KR102489767B1 - 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 조성물 - Google Patents
귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 조성물에 관한 것으로, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 이용하여 발효한 후 에탄올을 용매로 사용하여 추출한 쌍별귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물은 발효 전 에탄올 추출물 및 쌍별귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 리폭시게나아제 저해 활성 및 엘라스타아제 저해 활성이 현저히 증진되는 효과가 있으므로, 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 항염, 피부재생 및 주름개선용 화장품, 건강기능식품 또는 염증성 질환의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 조성물에 관한 것이다.
염증 반응은 조직이 손상되거나 박테리아, 바이러스 또는 알러젠(allergen)이 체내에 침투했을 때, 국소 혈관과 체액 내에 염증매개인자 및 관련 면역세포에 의하여 효소 활성화, 염증매개 물질의 분비, 체액침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응과 홍반, 부종, 발열, 통증 등의 외형적 증상을 특징으로 한다. 정상적인 경우에는 외부 감염원을 제거하고 손상된 조직을 재생하여 생명체 기능회복 작용을 하나, 염증 반응이 비정상적으로 과도하게 또는 지속적으로 일어나게 되면 과민성 질환 또는 만성 질환으로 발전할 수 있으며, 수혈, 약물투여, 장기 이식 등의 치료과정에서 장해요인이 되기도 한다. 염증 치료를 위해 널리 사용되고 있는 아스피린, 인도메타신과 같은 종래의 염증 억제 성분은 위장 장애, 항진성 혈관 확장 등의 부작용이 알려져 있다. 따라서, 최근에는 천연물로부터 부작용이 없고 안전한 염증 치료 물질을 개발하려는 연구가 진행되고 있다.
피부는 과다한 자외선에 노출되면 피부 구성성분인 콜라겐(collagen) 분해가 촉진되어 피부가 탄력을 잃고 주름이 생성될 수 있다. 또한, 피부가 과도한 온도변화, 습도저하, 바람 등에 의해 지나치게 건조해지면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 기능이 저하되어 주름이 생기기도 한다. 그리고 피부가 활성산소종이나 자유 라디칼에 노출되면 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고 그로 인해 콜라겐 등의 피부 구성 단백질이 변형되어 주름이 생성될 수 있다. 이러한 주름 발생을 억제하고자 다양한 화장품 조성물이 연구되고 있지만 화학성분이 함유된 기능성 화장품의 경우, 피부 자극을 유발하여 민감성 피부에 적합하지 않은 문제점이 있는 바, 피부에 자극이 적고 친환경적인 천연 식물 유래의 기능성 화장품에 대한 관심이 집중되고 있다.
한편, 쌍별귀뚜라미(Gryllus bimaculatus)는 메뚜기목 귀뚜라미과이고, 잡식성으로 곡물, 동물성 먹이, 농업부산물 등 무엇이든지 잘 먹는다. 또한 생육기간이 90일 정도로 짧은 편이라 알의 월동이 필요하지 않아 연중 실내 대량 사육이 가능하다. 약충 시기에는 주행성이고 성충 시기에는 야행으로 알려져 있으며, 알은 투명한 백색으로 젖은 성토나 모래흙, 톱밥, 부엽토 등 수분이 많은 부드러운 재질에서 산란한다. 산란은 긴 산란관을 이용하여 산란 배지 깊숙하게 알을 한 개씩 낳는데, 일생동안 100~200개 이상의 알을 낳는다. 알은 일반적인 사육온도에서 13일 정도 발육하면 부화를 시작한다. 약충으로 부화되면 투명한 흰색에서 점차 검은 갈색으로 변하면서 하루 정도 지나면 모두 검은 색으로 변한다. 이때부터 먹이를 먹게 되고 2개월 정도 탈피하면서 발육하여 성충이 된다. 탈피가 모두 끝나 성충으로 우화하면 약 1개월 동안 생존하면서 짝짓기를 위한 구애행동 및 산란을 계속한다.
2013년 곤충을 식량으로 추천하는 유엔 보고서가 나온 이후 미래 식량 및 환경에 대한 관심이 더욱 높아지면서 식용 곤충에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 식용 곤충은 다량의 불포화 지방산 및 아미노산이 고루 들어있으며, 이외에도 다양한 비타민, 무기질, 키토산 등의 영양성분을 함유하고 있다. 또한, 식용 곤충은 기존의 가축을 통한 동물성 단백질 자원 공급의 한계성을 극복하고 식량 공급의 다양성을 확보할 수 있는 대체 단백질 공급원으로서 각광받고 있다. 뿐만 아니라, 곤충은 기존의 가축보다 사육시 배출되는 이산화탄소 양이 더 적기 때문에 환경오염을 줄일 수 있는 환경친화적인 대체 식량자원이다.
우리나라의 경우 식용 곤충으로 식품공전에 정식으로 등록된 곤충은 누에 번데기, 벼메뚜기, 갈색거저리 유충, 쌍별귀뚜라미, 백강잠이 있고 서구에서는 밀웜, 귀뚜라미, 메뚜기 등이 주로 이용되고 있다. 이에 따라, 식용 곤충에 대한 연구와 산업화가 많이 진행되고 있으며, 향후 식용 곤충과 관련된 고부가가치 산업이 더욱 활성화 될 전망이다.
한편, 한국공개특허 제2021-0085627호에 쌍별귀뚜라미 및 갈색거저리 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진용 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2020-0069250호에 쌍별귀뚜라미 추출물을 유효성분으로 포함하는 알코올에 의한 간손상 보호용 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 조성물을 제공하고, 상기 유효성분인 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 항염, 피부재생 및 주름개선 효과를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 귀뚜라미 분말에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물에 에탄올을 첨가한 후 30~50℃에서 12~48 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하는 항염, 피부재생 및 주름개선 효과가 증진된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 조성물에 관한 것으로, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 이용하여 발효한 후 에탄올을 용매로 사용하여 추출한 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물은 발효 전 추출물 및 귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 리폭시게나아제 저해 활성 및 엘라스타아제 저해 활성이 현저히 증진되는 효과가 있다.
도 1은 균주 및 발효 일수에 따른 쌍별귀뚜라미 고상발효물의 형태학적 변화를 확인한 결과이다.
도 2는 추출 용매에 따른 귀뚜라미 발효 전 후 리폭시게나아제 저해 활성을 측정한 결과이다. 0.05% IDM은 양성 대조군으로 사용한 0.05%(w/v) 인도메타신(indomethacin)이다. *, ** 및 ***은 귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 리폭시게나아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다. #, ##, ###은 발효 전 귀뚜라미 에탄올 추출물 대비 1~3일차 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 리폭시게나아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ##은 p<0.01, ###은 p<0.001이다.
도 3은 추출 용매에 따른 귀뚜라미 발효 전 후 엘라스타아제 저해 활성을 측정한 결과이다. 0.05% USR은 양성 대조군으로 사용한 양성 대조군으로 사용한 0.05%(w/v) 우르솔산(ursolic acid)이다. *, ** 및 ***은 귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 엘라스타아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다. #, ##, ###은 발효 전 귀뚜라미 에탄올 추출물 대비 1~3일차 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 엘라스타아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ##은 p<0.01, ###은 p<0.001이다.
도 2는 추출 용매에 따른 귀뚜라미 발효 전 후 리폭시게나아제 저해 활성을 측정한 결과이다. 0.05% IDM은 양성 대조군으로 사용한 0.05%(w/v) 인도메타신(indomethacin)이다. *, ** 및 ***은 귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 리폭시게나아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다. #, ##, ###은 발효 전 귀뚜라미 에탄올 추출물 대비 1~3일차 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 리폭시게나아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ##은 p<0.01, ###은 p<0.001이다.
도 3은 추출 용매에 따른 귀뚜라미 발효 전 후 엘라스타아제 저해 활성을 측정한 결과이다. 0.05% USR은 양성 대조군으로 사용한 양성 대조군으로 사용한 0.05%(w/v) 우르솔산(ursolic acid)이다. *, ** 및 ***은 귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 엘라스타아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다. #, ##, ###은 발효 전 귀뚜라미 에탄올 추출물 대비 1~3일차 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 엘라스타아제 저해 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ##은 p<0.01, ###은 p<0.001이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 귀뚜라미는 쌍별귀뚜라미일 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 귀뚜라미 발효물은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 이용하여 발효한 것이 바람직하지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 귀뚜라미 발효물은 귀뚜라미 분말에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 접종하여 1~4일 동안 발효한 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.1~1 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효한 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨 토너, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징워터, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누 및 파우더 중에서 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으며, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 염증성 질환은 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 강직성 척추염, 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 상기 약학 조성물은, 염증유발 인자인 리폭시게나아제(lipoxygenase)의 저해 활성이 증가된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하고 있어, 염증성 질환에 효과가 있다.
본 발명의 상기 유효성분을 포함하는 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 조합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제제, 외용제, 좌제 및 주사제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 발효물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이 외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중,질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은
1) 귀뚜라미 분말에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물에 에탄올을 첨가한 후 30~50℃에서 12~48 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하는 항염, 피부재생 및 주름개선 효과가 증진된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 제조방법을 제공한다.
상기 항염, 피부재생 및 주름개선 효과가 증진된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 제조방법은 구체적으로
1) 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.1~1 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 50~150mL의 에탄올을 첨가한 후 30~50℃에서 12~48 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함할 수 있고,
더 구체적으로
1) 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.3~0.8 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함할 수 있으며,
더욱더 구체적으로
1) 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.5 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 100mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 24 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함할 수 있지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 제조
쌍별귀뚜라미 분말은 농업회사법인 트윈스타팜 주식회사(대구, 한국)에서 수입한 것을 구매하여 사용했고, 발효 균주로는 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 사용하였다.
각 균주는 YM 액체 배지(Yeast Malt broth, Difco)에서 전배양하였으며, 전배양시킨 균주(1.0×104~1.0×106 CFU/mL)를 쌍별귀뚜라미 분말에 1:0.5 중량비로 접종한 후, 락토바실러스 퍼멘텀을 접종한 시료는 37℃, 이외 균주를 접종한 시료는 30℃에서 1~3일 동안 고상발효시켰다(도 1). 그 후, 상기 발효물 10g에 100mL의 95%(v/v) 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 24 시간 동안 추출한 후, 여과하여 하기 실시예에 사용하였다. 비교군으로는 비발효 쌍별귀뚜라미 추출물(균주 혼합) 및 상기와 동일 조건으로 추출하되, 용매로 물을 사용하여 추출한 쌍별귀뚜라미 발효물의 물 추출물을 준비하여 사용하였다.
실시예 1. 리폭시게나아제(lipoxygenase) 억제 활성
리폭시게나아제(lipoxygenase)는 정상적인 세포에서는 활성이 미비하지만, 염증이 유발되면 류코트리엔(leukotrienes) 물질의 증가로 인해 활성이 증가한다.
1%(v/v)로 희석한 쌍별귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물, 쌍별귀뚜라미 발효물의 물 추출물 및 발효전 쌍별귀뚜라미 물 또는 에탄올 추출물을 시료로 사용하였으며, 각각의 시료에 200mM 보레이트 완충액(borate buffer, pH 9.0) 1mL을 넣은 후, 기질인 리놀렌산(linoleic acid, 0.6 mM/mL in ethanol) 2mL을 추가하여 혼합한 후 234nm에서 보정값을 측정하였다. 이후, 상기 시료에 10,000unit/mL의 리폭시게나아제 100mL를 넣고 상온에서 10분간 반응시킨 후 234nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 0.05%(w/v) 인도메타신(indomethacin, IDM)을 사용하였으며, 리폭시게나아제 억제 활성(%)은 하기 식 1에 의해 산출되었다.
[식 1]
리폭시게나아제 억제 활성(%)={1-(b'-b)/(a'-a)}×100
a: 효소 무첨가군
a': 효소 첨가군
b: 효소 무첨가 및 시료 첨가군
b': 효소 및 시료 첨가군
그 결과, 아스퍼질러스 오리재를 이용하여 발효한 군을 제외한 모든 군에서 에탄올 추출시 발효 전에 비해 발효 후 리폭시게나아제 저해 활성이 증가하였고, 특히 쌍별귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 리폭시게나아제 저해 활성이 쌍별귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 현저하였다(도 2).
실시예 2. 엘라스타아제(elastase) 저해 활성
본 발명의 유효성분인 쌍별귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 피부재생 및 주름개선 효과를 확인하기 위해 엘라스타아제 저해 활성을 측정하였다. 쌍별귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물에 의한 리폭시게나아제 저해 활성이 거의 없었던 아스퍼질러스 오리재 발효군은 실험에서 제외하였다.
엘라스타아제에 특이적인 기질인 N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide 1,300㎕에 본 발명의 시료 100㎕와 0.12M Tris-HCl(pH 8.0) 100㎕를 혼합하여 96웰 플레이트에 분주하였고, 엘라스타아제를 20초 간격으로 100㎕씩 분주하여 실온에 10분 동안 반응시킨 뒤, 20초 간격으로 410nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 식 2에 대입하여 엘라스타아제 저해 활성을 산출하였다. 양성 대조군으로는 엘라스타아제 저해제로 알려진 0.05% 우르솔산(ursolic acid, URS)을 사용하였다.
[식 2]
엘라스타아제 저해 활성(%)=[1-(A/B)]×100
A : 시료 처리군의 흡광도
B : 시료 무처리군의 흡광도
그 결과, 쌍별귀뚜라미 발효에 의해 엘라스타아제 저해 활성이 증가하는 것을 확인하였고, 특히 쌍별귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물은 발효 1일차에도 발효 전에 비해 엘라스타아제 저해 활성이 우수하였고, 쌍별귀뚜라미 발효물의 물 추출물 대비 현저한 엘라스타아제 저해 활성을 나타냈다(도 3).
Claims (6)
1) 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.3~0.8 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하여 제조된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물.
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하여 제조된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물.
삭제
1) 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.3~0.8 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하여 제조된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 건강기능식품 조성물.
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하여 제조된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염, 피부재생 및 주름개선용 건강기능식품 조성물.
1) 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.3~0.8 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하여 제조된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하여 제조된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제4항에 있어서, 상기 염증성 질환은 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 강직성 척추염, 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염 및 신장염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
1) 귀뚜라미 분말 1 중량부에 대하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 클로스트리듐 부틸리쿰(Clostridium butylicum)을 0.3~0.8 중량부 접종하여 1~4일 동안 발효하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하는 항염, 피부재생 및 주름개선 효과가 증진된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 제조방법.
2) 상기 단계 1)의 발효물 10g에 80~120mL의 에탄올을 첨가한 후 35~40℃에서 20~28 시간 동안 추출하여 추출물을 획득하는 단계;를 포함하는 항염, 피부재생 및 주름개선 효과가 증진된 귀뚜라미 발효물의 에탄올 추출물의 제조방법.
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2022
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