KR20010052369A

KR20010052369A - 신규 조성물

Info

Publication number: KR20010052369A
Application number: KR1020007013014A
Authority: KR
Inventors: 랜달 케이. 존슨
Original assignee: 스튜어트 알. 수터, 스티븐 베네티아너, 피터 존 기딩스; 스미스클라인 비참 코포레이션
Priority date: 1998-05-21
Filing date: 1999-05-20
Publication date: 2001-06-25
Also published as: TR200003453T2; CZ300496B6; IL139733A0; EP1079818B1; ES2204164T3; AR019844A1; TWI227136B; IL139733A; NZ508115A; DK1079818T3; CZ20004321A3; AU750918B2; MY123434A; CN1367686A; NO329195B1; DE69909781D1; US6582689B1; DE69909781T2; ZA200006675B; JP4283998B2

Abstract

본 발명은 인터페론-γ-유도 인자 (IGIF)로도 알려진, IL-18과 같은 증강제를 화학 요법제와 조합하여 포함하는 조성물, 이러한 조성물을 만드는 방법, 암의 예방 및/또는 치료를 위한 이러한 조성물의 용도, 및 포유 동물에서 종양 또는 암 세포의 성장을 억제하는 이러한 조성물의 용도에 관한것이다.

Description

신규 조성물 {Novel Compositions}

〈110〉 SmithKline Beecham Corporation

〈120〉 Novel Compounds

〈130〉 5196

〈150〉 US 60/086,560

〈151〉 1999-05-21

〈160〉 2

〈170〉 KopatentIn 1.71

〈210〉 1

〈211〉 157

〈212〉 PRT

〈213〉 Human

〈400〉 1

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

1 5 10 15

Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

20 25 30

Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

35 40 45

Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile

50 55 60

Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

85 90 95

Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys

100 105 110

Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu

130 135 140

Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp

145 150 155

〈210〉 2

〈211〉 157

〈212〉 PRT

〈213〉 Mouse

〈400〉 2

Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn

1 5 10 15

Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met

20 25 30

Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile

35 40 45

Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser

50 55 60

Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile

65 70 75 80

Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser

85 90 95

Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu

100 105 110

Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu

115 120 125

Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp

130 135 140

Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser

145 150 155

암을 유도하고 이를 더욱 악성이고 전이성인 질환이 되게 하는 유전자 및 세포 변화의 이해에 현저한 진보가 있어 왔다. 대장암, 폐암, 전립선암 및 유방암과 같은 많은 고빈도 종양이 심지어 가장 새로운 화학 요법제 섭생에도 단순히 반응하거나 전혀 반응하지 않으므로 전이성 암의 치료에 그다지 놀라운 발전은 없었다. 암의 분자 생물학적 연구는 종양이 화학 요법에 실패하는 이유에 대한 이해를 제공하였다. 정상 세포에서, 화학 요법제에 의한 DNA 손상 또는 다른 대사성 발작의 유도는 계획된 세포 소멸 경로 (세포 소멸)를 작동시킨다. 종양의 유전자적 진화의 부분으로, 세포 소멸을 예방하는 경로들의 조절이 있다. 이는 암세포에서 발생하는 이상 DNA 복제는 정상적으로 세포 소멸을 촉발할 것이므로, 생존을 촉진하는 p53 기능 손실 또는 bcl-2의 과잉 발현과 같은, 돌연변이 도태의 결과로서 나타난다. 항-세포 소멸 경로는 종양 세포에서 활성화된다는 사실은 이들 세포가 기전에 상관 없이 많은 다른 화학 요법제에 내성일 것을 제안해 준다. 그러므로, 화학 요법제 내성 암에서의 반응을 생성하기 위해, 종양-유도 혈관 형성의 억제 또는 종양에 대한 면역 반응의 자극과 같은, 새로운 치료 형태를 도입하는 것은 중요할 것이다.

인터페론-γ-유도 인자 (IGIF)로도 알려진, IL-18은 최근 발견된 신규한 사이토킨이다. 활성 IL-18은 157개의 아미노산 잔기를 함유한다. 이는 T 세포 및 비세포에 의한 인터페론-γ-생성의 유도, NK 세포의 킬링 활성의 증가 및 어린 CD⁺4 세포의 Th1 세포로의 분화를 포함한, 강력한 생물학적 활성을 갖는다. 또한, 인간 IL-18은 GM-CSF의 생성을 강화시키고 IL-10의 생성을 감소시킨다. IL-18은 IL-12보다 더 큰 인터페론-γ-유도 능력을 갖는 것으로 보여졌고, 상이한 수용체를 갖고 특징적인 신호 형질 도입 경로를 이용하는 것으로 보인다.

암의 치료에서 IL-18 및 내독성 쇼크가 유도된 간 손상 (이는 인간 간 부전과 유사함)의 치료에서 이의 항체의 치료적 잠재력이, 동물 모델에서 평가되었고, 예방 효과가 설명되었다. 예를 들면, IL-18은 쥐에서 대장 26 선암의 전이 및 성장을 억제하는 것으로 보고되었다. 문헌 [하나야 등, Anti-tumor effect of a new cytokine, IGIF on the metastasis and growth of murine colon 26 adenocarcinoma, Proceeding of the American Association for Cancer Research 37: 451-452 (1996)] 참조. IL-18의 항-종양 활성에 관한 추가의 연구가 하기 문헌에 보고되었다: 미칼레프 등, Interleukin 18 induces the sequential activation of the natural killer cells and cytotoxic T lymphocytes to protect syngeneic mice from transplantation with Meth A sarcoma, Cancer Res., 57: 4557-4563 (1997); 요시다 등, Antitumor effect of human pancreatic cancer cells transduced with cytokine genes which activate Th1 helper T cells, Anticancer Res., 18: 333-336 (1998); 오사키 등, IFN-γ-inducing factor/IL-18 administration mediates IFN-γ- and IL-12-independent antitumor effects, J. Immunol., 160: 1742-1749 (1998); 및 미칼레프 등, Augmentation of in vitro interleukin 10 production after in vivo administration of interleukin 18 is activated macrophage-dependent and is probably not involved in the antitumor effects of interleukin 18, Anticancer Res., 18(6A): 4267-74 (1998).

CD4⁺T 세포는 모든 면역 반응의 중심 조절 입자이다. 이들은 2개의 서브셋, Th1 및 Th2로 나뉘어진다. 각각의 서브셋은 다른 사이토킨을 분비하는 능력에 의해 한정된다. 흥미롭게도, 분화를 위해 가장 강력한 유도제는 사이토킨 자체이다. 어린 전구체로부터 Th2 세포의 개발은 IL-4에 의해 유도된다. IL-18의 발견 이전에, IL-12는 주요한 Th1 유도 사이토킨으로서 생각되었다. IL-18은 또한 Th1 유도 사이트킨이고 인터페론-γ 생성 자극에 대해 IL-12보다 더욱 강력하다.

Th1 세포는 IL-12, 인터페론-γ, 및 TNF-β를 분비한다. 인터페론-γ, 그 시그네쳐 Th1 사이토킨은 그들의 살균 및 식균 활성을 증가시키기 위해 대식 세포에 직접 작용한다. 결과로서, 활성화된 대식 세포는 세포내 병원체 및 종양 세포를 효과적으로 파괴할 수 있다. Th2 세포는 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 및 IL-13을 생성하고, 이는 B 세포가 항체-생성 세포로 변하는 것을 도움으로써 작용한다. Th1 세포는 주로 세포-매개 면역에 관여하고, Th2 세포는 체액 면역에 관여한다.

IL-18은, 이를 코팅하는 뉴클레오티드 서열, 및 그 정제된 단백질의 특정한 물리 화학적 성질이 알려져 있다.

1996년 1월 17일 공고된 가부시키가이샤 하야시바라 세이부추 가야쿠 겐큐조의 유럽 특허 제0692536 A2호는 면역 감응 세포에 의해 IFN-감마 생성을 유도하는 쥐 단백질을 개시하고, 이 단백질은 특정한 물리 화학적 성질 및 한정된 부분 아미노산 서열을 가짐으로써 추가로 특징화된다. 또한 157개의 아미노산 서열을 갖는 단백질, 이의 2개의 단편, 이 단백질을 코딩하는 DNA (471 bp), 하이브리도마, 단백질 정제 방법, 및 이 단백질을 검출하는 방법이 개시되어 있다.

1996년 5월 22일 공고된, 하야시바라의 유럽 특허 제0712931 A2호는 157개의 아미노산 인산 단백질 및 이의 유사체, 이 단백질을 코딩하는 DNA, 형질 전환체, 이 단백질을 제조하는 방법, 이 단백질에 대한 단클론성 항체, 하이브리도마, 단백질 정제 방법, 및 이 단백질을 검출하는 방법을 개시한다.

1997년 4월 9일 공고된, 하야시바라의 유럽 특허 제0767178 A1호는 N-말단 가까이에 10개의 아미노산 서열을 갖고 면역 감응 세포에 의해 인터페론 감마 생성을 유도하는 인간 단백질을 개시한다. 또한 이 단백질을 생성하는 방법, 제약학적 제제로서의 이 단백질, 항종양증제, 항종양제, 항바이러스제, 항균제, 면역 치료제로서의 이 단백질의 용도 및 아토피성 질환 치료를 위한 이 단백질의 용도가 개시된다.

1997년 7월 10일 공고된, 인사이트 파마슈티칼스, 인크.의 WO 제97/24441호는 IL-18 전구체에 상응하고 DNA를 코딩하는 193개 아미노산 단백질을 개시한다.

화학 요법제가 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, 토포테칸을 포함한, 캠토테신이 1991년 4월 2일 허여된, 스미스클라인 비챰 코포레이션의 미국 특허 제5,004,758호 ('759 특허)에 개시된다. 토포테칸을 포함한, 캠토테신이 또한 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 463-484]에 개시된다. 토포테칸은 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 9687]에 개시된다. 독소루비신을 포함한, 안트라사이클린 항생제는 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 409-434]에 개시된다. 독소루비신은 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 3495]에 개시된다. 사이클로포스파미드를 포함한, 알킬화제는 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 297-332]에 개시된다. 사이클로포스파미드는 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 2816]에 개시된다. 파클리탁셀을 포함한, 항마이크로튜블제는 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 263-296]에 개시된다. 파클리탁셀은 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 7117]에 개시된다. 다른 화학 요법제는 당업자에게 알려져 있다.

본 발명은 일반적으로 인터페론-γ-유도 인자(IGIF)로도 알려진, IL-18과 같은 증강제, 및 화학 요법제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 화학 요법제는 예를 들면, 토포테칸과 같은 캠토테신, 독소루비신과 같은 안트라사이클린 항생제, 사이클로포스파미드와 같은 알킬화제, 또는 파클리탁셀과 같은 항마이크로튜블제일 수 있다. 본 발명은 추가로 이러한 조성물을 만드는 방법, 암의 예방 및/또는 치료를 위한 이러한 조성물의 용도, 및 포유동물에서 종양 또는 암 세포의 성장을 억제하기 위한 이러한 조성물의 용도에 관한 것이다.

발명의 요약

한 면에서, 본 발명은 서열 전체 길이에서 서열 번호 1 또는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 70% 이상의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 화학 요법제와 조합하여 제공한다.

또다른 면에서, 본 발명은 서열 전체 길이에서 서열 번호 1 또는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 70% 이상의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 바람직하게는 토포테칸과 같은 캠토테신, 독소루비신과 같은 안트라사이클린 항생제, 사이클로포스파미드와 같은 알킬화제, 또는 파클리탁셀과 같은 항마이크로튜블제를 포함한, 화학 요법제와 조합하여 제공한다. 더욱 바람직하게는, 화학 요법제는 토포이성화 효소이다. 가장 바람직하게는, 화학 요법제는 토포테칸이다. 당업자에게 알려진 다른 화학 요법제와 폴리펩티드의 조합이 또한 본 발명에 포함된다.

또다른 면에서, 본 발명은 IL-18과 같은 폴리펩티드, 화학 요법제, 및 제약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

추가의 면에서, 본 발명은 폴리펩티드를 화학 요법제와 조합하고 생성되는 조성물을 회수하는 것을 포함하는 상기 기술된 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

추가의 면에서, 본 발명은 IL-18과 같은 폴리펩티드, 및 화학 요법제를 포함하는 조성물의 암 억제량 투여를 포함하는 포유 동물에서 암을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공한다.

추가의 면에서, 본 발명은 IL-18과 같은 폴리펩티드, 화학 요법제, 및 제약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물의 암 억제량 투여를 포함하는 포유 동물에서 암을 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공한다.

또다른 면에서, 본 발명은 IL-18과 같은 폴리펩티드, 및 화학 요법제를 포함하는 조성물에 민감한 포유 동물에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공하고, 이러한 방법은 상기 종양 세포로 시달리는 포유 동물에게 이러한 조성물의 종양 세포 성장 억제 유효량을 투여하는 것을 포함한다.

또다른 면에서, 본 발명은 IL-18과 같은 폴리펩티드, 화학 요법제, 및 제약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물에 민감한 포유 동물에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공하고, 이러한 방법은 상기 종양 세포로 시달리는 포유 동물에게 이러한 조성물의 종양 세포 성장 억제 유효량을 투여하는 것을 포함한다.

도면의 간단한 설명

도 1은 발달된 폐 루이스 폐암의 성장에 대한 IL-18 단독 효과 및 토포테칸과의 조합 효과를 도시하는 그래프이다.

도 2는 폐에서 루이스 폐암 콜로니 수에 대한 IL-18 단독 효과 및 토포테칸과의 조합 효과를 도시하는 그래프이다.

도 3은 폐 종양 결절의 수 감소에 대한 IL-18 단독 효과 및 토포테칸과의 조합 효과를 도시하는 그래프이다 (확인 실험).

도 4는 폐 종양 성장 감소에 대한 IL-18 단독 효과 및 토포테칸과의 조합 효과를 도시하는 그래프이다 (확인 실험).

도 5는 암컷 BALB/c 쥐에 발달된 피하 이식된 MOPC-315 형질 세포종의 성장에 대한 저용량 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 6은 발달된 MOPC-315 형질 세포종에서 최대 내성 용량의 토포테칸과 조합된 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 7은 발달된 MOPC-315 형질 세포종에서 최적량 이하 용량의 토포테칸과 조합된 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 8은 발달된 피하 MOPC-315 형질 세포종에 대한 고용량의 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 9는 발달된 피하 MOPC-315 형질 세포종에 대해 토포테칸과 IL-18을 조합한 효과를 도시하는 그래프이다 (확인 실험).

도 10은 발달된 피하 MOPC-315 형질 세포종에 대해 최적량 이하 용량의 토포테칸을 IL-18과 조합한 효과를 도시하는 그래프이다 (확인 실험).

도 11은 발달된 피하 MOPC-315 형질 세포종에 단일 제제로서 고용량의 IL-18을 복강내 또는 피하로 조합한 효과를 도시하는 그래프이다.

도 12는 피하 MOPC-315 형질 세포종에 대해 토포테칸과 조합하여 복강내 또는 피하로 제공될 때의 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 13은 발달된 피하 MOPC-315 형질 세포종에 대해 토포테칸과 조합하여 간헐적으로 피하로 투여된 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 14는 발달된 B16F10 흑색종의 종양 성장 억제에 대한 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 15는 발달된 피하 B16F10 흑색종에서 사이클로포스파미드에 의해 유도된 성장 지연 연장에 대한 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 16은 발달된 피하 B16F10 흑색종을 가진 쥐에서의 토포테칸 단독 효과 또는 IL-18과의 조합 효과를 도시하는 그래프이다.

도 17은 발달된 피하 B16F10 흑색종의 종양 성장 억제에 대한 고용량 IL-18 단독 효과를 도시하는 그래프이다.

도 18은 발달된 피하 B16F10 흑색종에서 최대 내성 용량의 사이클로포스파미드와 조합된 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 19는 발달된 피하 B16F10 흑색종에서 최적량 이하 용량의 사이클로포스파미드와 조합된 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 20은 발달된 피하 매디슨 폐암에서 파클리탁셀과 조합된 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 21은 발달된 포유류 선종 16/c의 성장의 용량 의존성 지연을 일으키는 독소루비신의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 22는 발달된 포유류 선종 16/c의 최소 종양 성장 지연을 일으키는 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 23은 발달된 포유류 16/c에서 독소루비신의 활성에 대한 IL-18의 효과를 도시하는 그래프이다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 일반적으로 IL-18과 같은 증강제 및 화학 요법제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 화학요법제는 예를 들면, 토포테칸과 같은 캠토테신, 독소루비신과 같은 안트라사이클린 항생제, 사이클로포스파미드와 같은 알킬화제, 또는 파클리탁셀과 같은 항마이크로튜블제일 수 있다. 본 발명은 추가로 이러한 조성물을 만드는 방법, 암의 예방 및/또는 치료를 위한 이러한 조성물의 용도, 및 종양 세포의 성장을 억제하기 위한 방법에 관한 것이다.

하기 정의는 본원에서 흔히 사용되는 특정한 용어 및 약어의 이래를 돕기 위해 제공된다.

"CPA"는 사이클로포스파미드를 의미한다; "CR"은 완전한 퇴행을 의미한다; "ip"는 복강 내를 의미한다; "iv"는 정맥 내를 의미한다; "ILS"는 증가된 수명을 의미한다; "LTR"은 장기간 퇴행을 의미한다; "MTD"는 최대 내성 용량을 의미한다; "PR"은 부분 퇴행을 의미한다; "q1D"는 1일 1회 투여를 의미한다; "q4D"는 매4일 1회 투여를 의미한다; "q4Dx6"은 매4일 1회 투여를 6회 반복함을 의미한다; "q4Dx7"은 매4일 1회 투여를 7회 반복함을 의미한다; "qDx5"는 5일간의 1일 1회 투여를 의미한다; "qDx21"은 21일간의 1일 1회 투여를 의미한다; "qDx26"은 26일간의 1일 1회 투여를 의미한다; "qDx30"은 30일간의 1일 1회 투여를 의미한다; "sc"는 피하를 의미한다; "UID"는 1일 투여량을 의미한다.

당업계에 알려져 있는 바대로, "동일성"은 서열들을 비교함으로써 결정되는, 2개 이상의 폴리펩티드 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 관계이다. 당업계에서, "동일성"은 또한 경우에 따라, 이러한 서열들의 스트링 사이의 매칭에 의해 결정되는, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 서열 상관성의 정도를 의미한다. "동일성" 및 "유사성"은 문헌 [Computational Molecular Biology , Lesk, A.M., Oxford University Press, New Yok, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., 및 Griffin, H.G., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; 및 Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. 및 Devereux, J., M. Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo, H. 및 Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1998)]에 기술된 방법 등을 포함하는, 알려진 방법에 의해 용이하게 계산될 수 있다. 동일성을 결정하기 위한 바람직한 방법은 시험되는 서열 사이에 가장 큰 매칭을 제공하도록 설계된다. 동일성 및 유사성을 결정하기 위한 방법은 대중적으로 이용 가능한 컴퓨터 프로그램으로 만들어져 있다. 2개 서열 사이의 동일성 및 유사성을 결정하기 위한 바람직한 방법은 GCG 프로그램 패키지 (Devereux, J. 등, Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA (Atschul, S.F., J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990)) 등을 포함한다. BLAST X 프로그램은 NCBI 및 다른 문헌 (BLAST Manual, Altschul, S. 등, NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S. 등, J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990))으로부터 대중적으로 이용 가능하다. 잘 알려진 스미스 원터맨 연산 방식이 또한 동일성 결정에 사용될 수 있다.

"분리된"은 천연 상태로부터 "사람의 손에 의해" 변화된 것을 의미한다. 만일 "분리된" 조성물 또는 물질이 천연에 나타나면, 이는 변화되었거나 또는 원래의 환경으로부터 제거되었거나, 또는 둘다이다. 예를 들면, 이 용어가 본원에 사용될 때, 살아 있는 동물에 천연적으로 존재하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드가 "분리된" 것이 아니라, 그 천연 상태의 공존 물질로부터 분리된 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드가 "분리된" 것이다.

"폴리펩티드"는 펩티드 결합 또는 변화된 펩티드 결합, 즉, 펩티드 동배체에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 펩티드 또는 단백질을 의미한다. "폴리펩티드"는 통상적으로 펩티드, 올리고펩티드 또는 올리고머로서 언급되는 짧은 사슬, 및 일반적으로 단백질로 언급되는 더 긴 사슬을 의미한다. 폴리펩티드는 20 유전자가 코딩된 아미노산 외 아미노산을 함유할 수 있다. "폴리펩티드"는 번역후 프로세싱과 같은, 천연 과정, 또는 당업계에 잘 알려진 화학적 변화 기술에 의해 변화된 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 변화는 기본 교과서 및 더욱 상세화된 전공 논문, 및 많은 연구 논문에 잘 기술되어 있다. 변화는 펩티드 골격, 아미노산 측쇄 및 아미노 또는 카르복실 말단을 포함한, 폴리펩티드 어느 부위에서든 일어날 수 있다. 동일한 형태의 변화가 제공된 폴리펩티드의 몇 부위에서 동일하거나 상이한 정도로 존재할 수 있다. 또한, 제공된 폴리펩티드는 많은 형태의 변화를 함유할 수 있다. 폴리펩티드는 편재화의 결과로서 분쇄될 수 있고, 이들은 분지화를 갖거나 갖지 않은 사이클일 수 있다. 사이클릭, 분쇄 및 분쇄 사이클릭 폴리펩티드는 번역후 천연 과정으로부터 얻어질 수 있거나 또는 합성 방법에 의해 만들어질 수 있다. 변화는 아세틸화, 아실화, ADP-리보스화, 아미드화, 플라빈의 공유 결합, 헴 잔기의 공유 결합, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 결합, 지질 또는 지질 유도체의 공유 결합, 포스포티딜이노시톨의 공유 결합, 교차-연결, 사이클화, 이황화 결합 형성, 탈메틸화, 공유 교차-연결의 형성, 시스틴의 형성, 피로글루타메이트의 형성, 포르밀화, 감마-카르복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 히드록실화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 단백질 분해 과정, 인산화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 황산화, 아르기닐화, 및 편재화와 같은 단백질로의 아미노산의 전달 RNA 매개 첨가 반응 (참조, 예를 들면, PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 제2판, T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, New York, 1993; Wold, F., Post-translational Protein Modifications: Perspectives and Prospects, 페이지 1-12, POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEINS, B. C. Johnson, Academic Press, New York, 1983; Seifter 등, "Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors,"Meth Enzymol (1990) 182:626-646 및 Rattan 등, "Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging," Ann NY Acad Sci (1992) 663:48-62)을 포함한다.

"변이체"는 참고용 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드와 다르나 필수적인 성질을 보유하고 있는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 의미한다. 폴리뉴클레오티드의 전형적인 변이체는 또다른 참고용 폴리뉴클레오티드와 뉴크레오티드 서열에 있어서 다르다. 이 변이체의 뉴클레오티드 서열 변화는 참고용 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 아미노산 서열을 변화시킬 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 뉴클레오티드 변화는 하기 기술된 바대로, 참고용 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드에서 아미노산 치환, 첨가, 삭제, 용융 및 절단을 초래할 수 있다. 폴리펩티드의 전형적이 변이체는 또다른 참고용 폴리펩티드와 아미노산 서열에 있어서 다르다. 일반적으로, 차이점은 참고용 폴리펩티드 및 변이체의 서열이 전체적으로 대단히 유사하고, 많은 부분에서 동일하도록 제한된다. 변이체 및 참고용 폴리펩티드는 조합된 한개 이상의 치환, 첨가, 삭제에 의해 아미노산 서열에 있어서 다를 수 있다. 치환되거나 삽입된 아미노산 잔기는 유전자 코드에 의해 코딩된 것일 수 있거나 또는 아닐 수 있다. 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드의 변이체는 대립 형질 변이체와 같은 천연적으로 존재하는 것일 수 있거나, 또는 천연적으로 존재한다고 알려지지 않은 변이체일 수 있다. 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 비천연적으로 존재하는 변이체는 돌연변이 생성술 또는 직접 합성에 의해 만들어질 수 있다.

폴리펩티드 서열 비교를 위해 바람직한 파라미터는 하기를 포함한다:

1) 연산 방식: Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol., 48:443-453 (1970)

비교 매트릭스: Hentikoff and Hentikoff로부터의 BLOSSUM62, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:10915-10919 (1992)

갭 페널티:12

갭 길이 페널티:4

이들 파라미터로 유용한 프로그램은 대중적으로 위스콘신주 매디슨에 소재하는 제네틱스 컴퓨터 그룹으로부터 "갭"으로 구입 가능하다. 상기 언급된 파라미터는 펩티드 비교를 위한 기본 파라미터이다 (말단 갭에 대해 페널티가 없음).

본 발명의 폴리펩티드 서열은 100% 동일한, 서열 번호 1 및 서열 번호 2의 참고용 서열과 동일할 수 있거나, 또는 이는 % 동일성이 100% 미만인 참고용 서열과 비교하여 특정한 정수 이하의 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 이러한 변화는 1개 이상의 아미노산 삭제, 통상적 및 비통상적 치환을 포함하는 치환, 또는 삽입으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 변화는 참고용 서열 아미노산 사이에서 개별적으로 또는 참고용 서열 내 1개 이상의 인접한 군에 산재된, 참고용 폴리펩티드 서열의 아미노 및 카르복시-말단 위치 또는 이들 말단 위치 어느 부위에서 일어날 수 있다. 주어진 % 동일성에 대한 아미노산 변화의 수는 서열 번호 1 또는 서열 번호 2의 아미노산 총수를 각각의 퍼센트 동일성 (100으로 나누어짐)의 숫자 퍼센트로 곱하고 이후 서열 번호 또는 서열 번호 2의 아미노산의 상기 총수로부터 각각 그 생성물을 뺌으로써 결정된다:

n_a≤x_a- (x_a· y),

상기 식에서 n_a는 아미노산 변화의 수이고, x_a는 서열 번호 1 또는 서열 번호 2의 아미노산 변화의 총 수이고, y는 예를 들면, 70%는 0.7, 80%는 0.8, 85%는 0.85 등이고, x_a및 y의 비정수 생성물은 이를 x_a로부터 빼기 전에 가장 가까운 정수로 된다.

"용융 단백질"은 2개의, 흔히 관련되지 않은, 용융 유전자 또는 이의 단편에 의해 코딩된 단백질을 의미한다. 한 예에서, EP-A-0 464는 또다른 인간 단백질 또는 이의 부분을 함께 갖는 면역 글로불린 분자의 일정한 영역의 다양한 부분을 포함하는 용융 단백질을 개시한다. 많은 경우에서, 용융 단백질의 한 부분으로 면역 글로불린 Fc 영역을 사용하는 것은 예를 들면, 개선된 약력학적 성질을 초래하여 치료 및 진단 용도를 위해 유익하다 [참조, 예를 들면, EP-A 0232 262]. 한편, 몇몇 용도를 위해 용융 단백질이 발현되고, 삭제되고 정제된 후 Fc 부분을 삭제할 수 있는 것이 바람직할 것이다.

증강제

일반적으로 증강제는 세포 환원 치료법과 조합하여 면역 반응을 증진시킨다. IL-18은 상이한 형태의 화학 요법제와 혼합될 때 그의 면역 자극 작용을 유지하는 넓은 범위 증강제이다. 화학 요법제의 특정한 증강제는 구체적이고 5-플루오로우라실과 조합하여 루코보린을 사용하거나 시스플라틴 또는 알킬화제와 같은 DNA 손상 제제와 함께 티라파자민을 사용하는 것과 같은, 조정된 의약품의 작용 기전에 관련된다.

IL-18 폴리펩티드

한 면에서, 본 발명은 화학 요법제와 조합된 IL-18 폴리펩티드에 관한 것이다. 폴리펩티드의 폴리펩티드 성분 및 본 발명의 조성물을 함유하는 캠토테신 화합물, 그의 분리, 동정 및 생성을 위한 특정한 기술이 유럽 특허 제0692536A2호, 제0712931A2호, 제0767178A1호, 및 WO 제97/2441호에 개시된다. 폴리펩티드는 각각 서열 번호 1 및 서열 번호 2의 전체 길이에서 서열 번호 1 (인간 IL-18) 및 서열 번호 2 (쥐 IL-18)의 서열과 70% 이상의 동일성, 바람직하게는 80% 이상의 동일성, 더욱 바람직하게는 90% 이상의 동일성, 더더욱 바람직하게는 95% 이상의 동일성, 가장 바람직하게는 97-99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 분리된 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 각각 서열 번호 1 및 서열 번호 2의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.

본 발명의 폴리펩티드는 인터페론-γ-유도 폴리펩티드이다. 이들은 T 세포 및 비세포에 의한 인터페론-γ- 생성 유도 및 NK 세포의 킬링 활성 증가 및 어린 CD⁺4 세포의 Th1 세포로의 분화를 포함한, 세포-매개 면역성 유도에서 주된 역할을 한다. 이들 단백질은 이후 "IL-18 활성" 또는 "IL-18 폴리펩티드 활성" 또는 "IL-18의 생물학적 활성으로서 언급된다. 또한 이들 활성에는 상기 IL-18 폴리펩티드의 항원 및 면역원성 활성, 특히 서열 번호 1 및 서열 번호 2의 폴리펩티드의 환원 및 면역원성 활성이 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 폴리펩티드는 IL-18의 1개 이상의 생물학적 활성을 나타낸다.

본 발명의 폴리펩티드는 "성숙한" 단백질 형태일 수 있거나 또는 용융 단백질과 같은 더 큰 단백질의 한 부분일 수 있다. 분비 또는 선도 서열, 프로-서열, 다중 히스티딘 잔기와 같은 정제에 도움이 되는 서열, 또는 재조합 생성 중 안정성을 위한 추가 서열을 함유하는 추가 아미노산 서열을 포함하는 것이 유익하다.

본 발명은 또한 상기 언급된 폴리펩티드 즉, 통상적인 아미노산 치환 (하나의 잔기가 유사한 특성을 갖는 또다른 잔기에 의해 치환됨)에 의해 참고용 폴리펩티드와 다른 폴리펩티드의 변이체를 포함한다. 전형적인 이러한 치환은 Ala, Val, Leu과 Ile 사이에서; Ser과 Thr 사이에서; 산성 잔기 Asp와 Glu 사이에서; Asn과 Gln 사이에서; 그리고 염기성 잔기 Lys과 Arg 사이에서; 또는 방향족 잔기 Phe과 Tyr 사이에서 일어난다. 특히 바람직한 것은 몇개, 5-10개, 1-5개, 1-3개, 1-2개 또는 1개의 아미노산이 조합되어 치환되고, 삭제되거나 또는 첨가된 변이체이다.

본 발명의 폴리펩티드는 적합한 방식으로 제조될 수 있다. 이러한 폴리펩티드는 분리된 천연적으로 존재하는 폴리펩티드, 재조합으로 생성된 폴리펩티드, 합성적으로 생성된 폴리펩티드, 또는 이들 방법의 조합으로 생성된 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 폴리펩티드를 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.

본 발명의 재조합 폴리펩티드는 발현계를 포함하는 유전학적으로 제조된 숙주 세포로부터 당업계에 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 추가의 면에서, 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 하나의 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드들을 포함하는 발현계, 이러한 발현계로 유전학적으로 제조된 숙주 세포 및 재조합 기술에 의해 본 발명의 폴리펩티드를 생성하는 것에 관한 것이다. 세포 없는 번역계는 또한 본 발명의 DNA 구조물로부터 유도된 RNA들을 사용하여 이러한 단백질을 생성하기 위해 사용될 수 있다.

적합한 숙주 세포의 대표적 예는 streptococci, staphylococci, E. coli,Streptomyces 및 Bacillus subtilis 세포와 같은 박테리아 세포; 이스트 세포 및 Aspergillus 세포와 같은 곰팡이 세포; Drosophila S2 및 Spodoptera Sf9 세포와 같은 곤충 세포; CHO, COS, HeLa, C127, 3T3, BHK, HEK 293 및 보우즈 흑색종 세포와 같은 동물 세포; 및 식물 세포를 포함한다.

대단히 다양한 발현계가 예를 들면, 염색체, 유전자 부체 및 바이러스-유도된 계, 예를 들면, 박테리아 플라스미드, 박테리오파지, 트랜스포손, 이스트 유전자 부체, 삽입 입자, 이스트 염색체 입자, 바큘로바이러스와 같은 바이러스, SV40과 같은 파포바 바이러스, 백시나 바이러스, 아데노바이러스, 계두 바이러스, 슈도라비 바이러스 및 레트로바이러스로부터 유도된 벡터, 및 코스미드 및 파지미드와 같은, 박테리오파지 유전 입자와 플라스미드로부터 유도된 것들과 같은, 이의 조합으로부터부터 유도된 벡터가 사용될 수 있다. 발현계는 발현을 조절하고 일으키는 조절 영역을 함유할 수 있다. 일반적으로, 숙주 세포에서 폴리펩티드를 생성하는 폴리뉴클레오티드를 유지, 증식 또는 발현시킬 수 있는 계 또는 벡터가 사용될 수 있다. 적합한 뉴클레오티드 서열은 예를 들면, 문헌 [샘브룩 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제2판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)]에서 제정된 방법과 같은, 다양한 공지의 통상적 기술에 의해 발현계로 삽입될 수 있다. 적합한 분비 신호는 번역된 단백질이 원형질 망의 내강, 주변 세포질 공간 또는 세포외 환경으로 분비되도록 하는 바람직한 폴리펩티드로 혼입될 수 있다. 이들 신호는 폴리펩티드에 내인성일 수 있거나 또는 이들은 이형 로그 신호일 수 있다.

본 발명의 폴리펩티드는 황산 암모늄 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로즈 크로마토그래피, 소수적 상호작용 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피, 이드록실아파타이트 크로마토그래피 및 렉틴 크로마토그래피를 포함하는 공지 방법에 의해 재조합 세포 배양으로부터 회수되고 정제될 수 있다. 가장 바람직하게는, 친화성 크로마토그래피가 정제를 위해 사용된다. 단백질을 리폴딩하는 공지 기술이 폴리펩티드가 분리 및/또는 정제 중 변성될 때 활성형을 재생시키기 위해 사용될 수 있다.

화학 요법제

본 발명은 증강제 예를 들면, IL-18과 조합하여 어떤 종류의 화학 요법제라도 사용할 수 있는 것으로 생각된다. 화학 요법제의 종류의 예는 토포테칸과 같은 캠토테신, 독소루비신과 같은 안트라사이클린 항생제, 사이클로포스파미드와 같은 알킬화제, 및 파클리탁셀과 같은 항마이크로튜블제이다. 더욱 바람직하게는, 화학 요법제는 토포이성화 효소이다. 가장 바람직하게는, 화학 요법제는 토포테칸이다. 당업자에게 잘 알려진 다른 화학 요법제가 또한 본 발명에 포함된다.

당업계에 알려진 화학 요법제의 예는 캠토테신이다. 토포테칸은 캠토테신의 예이다. 토포테칸을 포함하는, 캠토테신은 1991년 4월 2일 허여된, 스미스클라인 비챰 코포레이션의 '758 특허에 개시된다. 토포테칸을 포함하는, 캠토테신은 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 463-484]에 개시된다. 토포테칸은 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 9687]에 추가로 개시된다.

당업계에 알려진 화학 요법제의 또다른 예는 안트라사이클린 항생제이다. 독소루비신 및 다우노루비신은 안트라사이클린 항생제의 예이다. 이들 제제는 현재 임상에서 가장 널리 사용되는 몇몇 항종양제이다. 독소루비신은 고형암, 특히 유방암 및 림프종의 치료에 현재 주로 사용된다. 참조, 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 409-434]. 독소루비신은 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 3495]에 추가로 개시된다.

알킬화제는 당업계에 잘 알려진 화학 요법제의 또다른 예이다. 알킬화제의 예는 사이클로포스파미드이다. 이들 제제는 통상적인 조합 형식 및 골수 이식을 했을 때의 고용량 프로토콜로 화학 요법에 많이 사용된다. 참조, 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 297-332]. 사이클로포스파미드는 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 2816]에 추가로 개시된다.

항마이크로튜블제는 당업계에 알려진 화학 요법제의 또다른 종류이다. 항마이크로튜블제의 예는 탁세인 파클리탁셀이다. 탁세인은 광범위한 종양 형태에 효과적이다. 참조, 문헌 [Cancer chemotheraphy and Biotherapy, 제2판, 부루스 에이. 챠브너 및 댄 엘. 롱고, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia ⓒ 1996, 페이지 263-296]. 파클리탁셀은 문헌 [머크 인덱스, 제12판, ⓒ 1996 Merck ＆ Co., 제목 번호 7117]에 추가로 개시된다.

본 발명은 상기 기술된 IL-18 폴리펩티드와 같은 증강제, 및 당업계에 알려진 화학 요법제, 예를 들면 상기 기술된 것들과의 조합을 제공한다.

추가의 면에서, 본 발명은 상기 기술된 화학 요법제와 조합하여, 상기 기술된 증강제의 치료 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 제약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제가 또한 사용될 수 있다. 사용되는 제약학적 담체는 예를 들면, 고체 또는 액체일 수 있다. 고체 담체의 예는 테라 알바, 서당, 탈크, 젤라틴, 아가, 펙틴, 아카시아, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함한다. 액체 담체의 예는 염류, 완충 염류, 덱스트로즈, 물, 글리세롤, 에탄올 시럽, 땅콩유, 올리브유, 및 그의 조합물 등을 포함한다. 유사하게, 담체 또는 희석제는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트 단독으로 또는 왁스 에틸셀룰로즈, 히드록시프로필메틸셀룰로즈, 메틸아크릴레이트 등과 병용하는 것과 같은, 당업계에 잘 알려진 시간 지연 물질을 포함할 수 있다.

본 발명은 추가로 본 발명의 상기 언급된 조성물 중 1개 이상의 성분으로 채워진 1개 이상의 용기를 포함하는 제약학적 팩 및 키트에 관한 것이다. 폴리펩티드 및 화학 요법제의 조합은 단독으로 또는 치료 화합물과 같은, 다른 화합물과 결합하여 사용될 수 있다.

조성물은 예를 들면 전신 또는 경구 경로를 통한 투여 방법에 적용될 수 있다. 전신 투여의 바람직한 형태는 주사, 대체로 정맥 내 주사를 포함한다. 피하, 근육 내, 또는 복강 내와 같은 다른 주사 방법이 사용될 수 있다. 또한, 폴리펩티드 및 화학 요법제의 조합이 장내 또는 캡슐화 제제로 제형화될 수 있다면, 경구 투여가 가능할 수 있다. 전신 투여의 대안법은 빌산염 또는 푸시드산 또는 다른 세제와 같은 침투제를 사용하는 경점막 및 경피 투여를 포함한다. 이들의 조합 투여가 또한 연고, 페이스트, 겔 등의 형태로 국소 및/또는 신체 부분에 이루어질 수 있다.

필요한 조성물의 투약량 범위는 증강제 및 화학 요법제의 선택, 투여 경로, 제형의 특성, 환자 상태의 특성, 및 참가한 수행자의 판단에 달려 있다. 그러나, IL-18에 대한 조성물의 적합한 투약량은 환자 체중 kg 당 1 나노그램 내지 1 밀리그램의 범위 내에 있고, 화학 요법제에 대한 조성물의 적합한 투약량은 특정한 화학 요법제의 임상적으로 허용 가능한 투약량의 1/10 내지 특정한 화학 요법제의 임상적으로 허용 가능한 투약량의 10배 범위 내에 있다. 그러나, 필요한 투약량의 큰 차이는 이용 가능한 다양한 화합물 및 다양한 투여 경로의 상이한 효능의 관점에서 기대되는 것이다. 예를 들면, 경피 투여는 정맥 내 주사에 의한 투여보다 더 큰 투약량을 요구하는 것으로 기대될 것이다. 이들 투약량 차이는 당업계에서 잘 이해되는 바대로, 최적화를 위해 표준 실험 경로를 사용하여 조정될 수 있다.

조성물의 투여 계획은 투약량, 증강제 및 화학 요법제의 선택, 투여 경로, 제형의 특성, 환자 상태의 특성, 및 참가한 수행자의 판단에 달려 있다. 적합한 투여 계획은, 그러나, 1일 1-3회 투여 내지 1주 1회 투여이다. 조성물의 투여 계획의 큰 차이는 이용 가능한 다양한 화합물 및 다양한 투여 경로의 효능 차이의 관점에서 기대되는 것이다. 예를 들면, 경피 투여는 정맥 내 주사에 의한 투여보다 더 큰 투여량을 요구하는 것으로 기대될 것이다. 조성물의 이러한 투여 계획의 차이는 당업계에서 잘 이해되는 바대로, 최적화를 위해 표준 실험 경로를 사용하여 조정될 수 있다.

본 명세서에 인용된, 특허 및 특허 출원 등을 포함한, 모든 출판물은 각각의 출판물이 본원에 참고로 혼입됨이 구체적으로 그리고 개별적으로 지적된 것처럼 참고로 본원에 혼입된다.

당업자는 상기 상세한 설명을 이용하여, 본 발명을 완전히 이용할 수 있다고 여겨진다. 그러므로, 하기 실시예는 단순히 설명을 위한 것이지 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하려는 것이 아니다.

실시예 I (A) - 루이스 폐암 모델에서의 종양 성장 감소

실험 프로토콜

발달된 고형 종양 모델, 고도의 전이성 폐암에서 토포테칸 및 IL-18 조합의 활성을 보기 위한 실험에서, B6D2F₁암컷 쥐에게 10⁵루이스 폐암 세포를 정맥 내로 접종하였고 7일째에 각각 14마리의 쥐로 이루어진 치료군을 임의 추출하였다. 종양이 폐에서 자리를 잡고 성장하는 7일째까지 치료를 연기하였다. 폐 종양 성장에 대한 치료 효과를 결정하기 위해 16일째에 각 군에서 절반의 쥐를 죽였고, 남아 있는 쥐에 대해서는 치료를 계속하고 생존을 관찰하였다. (실시예 I (B)). 7일째에 시작하여 32일째에 끝나는 매4일 1회, 7번 반복 투여로 토포테칸을 복강 내로 투여하였고 그 투여량은 mg/kg으로 나타냈다. 7일부터 32일까지 쥐 IL-18을 복강 내로 1일 1회 투여하였고 그 투여량은 쥐 한마리 당 ㎍/으로 나타내었다. 3개 군의 대조용 동물이 있고, 이들 모두를 17일에서 30일 사이에 죽였다. 61일 동안 쥐의 생존을 관찰하였다. (도 1 및 2 및 표 1 참조).

결과

평균 350 mg의 폐 종양을 갖는 대조군에서 16일째에 매우 큰 종양이 있었다. (도 1 및 2 참조). 폐에서 특징적인 현미경적 종양의 수는 80보다 컸다. (도 2 참조).

IL-18은 단독으로 명확한 용량 반응 없이 폐 종양 무게 및 결절 수를 현저히 감소시켰다. IL-18의 단독 효과는 크지는 않았고 사이토킨이 공급된 동물은 증가된 평균 생존 시간을 가지지 않았다. 최대 내성 용량의 토포테칸 (매4일 1회 투여법으로 15 mg/kg)은 90%보다 크게 종양 성장을 억제하였지만 쥐는 여전히 45개의 폐 종양 결절을 가졌다. IL-18의 첨가는 유사한 강한 종양 성장 억제를 제공하였다. 그러나, 토포테칸의 최적량 이하의 투여량 (매4일 1회 투여법으로 9 mg/kg)에서 이 조합의 명확한 잇점이 있었다. (도 1 및 2 참조).

실시예 I (B) - 루이스 폐암 모델에서의 생존

실험 프로토콜

실시예 I (A)의 프로토콜 참조

결과

하기 표 1에 제시된 바와 같이, 발달된 전신성 루이스 폐암을 가진 쥐에서 토포테칸과 조합하여 IL-18을 투여하는 시도로부터의 생존 데이타는 종양 측정에 의해 관찰된 IL-18의 활성을 확인하게 하였다. 기대된 바대로, 단독으로 사용될 때, IL-18은 생존 시간에 대한 효과를 갖지 않았다. 토포테칸은 단독으로 그의 최대 내성 용량에서 68%까지 수명을 연장시켰고 60%의 최대 내성 용량에서 63%까지 수명을 연장시켰다. 0.5 mg/kg의 IL-18 및 최대 내성 용량의 토포테칸 (15 mg/kg)은 145%까지 수명을 증가시켰고; 최적량 이하의 토포테칸 (9 mg/kg) 및 0.5 mg/kg의 IL-18은 82%까지 수명을 증가시켰다.

치료	투약량	평균 생존 시간 (일)	수명 증가 (%)
대조용	-	22	-
IL-18	10310.3	242322.522	9420
토포테칸	15	37	68
토포테칸 + IL-18	15 + 1015 + 315 +115 + 0.3	54324741	1454511486
토포테칸	9.0	36	63
토포테칸 + IL-18	9.0 + 109.0 + 39.0 + 19.0 + 0.3	40383528	82735927

7일째에 시작하여 32일째에 끝나는 매4일 1회, 7번 반복 투여로 토포테칸을 복강 내로 투여하였고 그 투여량은 mg/kg으로 나타냈다.

7일부터 32일까지 쥐 IL-18을 복강 내로 1일 1회 투여하였고 그 투여량은 쥐 한마리 당 ㎍/으로 나타내었다.

실시예 II (A) - 루이스 폐암 모델에서 종양 성장 감소

실험 프로토콜

추가의 실험에서, 토포테칸 및 IL-18의 조합 활성을 발달된 전신성 루이스 폐암에서 확인하였다. 이 실험에서 더 큰 용량의 IL-18을 사용하였다. B6D2F₁암컷 쥐 (22-24 mg)에게 10⁵루이스 폐암 세포를 정맥 내로 접종하였고 7일째에 각각 12 내지 14마리의 쥐로 이루어진 치료군을 임의 추출하였다; 폐 종양 성장에 대해 종양 무게 및 결절 수를 포함하는, 치료 효과를 결정하기 위해 14일째에 각 군에서 절반의 쥐를 죽였다. 남아 있는 쥐에 대해서는 치료를 계속하고 생존을 관찰하였다. 매4일 1회, 6회 반복, 즉 7일, 11일, 15일, 19일, 23일, 및 29일에 토포테칸을 복강 내로 투여하였고; 그 투여량은 mg/kg으로 나타냈다. 7일부터 33일까지 26일간 1일 1회 쥐 IL-18을 복강 내로 투여하였고 그 투여량은 쥐 한마리 당 ㎍/으로 나타내었다. 3개 군의 대조용 동물이 있고, 이들 모두를 14일에서 28일 사이에 죽였다. 61일 동안 쥐의 생존을 관찰하였다. (도 3 및 4 및 표 2 참조).

결과

최대 내성 용량의 토포테칸은 종양 무게 및 결절 수에 양호한 감소를 제공하였고 너 낮은 용량의 토포테칸에서 상기 2개의 파라미터에 대한 더 적은 효과를 나타내었다. 이 조합은 토포테칸 단독으로 얻어진 것 보다 더 많이 종양을 감소시켰다. 이는 더 낮은 용량이 IL-18에서 더 큰 효과를 나타내는 결절 수 보다 오히려 종양 무게에서 가장 명백하다. 이는 루이스 폐암에서 이런 조합에 대한 초기 연구에서 보여진 양성적 결과를 확실히 한다. (도 3 및 4 참조).

실시예 II (B) - 루이스 폐암 모델에서 생존

실험 프로토콜

실시예 II (A)의 프로토콜 참조.

결과

절반 생존 실험에 관한 결과는 하기 표2에 요약된다. 토포테칸의 최대 내성 용량에서, IL-18도 공급된 쥐에 대해 현저하게 더 긴 생존 시간이 나타났다. 최적량 이하의 토포테칸 투여량은 가장 큰 용량의 IL-18의 수명 연장의 2배의 수명 연장을 나타내었다.

치료	투약량	n	평균 생존 시간 (일)	수명 증가 (%)
종양 대조군		18	18
IL-18	100301031	66666	2218.5181820	2230011
토포테칸	15	6	33.5	86
토포테칸 + IL-18	15 + 10015 + 3015 + 1015 + 215 + 1	77776	4342414238	139133128133111
토포테칸	9	6	25.5	42
토포테칸 + IL-18	9 + 1009 + 309 + 109 + 39 + 1	77777	3430273029	8967506761

매4일 1회, 6회 반복, 즉 7일, 11일, 15일, 19일, 23일, 및 29일에 토포테칸을 복강 내로 투여하였고; 그 투여량은 mg/kg으로 나타냈다.

7일부터 33일까지 26일간 1일 1회 쥐 IL-18을 복강 내로 투여하였고 그 투여량은 쥐 한마리 당 ㎍/으로 나타내었다.

실시예 III - MOPC-315 형질세포종

실험 프로토콜

MOPC-315 형질세포종은 복합 흑색종로서 알려진 인간 암과 유사하다. 이 종양은 항체 발현에 포함된 B 임파구의 성숙형인, 형질 세포의 악성 종양이다. MOPC-315는 동계 BALB/c 쥐에서 매우 큰 크기로 신속하게 성장한다. 이는 대단히 전이성이거나 침해적이지 않다.

피하에 자리를 잡은 MOPC-315 형질세포종을 가진 쥐에서 IL-18을 평가하였다. 면역 치료법의 효과를 볼 기회를 증가시키기 위해, 효과적인 화학 요법제와 조합하여 IL-18을 평가하고 단일 요법에 의해서도 IL-18을 평가하였다. IL-18을 쥐 1마리당 0.3, 1, 3, 및 10 ㎍ 매일 복강 내로 투여하였고 토포테칸을 매4일 1회 투여 계획하에 9 mg/kg 및 15 mg/kg 복강 내로 투여하였다. 평균 종양 부피가 32 내지 88 mg이 되는 이식 후 11일째에 두가지 약 투여를 시작하였다. 대조군은 1 그램으로 성장하는 데 17.2일이 걸렸다. (도 5 내지 7참조).

결과

IL-18 단독 치료는 이 실험에서 평가된 투여량에서 자리를 잡은 종양의 종양 성장에 대해 최소 효과만을 나타내었다. 종양 성장이 1.3 내지 3.1일 지체되었다. (도 5 참조). 토포테칸은 단독으로 그의 최대 내성 용량에서 1/7의 완전 퇴행을 제공하였고 약 12일까지 종양 성장을 지체시켰다. 최대 내성 용량의 토포테칸과 1일 쥐 1마리 당 10, 3 또는 1 ㎍의 IL-18의 조합은 5/7 이하의 쥐에서 완전 퇴행 및 장기간 퇴행을 나타내어 토포테칸을 단독으로 사용할 때보다 훨씬 더 활성이다. 현저하게, 종양은 퇴행 이전에 상당히 큰 크기로 성장하였다. 또한 종양이 치료를 중단한 후 다시 성장하고 이후 추가의 치료 없이 다시 퇴행하는 것 (면역 매개 반응 제안)은 상당히 주목할 만하다. (도 6 참조).

IL-18은 또한 최적량 이하의 토포테칸과 함께 증가되고 기대하지 않은 결과를 나타내었다. 9 mg/kg의 토포테칸은 종양 성장에 대해 효과가 없거나 또는 퇴행 없이 그리고 4일 동안의 종양 성장을 지연시켜 종양 성장에 대해 약간의 효과를 나타내었다. 고용량의 IL-18로, 5의 완전한 퇴행을 나타내었고 7마리 쥐에서 부분 퇴행을 나타내었다. 이들 중 2마리는 94일째에도 여전히 명백한 장기간 퇴행을 나타내었다. (도 7 참조).

실시예 IV - MOPC-315 형질세포종

실험 프로토콜

발달된 MOPC-315 형질세포종을 가진 쥐에서 토포테칸과 조합된 IL-18의 활성을 더 큰 용량의 IL-18이 사용된 대형 실험에서 확인하였다. 이 실험에서, 매4일 1회, 6회 반복하는 토포테칸 투여를 10일째에 시작하였고 같은 날에 30일간 1일 1회로 IL-18를 투여하였다. 두가지 약을 복강 내로 투여하였고 종양 측정에 의해 활성을 평가하였다.

결과

IL-18이 1일 쥐 1마리 당 최대 용량 10 ㎍이 투여된 이전의 실험에서는, 종양 성장에 대한 IL-18의 단독 효과는 없었다. 그러나, 확인 실험에서, IL-18을 더 큰 용량, 1일 쥐 1마리 당 100 ㎍ 및 30 ㎍으로 공급하고, 가장 큰 용량은 4/6의 완전 퇴행을 갖는 지연된 종양 퇴행을 유도함에 있어서 단독으로 효과적이었다. 더 낮은 용량의 IL-18은 도 8에 제시된 바대로 효과적이지 않았다.

최대 내성 용량에서의 토포테칸과 IL-18 조합의 대단히 효과적인 활성을 확인하였다. (도 9 참조). 토포테칸은 단독으로 상당히 효과적이었고, 이는 2/6의 완전 퇴행 및 종양 성장의 연장된 억제를 제공하였다. 그러나, 33일째에 토포테칸을 중단하면 재성장이 명백히 일어났다. 3개의 큰 용량의 IL-18은 모든 처리된 쥐에서 사실상 신속하고, 완전하고 연장된 퇴행을 나타내었다. 이들 반응은 단독으로 사용될 때 효과가 없는 IL-18의 투여량에서 발생하였다. (도 9 참조).

최적량 이하의 토포테칸은 이 발달된 종양에 대해 사실상 효과가 없었지만 IL-18과 조합된 3개의 큰 용량에서는 거의 모든 동물에서 완전한 퇴행을 나타내었다. (도 10 참조).

실시예 V - MOPc-315 형질세포종 (계획 및 경로 연구)

실험 프로토콜

화학 요법과 조합한 IL-18의 평가를 성립하기 위해 하기를 반복하였다: (a) 피하로 제공될 때 종양 모델에서 IL-18이 얼마나 효과적인가 및 (b) IL-18이 간헐적 계획하에 제공될 때 활성인지 아닌지 또는 매일 처리가 필요한지 아닌지. 종양이 부피로 약 100 mm³이 되는 10일째에 시작하는 치료로 발달된 MOPC-315 형질세포종에서 토포테칸으로 실험을 다시 하였다. 토포테칸을 매4일 1회 투여법하에 그의 최대 내성 용량 15 mg/kg으로 제공하였고 IL-18을 매일 1회 투여법 또는 매4일 1회 투여법하에서 복강 내 또는 피하로 광범위의 투여량을 제공하였다. 이 실험에서, 심각한 체중 감소가 명백하여 이전 실험에서 보다 조합한 결과 더 큰 독성을 나타내므로 토포테칸을 단지 2 경로 사용한 후 중단하였다. 그러나, IL-18은 계속 사용하였다. (도 11 내지 13 참조).

결과

IL-18은 단독으로 1일 1회 투여법하에서 1일 100 ㎍의 투여량에서 활성을 나타내었고, 이는 이전 실험의 결과를 확실히 해주었다. 복강 내 투여가 더욱 효과적이라 하더라도, 복강 내 및 피하 경로에 대해서 활성을 관찰하였다. (도 11 참조). 도 13에 제시된 바대로, 1회 투여량 당 1000 또는 100 ㎍의 간헐적 IL-18은 사이토킨이 단독으로 사용될 때 퇴행을 유도함에 있어서 효과가 없었다.

토포테칸과 조합하여 매일 IL-18의 활성을 다시 확인하였고 IL-18이 피하 또는 복강 내로 제공될 때 동등한 활성을 나타내었다. 어떤 경로든지, 증가된 효과를 보이기 위해서는 10 ㎍ 이상의 투여량이 요구되었다. (도 12 참조).

간헐적 계획하 IL-18의 투여는 화학 요법과 조합한 것 만큼 효과적이었다. 동일한 양, 1일 쥐 1마리 당 10 또는 100 ㎍이 1일 1회 투여법에서 만큼 매4일 1회 투여법하에서도 효과적이었다. (도 13 참조).

실시예 IV - B16 흑색종

실험 프로토콜

이 실험에서, 발달된 동계 종양 모델에서 단독으로 그리고 화학 요법과 조합하여 IL-18을 평가하였다. 발달된 피하 B16F10 흑색종을 가진 쥐를 IL-18 단독 또는 이를 사이클로포스파미드 또는 토포테칸과 조합하여 처리하였다. 처리는 이식 후 11일째에 시작하였다. 부형제 대조군은 20일의 평균 생존 시간을 가졌다.

결과

IL-18이 형질 세포종 모델에서 단독으로 활성인 것으로 나타난 고용량으로 시험되지 않은 것이 주목되어야 하더라도, IL-18 단독 처리는 종양 성장에 효과를 나타내지 않았고 생존 시간에 대한 최소 효과 (≤30% ILS)를 가졌다. (도 14 참조). 매7일 1회 투여법하 제공된, 최대 내성 용량, 300 mg/kg의 사이클로포스파미드는 95%까지 생존을 증가시켰고 14일의 종양 성장 지연을 나타내었다. (도 15 참조). 토포테칸은 그의 최대 내성 용량에서 불활성이었다. (도 16 참조).

최대 내성 용량의 사이클로포스파미드와 IL-18의 조합은 항종양 활성에 대해 최소의 용량 독립적 효과를 가졌다. 사이클로포스파미드와 가장 낮은 투여량의 IL-18은 110%까지 수명을 연장시켰고 종양 성장 지연을 추가로 3일 더 지연시켰다. 더 큰 IL-18 투여량 조합은 사이클로포스파미드 단독 투여와 다르지 않았다. (도 15 참조).

IL-18과 최대 내성 용량의 조합은 B16F10의 성장 지연 또는 이 전이성 종양 모델에서 수명을 연장시킴에 있어서 토포테칸 단독 투여보다 더욱 효과적이지 않았다. (도 16 참조). B16F10 흑색종이 현재 이용 가능한 치료법에 대해 잘 반응하지 않는 강한 종양 모델이다.

실시예 VII - B16 흑색종

실험 프로토콜

B16 흑색종 종양 모델에서 사이클로포스파미드와 조합한 IL-18의 효과를 결정하기 위해 반복 실험을 수행하였다. B16F10 아류를 조직 배양으로부터 피하로 이식하였고 처리 전에 평균 100 mm³부피로 성장하게 하였다. 이 실험에서는 14일까지 100 mm³의 평균 부피가 되지 않도록 종양의 성장을 지연시켰다; 또한 처리 초기에 매우 큰 종양을 갖는 몇몇 동물들의 종양 크기에 큰 차이가 있었다.

결과

IL-18, 사이클로포스파미드 또는 이 조합으로 퇴행이 이루어 졌다. IL-18은 단독으로 약 2일의 최소 종양 성장 지연을 나타내었다. 최대 내성 용량의 사이클로포스파미드는 종양 성장을 14일까지 지연시켰고 IL-18의 첨가는 이 활성에 큰 효과를 나타내지 않았다. 조합된 IL-18의 더 큰 용량에서, 분명히 효과는 감소하였지만 이는 단지 종양이 치료 초기에 이 군에서 더 컸다는 사실에 의한 것이다. 그러나, 최적량 이하의 사이클로포스파미드, 180 mg/kg은 단지 4일의 종양 성장 지연을 나타내었고, 조합으로 양성 효과 즉, 치료 초기에 큰 종양을 가졌던 조합 군을 제외하고 약 10일 및 15일의 종양 성장 지연 효과를 나타내었다. (도 17 내지 19 참조).

실시예 VIII - 매디슨 109 폐암

실험 프로토콜

매디슨 109 폐 종양 모델에서 파클리탁셀과 조합한 IL-18의 효과를 결정하기 위해 실험을 수행하였다. 이 종양 모델은 파클리탁셀에 가장 민감한 동계 쥐 종양이지만, 그럼에도 불구에고, 이 약품에 약간만 반응한다. 이 종양을 피하로 이식하였고 처리 전에 126 내지 326 mm³의 평균 부피로 성장하게 하였다. 처리 초기에 큰 종양을 가졌던 몇몇 동물의 종양 크기에 큰 차이가 있었다. 파클리탁셀 (12, 24, 48 mg/kg)을 매5일 1회 투여법하 정맥 내로 투여하였다 (9 내지 13일). 쥐 1마리 당 1, 10 및 100 ㎍의 IL-18을 21일간 1일 1회 투여법으로 피하 투여하였다.

결과

파클리탁셀은 48 mg/kg에서 단독으로 그리고 조합 형태로도 독성이 있고 과잉의 체중 감소가 나타나는 24 mg/kg에서 거의 독성이 있다. 이 파클리탁셀 용량에 더 큰 용량의 IL-18을 첨가하는 것은 초기 사망을 초래하였다. IL-18은 단독으로 이전 실험에서 처럼 잘 내성화되었다. (도 20 및 표 3 참조).

단독 처리 또는 조합 처리로 되행은 없었다. 파클리탁셀은 단독으로 최소 종양 성장 지연 및 생존의 최소 지연을 나타내었다. 조합으로 효능에 큰 개선은 없었으나, 12 mg/kg의 투여량의 파클리탁셀은 더 낮은 투여량의 IL-18과 함께 종양 성장 지연을 연장시켰다. 낮은 투여량의 IL-18은 단독으로 종양 성장을 지연하지 않고 77%까지 수명을 연장시켰다. 이 동일한 수명 연장은 이 투여량의 IL-18이 파클리탁셀과 혼합될 때 관찰되었다. (도 20 및 표 3 참조).

IL-18㎍, 피하	파클리탁셀, mg/kg, 정맥 내
	0	12	24	48
0		3.5일 종양 성장 지연비독성27% ILS	9.7일 종양 성장 지연-4.7 g35% ILS	독성
1	1.7일 종양 성장 지연비독성12% ILS	9.9일 종양 성장 지연-3.7 g77% ILS	9.7일 종양 성장 지연-5.6 g77% ILS	독성
10	2.1일 종양 성장 지연비독성12% ILS	6.4일 종양 성장 지연-4.2 g21% ILS	독성	독성
100	2.8일 종양 성장 지연비독성0% ILS	3.3일 종양 성장 지연-3.5 g46% ILS	독성	독성

T-C: 종양 성장 지연

NT: 비독성, 3 gm 미만의 체중 손실

실시예 IX - 포유류 선종 16/C

실험 프로토콜

16/c 포유류 선종 종양 모델에서 IL-18 단독 및 독소루비신과의 조합 효과를 결정하기 위해 실험을 수행하였다. 16/c계를 1:10 브레이로 피하로 이식하였고 처리 시작 전에 52 내지 109 mm³의 평균 부피로 성장하게 하였다. 독소루비신을 12일 및 19일째에 정맥 내로 7.2, 12, 및 20 mg/kg 투여하였다. 12일째에 시작하는 21일간 1일 투여법하에서 쥐 1마리 당 IL-18를 1, 10, 및 100 ㎍으로 피하 투여하였다. 이 연구의 중점은 종양 성장 지연 및 퇴행이었다.

결과

독소루비신 또는 IL-18 단독을 또는 조합으로 퇴행은 없었다. 표 4에 제시된 바대로, IL-18은 독소루비신의 독성을 현저하게 약화시켰다. 독소루비신의 최대 내성 용량은 20 mg/kg이었다. 이 용량은 1 ㎍의 IL-18과 혼합될 때 조차도 독성을 나타내었다. 이 최대 내성 용량의 1/3의, 독소루비신 용량은 체중 손실을 나타내지 않았고 작은 효능을 나타내거나 나타내지 않았고, 10 또는 100 ㎍의 IL-18과 함께 독성을 나타내었다.

IL-18쥐 1마리 당 ㎍, 복강 내	독소루비신, mg/kg, 정맥 내
	0	7.2	12	20
0		비독성	비독성	비독성
1	비독성	비독성 (1/6)	독성 (4/6)	독성 (4/6)
10	비독성	독성 (5/6)	독성 (5/6)	독성 (6/6)
100	비독성	독성 (6/6)	독성 (5/6)	독성 (6/6)

(독성 사망)

독성때문에, 항종양 활성에 관한 조합의 효과는 결정될 수 없었다. 독소루비신은 도 21에 제시된 바대로 용량 의존성 종양 성장 지연을 나타내었다. IL-18은 단독으로 1주 미만의 최소 종양 성장 지연을 나타내었고, 평가된 100배 용량에서 대한 용량 반응 증거는 없었다 (도 22 참조). 두가지 제제의 가장 낮은 용량, 내성이 있는 조합의 용량에서만, 독소루비신의 항종양 효과의 증가가 없었다. (도 23 참조).

Claims

화학 요법제와 조합된 서열 번호 1의 전체 길이에서 서열 번호 1의 아미노산과 70% 이상의 동일성을 갖는 폴리펩티드.
화학 요법제와 조합된 서열 번호 2의 전체 길이에서 서열 번호 2의 아미노산과 70% 이상의 동일성을 갖는 폴리펩티드.
화학 요법제, 토포테칸과 조합된 서열 번호 1의 전체 길이에서 서열 번호 1의 아미노산과 70% 이상의 동일성을 갖는 폴리펩티드.
화학 요법제, 토포테칸과 조합된 서열 번호 2의 전체 길이에서 서열 번호 의 아미노산과 70% 이상의 동일성을 갖는 폴리펩티드.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 및 화학 요법제, 및 제약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
폴리펩티드와 화학 요법제를 조합하고 생성되는 조성물을 회수하는 것을 포함하는 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 제조하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 및 화학 요법제를 포함하는 조성물의 암 억제량을 투여하는 것을 포함하는 포유 동물에서 암을 치료하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 폴리펩티드와 화학 요법제, 및 제약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물의 암 억제량을 투여하는 것을 포함하는 포유 동물에서 암을 치료하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 및 화학 요법제를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 포유 동물에서 암을 예방하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 폴리펩티드와 화학 요법제, 및 제약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 포유 동물에서 암을 예방하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 및 화학 요법제를 포함하는 조성물에 민감한 포유 동물에서 종양 세포의 성장을 억제하고, 상기 종양 세포로 시달리는 포유 동물에게 이러한 조성물의 종양 세포 억제량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 폴리펩티드와 화학 요법제, 및 제약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물에 민감한 포유 동물에서 종양 세포의 성장을 억제하고, 상기 종양 세포로 시달리는 포유 동물에게 이러한 조성물의 종양 세포 억제량을 투여하는 것을 포함하는 방법.