KR102235186B1 - 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 제조하는 최적의 방법을 확립하고, 상기 제조방법으로 제조된 발효 및 숙성한 코코넛 오일이 발효 및 숙성을 하지 않은 일반 코코넛 오일, 발효 코코넛 오일 또는 숙성 코코넛 오일에 비해 현저히 증진된 항염증 효과가 있으므로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 조성물은 항염증용 화장품 및 건강기능식품, 염증성 질환의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 및 이의 제조방법{Composition for anti-inflammation comprising coconut oil with fermentation and ripening as effective component and manufacturing method thereof}

본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

염증 반응은 조직의 손상, 박테리아나 바이러스 또는 알러젠(allergen)이 체내에 침투했을 때, 국소 혈관과 체액 내에 염증매개인자 및 관련 면역세포에 의하여 효소 활성화, 염증매개 물질의 분비, 체액침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응과 홍반, 부종, 발열, 통증 등의 외형적 증상을 특징으로 한다. 정상적인 경우에는 외부 감염원을 제거하고 손상된 조직을 재생하여 생명체 기능회복 작용을 하나, 염증 반응이 비정상적으로 과도하게 또는 지속적으로 일어나게 되면 과민성 질환 또는 만성 질환으로 발전할 수 있으며, 수혈, 약물투여, 장기 이식 등의 치료과정에서 장해요인이 되기도 한다.

염증 치료를 위해 널리 사용되고 있는 아스피린, 인도메타신과 같은 종래의 염증 억제 성분은 위장 장애, 항진성 혈관 확장 등의 부작용이 알려져 있다. 또한, P물질을 비롯한 신경 펩타이드계 성분에 대한 길항제, 브라디키닌 등 키닌류에 대한 길항제, 사이클로옥시게나아제 억제제 등이 대표적이지만, 부작용 때문에 장기적으로 사용하기가 곤란하며, 결과적으로 현재까지의 치료법에 부작용의 심각성이 너무 크기 때문에 새롭거나 개선된 치료제 개발은 필수적이고 시급하다고 할 수 있다. 따라서 최근에는 민간에서 사용되어지는 천연물에서 염증 치료 물질을 개발하려는 노력이 진행되고 있다.

한편, 코코넛은 코코스 야자의 열매로 식품뿐만 아니라 다양한 산업에 다양하게 사용된다. 코코넛의 겉껍질은 바닷물에 매우 강한 섬유인 코이어(Coir)를 뽑아내는데 사용되고, 열매 내부의 코코넛 워터는 수분을 보충하기 위한 음용수나 음료로 활용된다. 코코넛의 과육은 코코넛 밀크, 코코넛 오일, 조각 코코넛, 코코넛 가루 등 다양한 형태로 가공되어지고, 이는 요리의 재료, 및 마가린·비누, 양초·화장품 등의 원료로 쓰인다.

그 중 코코넛 오일은 쉽게 응고되는 성질을 가지고 있다. 코코넛 오일은 흔히 동남아국가에서 소염, 해열, 상처 치료용으로 주로 사용되고 있으며, 코코넛 오일의 주요성분 중 하나인 라우르산(rauric acid)은 전체지방산 함량 대비 50%를 차지하고 있으며, 아기의 면역성을 강화시키는 모유에서 발견되는 화합물로서 수많은 연구에서 라우르산이 면역성을 항상시키는 능력이 있음이 입증되었다. 또한 코코넛 오일은 중쇄지방산(medium chain fatty acid, MCT)으로 구성되어 있어, 혈관을 타고 그대로 이송되어 케톤체(ketone body)로 산화되어 에너지원으로 빠르게 이용되는 특징이 있다. 버터, 마가린과 같은 일반적으로 사용되는 장쇄지방질이 암죽미립(chylomicron)을 형성하여 림프계를 타고 간으로 이송된 후 사용되어 지거나, 사용되지 않은 지방은 지방세포로 저장되는 것과는 달리, 코코넛 오일은 지방에 축적되지 않는 오일로 체내 노폐물을 배출시키고, 지방 축적을 억제하는 효과가 있어 신진대사를 활발하게 한다.

한편, 유지 중 다양한 물질들이 생리활성에 중요한 역할을 하는 것이 밝혀짐에 따라 생리활성 물질의 섭취를 증진시키기 위하여 재래유지를 화학적 공정 및 생물학적 효소 활성을 이용한 기능성 유지의 개발 및 연구생산이 활발히 이루어 지고 있다. 지질(lipids)은 유지(fats and oils)의 주성분으로서 지방산과 글리세롤, 즉 트리글리세리드의 혼합물로 구성되며, 융점에 따라 고체 및 액체 상태로 존재한다. 유지 내 함유된 기능성을 가진 지질 유효성분으로는 모노-, 디-, 트리글리세리드, 단일 및 고도불포화지방산, 포화지방산, 중쇄지방산, 지방산알코올, 인지질, 당지질, 스테롤, 토코페롤, 토코트리에놀, 카르티노이드, 세사민, 감마오리자놀, 고시폴 등이 있다. 기능성을 지닌 새로운 개념의 유지의 생산을 위하여 기존 유지를 변형 및 가공한 신소재의 개발이 활발히 이루어지고 있으며, 그 중 지질의 주요 구성성분인 지방산(fatty acids)은 소화관 내에서 더 이상 가수분해되지 않고 직접 흡수되어 그 자체가 생리활성을 갖는 경우가 많으므로 효과적인 기능성식품의 하나로써 주목을 받고 있다.

한편, 특수한 성분이나 성질이 강화된 유지를 생산하거나, 천연의 동식물자원에서는 얻기 어려운 지질을 얻거나, 우리가 원하는 물리화학적 및 영양대사적 성질을 갖는 지질을 생산하는데는 생명공학기술이 긴요하게 사용되고 있다. 근래에 들어서는 효소나 미생물을 이용한 생물전환기술(biotransformation) 등을 이용하여 지방가수분해 효소인 리파제를 이용하는 생물공학적 방법이 중요시 되고 있는데, 이는 고온, 고압이 필요한 화학적 방법에 비해 에너지를 절감할 수 있을 뿐만 아니라 생산공정의 안정성이 높으며 효소의 특이성에 의해 불필요한 부산물을 줄이고 필요 물질을 주로 얻을 수 있기 때문이며, 인체 내에도 존재하는 효소이므로 인체에 대한 안전성이 보장된다는 이점이 있다.

한편, 한국등록특허 제1781589호에는 우수한 피부보습 효과와 피부장벽 기능회복 효과를 가지는 식물성 오일(동백 오일, 유차 오일, 코코넛 오일, 피마자 오일, 카놀라 오일, 올리브 오일 및 팜 오일로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 식물성 오일) 효소 반응 조성물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 및 이의 제조방법에 관해 개시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 항염증 효능은 증진되고, 공정시간은 감소된 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조방법을 확립한 후, 상기 제조방법으로 제조된 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 제공하고, 상기 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 항염증 효과를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은

1) 고초균이 포함된 배지 100 중량부에 대하여 5~15 중량부의 코코넛 오일을 혼합하여 25~35℃에서 12~72 시간 동안 교반하며 전배양하여 고초균을 환경에 적응시키는 단계;

2) 상기 단계 1)의 전배양물 100 중량부에 대하여 80~120 중량부의 코코넛 오일을 추가한 후 25~35℃에서 12~150 시간 동안 교반하며 발효하는 단계; 및

3) 상기 단계 2)의 코코넛 오일 발효액으로부터 오일층만 회수한 후 55~65℃에서 12~48시간 동안 숙성시키는 단계;를 포함하는 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 제조하는 최적의 방법을 확립하고, 상기 제조방법으로 제조된 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 항염효과를 확인한 결과, 본 발명의 발효 및 숙성한 코코넛 오일은 발효 및 숙성을 하지 않은 일반 코코넛 오일, 발효 코코넛 오일 또는 숙성 코코넛 오일에 비해 항염증 효과가 현저히 증진되었다.

도 1은 본 발명의 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조 공정도 이다.
도 2는 발효 코코넛 오일의 발효 시간별 항염 효과를 확인한 결과이다. **은 코코넛 오일에 비해 발효 코코넛 오일의 리폭시게나아제 억제 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.01이다.
도 3은 숙성 코코넛 오일의 숙성 온도별 항염 효과를 확인한 결과이다. *, **은 코코넛 오일에 비해 숙성 코코넛 오일의 리폭시게나아제 억제 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01이다.
도 4는 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 발효 시간에 따른 항염 효과를 확인한 결과이다. *, **은 코코넛 오일에 비해 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 리폭시게나아제 억제 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01이다.
도 5는 발효 및 숙성한 코코넛 오일 메탄올 추출물의 항염 효과를 확인한 결과이다. ***은 코코넛 오일 메탄올 추출물에 비해 발효 및 숙성한 코코넛 오일 메탄올 추출물의 리폭시게나아제 억제 활성이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다.

본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 발효는 고초균(Bacillus subtilis)을 이용하여 12~120 시간 동안 이루어지는 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 24~72시간 동안 이루어지는 것이며, 더욱더 바람직하게는 24시간 동안 이루어 지는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 숙성은 55~65℃에서 12~48 시간 동안 숙성되는 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 55~65℃에서 24시간 동안 숙성되는 것이며, 더욱더 바람직하게는 60℃에서 24시간 숙성되는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 발효 및 숙성한 코코넛 오일은 발효 및 숙성 후 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 추출하는 단계를 더 포함할 수 있고, 바람직하게는 메탄올을 첨가하여 추출하는 단계를 더 포함하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 급·만성 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 일광 피부염, 박탈 피부염, 구진상두드러기, 자극성 피부염, 비만세포증 또는 건선 중에서 선택된 하나 이상의 피부 염증성 질환을 예방 또는 개선할 수 있는 것이나, 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으며, 피부외용 연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으며, 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.

상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하지만, 이에 한정하지 않는다.

본 발명에 따른 약학조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 제형인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.

상기 발효 및 숙성한 코코넛 오일 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

본 발명의 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르므로, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

또한, 본 발명은

1) 고초균이 포함된 배지 100 중량부에 대하여 5~15 중량부의 코코넛 오일을 혼합하여 25~35℃에서 12~72 시간 동안 교반하며 전배양하여 고초균을 환경에 적응시키는 단계;

2) 상기 단계 1)의 전배양물 100 중량부에 대하여 80~120 중량부의 코코넛 오일을 추가한 후 25~35℃에서 12~150 시간 동안 교반하며 발효하는 단계; 및

3) 상기 단계 2)의 코코넛 오일 발효액으로부터 오일층만 회수한 후 55~65℃에서 12~48시간 동안 숙성시키는 단계;를 포함하는 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조방법에 관한 것이다.

구체적으로, 본 발명의 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일은

1) 고초균이 포함된 배지 100 중량부에 대하여 5~15 중량부의 코코넛 오일을 혼합하여 25~35℃에서 12~72 시간 동안 교반하며 전배양하여 고초균을 환경에 적응시키는 단계;

2) 상기 단계 1)의 전배양물 100 중량부에 대하여 80~120 중량부의 코코넛 오일을 추가한 후 25~35℃에서 12~72 시간 동안 교반하며 발효하는 단계; 및

3) 상기 단계 2)의 코코넛 오일 발효액으로부터 오일층만 회수한 후 55~65℃에서 24시간 동안 숙성시키는 단계;를 포함하여 제조될 수 있고,

바람직하게는

1) 고초균이 포함된 배지 100 중량부에 대하여 10 중량부의 코코넛 오일을 혼합하여 30℃에서 48 시간 동안 교반하며 전배양하여 고초균을 환경에 적응시키는 단계;

2) 상기 단계 1)의 전배양물 100 중량부에 대하여 100 중량부의 코코넛 오일을 추가한 후 30℃에서 24 시간 동안 교반하며 발효하는 단계; 및

3) 상기 단계 2)의 코코넛 오일 발효액으로부터 오일층만 회수한 후 60℃에서 24시간 동안 숙성시키는 단계;를 포함하여 제조될 수 있지만, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 단계 3) 이후에, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 추출하는 단계를 더 포함할 수 있고, 바람직하게는 메탄올을 첨가하여 추출하는 단계를 더 포함하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 단계 3)의 오일층 회수는 발효액을 정치 또는 원심분리하여 배양액과 오일층을 분리하여 획득할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

제조예 1. 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조

본 발명에서 사용된 코코넛 오일은 (주)퍼멘자임(서울, 한국)에서 제공받았다.

본 발명의 발효는 고초균(Bacillus subtilis KACC91157)을 이용하여 진행하였다.

1) 발효 코코넛 오일의 제조

고초균이 포함된 TBS(tryptone soy broth) 복합배지에 배지 부피에 대하여 코코넛 오일을 10%(v/v) 첨가한 다음, 30℃에서 180rpm으로 교반하며 48시간 동안 전배양하였다. 그 후, 전배양액과 동일한 부피의 코코넛 오일을 첨가한 다음 30℃에서 180rpm으로 교반하며 24~72 시간 동안 발효하였다. 발효 후, 10분 동안 정치하여 오일층만 회수함으로써, 발효 시간별 발효 코코넛 오일을 획득하였다.

전배양을 통해, 배지 내 균주를 오일 유화력에 적응시키고자 하고, 고초균이 포함된 복합배지에 코코넛 오일을 10%(v/v) 첨가하여 전배양 할 때, 균체가 자라 전배양액이 뿌옇게 보였고, 소량 첨가된 코코넛 오일이 유화된 것을 육안으로 확인하였다.

전배양액에 동일한 부피의 코코넛 오일을 첨가한 후 발효시킬 때, 발효액은 배지층과 오일층이 전반적으로 적절하게 유화되어 뿌옇게 된 것을 확인할 수 있었다.

2) 숙성 코코넛 오일의 제조

코코넛 오일을 30~70℃의 배양기에서 24시간 동안 방치한 후 숙성 온도별 숙성 코코넛 오일을 획득하였다.

3) 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조

고초균이 포함된 TBS(tryptone soy broth) 복합배지에 배지 부피에 대하여 코코넛 오일을 10%(v/v) 첨가한 다음, 30℃에서 180rpm으로 교반하며 48시간 동안 전배양하였다. 그 후, 전배양액과 동일한 부피의 코코넛 오일을 첨가한 다음 30℃에서 180rpm으로 교반하며 24~120 시간 동안 발효하였다. 발효 후, 10분 동안 정치하여 오일층만 회수한 다음 회수된 발효 코코넛 오일을 60℃의 배양기에서 24시간 동안 방치한 후, 발효 시간 별 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 획득하였다(도 1).

4) 발효 및 숙성한 코코넛 오일 메탄올 추출물의 제조

고초균이 포함된 TBS(tryptone soy broth) 복합배지에 배지 부피에 대하여 코코넛 오일을 10%(v/v) 첨가한 다음, 30℃에서 180rpm으로 교반하며 48시간 동안 전배양하였다. 그 후, 전배양액과 동일한 부피의 코코넛 오일을 첨가한 다음 30℃에서 180rpm으로 교반하며 24 시간 동안 발효하였다. 발효 후, 10분 동안 정치하여 오일층만 회수한 다음 회수된 발효 코코넛 오일을 60℃의 배양기에서 24시간 동안 방치한 후 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 획득하였다. 그 후, 상기 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 메탄올과 1:1 부피비로 혼합한 다음 1시간 동안 추출한 후 메탄올 층을 회수하여 발효 및 숙성한 코코넛 오일 메탄올 추출물을 획득하였다.

실시예 1. 발효 시간에 따른 코코넛 오일의 항염 효과

항염 효과는 리폭시게나아제(Lipoxygenase) 억제 활성을 통해 확인하였다.

상기 제조예 1의 발효 시간별 코코넛 오일을 DMSO에 희석하여 1%(v/v) 발효 코코넛 오일을 만들고, 상기 희석된 발효 코코넛 오일 100㎕와 1ml의 200mM 붕산염 완충액(borate buffer, pH 9.0)을 혼합한 후, 기질로 2.0ml의 0.6mM 리놀레산(linoleic acid)을 추가한 다음 234nm에서 보정 값을 측정한 후 회수하였다. 그 후, 100㎕의 리폭시게나아제(5000~10000unit/ml)를 혼합한 다음 10분 동안 반응한 후 234nm에서 흡광도를 측정하였다.

본 방법은 리폭시게나아제 효소가 리놀레산과 반응하여 염증반응을 일으키는 원리를 이용한 것으로, 시료를 첨가하였을 때 리폭시게나아제 효소가 시료 또는 시료 내 성분으로 인해 기질과 반응하지 못하도록 억제하여 염증물질인 NO(nitric acid)의 생성을 억제한다.

리폭시게나아제 억제 활성(%)은 하기 식 1을 통해 산출하였다.

[식 1]

리폭시게나아제 억제 활성(%)={1-(b'-b)/(a'-a)}×100

a: 효소 무첨가군

a': 효소 첨가군

b: 효소 무첨가 및 시료 첨가군

b': 효소 및 시료 첨가군

그 결과, 도 2에 개시된 바와 같이 발효 시간이 증가할수록 리폭시게나아제 억제 활성이 증가하는 것을 확인하였다.

실시예 2. 숙성 온도에 따른 코코넛 오일의 항염 효과

숙성 온도에 따른 코코넛 오일의 항염 효과는 상기 실시예 1의 방법으로 제조예 1의 숙성 온도별 코코넛 오일을 사용하여 측정하였다.

그 결과, 도 3에 개시된 바와 같이, 30~50℃에서 숙성된 코코넛 오일은 숙성되지 않은 일반 코코넛 오일과 유사한 정도의 리폭시게나아제 억제 활성을 나타냈지만, 60℃에서 숙성된 코코넛 오일은 약 55%의 리폭시게나아제 억제 활성을 나타내어 항염증 효과가 현저히 증진되는 것을 확인하였다. 또한, 70℃에서 숙성된 코코넛 오일은 60℃에서 숙성된 코코넛 오일에 비해 항염증 활성이 감소하는 것을 확인하였다. 이를 통해 코코넛 오일의 항염 효과를 증진시키는 최적의 숙성 온도는 60℃라는 것을 확인하였다.

실시예 3. 발효 시간에 따른 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 항염 효과

발효 시간에 따른 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 항염 효과는 상기 실시예 1의 방법으로 제조예 1의 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 사용하여 측정하였다.

그 결과, 도 4에 개시된 바와 같이 발효 및 숙성한 코코넛 오일은 아무것도 처리되지 않은 일반 코코넛 오일에 비해 리폭시게나아제 억제 활성이 증가하였고, 특히, 24시간 동안 발효 후 숙성시킨 코코넛 오일의 리폭시게나아제 억제 활성이 가장 우수하여, 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 항염 효과를 현저히 증진시킬 수 있는 최적의 발효 시간은 24시간이라는 것을 확인하였다.

이를 통해 장기간 발효한 코코넛 오일에 비해 단기간 발효 후 숙성시킨 코코넛 오일의 항염 효과가 현저하다는 것을 확인함으로써, 항염증 효능이 현저히 증진된 코코넛 오일을 획득하기 위한 효율적인 최적의 공정을 확립하였다.

실시예 4. 발효 및 숙성한 코코넛 오일 메탄올 추출물의 항염 효과

발효 및 숙성한 코코넛 오일 메탄올 추출물의 항염 효과는 상기 실시예 1의 방법으로 제조예 1의 발효 및 숙성한 코코넛 오일 메탄올 추출물을 사용하여 측정하였다.

그 결과, 도 5에 개시된 바와 같이 항염증 효과를 현저히 증진시키는 최적의 제조방법으로 제조된 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 메탄올 추출물은 아무것도 처리하지 않은 코코넛 오일의 메탄올 추출물에 비해 리폭시게나아제 억제 활성이 현저히 증진된 것을 확인하였다.

Claims (9)

1) 고초균이 포함된 배지 100 중량부에 대하여 5~15 중량부의 코코넛 오일을 혼합하여 25~35℃에서 24~48시간 동안 교반하며 전배양하여 고초균을 환경에 적응시키는 단계;
2) 상기 단계 1)의 전배양물 100 중량부에 대하여 80~120 중량부의 코코넛 오일을 추가한 후 25~35℃에서 24~48시간 동안 교반하며 발효하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 코코넛 오일 발효액으로부터 오일층만 회수한 후 55~65℃에서 12~48시간 동안 숙성시키는 단계;를 포함하는 제조방법으로 제조된 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 화장료 조성물.

삭제

삭제

제1항에 있어서, 상기 발효 및 숙성한 코코넛 오일은 발효 및 숙성 후 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 추출하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증용 화장료 조성물.

1) 고초균이 포함된 배지 100 중량부에 대하여 5~15 중량부의 코코넛 오일을 혼합하여 25~35℃에서 24~48시간 동안 교반하며 전배양하여 고초균을 환경에 적응시키는 단계;
2) 상기 단계 1)의 전배양물 100 중량부에 대하여 80~120 중량부의 코코넛 오일을 추가한 후 25~35℃에서 24~48시간 동안 교반하며 발효하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 코코넛 오일 발효액으로부터 오일층만 회수한 후 55~65℃에서 12~48시간 동안 숙성시키는 단계;를 포함하는 제조방법으로 제조된 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물.

삭제

삭제

1) 고초균이 포함된 배지 100 중량부에 대하여 5~15 중량부의 코코넛 오일을 혼합하여 25~35℃에서 24~48 시간 동안 교반하며 전배양하여 고초균을 환경에 적응시키는 단계;
2) 상기 단계 1)의 전배양물 100 중량부에 대하여 80~120 중량부의 코코넛 오일을 추가한 후 25~35℃에서 24~48 시간 동안 교반하며 발효하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 코코넛 오일 발효액으로부터 오일층만 회수한 후 55~65℃에서 12~48시간 동안 숙성시키는 단계;를 포함하는 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조방법.

제8항에 있어서, 상기 단계 3) 이후에 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 추출하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 효과가 증진된 발효 및 숙성한 코코넛 오일의 제조방법.

Images