ES2208099B1 - Empleo de 4-galactosil-xilosa en humanos para la evaluacion in vivo de lactasa intestinal como prueba diagnostica no invasiva de la deficiencia de este enzima. - Google Patents

Empleo de 4-galactosil-xilosa en humanos para la evaluacion in vivo de lactasa intestinal como prueba diagnostica no invasiva de la deficiencia de este enzima.

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Abstract

Empleo de 4-galactosil-xilosa en humanos para la evaluación in vivo de lactasa intestinal como prueba diagnóstica no invasiva de la deficiencia de este enzima. Utilización en humanos de método basado en la utilización de 4-galactosilxilosa integrando en este método una técnica alternativa a la determinación de xilosa en orina, consistente en valorar la concentración de xilosa en sangre tras la administración al paciente de 4-galactosil-xilosa, que resulta más conveniente para el caso de su utilización en recién nacidos. Tecnología para la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal, como prueba no invasiva para el diagnóstico de la deficiencia de este enzima, que se basa en la evaluación directa de la actividad global del enzima en el individuo completo, no en la valoración de las consecuencias de su deficiencia, no requiere de aparataje especializado, no provoca molestias aparentes en los pacientes portadores de deficiencia de lactasa y es altamente fiable, superando de esta forma los inconvenientes de las pruebas diagnósticas actualmente utilizadas.

Description

Empleo de 4-galactosil-xilosa en humanos para la evaluación in vivo de lactasa intestinal como prueba diagnóstica no invasiva de la deficiencia de este enzima.
Sector de la técnica
La invención se encuadra en el sector farmacéutico y es aplicable en el sector médico en la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal en humanos como prueba diagnóstica no invasiva de la deficiencia de este enzima, como así mismo en cualquier circunstancia normal o patológica en que interese determinar los niveles de este enzima in vivo.
Estado de la técnica
La lactasa intestinal se localiza en la mucosa del intestino delgado con su centro activo expuesto hacia la luz del intestino y es el enzima responsable de la hidrólisis de la lactosa, el azúcar de la leche. Este azúcar no se absorbe como tal a nivel intestinal, por lo que es imprescindible la hidrólisis previa a sus componentes galactosa y glucosa, que son los finalmente absorbidos. La deficiencia de lactasa intestinal conduce a la mala absorción e intolerancia a la lactosa. Debido a la carencia de este enzima, la lactosa no hidrolizada en el intestino delgado provoca retraso en la velocidad de vaciamiento gástrico y aumento del transito intestinal, incremento de la presión osmótica y retención de fluido en la luz intestinal, dando lugar su fermentación bacteriana en el colon a la producción de gases, como hidrógeno, metano y dióxido de carbono y a la formación de ácidos grasos de cadena corta. Como consecuencia de estos hechos el proceso de digestión se reduce y disminuye la absorción de monosacáridos, presentándose dolor y calambres abdominales, flatulencia, ruidos intestinales audibles y diarrea. En el adulto este cuadro se conoce como hipolactasia o intolerancia a la lactosa, que constituye el trastorno genético más frecuente, afectando a alrededor a la mitad de la especie humana. En el caso del recién nacido, la deficiencia congénita del enzima impide la correcta utilización de la lactosa originándose trastornos severos, como diarrea intensa y deshidratación, derivados tanto de la disminución del aporte energético como del acúmulo intestinal del disacárido no hidrolizado, lo que requiere una detección precoz y el cambio alimenticio a una leche carente de lactosa. La deficiencia de lactasa se presenta además de forma secundaria en un número importante de patologías intestinales que conllevan deterioro en diverso grado de la mucosa intestinal, como la enfermedad celíaca, enfermedad inflamatoria intestinal crónica (la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa), síndrome de colon irritable, resecciones intestinales, fibrosis quística, neonatos prematuros, administración de quimioterapia, o como trastorno adicional a la ancianidad, entre otras. La valoración de la actividad lactasa es, pues, de particular interés en gastroenterología, pediatría y, en general, en procesos patológicos en los que se precise evaluar la integridad funcional de la mucosa intestinal o realizar el diagnóstico diferencial con la deficiencia de este enzima. Hasta ahora, el diagnóstico de la deficiencia de lactasa intestinal se ha basado en:
-
Determinación directa del enzima lactasa en una muestra de mucosa de intestino delgado del paciente obtenida por biopsia mediante endoscopia (1).
-
Evaluación de las consecuencias metabólicas derivadas de la deficiencia del enzima tras una prueba de sobrecarga oral de lactosa (1-2 g por Kg de peso corporal), como la aparición de síntomas de deficiencia en el sujeto (dolor abdominal, flatulencia, diarrea, etc.), y determinación de glucosa en plasma (2), de galactosa en plasma (2) y orina (3) y de carbohidratos en heces (4). Evaluación de gases espirados tras la sobrecarga de lactosa resultantes de la fermentación en el colon de la lactosa no metabolizada, como es la determinación en el aliento de hidrógeno espirado (5), de ^{14}CO_{2} (6) o ^{13}CO_{2} (7) tras la sobrecarga de lactosa conteniendo ^{14}C-lactosa o ^{13}C-lactosa, respectivamente, o bien de la razón ^{13}CO_{2}/H_{2} (8). Determinación en suero de la razón ^{13}C/^{2}H-glucosa (9) tras la sobrecarga con lactosa conteniendo ^{13}C-lactosa y ^{2}H-glucosa.
Otros métodos de evaluación de la actividad de la lactasa intestinal se basan en el empleo de determinados disacáridos que son análogos estructurales de la lactosa y que son por ello susceptibles de funcionar como sustratos de ese enzima, por lo que una vez ingeridos son transformados por la acción de la lactasa intestinal en determinados monosacáridos que son absorbidos por la mucosa del intestino, pudiendo determinarse la eliminación de alguno de ellos en la orina. Así, los métodos descritos en las patentes españolas ES-P-478590 y ES-P-482073, se basan en la evaluación in vivo mediante la administración oral de 3-O-metil lactosa y la determinación de 3-O-metil-D-glucosa en orina.
Por otra parte, en la patente española ES-P-9001680 se describe la preparación del disacárido 4-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa de la fórmula
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para la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal. Dicho disacárido se administra oralmente, actúa como sustrato de la lactasa intestinal y por tanto se hidroliza, en el tracto intestinal, en xilosa y galactosa, ambos son absorbidos y la xilosa es eliminada por la orina donde puede determinarse directamente mediante un método colorimétrico simple. Las cantidades de xilosa excretadas en orina están correlacionadas con los niveles de lactasa intestinal.
La patente española ES-P-9001680 también describe un método de preparación para la 4-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa, que comprende una síntesis a partir de bencil \beta-D-xilopiranósido que implica reacciones de protección selectiva, glicosilación y desprotección.
La patente española ES-P-9502185 describe procedimientos enzimáticos para la preparación de mezclas de disacáridos galactopiranosil-xilosas que contienen 4-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa y sus regioisómeros 2-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa y 3-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa. La patente española ES-P-9502185 describe también el empleo de una mezcla de los tres dichos regioisómeros en la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal de ratas lactantes, demostrando que la eliminación de xilosa en orina tras la administración oral de esa mezcla a los animales a lo largo de su desarrollo es proporcional a la actividad lactasa intestinal determinada postmortem en mucosa intestinal de los mismos animales.
La patente española ES-P-20010419 describe un procedimiento enzimático para obtener 4-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa que implica una reacción enzimática entre D-xilosa y un sustrato \beta-D-xilopiranósido y una posterior fase de aislamiento y purificación de 4-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa. La patente española ES-P-20010419 describe también el uso de 4-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa en la preparación de composiciones y disoluciones útiles para la evaluación in vivo de lactasa intestinal en humanos.
Es objeto de esta patente describir el empleo de 4-O-\beta-galactopiranosil-D-xilosa preparada según el procedimiento descrito en la patente española ES-P-20010419 para la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal en hummanos como prueba diagnóstica no invasiva de la deficiencia de este enzima.
Referencias
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3. Goda, T., Bustamante, S., Thornburg, W. & Koldovsky, O. (1984) Biochem. J. 221, 261-263.
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7. Koetse, H.A., Stellaard, F., Bijleveld, C.M., Elzinga, H., Boverhof, R., Van der Meer, R., Vonk, R.J. & Sauer, P.J. (1999) Scand. J. Gastroenterol. 34, 35-40.
8. Koetse, H.A., Vonk, R.J., Pasterkamp, S., Pal, J., de Bruijn, S. & Stellaard, F. (2000) Scand. J. Gastroenterol. 35, 607-611.
9. Vonk, R.J., Stellaard, F., Priebe, M.G., Koetse, H.A., Hagedoorn, R.E., de Bruijn, S., Elzinga, H., Lenoir-Wijnkoop, I. & Antoine, J.M. (2001) Eur. J. Clin. Invest. 31, 226-233.
Descripción de la invención
Los métodos utilizados hoy para el diagnóstico de la deficiencia de lactasa intestinal, descritos en el apartado anterior, están afectos por una serie de desventajas que en líneas generales implican escasa fiabilidad y molestias importantes en los pacientes además de la necesidad de aparataje especializado, como se describe a continuación. La determinación directa de la actividad lactasa en una muestra de mucosa de intestino delgado del paciente obtenida por biopsia mediante endoscopia, además de ser una prueba cruenta e invasiva y que requiere control radiológico, indica solamente la actividad del enzima en una parte o una zona determinada del intestino, que además no coincide generalmente con la de mayor presencia de este enzima (el yeyuno medio), por dificultades de acceso a través de endoscopia, y es además variable de unas tomas a otras, no suministrando pues información sobre la actividad total del enzima en el individuo. El resto de los métodos son pruebas no invasivas que suponen una sobrecarga oral de lactosa (de 25 a 50 g) y posterior evaluación de las consecuencias metabólicas de la deficiencia de lactasa, como es la medición en el aliento de gases procedentes de la metabolización de la lactosa no hidrolizada por las bacterias que pueblan el intestino grueso; estas pruebas son indirectas, puesto que no permiten la medida directa de la actividad del enzima in vivo, y dependen de la capacidad de producción endógena de gases, como H_{2} o CO_{2}, por el sujeto, lo que además de ser variable de unos individuos a otros se afecta por factores diversos, como el hábito de fumar, la dieta, la ingesta de laxantes o la antibioterapia oral, por lo que presentan una importante proporción de falsos positivos y falsos negativos siendo por ello su fiabilidad escasa. Por otro lado, las pruebas de sobrecarga de lactosa requieren la ingesta de cantidades de ese azúcar muy superiores a las presentes en una dieta fisiológicamente equilibrada, lo que provoca molestias gastrointestinales considerables en los sujetos deficientes como dolores abdominales, flatulencia y diarrea. En lactantes con presunta deficiencia, la sobrecarga de lactosa puede resultar de hecho peligrosa por la presentación de diarrea importante y deshidratación potencial, lo que obviamente requiere otro tipo de prueba. La aplicación de las pruebas de sobrecarga de lactosa, en sus diversas modalidades, requieren de equipamiento no rutinario, como es la espirometría para la medida de gases en el aliento, que aunque usual en los medios hospitalarios no lo es en cualquier centro sanitario en general, o del empleo de contadores de centelleo, o aparataje mucho más especializado y restringido como cromatografía de gases y espectrometría de masas para la determinación de ^{14}CO_{2}, ^{13}CO_{2} y ^{13}C/^{2}H-glucosa, cuando la sobrecarga implica la utilización de 1-^{14}C-glucosa o ^{13}C-lactosa/^{2}H-glucosa. La administración oral de 3-O-metil lactosa y determinación posterior de la 3-O-metil-D-glucosa eliminada en orina, no empleada hasta ahora en la clínica, supone, por un lado, la absorción a sangre de un compuesto no fisiológico, como es la 3-O-metil-D-glucosa, y requiere de sistemas de cromatografia de gases o de cromatografía líquida de alta presión para su determinación.
Objeto de la invención
Superar los inconvenientes de las pruebas diagnósticas actualmente utilizadas y descritas en el párrafo anterior, proporcionando una tecnología para la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal, como prueba no invasiva para el diagnóstico de la deficiencia de este enzima, que se basa en la evaluación directa de la actividad global del enzima en el individuo completo, no en la valoración de las consecuencias de su deficiencia, no requiere de aparataje especializado, no provoca molestias aparentes en los pacientes portadores de deficiencia de lactasa y es altamente fiable, entre otras ventajas que se describen en el párrafo siguiente.
Utilizar en humanos el método basado en la utilización de 4-galactosilxilosa integrando en este método una técnica alternativa a la determinación de xilosa en orina, consistente en valorar la concentración de xilosa en sangre tras la administración al paciente de 4-galactosil-xilosa, que resulta más conveniente para el caso de su utilización en recién nacidos.
Breve descripción de la invención
La metodología objeto de la invención se basa en el empleo de 4-galactosil-xilosa (4-0-\beta-galactopiranosil-D-xilosa). Este compuesto funciona como un análogo estructural de la lactosa, el substrato fisiológico de la lactasa, de manera que tras su administración oral es hidrolizado por el enzima de la mucosa intestinal, pasando los productos de la reacción a la sangre y uno de ellos, la xilosa, aparece en la orina, donde puede ser valorado mediante una simple determinación colorimétrica. Alternativamente, en la presente invención se describe la valoración de xilosa en sangre puede determinarse igualmente la presencia de xilosa en sangre, para lo que bastan unas pocas gotas de la misma, dada la elevada sensibilidad del método de valoración de xilosa. En comparación con los métodos utilizados hoy para el diagnóstico de la deficiencia de lactasa intestinal ofrece las siguientes ventajas:
Alta fiabilidad, ya que esta metodología está basada en la evaluación directa de la actividad del enzima a través de la determinación de xilosa en orina o plasma, no en la valoración de las consecuencias metabólicas derivadas de su deficiencia, tales como la producción de H_{2} o CO_{2} resultantes de la fermentación en el colon del disacárido no hidrolizado. En consecuencia, todas aquellas circunstancias descritas en el primer párrafo de este apartado, que afectan a la generación endógena de gases y que reducen por ello marcadamente la fiabilidad de las pruebas de medida de gases en el aliento tras la sobrecarga de lactosa con producción frecuente de falsos positivos y falsos negativos, no ejercen influencia alguna sobre los resultados que se obtienen con la invención aquí descrita.
La información que suministra es directamente indicativa de la actividad lactasa total in vivo en el individuo.
Elevada sensibilidad: el límite mínimo de detección de xilosa cuando se determina madiante análisis colorimétrico basado en la reacción con floroglucinol es de 0,1 a 0,05 \mug.
Sencillez del aparataje requerido, disponible de rutina en cualquier centro sanitario con las mínimas facilidades de laboratorio de bioquímica clínica, ya que la evaluación del enzima in vivo se basa solamente en la determinación de xilosa, lo que puede hacerse mediante un simple ensayo colorimétrico.
Ausencia de molestias o trastornos gastrointestinales adversos en los pacientes portadores de deficiencia de lactasa con la realización de la prueba, debido a que la dosis oral a que se administra el disacárido, 4-galactosil-xilosa, es muy reducida, que en sujetos adultos es de 0,25 g cuando la determinación de xilosa se realiza en orina y 3,0 g cuando la determinación de xilosa se lleva a cabo en sangre. Esto hace prever que las dosis a administrar en niños pueden ser aun más inferiores. Lo reducido de la dosis del disacárido es consecuencia de la alta sensibilidad de la determinación de xilosa. También es de resaltar que la hidrólisis de 4-galactosil-xilosa por la lactasa intestinal origina la aparición de dos productos fisiológicos, galactosa y xilosa, que son los finalmente absorbidos por la mucosa intestinal.
No requiere una participación activa por parte del sujeto, lo que resulta de particular interés en sujetos lactantes.
No hay que administrar compuestos marcados con isótopos radiactivos.
Descripción de las figuras
Figura 1: Eliminación de xilosa en orina tras la administración oral de 4 mg de 4-galactosil-xilosa (círculo negro) y actividad lactasa intestinal (círculo blanco) en ratas lactantes durante el crecimiento.
Figura 2: Niveles de xilosa en plasma tras la administración oral de 8 mg de 4- galactosil-xilosa (círculo negro) y actividad lactasa intestinal (círculo blanco) en ratas lactantes durante el crecimiento.
Figura 3: Eliminación de xilosa en orina de un voluntario humano adulto con tolerancia a la ingesta láctea (sujeto 1, hombre) tras la administración oral de
\hbox{1 g}
de 4-galactosil-xilosa.
Figura 4: Eliminación de xilosa en orina de voluntarios humanos a lo largo del tiempo tras la administración oral de diferentes dosis de 4-galactosil-xilosa a dos voluntarios humanos adultos con tolerancia a la ingesta láctea (sujeto 1, hombre; sujeto 2, mujer).
Figura 5: Eliminación de xilosa en orina de voluntarios humanos a lo largo del tiempo tras la administración oral de 250 mg de 4-galactosil-xilosa a tres hombres [sujetos 1 (círculo negro, círculo blanco), 7 (triángulo negro, triángulo blanco) y 11 (cuadrado negro, cuadrado blanco)] y cinco mujeres, [sujetos 2 (círculo negro, círculo blanco), 3 (cuadrado negro, cuadrado blanco), 6 (rombo negro, rombo blanco), 8 (triángulo invertido negro, triángulo invertido blanco) y 9 (triángulo negro, triángulo blanco) tolerantes a la ingesta láctea.
Figura 6: Eliminación de xilosa en orina a lo largo del tiempo tras la administración oral de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa a tres voluntarios humanos [sujetos 12 (hombre), 5 (mujer) y 10 (mujer)] con intolerancia a la ingestión láctea.
Figura 7: Valoración de xilosa en orina por cromatrografía de gases en el sujeto 1, tolerante y en el sujeto 12, intolerante a la ingestión láctea tras la ingestión de 0,28 g de 4-galactosil-xilosa.
Figura 8: Niveles de xilosa en plasma sanguíneo de voluntarios humanos adultos tras la administración oral de 3 g de 4-galactosil-xilosa a los sujetos 1 (círculo blanco) y 2 (círculo negro) con tolerancia normal a la ingesta láctea y al sujeto 12 hipolactásico (cuadrado negro).
Descripción detallada de la invención
La metodología consiste en la administración por vía oral de una disolución acuosa de 4-galactosil-xilosa a sujetos humanos tras ayuno de al menos 8 horas, determinándose la cantidad de xilosa presente en la orina excretada a partir de entonces tras un periodo de tiempo determinado. La metodología puede llevarse a cabo igualmente determinando la aparición de xilosa en sangre valorándola en plasma, o suero sanguíneo, preparado a partir de una muestra de sangre extraída pasado un periodo de tiempo tras la ingesta del disacárido. La determinación de xilosa puede llevarse a cabo mediante análisis colorimétrico basado en la reacción con floroglucinol y usándose como blanco, bien la orina basal o bien el plasma o el suero sanguíneo basal, según la metodología que se emplee. La 4-galactosil-xilosa ingerida es hidrolizada por la lactasa intestinal, de manera que los productos de esta reacción enzimática, galactosa y xilosa, son absorbidos a la sangre a través de la mucosa intestinal, siendo luego excretada la xilosa en la orina, por lo que la cantidad de xilosa que a parece tanto en sangre como en orina tras ingerir el disacárido es expresión directa de la actividad del enzima in vivo.
La 4-galactosil-xilosa utilizada para la realización de esta invención fue preparada según el procedimiento descrito en la patente española ES-P-20010419.
Tanto la eliminación de xilosa en orina, como la aparición de xilosa en sangre, tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa se correlacionan estrechamente con la actividad lactasa intestinal, según se ha examinado en ratas lactantes, se representa en las Figs. 1 y 2 y se describe en los Ejemplos 1 y 2.
La ingestión de 4-galactosil-xilosa por sujetos voluntarios humanos adultos con capacidad normal de digestión de lactosa o tolerantes a la lactosa, esto es, que poseen niveles normales de actividad lactasa intestinal, juzgado en base a que no refirieron el padecimiento de ningún tipo de molestia o trastorno gastrointestinal adverso tras la toma de leche o cualquier alimento lácteo, dio lugar a la excreción paulatina de xilosa en orina a lo largo de un periodo de 8 horas a partir de la administración del disacárido, como consecuencia de su hidrólisis por la lactasa intestinal. Esto demuestra que la 4-galactosil-xilosa es substrato in vivo de la lactasa intestinal de humanos, según se representa en las Figs. 3, 4 y 5 y se describe en los Ejemplos 3 al 11.
La excreción de xilosa en orina por voluntarios humanos adultos tolerantes a la lactosa aumentó con la cantidad de 4-galactosil-xilosa ingerida, cuando ésta se empleó a dosis de 0,25 g, 0,5 g, 1 g y 3 g. La ingestión de 4-galactosil-xilosa no provocó molestias ni trastorno gastrointestinal alguno en los sujetos estudiados. Esto demuestra que la eliminación de xilosa por sujetos humanos es dependiente de la dosis que se administre de 4-galactosil-xilosa, siendo suficiente una dosis de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa para detectar con fiabilidad xilosa en orina tras la ingesta de este compuesto, según se representa en la Fig. 4 y se describe en los Ejemplos 4 y 5.
La proporción de xilosa excretada en orina por voluntarios humanos adultos tolerantes a la lactosa estuvo dentro del mismo rango cuando se administró la misma cantidad de 4-galactosil-xilosa a individuos del mismo sexo. Esto demuestra que los resultados obtenidos con esta metodología se reproducen con fidelidad de unos individuos normales a otros, según se representa en la Fig. 5 y se describe en los Ejemplos 4 al 11.
La administración de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa a voluntarios humanos adultos con intolerancia a la lactosa, portadores de una deficiencia de lactasa intestinal, da lugar a una disminución marcada en la eliminación de xilosa en orina respecto a los valore medios observados en voluntarios tolerantes, en función del grado de deficiencia del enzima. Esto se observó en dos sujetos estudiados que eran intolerantes a la lactosa, uno de ello diagnosticado previamente como hipolactásico intenso y otro que refirió presentar intolerancia a la lactosa desde el nacimiento, según se representa en las Figs. 6A y 6B, respectivamente, y se describe en los Ejemplos 12 y 13, respectivamente. La ingestión de 4-galactosil-xilosa por estos dos sujetos intolerantes no les provocó molestias ni trastornos gastrointestinales de ningún tipo. Esto demuestra que la metodología que se presenta permite la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal y es una prueba válida para el diagnóstico no invasivo de la deficiencia de este enzima en humanos, no provoca molestias aparentes en los sujetos portadores de una deficiencia y basta solamente una dosis de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa para detectar con fiabilidad deficiencias intensas del enzima.
La administración oral de 4-galactosil-xilosa y la posterior determinación de la xilosa resultante en orina permite diferenciar entre pacientes intolerantes a la lactosa que son portadores de una deficiencia de lactasa intestinal y pacientes intolerantes a la lactosa que lo son por presentar un cuadro de alergia a componentes de la leche pero que no son portadores de una deficiencia del enzima, puesto que en estos últimos la eliminación urinaria de xilosa está dentro de los límites normales. Esto se demuestra en la Fig. 6C y se describe en el Ejemplo 14; en esta Figura 6C se muestra que la eliminación urinaria de xilosa tras la ingestión de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa por una voluntaria adulta intolerante a la lactosa, que refirió padecer desde la niñez reacciones alérgicas cutáneas tras la toma de leche o alimentos lácteos, no fue significativamente diferente del comportamiento observado por la media de los voluntarios tolerantes mujeres estudiados. La ingestión de 4-galactosil-xilosa por esta voluntaria adulta alérgica intolerante a la lactosa no le ocasionó reacción alérgica alguna ni ningún tipo de trastorno gastrointestinal.
La eliminación de xilosa en orina tras la administración de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa a sujetos tolerantes a la lactosa, y su disminución en sujetos intolerantes a la lactosa hipolactásicos, se muestra adicionalmente por una técnica de valoración de xilosa diferente de la reacción colorimétrica con floroglucinol, como es la cromatografía de gases. Esto se presenta en la Fig. 7 y se describe en el Ejemplo 15, en que se demuestra igualmente que la eliminación de xilosa en orina se reduce marcadamente cuando se administra 4-galactosil-xilosa a un sujeto intolerante a la lactosa hipolactásico en comparación un sujeto tolerante a la lactosa.
La administración oral de 3 g de 4-galactosil-xilosa a voluntarios humanos adultos tolerantes a la lactosa dio lugar a la aparición gradual de xilosa en plasma sanguíneo determinada colorimétricamente con floroglucinol, que alcanzó un máximo alrededor de las 2 horas tras la ingesta del disacárido. La administración oral de la misma cantidad de 4-galactosil-xilosa a un voluntario humano adulto intolerante a la lactosa diagnosticado como hipolactásico originó una disminución marcada en la cantidad de xilosa determinada en plasma sanguíneo de este sujeto tras 2 horas de ingerir el disacárido; no dando lugar esta prueba a molestia o trastorno gastrointestinal alguno en este sujeto intolerante a la lactosa. Esto se muestra en la Fig. 8, describe en el Ejemplo 16 y demuestra que la determinación de xilosa en sangre tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa permite la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal y es una prueba válida para el diagnóstico no invasivo de la deficiencia de este enzima en humanos.
Teniendo en cuenta el patrón que sigue la aparición de xilosa en sangre y orina a lo largo del tiempo tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa a voluntarios humanos tolerantes e intolerantes a la lactosa y la alta sensibilidad del método empleado de valoración colorimétrica de xilosa con floroglucinol, las muestras de fluidos corporales a utilizar con esta metodología en sujetos adultos pueden ser orina basal previa a la ingesta de 4-galactosil-xilosa y orina total de 3 o 4 horas tras la ingesta de ese compuesto, o bien una muestra de sangre basal previa a la ingesta de 4-galactosil-xilosa y otra muestra de sangre extraída tras 2 horas de la administración de ese compuesto, siendo suficiente un volumen de 0,3 a 0,5 ml de sangre en cada muestra.
Esta prueba es igualmente aplicable en niños y en lactantes, tanto determinando xilosa en orina como en sangre, pudiéndose disminuir a la mitad la dosis a administrar oralmente de 4-galactosil-xilosa y pudiendo ser también suficiente la utilización de muestras de sangre de 0,15 a 0,3 ml, como una primera aproximación.
Ejemplos de realización de la invención Ejemplo 1
Correlación entre la eliminación de xilosa en orina y de la aparición de xilosa en sangre tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa con la actividad lactasa intestinal. Esto se ha demostrado en ratas lactantes comparando a lo largo del desarrollo de estos animales la eliminación de xilosa en orina tras administrarles oralmente 4-galactosil-xilosa con la actividad lactasa determinada postmortem en mucosa intestinal, que como es conocido declina fisiológicamente durante el crecimiento. Para ello, un grupo constituido por 20 ratas lactantes pertenecientes a dos camada y con 12 días de edad, se mantuvo en ayuno durante 6 horas separadas de la madre. Transcurrido ese tiempo, se recogió orina basal de cada animal mediante presión vesical transabdominal e inmediatamente se administraron a cada uno 4 mg de 4-galactosil-xilosa diluida en 0,3 ml de agua destilada utilizando una sonda intraesofágica. A partir de ese momento se recogió orina durante las 6 horas siguientes, determinándose en la misma la xilosa eliminada mediante análisis colorimétrico basado en la reacción con floroglucinol y usándose la orina basal como blanco. Inmediatamente tras la recogida de orina, se sacrificaron cuatro de los animales en los que se determinó directamente la actividad lactasa en la mucosa intestinal. Para ello se resecó un trozo de intestino delgado, se lavó, se recogió la mucosa mediante raspado con vidrio y se homogeneizó ésta; midiéndose la actividad lactasa espectrofotométricamente en el homogeneizado. Los animales restantes fueron devueltos a la madre y con ellos se repitió el experimento en condiciones similares a los 15, 18, 21, 26 y 35 días de edad en que quedó extinguida la población inicial de animales. Los resultados de esta experiencia aparecen recopilados en la Fig. 1. En la que se aprecia: 1) Que se detecta la presencia de xilosa en orina procedente de la hidrólisis de la 4-galactosil-xilosa administrada por la acción de la lactasa intestinal; 2) Que el curso de la eliminación de xilosa en orina, originada por la administración oral de 4-galactosil-xilosa a lo largo del crecimiento de los animales, corre paralelo con la conocida modificación fisiológica de la actividad lactasa intestina que declina a lo largo del desarrollo, correlacionándose estrechamente la eliminación de xilosa en orina con la actividad lactasa intestinal como lo indica el coeficiente de correlación lineal (r) de 0,96 obtenido entre ambos parámetros, según se representa en el inserto de la Fig. 1. Previamente a esta experiencia se encontró que la eliminación de xilosa en orina aumenta con el incremento de la cantidad de 4-galactosil-xilosa que se administre oralmente a los animales al margen de la edad de los animales, variando las dosis de este disacárido de 2 a 32 mg diluidas en 0,3 ml de agua. Esta experiencia demuestra que la metodología que se presenta es útil para la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal, siendo el procedimiento empleable para la evaluación no invasiva de esta actividad de manera incruenta con fines diagnósticos.
Ejemplo 2
Correlación entre la eliminación de xilosa en orina y de la aparición de xilosa en sangre tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa con la actividad lactasa intestinal. Esto se ha demostrado en ratas lactantes comparando a lo largo del desarrollo de estos animales la cantidad de xilosa en plasma analizada tras administrarles oralmente 4-galactosil-xilosa con la actividad lactasa determinada postmortem en mucosa intestinal. Para ello, un grupo constituido por 60 ratas lactantes pertenecientes a dos camadas y con 12 días de edad, se mantuvo en ayuno durante 6 horas separadas de la madre. Transcurrido ese tiempo, se extrajo sangre basal de cada animal mediante punción cardíaca e inmediatamente se administraron a cada uno 8 mg de 4-galactosil-xilosa diluida en 0,3 ml de agua destilada utilizando una sonda intraesofágica. Pasadas 3 horas de la administración del disacárido se extrajo de nuevo una muestra de sangre, obteniéndose el plasma sanguíneo o fracción sobrenadante por centrifugación de esa muestra determinándose xilosa en el mismo mediante análisis colorimétrico con floroglucinol y usándose el plasma de la sangre basal como blanco. Inmediatamente tras la extracción de sangre, se sacrificaron cuatro de los animales en los que se determinó directamente la actividad lactasa en la mucosa intestinal de la misma manera que lo descrito en el Ejemplo 1. Los animales restantes fueron devueltos a la madre y con ellos se repitió el experimento en condiciones similares a los 15, 18, 21, 26 y 35 días de edad en que quedó extinguida la población inicial de animales. Los resultados de esta experiencia aparecen recopilados en la Fig. 2. En la que se aprecia: 1) Que se detecta la aparición de xilosa en plasma sanguíneo procedente de la hidrólisis de la 4-galactosil-xilosa administrada por la acción de la lactasa intestinal; 2) Que el curso de la aparición de xilosa en plasma sanguíneo, originada por la administración oral de 4-galactosil-xilosa a lo largo del crecimiento de los animales, corre igualmente paralelo con el declive fisiológico de la actividad lactasa intestina a lo largo del desarrollo, correlacionándose de manera muy estrecha la aparición de xilosa en plasma sanguíneo con la actividad lactasa intestinal como lo indica el coeficiente de correlación lineal (r) de 0,98 obtenido entre ambos parámetros, según se representa en el inserto de la Fig. 2. Previamente a esta experiencia se encontró que la aparición de xilosa en plasma sanguíneo alcanza su máximo nivel en torno a 3 horas tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa, que la cantidad de xilosa en plasma aumenta con el incremento de la cantidad de 4-galactosil-xilosa que se administre oralmente a los animales al margen de la edad de los animales cuando la dosis de este disacárido varió de 4 a 16 mg diluida en 0,3 ml de agua y que las cantidades de xilosa en suero sanguíneo obtenido tras dejar reposar las muestras de sangre durante 20 minutos a temperatura ambiente y centrifugación posterior fueron similares a las determinadas en plasma. Esta experiencia demuestra que la determinación de xilosa en plasma o suero sanguíneo tras las administración oral de 4-galactosil-xilosa es igualmente útil para la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal, siendo el procedimiento empleable para la evaluación no invasiva de esta actividad de con fines diagnósticos.
A continuación se describe una serie de ejemplos de realización de la invención llevados a cabo con diversos voluntarios humanos adultos, todos ellos fueron informados por escrito del estudio a realizar y dieron su consentimiento escrito de participación voluntaria en el mismo.
Ejemplo 3
La 4-galactosil-xilosa es substrato in vivo de la lactasa intestinal de humanos. Esto se ha demostrado en primer lugar administrando oralmente 1 g de 4-galactosil-xilosa disuelto en 50 ml de agua a un voluntario adulto hombre (sujeto 1) ayunado 8 horas y con tolerancia normal a la ingesta de leche y productos lácteos, o sea tolerante a la lactosa. A este sujeto se le tomó una muestra de orina basal inmediatamente antes de ingerir el disacárido 4-galactosil-xilosa y se volvió a recoger su orina tras la ingesta del mismo cada hora durante 8 horas, constituyendo cada muestra la totalidad de la orina excretada en cada periodo de tiempo. Se determinó xilosa en todas las muestras mediante análisis colorimétrico basado en la reacción con floroglucinol y usándose la orina basal como blanco. La ingestión de 4-galactosil-xilosa no provocó molestias ni trastorno gastrointestinal alguno a este sujeto. Los resultados de esta experiencia aparecen recopilados en la Fig. 3, donde se representa la cantidad de xilosa determinada en cada muestra (con símbolo) y la cantidad de xilosa que se va acumulando en la orina a lo largo del tiempo (con símbolo) calculada adicionando a la cantidad de xilosa determinada en cada muestra las cantidades determinadas en todas las muestras precedentes. En esta Fig. 1 se aprecia: 1) Que se excreta xilosa en la orina de este sujeto tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa; 2) Que la eliminación de xilosa en orina fue máxima a las 2 horas y se acumuló progresivamente en la misma tras la administración de este compuesto. Esta experiencia demuestra que la 4-galactosil-xilosa es substrato in vivo de la lactasa intestinal de humanos y que la determinación de xilosa en orina oral de 4-galactosil-xilosa es útil para la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal en humanos, siendo el procedimiento empleable para la evaluación no invasiva de esta actividad de con fines diagnósticos.
Ejemplos 4 y 5
La eliminación de xilosa en orina por voluntarios humanos adultos tolerantes a la lactosa varia con la cantidad de 4-galactosil-xilosa ingerida. Esto se ha demostrado administrando 0,25 g, 0,5 g y 3 g de 4-galactosil-xilosa a un voluntario adulto hombre tolerante a la lactosa (sujeto 1, Ejemplo 4) y a un voluntario adulto mujer tolerante a la lactosa (sujeto 2, Ejemplo 5) en las mismas condiciones que las descritas en el Ejemplo 1 y determinando igualmente xilosa colorimétricamente con floroglucinol en la orina excretada por ambos a lo largo del tiempo tras la ingesta del disacárido. Se dejó un periodo libre de entorno a una semana entre cada toma de 4-galactosil-xilosa por el mismo individuo. La ingestión de 4-galactosil-xilosa a las dosis utilizadas no provocó molestias ni trastorno gastrointestinal alguno a ninguno de estos dos sujetos. Los resultados de estas experiencias aparecen recopilados en la Fig. 4 panel A (para el sujeto 1 y Ejemplo 4) y en la Fig. 4 panel B (para el sujeto 2 y Ejemplo 5), donde se representa la cantidad de xilosa acumulada en la orina tras la ingesta de 4-galactosil-xilosa para cada dosis administrada. En la Fig. 4A se incluyen los datos obtenidos con el mismo sujeto 1 tras ingerir 1 g del disacárido procedentes de la Fig. 3 para que pueda compararse con el resto de las dosis administradas. En estas Figuras 4A y 4B se aprecia: 1) Que la eliminación de xilosa en orina a lo largo del tiempo tras la ingesta de 4-galactosil-xilosa aumentó al incrementarse la cantidad administrada tanto al sujeto 1 (Fig. 4A), como al sujeto 2 (Fig. 4B); 2) Que una dosis de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa permitió detectar con facilidad la aparición de xilosa en orina de cualquiera de estos dos sujetos. Estas experiencias demuestran: 1) Que la excreción de xilosa en orina por voluntarios humanos adultos tolerantes a la lactosa aumentó con la cantidad de xilosa ingerida cuando ésta se administró oralmente a dosis de 0,25 g, 0,5 g, 1 g y 3 g, sin que ninguna de las dosis utilizadas provoque molestias ni trastorno gastrointestinal alguno derivados de la realización de la prueba y 2) Que una dosis de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa es suficiente como para determinar xilosa en orina con alta fiabilidad tras la ingesta de este disacárido.
Ejemplos 6 al 11
La proporción de xilosa excretada en orina por voluntarios humanos adultos tolerantes a la lactosa esta dentro del mismo rango cuando se administra la misma cantidad de 4-galactosil-xilosa a individuos del mismo sexo. Esto se ha demostrado administrando 0,25 g de 4-galactosil-xilosa a 8 voluntarios adultos tolerantes a la lactosa, 3 hombres (sujeto 1, Ejemplo 4; sujeto 7, Ejemplo 6; sujeto 11, Ejemplo 7) y 5 mujeres (sujeto 2, Ejemplo 5; sujeto 3, Ejemplo 8; sujeto 6, Ejemplo 9; sujeto 8, Ejemplo l0; sujeto 9, Ejemplo 11) en las mismas condiciones que las descritas en el Ejemplo 1 y determinando igualmente xilosa colorimétricamente con floroglucinol en la orina excretada por los sujetos a lo largo del tiempo tras la ingesta del disacárido. La ingestión de 4-galactosil-xilosa a las dosis utilizadas no provocó molestias ni trastorno gastrointestinal alguno a ninguno de estos sujetos. Los resultados de estas experiencias aparecen recopilados en la Fig. 5 que comprende los paneles A, B, C y D, donde se representa la cantidad de xilosa determinada en cada muestra (con símbolos blancos) y la cantidad de xilosa que se va acumulando en la orina a lo largo del tiempo (con símbolo negros) calculada adicionando a la cantidad de xilosa determinada en cada muestra las cantidades determinadas en todas las muestras precedentes. En el panel A se representan los valores individuales obtenidos con cada uno de los sujetos hombres (sujetos 1, 3 y 6). En el panel B representan los valores individuales obtenidos con cada uno de los sujetos mujeres (sujetos 2, 3, 6, 8 y 9). En los paneles C y D se representan los valores medios \pm el error estándar de la media calculados para los valores correspondientes a los sujetos hombres y mujeres estudiados, respectivamente. En la Fig. 5A se incluyen los datos obtenidos con el sujeto 1 tras ingerir 0,25 g de 4-galactosil-xilosa procedentes de la Fig. 4A y en la Fig. 5B se incluyen los datos obtenidos con el sujeto 2 tras ingerir 0,25 g de 4-galactosil-xilosa procedentes de la Fig. 4B, con objeto de que puedan compararse con el resto sujetos estudiados en las mismas condiciones. En esta Fig 5 se aprecia: 1) Que el acúmulo de xilosa eliminada en orina estuvo dentro del mismo rango, no excediendo el error estándar del 37% sobre la media en los hombres y del 8% en las mujeres y 2) Que la máxima eliminación de xilosa estuvo entre 2 y 3 horas tras la ingesta del disacárido. Estas experiencias demuestran que los resultados obtenidos con esta metodología se reproducen con fidelidad de unos individuos a otros.
Ejemplos 12 y 13
La administración de 4-galactosil-xilosa a voluntarios humanos intolerantes a la lactosa y posterior determinación de xilosa en orina permite detectar la deficiencia de lactasa intestinal. Esto se ha demostrado administrando 0,25 g de 4-galactosil-xilosa a dos sujetos voluntarios con sintomatología de intolerancia a la lactosa y determinando xilosa colorimétricamente con floroglucinol en la orina excretada por ambos a lo largo del tiempo tras la ingesta del disacárido. Uno de ellos (sujeto 12, Ejemplo 12), era un varón de 64 años de edad con intolerancia severa a la ingesta láctea desde los 8 años, diagnosticado previamente como hipolactásico tanto por biopsia intestinal como por pruebas de sobrecarga de lactosa, portando por tanto una deficiencia intensa de lactasa intestinal. El otro, (sujeto 5, Ejemplo 13) era una mujer de 30 años de edad que refirió padecer sintomatología de intolerancia a la lactosa desde el nacimiento, que precisó entonces el abandono de la lactancia materna y el cambio a una leche sin lactosa, portando presuntamente una deficiencia congénita de lactasa intestinal. La ingestión de 4-galactosil-xilosa a las dosis utilizadas no provocó molestias ni trastorno gastrointestinal alguno a ninguno de estos dos sujetos. Los resultados de estas experiencias aparecen recopilados en la Fig. 6 panel A (sujeto 12, Ejemplo 12) y panel B (sujeto 5, Ejemplo 13), donde se representa la cantidad de xilosa que se va acumulando en la orina a lo largo del tiempo en ambos sujetos (con símbolos negros), incluyendo en cada caso la curva que representa los valores medios de los voluntarios tolerante a lactosa correspondientes a su sexo y tomadas de las Figs. 5C y 5D, para facilitar la comparación. En esta Fig. 6 se aprecia: 1) Que la eliminación de xilosa en orina por el sujeto 12 fue muy inferior a los valores medios de eliminación de xilosa en voluntarios tolerantes a la lactosa, excretando este sujeto 1,33 mg totales de xilosa en orina de 8 horas tras la ingestión del disacárido, que frente al valor medio encontrado en los voluntarios tolerantes hombres estudiados de 35,7 \pm 2,0 mg tras el mismo periodo de tiempo representó una disminución del 96%, lo que esta de acuerdo con su diagnóstico previo de deficiencia intensa de lactasa intestinal; 2) Que la eliminación de xilosa en orina por el sujeto 5 fue muy inferior a los valores medios de eliminación de xilosa en voluntarios tolerantes a la lactosa, excretando este sujeto 4,08 mg totales de xilosa en orina de 8 horas tras la ingestión del disacárido, que frente al valor medio encontrado en los voluntarios tolerantes mujeres estudiados de 23,5 \pm 2,0 mg tras el mismo periodo de tiempo representó una disminución del 83%, lo que indica que se este sujeto porta una deficiencia también intensa de lactasa intestinal de carácter congénito, ya que presentó intolerancia a la lactosa desde el nacimiento. Estas experiencias demuestran que la metodología que se presenta permite la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal y el diagnóstico no invasivo de la deficiencia de este enzima en humanos, no provoca molestias aparentes en los sujetos portadores de una deficiencia y basta solamente una dosis de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa para detectar con fiabilidad deficiencias intensas del enzima en sujetos adultos.
Ejemplo 14
La administración de 4-galactosil-xilosa a voluntarios humanos intolerantes a la lactosa y posterior determinación de xilosa en orina, permite diferenciar entre pacientes intolerantes a la lactosa que portan una deficiencia de lactasa intestinal y pacientes intolerantes a la lactosa que lo son por presentar un cuadro de alergia a componentes de la leche, pero que no son portadores de una deficiencia del enzima. Esto se ha demostrado con la administración de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa y determinación posterior de xilosa colorimétricamente con floroglucinol en la orina excretada a lo largo del tiempo por un sujeto voluntario (sujeto 13), mujer de 25 años de edad, que presentó sintomatología de intolerancia a la lactosa a partir de los 12 años y que también refirió padecer alergia cutánea aguda tras la ingesta de leche. La ingestión de 4-galactosil-xilosa a la dosis utilizada no provocó molestias ni trastorno gastrointestinal alguno en este sujeto. Los resultados de esta experiencias aparecen recopilados en la Fig. 6 panel C, donde se representa la cantidad de xilosa que se va acumulando en la orina a lo largo del tiempo en este sujeto (con símbolos negros), incluyendo también la curva que representa los valores medios de los voluntarios tolerante a lactosa correspondientes a su sexo y tomada de la Fig. 5D para facilitar la comparación. En esta Fig. 6C se aprecia que este sujeto presentó un patrón de eliminación de xilosa prácticamente normal, excretando a las 8 horas la misma cantidad total que la media de las mujeres tolerantes, no tratándose entonces de una deficiencia del enzima, sino de un caso de alergia a algún componente de la leche a la vista de los datos clínicos referidos por el paciente. Esta experiencia demuestra que la metodología que se presenta permite diferenciar entre pacientes intolerantes a la lactosa que portan una deficiencia de lactasa intestinal y pacientes intolerantes a la lactosa que lo son por presentar un cuadro de alergia a componentes de la leche, pero que no son portadores de una deficiencia real del enzima.
Ejemplos 15 y 16
La eliminación de xilosa en orina tras la administración de 0,25 g de 4-galactosil-xilosa a sujetos tolerantes a la lactosa, y su disminución en sujetos intolerantes a la lactosa hipolactásicos, se observa igualmente por una técnica de valoración de xilosa diferente de la reacción colorimétrica con floroglucinol. Esto se ha demostrado administrando 0,25 g de 4-galactosil-xilosa a un sujeto voluntario tolerante a la lactosa [sujeto 1 (estudiado también en el Ejemplo 3), Ejemplo 15] por un lado, y por otro a un sujeto voluntario intolerante a la lactosa portador de una deficiencia intensa de lactasa intestinal [sujeto 12 (estudiado también en el Ejemplo 12), Ejemplo 16], y determinando xilosa por cromatografía de gases en la orina total recogida tras 3 horas de ingerir el disacárido con un cromatógrafo equipado con detector de ionización de llama y columna espiral de vidrio de 12 m de longitud, 0,2 mm de diámetro interno y 0,3 gm de espesor. La presencia de xilosa en la orina se detectó en forma de su trimetilsililderivado. Para ello la muestra de orina se liofilizó y se disolvió en 20 \mul de piridina conteniendo 1 mM de bencil (3-D-xilopiranósido como referencia interna. A continuación se añadieron otros 20 \mul de N-trimetilsililimidazol como agente sililante, se sonicó la mezcla durante un minuto y se calentó a 60°C durante 30 minutos, inyectándose luego
\hbox{1-2
 \mu l}
de muestra en el cromatógrafo de gases. La temperatura del inyector y del detector empleada fue de 250°C, y el gradiente de temperatura en la columna fue el siguiente: 2 minutos a 180°C y un incremento de 5°C por minuto hasta llegar a 250°C, manteniéndose esa temperatura durante 15 minutos. La concentración de xilosa en cada muestra se calculó a partir de las áreas de los picos correspondientes en los cromatogramas. Los resultados de esta experiencias aparecen recopilados en la Fig. 7, donde se muestran los cromatogramas correspondientes a las muestras de orina basal y de orina de 3 horas pertenecientes al sujeto tolerante y al sujeto intolerante, indicándose los tiempos de retención en minutos de los picos asignados a xilosa y al patrón interno en cada caso. En esta Fig. 7 se aprecia que la xilosa excretada en orina de 3 horas tras la ingesta de 4-galactosil-xilosa por el sujeto 12 hipolactásico fue igualmente muy inferior a la que excretó el sujeto 1 tolerante a la lactosa, según se aprecia por al área de los picos correspondientes a xilosa en los cromatogramas, determinándose con este procedimiento una cantidad de 2,1 mg totales de xilosa en orina de 3 horas del sujeto 12 intolerante hipolactásico frente a 25,2 mg totales de xilosa en orina de 3 horas del sujeto 1 tolerante a la lactosa, lo que representó una disminución del 92% que esta en concordancia con la intensa deficiencia de lactasa intestinal que padece este sujeto hipolactásico y es similar al grado de la disminución de xilosa determinada colorimétricamente tras el mismo periodo de tiempo en este mismo sujeto que se aprecia en la Fig. 6A. Esta experiencia demuestra que la metodología que se presenta permite el diagnóstico no invasivo de la deficiencia de lactasa intestinal en humanos independientemente del método de medida que se emplee para la determinación de la xilosa eliminada.
Ejemplos 17 al 19
La determinación de xilosa en sangre tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa permite el diágnóstico no invasivo de la deficiencia de lactasa intestinal. Esto se ha demostrado administrando 3 g de 4-galactosil- xilosa a dos sujeto voluntarios tolerantes a la lactosa [sujeto 1, Ejemplo 17 y sujeto 2, Ejemplo 18 (estos sujetos fueron estudiados también en los Ejemplos 3 al 6)] y al sujeto 12 intolerante a la lactosa hipolactásico [Ejemplo 19 (este sujeto fue estudiado también en los ejemplos 12 y 15]) y determinando xilosa colorimétricamente con floroglucinol en el plasma sanguíneo de muestras de sangre obtenidas de estos sujetos previamente a la ingesta del disacárido y tras la ingesta del mismo a intervalos de aproximadamente 1 hora durante 6 horas; en el sujeto hipolactásico se tomó una muestra de sangre basal y otra muestra de sangre tras 2 horas de ingerir el disacárido 4-galactosil-xilosa. La ingesta de los 3 g de 4-galactosil-xilosa no dio lugar a molestia o trastorno gastrointestinal alguno en este sujeto 12 intolerante a la lactosa ni en los dos sujetos tolerantes. Los resultados de esta experiencias aparecen recopilados en la Fig. 8, donde se aprecia: 1) Que aparece xilosa en el plasma sanguíneo tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa a los sujetos 1 y 2 tolerantes a la lactosa, como consecuencia de la hidrólisis de este disacárido por la lactasa intestinal; 2) Que la aparición de xilosa en el plasma sanguíneo de esto dos sujetos alcanzó un máximo alrededor de las 2 horas de ingerir 4-galactosil-xilosa para luego disminuir hasta ser indetectable a las 6 horas, como consecuencia del paso de xilosa a la orina; 3) Que en el sujeto 12 intolerante a la lactosa se detectó xilosa en plasma sanguíneo procedente de la muestra de sangre tomada tras 2 horas de la ingesta de 4-galactosil-xilosa en una cantidad de 0,48 \mug/100 \mul de plasma, que frente a la cantidad detectada a un intervalo de tiempo parecido en el sujeto 1, de 1,72 \mug/100 ml de plasma y en el sujeto 2, de 1,95 \mug/100 ml de plasma, representó una disminución de xilosa en el plasma del sujeto intolerante hipolactásico del 72% y del 75%, respectivamente. Estas experiencias demuestran que la determinación de xilosa en sangre tras la administración oral de 4-galactosil-xilosa permite la evaluación in vivo de la actividad lactasa intestinal y es una prueba válida para el diagnóstico no invasivo de la deficiencia de este enzima en humanos.

Claims (1)

1. Uso de 4-galactosil-xilosa para la elaboración de composiciones farmacéuticas para la determinación de xilosa en sangre en humanos.
ES200202372A 2002-10-16 2002-10-16 Empleo de 4-galactosil-xilosa en humanos para la evaluacion in vivo de lactasa intestinal como prueba diagnostica no invasiva de la deficiencia de este enzima. Expired - Fee Related ES2208099B1 (es)

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