KR102199750B1 - 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 상업용 효소인 펙티넥스 또는 비스코자임 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물은 들깨 및 들깨박 에탄올 추출물에 비해 LPS에 의해 유도된 NO 생성을 억제하는 효과가 있으므로, 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품, 기능성 화장품 또는 염증의 치료제로 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.
염증(inflammation)은 물리적인 상처나 미생물에 감염되었을 때 일어나는 정상적인 생체의 방어기전(defense mechanism)의 일종이며, 이 염증작용을 통하여 발병요인(pathogen)을 중화시키거나 제거하고, 손상된 조직을 복구시켜 정상적인 구조와 기능을 하게 한다. 염증을 동반하는 대부분의 질환은 조직의 손상, 통증 및 가려움증과 같은 삶의 질을 떨어뜨리는 결과를 초래하고, 만성적인 염증상태는 관절염, 천식, 뇌와 척수의 다발성 경화증, 염증성 장 질환 및 동맥 경화증을 일으킨다.
대식세포는 선천면역을 담당하는 주요 세포로, 사이토카인 및 박테리아 지질다당류 내독소(lipopolysaccharide, LPS) 같은 수많은 인자에 의해 활성화되고, 활성화된 대식세포는 산화질소(nitric oxide, NO) 및 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2, PGE2) 같은 염증 인자는 물론 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-6(interleukin-6), IL-1(interleukin-1) 같은 전염증성 사이토카인을 생산한다. NO는 자유 라디칼(free radical)의 일종으로 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)에 의해 합성되며, eNOS(endothelial NOS), nNOS(neuronal NOS) 및 iNOS(inducible NOS)의 3개의 동형 단백질(isoform)이 존재한다. IL-1, TNF-α, 인터페론-감마(interferon-gamma) 같은 전염증성 사이토카인들은 iNOS 발현을 유발하고 NO 생산을 일으킬 수 있다. 뇌암, 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암 및 흑색종 같은 많은 악성 암들이 iNOS 발현과 연관되어 있고, 과도한 NO의 생산은 상피세포암, 돌연변이 및 DNA 구조 손상을 일으킬 수 있다.
한편, 들깨(Perilla frutescens)는 쌍떡잎식물 통화식물목 꿀풀과의 한해살이풀로 식물분류학적으로 꿀풀과에 속하는 1년생 초본이다. 들깨는 연간 약 3만 3천 톤이 생산되며, 주로 기름 착유에 사용되고 있다.
들깨 기름 착유 후 부산물로 들깨박이 생성되는데, 착유 후 들깨박의 일부는 사료나 비료로 이용되고 있지만 대부분 버려지고 있어, 폐기되는 들깨박을 이용하여 기능성 소재의 개발시 고부가 제품을 개발할 수 있어 산업적 활용가치가 매우 높을 것으로 예상된다.
한편, 한국공개특허 제2017-0053407호에는 들깨유 유래 α-리놀렌산을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증, 항암, 신경세포보호용 조성물이 개시되어 있지만 본 발명의 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물을 제공하고, 상기 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물의 추출 수율이 증가하고, 상기 추출물 처리시 LPS에 의해 유도된 NO의 생성을 억제하는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에 물 및 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에 물 및 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 NO(nitric oxide)의 과다생성에 의한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에 물 및 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염증 완화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 상업용 효소인 펙티넥스 또는 비스코자임 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물은 들깨 및 들깨박 에탄올 추출물에 비해 LPS에 의해 유도된 NO 생성을 억제하는 효과가 있으므로, 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 염증의 예방, 개선 또는 치료를 위한 소재로 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 들깨 에탄올 추출물, 들깨박 에탄올 추출물 또는 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물의 세포독성을 확인한 결과이다. CON은 아무것도 처리하지 않은 대조군이다.
도 2는 본 발명의 들깨 에탄올 추출물, 들깨박 에탄올 추출물 또는 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물 처리에 의한 NO 생성 억제 정도를 확인한 결과이다. LPS는 NO 생성 유도 물질이다. CON은 아무것도 처리하지 않은 대조군이다. a~e는 서로 통계적으로 유의미한 차이가 있다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 2는 본 발명의 들깨 에탄올 추출물, 들깨박 에탄올 추출물 또는 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물 처리에 의한 NO 생성 억제 정도를 확인한 결과이다. LPS는 NO 생성 유도 물질이다. CON은 아무것도 처리하지 않은 대조군이다. a~e는 서로 통계적으로 유의미한 차이가 있다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
본 발명은
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에 물 및 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 단계 2)의 가수분해 효소는 펙틴 가수분해 효소(Pectinase) 또는 탄수화물 가수분해 효소(carbohydrase)일 수 있으며, 바람직하게는 펙티넥스(Pectinex) 또는 비스코자임(Viscozyme)인 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 펙틴 가수분해 효소인 펙티넥스는 상용효소로서, 펙티나아제(pectinase) 및 헤미셀룰라아제(hemicellulase)의 활성을 가지는 효소이고, 상기 탄수화물 가수분해 효소인 비스코자임은 상용효소로서, 아스퍼질러스 아큘레아투스(Aspergillus aculeatus) 유래 아라비나아제(arabinase), 셀룰라아제(cellulase), 베타-글루카나아제(beta-glucanase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase) 및 자일라나아제(xylanase)를 포함하는 복합효소이다.
상기 염증성 질환은 NO(nitric oxide)의 과다생성에 의해 발생하는 것으로, 바람직하게는 NO(nitric oxide)의 과다생성에 의해 관절 또는 상피세포에 발생하는 염증성 질환을 의미하며, 구체적으로는 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 요도염, 방광염, 화상 염증, 피부염, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경 염증 중에서 선택된 하나 이상의 염증성 질환인 것이 바람직하지만, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물은
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말 1 중량부에 대하여 30~50 부피부의 물 및 펙틴 가수분해 효소(Pectinase) 또는 탄수화물 가수분해 효소(carbohydrase)를 첨가한 후 30~60℃에서 1~12시간 동안 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물 1 부피부에 대하여 2~3 부피부의 에탄올을 첨가한 후 1~3시간 동안 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있고,
보다 구체적으로
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말 1 중량부에 대하여 40 부피부의 물 및 500 unit/mL의 펙티넥스(Pectinex) 또는 50 unit/mL의 비스코자임(Viscozyme)을 첨가한 후 30~60℃에서 1~12시간 동안 가수분해하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 가수분해물 1 부피부에 대하여 2~3 부피부의 에탄올을 첨가한 후 2시간 동안 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에 물 및 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 NO(nitric oxide)의 과다생성에 의한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 약학조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 제형인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
상기 추출물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 상기 추출물을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르므로, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에 물 및 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염증 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 화장료 조성물은 급·만성 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 일광 피부염, 박탈 피부염, 구진상두드러기, 자극성 피부염, 비만세포증 또는 건선 중에서 선택된 하나 이상의 피부염증을 완화할 수 있는 것이나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으며, 피부외용 연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예
1.
들깨박
추출물의 제조
(1) 비스코자임 효소처리 들깨박 추출물의 제조
들깨박을 건조한 후 분쇄한 들깨박 분쇄물 1g에 증류수 40㎖와 효소인 50unit/㎖의 비스코자임(Viscozyme)을 넣고, 50℃에서 10시간 동안 180rpm으로 교반하였다. 그 후, 100% 에탄올 93㎖를 첨가하여 상온(20±5℃)에서 180rpm으로 2시간 동안 추출하고, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 상등액을 필터하여 비스코자임 효소처리 들깨박 추출물을 제조하였다.
(2) 펙티넥스 효소처리 들깨박 추출물의 제조
들깨박을 건조한 후 분쇄한 들깨박 분쇄물 1g에 증류수 40㎖와 효소인 500unit/㎖의 펙티넥스(Pectinex)를 넣고, 37℃에서 2시간 동안 180rpm으로 교반하였다. 그 후, 100% 에탄올 93㎖를 첨가하여 상온(20±5℃)에서 180rpm으로 2시간 동안 추출하고, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 상등액을 필터하여 펙티넥스 효소처리 들깨박 추출물을 제조하였다.
(3) 들깨박 에탄올 추출물의 제조
들깨박을 건조한 후 분쇄한 들깨박 분쇄물 1g에 70%(v/v) 에탄올 40㎖를 첨가한 후 상온(20±5℃)에서 180rpm으로 10시간 동안 추출하고, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 상등액을 필터하여 들깨박 에탄올 추출물을 제조하였다.
(4) 들깨 에탄올 추출물의 제조
들깨를 건조한 후 분쇄한 들깨 분쇄물 1g에 70%(v/v) 에탄올 40㎖를 첨가한 후 상온(20±5℃)에서 180rpm으로 10시간 동안 추출하고, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 상등액을 필터하여 들깨 에탄올 추출물을 제조하였다.
실시예
1. 세포생존율(
cell
viability
) 측정
제조예 1에서 각 조건별로 추출한 시료의 세포독성을 확인하기 위하여 Mosmann(1983)의 방법을 이용하여 MTT(3-(4,5-dimeth-ylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석을 실시하였다.
마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 100㎕의 DMEM 배지가 담긴 96-웰 플레이트에 1일 동안 배양한 후, 각각의 추출방법으로 제조한 제조예 1의 시료 100㎍/㎖를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 각 웰에 5㎎/㎖의 MTT 용액을 10㎕씩 분주하고 1시간 동안 배양하면서 환원반응을 유도하였으며, 100㎕의 DMSO(dimethyl sulfoxide) 용액을 첨가하여 보라색의 포르마잔(formazan) 결정을 완전히 용해하였다. 그 후, 분광광도계를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 시료 무처리군(CON)의 생존율 100%를 기준으로 시료 처리군의 상대적 세포 생존율을 계산하였다.
그 결과, 도 1에 개시된 바와 같이 제조예 1의 들깨 에탄올 추출물, 들깨박 에탄올 추출물, 비스코자임 효소처리 들깨박 추출물 및 펙티넥스 효소처리 들깨박 추출물은 세포 생존율에 크게 영향을 주지 않은 것으로 보아 세포독성이 거의 없다는 것을 확인하였다.
실시예
2.
NO
(
nitric oxide)
생성 억제효과 확인
항염효과를 검증하기 위해 마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 96-웰 플레이트에 1×106 cells/㎖가 되도록 접종하고, 37℃ 온도와 5% CO2가 유지되는 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 각 웰에 제조한 제조예 1의 시료 100㎍/㎖를 1시간 동안 처리하고, 그 후 1㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액의 상징액을 얻고, 상징액과 그리스(griess) 시약을 반응시킨 후, 분광광도계를 이용하여 540㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. NO 생성율은 LPS 처리군 대비 백분율로 나타내었다.
그 결과, 도 2에 개시된 바와 같이 LPS 처리에 의해 증가된 NO의 생성이 제조예 1의 시료를 처리한 경우 감소하였고, 펙티넥스 효소처리 들깨박 추출물, 비스코자임 효소처리 들깨박 추출물, 들깨박 에탄올 추출물 및 들깨 에탄올 추출물 순으로 NO 생성 감소효과가 우수하였다. 특히 들깨박 에탄올 추출물에 비해 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물의 NO 생성량이 약 2배 감소하였으며, 들깨 에탄올 추추물에 비해 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물의 NO 생성량은 약 3배 감소하여 들깨 또는 들깨박 에탄올 추출물에 비해 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물의 현저한 항염효과를 확인하였다.
실시예
3. 추출방법에 따른
들깨박
추출 수율 비교
상기 실시예 2에서 우수한 NO 생성 억제효과를 나타낸 들깨박 에탄올 추출물 및 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물의 추출 수율을 확인하였다.
추출 후 가용화 성분에 따른 수율 측정은 추출물은 105℃ 상압가열 건조법에 의해 고형분 함량과 총 부피를 측정한 다음 원시료 무게로 나누어 백분율로 나타내었다.
그 결과, 하기 표 1에 개시된 바와 같이 들깨박 에탄올 추출물에 비해 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물의 추출 수율이 우수하였다.
| 시료 | 추출 수율(%) |
| 들깨박 에탄올 추출물 | 9.32 |
| 비스코자임 효소처리 들깨박 추출물 | 14.04 |
| 펙티넥스 효소처리 들깨박 추출물 | 12.81 |
Claims (6)
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에, 물과 펙티넥스(Pectinex)를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 에탄올을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에, 물과 펙티넥스(Pectinex)를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 에탄올을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 염증성 질환은 NO(nitric oxide)의 과다생성에 의해 발생하는 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
삭제
1) 들깨박을 건조한 후 분쇄하여 들깨박 분말을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에, 물과 펙티넥스(Pectinex)를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 에탄올을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염증 완화용 화장료 조성물.
2) 상기 단계 1)의 들깨박 분말에, 물과 펙티넥스(Pectinex)를 첨가한 후 가수분해하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 가수분해물에 에탄올을 첨가한 후 추출하여 가수분해된 들깨박 추출물을 획득하는 단계; 및
4) 상기 단계 3)의 가수분해된 들깨박 추출물을 원심분리한 뒤 상등액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조된 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염증 완화용 화장료 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180167480A KR102199750B1 (ko) | 2018-12-21 | 2018-12-21 | 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180167480A KR102199750B1 (ko) | 2018-12-21 | 2018-12-21 | 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 |
Publications (2)
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|---|---|
| KR20200077998A KR20200077998A (ko) | 2020-07-01 |
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| KR1020180167480A KR102199750B1 (ko) | 2018-12-21 | 2018-12-21 | 효소처리를 통해 얻은 들깨박 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 |
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| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102199750B1 (ko) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101694660B1 (ko) * | 2016-09-27 | 2017-01-10 | 주식회사 더가든오브내추럴솔루션 | 항염증 효과가 있는 암(暗) 조건에서 최아된 들깨새싹 추출물 |
-
2018
- 2018-12-21 KR KR1020180167480A patent/KR102199750B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| [이종희의 헬시푸드] 암 발생률 뚝! 콜레스테롤 수치 뚝! 들깨를 사랑하자! 건강다이제스트. 2018.11.12., [2020.03.29. 검색], 인터넷: <URL: http://www.ikunkang.com/news/articleView.html?idxno=26112> 1부.* |
| 대한의생명과학회지, 2018, 24(4), 398~404 |
| 손종연, 장성환. 참깨박, 흑참깨박 및 들깨박 에탄올 추출물의 효소처리에 따른 생리활성. 한국식품조리과학회지. 2013년, 제29권, 제4호 1 부.* |
| 한국식품저장유통학회지, 25(5), 605-612, 2018 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20200077998A (ko) | 2020-07-01 |
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