KR102501329B1

KR102501329B1 - 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법 및 이에 따른 가공 매실

Info

Publication number: KR102501329B1
Application number: KR1020220010645A
Authority: KR
Inventors: 오승희; 김지아; 김순동
Original assignee: 오승희; 김지아; 주식회사 위드바디
Priority date: 2022-01-25
Filing date: 2022-01-25
Publication date: 2023-02-21

Abstract

본 발명은 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법 및 이에 따른 가공 매실에 관한 것이다.
본 발명에 따른 가공 매실은 항암 효능, 항당뇨 효능 및 혈중 지질 개선 효능이 우수하다고 알려진 아미그달린을 다량 함유하면서도 아미그달린 분해로 인한 독성 물질이 생성되지 않는다. 따라서, 본 발명에 따른 가공 매실은 항암, 항당뇨 및/또는 혈중 지질 개선용 식품 조성물 또는 약학 조성물의 제조에 매우 유용하다.

Description

항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법 및 이에 따른 가공 매실{Method for processing plum with improved anti-cancer activity, anti-diabetes activity and effectiveness in improving blood lipid and processed plum using the same}

본 발명은 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법 및 이에 따른 가공 매실에 관한 것이다.

급속한 노령화 사회로 전환되면서 고혈압, 고지혈증, 당뇨를 비롯한 심혈관계 질환이나 암, 관절염 등의 만성질환 중 한 두 가지 이상을 갖고 있는 65세 이상의 노인이 90%를 차지하고 있다(박용서: 연세대 석사논문 2012). 이에 따른 의료비의 증가는 심각한 사회문제로 대두되고 있어 식생활 환경의 개선은 물론 이를 위한 새로운 식품 가공법의 필요성이 강조되고 있다.

매실은 매화나무 열매인 핵과류로 미숙과는 풋 매실이라 하며, 완숙과는 껍질의 색상에 따라 청매, 황매, 홍매로 나눈다. 매실에는 과육에 다량의 식이섬유와 폴리페놀성분, 피크르산(picric acid), 그리고 구연산, 사과산, 주석산과 같은 유기산이 풍부하게 함유되어 있으며 칼슘, 아연, 철, 마그네슘과 같은 미네랄을 함유한다. 또 분해되면 독성물질인 청산이 생기기는 하지만 비타민 17로 알려진 아미그달린이 함유되어 있다.

매실의 효능은 여타 과실의 기능성을 능가하는 변비 예방 효과와 더불어 항산화, 갈증과 숙취해소, 항염, 항균, 항암, 간 기능개선, 혈중지질개선, 골다공증예방, 소화 및 혈액순환촉진 등 다양한 효능이 있어 예로부터 질병을 예방하거나 건강을 위한 가공 재료로 많이 이용해 왔다.

매실에 함유된 성분 가운데 양적으로 가장 많이 함유된 식이 섬유질은 변비를 예방할 뿐만 아니라 항비만, 항당뇨, 혈중지질개선, 항 대장암 효과가 있다(위키백과: 식이섬유). 또 함유하는 여러 유기산가운데 특히, 구연산은 에너지 사이클(TCA-cycle)을 활성화함으로써 피로물질인 젖산의 양을 감소시키며 포도당의 에너지화를 촉진함으로써 혈당을 떨어트리는 작용이 있다(naver; 지식백과사전). 또 매실의 사과산은 섭취한 알코올이 산화될 때 소모되는 NAD를「사과산(malate)→옥살아세트산(oxaloacetate)→아스파르트산(aspartate)→사과산(malate)」회로를 통해 보충해 줌으로써 숙취를 해소하는 효과가 있으며, 알코올섭취로 생성된 혈중 지질의 양을 감소하는 효과도 있다(김순동 등, 청송군 사과 막걸리 결과보고서, 2010). 뿐만 아니라 매실에 함유된 카테츄산(catecchuic acid)은 해독, 살균, 장염의 치유와 뇌손상 후에 발생하는 뇌신경세포 사멸을 감소시킨다(이상원: 한림대학 석사논문 2018). 또, 피크르산(picric acid)은 혈관을 확장하여 항상성을 유지하며, 신경전달을 원활하게 하고 기관지의 확장과 폐포에서의 산소와 이산화탄소의 교환을 촉진한다(naver; 지식백과사전).

또한, 매실에 함유된 다양한 폴리페놀 성분은 항산화 물질로 각종 스트레스나, 흡연, 과음, 과식, 피로 등으로 생기는 활성산소종을 줄여 간, 췌장 등의 조직 손상을 예방하며, 체내 활성산소 생성계 효소류의 활성을 저해함으로써 각종 성인병을 예방한다. 특히 인슐린의 저항성을 완화시킴으로써 제2형 당뇨병을 완화한다(김지혜: 퀘르세틴의 항당뇨 효과 규명, 인제대학 석사논문 2011). 또한 매실의 주요 미네랄인 칼슘, 철, 아연, 마그네슘 등은 골다공증 예방에 관여한다.

한편, 매실의 종자와 과육에 존재하는 아미그달린(amygdalin)은 청산배당체로써 벤즈알데하이드 시안하이드린(benzaldehyde cyanhydrin)의 수산기에 포도당 한 분자가 베타결합하고 이 포도당 6번 탄소에 다시 한 분자의 포도당 1번 탄소의 수산기가 베타결합하고 있다. 매실과육에 존재하는 에멀신(베타글루코시다제)은 식물조직에 존재하는 복합효소로 아미그달린의 분해에 관여한다. 먼저 포도당 한 분자를 떼 내어 플루나신(prunasin)을 만들며 연속적으로 작용하여 나머지의 포도당도 떼어냄으로써 아미그달린을 분해시켜 청산(HCN)과 벤즈알데하이드를 생성한다. 상기 벤즈알데하이드와 청산은 강한 독성을 나타내며, 특히 청산은 헤모글로빈과 결합함으로써 호흡을 저해하여 심하면 사람의 생명을 잃게 하기도 한다.

하지만 청산배당체인 아미그달린은 열이나 산에 안정하며, 매실에 존재하는 에멀신의 작용을 받지 않고서는 쉽게 분해되지 않는다. 마치 포도당들이 베타 결합으로 연결된 섬유소가 체내에서 분해되지 않고 식이섬유로 남아 있듯 또한 시안기(-CN)를 가진 비타민 B₁₂(cyanocobalamin)가 체내에서 비타민 역할을 하듯 인체 내에서는 분해되지 않는다.

아미그달린의 함량은 매실의 품종과 숙도에 따라 차이가 있지만 대부분이 종자에 함유되어 있으며 과육에는 종자의 1/10~1/20에 해당하는 양이 존재한다. 이에 따라 종래의 매실 가공방법은 종자를 미리 제거하는 경우가 대부분이다. 그러나 종자를 제거할 때 조직의 손상을 막을 수 없으므로 손상 조직으로부터 유리된 에멀신이 아미그달린을 분해시키게 된다. 또 매실액을 제조할 경우 매실에 설탕이나 소금을 가해 숙성시킬 경우에도 설탕이나 소금의 삼투작용으로 매실 조직은 손상되며 살아있는 에멀신의 작용이 지속적으로 일어나 매실액이나 조직에 그 독성 분해물이 존재하게 된다. 또 숙성기간이 몇 개월 이상의 장기간 숙성으로 청산이 휘발되고 없다는 자료들이 있으나 휘발성이 낮은 벤즈알데하이드는 잔존할 가능성이 높다.

최근, 아미그달린이 항암작용과 진통작용을 하는 비타민 B17로 작용 한다는 다수의 연구사례들이 발표되고 있다. 이러한 발표에도 불구하고 아직은 식품위생법에서 식품에 함유하는 아미그달린의 함량을 제한하고 있는 것은 청산의 독성이 매우 크기 때문이다. 최근 발표된 아미그달린의 항암연구에 따르면 아미그달린은 특히 삼중음성유방암(Lee HM & Moon A: Amygdalin regulator apoptosis and adhesion in Hs578T triple negative breast cancer cells. Biomol. Ther. 24: 62-66, 2016)에 효과가 있고, 폐암가운데 85%를 차지하는 비소세포(非小細胞) 폐암(Qion L et al: Amygdalin mediated inhibition of non-small cell lung cancer cell invasion in vitro. Int. J. Clin. Exp. Pathol. 8: 5365-5370, 2015)과 전립선암(prostate cancer)(Makarevic J. et al: Amygdalin delays cell cycle progression and blocks growth of prostate cancer cells in vitro. Life Sci., 147: 137-142 2016), 자궁경부암(Chen Y. et al: Amygdalin induces apoptosis in human cervical cancer cell line Hela cells. Immunotoxicol. 35: 43-51 2013), 간암(Petrovske B.B.: Pharmacogn. Rev. 6: 1-5, 2012), 신장암(Juengel E. et al: Amygdalin blocks the in vitro adhesion and in vasasion of renal cell carcinoma cells by an integrin dependent mechanism. In. J. Mol. Med. 37: 483-850, 2016)에도 항암 효과가 확인되고 있다.

본 발명에서는 상기에서 언급한 바와 같이 매실이 기본적으로 가지고 있는 기능 중에서 특히 현대인의 주요 사망 원인이 되고 있는 심혈관계 질환을 비롯해서 암과 당뇨에 더욱 효과가 있는 가공 매실을 제시하고 그 효능을 암세포 생육저해 및 동물실험을 통해 검증코자 하였다.

종래의 가공 매실은 생 매실에 과잉의 설탕을 가해 추출하거나 발효숙성 하는 방법이 많이 이용되었다. 또, 추출액이나 발효 숙성액에 다양한 재료들을 혼합하여 맛과 기능성을 보완하는 가공을 해왔다. 이러한 가공법은 거의 모두가 아미그달린을 분해하는 효소가 매실 조직에 살아있어 아미그달린의 기능이 소실됨과 동시에 독성 물질을 생성함으로써 인체에 나쁜 영향을 끼치는 사례가 많다. 또 이러한 이유로 매실을 가공하기 이전에 아미그달린이 다량 함유된 종자를 제거하지만 이 과정에서도 매실 조직이 손상되기 때문에 에멀신에 의한 독성물질의 생성은 불가피하다.

본 발명자들은 아미그달린 분해효소인 에멀신을 불활성화시킨 후 가공한 가공 매실의 경우 항암 효능, 항당뇨 효능 및 혈중 지질 개선 효능이 우수하다고 알려진 아미그달린의 분해가 원천적으로 차단되어 독성물질이 생성되지 않는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

KR

10-2160163

B

본 발명의 목적은 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 아미그달린의 분해로 인한 독성 물질이 생성되지 않는 것을 특징으로 하는 가공 매실을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 가공 매실을 유효성분으로 포함하는 암 또는 당뇨의 예방 또는 개선용, 또는 혈중 지질 개선용 식품 조성물을 제공하는 데 있다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 (1) 매실을 수증기로 60분 내지 120분 동안 쪄서 익히는 전처리 단계; (2) 상기 전처리한 매실을 8 내지 10 중량%의 염수에 침지하여 매실의 수분함량이 35 내지 40 중량%가 될 때까지 염수 처리하는 단계; (3) 상기 염수 처리한 매실을 물에 침지하여 매실의 염도가 0.5 내지 1.5 중량%가 되도록 탈염하는 단계; (4) 상기 탈염한 매실을 건조시키는 건조 단계; 및 (5) 상기 건조한 매실에 가미액을 혼합한 혼합물을 가열한 후 실온에서 숙성시키는 단계;를 포함하는 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법에 관한 것이다.

상기 (1) 단계의 매실은 종자를 제거하지 않은 매실일 수 있다.

상기 (5) 단계의 가미액은 진피 분말, 상황버섯 분말, 홍차, 여주 분말, 다시마 분말 및 한천 분말 중에서 선택된 1종 이상의 열수 추출물에 당류를 혼합한 것일 수 있다.

또한, 상기 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명은 상기 방법에 따라 가공되어, 아미그달린의 분해로 인한 독성 물질이 생성되지 않는 것을 특징으로 하는 가공 매실에 관한 것이다.

또한, 상기 또 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명은 상기 가공 매실을 유효성분으로 포함하는 암 또는 당뇨의 예방 또는 개선용, 또는 혈중 지질 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 가공 매실은 항암 효능, 항당뇨 효능 및 혈중 지질 개선 효능이 우수하다고 알려진 아미그달린을 다량 함유하면서도 아미그달린 분해로 인한 독성 물질이 생성되지 않는다. 따라서, 본 발명에 따른 가공 매실은 항암, 항당뇨 및/또는 혈중 지질 개선용 식품 조성물 또는 약학 조성물의 제조에 매우 유용하다.

도 1은 5주간 가공 매실(2%)을 식이한 당뇨 흰쥐 췌장 조직을 헤마톡시린-에오신 염색하여 관찰한 광학현미경 사진이다. 이때, NC는 정상군, DM는 당뇨대조군, DN는 당뇨+가공하지 않은 매실 과육분말 2% 혼합 식이군, E1는 당뇨+종자제거 가공매실과육분말 2% 혼합식이군, E2는 당뇨+종자함유가공매실 과육분말 2% 혼합식이군을 의미한다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 일 측면은 (1) 매실을 수증기로 60분 내지 120분 동안 쪄서 익히는 전처리 단계; (2) 상기 전처리한 매실을 8 내지 10 중량%의 염수에 침지하여 매실의 수분함량이 35 내지 40 중량%가 될 때까지 염수 처리하는 단계; (3) 상기 염수 처리한 매실을 물에 침지하여 매실의 염도가 0.5 내지 1.5 중량%가 되도록 탈염하는 단계; (4) 상기 탈염한 매실을 건조시키는 건조 단계; 및 (5) 상기 건조한 매실에 가미액을 혼합한 혼합물을 가열한 후 실온에서 숙성시키는 단계;를 포함하는 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법에 관한 것이다.

(1) 매실 전처리 단계

먼저, 세척 후 물기를 제거한 매실을 수증기로 60분 내지 120분, 바람직하게는 60분 내지 100분, 더욱 바람직하게는 60분 내지 80분, 더욱 바람직하게는 60분 내지 70분 동안 쪄서 익힌다.

상기와 같이 매실을 수증기로 60분 이상 쪄서 익히는 경우 아미그달린 분해효소인 에멀신을 완전히 비활성화시킬 수 있어, 아미그달린 분해로 인한 독성 물질이 생성되지 않게 된다. 추가적으로, 매실을 수증기로 60분 이상 찌는 경우 매실의 과도한 신맛을 완화시킴으로써 기호도가 증진된다.

상기 찌는 시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 에멀신이 완전히 비활성화되지 않을 수 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 이미 에멀신이 모두 비활성화된 상태에서 추가적으로 가열하는 것이므로 경제적이지 않다.

상기 수증기의 온도는 100 내지 120 ℃, 바람직하게는 100 내지 110 ℃일 수 있다.

상기 매실은 종자를 제거하거나 제거하지 않은 것일 수 있으나, 아미그달린 함량 증대, 또는 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능 증대 면에서 종자를 제거하지 않은 것이 바람직하다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서, 종자를 제거한 매실의 경우 상기 열처리로 인해 아미그달린 함량이 열처리 전에 비해 약 45.6 ~ 45.8%로, 50% 이상 감소하였으나, 종자를 제거하지 않은 매실의 경우 상기 열처리로 인해 아미그달린 함량이 열처리 전에 비해 약 146.5 ~ 156.5%로, 50% 내외로 증가한 것을 구체적으로 확인하였다.

(2) 염수 처리 단계

상기 전처리한 매실을 8 내지 10 중량%의 염수에 침지하여 매실의 수분함량이 35 내지 40 중량%가 될 때까지 염수 처리한다.

상기 염수 처리는 매실의 조직을 손상시킴과 동시에 탈수시켜 이후의 가미액 침투 처리를 용이하게 할 목적으로 수행된다.

상기 염수 처리는 매실에 대하여 염수를 1 : 0.8 ~ 1.2 (w/v)의 비율로 첨가한 후 5 내지 10일간 침지하여 수행되는 것일 수 있다.

이때, 상기 염수는 매실에서 빠져나온 수분으로 인해 희석되지 않도록 정제염을 가하면서 일정 염도를 유지하는 것이 바람직하다.

(3) 탈염 단계

상기 염수 처리한 매실을 물에 침지하여 매실의 염도가 0.5 내지 1.5 중량%, 바람직하게는 0.8 내지 1.2 중량%가 되도록 탈염한다.

상기 탈염은 매실 조직에 침투한 염분을 빼내어 이후의 가미액 침투 처리를 용이하게 할 목적으로 수행된다.

상기 탈염 처리는 매실에 대하여 물을 1 : 0.8 ~ 1.2 (w/v)의 비율로 첨가한 후 20 내지 28시간 동안 침지하여 수행되는 것일 수 있다.

(4) 건조 단계

상기 탈염한 매실을 건조시킨다.

상기 건조는 이후의 가미액 침투 처리를 용이하게 할 목적으로 수행된다.

상기 탈염한 매실은 50 ~ 60 ℃의 건조실로 옮겨 수분함량이 35 ~ 40 중량% 범위가 될 때까지 10 ~ 15시간 동안 건조시킬 수 있다.

(5) 가미액 침투 단계

상기 건조한 매실에 가미액을 혼합한 혼합물을 가열한 후 실온에서 숙성시킨다.

상기 가미액은 본 발명의 가공 매실의 관능성을 더욱 좋게 하면서 가공 매실의 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능을 더욱 향상시키는 역할을 한다.

상기 가미액은 진피 분말, 상황버섯 분말, 홍차, 여주 분말, 다시마 분말 및 한천 분말 중에서 선택된 1종 이상의 열수 추출물에 당류를 혼합한 것일 수 있다.

일 구현예에 있어서, 상기 열수 추출물은 정제수 100 중량부에 진피 분말, 상황버섯 분말, 홍차, 여주 분말, 다시마 분말 및 한천 분말 중에서 선택된 1종 이상을 각각 0.1 내지 1 중량부, 바람직하게는 0.2 내지 0.8 중량부, 더욱 바람직하게는 0.4 내지 0.6 중량부로 첨가한 후 90 내지 110 ℃에서 0.5 내지 2 시간 동안 추출한 추출물일 수 있다. 상기 추출물은 면포 등을 이용하여 여과한 후 이용할 수 있다.

상기 당류는 과당, 물엿 중 황설탕 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.

일 구현예에 있어서, 상기 가미액은 상기 열수 추출물 100 중량부에 과당, 물엿 및 황설탕을 각각 1 내지 10 중량부, 바람직하게는 2 내지 8 중량부, 더욱 바람직하게는 4 내지 6 중량부로 첨가한 것일 수 있다.

일 구현예에 있어서, 상기 가미액은 상기 열수 추출물 100 중량부에 인공감미료인 아스파탐을 0.05 내지 0.1 중량부로 첨가한 것일 수 있다.

상기 건조한 매실과 가미액은 1 : 0.8 ~ 1.2 (w/v)의 비율로 혼합할 수 있다.

일 구현예에 있어서, 상기 가열은 60 내지 80 ℃, 바람직하게는 65 ~ 70 ℃에서 20 내지 28시간 동안 수행될 수 있다.

이후, 상기 열처리한 매실을 건져 내어 실온에서 20 내지 28시간 동안 숙성시킨다.

상기 매실과 가미액을 혼합하고, 가열한 후 실온에서 숙성시키는 과정은 2 ~ 3회 반복하여 수행하는 것이 매실에 가미액의 침투율을 높일 수 있다.

본 발명의 가공 매실은 상기 가미액을 5 내지 30 중량%, 바람직하게는 10 내지 20 중량%, 더욱 바람직하게는 12 내지 18 중량%로 포함한다.

상기와 같이 매실에 가미액을 침투시키는 경우 가미액을 침투시키지 않은 매실에 비해 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 더욱 향상된다.

(6) 가미액 성분의 건조 및 평형화

상기 가미액을 침투시킨 매실은 수분 함량이 35 ~ 40%가 될 때까지 건조시킬 수 있다.

이때, 상기 매실은 자외선등이 설치된 30 내지 50 ℃, 바람직하게는 35 내지 45 ℃의 무균실에서 1 ~ 2 일간 보관하여, 건조와 함께 상기 침투된 가미액을 평형화시킬 수 있다.

또한, 제품의 유통 중에 미생물의 오염을 방지하기 위하여 상기 가공 매실의 표면에 항균 활성이 높은 키토산-비타민 C를 0.001 ~ 0.005%, 바람직하게는 0.001 ~ 0.003%의 농도로 1 ~ 2회 분무할 수 있다.

상기 키토산-비타민 C 용액은 분자량 3,000 ~ 5,000 kDa의 시판 키토산 1 g을 1 %의 비타민 C 용액 100 mL에 녹인 원액을 제조한 후 증류수 1 L에 상기 원액 1 ~ 5 mL을 넣어 최종 농도를 조정할 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 측면은 상기 방법에 따라 가공되어, 아미그달린의 분해로 인한 독성 물질이 생성되지 않는 것을 특징으로 하는 가공 매실에 관한 것이다.

본 발명의 가공 매실은 매실의 종자와 과육에 존재하는 아미그달린의 분해에 관여하는 효소인 에멀신(베타글루코시다제)이 비활성화된 것이다.

본 발명의 가공 매실은 아미그달린이 가공 전에 비하여 30 내지 150 중량%, 바람직하게는 50 내지 150 중량%, 더욱 바람직하게는 100 내지 150 중량%로 포함되어 있다.

본 발명의 가공 매실에 대해서는 이미 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.

또한, 본 발명의 또 다른 측면은 상기 가공 매실을 유효성분으로 포함하는 암 또는 당뇨의 예방 또는 개선용, 또는 혈중 지질 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.

한편, 본 명세서에서 용어 “유효성분으로 함유하는”이란 가공 매실의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 가공 매실의 1일 투여량은, 250 내지 2500 mg/kg일 수 있으며, 바람직하게는 250 내지 2000 mg/kg일 수 있고, 더욱 바람직하게는 250 내지 1800 mg/kg 또는 250 내지 1500 mg/kg일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 250 내지 1250 mg/kg일 수 있고, 가장 바람직하게는 500 내지 1000 mg/kg일 수 있다. 본 발명의 가공 매실의 투여량의 상기 하한치 미만인 경우에는 암 또는 당뇨의 예방 또는 개선 효과, 또는 혈중 지질 개선 효과가 원하는 정도로 나타나지 않을 수 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 투여량이 증가하는 만큼 암 또는 당뇨의 예방 또는 개선 효과, 또는 혈중 지질 개선 효과가 증가하지 않을 수 있다. 본 발명의 가공 매실은 천연물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 가공 매실의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 암세포 생육 저해 활성 시험에서, 간암 세포, 전립선암 세포 및 폐암 세포에 대해 본 발명의 가공 매실 추출물을 처리한 결과 각 암세포의 생육을 현저히 저해하는 효과가 있음을 구체적으로 확인하였다(표 9 참조). 이는, 본 발명의 가공 매실이 다양한 암의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있음을 시사하는 것이다.

또한, 본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 당뇨 유발 마우스 모델에서 본 발명의 가공 매실을 식이한 흰쥐 시험군의 혈당 수치가 현저히 감소한 것을 구체적으로 확인하였다(표 10 참조). 이는, 본 발명의 가공 매실이 당뇨의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있음을 시사하는 것이다.

또한, 본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 당뇨 유발로 인해 혈중 지질 수치가 증가한 마우스 모델에서 본 발명의 가공 매실을 식이한 흰쥐 시험군의 혈중 중성지방 함량, 총콜레스테롤 함량, LDL-콜레스테롤 함량이 유의적으로 감소하고, HDL-콜레스테롤 함량이 유의적으로 증가함을 구체적으로 확인하였다(표 11 참조). 이는 본 발명의 가공 매실이 혈중 지질 수치의 개선에 유용하게 이용될 수 있음을 시사하는 것이다.

본 발명의 용어 "예방"이란, 상기 암 또는 당뇨를 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다. 또는 혈중 지질 수치의 증가를 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다.

본 발명의 용어 "치료"란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 암 또는 당뇨의 증상, 또는 혈중 지질 수치의 증가를 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미한다.

본 발명의 용어 "개선"이란, 본 발명의 가공 매실을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 것을 의미한다.

본 발명에 따른 식품 조성물은 식품학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 분말, 과립, 정제, 캡슐 등으로 제제화하여 기능성 식품으로 이용조할 수 있다. 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 식품 조성물은 예를 들어, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 다이어트바, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류 등일 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 식품 조성물은 커피 음료일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서 가공 매실 뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 가공 매실 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다. 상기 식품 조성물의 제형은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료일 수 있다.

상기 식품 조성물에서 상기 가공 매실의 함량은 0.001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 5 중량%, 더욱 바람직하게는 1 내지 3 중량%, 더욱 바람직하게는 1.5 내지 2.5 중량%일 수 있다.

또한, 본 발명은 가공 매실을 유효성분으로 함유하는 암, 당뇨 또는 고지혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.

액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.

본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물의 1일 투여량은 0.001-10 g/㎏일 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 가공 매실을 유효성분으로 포함하는 암 또는 당뇨의 예방 또는 개선용, 또는 혈중 지질 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. 건강기능식품이란, 가공 매실을 다양한 식품 소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 가공 매실의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태일 수 있다.

또한, 본 발명은 암, 당뇨 또는 고지혈증의 예방, 개선 또는 치료용 의약 또는 식품의 제조를 위한 가공 매실의 용도를 제공한다. 상기한 바와 같이 가공 매실은 암, 당뇨 또는 고지혈증의 예방, 개선 또는 치료를 위한 용도로 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 포유동물에게 유효량의 가공 매실을 투여하는 것을 포함하는 암, 당뇨 또는 고지혈증의 예방, 개선 또는 치료 방법을 제공한다.

여기에서 사용된 용어 “포유동물”은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.

여기에서 사용된 용어 “유효량”은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 해당 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 유효량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 수 있다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 예방, 개선 또는 치료 방법에 있어서, 성인의 경우, 가공 매실을 1일 1회 내지 수회 투여시, 0.001 g/kg 내지 10 g/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명의 치료방법에서 가공 매실을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.

이하, 본 발명에 따른 가공 매실에 대해 구체적인 실시예를 통해 상세히 설명하기로 한다.

<실시예>

재료

1) 매실: 2020년 6월에 경상북도 포항에서 수확한 품종 육영 L, 청매실(Prunus mume)을 실험재료로 사용하였다.

2) 과당: 국내산 분말과당(주, 썬앤지, 한국)을 사용하였다.

3) 물엿: 100% 옥수수로 제조한 맥아 물엿(샘표식품, 한국)을 사용하였다.

4) 황설탕: 청정원 유기농 황설탕(코스트코 코리아, 한국)을 사용하였다.

5) 아스파탐: 대경식품(한국)에서 생산한 제품을 사용하였다.

6) 진피: 국내산 귤피를 소금물로 씻어낸 후 자연 건조한 진피(두손애식품, 한국)를 사용하였다. 진피에는 니아신, 레티놀, 베타카로틴, 비타민 A, B1, B2, B6, C, E, P, 엽산을 비롯하여 다양한 플라보노이드가 함유한다(네이버 지식백과). 또, 진피에 함유된 헤스페리딘은 모세혈관 수축작용을 하는 비타민 P는 혈액순환과 성인병예방 및 항암효과를 있다. 또 아우랍텐도 항암효과가 있으며, 살페스테롤은 폐암과 유방암 및 면역력 활성효과를 나타내고, D-갈락토사민은 간세포독성을 제거하고 관절염을 개선하는 효과가 있다(네이버 지식백과).

7) 상황버섯: 유기농 상황버섯(문상영 유기농 장수상황버섯농가, 전남 장흥, 한국)을 사용하였다. 상황버섯은 항암, 면역력증진, 변비예방, 동맥경화예방 등 다양한 효과가 알려져 있다(네이버 지식백과).

8) 홍차: 홍차는 국내산 오설록(제주숲 홍차, 한국)을 사용하였다. 홍차는 완천발효차로써 항암, 항균, 항노화, 항비만효과가 있다(네이버 지식백과).

9) 여주: 여주분말제품(해품고야브랜드, 당진, 한국)을 사용하였다. 여주에는 식물성 인슐린이 함유되어 있어 항당뇨 효과가 있다.

10) 다시마: 포항 죽도시장에서 건 다시마를 구입하여 100 메쉬 입도로 분쇄하여 사용하였다. 다시마는 항콜레스테롤, 항고혈압, 항당뇨, 변비예방에 효과가 알려져 있다(woman.donga.com).

11) 한천: 한천에 함유된 중성다당류인 아가로오스(agarose)와 산성다당류인 아가로펙틴(agaropectin)은 유화 또는 겔화작용을 하며, 해독, 피부미용, 항변비 효능이 알려져 있다(한국민족문화대백과사전, 한천(寒天).

12) 소금: 정제염(도염원, 경기, 한국)을 사용하였다.

실시예: 가공 매실의 제조

(1) 매실을 깨끗하게 세척한 후 물기를 제거하였다. 물기를 제거한 매실을 찜 솥의 채판에 얹어 뜨거운 수증기가 매실 위로 오르게 하여 60분간 쪘다. 이 과정에서 매실의 종자와 과육에 존재하는 아미그달린의 분해에 관여하는 효소인 에멀신(베타글루코시다제)이 완전하게 불활성화된다. 에멀신이 불활성화된 매실은 종자를 제거하거나 종자가 있는 상태로 다음 단계를 수행한다.

(2) 상기 전처리한 매실 10 kg에 끓인 후 식힌 10 %(w/w) 소금물 10 L를 붓고 누름돌을 얹어 7일간 침지하여 매실의 수분함량이 35 ~ 40 %(w/w)이 되게 하였다. 염수처리 과정에서 매일 1회씩 염도계를 이용하여 염수의 염도를 측정하였으며, 매실에서 빠져나온 수분으로 희석된 염도를 정제소금을 가해 10 %(w/w)를 유지하였다.

(3) 상기 염수를 처리한 매실 10 kg에 끓인 후 40 ℃까지 식힌 물 10 L를 부은 후 24시간 동안 침지하여 매실의 잔류염도가 1 %(w/w) 내외가 되도록 탈염하였다.

(4) 탈염한 매실은 50 ~ 60 ℃의 건조실로 옮겨 수분함량이 35 ~ 40 %(w/w)가 될 때까지 약 10 ~ 15시간 동안 건조시켰다.

(5) 상기 매실에 미리 준비한 가미액을 1 : 1(w/w)의 비율로 혼합한 혼합물을 가열 솥에 넣고 65 ~ 70 ℃로 24시간 동안 가열하였다. 이후, 매실을 건져내고 25 ℃에서 24시간 동안 숙성시켰다. 이와 같은 과정을 2~3회 반복하여 매실의 조직 내로 상기 가미액을 침투시켰다. 이 과정 중에 가미액이 농축되면 정제수를 부어 초기의 농도가 되도록 조절하였다.

상기 가미액은 정제수 1 kg에 진피 분말, 상황버섯 분말, 홍차 분말, 여주 분말, 다시마 분말 및 한천 분말을 각각 5 g씩 넣고 1 시간 동안 끓여 추출한 열수 추출물을 면포로 여과한 후, 상기 여과액에 과당, 물엿, 황설탕을 각각 50 g씩, 및 아스파탐 0.8 g을 첨가하여 제조한 것이다.

(6) 상기 가미액을 침투시킨 매실은 자외선등이 설치된 40 ℃의 무균실로 옮겨 수분함량이 35 %(w/w)가 될 때까지 1 ~ 2일간 두어 평형화와 건조를 병행하였다.

<시험예>

시험예 1: 가공 매실의 특성

시험방법

(1) 아미그달린 함량 측정

아미그달린의 함량은 자외선 검출기(M720)와 M930펌프(Youngleen, Korea)가 부착된 고속 크로마토그래피(HPLC)로 214 nm에서 분석하였다. 컬럼은 팩C18 UG120(4.6m x 250m 5μm, Shiseido, Japan), 컬럼오븐은 CTS30(Youngleen, Korea)을 사용하였고, 온도 35℃, 이동상은 25% 메탄올을 사용하였으며 유속은 1 mL/분으로 하였다. 시료는 70% 에탄올 추출액을 시린지를 사용하여 10~20 μL 주입하였다. 함량의 측정은 표준품 아미그달린(Sigma Chem. Co. Mo, USA)을 10~100μg/mL로 주입하여 얻은 피크의 면적으로 구한 표준곡선에 의하여 함량을 산출하였다.

(2) 총 유기산 함량을 구하기 위한 산도 측정

매실에 함유된 총 유기산의 함량은 pH-메타를 이용한 산도의 측정으로 다음과 같이 측정하였다. 즉, 매실의 과육 1 g을 폴리트론 균질기(Polytron Homogenizer)로 파쇄한 후 증류수를 가하여 100 mL로 채운 후 0.1N-NaOH(f: 1.0000)로 pH가 8.3이 될 때까지 소비된 0.1N-NaOH 소비량을 구한 후 구연산 양으로 환산하였다.

(3) 에멀신의 활성도 측정

에멀신의 활성도 측정을 위한 효소액은 최 등의 방법(Choi YB, Kim KS, Rhee JS: Hydrolysis of soybean isoflavone glucosides by lactic acid bacteria. Biotechnol Lett 24: 2113-2116, 2002)에 따라 매실 과육 20 g에 80 mL(w/v)의 증류수를 첨가하고 1분간 균질화(400 rpm, Poytronⓡ PT 2100 Homogenizers, Kinematica AG, Luzern, Switzerland)한 후 이를 8,000×g에서 10분간 원심분리한 상등액을 사용하였다. 기질 용액은 0.2 M 소듐포스페이트 완충액(pH 7.0)에 5 mM이 되게 파라니트로페닐 베타디글루코사이드(pnitrophenyl-β-D-glucoside: PNPG)를 녹여 사용하였다. 효소반응은 기질용액 0.6 mL에 효소액 0.2 mL를 넣어 37 ℃에서 20분간 반응시킨 다음 2 M 소듐카보네이트(sodium carbonate) 용액 0.5 mL를 첨가하여 15,000×g에서 5분간 원심분리하여 얻은 상등액을 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 효소활성은 매실 1 g에 의해 1분 동안에 생성한 파라니트로페놀(pnitrophenol)(Sigma Chem. Co. Mo, USA)의 양을 표준곡선으로부터 구하여 1분간 파라 니트로페놀 1 μg을 생성하는 능력을 1 유니트(unit)로 하였으며, 상대적 활성도는 무처리에 대한 %로 나타내었다.

(4) 관능평가

관능평가는 식품공학을 전공하는 대학생 20명의 관능요원에 의하여 5점 채점법(Herbert A & Juel LS: Sensory evaluation practices. 2nd ed, Academic Press, 66-94, 1993)으로 평가하였으며 신맛, 짠맛, 단맛, 쓴맛 및 쫄깃한 맛은 아주 적다 또는 아주 약하다(1점), 적다 또는 약하다(2점), 보통이다 또는 적당하다(3점), 많다 또는 강하다(4점), 아주 많다 또는 아주 강하다(5점)로, 종합적인 기호도는 아주 나쁘다(1점), 나쁘다(2점), 보통이다(3점), 좋다(4점), 아주 좋다(5점)로 평가하였다.

(5) 통계 분석

상기 성분분석 결과는 3반복으로 실험하여 평균치와 표준편차로 나타내었다. 관능검사 결과는 식품을 전공하는 대학생으로 구성된 20명의 관능요원에 의하여 평균치와 표준편차로 나타내었다.

시험결과

1-1: 열처리 조건에 따른 에멀신의 불활성화

매실 과육에 존재하는 아미그달린의 분해에 관여하는 에멀신을 불활성화 하기 위한 열처리 조건을 찾기 위하여 매실 1 kg을 채판에 얹어 찜 솥으로 가열하여 생긴 100 ℃의 수증기로 80분간 열처리하면서 20분 간격으로 시료를 채취하고 상기의 에멀신의 활성도 측정방법에 준하여 측정한 후 하기 표 1에 나타내었다.

처리시간 (분/100 ℃)	활성도 (유니트/매실 g)	상대적 활성도 (%)
0	0.45 ± 0.02^a1)	100.00 ± 5.01^a
20	0.32 ± 0.01^b	71.11 ± 2.22^b
40	0.08 ± 0.00^c	17.78 ± 0.89^c
60	0.00 ± 0.00^d	0.00 ± 0.00^d
80	0.00 ± 0.00^d	0.00 ± 0.00^d

¹⁾세로로 서로 다른 문자(a~d)는 5% 수준에서 유의성이 있음을 나타냄.

상기 표 1을 살펴보면, 매실을 100 ℃의 수증기로 열처리하는 경우 열처리 시간이 길어짐에 따라 에멀신의 상대적 활성도가 급격하게 감소되었고, 60분 이상 처리하는 경우 에멀신이 완전히 불활성화되는 것을 확인할 수 있다.

1-2: 열처리 조건에 따른 산미의 조절

매실은 구연산을 비롯하여 주석산, 푸말산, 사과산 등 다양한 유기산을 함유하며 구연산의 함량이 가장 높다. 매실에 함유된 구연산은 에너지 사이클(TCA-사이클)을 활성화하는 주요 성분이지만 과도한 신맛을 띠게 하여 기호도를 떨어트리는 원인 물질이기도 하다.

하기 표 2에서는 에멀신을 불활성화시키는 열처리 과정 중에 산미의 감소 정도를 조사하였으며 에멀신의 불활화 조건인 100 ℃에서 60분간 열처리 하였을 때 매실의 유기산이 49%가 감소하였으며 이때의 신맛에 대한 기호도가 2.85점으로 가장 적당한 것으로 나타났다. 그러므로 100 ℃에서의 60분간 열처리가 에멀신의 불활성화 최적 조건인 동시에 신맛을 적당하게 조절하는 최적 조건임을 알 수 있다.

처리시간 (분/100 ℃)	총 유기산 함량 (g/매실 100 g)	무처리군에 대한 상대적 비율 (%)	신맛의 정도¹⁾ (점수)
0	1.75 ± 0.11^a2)	100	4.47 ± 0.31^a
20	1.40 ± 0.08^b	71	4.03 ± 0.35^ab
40	0.91 ± 0.04^c	65	3.26 ± 0.28^bc
60	0.72 ± 0.03^d	51	2.85 ± 0.23^c
80	0.54 ± 0.03^d	39	2.33 ± 0.18^d

¹⁾ 신맛은 관능평가 요원 20명에 의하여 아주 약하다(1점), 약하다(2점), 보통이다(3점), 강하다(4점), 아주 강하다(5점)로 평가하여 평균값±표준편차로 나타냄

²⁾ 세포로 a~d의 서로 다른 문자는 5% 수준에서 유의성이 있음을 나타냄.

1-3: 매실의 열처리 조건에 따른 과육의 아미그달린 함량 변화

매실에 함유된 아미그달린은 항암 효과 등을 나타내는 비타민 B17라는 주장과 독성 물질을 생성하는 불필요한 성분이라는 주장이 엇갈리고 있다. 따라서 열처리에 의한 아미그달린의 함량 변화를 조사하기 위하여 100 ℃의 수증기로 80분 동안 열처리하는 중에 20분 간격으로 시료를 채취하여 상기의 실험방법에 따라 HPLC로 아미그달린의 함량을 측정하여 하기 표 3에 나타내었다.

처리시간 (분/100 ℃)	아미그달린 함량 (mg/100g 매실)
처리시간 (분/100 ℃)	종자 제거 과육	종자 함유 과육
0	27.51 ± 1.38^a1)	27.81 ± 1.29^c
20	21.45 ± 0.99^b	29.77 ± 1.06^c
40	15.67 ± 0.94^c	35.80 ± 2.86^b
60	12.55 ± 0.60^d	40.75 ± 2.05^ab
80	12.60 ± 0.51^d	43.52 ± 2.14^a

상기 표 3을 살펴보면, 종자를 제거한 매실 과육의 아미그달린 함량은 열처리하기 직전에 27.51 mg/100g이었던 것이 열처리 시간이 길어짐에 따라 감소하여 60분 처리에서는 최소치인 12,60 mg/100g을 나타내었다. 이와 같은 결과는 아미그달린의 분해에 관여하는 에멀신이 100 ℃에서 60분간의 열처리에 의하여 완전하게 불활성화 된 점을 감안할 때 아미그달린이 분해되어 감소된 것이 아니라 열에 의하여 조직 밖으로 용출되어 나간 것임을 알 수 있다.

또한, 종자를 함유하는 매실 과육에서의 아미그달린 함량은 초기 27.81 mg/100g에서 열처리 60분에서 40.75 mg/100g, 80분에서 43.52 mg/100g으로 다소 증가하는 경향을 보였으며, 60분 처리와 80분 처리 사이에는 유의차가 없었다. 이러한 현상은 종자에 많이 함유된 아미그달린이 열처리에 의하여 과육으로 옮아갔기 때문으로 보인다. 본 공정의 목적은 아미그달린의 분해효소인 에멀신의 불활성화에 있으며, 아미그달린의 제거에 목적을 두지 않았다. 아미그달린은 과실에 존재하는 에멀신에 의하지 않고서는 체내에서는 분해되지 않는다는 일반적인 사실을 고려할 때 열처리의 최적 시간은 종자를 제거한 매실이나 종자를 제거하지 않은 과실 모두가 100 ℃에서 60분간 처리가 최적 조건이라 할 수 있다.

1-4: 염수 처리 조건에 따른 매실의 탈수량 변화

본 발명의 매실 가공방법에서의 염수처리 단계는 소금을 조직 내로 침투시켜 염절임 식품을 만드는데 그 목적이 있는 것이 아니라 소금의 삼투작용을 활용하여 조직을 손상시키고 손상된 조직을 통해 가미액을 침투시키는데 그 목적을 두었다. 소금에 의한 매실 조직의 손상 정도는 탈수되는 양으로 알 수 있다. 이때 지나치게 많은 양의 소금을 처리한다면 탈염이 어렵고, 조직이 과도하게 손상됨으로써 주요성분이 많이 소실되는 문제점이 있다.

이에 따라 본 발명에서는 피클 제조나 일반 염절임 식품 제조 시에 흔히 사용하는 염농도인 10 %(w/w)로 고정하고, 염수의 온도 및 처리시간에 따른 탈수 조건을 조사하였다. 즉, 매실 10 kg에 끓인 후 식힌 10 %(w/w)의 소금물 10L을 부은 후 누름돌을 얹어 10일간 탈수하면서, 1일 간격으로 불어난 염수의 양을 측정하였으며, 매실 100 g당 우러나온 물의 양(g)을 표 4에 나타내었다. 또 염수의 염도는 매일 일정시간에 측정하였으며 시판 정제소금을 녹여 염도를 10 %(w/w)로 유지하였다.

처리기간 (일수)	탈수량 (g/100g 매실)
	종자 제거 매실				종자 함유 매실
	30 ℃	40 ℃	50 ℃	60 ℃	30 ℃	40 ℃	50 ℃	60 ℃
1	5.1	11.0	20.1	32.0	3.3	7.1	17.0	26.3
2	10.0	15.1	27.2	38.3	8.2	12.0	21.2	30.4
3	15.3	20.2	34.0	48.5	11.4	18.2	29.3	35.2
4	20.0	27.1	40.3	48.5	17.0	22.5	32.2	35.3
5	25.3	35.3	49.7	48.4	21.2	28.4	35.8	35.5
6	34.5	42.1	49.0	48.5	27.3	32.3	35.7	35.4
7	40.0	49.2	49.1	48.3	31.3	35.6	35.7	35.4
8	42.7	49.0	49.2	48.3	32.4	35.6	35.6	35.5
9	47.0	49.1	49.0	48.5	33.2	35.6	35.7	35.3
10	45.9	48.8	49.2	48.4	35.4	35.6	35.8	35.3

상기 표 4를 살펴보면, 종자를 제거한 매실에서의 탈수량은 30 ℃에서는 10일째에 45.9 g/100g으로 최대량을 나타내었다. 그리고 40 ℃에서는 7일째에 최대 탈수량 49.2 g/100g을 나타내었으며 50℃에서는 5일째에 최대 탈수량 49.7g/100g, 60℃에서는 3일째에 최대 탈수량 48.5g/100g을 나타내었다.

또한, 종자를 함유하는 매실에서의 최대 탈수량은 30 ℃에서는 10일째에 35.4 g/100g을, 40 ℃에서는 7일째에 35.6 g/100g을, 50 ℃에서는 5일째에 35.8 g/100g을, 60 ℃에서는 3일째에 35.2 g/100g을 각각 나타내었다. 온도가 높아지고, 시간이 길어질수록 탈수량이 증가하였다. 30 ℃에서는 10일간의 기간이 소요되었고, 50~60 ℃에서는 탈수 시간은 빨라지나 수분 이외의 매실 성분이 용출되는 문제점이 나타나 최적 탈수 온도는 40 ℃라 확인되었다. 종자를 제거하지 않은 매실에서 최대 탈수량이 낮은 것은 수분함량이 90%가 되는 과육이 약 80%를 차지하고, 수분함량이 낮은 종자가 차지하는 비율이 20%로 높기 때문으로 보인다.

1-5: 매실의 가공단계별 아미그달린의 함량변화

매실에 함유된 아미그달린은 비록 독성을 지닌 청산을 함유하고 있으나 가공 제품 내에 이를 분해하는 에멀신(베타글루코시다제)이 존재하지 않거나 불활성화한 상태가 되면 당연히 청산이나 벤즈알데하이드와 같은 독성물질은 생성되지 않는다. 또 인체 내에는 아미그달린을 분해하는 효소가 존재하지 않으므로 본 발명에서의 매실가공제품은 아미그달린으로 인한 위해는 없다할 것이다. 하지만 현행 위생법상에서 그 함량을 제한하고 있으므로 본 발명의 가공단계별 아미그달린의 함량을 HPLC로 측정하여 하기 표 5에 나타내었다.

가공단계	종자 제거 매실 가공품		종자 함유 매실 가공품
가공단계	함량(mg/100g)	누진감소율(%)	함량(mg/100g)	누진감소율(%)
원재료	27.51±1.38^a1)	0	27.81±1.29^c	100
1단계 후	12.55±0.60^b	54	40.75±2.05^a	147
2단계 후	11.25±0.55^bc	59	35.52±1.83^b	128
3단계 후	9.44±0.41^cd	66	32.83±1.56^c	118
4단계 후	8.72±0.40^d	68	30.45±1.25^c	109
5단계 후	8.12±0.39^d	69	30.18±1.54^c	109

상기 표 5를 살펴보면, 매실에 존재하는 에멀신의 불활성화를 위해100 ℃에서 60분간의 열처리하는 제1단계 공정을 거친 후 종자를 제거한 매실은 아미그달린 함량이 12,55 mg/100g으로 최초 함량의 54%가 감소하였다. 이러한 감소는 효소에 의해 분해된 것이 아니라 열처리 시에 빠져 나간 것이다. 종자를 함유한 매실의 경우는 40.75 mg/100g으로 초기량의 47%가 증가하였다. 이는 열처리에 의하여 종자에 있던 아미그달린이 과육으로 옮아간 때문으로 보인다. 제2단계 공정인 염수 처리 공정에서는 종자 제거 매실에서는 제1단계 처리 후에 비해 5%가 더 감소되었고, 종자 함유 매실에서는 제1단계 처리 후에 비해 19%가 더 감소되었다. 이러한 결과는 매실의 탈수량이 증가한 것에 비해 현저하게 낮은 값으로 아미그달린의 물에 녹지 않는 성질 때문으로 보인다. 제3단계인 탈염 공정이나 제4단계인 가미액 침투 공정에서는 아미그달린의 함량 변화에 유의차가 없었다. 이러한 현상은 에멀신의 불활성화에 의한 아미그달린의 분해량이 전무하고 물에 대한 용해도가 낮은데 기인한 결과로 보인다.

1-6: 가공 매실의 저장 기간 경과에 따른 아미그달린 함량 변화

아미그달린이 함유된 수많은 식품들은 저장 중에 식재료에 존재하는 에멀신이나 오염 미생물이 생성하는 베타글루코시다제의 작용에 의하여 아미그달린이 분해됨으로써 그 함량이 감소하는 반면에 그 분해 생성물에 의해 독성이 생긴다. 본 발명에서는 앞서 제1단계에서의 에멀신의 불화성화 정도를 한번 더 확인하는 실험이라 할 수 있으며 동시에 제품에 함유하는 아미그달린의 함량을 제시하기 위한 실험이다. 실시예에 의해 제조된 가공 매실을 15 ℃에서 7주간 보관하면서 아미그달린의 함량 변화를 HPLC로 측정하여 하기 표 6에 나타내었다.

저장기간(주)	종자 제거 가공 매실 (mg/100g)	종자 함유 가공 매실 (mg/100g)
0	8.12 ± 0.39	30.18 ± 1.54
1	8.40 ± 0.38	30.02 ± 2.06
2	8.22 ± 0.29	29.88 ± 2.16
3	8.35 ± 0.33	30.22 ± 2.05
4	8.20 ± 0.27	30.25 ± 2.14
5	8.18 ± 0.29	31.36 ± 1.99
6	8.23 ± 0.31	30.54 ± 1.47
7	8.15 ± 0.32	30.45 ± 1.79

상기 표 6을 살펴보면, 종자를 제거하고 가공한 매실과 종자를 제거하지 않고 가공한 매실의 초기 아미그달린의 함량은 각각 8.12 mg/100g 및 30.18 mg/100g이었다. 그러나 7주간 저장하는 동안 종자를 제거하고 가공한 매실은 8.12~8.35 mg/100g범위였고, 종자 함유 가공매실의 경우는 30.18~30,54 mg/100g 범위로 각각 저장 기간에 따른 통계학적 유의차가 없었다. 이러한 결과로부터, 제1단계에서의 에멀신의 불활성화 처리가 완전하게 이루어졌음을 확인할 수 있으며, 저장 중에 아미그달린의 분해로 인한 독성물질의 생성이 없음을 확인할 수 있었다.

1-7: 가공 매실의 관능평가

20명의 관능요원에 의하여 최종 제품에 대한 관능평가를 수행한 결과를 하기 표 7에 나타내었다.

관능평가 항목	종자 제거 가공 매실	종자 함유 가공 매실
신맛	2.84 ± 0.25	3.01 ± 0.28
짠맛	3.02 ± 0.22	2.98 ± 0.22
단맛	3.40 ± 0.34	3.29 ± 0.27
쓴맛	1.32 ± 0.12	1.54 ± 0.09
쫄깃한 맛	3.84 ± 0.25	3.50 ± 0.29
종합적인 기호도	4.18 ± 0.30	3.96 ± 0.33

상기 표 7을 살펴보면, 신맛, 짠맛, 단맛, 쓴맛, 쫄깃한맛 및 종합적인 기호도는 종자를 제거한 가공 매실이나 제거하지 않은 가공 매실 간의 유의적인 차이는 없었다. 두 제품 모두 신맛, 짠맛, 단맛 모두 2.5점 이상에서 3.4점 이하로 ‘적당하다’로 나타났고, 쓴맛은 1,32~1.54점으로 ‘아주 약하다’로 평가되었다. 쫄깃한 맛이 3.50~3.84점 수준으로 ‘좋다’로 평가되었으며 종합적인 기호도 역시 3.96~4.18점 범위로 “좋다”로 평가되었다.

1-8: 가공 매실을 이용한 식품

1) 매실 분말: 실시예의 가공 매실을 냉동진공건조 또는 진공감압냉풍건조, 냉풍건조기에서 수분함량4-5%이 되게 건조한 후 각각 2-4 g씩 포장하여 제품화하였다.

2) 매실 농축액: 실시예의 가공 매실 1중량부, 정제수 10 중량부, 발효홍삼 0.02 중량부, 수용성고분자 키토산 0.002 중량부를 혼합한 후 가압농축한 농축액(수분함량 30%)을 10g 단위로 포장하였다.

3) 매실환: 실시예의 가공매실 1 중량부, 정제수 10 중량부, 다시마가루(100 mesh입자) 5 중량부, 진피가루 2 중량부, 찹쌀가루 10 중량부, 수용성고분자 키토산 0.002 중량부 및 발효홍삼 0.02 중량부를 넣어 반죽하고 환으로 성형하여 제품화하였다.

4) 매실 젤리: 실시예의 가공 매실 1 중량부, 정제수 10 중량부, 한천 0.2 중량부, 다시마가루(100 mesh입자) 1 중량부, 진피가루 2 중량부, 수용성고분자 키토산 0.002 중량부를 혼합하고 당업계의 통상적인 방법에 따라 젤리화하여 제품화하였다.

5) 매실 음료: 실시예의 가공 매실 1 중량부, 정제수 10 중량부, 발효홍삼 0.02 중량부, 수용성고분자 키토산 0.002 중량부를 혼합한 후 당업계의 통상적인 방법에 따라 음료로 제품화하였다.

시험예 2: 가공 매실의 항암 효과

시험방법

항암효과를 검정하기 위한 실험은 인간의 간암세포(HEP3B: Hepatocellular carcinoma, Human), 폐암세포(A549: Lung carcinoma, Human), 전립선 암세포(DU145: prostate carcinoma, Human)를 사용하였다.

간암세포(Hep3B)와 전립선암 세포(DU145)는 DMEM 배지(GIBCO, USA)에, 폐암세포(A549)는 RPMI-1640 배지(GIBCO, USA)에 각각 10%의 가열하여 불활성화한 태아소혈청fetal bovine serum 및 1% 항생제(HyClone Laboratories Inc.)를 가해 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 계대 배양하였고, 48시간마다 트립신-EDTA(HyClone Laboratories Inc.)를 이용하여 세포를 부유상태로 만든 다음 1×10⁴cells/mL로 분주하여 계대 배양하였다.

세포의 증식 및 저해활성의 측정은 세포의 단백질을 염색하는 방법인 SRB (Sulforhodamine B) 분석을 행하였다. 즉, 배양한 간암세포(Hep3) 및 전립선암세포(DU145)를 10% FBS 함유 DMEM 배지로, 폐암세포(A549)는 10% FBS 함유 RPMI-1640 배지에서 배양한 배양액을 각각 4.0∼5.0×10⁴ cell/mL로 희석하여 96 웰 플레이트(well plate)의 각 웰(well)에 100μL씩 첨가하여 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양한 다음, 시료의 70% 에탄올 추출물을 40℃에서 감압 농축하여 에탄올을 제거시킨 추출액을 가공매실 양으로 1~5g/100μL가 되도록 조정하여 암세포 배양액에 100μL씩 첨가하여 48시간 동안 추가로 배양하였다.

배양이 끝난 다음 상등액을 제거하고, 빙냉의 10% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid: TCA) 용액 100 μL를 가해 4 ℃에서 1시간 동안 방치 후, 증류수로 4∼5회 세척하여 TCA를 제거하고 실온에서 플레이트를 건조하였다. 건조 후, 각 웰(well)에 1 %(w/v) 아세트산에 용해시킨 0.4 %(w/v) SRB 용액을 100 μL씩 첨가하여 상온에서 30분 동안 염색하였다. 단백질과 결합되지 않은 SRB 염색액은 1 %(w/v) 아세트산 용액으로 4∼5회 세척, 건조한 후 10 mM 트리스 완충용액(Tris buffer) 100 μL을 첨가하여 염색물을 용해시켜 540 nm에서 마이크로플레이트 리이더(Microplate Reader, Molecular Devices, USA)를 이용하여 흡광도를 측정하였다(Rubinstein 등: Comparison of in vitro anticancer drug-screening data generated with a tetrazolium assay versus a protein assay against a diverse panel of human tumor cell lines. J. Natl. Cancer Inst. 82:1113-1118, 1990). 암세포주의 생육억제 활성은 무첨가군에 대한 상대적 활성(%)으로 나타내었으며, 별도로 동일한 방법으로 가공전의 매실과 가공후의 매실을 상호 비교하였다. 상기 항암실험 결과는 3반복으로 실험하여 평균치와 표준편차로 나타내었다.

시험결과

실시예에 따른 가공 매실과 가공하지 않은 매실의 항암 효과를 비교하기 위해, 대조군으로써 가공하지 않은 매실의 에탄올 추출물을 감압건조한 후 증류수를 가하여 매실의 농도로 환산하여 1~5 g/100 ㎕ 범위에서 농도를 높여가면서 각 암세포주의 생육에 대한 저해 활성을 측정하여 하기 표 8에 나타내었다. 하기 표 8은 무처리군에 대한 상대적 생육 저해율(%)을 나타낸 것이다.

가공 전 매실의 에탄올 추출물의 암세포 생육 저해 활성

암세포의 종류	매실 추출물의 농도(매실 g¹⁾/100 ㎕)
암세포의 종류	0²⁾	1	3	5
간암세포(Hep3B)	0	3.2^b,NS,3)	5.5^ab,NS	5.8^a,NS
전립선암세포(DU145)	0	4.0^b	6.8^ab	8.7^a
폐암세포(A549)	0	4.1^b	7.3^ab	9.3^a

¹⁾ 가공 전 매실의 70% 에탄올 추출물을 40 ℃에서 감압농축하여 에탄올을 제거시킨 후 매실의 양으로 1~5 g/100 ㎕이 되도록 조정하여 첨가, 배양하여 암세포에 대한 생육 저해율을 측정함

²⁾ 무처리군

³⁾모든 값은 3회 측정한 평균값이며, 세로로 서로 다른 문자 a~c는 5% 수준에서 유의성이 있음을 나타내고, 가로로 서로 다른 문자 A, B는 5% 수준에서 유의성이 있음을 나타냄

상기 표 8을 살펴보면, 간암세포(Hep3B)에서는 1 g/100μL에서 5 g/100μL로 추출물의 농도가 증가함에 따라 암세포에 대한 생육 저해 활성이 3.2%에서 5.8%로 미미한 증가를 나타내었다. 전립선암세포(DU145)와 폐암세포(A549)에서도 간암세포와 유사한 경향을 나타내었으며 각 암세포간의 유의적인 차이를 보이지 않았다.

실시예 1의 가공 매실을 70 % 에탄올로 추출한 후 감압건조하여 에탄올을 제거하고, 각각의 암세포 배지에서 4.0~5.0x10⁴ cell/m로 증식시킨 간암세포(hep3B), 전립선암세포(DU145) 및 폐암세포(A549) 배양액에 가공매실 1~5g/100μL이 되도록 조정하여 각각 100μL씩 첨가한 후 48시간 동안 배양하였을 때 암세포의 생육 저해율(%)을 측정한 결과를 하기 표 9에 나타내었다.

실시예에 따른 가공 매실의 에탄올 추출물의 암세포 생육 저해 활성

암세포의 종류	종자 제거 가공 매실 추출물 (매실 g¹⁾/100 ㎕)				종자 함유 가공 매실 추출물 (매실 g¹⁾/100 ㎕)
암세포의 종류	0²⁾	1	3	5	0²⁾	1	3	5
간암세포(Hep3B)	0	7.5^cB.3)	20.4^bB	33.8^aB	0	13.4^cB	32.9^bB	57.8^bB
전립선암세포(DU145)	0	6.3^cB.	18.5^bB	30.4^aB	0	12.6^cB	35.5^bB	55.4^bB
폐암세포(A549)	0	10.3^cA	26.8^bA	43.7^aA	0	18.3^cA	49.4^bA	62.7^aA

¹⁾ 가공 매실의 70% 에탄올 추출물을 40 ℃에서 감압농축하여 에탄올을 제거시킨 후 가공 매실의 양으로 1~5 g/100 ㎕이 되도록 조정하여 첨가, 배양하여 암세포에 대한 생육 저해율을 측정함

²⁾ 무처리군

상기 표 9를 살펴보면, 암세포의 생육 저해율은 종자를 제거한 경우, 농도에 비례하여 간암세포는 7.5%에서 33.8%로, 전립선암세포는 6.3%에서 30.4%로, 폐암세포에서는 10.3%에서 43.7%로 증가하였다. 종자를 제거하지 않은 경우에도 간암세포는 13.4%에서 57.8%로, 전립선암세포는 12.6%에서 55.4%로, 폐암세포에서는 18.3%에서 62.7%로 비례적으로 증가하였다. 암세포별 저해율은 폐암세포가 간암이나 전립선암세포에 비해 유의적으로 높았다. 이와 같이 본 발명의 가공 매실은 매실이 가지는 기존의 효능에 비하여 항암 효능이 더욱 향상되었다.

시험예 3: 가공 매실의 항당뇨 및 혈중지질 개선 효과

시험방법

(1) 실험동물과 실험식이의 조제

실험동물은 5주령의 평균체중이 140±10 g인 Sprague-Dawley계 SPF/VAF outbred rats(Orient Ltd., Sungnamsi, Korea)를 사용하였다. 기본식이는 AIN-76 다이어트(Teklad, USA)(15)를 기본으로 하여 조제하였다. 실험군은 군별 10 마리씩으로 1주일간 환경에 적응시킨 후 정상대조군(NC), 당뇨대조군(DM), AIN-76 다이어트에 가공하지 않은 매실 과육을 동결건조한 분말을 2%(w/w) 혼합한 식이를 급여한 군(DN), AIN-76 다이어트에 종자를 제거한 가공 매실의 과육을 동결건조한 분말을 2%(w/w) 혼합한 식이를 급여한 군(E1), AIN-76 다이어트에 종자를 제거하지 않은 가공 매실의 과육을 동결건조한 분말을 2%(w/w) 혼합한 식이를 급여한 군(E2)의 5개 군으로 구분하여 5주간 사육하였다. 사육장은 스텐레스 스틸 케이지를 사용하고, 온도 및 습도는 23±2 ℃, 60±5%로 조정하고, 명암주기는 12시간 간격으로 설정하고, 물과 사료의 섭취는 자유 섭취시켰다.

(2) 당뇨 유발 방법

스트렙토조토신(Streptozotocin: STZ, Sigma Chem. Co. Mo, USA)을 0.1 M 시트레이트 완충용액(pH 4.3)에 녹여 체중 250g 이상인 실험동물을 대상으로 55 mg/kg 농도로 대퇴부 근육에 주사하였다. STZ 투여 48시간 후 공복 시에 꼬리정맥으로부터 취한 혈액의 혈당농도가 300 mg/dL 이상인 동물을 실험에 이용하였다.

(3) 혈당의 측정

혈당은 글루코테스타(Gluco-Tester, Life Scan lnc., USA)로 매일 오전 10~12시에 측정하였으며, 공복 시의 꼬리부위 혈관에서 란셋으로 채혈하여 측정하였다.

(4) 혈청지질 함량의 측정

실험식이로 5주간 사육한 흰쥐에게 물만 주면서 12시간 동안 절식시킨 후 에테르 마취 하에서 복부 대동맥으로부터 채혈한 다음, 빙냉의 생리식염수로 간장을 관류하고 췌장을 적출 한 후 습기를 제거하였다. 채취한 혈액은 실온에서 응고시킨 다음 4 ℃, 3,000 rpm으로 20분간 원심분리 하여 혈청을 분리한 후 -70 ℃에 두면서 분석용 시료로 사용하였다. 혈청 중성지질(triglyceride), 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 함량은 kit 시약(AM 157S-K, AM 202-K, AM 203-K, Asanpharm Co. Korea)으로 측정하였다. 즉, 혈청중성지방의 함량은 혈청 20 μL에 키트 효소용액 3.0 mL씩을 가하여 37 ℃에서 10 분간 반응시킨 후 550 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 혈청 총콜레스테롤 함량은 중성지방의 경우와 동일한 용양비로 37 ℃에서 5분간 반응, 500 nm에서 흡광도를 측정, 계산식(mg/dL = (표준용액의 흡광도/검액의 흡광도) x 300)에 의하여 함량을 구하였다. HDL-콜레스테롤 함량은 혈청 100 μL에 키트 효소용액 3.0 mL을 가하여 37 ℃에서 5분간 반응시킨 후 500 nm에서 흡광도를 측정, 계산식(mg/dL = (표준용액의 흡광도/검체용액의 흡광도) x 100)에 의하여 함량을 산출하였다. LDL-콜레스테롤 l함량은 Friedewald 등(Friedwald et al: Estimation of the concentration of the low-density lipoprotein cholesterol in plasma without use of the preparative ultracentrifuge. Clin. Chem. 18: 499-502, 1972)의 방법에 따라 총콜레스테롤 - HDL-콜레스테롤 + (중성지질 함량/5)에 의하여 계산하였다.

(5) 간조직과 췌장조직의 검정

실험동물로부터 적출한 췌장조직의 소편을 10%의 중성 포르말린으로 고정시킨 후 에탄올로 탈수, 파라핀으로 고정한 후 4 μm두께로 자른 절편을 헤마톡시린-에오신으로 염색하여 광학현미경으로 관찰하였다(Stanley S & Paphael Y.: Lynch's medical laboratory technology. 3th WB Saunder Com. p. 1031, 1976).

(6) 통계분석

동물실험 결과는 실험동물 10마리의 평균값과 표준편차로 나타내었다. 유의성 검증은 SPSS(Statistical Package for Social Sciences, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) software package를 이용하여 던컨의 다중검정을 행하였다(Chae SI & Kim BJ: Statistical Analysis for SPSS/PC. Bubmoon Publishing Co, Seoul, Korea, p 66-75, 1995).

시험결과

3-1: 가공 매실의 식이가 스트렙토조토신으로 유발한 당뇨 흰쥐의 혈당 함량에 미치는 영향

5주령의 평균 체중 140±10 g인 흰쥐를 정상군(NC), 당뇨대조군(DM), 당뇨+가공하지 않은 매실 과육 분말 2% 혼합식이군(DN), 당뇨+종자 제거 가공 매실 과육 분말 2% 혼합식이군(E1), 당뇨+종자함유 가공 매실 과육 분말 2% 혼합식이군(E2)의 5개 군으로 나누어 5주간 사육하면서 매주 동일한 시간에 혈당을 측정하여 하기 표 10에 나타내었다.

실험군¹⁾	혈당 (mg/dL)
실험군¹⁾	0	1주	2주	3주	4주	5주
NC	102.5^NS,2)	98.7^c	98.3^E	99.6^D	97.8^D	98.1^D
DM	385.2^cA	390.8^bcA	396.1^abA	403.5^abA	410.0^abA	412.5^aA
DN	383.7^aA	383.1^abAB	372.7^bcB	330.9^cB	302.3^dB	285.0^eB
E1	384.5^aA	375.4^abB	354.9^bcC	260.6^cC	228.6^dC	195.4^eC
E2	385.8^aA	371.5^abB	340.8^bD	257.1^cC	223.7^dC	190.7^eC

¹⁾ 약어: NC; 정상군, DM; 당뇨대조군, DN; 당뇨+가공하지 않은 매실 과육 분말 2% 혼합식이군, E1; 당뇨+종자 제거 가공 매실 과육 분말 2% 혼합식이군, E2; 당뇨+종자 함유 가공 매실 과육 분말 2% 혼합식이군.

²⁾ 실험동물 10마리의 평균값임. NS: 가로로 유의성이 없음을 나타냄.

³⁾ 가로로 서로 다른 문자 a~e는 5% 수준에서 유의성이 있음을 나타내며, 세로로 다른 문자 A~D는 5% 수준에서 유의성이 있음을 나타냄.

상기 표 10을 살펴보면, 혈당의 수치는 정상군에서는 5주간 98.1~102.5 mg/dL범위를 나타내었고 DM군에서는 385~412 mg/dL으로 높았다. DN군에서는 1주간은 DM과의 차이를 보이지 않았으나 2주째는 5.9%가 감소되었고, 3주째는 19.99%가, 5주째는 30.9%가 각각 감소되어 가공하지 않은 매실 자체로도 혈당의 감소 효과가 나타났다.

그러나 실시예의 종자를 제거하지 않은 가공 매실을 급여한 군(E1)과 실시예의 종자를 함유한 가공 매실을 급여한 군(E2)에서는 2주째 DN군 수치의 4.78~8.50%가 감소되었고 5주째는 31.44~33.09%가 감소하였다. 특히, 5주 후의 혈당수치는 DN군에서는 383.7mg/dL이 285.0mg/dL으로 감소한 반면 E1군에서는 384.5mg/dL에서 195.4mg/dL으로, E2군에서는 385.8mg/dL에서 190.7mg/dL로 큰 감소를 나타내었다.

3-2: 가공 매실의 식이가 당뇨 유발된 흰쥐의 혈중 지질 개선에 미치는 영향

스트렙토조토신(STZ)로 당뇨를 유발한 당뇨 흰쥐를 5주간 사육한 후 분리한 혈청을 시료로 중성지방과 총콜레스테롤함량, HDL-콜레스테롤 함량 및 LDL-콜레스테롤의 함량을 측정하여 하기 표 11에 나타내었다.

실험군¹⁾	중성지방 (mg/dL)	총콜레스테롤 (mg/dL)	HDL-콜레스테롤 (mg/dL)	LDL-콜레스테롤²⁾ (mg/dL)
NC	53.83±9.02^C,3)	82.13±6.42^C	40.06±2.55^AB	71.36±4.44^D
DM	131.22±8.45^A	128.83±8.76^A	27.50±2.04^C	102.59±7.07^A
DN	114.05±5.60^A	117.52±6.48^A	30.75±2.25^C	94.71±5.47^AB
E1	70.67±7.48^B	97.80±7.63^B	30.27±2.96^B	83.67±6.13^BC
E2	66.80±6.22 ^BC	90.22±7.65^BC	42.98±2.51^A	76.86±6.41^CD

²⁾ LDL-콜레스테롤(mg/dL) = 총콜레스테롤 - HDL-콜레스테롤 + (중성지질 함량/5)에의하여 계산하였다.

³⁾ 실험동물 10마리의 평균값임. 세로로 다른 문자 A~D는 5% 수준에서 유의성이 있음을 나타냄.

상기 표 11을 살펴보면, 당뇨를 유발시킨 후 일반 사료만을 급여한 DM군에서는 정상군(NC)에 비하여 혈중 중성지방의 함량이 2.4배로 증가하였고, 총콜레스테롤 함량과 몸에 나쁜 LDL-콜레스테롤의 함량이 각각 1.57배 및 1.43배가 증가하였다. 또, 몸에 좋은 HDL-콜레스테롤 함량은 31%가 감소하였다.

가공하지 않는 매실을 급여한 군(DN)에서는 DM군에 비하여는 중성지질과 총콜레스테롤 함량, HDL- 및 LDL-콜레스테롤 함량이 평균값으로는 개선되었으나 DM군과의 유의차를 보이지 않았다. 실시예의 가공 매실을 급여한 E1 및 E2군에서는 가공하지 않은 매실 급여군(DN)에 비하여 중성지방은 38.04~41.43%가, 총콜레스테롤 함량은 16.78~23.23%가, LDL-콜레스테롤 함량은 11.66~18.85%가 각각 감소되었으며 HDL-콜레스테롤 함량은 21.20~39.77%가 증가하였다. 이러한 결과는 본 발명의 가공 매실이 가공하지 않은 매실에 비하여 당뇨에 의해 유발된 혈중지질의 개선 효과가 크게 향상되었음을 나타낸다.

3-3: 가공 매실의 식이가 당뇨 흰쥐의 췌장 조직에 미치는 영향

가공하지 않은 매실과 가공 매실(종자를 제거한 것과 제거하지 않는 것)을 각각 당뇨 유발 흰쥐에 5주간 급여한 후 췌장을 절취하여 광학현미경으로 관찰하였다(도 1). 구체적으로, 췌장의 핵은 글루카곤을 분비하는 A 타입의 세포들이 작은 섬(islet)의 가장자리에 위치한다. 핵의 크기는 다른 세포에 비해 다소 작으며 소마토스타틴(somatostatin)을 분비하는 D 타입의 세포와 인슐린을 분비하는 베타 타입의 세포는 랑게르헨즈의 작은 섬(Langerhans' 중앙부에 존재함으로 이를 중심으로 관찰하였다.

도 1을 살펴보면, 스트렙토조토신(STZ)으로 당뇨를 유발한 후 일반사료를 급여한 DM군과 당뇨 유발 후 가공하지 않은 매실을 급여한 DN군에서는 세포의 종창과 괴사현상이 관찰되었으나, 실시예의 가공 매실을 급여한 E1군과 E2군에서는 이러한 병변 현상이 관찰되지 않았다. 또, E1군과 E2군 간의 조직상의 뚜렷한 차이는 관찰되지 않았다. 이러한 결과는 표 10의 혈당 변화 및 표 11의 혈중 지질조성별 함량과도 일치하는 현상이다.

비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

Claims

(1) 종자를 제거하지 않은 매실을 수증기로 60분 내지 120분 동안 쪄서 익히는 전처리 단계;
(2) 상기 전처리한 매실을 8 내지 10 중량%의 염수에 침지하여 매실의 수분함량이 35 내지 40 중량%가 될 때까지 염수 처리하는 단계;
(3) 상기 염수 처리한 매실을 물에 침지하여 매실의 염도가 0.5 내지 1.5 중량%가 되도록 탈염하는 단계;
(4) 상기 탈염한 매실을 건조시키는 건조 단계; 및
(5) 상기 건조한 매실에 진피 분말, 상황버섯 분말, 홍차, 여주 분말, 다시마 분말 및 한천 분말 중에서 선택된 1종 이상의 열수 추출물에 당류를 혼합한 가미액을 혼합하고, 상기 혼합물을 가열한 후 실온에서 숙성시키는 단계;를 포함하는 항암, 항당뇨 및 혈중 지질 개선 효능이 향상된 매실 가공방법.
삭제
제1항에 있어서,
상기 건조한 매실과 가미액은 1 : 0.8 내지 1.2 (w/v)의 비율로 혼합되는 것을 특징으로 하는 매실 가공방법.
제1항 및 제3항 중 어느 한 항의 방법에 따라 가공되어, 아미그달린의 분해로 인한 독성 물질이 생성되지 않고, 가공되기 전에 비해 암세포 생육 저해 효과, 혈당 감소 효과 및 혈중 지질 개선 효과가 증진된 것을 특징으로 하는 가공 매실.
제1항 및 제3항 중 어느 한 항의 방법에 따라 가공된 매실을 유효성분으로 포함하는 암 또는 당뇨의 예방 또는 개선용, 또는 혈중 지질 개선용 식품 조성물.