KR19980703570A - 폴리뉴클레오타이드 면역유발제 - Google Patents

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KR19980703570A
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아미시 아우구스토
콘세티 안토니오
프랑코 베난지 마리아
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이그나쇼 보일
유니버시타 디글리 스튜디 디 카멜리노
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Abstract

폴리뉴클레오타이드를 함유된 면역유발제에 관한 것으로, 상피성장인자 수용체(EGFR) 친족의 군에 대하여 면역반응 유도하는 능력이 있는 약제에 관한 것이다.

Description

폴리뉴클레오타이드 면역유발제(Polynucleotide immunogenic agents)
제 1 도 : pCDneuNT 작도이고,
제 2 도 : 임신시 pCDneuNT 백신화 효과를 보인 그래프이다.
스위스(이계교배, outbred), 암컷마우스(3내지 6마리)를 pCDneuNT로 면역시키고, 마지막 보조후 2주일후 수컷으로 하루동안 교미를 시켰다. 교미는 질지고 표본중 정자세포의 존재로 평가하였다. (임신초일) 보고된 데이터는 임신동안 체성장률에 관한 것이다. 마우스 1 내지 2는 면역을 실시하지 않은 동물이다. (대조군)
[본 발명의 상세한 설명]
본 발명에 따르면, EGF수용체, 특히 HER-2/neu를 암호환한 비감염성 cDNA서열의 생체내 투여로 항암요법에 유용한 면역반응을 유발시킨다.
실제, 이와 같은 요법은 특히 암덩어리를 감소시키며 실험적으로 유도된 선천성암의 성장을 억제한다.
생체내 면역화효과는 역시 임신모델을 사용하여 나타내었다. 태아와 암발전이, 적어도 그들의 초기단계에서, 실제로 몇몇 관련된 생물학적 특징, 예를 들면 erbB-2/neu 유전자의 증가된 발현을 함께 나타낸다.
실제로 임신된 마우스에서 면역반응은, 상이한 성인 상피조직에 대한 세포독성이 없거나 무시해도 좋은, 태아 발육에 해를 끼치는 항원에 대하여 선택성이 있음이 판명되었다. 관찰된 특이 세포독성 효과에 따라, 전기 선택성은, 포름알데히드 치료시 비정상적 내성을 보여주는, 수용체 세포외 영역의 에피로프(epitopes)를 인정할 수 있는 anti p185항체를 생산과 연관되어 있다. 나아가 전기 선택성은, pCDneuNT 프라스미드로 변형된 NHI-3T3 휘브로브 라스트와 상호작용하기 위하여, c-erbB-2를 과잉발현하는 유방암세포선 SK-BR3와 상호작용을 하기 위하여, 맥관성암이 침투하는 인간유방이나 또는 neu transgenic mouse중 소절 유방선암으로부터 조직학적 시료를 착색시킴으로서 항체의 능력으로 확인하였다.
암유발 및 임신의 두가지 공정의 억제로, 면역화는 발전하는 조직중에서는 erbB-2/neu를 과잉발현하는 구조로 놀라울정도로 제한적이었고 다른 조직에서는 그렇지 않았기 때문에, EGF수용체를 암호한 서열을 갖는 DNA백신은 특이하고 효과적인 항암치료에 사용될 수 있는 것이다.
본 발명은 종래의 면역요법제와 비교시 여러 장점을 갖고 있다. 모노클로날 항체의 수동적인 전이와 비교시, 폴리뉴클레오타이드 백신은 항체의 생산뿐만 아니라 세포독성이 있는 CD8+MHC 1급 T임파구의 생산 및 팽창을 유발하는 장점이 있다. 면역반응을 일으켜야만 하는 것에 대하여 단백질의 에피토프(epitopes)를 보이는 선택된 서열을 갖는 펩타이드류(peptides)의 사용과 비교시, 본 발명은 현저한 장점을 갖는다: 실제 후자는 선택된 아프로타입(aplotypes)에는 제한적이지 못하고, 따라서 신비하고 약간 우수한 에피토프를 위한 잠재적인 T세포는 아프로타입 자체의 기초하여 각 목적으로 자발적으로 선택된 Th응답을 얻기 위하여 동족성 외래항원으로 활성화시킬 수 있다.
더욱이 항원농도가 제한적인 경우, 항체의 높은 친화성이 관용의 면역화로 생기는 것 같이, 폴리뉴클레오타이드 면역화로 관찰되는 바와 같이 낮은 농도의 항원의 발현이 첫번째 면역단계에서 이미 항체의 고친화도의 발전을 야기시킨다.
바이러스성 벡터(viral vectors)에 의한 면역요법과 비교시 naked DNA의 투여는 현저한 안정성을 보이는데 그 이유는 1) DNA는 감염성이 없고; 2) 숙주 클로모솜(host chromosome)중 항원성 DNA의 동화(integration)가 없기 때문이다. (발현벡터는 약 1주일간 에피조말 형태로 유지된다)
바이러스 면역으로 유발된 세포독성효과는 바이러스 항원을 발현하는 숙주세포의 수를 감소시킨다.
더욱이, 많은 바이러스가 부정적으로 숙주전사인자(host's transcriptional factors)를 통제하는데, 세포표면에 MHC Ⅰ군의 구조물의 발현을 감소시키는 한편, 다른 편으로는 MHC 구조물중 에피토프의 존재를 감소시키는 방법으로 세포내 단백질의 정상적인 공정을 저하시키고 있는 것이다. 본 발명의 또다른 장점은 항원 DNA서열의 손쉬운 유용성과 조절을 제공할 수 있다는 것이다.
본 발명에 따르면, 면역유발제(immunogenic agent)는 관용의 방법으로 제조될 수 있다. EGFR 또는 HER-2/neu의 DNA서열은 공지되어 있으며 PCR, 재조합 DNA등과 같은 관용의 방법으로 제조될 수 있다. 유전자 또는 키메라 구조물의 부분적인 서열 또한 사용하는 것이 임의 가능한데, 단 얻어진 발현제품은 적당한 면역유발성질을 갖어야 한다. 예를 들면 면역제는 제조공정으로 조직 및 미생물중에서 전기 DNA 발현을 허용하는 또는 그 이상의 서열(프로모토 및 원시복제)에 EGFR DNA를 연결하여 제조될 수 있다. 대조서열은 SV40 또는 싸이토 메갈로바이러스(cytomegalovirus, CMV)와 같은 프라스미드 또는 바이러스로부터 얻어질 수 있다. (참조, WO 94/21707, 1994. 9. 29)
면역제는 관용의 방법에 따라 투여될 수 있다. (참조, Donnelly J. J 등, The immunologist 2:1,. 1994)
DNA의 근육주사 투여효과를 감염된 질환의 치료를 위해 새로운 백신기구가 고려되었다. 근육경로에 부가해서 DNA는 다른 투여경로가 가능한데, 예를 들면 비경구 및 점막경로가 해당된다. (참조, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 9551, 1986; WO 90/11092, 1990. 10. 4) 또한 DNA는 발사장치(balistic apparatuses)에 따른 경피투여를 위하여 금 미세입자에 흡수시킬 수 있다. (참조, Johnston, Nature, 356, 152, 1992)
더욱이, 사전에 의견제시 관점에서, 면역은 생체내 생물학적 효능을 갖는 모노클로날 항체의 제조시 현저한 이점을 갖는다. 실제로 전기 온코겐(oncogene) 또는 관련된 푸로토-온코겐(related proto-oncogene)(neuNT, neu)의 DNA백신은, 치료시 응답하는 동물에서 직접적으로, 선택이 가능하며, 임파구선은 전기 모노클로날 항체 제조시 사용될 비장으로부터 분리된다. 유사하게 전기 백신은, 수동적 면역요법시 사용될 세포독성 분자구조물과의 임의 배합되어 보조제로서 사용하기 위한 모노클로날 항체의 생산시 말초혈액으로부터 인간 임파구선의 선택을 위하여 사용될 수 있다.
[발명의 분야]
본 발명은 면역유발제로서 erbB단백질의 단면 또는 전체(EGF receptors), 특히 her-2/erbB-2/neu receptor를 암호화하는 발현벡터(expression vectors)에 관한 것이다.
좀더 특별하게는, 본 발명은 숙주세포에서 특이한 면역반응을 유발하는 의약을 제조하기 위한 발현벡터의 용도에 관한 것이다.
[발명의 배경]
상이한 EGF수용체인 EGFR1, HER-2/neu, HER-3 또는 HER-4는 공지되어 있다.
특히 HER-2/neu는 항암치료분야에서 타켓(target)로서 제안된 바 있다. (참조, WO 90/14357)
푸로토-온코겐 HER-2/neu는 185 KDa막수용체 단백질(p185)를 암호한다. (참조, Schechter, A. 등, Nature 312/513, 1984)
HER-2/neu의 기능은 지금까지 잘 알려져 있지 않지만 그들은 티로신 키나제 활성(tyrosine kinase activity)의 증가와 연관된 것으로 보인다. (참조, Di Fiore, P. 등, Mol. Cell. Biol. 10:2749, 1990)
리간드(ligand) 및/또는 실험적 조건에 의존하는 흥분 또는 억제신호 모두를 유발하는 상이한 리간드가 수용체를 위해 제안되었다. (참조, Peles, E. 등, Cell. 69:205, 1992)
HER-2/neu는 태반형성 및 기관형성 동안 나타나고(참조, Kokay, Y 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:8498, 1987; Knezevic V. 등, J. Anat. 1985:181, 1994), 상피/소선 성인 조직의 대다수에서 적은량으로 검출될 수 있다. (참조, Press. M. 등, Oncogenes. 5:953, 1990)
p185의 돌연변이 및/또는 과잉발현(overexpression)은 암발병과 연관이 있다. 푸로토-온코겐은 점상 돌연변이로 활성화된다(Bargmann, C.와 Weimberg R.A., EMBO J. 7:2043, 1988). 남성에서는 돌연변이가 없었고 소선기관(예를 들면, 유방, 난소, 폐 및 신장의 선암)의 암에서 변형능력이 정상구조로 p185의 증폭/과잉발현과 관계가 있음이 발견되었다.
p185의 증폭은 유방암을 보이는 환자에 있어서 바람직하지 못한 예후와 관련이 있다. (참조, Yokota, J. 등, Lancet. i. 765, 1986; Slamon. D. J. 등, Science 235:1772, 1987; Yonemura, Y. 등, Cancer Research, 51:1034, 1991; Gustarson. B. A. 등, Europe. J. Cancer. 28:263, 1992)
최근의 연구에서 수용체 과잉발현과 약물내성의 현상사이에 연관이 있음을 제시하였다. 실제, HER-2/neu를 과잉발현하는 암은 5-후루오로우라실 치료로 감수성이 없다. (참조, Paikj S. M. 등, Proc. Am. Assoc. Cancer Resear. 32, 291, 1991) 이는 타목시펜과 시스푸라틴에 내성을 보이는 유방암세포선에서 HER-2/neu의 변형연구에서 확인된 바 있다. (참조, Benz C. C. 등, Breast Cancer Research Treat. 24, 84, 1991)
면역화학적으로 확인될 수 있는 HER-2/neu를 보이지만 예후가 좋은 유방암 Ⅰ기 환자에서 화학요법제 치료후 재발을 보였다. (참조, Alfred D. C. 등, J. Clin. Onc., 10, 559, 1992 및 Gusterson B. A. 등, J. Clin. Onc., 10, 1049, 1992) 더욱이 anti-HER-2/neu 항체는 유방암 및 난소암에 대하여 시스푸라틴 및 암괴사인자(TNF) 세포독성(cytotoxicity)을 증가시켰다. (참조, Hancock M. C. 등, Canc. Res., 51, 4575, 1991 및 Hudziac R. M., Mol. Cell. Biol., 9, 1165, 1989) 다른 한편, 약물내성 세포선에서, 상피성장인자(epidermal growth factor, EGF) 수용체의 량은 증가하고(참조, Meyers M. B. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 5521, 1986) 전기 수용체에 대한 항체는 약물의 세포독성효과를 증가시켰다. (참조, Aboud-Pirak E.등, J. Natl. Canc. Inst., 80, 1605, 1988; Baselga J. 등, J.Natl. Canc. Inst., 85, 1327, 1993)
항체와 유사하게 EGF 역시 시스푸라틴과 같은 알킬화제 이온화 광선, 마이토마이신, 5-후루오로우라실 및 아드리아마이신의 세포독성효과를 증가시켰다. (참조, Christen R. D., J. Clin. Inv., 86, 1632, 1990; Kowk T. T. 등, J. Natl. Canc. Inst., 81, 1020, 1989; Amagase H. 등, J. Pharm. Dyn., 13, 263, 1990; Amagase H. 등, XXX Jpn. J. Canc. Res., 80, 670; Kowk T. T. 등, Int. J. Cancer 49, 73, 1991)
암조직에서의 많은 량과 비교시 정상 상조식에서 발현된 p185소량의 수용체가 수동적 면역요법 치료를 위해 표적항원(target antigen)으로서 역할을 한다고 믿게 되었다. (예, 모노클로날 항체투여로) 예를 들면, 몇몇 anti-p185 모노클로날 항체는 생체외 및 누드마우스에서 유방암세포의 성장을 억제할 수 있다고 알려져 있다. (Marx. J., Science, 259:226, 1993)
최근 anti-erbB-2 모노클로날 항체가 수용체 자체의 정상이하(down-regulation)로 암에 대한 세포정지효과를 보인다는 것이 증명되었다. (Katsumatu M. 등, Nature Medicine 1:644-648, 1985)
비록 활동면역화치료(백신화)가 이항원을 위해 제안되었고, 예후는 유발된 면역이 이 항원을 생리학적으로 발현하는 상피조직에 대하여 독성을 보일 수 있다는 가능성으로 편견을 갖게 한다.
다른 한편 neu온코겐의 세포의 영역을 나타내는 재조합 백신 바이러스의 접종은 항원을 발현하는 암세포에 대하여 완벽하고 특징적으로 마우스를 보호하였다. (참조, Bernard. R. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:6854, 1987)
성장인자와 그들의 수용체는 암의 발생동안뿐만 아니라 태아발육동안 오토크린(autocrine) 및 파라크린(paracine) 정상순환계로서의 중요한 역할을 하기 때문에, 이들 발전적 공정에 기초된 실시모델은 특히 본 발명의 목적을 위하여 중요하다.
[발명의 요약]
본 발명은 종양학적 면역치료시 사용될 면역유발 제제의 제조를 위한 동족성 외래 HER-2/neu 또는 다른 EGF수용체 또는 전기 수용체의 부분서열을 암호화한 대체적으로 순수한 cDNA의 용도에 관한 것이다. 본 발명은, 또한 상기 언급된 cDNA중 하나를 포함하는 발현벡터, 그의 푸라스미드에 관한 것이다.
본 발명은 또한 특이한 모노클로날 항체의 생산에 사용될 수 있는 B-임파구의 분리와 선택을 하기 위한 cDNA의 용도에 관한 것이다.
1.1 pCDneuNT 발현벡터의 클로닝
DNA의 모든 효소조작, 클로닝 및 재조합의 구조물의 특징화방법은 매니아티스(Maniatis)에 의해 서술된 방법(Gene Cloning)을 엄격히 고수하며 수행하였다. neuNT 온코푸로테인을 암호한 cDNA를 함유하는 프라스미드 pSV2 neuNT를 HindⅢ, Sal Ⅰ 및 EcoRI 효소로 소화(digest)시켰다. (참조, Weinberg) EcoRI으로의 소화는 원시 프라스미드(PSV2neo)의 2개 단편으로 세대화(generate)한다. HindⅢ/Sal Ⅰ으로의 조합된 소화는 전체길이의 cDNA(약 4600bp)로 세대화한다. 다음 HindⅢ/Sal Ⅰ유전자분절(segment)을 중간벡터 pSP64중에서 클로화시키고, 미리 효소 HindⅢ/Sal Ⅰ으로 소화시킨다. 재조합구조물 pSP64neuNT(Amersham)을 클론화시키고 앞서 기재된 바와 같이 특징화시킨다. pSP64neuNT를 HindⅢ/EcoRI으로 소화시키며 두개의 절편(fragement)로 세대화한다: 1) 3000bp(pSP64) ; 2) 약 4600bp(neuNT). 절편 2(Fragment 2)를 pCDNA3 neo ()중에서 클론화시키고, 앞서 효소 HindⅢ/EcoRI로 제조 및 소화시켰다. 최종 재조합벡터를 면역절차를 위해 사용하였다.
1.2 마우스와 랫트의 면역화
암컷의 outbred Swiss, CD1 및 Balb-c와 inbred FVBN과 Balb-c H2 D계 마우스를 0.3ml/체중100g의 용량으로 넴부탈-에퀴쉐시나인(nembutal-Equithesinain) 용액을 투여하여 마취시켰다. 인슈린실린저(1ml) 주사액을 샐라인중 DNA용액 100μ1(1mg/1ml)를 넣는다. 동물을 격주 간격으로 수행한 3번의 접종물로 면역화시킨다. 동일한 면역절차를 비스타 랫트(Wister rats)에 사용하였다.
1.3 생체내에서 항원의 발현
생체내 neuNT항원을 발현하는 pCDneuNT 프라스미드의 능력을 부여하기 위하여, 동물을 48시간 주사제로 희생시키고 대퇴사두근육을 한조각중에서 제거시킨다. 근육조직을 프로테아제 억제제와 비이온성 세정제 존재하 균질화시킨다. 다음 총 추출단백직을 단일 특징화한 토끼 폴리클로날 anti-neu 1gG 항체(K15) SC-07(Santa Cruz Biotechnology, USA)를 사용하여 p185 항원 존재하 돗트 브롯트(dot blots)중에서 표준절차를 따라 측정한다. (돗트브롯트 공정과 모든 다른 면역화학적 기술은 다음에 보고된 기술에 따라 수행하였는 바, Antibodies : a laboratory manual 1988 Cold Spring Harbor Laboratory Ed. Harlow/David Lane에 기술된 공정에 따라 수행한 것이다)
결과적으로, 단지 pCDneuNT를 주입한 근육에서 유도된 단백질이, 대조 푸라스미드로 처리된 것은 없이 anti-p185항체와 결합시킬 수 있었음이 입증되었고 pCDneuNT푸라스미드는 근육섬유 내부에 p185 분자구조물의 합성을 직접할 수 있다고 결론지을 수 있었다.
1.4 숙주에서의 면역반응능(Immunoreactivity in the host)
ⅰ) 마우스(mouse) :
사용된 동물종류에 따라 외인성항원(exogenous antigens)에 반응하는 능력이 크게 다름을 알 수 있었다. 또한 마우스중 neu rat의 면역유발능(immunogenicity)과 관련하여 문헌(Bernards R. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 6854~6858, 1987)에는 백신바이러스로 면역화로 온코켄의 세로외 영역(extracellular domain, ECD)에 대하여 항체생산이 잡종 개체 속하는 숙주에 제한적임을 밝힌 바 있다. 그러므로 다음과 같은 유전자 면역화된 상이한 종의 anti-p185 면역반응능을 분석할 필요가 있는 것이다.
8주되는 잡계(Outbred) Balb-c, CD1 또는 스위스계 또는 순계(inbred) Balb-c H2 D또는 FVBN 마우스에 100μg 대조푸라스미드를 접종하거나 앞에서 기재한 스케줄데로 pCDneuNT 동량으로 접종하였다. 대조군으로 동일동물의 전면역혈청(preimmune sera)을 사용하였다.
anti-p185 항체의 생산 및 특이성을, 웨스턴 브롯팅 기술을 통하여 pSVneuNT로 변형된 3T3세포에서 용리된 항원자원세포를 사용하면서 평가하였다. (Bernards, R. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:6854-6858, 1987)
실험결과 동족 및 잡종 마우스 모두 pCDneuNT로 면역화시 랫트단백질을 인정할 수 있음을 보여준다.
나아가, 항원항체 복합물의 형성이 수용체의 과잉생산으로 특정화된 조환(transgenic) MMTV, neuN 마우스중 쥐의 유선암을 면역화학적 분석을 통하여 증명되었다. (C. T. Guy 등, PNAS, 89:10578~582, 1992)
MMTV, neuN 조환마우스(3-5u)의 유선암의 섹숀이 상기에서 보고된 동일한 방법으로 제조되었으며, pCDneuNT 또는 대조푸라스미드로 면역된 쥐에서 유래한 항혈청(antisera)으로 인큐베이션시키고(항혈청의 희석도 1/30), 다음 퍼옥시다제와 결합된(1/100희석) 염소 항-마우스항체를 부가하였다. 단지 pCDneuNT항혈청이 암세포막에 명백한 반점이 발전될 수 있음을 발견하였다.
ⅱ) 랫트(rat) :
마우스에서 pCDneuNT와의 면역화는 전형적인 이종면역을 보이는데, 그 절차는 상이한 종(마우스)의 숙주중에 다른 종(랫트)의 면역유발 단백질이 존재함을 보인다. 만약 anti-p185 면역능을 다양화하기 위해서는 완전한 유성생식으로 유전자의 면역화를 통하여 세대화할 수 있으며, 비스타 랫트(Wister rats)(outbred)를 마우스에 적용된 것과 같은 동일한 면역체계를 응용하여 pCDneuNT푸라스미드로 접종하였다. 근육중 접종량은 0.8mg까지 증가시킬지라도 anti-p185 혈청양성은 처치된 동물중에서 입증된 바 없다.
이 결과는 Bernards R. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:6854~6858(1987)에 보고된 내용과 일치하며, 쥐의 모델중에 항원 자신에 관하여 증가된 내성(예를 들면, 인간에 있어)을 보인다는 개념을 시행한 것이다(Houghton A. N., J. Exp. Med., 180:1~4, 1994) 동일하거나 다른 경로를 통하여 벡터와 약물을 동시에 접종은 p185자신에 관하여 내성영향을 감소시키거나 피할 수 있다 함은 어느 경우에서도 아직은 가능한 일이다.
1.5 항체특이성(Antibodies specificity)
ⅰ) 자동항체(antoantibodies)인 anti-rat p185 IgGs.
랫트 pCDneuNT의 주입은 랫트수용체(neuNT에 대한 반응성)에 대한 항체반응의 생성을 유발시킴을 보이며, 단순한 필로게네틱(philogenetic) 이유로, 동일한 마우스 항체는 마우스 수용체자체(항원자신)과 동질의 인간변종 erbB-2 모두를 인정할 수 있다는 점은 예상될 수 있는 일이다.
마우스에서 항원자신에 대한 순환 anti-p85 항체의 면역반응은 조직화학(histochemical) 수단으로 입증되었다.
성체 랫트에서와 같이 마우스에서, neu proto-oncogen1은 생리학적으로 폐, 간, 신장, 소화관과 같은 상피/내분비 조직중에서 그리고 표피세포의 경피층에서 발현된다. (참조, Knerewik V. 등, J. Anat., 181:1985, 1994)
실험에서 동물은 에텔증기과량으로 희생시켰고, 섹숀(3-5u)을 조직으로부터 제제하였는데, 이 조직은 카르녹익스(Carnoix) 방법에 따라 제조된 재료로부터 신장과 같은 계속적으로 erbB-2/neu를 발현하며, 표준방법에 따라 조직분석으로 제조되었다. 다음 시료는 anti-p185 항혈청으로 또는 1:60의 희석된 대조혈청으로 인큐베이숀 시켰으며, 계속하여 알카리성 포스파타제(희석 1/100)와 결합된 염소 anti-mouse 항체를 가한다. 그 결과 다음과 같은 사항을 명백히 입증되었다 : a) 동일동물의 신장세포에 대한 순환 p185항체의 반응성 및 b) 대조 pCDNA-3으로 면역시킨 항체로 동일세포의 인정결여, 타켓항원인 쥐 p185의 확인은 면역 마우스혈청 또는 전에 기재된 토끼 anti neu K15 SC-07 항체와 함께 인큐베이숀시킨 마우스 신장의 균질화된 추출물을 사용하여 웨스턴 브롯팅(Western blotting) 방법으로 입증되었다.
ⅱ) 인간수용체와 Anti-rat p185 IgGs의 교차반응
pCDneuNT로 면역화된 마우스에서 생산된 anti-p185항체는 인간 p185 동질변형 erbB-2로 인정될 수 있다는 가능성이 p185erbB-2를 과잉발현하는 인체 유선암 세포선으로부터 유도된 SKBR3 세포를 사용하여 동초점 현미경(confocal microscopy)으로 면역형광을 관찰하는 것으로 얻어졌다. (106수용체 분자구조물/세포; Kraus M. H. 등, EMBO J., 6:605~610, 1987 참조)
SKBR3 세포를 제조한 후, 커버-슬립 슬라이드(cover-slip slides)상에서 성장시키고, 냉메탄올-아세톤(1:1 V/V)(투과성이 있는 세포)의 혼합물 또는 2% 파라포름알데히드(비투과성인 세포)를 혼합하고, 세포시료를 1/30로 최종 희석시켜 anti-p185 항혈청으로 인큐베이션시킨 다음, 항원항체반응을 후루오레신과 결합된 양 anti-mouse IgG 항체(FITC)(Boehringer)(희석 1:60)를 사용하여 입증하였다.
장삽된 슬라이드를 트리플알곤레이져 및 60x오일침적 대물렌즈가 장착된 레이져 동초점 현미경(BioRad MRC800K)하에서 실험하였다.
프라스마 멤브레인의 세포외 부위상 확산방법으로 분배된 강한 형광을 보이는 비투과성 세포와, 핵주변(perinuclear) 영역에서 잘 경계가 이루어진 형광을 보이는 투과성 세포 모두의 반응성은, anti-p185 항체가 항원의 세포외 및 세포내 영역 모두에서 이정될 수 있는 면역 글로부린(immunoglobulins)의 혼합개체로 구성되었음을 보여준다.
쥐 anti-p185 항테가 인체변형 항원임을 인정할 수 있는 확증이 SKBR3, T23.1(레트로 바이러스 erbB-2 DNA로 형질감염 3T3 NIH fibroblasts), 및 대조 3TS 세포의 세포용리물을 사용하여 웨스턴 브롯팅(Western blotting) 방법을 수행하여 얻어졌다.
그 결과 pCDneuNT로 면역된 마우스의 혈청으로 anti-p185 존재를 분명히 나타냈으며, 스트렙타비딘(streptavidin)(1:200)과 결합된 포옥시다제(horseradish)와 바이오틴닐화된(biotinylated) 염소 anti-mouse IgG 항체(Santa Cruz Biotechnology Inc.)로 검정했다.
Anti-p185 항체는 인체 erbB-2와 상호작용할 수 있으며, 강한 고정 공정후라 할지라도 단백질의 세포외 영역을 인정할 수 있다는 사실이, 이들 항체와 함께, 몇몇 인간 유방선암(human mammary adenocarcinomas)에서 관찰할 수 있는 erbB-2/neu의 과잉발현을 분석할 수 있는 가능성을 제시한다.
따라서, 외과적 방법으로 얻고 마세라타(Macerata)의 Ospedile Civile에 기재된 병리학적 해부방법으로 수행된 맥관성 침투암의 히스토타입(ductal infiltrating carcinoma histotype)과 대응하는 21개의 시료를, 파라핀 브록에 함침시켜 고정시키는 동일공정을 사용하고 쥐조직을 조직섹숀하여 염색하는, 조직화학(histochemistry)방법으로 실험하였다.
pCDneuNT로 면역된 암컷마우스의 혈청에서 anti-p185 양성이, 절대적으로 겹쳐놓는 방법으로 상업적으로 이용가능한 항체로 염색될 때 erbB-2에 대한 양성을 보인 21개의 케이스 중 8개 케이스에 지나지 않음이 관찰되었다.
쥐의 anti-erbB-2/neu항체를, 예를 들면 EGFR-1과 같은 EGFR 친족 멤버중의 다른 멤버와 반응시킬 수 있는지를 입증하기 위해서, 쥐의 항체를 표면중에 EGFR-1 수용체 분자구조물(2-3×106/세포)을 아주 고단위로 발현하는 것으로 알려진 인체 A431 표피세포암선의 세포로 인큐베이숀시켰다. p170EGFR-1과 관련하여 anti-p185neu 항체의 면역반응능을 FACS 스캔을 사용한 면역형광법으로 분석하였다.
항원과 항체의 대조군은 각기 음성대조군으로서 임파세포 CEM(EGFR-1을 발현하지 않는, 급성 임파구 백혈병이 있는 환자로부터 얻은 인체세포)와, erbB-2/neu의 ECD로 특정화된 모노클로날항체 W600(P.G.Natali : 박사, Istituto di ricerca sperimentale Regina Elena, 로마)으로, 양성대조군으로 EGFR-1 항원과 교차반응이 없는 세포를 사용하여 제조된다. 세포를, 항체와 2차 anti-mouse FIT를 결합시켜 인큐베이션한 후 Bekton Dickinson FACS(알곤레이져광선여기, 488nm, 525nm에서 방출된 광선측정)를 사용하여 분석하였다. 얻어진 결과는, anti-p185 면역글로부린이 면역된 마우스의 항혈청중에 존재하였고 W600MAb와 정확하게 같은 처신을 보였으며, 즉 그들은 p170EGFR-1에 대하여 반응성을 보이지 않았음을 명백히 알려주는 것이다.
1.6 p185항혈청의 생체외 능력
anti p185항혈청에 의한 SKBR3세포의 성장억제
SKBR3 세포를 103세포/플레이트의 농도가 되도록 35mm 배양 플레이트중에 플레이트하였다. anti-p185 항혈청과 대조항혈청 30μl (총 IgG 약 300μg)를, 2회에 걸쳐 0일에 첨가하였다. 일주일후 세포를 플레이트에서 옮긴후 그 수를 혈구계(haemocytometer)로 측정하였다. IgG의 이소타입(isotype)인, pCDneuNT 면역된 마우스에서 얻은 면역글로부린은 SKBR3세포의 성장을 억제하였다.
ⅰ) 치료시독성
DNA 백신투여로 인한 순환 anti-DNA 항체의 비생산성을, 항원으로서 고도의 정제된 송아지 흉선 더블헤릭스 DNA를 사용한 상업적으로 유용한 ELISA Kit(INOV Diagnostics INC; 샌디에고, 카나다) 사용하여 측정하였다. IgM과 IgG 용량의 변화는 특별히 기재하지 않았다. 혈액학적 및 헤모크롬(Haemochrome)과 같은 혈청변수, VES 백혈구 구조, 단백혈증 등의 분석을 수행하였는 바, 모두 정상범위내로 밝혀졌다.
ⅱ) 조직의 조직병리학적 실험
면역된 동물이 그들 자신의 조직인 neu수용체와 상호작용할 수 있는 순환항체를 소유하고 있는 사실이, 자동면역타입의 병리학적 현상이 예를 들면, 보상계(세포독성 의존성보상, CDC) 및/또는 천연 킬러세포(세포의 세포독성 의존성 항체, ADCC)에 의해 매개된 기전을 통하여 일어날 수 있는 가능성을 내포하고 있다. (참조, Stribling 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89; 11277-11281, 1992)
이와 같은 가설을 입증하기 위하여, 동물을 과량의 에텔증기로 희생시키고, erbB-2/neu를 본질적으로 발현하는 조직인 신장, 소화관, 프라센타 및 유방선을 관용의 방법으로 고정시키고, 파라핀 블록에 침윤시킨후, 섹숀(3-5μ)을 절단하고 전에 기재된 표준공정을 이용하여 탈파라핀화 공정을 수행하였다. 이와 같은 방법으로 처리된 시료를 헤마톡실린(haematoxillin)과 에오신(eosin)으로 염색하였다.
반복적인 조식실험에서, 면역 마우스중에서, pcDNAneuNT로 면역된 동물중에서 조직손상(예를 들면 조직괴사면적, 임파구 침투 또는 기타에 의해 입증된)의 최소흔적일지라도 존재성을 항상 배척하여 왔다. 그러므로 DNA백신은 일반적 및 조직수준의 분명한 독성을 갖지 않는다고 혹자는 주장하고 있으며, 실제 동물이 수용체 자체에 대한 항체를 소유한다는 사실에도 불구하고 조직 또는 기관에 특이한 자동면역병리가 관찰된 바는 없다.
이상을 요약하면 다음과 같다.
ⅰ) 동물에게 백신투여후 1년간 정상적으로 규칙적으로 사료와 음료를 주었다;
ⅱ) 그들은 질적으로 우수하였고; 그들의 개별 또는 군을 이루는 행동의 변화는 기재될만한 것이 없었다.;
ⅲ) 혈액학전 변수는 정상범위내를 유지하였다;
ⅳ) 조직실험에서 어떠한 손상도 없이 neu를 발현시키는 조직이었다;
ⅴ) 백신화로 순환 anti-DNA IgM 과/또는 IgG 항체가 검출된 정도의 증가로 생산되지 않았다.
ⅲ) 임신한 마우스에서 pCDneuNT로 백신한 효과
면역된 암컷 스위스 마우스의 83%에서 순환 anti-p185항체가 발견되었다. 10마리의 혈청 양성동물을 수컷과 함께 장에 가두고 질내용 도포방법으로 정자세포를 존재시켜 그 날자를 교미일(임신 1일)로 잡았다. 임신후 체중을 매 이틀 간격으로 기록하였다. 열마리의 암컷 마우스중 7마리가 1배 새끼당 새끼의 감소된 숫자를 보여주는 반면(5±2로 대조군에서 13±3으로 비교된다) 잔여 3마리는 자궁절제 수술로 충분한 태아 재흡수를 보였다. 보다 특징적인 것은 anti-p185 항체의 특징적 발전을 모두가 보여준 Balb/c H2 D와 같은 인브레드 종에 대한 백신의 효과이다. 면역화된 암컷 마우스 19마리중 14마리가 전혀 출산을 하지 못했고, 나머지는 출산을 했으나 대조군과 비교될만한 제한된 숫자의 새끼를 출산했다. (15마리 : 8±3마리 출산) 반대로 대조 플라스미드로 미처리된 마우스군과 면역된 마우스군 또는 pCDneuNT(유성면역)로 면역된 랫트군 사이에서는 수정능의 특이한 차이점은 없었다.
ⅳ) 프라센타(placenta) 및 유방조직의 조직병리학적실험
7마리의 p185 혈청양성 임신한 마우스를 프라센타 및 유방조직선의 조직병리학적 실험을 위하여 희생되었다. 포르말린으로 고정된 조직의 섹숀(3-5μ)을 전술한 바와 같이 염색되였다. 모든 표본에서 조직 병리학적 요소를 피할 수 있음을 발견하였다.
ⅴ) 마우스 육종에 대한 효과
푸로토-온코겐을 과잉발현하는 육종과 관련하여 erbB-2/neu에 대하여 백신에 의한 면역요법 효과를 검증하기 위하여, 육종을 다음 절차에 따라 아웃브레드(outbred) 마우스중에 유발시켰다: NIH3T3 피브로프라스트의 클론은 CMVneuNT로 형질전환시키고, 세포표면에 수용체의 대체적 수준으로 발현시킨 것을, 면역 싸이클의 종말후 2주간 스위스 CD1 마우스에 접종시킨다. 주입부위에서 신생물 덩어리의 성장을 칼리브레이션 방법에 따라 시간별로 측정하였다. 대조 플라스미드로 비면역된 마우스와 면역된 마우스에 있어서, 세포를 약 3주간 진행시켜 성장시켰다.(표 참조). 기본적으로 상이한 결과가 변형된 피브로브라스트(fibroblasts)를, 주입 부위에서 신생물 덩어리의 발전이 관찰되지 않는, pCDneuNT로 면역된 마우스에 접종시킨 경우에서 얻어졌다.
그러므로 이 결과는 나선 DNA의 주입생리학적 용액의 형태로 CMVneuNT plasmid로 면역화된 것은, neu 온코겐을 과잉발현하는 암세포의 부착과 보급을 철저하고 특이적으로 억제할 수 있음을 보여주는 것이다.
[표]
육종성장의 억제
10주된 고령의 스위스 CD1(Charles River) 암컷 마우스(그룹당 12마리)를 실험에서 기재된 바와 같이 neuNT(C)와 관계가 없는 유전자(p24-FIV)(B)로 암호화된 프라스미드 DNA로 면역화시켰다. A그룹의 마우스는 생리식염 주입을 받았다. 2주후 마우스에 neuNT로 형질감염된 107의 3T3 NIH세포로 접종시켰다.
w : 시도후 주일수이다.
본 자료는 육종의 면적을 평균한 것이다(±SD)
nd : 육종이 검출된 바 없음.

Claims (9)

  1. 상피성장인자수용체(EGF)가 기능적으로 cDNA의 발현을 지도할 수 있는 능력이 있는 대조서열(control sequences)과 연결되어 암호화된 cDNA로 구성된 근주 또는 다른 경로로 투여할 수 있는 폴리뉴클레오타이드 면역유발제.
  2. 제 1 항에 있어서, cDNA가 HER-2/erbB/neu 온코겐으로 암호화된 면역유발제.
  3. 제 1 항과 제 2항중 어느 한 항에 있어서, cDNA가 EGF 수용체 친족의 푸로토-온코겐 또는 온코겐으로 암호화된 면역유발제.
  4. 제 1, 2 또는 3항중 어느 한 항에 있어서, 암의 예방 또는 요법치료를 하기 위한 면역유발제.
  5. 제 4 항에 있어서, 유방암 및/또는 난소암, 폐암 및 신장암의 선암과 상기 온코겐으로 발현된 다른 신생물에 의한 암의 예방 또는 요법치료를 하기 위한 면역유발제.
  6. 상기 항중 어느 한 항에 있어서, 대조서열(control sequences)이 폴리스미드 또는 바이러스로부터 유도된 면역유발제.
  7. 제 1, 2, 3 및 6항에 따라 처리된 면역유발 동물에서 선택된 항수용체 모노클로날 항체를 생산하는 면역유발제.
  8. 제 7 항에 있어서, 인체 모노클로날 항체 생산시 세포독성약제(면역독성)와 연합(association) 또는 결합(conjugated)되어 면역요법으로 사용되는 면역유발제.
  9. 제 1, 2, 3, 4, 5 항중 어느 한 항에 있어서, 암치료시에 보조요법으로 강화된 면역유발제.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101135233B1 (ko) * 2000-05-19 2012-04-12 제넨테크, 인크. ＥｒｂＢ 길항제에 의한 암 치료요법에 대한 효과적인 반응의 가능성을 개선시키기 위한 유전자 검출 분석
US7332585B2 (en) * 2002-04-05 2008-02-19 The Regents Of The California University Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof
US20040147428A1 (en) * 2002-11-15 2004-07-29 Pluenneke John D. Methods of treatment using an inhibitor of epidermal growth factor receptor
WO2004061105A1 (en) 2003-01-03 2004-07-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Rhesus her2/neu, nucleotides encoding same, and uses thereof
CN101173282B (zh) * 2003-07-21 2011-04-06 P.安杰莱蒂分子生物学研究所 编码人表皮生长因子2/neu抗原的合成基因及其用途

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4935341A (en) * 1986-06-04 1990-06-19 Whitehead Institute For Biomedical Research Detection of point mutations in neu genes
US5401638A (en) * 1986-06-04 1995-03-28 Oncogene Science, Inc. Detection and quantification of neu related proteins in the biological fluids of humans
ES2106033T3 (es) * 1989-05-19 1997-11-01 Genentech Inc Dominio extracelular de her2.
WO1991017251A1 (en) * 1990-04-30 1991-11-14 Board Of Regents, The University Of Texas System STEROID 5α-REDUCTASES
US5527703A (en) * 1994-05-25 1996-06-18 Merck & Co., Inc. DNA encoding glutamate gated chloride channels

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ITMI950676A0 (it) 1995-04-04

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