KR19980701287A - 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-디이-갈락토피라노실-디이-크실로스의 용도 및 생산방법 - Google Patents

장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-디이-갈락토피라노실-디이-크실로스의 용도 및 생산방법 Download PDF

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후안 호세 아라곤 레예스
프란시스꼬 하비에르 까나다 비시나이
알폰소 페르난데스 마요랄라스 알바레스
로사 로뻬스 알바레스
마누엘 마르띤 로마스
다니엘 비야누에바 또레그로사
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놈벨라 써싸르
꼰세호 수페리올 인베스띠가시오네스 시엔띠까스
씨에이로 까를로스
우니베르시다드 아우또노마
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Abstract

O-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스에 대해, 특히, 실질적으로 강화된 락타아제 에 친화력이 있는, 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 2-O-β-D-갈락토피라노실-D-자일로스와 3-O-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 용도에 대해 기재되어 있다. 또한, 4℃ 내지 37℃의 온도에서 pH 5.0 내지 pH 9.0로 완화된 액체 매개물과 β-갈락토사이드 효소의 존재에서의 β-D-갈락토피라노실의 기질과 D-크실로스의 반응단계와, 박층 색층 분석에 의해 검출된 이당류 형성의 최대 산출에 도달했을 때 100℃로의 가열에 의해 β-갈락토사이드의 활성제거단계와, 물과 물/알콜 사이에서 선택되는 희석제에 의해 여과되어 형성된 이당류를 분리하는 단계로 구성되는 O-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 생산방법에 대해 기재되어 있다.

Description

장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-디이-갈락토피라노실-디이-크실로스의 용도 및 생산방법
장내 락타아제의 활동의 결정은 위장병학에서 매우 중요하며, 점액질 샘플로부터 분리하거나 직접적으로 전달될 수 있고, 또는, 개인적인 투약 후에, 간접적으로 혈액의 포도당이나 배출된 수소로부터 분리될 수 있다. 직접 측정은, 구성이 복잡하고 고가의 방법이라는 단점이 있어서, 각각의 위험성이 있는 불유쾨함과는 별도로, 이어서 분석을 실시해야만 하는 시료의 추출 기술을 구비한 전문가와 특별한 기구를 필요로 한다.
간접 측정은, 개인적으로 채취되는 다른 식품의 소화에 기인한 포도당과 유통되는 내생(內生) 포도당의 존재에 의한 실수의 가능성과 복잡함과는 별도로, 시료를 분석하기 전에 전문가에 의한 혈액의 추출을 필요로 하는 혈액을 포함하는 기술인 단점이 있다.
장의 락타아제의 또 다른 측정방법은, 비이당류라는 사실을 근거로 하고, 또한 락타아제의 친화력을 근거로 하며, 특별하게는, 락타아제의 기질에 따른 작용과 변형, 효소의 작용에 의한 비단당류는 장에 의해 쉽게 흡수되고 소변을 통해서 제거된다.
따라서, 스페인특허 ES-P-478590호와 ES-P-482073호에 나타난 방법은, 3-0-메틸 락타아제의 구두투약과 소변인 3-0-메틸-D-글루코스의 조직을 의미하는 “in vivo”라는 사실을 근거로 평가된다. 그러나, 상기한 본 방법은 소변인 3-0-메틸-D-글루코스 발견을 위한 크로마토그래피 절차를 필요로 하게 되고, 합성이식과 값비싼 설비로 장치를 조직화한다.
반면에, 스페인특허 ES-P-9001690호에는 식(Ⅰ)의 이당류 4-0-β-글라토피라노실-D-크실로오스의 조제와 장의 락타아제의 작용이 나타나 있다.
상기한 이당류는 구두로 투약되고, 이 장의 락타아제의 기질에 따른 작용은 장를 분해하는 것으로, 크실로오스와 갈락토오스에 있어서, 크실로오스의 흡수와 소변을 통한 제거로 단순한 색채적인 방법을 의미하는 것으로 평가되어진다. 스페인 특허 ES-P-9001680호의 이당류는 락타아제의 완전히 작은 구조를 보유함에도 불구하고 현재 필요로 하며, 또한, 락토오스의 친화력을 강화시킨다. 이 이식은 4-0-β-글라토피라노실-D-크실로오스로 소화되는 한 부분으로 락타아제의 효소적인 작용을 근거로 가수분해하기 때문에 크실로오스와 갈락토오스의 비분해부분은 배설물로 제거된다. 상기 이식은 소변을 조직화하는 크실로오스의 한계값을 심지어 낮게 표시되어지는 에러의 각각의 기질의 마진을 뜻하며, 2로 시작해서 0으로 지정되는 장의 락타아제 작용과 이당류의 가수분해의 지정은 라타아제의 친화력의 결점 때문에 형성되어진다. 상기한 에러의 마진의 경감을 위해, 이것은 이당류의 기질의 양을 개별적으로 소화시킬 필요가 있고, 여기서 그와 같은 개개인의 불쾌한 점인 설사라는 장에 있어서의 문제를 유도하여 해결한다.
스페인특허 ES-P-9001680호에도 또한 4-0-β-글라토피라노실-D-크실로오스를 위한 준비의 방법이 나타나 있고, 근본적으로 벤질-β-D-크실로피라노시드의 합성부분으로 구성되며 조직상의 순서에 따른 이식은 보호반응, 글리코실화와 비보호로 선택되어진다. 모든 반응무대의 수로 값비싼 반응제의 사용과 같은 실버트리플레이트인 글리코실화의 반응과 크로마토그래픽 컬럼의 이용인 최종생산물과 중간물의 정화로, 생산비용과 산업규모에 있어서의 상기한 절차에 따른 현상으로 이해하기 어려운 생산비용을 형성하게 된다.
반면에, 고린(Gdrin) 등은 β-갈락토와 β-글루코-피라노실 이당류의 합성은 “Sporobolomyces Sinqularis”, Can.J.Chem.42(1964)2307-2319호에 복수의 이당류의 합성이 나타나 있고, 2-0-β-D-글라토피라노실-D-크실로오스와 3-0-β-D-글라토피라노실-D-크실로오스의 사이에 실험에 의한 완전한 절차임을 의미한다. 이 간행물 추단은 갈락토실의 전이로부터 처리되는 결과에 따라서 조사되어지고, 다양한 수용체로 사용되어지는 제1히드록실기로부터 그이상의 제2히드록실기로 근본적으로 대용되는 최소구조를 필요로 하는 반응으로 수용체와 같은 히드록실기를 대용하는 것과 같은 반응을 일으킨다. 그러나, 이 간행물은 이당류의 합성으로 분배되어 사용되어지지는 않는다고 나타나 있다.
소화하는 락토오스가 불충분하거나 없음으로 인한 장내 락타제의 결핍 또는 저활성은, 성인에 있어서의 일반적인 증후군이라 하더라도, 선천적 신진대사의 결함에 기인하는 경우는 극히 적다. 대부분의 포유동물에 있어서, 락타아제 활동의 급격한 감소는 이유기로부터 나타난다.
오랜 기간동안 생성되는 우유 등을 실질적으로 소비하는 인간에 있어서, 이러한 감소는 극히 적다. 한편, 장내 락타제의 결핍 또는 저활성은, 양육되는 유아에 있어서는 대단히 빈번하다.
본 발명은 장내 락타아제 활동의 엄밀한 평가방업의 분야에 관한 것이다.
도 1은 a) 생체 내에서의 소변을 통하여 제거된 크실로오즈의 비율에 따른 β-D-갈락토피라노실-D-크실로오즈 (I), (II), (III)의 혼합물의 가수분해와 그리고 b) 다음의 예들에서 기술한 쥐들의 성장 동안에 장(腸)내의 락타아제 활동(nm/min/mg 단백질)의 방출의 그래픽적 표현이다.
본 발명은 상기한 과제를 명백히 해결하기 위한 것으로 β-D-글라토피라노실-D-크실로오스을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상세하게는, 2-0-β-D-글라토피라노실-D-크실로오스(일반식(Ⅱ))
및, 3-0-β-D-글라토피라노실-D-크실로오스(일반식(Ⅲ))
장의 락타아제의 무혈 및 관련평가에 사용되어지는 조성물 및 용액의 제조에 사용되어진다.
다른 한 편으로, 본 발명의 다른 목적은 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 제조를 가능하게 하는 방법이고, 이당류의 이러한 타입의 종래 제조방법에 대한 단순화한 방법으로서, 다른 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 그것과 함께 청구된 용도이다.
β-D-갈락토피라노실-D-크실로스, 즉, 청구된 용도인 2-O-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스 및 3-O-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스는 이러한 식의 평가에서 종래에 사용된 이당류에 대하여 충분히 증강된 락타제의 친화도를 나타내며, 이것은 이 두 화합물이, 4-O-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스와 같이 종래에 사용된 화합물보다 락타제와 구조적으로 덜 유사하다는 사실에 비추어 놀라운 결과를 나타내고, 이것으로부터 분자의 글리코시드 결합에 각각 인접한 여러 가지 히드록시기와 구조적으로 구별된다.
화학식(Ⅱ) 및 (Ⅲ)의 이당류는, 종래의 그 자체로 각각 또는 연합하여 있거나, 화학식(Ⅰ)의 종래 이당류의 양 및/또는 락토스의 저량과 혼합된 조성물 및 용액에 함유되어 있다. 이러한 조성물 및 용액은, 종래의 그 자체와, 안정제, 보호제, 향미료, 락토스, 젤리피언트, 플럭산트 및 방부제 가운데서 선택된 첨가제의 적어도 하나인 약제 성분량을 함유한다. 용액은 종래 그 자체로 수용액 또는 살리신 용액, 물이다.
세 이당류 (Ⅰ), (Ⅱ) 및 (Ⅲ)의 혼합물이 사용될 때라도, 제거된 소변(urine)에 존재하는 크실로스에 의한 장 락타제 활성도의 평가는, 오로지 이당류(Ⅰ)가 공급될 때 가능한 평가에 대해 실질적 증강을 나타내고, 이것은 본 발명에 대한 고유의 놀라운 효과를 명백히 나타낸다.
본 발명의 제조 방법은 상기 이당류 (Ⅰ), (Ⅱ) 및 (Ⅲ)을 함유하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제조하는 가능성을 포함하고, 다음 단계로 구성된다.
β-갈락토시다제 효소의 존재 하에 β-D-갈락토피라노시드의 기질 및 D-크실로스를 반응시킨다.
pH 5.0~9.0으로 완충된 수용 매질 및 4~37℃의 온도에서 D-크실로스의 농도는 β-D-갈락토피라노시드의 농도보다 2~20배 이상이고, 얇은 막 크로마토그래피 또는 활성 탄소 컬럼으로 검출된(일반적으로 4~8시간 후) 이당류 생성의 최대수율에 도달할 때 100℃로 가열하여 β-갈락토시도제를 비활성화하고, 물 또는 물/알콜 사이에서 선택된 희석제로 충전관에서 여과하여 형성된 이당류를 분리하면, 세 이당류의 혼합, 또는 이당류 (Ⅰ)과 이당류 (Ⅱ) 또는 (Ⅲ)의 하나 또는 각각으로의 대응 분리 후 혼합물로서, 조성물 또는 용액에 함유된 이당류 (Ⅰ), (Ⅱ) 및 (Ⅲ)의 혼합물을 얻는다.
제조 실시예에 있어서, 사용된 β-D-갈락토피라시드는 O-니트로페닐, β-D-갈락토피라노시드인 반면 다른 실시예에서는 락토스이다.
다른 한 편으로, β-갈락토시다제는, 예를 들어, 스페인회사 SIGMA-ALDRICH QUIMICA, S.A.가 상품화한 Escherichia Coli이다.
제조 방법은, 아세토니트릴, 디메틸 포름아미드 또는 디메틸 술폭시드와 같은, 물과 혼화되기 쉬운 공용제의 존재 하에서 수행된다.
이당류의 분리에 사용되는 여과 칼럼은, SephadexTMG-10 또는 BiogelTMP2 또는 다른 활성탄소로 밀폐한다.
이당류 (Ⅱ), (Ⅲ)는, Sporobolomyces Singilaris의 β-갈락토 및 β-글루코-피라노실 이당류, Can.J.Chem. 42(1964) 2307-2319의 Gorin 등이 발견한 것과 같은 다른 종래의 방법으로 얻을 수 있다.
하기한 예들은 본 발명과 관련된 특징들을 서술하고 있지만, 이것에 한정되는 것은 아니다.
예 1: 4-o-β-D-갈락토피라노실-D-크실로오즈(이당류 I)과 2-o-β-D-갈락토피라노실-D-크실로오즈(이당류 II)과 그리고, 3-o-β-D-갈락토피라노실-D-크실로오즈(이당류 III)의 준비.
완충액(0.05 M KH2PO4, 1mM MgCl2, 5mM 머캡토 에탄올, 265mL, pH 7, 0) 속에 O-니트로페닐 β-갈락토시다제(4g, 50mM)와 크실로오즈를 첨가한 용액에 SIGMA(1.5mg, 560U)의 E.Coil의 β-갈락토시다제를 첨가하고, 그리고, 그 혼합물을 25°C에서 5시간 45분 동안 배양하였다. 이 시간이 경과한 후에 그 혼합물은 10분동안 100°C로 가열되었고, 농축되었다. 그리고 결과로서 나타나는 찌꺼기는 물과 에탄올의 비가 1:0 에서 85:15로 되는 구배를 사용한 활성화된 탄소의 컬럼으로 삽입되었다. 처음에 단당류 크실로오즈와 갈락토오즈는 평가되었고, 다음으로 이당류(Disaccharides) I, II and III의 혼합물은 비율을 각기 8.6 : 1.4 : 1.0로하여 이당류(O-니트로페닐 β-갈락토피라노시드와 동일한 것으로 50%인)의 혼합물의 2g을 얻었다.
이당류 I, II, III은 각각 다른 작용기들로 구성되어 있고, RMN에 의하여 그들 각각을 특징지울수 있고, 순수하며 그들 서로 분리되어 있다.
이당류 I의 한 부분을 Varian XL-300 분광계로 측정한 H-RMN 스펙트럼(300 MHz, D2O)은 이전에 준비한 산물의 그것과 동일하게 되었다.
이당류 II와 III에서 형성된 결합의 레지오(Regio)-화학을 뚜렷하게 결정짓고 결정하려는 목적으로, 상기한 화합물들 중 자극성 단편들을 아세틸화 시켰고, 그 결과로 나온 생성물들은 반제조(Semipreparation) HPLC(표준상(normal phase) 칼럼 SiO2, 에틸 헥산-아세테이트 1 : 1, 굴절지표에 의한 검출(detection by refraction index))로 분리시켰다. HRMN 스펙트럼은 얻어지는 유동체들 각각이 계속적으로 기록된다.
- 2-o-β-D-갈락토피라노실-o-D-크실로피라노제인 아세틸화된 유도체.
- 2-o-β-D-갈락토피라노실-β-D-크실로피라노제인 아세틸화된 유도체.
- 3-o-β-D-갈락토피라노실-o-D-크실로피라노제인 아세틸화된 유도체.
- 3-o-β-D-갈락토피라노실-β-D-크실로피라노제인 아세틸화된 유도체.
크로마토 그래픽 칼럼에서 얻어지는 이당류 I과 II 그리고 III의 비율은 불꽃 이온 검출기와 캐필러 칼럼 SE-54(정지상: 5%디페닐기와 95% 디메틸폴리실록산, 길이15m, 안지름 0.15mm, 그리고 두께 μm)를 장착한 크로마토 그래프를 보유한 가스 크로마토 그래피에 의해서 정해진다. 분석에서 1mL/min의 니트로젠 플로우가 사용된다. 온도는 다음과 같은 과정으로 조정된다: 시작 온도 160。C;시작 시간 2분; 온도 상승율 5。C/min; 최종 온도:250。C. 시료들은 다음의 계획안에 의해서 트리메틸 실리캐이션후에 분석된다. 알리쿼트(10μl)는 100。C에서 10분간 가열된다. 그 후에 내부에 벤질 β--크실로피라노시드(10mM)과 N-트리메틸 실리미다졸(sylimidazol)(25μL)이 포함된 피리딘(25μL)을 첨가한다. 계속해서 30분간 60。C로 가열한다. 다른 이당류에 할당가능한 피크의 유지시간은 다음과 같다.
- 벤질 β--크실라노시드 (내부참조): 12, 04 min
- 이당류 I: 20, 35 그리고 20, 50 min
- 이당류 II: 18, 46 그리고 19, 50 min
- 이당류 III: 18, 30 min
예 2: 시험관내의 가수분해의 반응 실험
이(2)당류 I과 II, 그리고, III과 락타제는 pH 6.0에서 양의 내장의 락타제를 가지고, A.Rivera-Sagredo, F.J.Canada, O.Nieto, J.Jimenez-Barbero and M.Martin-Lomas, Eur. J.Biochem., 209 (1992) 415-422의 방법에 따라서 다음의 미하엘리스(Michaelis)함수(Km)와 최대 속도(Vmax)의 관계에 따른 결과를 가지고 가수분해하였다. :
이당류 Km(mM) Vmax(%)
락타제 11, 0 100
이당류 I 340, 0 20
이당류 II 14, 0 20
이당류 III 4, 0 70
이당류 II와 III의 미하엘리스 상수는 이당류I의 그것보다 확실히 작고, 이당류III의 미하엘리스 상수는 락타제의 그것보다 확실히 작다. 그러므로 이당류 II와 III은 락타제에 대하여 비정상 친화도를 가짐을 알 수 있다.
실시예 3: 이당류 혼합물(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)의 구강투여 후의 소변 내의 크실로스의 제거
이당류 혼합물(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)(각각 8,6:1,4:1,0의 비율)은 장내 락타아제의 활성을 평가하기위하여 사용된 예 1의 진행을 통해 준비하였다.
어미로부터 떨어져서 6시간동안 아무것도 먹이지 않은 생후 12일된 새끼 쥐를 돌보는 17 스프레크-다울리(Spraque-Dawley) 그룹.
상기한 시간이 경과 후, 각각의 쥐의 소변은 방광 경복벽 압력으로 수집하고
내위(內胃)탐침을 사용하여 0.3mL의 증류수내에 18.2mg의 희석 이당류를 각각의 쥐에게 투여하였다.
계속하여, 소변은 플루오로굴루시아놀 반응에 기초하여 비색분석으로 크실로스를 제거하여 5시간동안 수집 되었다.
즉시 소변을 모은후 장내 점액의 락타아제 활성이 결정되는 3마리의 쥐는 희생되었다.
그리고 소장은 말리고 세척하며 점액질은 유리로 긁어모아 점액질내의 락타아제 활성도를 분광 광도학적으로 측정한다.
남은 쥐는 어미에게 보내고 15, 18, 21, 24 그리고 30일후에 유사한 조건하에서 성장한 새끼들을 반복 실험하였다.
상기한 실험 값은 이당류 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ의 생체내 혼합물의 가수분해와 쥐의 성장기간 락타아제 활성도를 그림에 반영한 값이다.
이것을 달성하기 위하여 배설 크실로스(%)(곡선 A)는 락타아제 활성도와 함께(nm/min/mg 단백질)(곡선 B)에 대한 나이(날짜)를 나타낸다.
이 실험 결과는
오줌내에 크실로스의 존재를 나타내고 락타아제 활동으로인한 이당류의 가수분해로된 것을 나타낸다.
그리고 구강 투여로인하여 발생하는 소변내에 크실로스의 배설은 알려진것처럼 그래프의 전개 길이가 계속 하락하는 장내 점액 활성화의 생리적인 조절과 동등하다.
상기한 효소가 부족한 사람의 치료에 특별히 적용할 수 있고, 피를 흘리지 않는 상기한 활성 평가에 사용되는 장내 락타아제 활성도의 생체내 평가에 사용되는 계통적 분류법을 설명한다.
예 4: 생후 15일된 배에서 나온 Sprague-Dawley를 수유하는 일단의 쥐들을 섭씨 30도의 온도에서 메타보리컬(metabolical)상자에서 4시간 동안 먹이를 주지 않고 두었다. 각각의 쥐에게 0.5ml의 증류수에서 18.2g의 이당류 Ⅰ를 투여하였다. 5시간 동안 복부를 관통하여 방광을 눌러 소변을 수집하였다. 이러는동안 소변을 통해서 배출된 크실로스는 분광기에의하여 검사되었다.
그결과 배출된 크실로스는 21%, 다시 말하면 15일 이후의 생산물 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ의 혼합의 결과보다 절반 이하이다.
본 예의 데이터와 예 3의 데이터를 비교하면, 이당류 Ⅱ와 Ⅲ의 생체 내에서의 친화력은 높아서, 3개의 이당류가, 이당류 Ⅰ가 퍼져있는 혼합물에 투약될 경우 이들은 이당류 Ⅰ의 최악의 친화력을 상쇄하기까지 한다는 사실이 명백해진다.

Claims (16)

  1. β-D-갈락토피라노실-D-크실로스가 그 분자내의 글리코시드 결합에 따로따로 인접한 몇 개의 히드록시기를 제공하는, 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 용도.
  2. 제1항에 있어서, 상기 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스는 2-O-β-갈락토피라노실-D-크실로스, 3-0-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스 및 그것의 합성물로부터 선택된 것을 특징으로 하는 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 용도.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물이 안정제, 보호제, 향미료, 락토스, 겔, 플럭선트 및 방부제들로부터 선택된 적어도 하나의 혼합제의 제약적으로 수용할 수 있을 정도의 양을 포함하는 것을 특징으로 하는 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 용도.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 용액이 수양액인 것을 특징으로 하는 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 용도.
  5. 제4항에 있어서, 상기 용액이 염수인 것을 특징으로 하는 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 용도.
  6. 제1항, 제2항, 제4항 또는 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 용액이 안정제, 보호제,향미료, 락토스 및 방부제들로부터 선택된 적어도 하나의 혼합제의 제약적으로 수용할 수 있을 정도의 양을 포함하는 것을 특징으로 하는 장내 락타아제의 평가를 위한 조성물과 용액의 제조에 사용되는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 용도.
  7. (a) pH 5.0∼9.0, 온도 4∼37℃에서 완충제로 처리된 수양액 매체에서, D-크실로스/β-D-갈락토피라노사이드 기질의 농도가 2∼20:1인 β-갈락토피라노사이드 효소가 존재하는 D-크실로스 및 β-D-갈락토피라노사이드 기질을 재활성화하는 단계와,
    (b) 박막 크로마토그래피에 근거하여 이당류 형태의 최대수율이 얻어질 때, 100℃에서 열을 가해 β-갈락토피라노사이드 효소를 불활성화하는 단계와, 그리고
    (c) 물 및 물과 알코올의 혼합액 중에서 선택된 용제로 밀폐된 칼럼에서 여과를 통하여 형성된 이당류를 단리시키는 단계를 포함하는, β-D-갈락토피라노실-D-크실로스가 그 분자내의 글리코시드결합에 따로따로 인접한 몇 개의 히드록시기를 제공하는, 적어도 하나의 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 포함하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  8. 제7항에 있어서, 상기 β-D-갈락토피라노사이드 기질이 0-니트로페닐 β-D-갈락토피라노사이드인 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  9. 제7항에 있어서, 상기 β-D-갈락토피라노사이드 기질이 락토오스인 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  10. 제7항에 있어서, 상기 β-갈락토피라노사이드 효소가 E.Coil의 β-D-갈락토피라노사이드인 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  11. 제7항에 있어서, 상기 과정은 물과 혼화되기 쉬운 적어도 하나의 공동용제를 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  12. 제11항에 있어서, 상기 공동용제는 적어도 하나의 아세토니트릴, 디메틸포름아미드, 디메틸 설폭사이드 및 그들의 혼합제로부터 선택된 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  13. 제7항에 있어서, 상기 밀폐된 칼럼은 세파덱스 G-10 및 바이오겔 P-2 중의 하나와 묶인 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  14. 제7항에 있어서, 상기 밀폐된 칼럼은 활성탄소와 묶인 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  15. 제7 또는 10항에 있어서, 상기 이당류가 2-0-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스, 3-0-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스 및 4-0-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스의 혼합제인 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
  16. 제10항에 있어서, 상기 이당류로부터 적어도 하나의 2-0-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스 및 3-0-β-D-갈락토피라노실-D-크실로스가 단리되는 것을 특징으로 하는 β-D-갈락토피라노실-D-크실로스를 제공하기 위한 효소화 과정.
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