ES2621923T3 - Biomarcador para medir la eficacia de un fármaco en enfermedad enteropática - Google Patents

Abstract

Un método para evaluar la eficacia de un agente terapéutico o de un régimen terapéutico en el tratamiento de un paciente individual con un trastorno enteropático, comprendiendo el método: cuantificar la presencia de un sustrato de CYP3A y/o de su metabolito (o metabolitos) en al menos una muestra que se ha obtenido del paciente, en donde dicho paciente es un individuo identificado como afectado por un trastorno enteropático, y a dicho paciente se le ha administrado una dosis oral del sustrato de CYP3A.

Description

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DESCRIPCION

Biomarcador para medir la eficacia de un farmaco en enfermedad enteropatica Derechos gubernamentales

La presente invencion se realizo con la subvencion del Gobierno segun el Convenio R01 DK063158 otorgado por the National Institutes of Health. El Gobierno tiene ciertos derechos sobre esta invencion.

Las enzimas del citocromo P450 son una familia que contiene un grupo hemo que desempena funciones principales en el metabolismo oxidativo, peroxidativo y reductor de numerosos compuestos endogenos y exogenos, entre los que se incluyen muchos agentes farmaceuticos. Las sustancias que se sabe que estan metabolizadas por las enzimas de P450 incluyen esteroides, acidos biliares, acidos grasos, prostaglandinas, leucotrienos, aminas biogenicas, retinoides, hidroperoxidos lipldicos, fitoalexinas, compuestos farmaceuticos, compuestos qulmicos ambientales y contaminantes. Los sustratos de P450 tambien incluyen productos vegetales naturales implicados en el aroma, el olor y color de las flores, y en la respuesta a la cicatrizacion. Las enzimas de P450 y otras enzimas metabolizantes de farmacos, mantienen niveles constantes de ligandos endogenos implicados en la transcription de genes, modulada por ligandos, que efectuan funciones de crecimiento, apoptosis, diferenciacion, homeostasis celular y neuroendocrina. El metabolismo de agentes qulmicos exogenos por las enzimas de P450 puede producir metabolitos toxicos, algunos de los cuales se han implicado como agentes responsables de defectos congenitos y del inicio y progresion tumoral.

La subclase CYP3A cataliza un extraordinario numero de reacciones de oxidation de farmacos cllnicamente importantes, tales como quinidina, warfarina, eritromicina, ciclosporina A, midazolam, lidocalna, nifedipina y dapsona. Las estimaciones actuales son que mas del 60 % de los farmacos cllnicamente utilizados se metabolizan mediante la enzima CYP3A4, incluyendo clases de farmacos principales tales como bloqueadores de canales de calcio, inmunosupresores, antibioticos macrolidos y farmacos contra el cancer.

Ademas de en el hlgado, las P450 se expresan apreciablemente en la mucosa del intestino delgado, en pulmon, rinon, cerebro, mucosa olfativa y piel. De estos tejidos, la mucosa intestinal es el sitio extrahepatico mas importante de biotransformacion de farmacos. Como consecuencia, existe la posibilidad de un metabolismo presistemico sustancial y por tanto de una reduction potenciada en la biodisponibilidad a medida que pasa el farmaco, secuencialmente, a traves del intestino delgado e hlgado. Vease Lang et al. (1996) Clin Pharmacol Ther 59: 41-46; Kolars et al. (1992) J. Clin. Invertir. 90: 1871-1887).

Al igual que en el hlgado, la CYP3A es la subfamilia de P450 mas abundante expresada en el intestino delgado, con un contenido especlfico promedio (o mediana) que representa del 50 al 70 % del contenido de P450 determinado con espectros. Al igual que la CYP3A hepatica, la CYP3A enterica se localiza en un solo tipo de celula, especialmente dentro de las celulas epiteliales columnares absortivas maduras (enterocitos) que componen la mayor parte del recubrimiento de la mucosa. El contenido de CYP3A microsomal enterico, as! como la actividad catalltica asociada, es generalmente mas elevado en la region proximal y despues desciende bruscamente hacia el Ileon distal.

Aunque se ha estimado que la masa total de CYP3A en todo el intestino delgado es de ~1 % de la que hay en el hlgado, estudios realizados en seres humanos han demostrado que la CYP3A enterica puede contribuir significativamente, y en algunos casos del mismo modo, con la CYP3A hepatica, al metabolismo del primer paso global de diversos farmacos, particularmente de los que se absorben por la via transcelular. Una ventaja de la actividad de CYP3A como un biomarcador para enteropatla, es la rapidez con la que puede cambiar la actividad de CYP3A. Por ejemplo, en tan solo 7 dlas de tratamiento con rifampina, un inductor conocido de la CYP3A4, puede dar como resultado un aumento mayor de 5 veces en la actividad enzimatica en el intestino delgado (Kolars, et al, citado anteriormente). De manera similar, el zumo de pomelo, un regulador negativo conocido de CYP3A4, reduce mas de 2 veces la concentration epitelial en el intestino delgado de esta enzima en tan solo 6 dlas (Lown et al., J. Clin. Invest. 99, 2545, 1997). Por tanto, es posible minimizar la duration de la dolencia en pacientes en los que debe inducirse la enfermedad para fines de diagnostico o relacionados.

Los enterocitos participan en diversas patologlas. Por ejemplo, en 1953, se reconocio por primera vez, que la ingestion de gluten, una protelna habitual de la dieta, presente en trigo, cebada y centeno, causaba enfermedad en individuos sensibles. El gluten es una mezcla compleja de moleculas de glutamina - y prolina - rica en glutenina y gliadina, que se piensa que es responsable de la induction de la enfermedad. La ingestion de dichas protelnas por individuos sensibles produce aplanamiento del recubrimiento epitelial, normalmente suntuoso, similar a una alfombra, del intestino delgado, que se sabe que es responsable de la digestion terminal eficiente y extensiva de peptidos y otros nutrientes.

Los slntomas cllnicos del esprue celiaco incluyen cansancio, diarrea cronica, mala absorcion de nutrientes, perdida de peso, distension abdominal, anemia, as! como un riesgo sustancialmente potenciado de desarrollar osteoporosis y neoplasias intestinales (linfoma y carcinoma). La enfermedad tiene una incidencia de aproximadamente 1 en 200

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en la mayorla de las poblaciones. Aunque hasta ahora no se ha aprobado una terapia no dietetica para el tratamiento del esprue celiaco, se estan realizando diversos esfuerzos para desarrollar terapias enzimaticas orales (a partir de ahora en el presente documento denominadas “glutenasas”) que aceleren la digestion, la destoxificacion y la asimilacion de peptidos de gluten inmunotoxicos, proteollticamente resistentes en el tracto gastrointestinal de pacientes cellacos. Tambien se estan considerando otros tipos de farmacos para el tratamiento del esprue celiaco.

Una enfermedad relacionada es la dermatitis herpetiforme, que es una erupcion cronica caracterizada por agrupaciones de veslculas intensamente prurlticas, papulas y lesiones similares a urticaria. Se producen depositos de IgA en casi toda la piel perilesional y de aspecto normal. La enteropatla asintomatica sensible a gluten se descubrio en el 75 al 90 % de pacientes y en algunos de sus familiares. La aparicion es normalmente gradual. El picor y el ardor son graves, y las rascaduras a menudo enmascaran las lesiones primarias con eccematizacion de piel adyacente, lo que conduce a un diagnostico de eccema erroneo. La adherencia estricta a una dieta sin gluten durante perlodos prolongados puede controlar la enfermedad en algunos pacientes, obviando o reduciendo la necesidad de terapia con farmacos. Algunas veces se prescribe dapsona, sulfapiridina y colchicinas para aliviar el picor, aunque la enfermedad subyacente no se ve afectada por estos farmacos. Dada la estrecha relacion entre el esprue celiaco y la patogenesis de la dermatitis herpetiforme, tambien se espera que las terapias anteriormente mencionadas sean utiles para el tratamiento de la dermatitis herpetiforme.

Hay una imperiosa necesidad de desarrollar biomarcadores sensibles, especlficos y no invasivos, para evaluar la eficacia farmacologica en el tratamiento de pacientes con enfermedades enteropaticas tales como el esprue celiaco. El biomarcador ideal no solo posibilitarla ensayos cllnicos de candidatos farmacologicos, sino que tambien encontrarla utilidad en el control de la enfermedad de pacientes a los que se prescriben dichas medicaciones. Los metodos de diagnostico actuales para el esprue celiaco, tales como metodos basados en ELISA, en los que se detectan anticuerpos anti-gliadina o anti-tTG en el suero del paciente o metodos basados en linfocitos T en los que se mide la proliferacion celular o la secrecion de y-IFN despues de estimulacion con gliadina, son inadecuados para esta finalidad. Los ensayos con anticuerpos son inadecuados porque los pacientes deben exponerse a dosis relativamente altas de gluten durante periodos de tiempo prolongados antes de su seroconversion. Los ensayos de proliferacion de linfocitos T son mas sensibles, pero requieren procedimientos invasivos (por ejemplo, extraccion de una biopsia del intestino delgado o de cantidades relativamente grandes de sangre para recoger numeros adecuados de celulas mononucleares de sangre periferica) y se considera que son demasiado costosos para su uso habitual. La presente invencion aborda esta nueva necesidad medica aunque insatisfecha.

Sumario de la invencion

En el presente documento se describen metodos para el diagnostico y la monitorizacion cllnica de enfermedades enteropaticas, cuyas enfermedades incluyen, sin limitacion, esprue celiaco, enfermedad de Crohn y slndrome del intestino irritable. La invencion proporciona un metodo para evaluar la eficacia de un agente terapeutico o de un regimen terapeutico en el tratamiento de un paciente individual con un trastorno enteropatico, comprendiendo el metodo: cuantificar la presencia de un sustrato de CYP3A y/o de su metabolito (o metabolitos) en al menos una muestra que se ha obtenido del paciente, en el que dicho paciente es un individuo identificado como que tiene un trastorno enteropatico y a dicho paciente se le ha administrado una dosis oral del sustrato de CYP3A. En algunas realizaciones, los metodos de la invencion se utilizan para determinar la eficacia de una terapia para el tratamiento de una enfermedad enteropatica, bien a un nivel individual, o en el analisis de un grupo de pacientes, por ejemplo, en un formato de ensayo cllnico. Dichas realizaciones implican normalmente la comparacion de dos o mas instantes para un paciente o un grupo de pacientes. Se espera que el estado del paciente difiera entre los dos instantes como resultado de la administracion de un agente terapeutico, de un regimen terapeutico o de una exposicion del paciente que se somete a tratamiento, a un agente inductor de enfermedad. La respuesta de un paciente con una enfermedad enteropatica a la terapia se evalua detectando la capacidad del paciente para metabolizar un sustrato de CYP3A administrado por via oral. El metabolismo del paciente puede monitorizarse de diversas maneras. Convenientemente, la aparicion de un metabolito del sustrato de CYP3A se detecta en una muestra del paciente durante un perlodo de tiempo despues de administracion oral, por ejemplo, en la orina, plasma, aliento, saliva, etc. El sustrato de CYP3A se marca opcionalmente, por ejemplo, con un marcador isotopico fluorescente, etc.

En los analisis farmacocineticos pueden utilizarse diversos formatos. En algunas realizaciones, como control, una muestra del paciente se obtiene antes del tratamiento, y se compara con muestras del mismo paciente despues del tratamiento. En otras realizaciones, la funcion de CYP3A se evalua durante perlodos de tiempo prolongados para monitorizar el estado del paciente.

Descripcion detallada

La enfermedad enteropatica se monitoriza cllnicamente midiendo el comportamiento farmacocinetico de sustancias que se metabolizan principalmente por citocromos de CYP3A. En realizaciones preferidas dichas sustancias se administran por via oral, como una solucion, formulacion enterica, etc.

Los parametros farmacocineticos de un sustrato de CYP3A farmacologico administrado por via oral se monitorizan como un sustituto no invasivo para enteropatla. Determinadas enzimas xenobioticas del citocromo P450, tales como

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CYP3A4, son muy activas tanto en enterocitos as! como en hepatocitos (Kolars, 1992). Sin embargo, a diferencia del hlgado, donde el nivel de expresion es relativamente constante, los niveles de CYP3A4 pueden fluctuar significativamente en el intestino delgado. Por ejemplo, CYP3A4 es abundante en enterocitos proximos a las terminaciones vellosas, pero no en enterocitos proximos a las criptas (Kolars, 1992; Lang, 1996; Johnson, 2001), lo que sugiere que la actividad de CYP3A4 se correlaciona con la madurez de los enterocitos.

Se sabe que en los pacientes celiacos el gluten de la dieta induce una morfologla y fisiologla anomalas. (Kagnoff, 2007). Por consiguiente, los pacientes celiaticos con enfermedad activa tienen niveles de actividad y de protelna CYP3A disminuidos en su intestino delgado, ambos de los cuales recuperan la normalidad tras la introduccion de una dieta sin gluten (Lang, 1996; Johnson, 2001). Por tanto, la eficacia de los farmacos en pacientes celiacos se monitoriza convenientemente utilizando la actividad de CYP3A4 intestinal como un sustituto para la enteropatla inducida por gluten.

Definiciones

De la manera en la que se usa en el presente documento, la expresion “farmaco terapeutico” o “regimen terapeutico” se refiere a un agente que se utiliza en el tratamiento o en la prevention de una enfermedad o afeccion, particularmente una afeccion enteropatica para los fines de la presente invention. Son de interes los ensayos cllnicos que utilizan dichas terapias, y la monitorizacion de pacientes que se someten a las mismas.

En algunas realizaciones, la terapia implica el tratamiento de pacientes con esprue celiaco con glutenasa. En otras realizaciones, la terapia implica el tratamiento de pacientes con esprue celiaco con un inhibidor de transglutaminasa. La evaluation del tratamiento puede utilizar una exposition a gluten. En algunas realizaciones, para esta finalidad se utiliza una dosis moderada de gluten oral (de al menos aproximadamente 1 g/dla, al menos aproximadamente 5 g/dla, al menos aproximadamente 10 g/dla, o mas) durante 1-14 dlas. Los pacientes pueden ser pacientes de control que no se han tratado, o pacientes sometidos a un regimen cllnico de interes, por ejemplo, restriction dietetica de gluten, tratamiento con un inhibidor de transglutaminasa, tratamiento con glutenasa y similares.

Un “paciente”, de la manera en la que se usa en el presente documento, describe un organismo, incluyendo mamlferos, del cual se recogen muestras de acuerdo con la presente invencion. Las especies de mamlfero que se benefician de los sistemas y metodos desvelados para la monitorizacion farmacologica terapeutica incluyen, sin limitation, simios, chimpances, orangutanes, seres humanos, monos; y animales domesticados (por ejemplo, animales de companla) tales como perros, gatos, ratones, ratas, cobayas y hamsters.

La expresion “parametros farmacocineticos”, se refiere a la caracterizacion matematica de interacciones entre procesos fisiologicos normales y un farmaco terapeutico a lo largo del tiempo (es decir, efecto corporal sobre el farmaco). Determinados procesos fisiologicos (absorcion, distribution, metabolismo y elimination) afectaran a la capacidad del farmaco para proporcionar un efecto terapeutico deseado en un paciente. El conocimiento de los parametros farmacocineticos de los farmacos ayuda a interpretar la concentration del farmaco en la corriente sangulnea y es util en la determination de las dosificaciones de farmacos farmacologicamente eficaces.

Las expresiones “citocromo P450” y “CYP” pretenden referirse a una gran familia (a menudo denominada “superfamilia”) de enzimas de hemoprotelna capaces de metabolizar xenobioticos tales como farmacos, carcinogenos y contaminantes ambientales, as! como endobioticos, tales como esteroides, acidos grasos y prostaglandinas. De la manera en la que se usa en el presente documento, estas expresiones pretenden incluir todos los miembros de la superfamilia de CYP. En algunas realizaciones, estas expresiones se refieren a las CYP de origen humano.

Todas las isoenzimas, o isoformas, dentro de la superfamilia de CYP, se contemplan dentro de las expresiones “citocromo P450” y “CYP” de la manera en la que se usa en el presente documento. Las isoformas de CYP particularmente contempladas incluyen, pero sin limitacion, miembros de las familias CYP1A, CYP2B, CYP2C, CYP2D, CYP2E y CYP3A, ya que estas isoformas se han identificado como las mas habitualmente responsables del metabolismo de farmacos en seres humanos.

Substrato de CYP3A. De la manera en la que se usa en el presente documento, el termino se refiere a un compuesto que se transforma enzimaticamente por CYP3A en un compuesto, o metabolito, diferente. Para los fines de la presente invencion, es deseable que el metabolito o metabolitos primarios sean detectablemente diferentes en comparacion con el sustrato. Adicionalmente, es deseable que el sustrato se administre por via oral, y que se absorba en el intestino.

Diversos farmacos disponibles en el comercio son metabolizados por CYP3A4 y pueden encontrar uso en los metodos de la invencion. Como sustratos de interes se incluyen, sin limitacion, los expuestos en la Tabla 1, con su metabolito(s) primario(s).

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Tabla 1

Sustrato

Metabolito(s) Primario(s)

ciclosporina A

AM91 AM11 AM4N1

Midazolam

1'-hidroximidazolam, 4-hidroximidazolam

Triazolam

1 '-hidroxitriazolam, 4-hidroxitriazolam

Lovastatina

forma (p)-hidroxiacido

Simvastatina

3'-hidroxi simvastatina, 6'-exometilen simvastatina, 3',5'-dihidrodiol simvastatina, (p)- hidroxiacido de simvastatina,

Terfenadina

azaciclonol y alcohol de terfenadina

En algunas realizaciones de la invencion, el midazolam es el sustrato de CYP3A. El midazolam exhibe cambios de tasas de eliminacion grandes y relativamente reproducibles en seres humanos, pudiendo, en la mayoria de los cuales, atribuirse a cambios en el metabolismo enterico (Thummel et al. (1996) Clin. Pharm Therap. 59: 491; Gorski et al. (1998) Clin. Pharm Therap. 64: 133; Paine et al. Clin. Pharm Therap. 60: 14-24; Chung et al. (2006) Pharmacokinetics & Drug Disposition 79: 350). Por tanto, la eficacia del tratamiento se evalua monitorizando la Cmax, el ABC o la tasa de eliminacion de una sola dosis de midazolam, por ejemplo, si midozalam se administra despues de una exposicion a gluten en presencia de farmaco o placebo, durante tratamiento prolongado de un paciente celiaco, etc.,. En seres humanos, el midazolam se elimina principalmente del organismo por metabolismo a 1'- hidroximidazolam y 4-hidroximidazolam por enzimas de la subfamilia 3A del citocromo P450, y menos del 1 % de la dosis se excreta sin cambios en la orina. La eliminacion de midazolam y la proporcion en plasma de 1'- hidroximidazolam con respecto a midazolam despues de administration intravenosa ha demostrado tener indices eficaces de actividad CYP3A en biopsias de higado. Despues de administracion oral, el midazolam es util para evaluar la funcion enterocitica de CYP3A.

Un sustrato se CYP3A4 alternativo es la simvastatina oral, cuya biodisponibilidad es mas dependiente del metabolismo intestinal que el midazolam. Los cambios en la actividad de CYP3A4 intestinal pueden monitorizarse con simvastatina midiendo la concentration en suero del farmaco 1-2 horas posteriores a la dosis, que se aproxima razonablemente a la Cmax del farmaco. La ventaja de una medicion fiable de un solo instante de actividad de CYP3A4 intestinal es que puede utilizarse un analisis de orina o una puncion digital para monitorizar a largo plazo el cumplimiento en una dieta sin gluten o la adherencia a un regimen con farmacos.

La expresion “muestra de un paciente” o “muestra” de la manera en la que se usa en el presente documento, se refiere a una muestra de un animal, mas preferentemente de un ser humano, que busca el diagnostico o el tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, una enfermedad enteropatica. Las muestras de la presente invencion incluyen, sin limitation, orina, saliva, aliento y sangre, incluyendo derivados de sangre, por ejemplo, plasma, suero, etc.

Analisis de muestras. Se analizaron muestras de pacientes para determinar el metabolismo de un sustrato de CYP3A, normalmente un sustrato de CYP3A administrado por via oral. La muestra puede analizarse cuantitativamente para determinar la presencia del sustrato y/o de sus metabolitos mediante cualquier ensayo adecuado, que sea muy conocido en la tecnica. Los metodos de analisis incluyen espectroscopia de masas con cromatografia Kquida (vease Kanazawa et al. (2004) J. Chromatography 1031: 213-218, Gorski et al., citado anteriormente.); HPLC; cromatografia de gases con monitorizacion de iones/espectroscopia de masas (vease Paine et al., citado anteriormente); cromatografia de gases; sensores semiconductores para la detection de gases; inmunoensayos; espectrometros de masas (incluyendo espectrometria de masas con reaction de transferencia de protones), espectrometros de infrarrojo (IR) o ultravioleta (UV) o de luz visible o fluorescente (es decir, espectrometro infrarrojo no dispersivo); ensayos de union que implican aptameros o proteinas modificadas geneticamente, etc.

En otras realizaciones, pueden utilizarse inmunoensayos de union competitiva para ensayar una muestra de fluido corporal para determinar la presencia del sustrato o metabolitos. Los analisis con inmunoensayo pueden incluir una tira absorbente, fibrosa que tiene uno o mas reactivos incorporados en zonas especificas en la tira. La muestra de fluido corporal se deposita en la tira y por action capilar la muestra migrara a lo largo de la tira, entrando en zonas con reactivos especificas en las que puede tener lugar una reaccion quimica. Se incluye al menos un reactivo que manifieste una respuesta detectable, por ejemplo, un cambio de color, en presencia de una cantidad minima de un agente de serialization de interes.

En algunas realizaciones, la muestra biologica es aliento del paciente. Los sensores que pueden analizar componentes del aliento exhalado del paciente para detectar, cuantificar y/o tender concentraciones de compuestos en aliento exhalado, pueden correlacionarse con la concentracion del compuesto en el cuerpo del paciente, en particular en la sangre. Puede seleccionarse un sensor de diversos sistemas que se han desarrollado para su uso en

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la recogida y monitorizacion de componentes del aliento exhalado, particularmente gases especlficos. Por ejemplo, el sensor de la invention en cuestion puede seleccionarse de los descritos en las Patentes de Estados Unidos n.° 6.010.459; 5.081.871; 5.042.501; 4.202.352; 5.971.937 y 4.734.777. Adicionalmente, en la invencion en cuestion pueden utilizarse sistemas sensores que tengan componentes de analisis de datos informatizados (es decir, Patente de Estados Unidos n.° 4.796.639).

En otras realizaciones, la muestra biologica es orina del paciente. La concentration del compuesto y de sus metabolitos puede monitorizarse en una recogida de orina de 6 horas. En los casos en los que cualquiera de estas concentraciones muestren una buena correlation con el ABC del compuesto en plasma, puede realizarse un analisis de orina para determinar la actividad CYP3A utilizando este biomarcador.

Como condiciones de interes para monitorizar los metodos de la presente invencion se incluyen diversas afecciones enteropaticas, particularmente afecciones cronicas. En algunas realizaciones de la invencion, a un paciente se le diagnostica que tiene una afeccion enteropatica, para el cual se contempla el tratamiento. El paciente puede inicialmente someterse a ensayo con respecto a la actividad CYP3A enterica antes del tratamiento, para establecer un nivel de actividad inicial. Como alternativa, el paciente puede retirarse de un regimen de tratamiento durante un perlodo de tiempo suficiente para inducir un estado enteropatico, en el que el estado del paciente se ensaya con respecto a la actividad CYP3A enterica para establecer un nivel de actividad inicial. Las afecciones enteropaticas de interes incluyen, sin limitation, esprue celiaco, dermatitis herpetiforme, slndrome del intestino irritable (SII); y Enfermedad de Crohn.

El esprue celiaco es una enfermedad mediada inmunologicamente en individuos geneticamente susceptibles causada por intolerancia al gluten, dando como resultado inflamacion de la mucosa, que causa mala absorcion. Normalmente, los slntomas incluyen diarrea y molestias abdominales. Aparece generalmente en la ninez pero puede aparecer mas tarde. No existe presentation tlpica. Algunos pacientes son asintomaticos o solamente tienen signos de deficiencia nutricional. Otros tienen slntomas GI significativos.

El esprue celiaco puede presentarse en la infancia y en la ninez despues de la introduction de cereales en la dieta. El nino tiene deficit de crecimiento, presenta apatla, anorexia, esta palido, tiene hipotonla generalizada, distension abdominal y atrofia muscular. Las heces son blandas, voluminosas, arcillosas y de olor desagradable. Los ninos mas mayores pueden presentar anemia o no crecer normalmente. En adultos, la lasitud, debilidad y anorexia son mas comunes. La diarrea leve e intermitente es algunas veces el slntoma que presentan. La esteatorrea varla de leve a grave (7 a 50 g de grasa/dla). Algunos pacientes tienen perdida de peso, rara vez bajo peso. En estos pacientes se observa generalmente anemia, glositis, estomatitis angular y ulceras aftosas. Las manifestaciones de deficits de vitamina D y Ca (por ejemplo, osteomalacia, osteopenia, osteoporosis) son habituales. Tanto en hombres como en mujeres puede haber fertilidad reducida.

El diagnostico se sospecha cllnicamente y por anomallas de laboratorio que sugieren una mala absorcion. La incidencia familiar es una pista valiosa. El esprue celiaco debe considerarse encarecidamente en un paciente con deficit de hierro sin sangrado GI obvio. Normalmente la confirmation implica una biopsia de intestino delgado de la segunda parte del duodeno. Los hallazgos incluyen ausencia o acortamiento de vellosidades (atrofia vellosa), aumento de celulas intraepiteliales, e hiperplasia crlptica. Dado que los resultados de la biopsia pueden ser inespeclficos, los marcadores serologicos pueden ayudar al diagnostico. Un anticuerpo anti gliadina (AGA) y un anticuerpo anti-endomisial (EMA, un anticuerpo contra una protelna del tejido conectivo intestinal) en combination, tienen un valor predictivo positivo y negativo de casi 100 %. Estos marcadores tambien pueden utilizarse para explorar poblaciones con alta frecuencia de esprue celiaco, incluyendo familiares de 1er grado de los pacientes afectados y pacientes con enfermedades que se producen a una mayor frecuencia en asociacion con esprue celiaco. Si cualquiera de las pruebas es positiva, al paciente se le puede realizar una biopsia diagnostica del intestino delgado. Si ambos son negativos, es improbable que se produzca un episodio celiaco. Con frecuencia se producen otras anomallas de laboratorio y pueden buscarse. Estas incluyen anemia (anemia ferropenica en ninos y anemia por deficiencia de folato en adultos); bajas cantidades de albumina, Ca, K y Na; y elevadas cantidades de fosfatasa alcalina y PT. Algunas veces se realizan pruebas de mala absorcion, aunque no son especlficas para el esprue celiaco. Si se realizan, los hallazgos habituales incluyen esteatorrea de 10 a 40 g/dla y D-xilosa anomala (en enfermedad grave del Ileon) y pruebas de Schilling.

El tratamiento convencional es una dieta sin gluten (evitar alimentos que contengan trigo, centeno o cebada). El gluten se utiliza de una manera tan extendida que un paciente necesita una lista detallada de alimentos que debe evitar. Se recomienda a los pacientes que acudan a la consulta de un dietista y que se unan a un grupo de ayuda al celiaco. La respuesta a una dieta sin gluten es normalmente rapida, y los slntomas se resuelven al cabo de 1 a 2 meses. La ingestion, incluso de pequenas cantidades de alimentos que contienen gluten, puede prevenir la remision o inducir la enfermedad.

Las complicaciones incluyen esprue refractario, esprue colagenoso y el desarrollo de linfomas intestinales. Los linfomas intestinales afectan del 6 al 8 % de los pacientes con esprue celiaco, presentandose normalmente en los pacientes de 50 anos. La frecuencia de otras neoplasias del tracto GI (por ejemplo, carcinoma de esofago o de

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orofaringe, adenocarcinoma de intestino delgado) aumenta. La adherencia a una dieta sin gluten puede reducir significativamente el riesgo de neoplasia.

La dermatitis herpetiforme es una erupcion cronica caracterizada por agrupaciones de veslculas intensamente prurlticas, papulas y lesiones similares a urticaria. La causa es autoinmunitaria. El diagnostico es mediante una biopsia de la piel con ensayo de inmunofluorescencia directo. El tratamiento es normalmente con dapsona o con sulfapiridina.

Normalmente esta enfermedad se presenta en pacientes de 30 a 40 anos y es rara en personas de raza negra y asiaticos del este. Es una enfermedad autoinmunitaria. El esprue celiaco esta presente en el 75 al 90 % de los pacientes con dermatitis herpetiforme y en algunos de sus familiares, pero es asintomatico en la mayorla de los casos. La frecuencia de la enfermedad tiroidea tambien se incrementa. Los yoduros pueden exacerbar la enfermedad, incluso cuando los slntomas estan bien controlados. La expresion “herpetiforme”, se refiere a la aparicion agrupada de las lesiones en vez de a una relacion con el herpesvirus.

A los pacientes se les puede realizar una biopsia de piel de una lesion y de piel adyacente de aspecto normal. Normalmente suele haber deposicion de IgA en las terminaciones papilares dermicas y es importante para el diagnostico. Los pacientes deben evaluarse con respecto al esprue celiaco.

La adherencia estricta a una dieta sin gluten durante perlodos prolongados (por ejemplo de 6 a 12 meses) controla la enfermedad en algunos pacientes, obviando o reduciendo la necesidad de terapia con farmacos. Cuando se necesitan los farmacos, la dapsona puede proporcionar una mejora sintomatica. Se comienza con 50 mg po (por via oral) una vez al dla, aumentando hasta dos o tres veces al dla (o a una dosis de 100 mg una vez al dla); normalmente esto alivia drasticamente los slntomas, incluyendo el picor, al cabo de 1 a 3 dlas; si es asl, se continua con esta dosis. Si no se produce mejora, la dosis puede aumentarse cada semana, hasta 100 mg cuatro veces al dla. La mayorla de los pacientes puede mantenerse en 50 a 150 mg/dla, y algunos requieren tan solo 25 mg/semana. Aunque es menos eficaz, la sulfapiridina puede utilizarse como una alternativa para los que no pueden tolerar la dapsona. La dosificacion oral inicial es de 500 mg dos veces al dla, aumentando en 1 g/dla cada 1 a 2 semanas hasta que se controla la enfermedad. La dosificacion de mantenimiento varla de 500 mg dos veces/semana a 1000 mg una vez/dla. La colchicina es otra opcion de tratamiento. El tratamiento continua hasta que se resuelven las lesiones.

La enfermedad de Crohn (enteritis regional; ileitis o ileocolitis granulomatosa) es una enfermedad inflamatoria transmural cronica que normalmente afecta al Ileon distal y al colon pero puede producirse en cualquier parte del tracto GI. Los slntomas incluyen diarrea y dolor abdominal. Pueden surgir abscesos, fistulas internas y externas y obstruccion intestinal. Pueden aparecer slntomas extraintestinales, particularmente artritis. El diagnostico es por colonoscopia y con estudios de contraste con bario. El tratamiento es con acido 5-aminosalicllico, corticosteroides, inmunomoduladores, anticitocinas, antibioticos y a menudo cirugla.

La presentacion inicial mas habitual es diarrea cronica con dolor abdominal, fiebre, anorexia y perdida de peso. El abdomen es blando, y puede palparse una masa o inflamacion. La hemorragia rectal es inusual, excepto en enfermedad colonica aislada, que puede manifestarse de forma similar a la colitis ulcerosa. Algunos pacientes presentan un abdomen agudo que simula apendicitis aguda u obstruccion intestinal. Alrededor del 33 % de los pacientes tienen enfermedad perianal (especialmente fisuras y fistulas), que a veces es la dolencia mas prominente o incluso inicial. En ninos, con frecuencia predominan las manifestaciones extraintestinales sobre los slntomas GI; pudiendo ser la artritis, fiebre de origen desconocido, anemia, o retraso del crecimiento, un slntoma de presentacion, mientras que puede no presentarse dolor abdominal o diarrea.

Con enfermedad recurrente, los slntomas varlan. El dolor es mas habitual y se produce con tanto con recurrencia simple como con formacion de abscesos. Los pacientes con brotes o abscesos graves probablemente tienen dolor agudo con la palpacion, espasmos musculares y rebotes y un aspecto general toxico. Los segmentos estenoticos pueden producir obstruccion intestinal, con dolor por colicos, distension, estrenimiento y vomitos. Las adhesiones de cirugla previa tambien pueden producir obstruccion intestinal, que comienzan rapidamente, sin el prodromo de fiebre, dolor y malestar tlpico de obstruccion debido a un brote de enfermedad de Crohn. Una fistula enterovesical puede producir burbujas de aire en la orina (neumaturia). Pueden aparecer fistulas de drenaje cutaneas. La perforacion con aire libre en la cavidad peritoneal es inusual.

La enfermedad de Crohn debe sospecharse en un paciente con slntomas inflamatorios u obstructivos o en un paciente sin slntomas GI prominentes pero con fistulas o abscesos perianales o, de otra manera, con artritis indeterminada, eritema nodoso, fiebre, anemia, o (en un nino) raquitismo. Un antecedente familiar de enfermedad de Crohn tambien aumenta el Indice de sospecha. Los pacientes que presenten abdomen agudo (inicialmente o en recalda) deben hacerse radiograflas abdominales en posicion horizontal y vertical y una tomografla axial computarizada (CT scan) abdominal. Estos estudios demuestran obstruccion, abscesos o fistulas y otras posibles causas de un abdomen agudo (por ejemplo, apendicitis). La ecografla puede distinguir mejor la patologla ginecologica en mujeres con dolor pelvico y abdominal inferior.

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Si la presentacion inicial es menos aguda, se prefieren series GI superiores con pellculas instantaneas y de seguimiento del intestino delgado del Ileon terminal sobre la CT convencional. Sin embargo, en algunos centros las tecnicas de enterografla con CT mas novedosas, que combinan la CT de alta resolucion con grandes volumenes de contraste ingerido, se estan convirtiendo en los procedimientos de eleccion. Estos estudios de formacion de imagenes son practicamente diagnosticos si muestran estenosis o fistulas caracterlsticas acompanadas de separacion de asas intestinales. Si los hallazgos son cuestionables, la enteroclisis por tomografla computarizada o la enteroscopia con capsula de video, pueden mostrar ulceras aftosas y lineales superficiales. Puede utilizarse rayos X con enema de bario si aparecen slntomas predominantemente colonicos (por ejemplo diarrea) y pueden mostrar reflujo de bario en el Ileon terminal con un lumen irregular, nodular, rlgido, con espesamiento en la pared y estrechado. Como diagnosticos diferenciales en pacientes con hallazgos de rayos X similares se incluyen, cancer de intestino ciego, carcinoide de Ileon, linfosarcoma, vasculitis sistemica, enteritis por radiacion, TB ileocecal y ameboma.

La enfermedad de Crohn establecida se cura raramente pero se caracteriza por exacerbaciones y remisiones intermitentes. Algunos pacientes padecen enfermedad grave con periodos frecuentes de debilitamiento de dolor. Sin embargo, con una terapia medica prudente y, cuando sea apropiado, terapia quirurgica, la mayorla de los pacientes se recuperan y se adaptan satisfactoriamente. La mortalidad relacionada con la enfermedad es muy baja. El cancer GI, incluyendo cancer de colon y de intestino delgado, es la causa principal del exceso de mortalidad relacionada con la enfermedad de Crohn.

El acido 5-aminosalicllico (5-ASA, mesalamina) se utiliza habitualmente como tratamiento de primera llnea, aunque sus beneficios para la enfermedad del intestino delgado son modestos en el mejor de los casos. Algunos medicos consideran que los antibioticos son un agente de primera llnea, o que pueden reservarse para pacientes que no responden a un tratamiento de 4 semanas con 5-ASA; su uso es estrictamente emplrico. Con cualquiera de estos farmacos, se requiere un tratamiento de 8 a 16 semanas. Los pacientes con enfermedad mas grave pueden necesitar corticosteroides, por via oral o parenteral, dependiendo de la gravedad de los slntomas y de la frecuencia de los vomitos. Los pacientes que no responden a los corticosteroides, o aquellos cuyas dosis no pueden reducirse, deben recibir azatioprina, o posiblemente metotrexato. Algunos prefieren 6-mercaptopurina como un agente de segunda llnea despues de los corticosteroides, e incluso como un agente de primera llnea en preferencia a los corticosteroides, pero esta contraindicado en infeccion activa incontrolada.

El sfndrome de intestino irritable consiste en slntomas recurrentes del tracto GI inferior y superior, incluyendo grados variables de dolor abdominal, estrenimiento o diarrea y distension abdominal. El diagnostico es cllnico. El tratamiento es generalmente sintomatico, que consiste en controlar la dieta y en farmacos, incluyendo anticolinergicos y agentes activos en los receptores de serotonina.

No hay anomallas de motilidad consecuentes. Algunos pacientes tienen un reflejo gastrocolonico anomalo, con actividad colonica retardada, prolongada. Puede haber vaciamiento gastrico reducido o motilidad del yeyuno trastornada. Algunos pacientes no tienen anomallas demostrables, y en los que las hay, estas pueden no correlacionarse con los slntomas. El transito varla en el intestino delgado: algunas veces el intestino delgado proximal parece ser hiperreactivo a los alimentos o a los farmacos parasimpaticomimeticos. Estudios de presion intraluminal del sigmoide muestran que puede producirse estrenimiento funcional con segmentacion haustral hiperreactiva (es decir, frecuencia y amplitud de contracciones aumentadas). Por otro lado, la diarrea se asocia con funcion motora disminuida. Por tanto, las fuertes contracciones pueden, a veces, acelerar o retrasar el transito.

Existe hipersensibilidad a cantidades normales de distension intraluminal e intensificacion de la perception del dolor en presencia de cantidades normales de gas intestinal. El dolor parece estar causado por fuertes contracciones anomalas del musculo liso intestinal y por un aumento de sensibilidad del intestino a la distension. Tambien puede existir hipersensibilidad a las hormonas gastrina y colecistoquinina. Sin embargo, las fluctuaciones hormonales no se correlacionan con los slntomas. Las comidas de alta densidad calorica pueden aumentar la magnitud y la frecuencia de actividad mioelectrica y la motilidad gastrica. La ingestion de grasas puede producir un pico de actividad motora retrasado, que puede exagerarse en el SII. Los primeros dlas de la menstruation pueden conducir a prostaglandina E2 transitoriamente elevada, dando como resultado un aumento del dolor y diarrea, probablemente por la liberation de prostaglandinas.

Se han descrito dos tipos cllnicos principales de SII. En el SII con predominio de estrenimiento, la mayorla de los pacientes tiene dolor en al menos un area del colon y periodos de estrenimiento que alternan con una frecuencia de heces mas normal. A menudo las heces contienen mucosidad clara o blanca. El dolor es bien por colico, que aparece en brotes, o es un dolor seco continuo; que puede aliviarse con un movimiento intestinal. Comer desencadena normalmente los slntomas. Tambien puede producirse distension, flatulencia, nauseas, dispepsia y pirosis.

El SII con predominio de diarrea se caracteriza por una diarrea precipitada que se produce inmediatamente al levantarse o durante o inmediatamente despues de comer, especialmente una comida rapida. La diarrea nocturna es inusual. El dolor, la distension y urgencia rectal son habituales y puede producirse incontinencia. La diarrea indolora no es tlpica.

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El diagnostico se basa en patrones intestinales caracterlsticos, tiempo y caracter del dolor, y exclusion de otros procesos de la enfermedad, a traves de un examen flsico y de pruebas diagnosticas habituales. Las pruebas diagnosticas deben ser mas exhaustivas cuando hay “senales de peligro”: edad avanzada, perdida de peso, sangrado rectal, vomitos. Debe realizarse proctosigmoidoscopia con un instrumento de fibra optica flexible. La introduccion del sigmoidoscopio y la insuflacion de aire suelen desencadenar espasmos intestinales y dolor. Los patrones mucosales y vasculares en el SII a menudo parecen normales. La colonoscopia es la tecnica preferida para los pacientes mayores de 40 anos con un cambio en los habitos intestinales, en particular aquellos sin slntomas previos de SII, para excluir polipos y tumores colonicos.

En los pacientes con diarrea cronica, particularmente en mujeres de edad avanzada, la biopsia de la mucosa puede descartar posible colitis microscopica.

Metodos de la invencion

La capacidad de un individuo para metabolizar un sustrato de CYP3A a traves de una via intestinal, se analiza administrando una dosis oral de un sustrato de CYP3A a un individuo que padece un trastorno enteropatico, y cuantificando la presencia del sustrato de CYP3A y/o de su metabolito (o metabolitos) en al menos una muestra del paciente.

En algunas realizaciones, el metodo comprende identificar a un paciente que tiene un trastorno enteropatico, por ejemplo, mediante criterios descritos anteriormente para patologlas especlficas; administrando una dosis oral de un sustrato de CYP3A a un individuo identificado que tiene un trastorno enteropatico, y cuantificando la presencia del sustrato de CYP3A y/o de su metabolito (o metabolitos) en al menos una muestra del paciente.

Las muestras de los pacientes incluyen diversos fluidos corporales en los que el sustrato y/o metabolitos de CYP3A estaban presentes, por ejemplo, sangre y sus derivados, orina, saliva, aliento, etc. Las muestras se tomaran antes de la administracion del sustrato, a instantes adecuados despues de la administracion, por ejemplo, a los 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 1,5 horas, 2 horas, 2,5 horas, 3 horas, 4 horas, 6 horas, etc., despues de la administracion.

En algunas realizaciones preferidas, los metodos de la invencion se usan para determinar la eficacia de una terapia para el tratamiento de una enfermedad enteropatica, bien a nivel individual, o en el analisis de un grupo de pacientes, por ejemplo, en un formato de ensayo cllnico. Dichas realizaciones normalmente implican la comparacion de dos instantes de un paciente o grupo de pacientes. Se espera que el estado del paciente difiera entre los dos instantes como resultado de la administracion de un agente terapeutico, de un regimen terapeutico, o de una exposicion a la enfermedad de un paciente que se somete a tratamiento.

Como ejemplos de formatos para dichas realizaciones pueden incluirse, sin limitacion, la prueba de metabolismo enterico de CYP3A a dos o mas instantes, en el que en primer instante es un paciente diagnosticado pero no tratado; y un segundo o mas instantes adicionales, es un paciente tratado con un agente o regimen terapeutico candidato. Un instante adicional puede incluir un paciente tratado con un agente o regimen terapeutico candidato, y exponerle a la enfermedad, particularmente a esprue celiaco y/o a dermatitis herpetiforme, que puede exponerse con la administracion de gluten.

En otro formato, un primer instante es un paciente diagnosticado en remision de enfermedad, por ejemplo, segun lo determinado mediante criterios cllnicos actuales, como resultado de un agente o regimen terapeutico candidato. Un segundo o mas instantes adicionales, es un paciente tratado con un agente o regimen terapeutico candidato, y exponerle a un agente inductor de enfermedad, particularmente a esprue celiaco y/o a dermatitis herpetiforme, que puede exponerse con la administracion de gluten.

En dichos formatos de ensayo cllnico, cada conjunto de instantes puede corresponder a un solo paciente, a un grupo de pacientes, por ejemplo, a un grupo de cohorte, o a una mezcla de datos individuales o grupales. Tambien pueden incluirse datos de control adicionales, en dichos formatos de ensayo cllnico, por ejemplo, un grupo tratado con placebo, un grupo sin enfermedad, y similar, como se sabe en la tecnica. Los formatos de interes incluyen estudios cruzados, aleatorizados, doble ciego, controlados con placebo, ensayos cllnicos de grupos paralelos, que tambien pueden ensayar la eficacia de farmacos y similares. Vease, por ejemplo Clinical Trials: A Methodologic Perspective Second Edition, S. Piantadosi, Wiley-Interscience; 2005, ISBN-13: 978-0471727811; and Design and Analysis of Clinical Trials: Concepts and Methodologies, S. Chow y J. Liu, Wiley-Interscience; 2003; ISBN-13: 9780471249856.

Los ensayos cllnicos especlficos de interes incluyen analisis de agentes terapeuticos para el tratamiento de esprue celiaco y/o dermatitis herpetiforme, en el que un paciente se identifica como que tiene esprue celiaco mediante indicios cllnicos convencionales. Por ejemplo, en esprue celiaco una dosis diaria de 5-10 g de gluten (equivalente a 2-3 rebanadas de pan) durante dos semanas puede inducir mala absorcion, medido con una recogida de grasa fecal cuantitativa de 72 horas o un ensayo urinario de D-xilosa (Pyle, 2005), que proporciona un medio para poner a prueba la eficacia del tratamiento.

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En una realizacion, se utiliza un formato de ensayo cllnico cruzado, ciego. Un paciente alterna durante un periodo de tiempo establecido, por ejemplo, una semana, dos semanas, tres semanas o de alrededor de aproximadamente 7 a 14 dlas, o de alrededor de aproximadamente 10 dlas, entre un farmaco de ensayo y placebo, con un periodo de eliminacion de 4-8 semanas. El paciente se expone a gluten durante periodos de tiempo alternos con alrededor de aproximadamente 1 g de gluten, aproximadamente 5 g de gluten, aproximadamente 10 g de gluten, o mas, normalmente no mas de aproximadamente 25 g de gluten al dla. Los sujetos se ensayan con un sustrato de CYP3A, como se ha descrito anteriormente, al inicio y al final de cada uno de los periodos de tiempo alternos. Se tiene cuidado para garantizar que los sujetos no consuman otros farmacos u articulos alimentarios (por ejemplo zumo de pomelo) que se sabe que son inhibidores de CYP3A4 durante un tiempo apropiado antes de los ensayos del sustrato de CYP3A. La duracion de la exposicion a gluten puede ser de aproximadamente 1, aproximadamente 3, aproximadamente 5, aproximadamente 7, aproximadamente 10 dias, aproximadamente 14 dias, dado que los cambios en los enterocitos en las terminaciones vellosas son normalmente una de las consecuencias precoces de la exposicion al gluten. Disminuyendo la duracion de la exposicion al gluten o la magnitud de la dosis de gluten diaria, pueden minimizarse los sintomas adversos.

En otra realizacion, se utiliza un ensayo clinico de grupos paralelos, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo, para ensayar la eficacia del farmaco. En una realizacion, los individuos identificados como que tienen esprue celiaco, que estan con una dieta sin gluten, se a tres periodos de tratamiento secuenciales, cada uno de ellos de 1-14 dias de duracion. Los sujetos se evaluaran con el sustrato de CYP3A al inicio y al final de cada periodo de tratamiento. Durante todo el estudio, los sujetos consumiran comidas sin gluten regulares mas farmaco o placebo segun se indique. Durante el primer periodo de tratamiento (de tanteo), todos los sujetos recibiran placebo. Durante el segundo periodo de tratamiento, los sujetos se asignaran al azar en grupos de tratamiento con farmaco o con placebo. Durante el tercer periodo de tratamiento los sujetos permaneceran con el mismo tratamiento (farmaco o placebo) que en el segundo periodo. Ademas, todos los sujetos recibiran 1-5 g de gluten con cada comida. Los farmacos que son eficaces mostraran una frecuencia estadisticamente mas baja de recaida en el grupo de tratamiento frente al grupo del estudio que recibe placebo.

En todos estos metodos, el sustrato de CYP3A se administra a una dosis que es suficiente para monitorizar el metabolismo a lo largo del tiempo, que variara con el sustrato especifico que se seleccione. Cuando el sustrato es midazolam, la dosis puede ser al menos de aproximadamente 0,5 mg, al menos aproximadamente 1 mg, al menos aproximadamente 2 mg al menos aproximadamente 4 mg, al menos aproximadamente 5 mg, al menos aproximadamente 7,5 mg y no mas de aproximadamente 10 mg.

El sustrato puede administrarse en cualquier formulacion convencional, por ejemplo, solucion, suspension, comprimidos, polvos, granulos o capsulas, por ejemplo, con aditivos convencionales, tales como lactosa, manitol, almidon de maiz o almidon de patata; con aglutinantes, tales como celulosa cristalina, derivados de celulosa, goma arabiga, almidon de maiz o gelatinas; con disgregantes, tales como almidon de maiz, almidon de patata o carboximetilcelulosa de sodio; con lubricantes, tales como talco o estearato de magnesio; y si se desea, con diluyentes, agentes tampon, agentes humectantes, conservantes y agentes aromatizantes.

En una realizacion de la invencion, las formulaciones orales comprenden recubrimientos entericos, de tal manera que el agente activo se libera al tracto intestinal. Dichas formulaciones se crean recubriendo una forma de dosificacion solida con una pelicula de un polimero que es insoluble en entornos acidos, y soluble en entornos basicos. Son ejemplos de peliculas el acetato ftalato de celulosa, el acetato ftalato de polivinilo, el ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa y el acetato de hidroxipropilmetilcelulosa succinato, los copolimeros de metacrilato y el ftalato de acetato de celulosa. Otras formulaciones entericas comprenden microesferas polimericas disenadas tecnicamente fabricadas con polimeros biologicamente erosionables, que presentan fuertes interacciones adhesivas con recubrimientos mucosos y celulares gastrointestinales y que pueden atravesar tanto el epitelio absortivo mucoso como el epitelio asociado a foliculos que cubre el tejido linfoide de las placas de Peyer. Los polimeros mantienen contacto con el epitelio intestinal durante periodos de tiempo prolongados y de hecho lo atraviesan, a traves y entre las celulas. Vease, por ejemplo Mathiowitz et al. (1997) Nature 386 (6623): 410-414. Los sistemas de liberacion de farmacos tambien pueden utilizar un nucleo de hidrogel superporoso (SPH) y compuestos de SPH (SPHC), como describe Dorkoosh et al. (2001) J Control Release 71(3): 307-18.

Bases de datos de analisis farmacocineticos

Tambien se proporcionan bases de datos de analisis farmacocineticos. Dichas bases de datos comprenderan normalmente perfiles de analisis de diversos individuos siguiendo un protocolo clinico de interes, etc., en el que dichos perfiles se describen con detalle mas adelante.

Los perfiles y sus bases de datos pueden proporcionarse en diversos medios para facilitar su uso. Los “medios” se refieren a una fabricacion que contiene la informacion del perfil de expresion de la presente invencion. Las bases de datos de la presente invencion pueden registrarse en medios legibles por ordenador, por ejemplo, cualquier medio que pueda leer y acceder directamente un ordenador. Dichos medios incluyen, pero sin limitacion: medios de almacenamiento magnetico, tales como discos flexibles, medios de almacenamiento de disco duro, y cintas magneticas; medios de almacenamiento optico, tales como CD-ROM; medios de almacenamiento electrico tales

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como RAM y ROM; e hlbridos de estas categories tales como medios de almacenamiento magnetico/optico. Un experto en la tecnica puede apreciar facilmente como puede utilizarse cualquiera de los medios legibles por ordenador conocidos actualmente para crear una fabricacion que comprenda un registro de la presente informacion de bases de datos. “Registrado” se refiere a un proceso para almacenar informacion en un medio legible por ordenador, utilizando cualquiera de dichos metodos como los conocidos en la tecnica. Cualquier estructura de almacenamiento de datos conveniente puede seleccionarse, basandose en los medios que se utilicen para acceder a la informacion almacenada. Para el almacenamiento puede utilizarse diversos programas y formatos procesadores de datos, por ejemplo, archivos de texto de procesamiento Word, formatos de bases de datos, etc.

De la manera en la que se usa en el presente documento, “un sistema basado en ordenador” se refiere a medios hardware, medios software y medios de almacenamiento de datos utilizados para analizar la informacion de la presente invencion. El hardware mlnimo de los sistemas basados en ordenador de la presente invencion comprende una unidad de procesamiento central (CPU), medios de entrada, medios de salida, y medios de almacenamiento de datos. Un experto en la tecnica puede apreciar facilmente que cualquiera de los sistemas basados en ordenador disponibles actualmente es adecuado para su uso en la presente invencion. Los medios de almacenamiento de datos pueden comprender cualquier fabricacion que comprenda un registro de la presente informacion como se describe anteriormente, o medios de acceso a memoria al que pueda acceder dicha fabricacion.

Para los medios de entrada y salida pueden utilizarse diversos formatos estructurales que pueden utilizarse para introducir y obtener la informacion en los sistemas basados en ordenador de la presente invencion. Dicha presentacion proporciona al experto en la tecnica una clasificacion de similitudes e identifica el grado de similitud contenido en el perfil de expresion del ensayo.

Reactivos y kits

Tambien se proporcionan reactivos y kits de los mismos para la realizacion practica de uno o mas de los metodos descritos anteriormente. Los reactivos en cuestion y kits de los mismos pueden variar enormemente. Los reactivos de interes incluyen reactivos especialmente disenados para su uso en la produccion de los analisis descritos anteriormente. Los kits pueden incluir un sustrato de CYP3A, reactivos para el analisis del sustrato y/o metabolitos, y envases se requieren para la recogida de muestras.

Los kits pueden incluir adicionalmente un paquete de software para el analisis estadlstico de uno o mas fenotipos. Ademas de los componentes anteriores, los kits en cuestion incluiran adicionalmente instrucciones para llevar a la practica los metodos en cuestion. Estas instrucciones pueden estar presentes en los kits en cuestion de diversas formas, una o mas de las cuales pueden estar presentes en el kit. Una forma en la que estas instrucciones pueden estar presentes es una informacion impresa en un medio o sustrato adecuado, por ejemplo, una o mas hojas de papel en las que se imprime la informacion, en el envase del kit, en un prospecto, etc. Otro medio mas serla un medio legible por ordenador, por ejemplo un disquete, un CD, etc., en el que se ha registrado la informacion. Incluso aun otro medio que puede haber es una direccion de pagina web que puede utilizarse mediante Internet para acceder a la informacion en un lugar distante. Cualquiera de los medios convenientes puede estar presente en los kits.

Se ofrecen los siguientes ejemplos para proporcionar al experto habitual en la tecnica una divulgacion y description completas de como realizar y utilizar la presente invencion, y no pretenden limitar el alcance de la invencion o representar que los siguientes experimentos sean todos o los unicos experimentos realizados. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precision con respecto a los numeros utilizados (por ejemplo cantidades, temperatura y similares), pero puede haber algunos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique otra cosa, las partes son partes en peso, el peso molecular es peso molecular promedio en peso, la temperatura es en grados centlgrados y la presion es la atmosferica o proxima a ella.

Ejemplo 1

Materiales y metodos

Sujetos. Despues de la aprobacion de la junta de revision institucional, se seleccionaron ocho voluntarios adultos sanos y ocho pacientes adultos con esprue celiaco con diagnostico de mala absorcion intestinal en curso. Despues del ensayo inicial basal, los pacientes cellacos se trataron con glutenasa durante un tiempo suficiente para aliviar los slntomas de la mala absorcion, y despues volvieron a ensayarse como se hizo para el analisis inicial basal.

Diseno del estudio. Despues de que los sujetos ayunasen durante la noche, se coloco un cateter intravenoso en el antebrazo de cada sujeto para extraer sangre. Antes de recibir la dosis de midazolam, cada sujeto vacio su vejiga y se obtuvo una muestra de sangre basal. Cada sujeto recibio 4,0 mg de midazolam por via oral como una solution. Se obtuvieron muestras de sangre a los 5, 15, 30 y 45 minutos y 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12 y 24 horas despues de la administration del farmaco. Se obtuvo suero y se congelo a -20 °C hasta el analisis. Se recogio orina durante los intervalos de 0 a 2, 2 a 4, 4 a 6, 6 a 12 y 12 a 24 horas despues de la dosis y se congelo a -20 °C hasta el analisis. El tiempo de sueno inducido por midazolam se determina como el intervalo entre el momento en que el

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sujeto ya no puede ser excitado por estlmuios auditivos leves y el momento en que el sujeto permanece despierto y consciente en respuesta a estlmuios auditivos leves. Un estlmuio auditivo ieve se define como habiar en una voz conversacionai normal.

Analisis de las muestras. Las muestras de suero se procesaron utiiizando una tecnica de extraccion ilquido-ilquido y se cuantificaron despues de la derivatizacion con espectrometrla de masas y cromatografla de gases (detector seiectivo de masa Hewlett-Packard 597 1 y cromatografo de gases 5890A) como describen Thummei et al. (1994) J. Pharmacol. Exp. Ther. 271:549-546. Los iones monitorizados inciuyen 310 y 398, que se utiiizan para cuantificar ios niveies de midazolam, y de 1'-hidroximidazolam. Como patrones internos para el precursor y metaboiito se utiiiza diazepam y temazepam respectivamente y ios iones monitorizados son 256 y 357 respectivamente, despues de la derivatizacion con N-metii-N-t-butiidimetiisiiii trifiuoroacetamida que contiene t-butiidimetiiciorosiiano ai 1 % (Regis Technologies, Morton Grove, III.)

El ensayo se utiiiza para medir habituaimente concentraciones de midazolam y metaboiitos de 1 ng/mi. Las muestras de orina se procesaron como se describe despues de la desconjugacion con P-giucuronidasa (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.). La concentracion de midazolam en la solucion infundida se caicuia mediante HPLC (vease Gorski et al. (1994) Biochem Pharmacol 47: 1643-1657). Las muestras de suero se procesaron a traves de un metodo de extraccion ilquido-ilquido.

Analisis farmacocinetico. Para determinar ios parametros farmacocineticos de interes se utiiizaron metodos independientes de modeios convencionaies. La constante de la veiocidad de elimination terminal (p) se determina por regresion lineal. La semivida de eliminacion (t1^) se determina como t1^ = 0,693/p. La concentracion maxima y el tiempo para aicanzar la concentracion maxima se determinan por inspection visual de ios datos. El area bajo la curva de concentracion-tiempo (ABC de cero a concentracion en suero de midazolam detectable final) despues de administration oral se determina por una combination de metodos trapezoidaies iineaies y iogarltmicos con extrapolation ai infinito.

La eficacia del tratamiento para ios pacientes con esprue ceiiaco se evaluo determinando la disminucion de midazolam en el metaboiismo enterico de CYP3A. Una giutenasa eficaz protegera ai paciente de enteropatla inducida por gluten; por consiguiente, la t1^ y el ABC para midazolam permaneceran sin cambios antes y despues de la exposition ai gluten. En cambio, el placebo dara como resuitado una enteropatla inducida por gluten; por consiguiente la t1^ y el ABC para midazolam aumentaran despues de la exposicion ai gluten en comparacion con ios vaiores correspondientes antes de la exposicion ai gluten.

Ejemplo 2

La administracion de midazolam y ios analisis de las muestras se reaiizaron como se ha descrito anteriormente.

Los pacientes se identificaron como que tenlan esprue ceiiaco mediante indicios cilnicos convencionaies.

La eficacia cilnica de una propii endopeptidasa de Aspergillus niger (Stepniak, et al. Am. J. Physiol. GI Liver Physiol. 291, 621-629, 2006) se evaluo de la siguiente manera. Pacientes ceilacos aduitos cilnicamente diagnosticados que estaban con una dieta sin gluten participaron en el estudio y se dividieron en dos grupos. Cada sujeto en el ensayo cilnico se sometio a tres perlodos de tratamiento secuenciaies de una duration de 1 a 14 dlas. El metaboiismo de CYP3A de cada sujeto se evaluo ai principio y ai final de cada perlodo de tratamiento.

Durante todo el estudio, ios sujetos consumieron comidas reguiares sin gluten mas una dosis de giutenasa o placebo con el desayuno, aimuerzo y cena. El intervaio de dosis de la giutenasa a ensayar con respecto a la eficacia cilnica es de 0,2-10 mg/kg. Durante el primer perlodo (de tanteo), todos ios sujetos recibieron giutenasa placebo. Se espera que la saiud intestinal de un subconjunto de sujetos mejore debido a una mayor supervision de la dieta por su parte. Durante el segundo perlodo, ios sujetos se aieatorizaron en grupos de giutenasa activa o placebo. Este perlodo se diseno para estabiecer si la saiud intestinal de ios sujetos que tomaban giutenasa activa mejoraba como resuitado de su capacidad para destoxificar niveies de fondo de gluten en una dieta de paciente ceiiaco. Durante el tercer perlodo, ios sujetos permanecieron con el mismo tratamiento (farmaco o placebo) que el del segundo perlodo. Ademas, todos ios sujetos recibieron 0,5-3 g de gluten con cada comida en forma de un artlcuio de ensayo apropiado (por ejemplo, una gaiieta o una rebanada de pan). La eficacia del tratamiento con giutenasa se evaluo principaimente basandose en ios resuitados de este perlodo de tratamiento.

Un resuitado estadlsticamente significativo se basaba en las mediciones de la veiocidad de eliminacion y del ABC de midazolam. Un aumento en el ABC y una disminucion en la veiocidad de eliminacion impiican que la afeccion ceiiaca ha empeorado como resuitado de la exposicion a peptidos toxicos de gluten. Esto se observa ai final del tercer perlodo de tratamiento en sujetos a ios que se dosifico giutenasa placebo. Un ABC y una veiocidad de eliminacion estadlsticamente sin cambios son indicativos de destoxificacion de gluten por la giutenasa oral. Esto se observa ai final del tercer perlodo de tratamiento en sujetos a ios que se dosifico giutenasa activa. En ios sujetos que inician el estudio cilnico con evidencia de enfermedad activa, puede observarse una disminucion en el ABC y un aumento en

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la velocidad de eliminacion al final del segundo perlodo con respecto al final del primer perlodo. Para un significado estadlstico, se espera un cambio multiplicado por dos o mayor en el ABC o en la eliminacion entre las dos cohortes.

Ejemplo 3

Un metodo alternativo para evaluar la eficacia de la propil endopeptidasa de Aspergillus niger implica un ensayo cllnico cruzado, controlado con placebo, doble ciego. La principal ventaja de este formato de ensayo cllnico es que cada paciente sirve como su propio control. En el estudio participaron pacientes celiacos adultos, cllnicamente diagnosticados, cuya enfermedad estaba en remision (segun una biopsia de intestino delgado normal, seronegatividad, y una medicion de grasa fecal de 72 horas dentro del intervalo normal).

Cada sujeto en el ensayo cllnico se sometio a dos perlodos de tratamiento de 1-14 dlas de duracion separados por un descanso de 4-8 semanas. El metabolismo de CYP3A de cada sujeto se evaluo al inicio y al final de cada perlodo de tratamiento. Durante cada uno de los dos perlodos de tratamiento, los sujetos recibieron 0,5-3 g de gluten con cada comida en forma de un artlculo de ensayo apropiado. Cada sujeto recibio glutenasa activa y glutenasa placebo alternativamente en los dos perlodos de tratamiento; el orden de la dosificacion se asigno al azar. El intervalo de la dosis de la glutenasa a ensayar con respecto a la eficacia cllnica es de 0,2-10 mg/kg.

Un resultado estadlsticamente significativo se basa en mediciones del ABC de midazolam y de la velocidad de eliminacion. Un aumento en el ABC y una disminucion en la velocidad de eliminacion implica que la afeccion celiaca ha empeorado como resultado de la exposicion a peptidos toxicos de gluten. Esto se observa al final del perlodo de tratamiento con glutenasa placebo. Un ABC y una velocidad de eliminacion estadlsticamente sin cambios son indicativos de destoxificacion de gluten por la glutenasa oral. Esto se observa al final del perlodo de tratamiento con glutenasa activa.

Ejemplo 4

Una terapia alternativa con glutenasa es una glutenasa con dos enzimas que comprende proteasa EP-B2 de cebada y peptidasa SC PEP de Sphingomonas capsulata (Gass, et al., Gastroenterology 133, 472-480, 2007). La eficacia cllnica de esta enzima se evaluo mediante un ensayo cllnico, como en el Ejemplo 2 o Ejemplo 3 anteriores. En una realizacion, las dosis de glutenasa en el intervalo de 0,2-10 mg/kg, con las dos protelnas presentes en una proporcion de 1:1 masa, se evaluaron con respecto a su eficacia por los metodos de la invencion.

Ejemplo 5

Un candidato farmacologico alternativo para el esprue celiaco es el inhibidor de la permeabilidad intestinal, AT1001 (Paterson, et al., Aliment. Pharm., 26, 757-766, 2007). La eficacia cllnica de este farmaco se evaluo mediante un ensayo cllnico, como en el Ejemplo 2 o Ejemplo 3 anteriores. En una realizacion, las dosis en el intervalo de 5 a 50 mg/kg (tvd, con las comidas) se evaluaron con respecto a su eficacia por los metodos de la invencion.

Ejemplo 6

Materiales y metodos

Sujetos. Despues de la aprobacion de la junta de revision institucional, se seleccionaron ocho voluntarios adultos sanos y ocho pacientes adultos con esprue celiaco con diagnostico de mala absorcion intestinal en curso. Despues del ensayo inicial basal, los pacientes celiacos se trataron con glutenasa durante un tiempo suficiente para aliviar los sintomas de la mala absorcion, y despues volvieron a ensayarse como se hizo para el analisis inicial basal.

Diseno del estudio. Despues de que los sujetos ayunasen durante la noche, se coloco un cateter intravenoso en el antebrazo de cada sujeto para extraer sangre. Antes de recibir la dosis de midazolam, cada sujeto vacio su vejiga y se obtuvo una muestra de sangre basal. Cada sujeto recibio de 20 a 100 mg de simvastatina por via oral como una solucion. Se obtuvieron muestras de sangre a los 5, 15, 30 y 45 minutos y 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12 y 24 horas despues de la administracion del farmaco. Se obtuvo suero y se congelo a -20 °C hasta el analisis. Se recogio orina durante los intervalos de 0 a 2, 2 a 4, 4 a 6, 6 a 12 y 12 a 24 horas despues de la dosis y se congelo a -20 °C hasta el analisis.

Analisis de las muestras. Las muestras de suero se procesaron utilizando una tecnica de extraccion liquido-liquido y se cuantificaron despues de la derivatizacion con espectrometria de masas y cromatografia de gases (detector selectivo de masa Hewlett-Packard 597 1 y cromatografo de gases 5890A) como describen Thummel et al. (1994) J. Pharmacol. Exp. Ther. 271:549-546. Se monitorizo la simvastatina, la 3'-hidroxi simvastatina, la 6'-exometilen simvastatina, la 3',5'-dihidrodiol simvastatina y/o el (p)-hidroxiacido de simvastatina.

El ensayo se utilizo para medir habitualmente concentraciones de simvastatina y metabolitos de 1 ng/ml. Las muestras de orina se procesaron como se describe despues de la desconjugacion con P-glucuronidasa (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.). La concentracion de simvastatina en la solucion infundida se calcula mediante HPLC

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(vease Gorski et al. (1994) Biochem Pharmacol 47: 1643-1657). Las muestras de suero se procesaron a traves de un metodo de extraccion llquido-llquido.

Analisis farmacocinetico. Para determinar los parametros farmacocineticos de interes se utilizaron metodos independientes de modelos convencionales. La constante de la velocidad de elimination terminal (p) se determina por regresion lineal. La semivida de eliminacion (t1^) se determina como t1^ = 0,693/p. La concentration maxima y el tiempo para alcanzar la concentracion maxima se determinan por inspection visual de los datos. El area bajo la curva de concentracion-tiempo (ABC de cero a concentracion en suero de simvastatina detectable final) despues de administration oral se determina por una combination de metodos trapezoidales lineales y logarltmicos con extrapolation al infinito.

La eficacia del tratamiento para los pacientes con esprue celiaco se evaluo determinando la disminucion de simvastatina en el metabolismo enterico de CYP3A. Una glutenasa eficaz protegera al paciente de enteropatla inducida por gluten; por consiguiente, la t1^ y el ABC para simvastatina permaneceran sin cambios antes y despues de la exposition al gluten. En cambio, el placebo dara como resultado una enteropatla inducida por gluten; por consiguiente la t1^ y el ABC para simvastatina aumentaran despues de la exposicion al gluten en comparacion con los valores correspondientes antes de la exposicion al gluten.

Ejemplo 7

La administracion de simvastatina y los analisis de las muestras se realizaron como se ha descrito anteriormente.

Los pacientes se identificaron como que tenlan esprue celiaco mediante indicios cllnicos convencionales.

La eficacia cllnica de una propil endopeptidasa de Aspergillus niger (Stepniak, et al. Am. J. Physiol. GI Liver Physiol. 291, 621-629, 2006) se evaluo de la siguiente manera. Pacientes cellacos adultos cllnicamente diagnosticados que estaban con una dieta sin gluten participaron en el estudio y se dividieron en dos grupos. Cada sujeto en el ensayo cllnico se sometio a tres perlodos de tratamiento secuenciales de una duration de 1 a 14 dlas. El metabolismo de CYP3A de cada sujeto se evaluo al principio y al final de cada perlodo de tratamiento.

Durante todo el estudio, los sujetos consumieron comidas regulares sin gluten mas una dosis de glutenasa o placebo con el desayuno, almuerzo y cena. El intervalo de dosis de la glutenasa a ensayar con respecto a la eficacia cllnica es de 0,2-10 mg/kg. Durante el primer perlodo (de tanteo), todos los sujetos recibieron glutenasa placebo. Se espera que la salud intestinal de un subconjunto de sujetos mejore debido a una mayor supervision de la dieta por su parte. Durante el segundo perlodo, los sujetos se aleatorizaron en grupos de glutenasa activa o placebo. Este perlodo se diseno para establecer si la salud intestinal de los sujetos que tomaban glutenasa activa mejoraba como resultado de su capacidad para destoxificar niveles de fondo de gluten en una dieta de paciente celiaco. Durante el tercer perlodo, los sujetos permanecieron con el mismo tratamiento (farmaco o placebo) que el del segundo perlodo. Ademas, todos los sujetos recibieron 0,5-3 g de gluten con cada comida en forma de un artlculo de ensayo apropiado (por ejemplo, una galleta o una rebanada de pan). La eficacia del tratamiento con glutenasa se evaluo principalmente basandose en los resultados de este perlodo de tratamiento.

Un resultado estadlsticamente significativo se basaba en las mediciones de la velocidad de eliminacion y del ABC de simvastatina. Un aumento en el ABC y una disminucion en la velocidad de eliminacion implican que la afeccion celiaca ha empeorado como resultado de la exposicion a peptidos toxicos de gluten. Esto se observa al final del tercer perlodo de tratamiento en sujetos a los que se dosifico glutenasa placebo. Un ABC y una velocidad de eliminacion estadlsticamente sin cambios son indicativos de destoxificacion de gluten por la glutenasa oral. Esto se observa al final del tercer perlodo de tratamiento en sujetos a los que se dosifico glutenasa activa. En los sujetos que inician el estudio cllnico con evidencia de enfermedad activa, puede observarse una disminucion en el ABC y un aumento en la velocidad de eliminacion al final del segundo perlodo con respecto al final del primer perlodo. Para un significado estadlstico, se espera un cambio multiplicado por dos o mayor en el ABC o en la eliminacion entre las dos cohortes.

Ejemplo 8

Un metodo alternativo para evaluar la eficacia de la propil endopeptidasa de Aspergillus niger implica un ensayo cllnico cruzado, controlado con placebo, doble ciego. La principal ventaja de este formato de ensayo cllnico es que cada paciente sirve como su propio control. En el estudio participaron pacientes celiacos adultos, cllnicamente diagnosticados, cuya enfermedad estaba en remision (segun una biopsia de intestino delgado normal, seronegatividad, y una medicion de grasa fecal de 72 horas dentro del intervalo normal).

Cada sujeto en el ensayo cllnico se sometio a dos perlodos de tratamiento de 1-14 dlas de duracion separados por un descanso de 4-8 semanas. El metabolismo de CYP3A de cada sujeto se evaluo al inicio y al final de cada perlodo de tratamiento. Durante cada uno de los dos perlodos de tratamiento, los sujetos recibieron 0,5-3 g de gluten con cada comida en forma de un artlculo de ensayo apropiado. Cada sujeto recibio glutenasa activa y glutenasa placebo

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alternativamente en los dos perlodos de tratamiento; el orden de la dosificacion se asigno al azar. El intervalo de la dosis de la glutenasa a ensayar con respecto a la eficacia cllnica es de 0,2-10 mg/kg.

Un resultado estadlsticamente significativo se basa en mediciones del ABC, de la Cmax y de la velocidad de eliminacion de simvastatina. Un aumento en el ABC y una disminucion en la velocidad de eliminacion implica que la afeccion celiaca ha empeorado como resultado de la exposicion a peptidos toxicos de gluten. Esto se observa al final del perlodo de tratamiento con glutenasa placebo. Un ABC y una velocidad de eliminacion estadlsticamente sin cambios son indicativos de destoxificacion de gluten por la glutenasa oral. Esto se observa al final del perlodo de tratamiento con glutenasa activa.

Ejemplo 9

Una terapia alternativa con glutenasa es una glutenasa con dos enzimas que comprende proteasa EP-B2 de cebada y peptidasa SC PEP de Sphingomonas capsulata (Gass, et al., Gastroenterology 133, 472-480, 2007). La eficacia cllnica de esta enzima se evaluo mediante un ensayo cllnico, como en el Ejemplo 7 o Ejemplo 8 anteriores. En una realizacion, las dosis de glutenasa en el intervalo de 0,2-10 mg/kg, con las dos protelnas presentes en una proporcion de 1:1 masa, se evaluaron con respecto a su eficacia por los metodos de la invencion.

Ejemplo 10

Un candidato farmacologico alternativo para el esprue celiaco es el inhibidor de la permeabilidad intestinal, AT1001 (Paterson, et al., Aliment. Pharm., 26, 757-766, 2007). La eficacia cllnica de este farmaco se evaluo mediante un ensayo cllnico, como en el Ejemplo 7 o Ejemplo 8 anteriores. En una realizacion, las dosis en el intervalo de 5 a 50 mg/kg (tvd, con las comidas) se evaluaron con respecto a su eficacia por los metodos de la invencion.

Este y otros metodos diagnosticos de la invencion pueden ponerse en la practica utilizando los metodos proporcionados por la invencion.

La presente invencion se ha descrito en terminos de realizaciones particulares encontradas o propuestas por el inventor que comprenden modos preferidos para la realizacion practica de la invencion. Se apreciara por los expertos en la tecnica que, a la luz de la presente divulgacion, pueden realizarse numerosas modificaciones y cambios en las realizaciones particulares ilustradas sin alejarse del alcance de la invencion que se pretende. Ademas, debido a cuestiones de equivalencia funcional biologica, pueden realizarse cambios en los metodos, estructuras y compuestos sin afectar a la accion biologica en tipo o cantidad. Todas estas modificaciones pretenden incluirse, pero unicamente en cuanto a que queden cubiertas por las reivindicaciones.

Claims (13)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   REIVINDICACIONES

   1. Un metodo para evaluar la eficacia de un agente terapeutico o de un regimen terapeutico en el tratamiento de un paciente individual con un trastorno enteropatico, comprendiendo el metodo:

   cuantificar la presencia de un sustrato de CYP3A y/o de su metabolito (o metabolitos) en al menos una muestra que se ha obtenido del paciente,

   en donde dicho paciente es un individuo identificado como afectado por un trastorno enteropatico, y a dicho paciente se le ha administrado una dosis oral del sustrato de CYP3A.
2. 2. El metodo de la reivindicacion 1, en el que el grado de metabolismo del sustrato de CYP3A con respecto a su metabolito es indicativo de la salud de los enterocitos.
3. 3. El metodo de las reivindicaciones 1 o 2, en el que el trastorno enteropatico se selecciona de esprue celiaco, dermatitis herpetiforme, enfermedad de Crohn y slndrome del intestino irritable.
4. 4. El metodo de la reivindicacion 3, en el que el individuo es un ser humano.
5. 5. El metodo de la reivindicacion 1, en el que el sustrato de CYP3A es midazolam.
6. 6. El metodo de la reivindicacion 5, en el que la presencia de midazolam, de 1'-hidroximidazolam y/o de 4- hidroximidozalam se cuantifica en una muestra del paciente.
7. 7. El metodo de la reivindicacion 1, en el que el sustrato de CYP3A es simvastatina.
8. 8. El metodo de la reivindicacion 7, en el que la presencia de simvastatina, de 3'-hidroxi simvastatina, de 6'- exometilen simvastatina, de 3',5'-dihidrodiol simvastatina y/o de (p)-hidroxiacido de simvastatina se cuantifica en una muestra del paciente.
9. 9. El metodo de la reivindicacion 1, en el que la muestra del paciente se selecciona de sangre, saliva, orina y aliento.
10. 10. El metodo de la reivindicacion 1, en el que las etapas de administrar un sustrato de CYP3A y de cuantificar la presencia del sustrato de CYP3A y/o de su metabolito (o metabolitos) en al menos una muestra del paciente se realizan a dos o mas instantes, en donde se espera que el estado de la enfermedad del individuo difiera entre los instantes como resultado de la administracion de un agente terapeutico, de un regimen terapeutico o de una exposicion del individuo a la enfermedad.
11. 11. El metodo de la reivindicacion 10, en el que el individuo es uno de un grupo de individuos de un ensayo cllnico.
12. 12. El metodo de la reivindicacion 11, en el que el ensayo cllnico es un ensayo cruzado.
13. 13. El metodo de la reivindicacion 11, en el que el ensayo cllnico es un ensayo en paralelo doble ciego.