KR19980086717A - 덱스트란의 생성방법 - Google Patents

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쿠르트 에여르
위르크 에비셔
말프라드 도미니끄 드
로베르또 레니에로
쟝-리샤르 네세르
꼬린느 레젱
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빌르 로망 엘
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Abstract

본 발명은 덱스트란을 생성하는 박테리아 균주, 덱스트란의 생성방법, 덱스트란의 생합성에 포함되는 효소를 함유하는 첨가물의 생성방법, 및 식품 또는 화장 조성물의 제조에 있어서 상기 덱스트란, 상기 효소 및/또는 상기 덱스트란을 생성하는 균주의 용도에 관한 것이다.

Description

덱스트란의 생성방법
본 발명은 덱스트란을 생성하는 박테리아 균주, 덱스트란의 생성방법, 덱스트란의 생합성에 포함되는 효소를 함유하는 첨가물의 생성방법, 및 식품 또는 화장 조성물의 제조에 있어서의 상기 덱스트란, 상기 효소 및/또는 상기 덱스트란 및 상기 효소를 생성하는 균주의 용도에 관한 것이다.
덱스트란은 글루코스 단위체로 형성되며, 사슬 신장이 덱스트란 수크라제에 의해 촉매되는 다당류이다. 덱스트란의 생합성은 많은 박테리아, 특히, 스트렙토코쿠스 뮤탄스 (Streptococcus mutans), 류코노스톡 메센테로이데스 아종 메센테로이데스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides) 및 류코노스톡 메센테로이데스 아종 덱스트라니쿰 (Leuconostoc mesenteroides ssp. dextranicum) 에서 확인되었다. 류코토스톡 (Leuconostoc) 은 덱스트란 수크라제 효소를 생산하여 이를 수크로스의 존재하의 배양 배지로 분비한다. 이어서, 상기 덱스트란 수크라제 효소는 수크로스 기질로 부터 덱스트란을 합성한다. 덱스트란은 여러 분야에서 이용된다. 이는 특히 생화학에 있어서, 세파덱스 타입의 겔상에서 여과 크로마토그래피용 지지체로써 사용된다. 또한, 의료 분야에 있어서도, 혈장의 대체물로써 사용된다 [Biochimie generale (General Biochemistry) - J.H. WEIL - Masson, 6th edition - 1990 - p. 171].
더욱이, 류코노스톡 덱스트라니쿰 (Leuconostoc dextranicum) 의 균주에 의해서 합성된 덱스트란은, 식품 산업에 있어서, 요구르트, 크림 디저트, 음료용 유제품 및 샐러드 드레싱과 같은 식품의 조직화 (texturing) 를 위해 이용된다. 그러므로, EP 0363633 호에는, 류코노스톡 덱스트라니쿰 (Leuconostoc dextranicum) 의 균주, 특히 균주 류코노스톡 덱스트라니쿰 (Leuconostoc dextranicum) NRRL-B-18242 에 의한 덱스트란의 합성이 개시되어 있다. 상기 문헌은 특히 상기 박테리아에 의해 합성된 덱스트란을 함유하는 조성물 및 식품 분야에서의 상기 조성물의 용도를 기재하고 있다.
또한, 류코노스톡 (Leuconostoc) 속의 박테리아 균주에 대한 분류가 수차례 수정되었다.
그러므로, 문헌 [Garvie et al., International Journal of Systematic Bacteriology, 118-119, 1983] 에는, 데옥시리보핵산 (DNA) 의 측면에서 상동성을 기준으로 하여, 류코노스톡 (Leuconostoc) 속의 박테리아 균주의 분류가 기재되어 있다. 서로 상이한 표현형에도 불구하고, 이전에 류코노스톡 메센테로이데스 (Leuconostoc mesenteroides), 류코노스톡 덱스트라니쿰 (Leuconostoc dextranicum) 및 류코노스톡 크레모리스 (Leuconostoc cremoris) 로 분류된 박테리아는 그들의 DNA 상에서 매우 높은 정도의 상동성을 갖는다. 그러므로, 상기 분류에 따라, 상기 박테리아들은 류코노스톡 메센테로이데스 (Leuconostoc mesenteroides) 의 아종이고, 각각을 류코노스톡 메센테로이데스 아종 메센테로이데스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides), 류코노스톡 메센테로이데스 아종 덱스트라니쿰 (Leuconostoc mesenteroides ssp. dextranicum) 및 류코노스톡 메센테로이데스 아종 메센테로이데스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides) 및 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 라 부른다.
또한, 문헌 [J.B. Milliere et al., Journal of Applied Bacteriology, 67, 529-542, 1989] 에는 11 개의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주를 포함하는 류코노스톡 (Leuconostoc) 속의 81 개 균주에 대해 수행한 분류학적 분석이 기재되어 있다. 상기 분석은 Garvie et al. 에 의해 설정된 분류에 의한 것이며, 특히, 상기 균주들의 각종 당류 발효능, 상기 균주들의 시트레이트 이용능 및 상기 균주들의 덱스트란 생성능과 같은 기준을 근거로 한다. 상기 문헌은 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 가 덱스트란을 합성하지 못한다는 사실을 나타내고 있다. 또한, 상기 균주는 5탄당류를 발효하지 못한다는 사실에 의해 구별되어 정의된다.
덱스트란을 합성할 수 있는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주는 아직까지 분리된 바 없었다. 이제, 예를 들어, 요구르트-형 발효 제품 또는 유제 크림와 같은 유제품의 제조에 있어서 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주는 매우 중요하다. 그러므로, 좋은 조직감 및 맛을 가진 덱스트란을 합성할 수 있는, 특히 상기 형태의 식품을 조직화하기 위해, 상기 박테리아를 이용할 수 있는 것은 매우 유용할 것이다.
본 발명의 목적은 상기 필요를 충족시키는 것이다.
상기 목적을 위해서, 본 발명은 덱스트란을 생성하는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주, 특히 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) CNCM I-1692 및 CNCM I-1693 에 관한 것이다.
본 발명은 또한 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주를 이용한 식품 또는 화장 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 로 부터 덱스트란의 생성방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기 방법에 의해 수득된 덱스트란을 식품 또는 화장 조성물의 제조중에 혼입시킨 식품 또는 화장 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 로 부터의 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물의 생성방법에 관한 것이다.
본 발명은 마지막으로 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 로 부터의 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 식품 또는 화장 조성물의 제조중에 혼입시킨 식품 또는 화장 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 그러므로 덱스트란을 생성하는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주에 관한 것이다. 덱스트란을 생성하는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주를 단리시키는 것이 가능하다. 그러므로, 덱스트란을 생성하는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스의 모든 균주는 본 발명에 포함된다.
류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주는 특히 스위스 크림으로 부터 단리되고, 놀랍게도 이 균주가 좋은 조직감과 맛을 가진 덱스트란의 합성능이 뛰어나다는 것이 밝혀졌다. 상기 균주는 부다페스트 조약에 의해 기탁기관 [Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, INSTITUT PASTEUR, 25, rue du Docteur Roux, F-75724 PARIS CEDEX 15] 에 1996년 4월 18일자로 기탁되어, 기탁 번호 CNCM I-1692 를 부여받았다.
더욱이, 좋은 조직감과 맛을 가진 덱스트란의 뛰어난 합성을 가진 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주는 균주 CNCM I-1692 로 부터 자연 선별되어 단리된다. 상기 균주는 부다페스트 조약에 의해 기탁기관 [Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, INSTITUT PASTEUR, 25, rue du Docteur Roux, F-75724 PARIS CEDEX 15] 에 1996년 4월 18일자로 기탁되어, 기탁 번호 CNCM I-1693 를 부여받았다.
특히 그들의 형태, 당의 발효 및 다른 점들에 관한 상기 균주들의 상세한 점들을 하기에 기재한다.
형태
- 그람-양성 미생물,
- 네가티브 카탈라제,
- 조건적 호기성 생물,
- 구균.
당의 발효
- D- 및 L-아라비노스, D- 및 L-크실로스 및 D- 및 L-리보스로 부터 젖산 생성무,
- 균주 CNCM I-1692 에 의해 락토스로 부터 젖산 생성,
- 균주 CNCM I-1693 에 의해 락토스로 부터 젖산 생성무.
기타
- 상당한 조직성을 가진 다당류인, 덱스트란을 합성하는 균주.
본 발명에 따르면, 락토스를 발효시키지 못하는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주, 예를 들어, CNCM I-1693 을 단리시키는 것이 가능하다.
본 발명에 따른 바람직한 균주는 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 과 동일한 덱스트란을 생성한다.
본 발명은 또한 수크로스를 함유하는 배지에 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비배양액으로 접종하여, 25 ∼ 35 ℃ 에서 10 ∼ 20 시간 동안 발효시킨 다음, 생성된 배양액의 pH 를 5 ∼ 5.5 로 저하시켜 0 ∼ 10 ℃ 에서 16 ∼ 48 시간 동안 보관하는 것을 특징으로 하는 덱스트란의 생성방법에 관한 것이다.
2 % 이상의 수크로스를 함유하는 배지에 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비배양액을 접종하여, 예를 들어, 덱스트란 수크라제를 생성하고 배양 배지에서 덱스트란을 합성할 수 있다.
0.05 ∼ 0.2 % 의 효모추출물 및 2 % 이상의 수크로스가 공급된 5 ∼ 12 % 의 MSK 배지 (탈지유) 를 함유하는 배지에 예를 들어, 0.2 ∼ 3 % 의 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주, 특히 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 의 예비배양액을 접종할 수 있다. 예를 들어, pH 를 6 ∼ 7.3 으로 유지하면서 25 ∼ 35 ℃ 에서 10 ∼ 20 시간 동안 배지를 발효시킬 수 있다. 이어서, 발효가 완료되었을 때, 생성된 배양액의 pH 를 예를 들어, 젖산을 첨가하므로써 5 ∼ 5.5 로 저하시킬 수 있다. 배양액을 이어서 0 ∼ 10 ℃ 에서 16 ∼ 48 시간 동안 저장한다.
또한, 2 % 이상의 수크로스와 함께 0.05 ∼ 2 % 의 효모 추출물을 함유하는 배지에 예를 들어, 0.2 ∼ 3 % 의 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주, 특히 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 의 예비배양액을 접종할 수 있다. 예를 들어, pH 를 6 ∼ 7.3 으로 유지하면서 25 ∼ 35 ℃ 에서 10 ∼ 20 시간 동안 배지를 발효시킬 수 있다. 이어서, 발효가 완료되었을 때, 상기 배양액을 동일 부피의 20 % MSK 배지와 혼합하므로써 예를 들어, MSK 배지에 함유된 락토스에 의해 효소 덱스트란 수크라제 생성이 저해되는 것을 발효중에 피할 수 있다. 생성된 배지의 pH 를 예를 들어, 젖산을 첨가하므로써 5 ∼ 5.5 로 저하시킬 수 있다. 배양액을 이어서 0 ∼ 10 ℃ 에서 16 ∼ 48 시간 동안 저장한다.
상기 배양액을 이어서 건조시켜 덱스트란 분말을 수득할 수 있다. 상기 배양액은 예를 들어, 동결건조 또는 분무 건조에 의해 건조될 수 있다.
본 발명은 또한 상기 방법을 수행하므로써 수득될 수 있는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스로 부터의 덱스트란을 함유하는 식품 또는 화장 조성물에 관한 것이다.
상기 식품 또는 조성물을 제조하기 위해서, 상기 방법에서 수득된 덱스트란을 예를 들어, 분유, 요구르트, 케찹, 마요네즈 또는 스킨 크림과 같은, 식품 또는 화장 생성물에 그의 제조중에 혼입시킬 수 있다.
본 발명은 또한 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물의 생성방법에 관한 것으로, 수크로스를 함유하는 배지에 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비 배양액을 접종한 다음 25 ∼ 35 ℃ 에서 10 ∼ 20 시간 동안 발효시킨다.
2 % 이상의 수크로스를 함유하는 배지에 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비 배양액을 접종하여 예를 들어, 배양 배지중에서 덱스트란 수크라제를 생성한다.
0.05 ∼ 2 % 의 효모 추출물 및 2 % 이상의 수크로스가 공급된 5 ∼ 12 % 의 MSK 배지 (탈지유) 를 함유하는 배지에, 예를 들어, 0.2 ∼ 3 % 의 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비배양액, 특히 0.2 ∼ 3 % 의 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 의 예비배양액을 접종할 수 있다. 배지를 예를 들어, pH 를 6 ∼ 7.3 으로 유지하면서 25 ∼ 35 ℃ 에서 10 ∼ 20 시간 동안 발효시킬 수 있다.
2 % 이상의 수크로스를 함유하는 배지에 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비 배양액을 접종하여 예를 들어, 배양 배지중에서 덱스트란 수크라제를 생성할 수 있다.
0.05 ∼ 0.2 % 의 효모추출물 및 2 % 이상의 수크로스가 공급된 5 ∼ 12 % 의 MSK 배지 (탈지유) 를 함유하는 배지에 예를 들어, 0.2 ∼ 3 % 의 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비배양액, 특히 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 의 예비배양액을 접종할 수 있다. 예를 들어, pH 를 6 ∼ 7.3 으로 유지하면서 25 ∼ 35 ℃ 에서 10 ∼ 20 시간 동안 배지를 발효시킬 수 있다.
0.05 ∼ 0.2 % 의 효모 추출물 및 2 % 이상의 수크로스를 함유하는 배지에, 예를 들어, 0.2 ∼ 3 % 의 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비배양액, 특히 0.2 ∼ 3 % 의 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 의 예비배양액을 접종할 수 있다. 배지를 예를 들어, pH 를 6 ∼ 7.3 으로 유지하면서 25 ∼ 35 ℃ 에서 10 ∼ 20 시간 동안 발효시킬 수 있다. 발효가 완료되었을 때, 상기 배양액을 동일 부피의 20 % MSK 배지와 혼합하므로써 예를 들어, MSK 배지에 함유된 락토스에 의해 효소 덱스트란 수크라제 생성이 저해되는 것을 발효중에 피할 수 있다.
또한, 2 % 이상의 수크로스, 1 ∼ 3 % 의 K2HPO4, 0.2 ∼ 1 % 의 효모추출물, 0.2 ∼ 1 % 의 펩톤 및 0.0005 ∼ 0.001 % 의 MnSO4를 함유하는 합성 배양 배지에 0.2 ∼ 3 % 의 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주의 예비배양액, 특히 0.2 ∼ 3 % 의 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 의 예비배양액을 접종할 수 있다. 배지를 예를 들어, pH 를 6 ∼ 7.3 으로 유지하면서 25 ∼ 35 ℃ 에서 7 ∼ 12 시간 동안 발효시킬 수 있다.
활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물의 생성방법으로 첫번째 바람직한 구현예로는, 발효후 배양액의 pH 를 5 ∼ 5.5 로 조절한 다음, 상기 배양액을 건조시켜 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 분말을 수득한다. 배양액의 pH 를 예를 들어, 젖산을 첨가하여 조절할 수 있다. 배양액을 예를 들어, 동결 건조 또는 분무 건조에 의해 건조시킬 수 있다.
활성 덱스트란 수크라제의 제조 방법의 두번째 바람직한 구현예로는, 발효후에 배양액을 분리하므로써 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 상청액을 단리시킨다. 상기 분리는 예를 들어, 2 ∼ 6 ℃ 에서 10 ∼ 35 분간 15,000 ∼ 20,000 g 로 원심분리시키므로써 수행될 수 있다.
상청액의 pH 를 4.9 ∼ 5.7 로 조절하고, 상기 상청액을 0 ∼ 10 ℃ 에서 15 ∼ 30 시간 동안 방치한 다음 상기 상청액에 함유된 거대분자를 침전시키므로써 덱스트란 수크라제를 함유하는 침전물을 단리시키는 것이 가능하다. 상청액내 거대분자는 2 ∼ 6 ℃ 에서 교반하에 폴리에틸렌 글리콜 또는 암모늄 술페이트로 침전시킬 수 있다.
덱스트란 수크라제를 함유하는 침전물을 이어서 투석시키므로써 침전제를 제거할 수 있다.
마지막으로, 본 방법의 상기 두번재 바람직한 구현예에 있어서, 덱스트란 수크라제를 함유하는 침전물을 예를 들어 침전 단계후 또는 투석 단계후에 -4 ℃ 이하의 온도에서 보관할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 방법을 수행하므로써 수득될 수 있는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스로 부터의 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물로 이루어지는 식품 또는 화장 조성물에 관한 것이다.
상기 식품 또는 조성물을 제조하기 위해서, 상기 방법으로 수득된 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 분유, 요구르트, 케찹, 마요네즈 또는 스킨 크림과 같은, 식품 또는 화장 조성물에 상기 제조중에 혼입시킬 수 있다.
마지막으로, 본 발명은 또한 식품 또는 화장 조성물의 제조를 위해 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주를 이용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주, 상기 균주에 의해서 생성된 덱스트란 수크라제 및 상기 균주에 의해서 합성된 덱스트란은 상이한 형태 및 상기 성질들을 설명하는 생화학적 데이타에 의해서 하기에서 보다 상세하게 특성화될 것이다. 달리 나타낸 바 없으면, 퍼센트는 중량 % 를 의미한다.
덱스트란을 생성하는 류코노스톡 (Leuconostoc) 균주의 시험
덱스트란을 생성하는 균주에 대한 시험은 유제품, 또는 와인, 커피 및 소금에 절인 양배추 (sauerkraut) 와 같은 비유제품중 어느 하나로 부터 단리된 150 종류의 균주상에서 수행된다.
수크로스를 함유하는 배지에서 덱스트란의 생성을 측정한다.
이를 수행하기 위해서, 1 % 의 B. 트립톤, 0.5 % 의 효모 추출물, 0.5 % 의 K2HPO4, 0.5 % 의 암모늄 시트레이트 및 5 % 의 수크로스를 함유하는 10 ml 의 DEX 배지에 150 종류의 균주 각각의 1 % 예비배양액을 접종한다. 이어서, 배지를 30 ℃ 에서 24 시간 동안 발효시킨다.
덱스트란을 생성할 수 있는 16 종류의 균주를 150 종류의 균주들로 부터 선별한다.
이어서, 상기 기재된 바와 같은 DEX 배지 150 ml 에 상기 16 종류의 선별된 균주 각각의 1 % 예비배양액을 접종한 다음 30 ℃ 에서 24 시간 동안 발효시켜 상기 방법으로 수득되는 상기 16 종류의 배양액의 생성물의 점성도를 측정한다. 점성도는 직경 25 mm 의 중력 점도계로 측정된다.
표 1 은 중력 점도계를 통해 각 배양액의 생성물 100 ml 이 통과하는데 걸린 수치를 초로 나타낸다. 표 1 에 나타낸 바와 같이, 균주 A1 은 음성 대조 균주로서 사용되었다.
표 1 에서, 균주 A 는 류코노스톡 아종 (Leuconostoc ssp.) 의 균주이고, 균주 B 는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주이고, 균주 C1 은 류코노스톡 락티스 (Leuconostoc lactis) 의 균주이며, 균주 D 는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 메센테로이데스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides) 균주이다.
균주 점성도 (s)
A1 11
A2 16
A3 14
A4 13
A5 18
A6 20
A7 19
A8 19
C1 17
CNCM I-1692 22
B1 12
B2 14
B3 15
D1 12
D2 14
D3 15
D4 17
상기 표 1 에 나타낸 결과는 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 가 16 종류의 선별된 균주중 가장 높은 점도를 갖는 것으로 증명되었으므로, 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 가 가장 많은 양의 덱스트란을 생성한다는 것을 알 수 있다.
발효 시간의 함수로써 효소 덱스트란 수크라제의 농도에 관한 연구
2 % 수크로스, 2 % 의 K2HPO4, 0.5 % 의 효모추출물, 0.5 % 의 펩톤, 0.02 % 의 MgSO4, 0.001 % 의 MnSO4, 0.001 % 의 FeSO4및 0.001 % 의 NaCl 를 함유하는 합성 배지에 1 % 의 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 의 예비 배양액을 접종한다. 5 리터 발효기내에서 30 ℃ 로 12 시간 동안 발효시킨다.
4 시간 발효후, 생성된 배양액중 시료를 12 시간의 발효시간 동안 매 2 시간 마다 채취하여, 600 nm 에서의 광학 밀도로써 균주의 성장을 측정한다.
각 시료를 이어서 4 ℃ 에서 20 분간 18,000 g 로 원심분리한 다음, 상청액을 회수하여 그의 pH 를 5. 2 로 조절하고, 상청액에 함유된 덱스트란 수크라제의 활성을 방사성 수크로스로 부터 덱스트란으로 혼입된 방사성을 측정하여 평가한다 [J. Dent. Res. 1974, 53, 1355-1360].
하기 표 2 는 발효개시후 4 시간에서 12 시간사이에 매 2 시간 마다 채취한 시료를 기준으로 하여 균주의 성장을 측정하여 수득된 결과를 나타낸다. 표 2 는 또한 상기 시료의 상청액중 함유된 덱스트란 수크라제의 활성을 측정한 결과를 나타낸다.
발효시간 (시간) 4 6 8 10 12
성장 (OD600)/10 0.034 0.085 0.21 0.51 0.53
활성 (u/ml) - 0.1 0.17 0.6 0.61
표 2 에 나타낸 결과들은 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 박테리아가 정지상으로 돌입하는 직후에 덱스트란 수크라제의 농도가 최대치에 도달한다는 것을 증명한다.
효소 덱스트란 수크라제의 정제 및 그의 고유활성의 측정
0.2 % 의 수크로스, 0.5 % 의 효모추출물, 0.5 % 의 펩톤, 2 % 의 K2HPO4, 0.02 % 의 MgSO4, 0.001 % 의 MnSO4, 0.001 % 의 FeSO4및 0.001 % 의 NaCl 을 함유하는 배양 배지에 1 % 의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 의 예비 배양액을 접종하여, pH 를 6.7 로 유지하면서 실온에서 12 시간 발효시킨다.
상기 방법으로 제조된 배양액을 이어서 4 ℃ 에서 20 분간 18,000 g 로 원심분리시킨다.
이어서, 덱스트란 수크라제를 함유하는 상청액을 단리하여 그의 pH 를 5.2 로 조절한 다음 4 ℃ 에서 4 시간 동안 항온배양시킨다.
상청액을 이어서 동부피의 33 % 의 폴리에틸렌 글리콜 400 과 혼합하고 혼합물을 4 ℃ 에서 5 시간동안 교반하에 항온배양시키므로써, 상청액내 함유된 단백질을 침전시킨다.
혼합물을 4 ℃ 에서 20 분간 18,000 g 로 원심분리시켜 침전된 단백질을 함유하는 잔류물을 분리시킨다.
침전된 단백질을 함유하는 상기 잔류물을 이어서 pH 5.2 인, 20 mM 암모늄 아세테이트 70 ml 중에 현탁시킨다.
600 μg 의 덱스트라나제를 이어서 상기 현탁액에 첨가하고, 그 전체를 25 ℃ 에서 1 시간 동안 항온배양시키므로써 현탁액내 함유된 덱스트란을 덱스트라나제로 절단한다.
상기 현탁액을 pH 5.2 인, 70 ml 의 20 mM 암모늄 아세테이트중에서 투석하므로써 덱스트라나제로 덱스트란을 절단한 후 수득된 글루코스 분자를 제거한다. 단백질을 이어서 pH 5.2 인 20 mM 암모늄 아세테이트 완충액으로 미리 평형화시킨 음이온 교환 컬럼 (Fast Q, Pharmacia Biotech AB, Uppsala, SU) 으로 분리한다.
단백질을 0 ∼ 0.5 M NaCl 의 직선 농도구배로 용출시킨다.
상기 방법으로 용출된 상이한 단백질 분획중 덱스트란 수크라제의 활성을 분석하고, 상기 단백질 분획을 SDS-폴리아크릴아미드 겔상에서 전기영동한다.
덱스트란 수크라제를 함유하는 단백질 분획을 분리하고, 정제된 덱스트란 수크라제의 활성을 측정하여 105 u/mg 인 것으로 밝혀졌다.
효소의 항온배양 온도의 함수로써 덱스트란의 조직능
균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 로 부터의 덱스트란 수크라제의 활성을 한편으로는 30 ℃ 에 대해서, 또 다른 한편으로는 4 ℃ 에서 측정하므로써 상기 상이한 온도에서의 덱스트란의 조직능이 입증되었다.
이는 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 의 배양액으로 부터의 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 제조하므로써 수행된다.
2 % 의 수크로스, 2 % 의 K2HPO4, 0.5 % 의 효모추출물, 0.5 % 의 펩톤, 0.02 % 의 MgSO4, 0.001 % 의 MnSO4, 0.001 % 의 FeSO4및 0.001 % 의 NaCl 을 함유하는 합성 배지에 1 % 의 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 의 예비 배양액을 접종한다. 이를 6.7 로 pH 를 유지하면서 30 ℃ 에서 12 시간 동안 발효시킨다.
배양액을 이어서 4 ℃ 에서 20 분간 18,000 g 로 원심분리로 분리시켜 덱스트란 수크라제를 함유하는 상청액을 분리한다.
상청액의 pH 를 5.2 로 낮추고, 이 상청액을 4 ℃ 에서 12 시간 동안 항온배양시킨다.
이어서, 현탁액중 거대분자를 4 ℃ 에서 폴리에틸렌 글리콜로 2 회 침전시키므로써 덱스트란 수크라제를 정제한다.
상기 방법으로 분리된 덱스트란 수크라제에 의해 합성된 덱스트란의 조직능은 pH 5.2 인 20 mM 아세테이트, 200 mM 수크로스 및 20 mM CaCl 을 함유하는 완충액-기질중에서, 한편으로는 30 ℃ 에서 다른 한편으로는 4 ℃ 에서 항온배양하므로써 입증된다.
하기 표 4 는 30 ℃ 및 다른 한편으로 4 ℃ 에서의 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 로 부터의 활성 덱스트란 수크라제의 조직화 결과를 나타낸다.
표 4 에 나타낸 결과들은 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 로 부터의 덱스트란 수크라제가 4 ℃ 에서 두껍고 좋은 조직감을 가진 덱스트란을 합성할 수 있도록 하는 반면, 30 ℃ 에서는 조직화되지 않은 탁한 용액이 수득된다는 것을 증명한다. 조직화에 있어서 상기 차이점은 4 ℃ 에서 덱스트란이 짧은 측쇄를 갖는 분자의 형태이므로 두껍고 좋은 조직감을 수득하는 것이 가능한 반면, 30 ℃ 에서는 덱스트란이 주쇄에 평행하게 나열된 긴 측쇄를 갖는 분자 형태라는 사실에 기인한다는 것은 의심할 바 없다. 상기 분자는 좋은 감촉을 주지 못한다.
덱스트란 수크라제로 유제품의 조직화
덱스트란 수크라제를 요구르트 제조중에 이용되는 것과 동일한 조건 (배지, 온도 및 pH) 하에서 배양한다.
이는 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 의 배양액으로 부터의 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 생성하므로써 수행된다.
2 % 의 수크로스, 2 % 의 K2HPO4, 0.5 % 의 효모추출물, 0.5 % 의 펩톤, 0.02 % 의 MgSO4, 0.001 % 의 MnSO4, 0.001 % 의 FeSO4및 0.001 % 의 NaCl 을 함유하는 합성 배지에 1 % 의 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 의 예비 배양액을 접종한다. 이를 6.7 로 pH 를 유지하면서 30 ℃ 에서 하룻밤 동안 발효시킨다.
배양액을 이어서 4 ℃ 에서 20 분간 18,000 g 로 원심분리로 분리시켜 덱스트란 수크라제를 함유하는 상청액을 분리한다.
상청액의 pH 를 5.2 로 낮추고, 상기 상청액을 4 ℃ 에서 12 시간 동안 항온배양시킨다.
이어서, 상청액중 거대분자를 4 ℃ 에서 폴리에틸렌 글리콜로 2 회 침전시키므로써 덱스트란 수크라제를 정제한다.
덱스트란 수크라제에 의한 덱스트란의 합성은 이어서 입증된다. 이는 한편으로는 20 mM 아세테이트, 200 mM 수크로스 및 20 mM CaCl2을 함유하는 pH 6.4 인 완충액-기질중에서, 다른 한편으로는 6 % 의 수크로스를 함유하는 우유 음료중에서 덱스트란 수크라제를 항온배양시키므로써 달성된다.
하기 표 5 는 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 로 부터의 활성 덱스트란 수크라제의 조직화 결과를 나타낸다.
표 5 에 나타낸 결과들은 덱스트란 수크라제가 우유-기재 배지를 조직화시킬 뿐 아니라 37 ℃ 에서 5 시간후 덱스트란을 더이상 증점시키지 않는다는 사실을 증명한다. 요구르트는 발효후 4 ℃ 보관전에 덱스트란 수크라제를 첨가하므로써 조직화시킬 수 있다.
하기 실시예들은 본 발명에 따른 식품 또는 화장 조성물의 제조시 덱스트란, 덱스트란 수크라제 및/또는 상기 덱스트란 및 상기 덱스트란 수크라제를 생성하는 균주의 용도를 설명하기 위해 기재된다. 기재된 퍼센트는 달리 나타낸 바 없으면 중량 % 를 나타낸다.
실시예 1
본 발명에 따른 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 가 요구르트 제조를 위해 사용된다.
이를 위해서, 2.8 % 의 지방을 함유하고 2 % 의 탈지유 분말 및 6 % 의 수크로스가 추가 공급된 우유 생성물 1 리터를 제조하고, 이를 96 ℃ 에서 30 분간 저온 살균시킨 다음, 그의 온도를 42 ℃ 로 저하시킨다.
동시 공정으로, 스트렙토코쿠스 써토필러스 (Streptococcus thermophilus) 의 비-증점 균주의 동결된 예비배양액 및 락토바실러스 불가리쿠스 (Lactobacillus bulgaricus) 의 비-점성 균주의 동결된 예비배양액을 10 % 의 조제분유 및 0.1 % 의 시판되는 효모 추출물을 함유하는 멸균된 MSK 배양 배지중에서 재활성화시킨다.
류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스의 동결된 예비배양액을 또한 MRS 배양 배지 (MRS 락토바실라이-디트로이트-USA) 중에서 재활성화시킨 다음, 10 % 의 조제분유 및 0.1 % 의 시판되는 효모추출물을 함유하고 1 % 의 수크로스가 추가 공급된 멸균 MSK 배양 배지중에서 재활성화시킨다.
저온 살균된 유제품에 이어서 1 % 의 상기 재활성화시킨 예비배양액 각각을 접종하고, 상기 유제품을 이어서 pH 가 4.5 에 도달할 때 까지 발효시킨다.
요구르트를 상기 방법으로 생성하여 4 ℃ 에서 보관한다.
균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스에 의해 생성된, 요구르트는 특히 4 ℃에서 10 일간 저장한 후 맛이 좋으며 매끄러운 조직을 갖는다.
실시예 2
본 발명에 따른 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물은 요구르트의 제조를 위해 사용된다.
이를 수행하기 위해서, 2 % 의 수크로스, 2 % 의 K2HPO4, 0.5 % 의 효모 추출물, 0.5 % 의 펩톤, 0.02 % 의 MgSO4, 0.001 % 의 MnSO4, 0.001 % 의 FeSO4및 0.001 % 의 NaCl을 함유하는 합성 배지에 1 % 의 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 CNCM I-1692 의 예비배양액을 접종한다. 이를 6.7 로 pH를 유지하면서 30 ℃에서 12 시간동안 발효시킨다. 이어서, 배양액을 4 ℃에서 18,000 g 로 20 분간 원심분리하여 분리시켜 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 상청액을 단리시킨다. 상청액의 pH를 5.2 로 낮추고 상청액중 거대분자들을 이어서 암모늄 술페이트로 4 ℃에서 침전시키므로써 덱스트란 수크라제를 함유하는 침전물을 단리시킨다. 상기 침전물을 이어서 투석하여 암모늄 술페이트를 제거한다.
2.8 % 의 지방을 함유하고 2 % 의 탈지분유 및 6 % 의 수크로스가 추가 공급된 1 ℓ 의 우유 생성물을 또한 제조하고, 96 ℃에서 30 분간 저온살균처리한 다음, 그의 온도를 42 ℃ 로 저하시킨다.
동시 공정으로, 스트렙토코쿠스 써모필러스 (Streptocuccus thermophilus) 의 비-점증 균주의 동결된 예비배양액 및 락토바실러스 불가리쿠스 (Lactobacillus bulgaricus) 의 비-점성 균주의 동결된 예비배양액을 10 % 의 조제분유 및 0.1 % 의 시판되는 효모추출물을 함유하는 멸균 MSK 배양 배지중에서 재활성화시킨다.
저온살균처리된 우유 생성물에 상기 두 균주의 1 % 의 각 배양액을 접종한 다음, 우유 생성물을 pH 가 4.5 에 도달할 때 까지 37 ℃에서 항온배양시킨다.
1 ‰ 의 정제된 덱스트란 수크라제를 이어서 교반하에 첨가한다.
요구르트를 본 방법으로 제조하여 4 ℃에 저장한다.
류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스에 의해 합성된 정제 덱스트란 수크라제로 제조된, 상기 요구르트는, 특히 4 ℃에서 10 일간 저장한 후, 맛이 좋고 매끄러운 조직감을 갖는다.
실시예 3
본 발명에 따른 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물은 요구르트의 제조를 위해 분말 형태로 사용된다.
이를 수행하기 위해서, 9 % 의 탈지분유, 0.1 % 의 효모추출물 및 2 % 의 수크로스를 함유하는 배양 배지에 1 % 의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비배양액을 접종한다. pH를 6.7 로 유지하면서 30 ℃에서 20 시간 동안 발효시킨다. 배양액을 동 부피의 20 % 의 MSK 용액과 혼합시킨다. 생성된 배양액의 pH를 이어서 젖산을 첨가하여 5.2 로 저하시킨 다음 배양액을 분무-건조시켜 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 분말 형태로 수득한다.
2.8 % 의 지방을 함유하고 2 % 의 탈지분유 및 6 % 의 수크로스가 추가 공급된 1 ℓ 의 우유 생성물을 또한 제조하고, 이를 96 ℃에서 30 분간 저온살균처리하고, 그의 온도를 이어서 42 ℃로 저하시킨다.
동시 공정으로, 스트렙토코쿠스 써모필러스 (Streptocuccus thermophilus) 의 비-점증 균주의 동결된 예비배양액 및 락토바실러스 불가리쿠스 (Lactobacillus bulgaricus) 의 비-점성 균주의 동결된 예비배양액을 10 % 의 조제분유 및 0.1 % 의 시판되는 효모추출물을 함유하는 멸균 MSK 배양 배지중에서 재활성시킨다.
저온살균처리된 우유 생성물에 상기 두 균주의 1 % 의 각 배양액을 접종한 다음, 우유 생성물을 pH 가 4.5 에 도달할 때 까지 40 ℃에서 항온배양시킨다. 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 1 % 의 첨가물을 분말 형태로 교반하에 첨가한다.
요구르트를 본 방법으로 제조하여 4 ℃에 저장한다.
분말형태의 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물로 제조된, 상기 요구르트는, 특히 4 ℃에서 10 일간 저장한 후, 맛이 좋고 매끄러운 조직감을 갖는다.
실시예 4
본 발명에 따른 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물은 아이스크림의 제조를 위해 분말 형태로 사용된다.
이를 수행하기 위해서, 0.5 % 의 효모추출물 및 2 % 이상의 수크로스를 함유하는 배양 배지에 1 % 의 균주 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 의 예비배양액을 접종한다. pH를 6.7 로 유지하면서 23 ℃에서 20 시간 동안 발효시킨다. 생성된 배양액의 pH를 젖산을 첨가하여 5.2 로 저하시킨다. 배양액을 동 부피의 20 % 의 MSK 용액과 혼합시킨 다음 배양액을 분무-건조시켜 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 분말 형태로 수득한다.
또 다른 공정으로, 8 % 의 지방, 10 % 의 비지방 고체, 14 % 의 수크로스, 3 % 의 글루코스 시럽 DE 36-40, 0.3 % 의 유화제, 모노글리세리드 및 디글리세리드를 함유하는 아이스크림 혼합물 100 ℓ를 제조한다. 상기 혼합물중 총 건조 추출물은 35.28 % 이다. 본 방법으로 제조된 혼합물을 60 ∼ 65 ℃에서 20 분간 교반시키고, 210 바 및 72 ℃ 에서 균질화시키고 (상승하는 균질화 - 2 단계), 86 ℃에서 22 초간 저온살균처리한 다음 +4℃ 로 냉각시킨다. 호모-저온살균 생산라인의 생산율은 200 ℓ/h 이다.
혼합물에 젖산을 첨가하여 pH 5.5 로 산성화시킨다. 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 1 % 의 첨가물을 이어서 교반하에 분말 형태로 첨가한다.
혼합물을 이어서 +4℃에서 숙성시킨다. 숙성시, 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 분말 형태의 첨가물로 제조된 아이스크림 혼합물은 매끄러운 조직감을 갖는다. -5 ℃ 에서 3 바의 상대압력하에 95 % 부피증가율로 동결되고 생산고가 80 ℓ/h 이다. 아이스크림을 이어서 강화된 쳄버내에서 - 35 ℃ 로 이어서 - 30 ℃ 또는 - 20 ℃ 로 보관한다.
활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 분말 형태의 첨가물로 제조된 아이스크림은 우수한 조직성 및 좋은 맛을 갖는다. 본 방법으로 수득된 아이스크림은 입안에서 좋은 느낌을 준다. 아이스크림은 부드럽고 매끄럽다. 강화된 에이징후 아이스크림은 양호한 수준의 조직성 및 입안에서의 부드러운 느낌을 유지한다. 아이스크림의 부드러운 특성이 잘 보존되고; 이는 덱스트란의 저온보호성에 의해 설명될 수 있으며, 이는 얼음 결정의 과도한 성장을 제한한다.
실시예 5
본 발명에 따른 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물은 아이스크림의 제조를 위해 분말 형태로 사용된다.
이를 수행하기 위해서, 0.5 % 의 효모추출물 및 2 % 이상의 수크로스를 함유하는 배양 배지에 1 % 의 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주의 예비배양액을 접종한다. pH를 6.7 로 유지하면서 23 ℃에서 20 시간 동안 발효시킨다. 생성된 배양액의 pH를 젖산을 첨가하여 5.2 로 저하시킨다. 배양액을 동 부피의 20 % 의 MSK 용액과 혼합시킨 다음 배양액을 분무-건조시켜 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 분말 형태로 수득한다.
또 다른 공정으로, 18 % 의 수크로스를 함유하는 100 ℓ 의 프리믹스를 제조한다. 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 1 % 의 첨가물을 이어서 교반하에 분말형태로 첨가한다. 이어서, 프리믹스를 +4 ℃ 에서 항온배양시킨다.
항온배양후, 프리믹스의 점성도가 증가한다. 프리믹스는 8 % 의 지방, 10 % 의 비지방 고체, 14 % 의 수크로스, 3 % 의 글루코스 시럽 DE 36-40, 0.3 % 의 유화제, 모노글리세리드 및 디글리세리드를 함유하는 최종 아이스크림 혼합물을 수득하도록 제조된다. 상기 혼합물의 총 건조 추출물은 35.28 % 이다. 본 방법으로 제조된 혼합물을 60 ∼ 65 ℃에서 20 분간 교반시키고, 210 바 및 72 ℃ 에서 균질화시키고 (상승하는 균질화 - 2 단계), 86 ℃에서 22 초간 저온살균처리한 다음 +4℃ 로 냉각시킨다. 상기 지점에서 효소는 전체적으로 불활성화된다. 호모-저온살균 생산라인의 생산율은 200 ℓ/h 이다.
혼합물을 +4℃에서 숙성시킨 다음, -5 ℃ 에서 3 바의 상대압력하에 95 % 부피증가율로 동결되고 생산고가 80 ℓ/h 이다. 아이스크림을 이어서 강화된 쳄버내에서 - 35 ℃ 로 이어서 - 30 ℃ 또는 - 20 ℃ 로 보관한다.
활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 분말 형태의 첨가물과 항온배양된 프리믹스로부터 제조된 아이스크림은 우수한 조직성 및 좋은 맛을 갖는다. 본 방법으로 수득된 아이스크림은 입안에서 좋은 느낌을 준다. 아이스크림은 부드럽고 매끄럽다. 강화된 에이징후 아이스크림은 양호한 수준의 조직성 및 입안에서의 부드러운 느낌을 유지한다. 아이스크림의 부드러운 특성이 잘 보존되고; 이는 덱스트란의 저온보호성에 의해 설명될 수 있으며, 이는 얼음 결정의 과도한 성장을 제한한다.
예를 들어, 요구르트-형 발효 제품 또는 유제 크림와 같은 유제품의 제조에 있어서 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 균주는 매우 중요하다. 그러므로, 좋은 조직감 및 맛을 가진 덱스트란을 합성할 수 있는, 특히 상기 형태의 식품을 조직화하기 위해, 상기 박테리아를 이용할 수 있는 것은 매우 유용할 것이다.

Claims (19)

  1. 덱스트란을 생성하는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 균주.
  2. 제 1 항에 있어서, CNCM 에 기탁번호 I-1692 로 기탁된 균주.
  3. 제 1 항에 있어서, CNCM 에 기탁번호 I-1693 로 기탁된 균주.
  4. 제 1 항에 있어서, 균주 CNCM I-1692 또는 균주 CNCM I-1693 와 동일한 덱스트란을 생성하는 균주.
  5. 제 1 항, 제 3 항 및 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 락토스를 발효시키지 못하는 균주.
  6. 하기와 같이 구성된 덱스트란 생성방법 :
    - 수크로스를 함유하는 배양 배지에 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 균주의 예비배양액을 접종하고,
    - 25 ∼ 35 ℃에서 10 ∼ 20 시간 동안 발효시키고,
    - 생성된 배양액의 pH를 5 ∼ 5.5 로 저하시킨 다음 0 ∼ 10 ℃에서 16 ∼ 48 시간 동안 저장한다.
  7. 제 6 항에 있어서, 배양 배지가 2 % 이상의 수크로스를 함유하는 방법.
  8. 제 6 항에 있어서, 배양액을 발효 단계 직후에 우유-기재 배지와 혼합시키는 방법.
  9. 제 6 항에 있어서, 배양액을 저장 단계후에 건조시키는 방법.
  10. 제 6 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하므로써 수득될 수 있는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris) 로 부터의 덱스트란을 함유하는 식품 또는 화장 조성물.
  11. 수크로스를 함유하는 배지에 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 균주의 예비배양액을 접종한 다음 25 ∼ 35 ℃에서 10 ∼ 20 시간 동안 발효시키는 것으로 이루어진 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물의 생성방법.
  12. 제 11 항에 있어서, 배양 배지가 2 % 이상의 수크로스를 함유하는 방법.
  13. 제 11 항에 있어서, 배양액의 pH를 발효후 5 ∼ 5.5 로 조절한 다음, 이 배양액을 건조시키는 방법.
  14. 제 11 항에 있어서, 배양액을 발효후에 분리하여 덱스트란 수크라제를 함유하는 상청액을 단리시키는 방법.
  15. 제 14 항에 있어서, 상청액의 pH를 4.9 ∼ 5.7 로 조절하고, 상청액을 0 ∼10 ℃에서 15 ∼ 30 시간 동안 저장한 다음, 상청액중의 거대분자를 침전시키므로써 덱스트란 수크라제를 함유하는 침전물을 단리시키는 방법.
  16. 제 15 항에 있어서, 덱스트란 수크라제를 함유하는 침전물을 투석시키는 방법.
  17. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 덱스트란 수크라제를 함유하는 침전물을 -4 ℃ 이하의 온도에서 저장하는 방법.
  18. 제 10 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하므로써 수득될 수 있는 류코노스톡 메센테로이데스 아종 크레모리스 (Leuconostoc mesenteroidesssp. cremoris) 로 부터의 활성 덱스트란 수크라제를 함유하는 첨가물을 함유하는 식품 또는 화장 조성물.
  19. 식품 또는 화장 조성물를 제조하는데 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 균주를 이용하는 방법.
KR1019980015790A 1997-05-31 1998-05-01 덱스트란의 생성방법 KR19980086717A (ko)

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