KR101963630B1 - 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 - Google Patents

효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 상업용 효소인 펙티넥스(Pectinex)를 처리한 고춧잎 추출물의 추출수율 및 총 폴리페놀 함량은 고춧잎 에탄올 추출물에 비해 증가하고, 상기 추출물은 LPS에 의해 유도된 NO 생성을 억제하는 효과가 우수하므로 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품, 기능성 화장품 또는 염증의 치료제로 사용될 수 있다.

Description

효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물{Anti-inflammatory composition comprising pepper leaf extract produced by enzyme treatment as effective component}
본 발명은 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 약학, 건강기능식품 또는 화장료 조성물로 이용될 수 있는 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.
염증(inflammation)은 물리적인 상처나 미생물에 감염되었을 때 일어나는 정상적인 생체의 방어기전(defense mechanism)의 일종이며, 이 염증작용을 통하여 발병요인(pathogen)을 중화시키거나 제거하고, 손상된 조직을 복구시켜 정상적인 구조와 기능을 하게 한다. 염증을 동반하는 대부분의 질환은 조직의 손상, 통증 및 가려움증과 같은 삶의 질을 떨어뜨리는 결과를 초래하고, 만성적인 염증상태는 관절염, 천식, 뇌와 척수의 다발성 경화증, 염증성 장 질환 및 동맥 경화증을 일으킨다.
대식세포는 선천면역을 담당하는 주요 세포로, 사이토카인 및 박테리아 지질다당류 내독소(lipopolysaccharide, LPS) 같은 수많은 인자에 의해 활성화되고, 활성화된 대식세포는 산화질소(nitric oxide, NO) 및 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2, PGE2) 같은 염증 인자는 물론 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-6(interleukin-6), IL-1(interleukin-1) 같은 전염증성 사이토카인을 생산한다. NO는 자유 라디칼(free radical)의 일종으로 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)에 의해 합성되며, eNOS(endothelial NOS), nNOS(neuronal NOS) 및 iNOS(inducible NOS)의 3개의 동형 단백질(isoform)이 존재한다(Cho 등. 2014. Biomol. Ther. 22: 288-294). IL-1, TNF-α, 인터페론-감마(interferon-gamma) 같은 전염증성 사이토카인들은 iNOS 발현을 유발하고 NO 생산을 일으킬 수 있다. 뇌암, 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암 및 흑색종 같은 많은 악성 암들이 iNOS 발현과 연관되어 있고, 과도한 NO의 생산은 상피세포암, 돌연변이 및 DNA 구조 손상을 일으킬 수 있다(Guo 등. 2012. J. Agric. Food Chem. 60: 2157-2164).
한편, 고춧잎은 수분 79.4%, 단백질 4.1%, 지질 1%, 섬유소 3.8%, 당질 8.2%, 회분 3.5%로 구성되어 있고, 풍부한 비타민 A, 비타민 C, 폴리페놀, 플라보노이드 등을 함유하고 있으며, DPPH 라디칼 소거능, 과산화수소 소거능 및 높은 항산화능을 가지고 있다는 것이 보고되었다. 또한, 유방암, 대장암 및 위암 등의 암세포 증식 억제효과, 보체계 활성효과 등 항암효과와 면역증진, 항균활성 및 티로시나아제(tyrosinase) 저해 활성 등을 가진다고 알려져 있다. 이러한 고춧잎의 어린순은 일부 식용으로 활용되고 있지만, 대부분의 고춧잎과 줄기 부위는 폐기되고 있다. 고춧잎은 고추 과육과 달리 매운맛이 없으면서 유용한 물질을 함유하고 있으므로 이를 활용한 기능성 소재의 개발시 고기능성의 고부가 제품을 개발할 수 있어 산업적 활용가치가 매우 높은 자원이다.
한편, 현재까지 보고된 소재의 효능 및 추출 수율 개선을 위한 연구는 물리적인 측면에서 미세분쇄에 따른 표면적 증가에 따른 수율 개선과 세포파쇄를 위한 초음파 및 균질기의 활용, 용매의 극성에 따른 용해도 증가 등의 연구가 보고되었으며, 생물학적인 측면에서는 불용성 물질의 가용화를 위한 발효 및 효소처리공정에 대한 내용이 보고되었지만, 소재의 효능 및 추출 수율의 개선능력은 상대적으로 한계를 나타내었다. 최근 초고압 정수압 처리를 통한 추출 수율의 개선효과는 배치(batch)식 공정으로 대량생산에 적용하기는 불가능하며, 추출 수율의 개선에도 한계를 나타내었다. 따라서 소재의 효능 및 추출 수율을 보다 효율적으로 개선하기 위한 노력이 필요하다.
한편, 한국등록특허 제1009904호에는 천연식물 추출물을 포함하는 항염증 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1062171호에는 글루코사민, 인삼, 고춧잎, 백작약, 감초, 우슬 추출물을 함유하는 관절염 치료용 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물을 제공하고, 상기 추출물이 LPS에 의해 유도된 NO의 생성을 억제하고, 추출수율 및 총 폴리페놀 함량이 증가되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다:
(1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
(2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말에 물을 첨가한 혼합물에 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계; 및
(3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 C1~C4의 저급 알코올 또는 물을 처리하는 단계.
또한, 본 발명은 상기 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염증 완화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 상업용 효소인 펙티넥스(Pectinex) 처리를 통해 추출한 고춧잎 추출물은 추출수율 및 총 폴리페놀 함량이 효소처리를 하지 않은 추출물에 비해 증가하고, LPS에 의해 유도된 NO 생성을 억제하는 효과가 있으므로, 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 염증의 예방, 개선 또는 치료를 위한 소재로 사용될 수 있다.
도 1은 추출 방법에 따른 고춧잎 추출물의 세포독성을 확인한 결과이다. CON은 고춧잎 추출물 무처리 음성대조군, 비교예 1은 에탄올 고춧잎 추출물, 비교예 2는 비스코자임 효소처리 고춧잎 추출물, 비교예 3은 초고압 균질화 공정을 통한 고춧잎 추출물, 비교예 4는 비스코자임 효소처리 및 초고압 균질화 공정을 통한 고춧잎 추출물, 실험예 1은 펙티넥스 효소처리 고춧잎 추출물 및 실험예 2는 펙티넥스 효소처리 및 초고압 균질화 공정을 통한 고춧잎 추출물이다.
도 2는 효소처리를 통해 얻은 고춧잎 추출물 처리시 NO 생성 억제 정도를 확인한 결과이다. NO의 생성은 LPS를 처리하여 유도하였다. CON은 LPS 및 고춧잎 추출물 무처리 음성대조군, 비교예 1은 에탄올 고춧잎 추출물, 비교예 2는 비스코자임 효소처리 고춧잎 추출물, 비교예 3은 초고압 균질화 공정을 통한 고춧잎 추출물, 비교예 4는 비스코자임 효소처리 및 초고압 균질화 공정을 통한 고춧잎 추출물, 실험예 1은 펙티넥스 효소처리 고춧잎 추출물 및 실험예 2는 펙티넥스 효소처리 및 초고압 균질화 공정을 통한 고춧잎 추출물이다.
본 발명은
(1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
(2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말에 물을 첨가한 혼합물에 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계; 및
(3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 C1~C4의 저급 알코올 또는 물을 처리하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 단계 (2)에서 첨가된 가수분해 효소는 펙틴 가수분해 효소이며, 바람직하게는 펙티넥스(Pectinex)인 것이지만, 이에 한정하지 않는다.
상기 펙티넥스는 상용효소로서, 펙티나아제(pectinase) 및 헤미셀룰라아제(hemicellulase)의 활성을 가지는 효소이다.
상기 단계 (3)에서 가수분해물에 첨가되는 C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 물은 바람직하게는 C1 내지 C4의 저급 알코올이며, 더욱 바람직하게는 가수분해물에 C1 내지 C4의 저급 알코올을 1~5:5~9의 혼합비율로 첨가하는 것이며, 가장 바람직하게는 가수분해물:C1 내지 C4의 저급 알코올이 3:7의 혼합비율로 혼합되는 것이지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 상기 단계 (3) 이후에, 초고압 균질화하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 100~120MPa의 압력으로 초고압 균질화하는 단계를 추가로 포함하는 것이고, 더욱 바람직하게는 110MPa의 압력으로 초고압 균질화하는 단계를 추가로 포함하여 고춧잎 추출물을 제조하는 것이나, 이에 제한되지 않는다.
상기 염증성 질환은 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 요도염, 방광염, 화상 염증, 피부염, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경 염증 중에서 선택된 하나 이상의 염증성 질환인 것이 바람직하지만, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 바람직한 일 예로는
(1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
(2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말 1 중량부에 대하여, pH 4.5로 조절된 물 12 중량부를 첨가한 혼합물에 펙티넥스를 첨가하여 가수분해하는 단계; 및
(3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 100%(v/v) 에탄올을 3:7의 부피비가 되도록 첨가하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물인 것이나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은
(1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
(2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말에 물을 첨가한 혼합물에 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계; 및
(3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 C1~C4의 저급 알코올 또는 물을 처리하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 약학조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 제형인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
상기 추출물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 상기 추출물을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르므로, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은
(1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
(2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말에 물을 첨가한 혼합물에 가수분해 효소를 첨가한 후 가수분해하는 단계; 및
(3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 C1~C4의 저급 알코올 또는 물을 처리하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염증 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 화장료 조성물은 급·만성 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 일광 피부염, 박탈 피부염, 구진상두드러기, 자극성 피부염, 비만세포증 또는 건선 중에서 선택된 하나 이상의 피부염증을 완화할 수 있는 것이나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으며, 피부외용 연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 고춧잎 추출물의 제조
(1) 펙티넥스 효소처리 고춧잎 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 고춧잎 2.5g에 pH 4.5로 조정한 증류수 30㎖와 500unit/㎖의 펙티넥스(Pectinex)를 넣고, 37℃에서 2시간 동안 180rpm으로 교반하였다. 그 후, 100%(v/v) 에탄올 70㎖를 첨가하고 상온에서 180rpm으로 2시간 동안 교반하며 추출하고, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 필터하여 고춧잎 추출물을 제조하였으며, 상기 여과된 펙티넥스 효소처리 고춧잎 추출물을 실험예 1로 사용하였다.
(2) 펙티넥스 효소처리 및 초고압 균질화 병행처리 고춧잎 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 고춧잎 2.5g에 pH 4.5로 조정한 증류수 30㎖와 500unit/㎖의 펙티넥스(Pectinex)를 넣고, 37℃에서 2시간 동안 180rpm으로 교반하였다. 그 후, 100%(v/v) 에탄올 70㎖를 첨가하고 상온에서 180rpm으로 2시간동안 교반 추출한 후, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 필터하여 여과액을 제조한 후, 110MPa의 압력으로 2회 오리피스관을 통과시켜 펙티넥스 효소처리 및 초고압 균질화 병행처리 고춧잎 추출물을 제조하였으며, 이후 실험예 2로 사용하였다.
(3) 고춧잎 에탄올 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 고춧잎 2.5g에 pH 4.5로 조정한 증류수를 이용하여 제조한 70%(v/v) 에탄올을 100㎖ 넣고, 상온에서 180rpm으로 2시간 동안 교반하여 추출한 후, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 필터하여 비교예 1로 사용하였다.
(4) 비스코자임 효소처리 고춧잎 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 고춧잎 2.5g에 pH 4.5로 조정한 증류수 30㎖와 50unit/㎖의 비스코자임(Viscozyme)을 넣고, 50℃에서 10시간 동안 180rpm으로 교반하였다. 그 후, 100%(v/v) 에탄올 70㎖를 넣고 상온에서 180rpm으로 2시간 동안 교반 추출하고, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 필터하여 고춧잎 추출물을 제조하였으며, 상기 여과된 비스코자임 효소처리 고춧잎 추출물은 비교예 2로 사용하였다.
(5) 초고압 균질화 처리 고춧잎 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 고춧잎 2.5g에 pH 4.5로 조정한 증류수를 이용하여 제조한 70%(v/v) 에탄올을 100㎖ 첨가한 후, 상온에서 180rpm으로 3시간 동안 교반하여 추출하였다. 추출된 추출액은 12,000rpm에서 15분 동안 원심 분리한 뒤, 필터하여 여과액을 제조한 후, 110MPa의 압력으로 2회 오리피스관을 통과시켜 비교예 3으로 사용하였다.
(6) 비스코자임 효소처리 및 초고압 균질화 병행처리 고춧잎 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 고춧잎 2.5g에 pH 4.5로 조정한 증류수 30㎖와 효소인 50unit/㎖의 비스코자임(Viscozyme)을 넣고, 각각 50℃에서 10시간 동안 180rpm으로 교반하였다. 그 후, 100%(v/v) 에탄올 70㎖를 넣고 상온에서 180rpm으로 2시간 동안 교반하여 추출한 후, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리한 뒤 필터하여 여과액을 제조한 후, 110MPa의 압력으로 2회 오리피스관을 통과시켜 비스코자임 효소처리 및 초고압 균질화 병행처리 고춧잎 추출물을 제조하였으며, 비교예 4로 사용하였다.
실시예 1. 추출 방법에 따른 고춧잎 추출 수율 비교
제조예 1에서 각 조건별로 추출한 고춧잎 추출물의 추출 수율을 확인하였다. 그 결과, 표 1에 나타난 바와 같이 고춧잎 에탄올 추출물에 비해 효소처리, 초고압 균질화 또는 효소처리와 초고압 균질화를 병행하였을 경우 추출 수율이 높아지는 것을 확인하였으며, 비스코자임과 초고압 균질화를 병행처리한 군에서 가장 우수한 추출 수율을 나타냈다. 펙티넥스 처리군에 비해서 비스코자임 처리군의 추출 수율이 높았으며, 효소 단독 처리군보다는 초고압 균질화 공정을 병행하였을 경우 추출 수율이 높아지는 것을 확인할 수 있었다. 추출 수율은 하기 식 1로 계산하였으며, 증가율은 비교예 1을 기준으로 증가된 정도를 의미한다.
[식 1]
추출 수율(%)=(추출 분말의 무게(g)/초기 시료의 무게(g))×100
처리군 추출 수율(%) 증가율(%)
비교예 1
(에탄올 추출)		 31.60 -
비교예 2
(비스코자임 처리)		 56.57 79.02
비교예 3
(초고압 균질화 처리)		 37.60 18.99
비교예 4
(초고압 균질화+비스코자임 처리)		 70.71 123.77
실험예 1
(펙티넥스 처리)		 50.58 60.06
실험예 2
(초고압 균질화+펙티넥스 처리)		 51.15 61.87
실시예 2. 추출 방법에 따른 고춧잎 추출물의 폴리페놀 함량 변화
제조예 1에서 각 조건별로 추출한 고춧잎 추출물의 총 폴리페놀 함량을 확인하였다. 그 결과, 표 2에 나타난 바와 같이 효소처리, 초고압 균질화 또는 효소처리와 초고압 균질화를 병행하였을 경우, 고춧잎 에탄올 추출물에 비하여 총 폴리페놀 함량이 증가함을 확인하였다. 특히, 초고압 균질과 비스코자임 효소를 병행처리하였을 경우 폴리페놀 함량이 약 34% 증가하여 가장 우수한 폴리페놀 함량을 나타냈으며, 초고압 균질 처리군에 비해 효소 단독 처리군 또는 효소처리 및 초고압 균질 병행 처리군의 총 폴리페놀 함량이 증가하는 것을 확인하였다. 펙티넥스의 경우 효소 단독 처리군과 초고압 균질 병행 처리군의 폴리페놀 함량이 비슷한 수준으로 확인되었다.
처리군 폴리페놀 함량(㎎/extract 1g)
비교예 1
(에탄올 추출)		 36.50
비교예 2
(비스코자임 처리)		 44.48
비교예 3
(초고압 균질화 처리)		 37.61
비교예 4
(초고압 균질화+비스코자임 처리)		 48.97
실험예 1
(펙티넥스 처리)		 40.39
실험예 2
(초고압 균질화+펙티넥스 처리)		 40.10
실시예 3. 세포생존율( cell viability ) 측정
제조예 1에서 각 조건별로 추출한 고춧잎 추출물이 세포생존에 미치는 영향을 확인하기 위하여 Mosmann(1983)의 방법을 이용하여 MTT(3-(4,5-dimeth-ylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석을 실시하였다.
마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 100㎕의 DMEM 배지가 담긴 96-웰 플레이트에 1일 동안 배양한 후, 160ppm의 고춧잎 추출물을 처리하여 24시간 배양하였다. 그 후, 각 웰에 5㎎/㎖의 MTT 용액을 10㎕씩 분주하고 3시간 동안 배양하면서 환원반응을 유도하였으며, 100㎕의 DMSO(dimethyl sulfoxide) 용액을 첨가하여 보라색의 포르마잔(formazan) 결정을 완전히 용해하였다. 그 후, 분광광도계를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 고춧잎 추출물 무처리군의 생존율 100%를 기준으로 고춧잎 추출물 처리군의 상대적 세포 생존율을 계산하였다. 그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 제조예 1의 고춧잎 추출물은 세포 생존율에 크게 영향을 주지 않은 것으로 보아 세포 독성이 거의 없다는 것을 알 수 있었다.
실시예 4. 추출 방법에 따른 고춧잎 추출물의 NO ( nitric oxide ) 생성 억제효과 확인
항염효과를 검증하기 위해 마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 96-웰 플레이트에 1×106 cells/㎖가 되도록 접종하고, 37℃ 온도와 5% CO2가 유지되는 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 각 웰에 제조예 1의 각 조건별로 추출한 고춧잎 추출물 160ppm을 1시간 동안 처리하고, 그 후 1㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액의 상징액을 얻고, 상징액과 그리스(griess) 시약을 반응시킨 후, 분광광도계를 이용하여 540㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. NO 생성율은 LPS 처리군 대비 백분율로 나타내었다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 비교예 2의 비스코자임 처리 고춧잎 추출물 처리시 비교예 1의 고춧잎 에탄올 추출물과 NO 생성 억제 효율이 비슷하게 나타났으며, 실험예 1의 펙티넥스 처리시 비교예 1 및 2에 비해 증진된 NO 생성 억제효율을 확인하였다. 초고압 균질 공정을 거치면(비교예 3) 오히려 NO 생성 억제효율이 효소 단독 처리군에 비해 감소하는 것을 확인하였으며, 효소를 병행처리 하였을 경우 초고압 단독 처리군에 비해 억제효율이 증가하였다(비교예 4 및 실험예 2). 효소 단독처리군 및 초고압 균질 공정 병행처리군 모두 비스코자임에 비하여 펙티넥스를 처리하였을 경우 NO 생성 억제 효율이 더 우수하였으며, 초고압 균질화 공정을 병행처리하는 것보다 효소를 단독 처리하는 경우 효과가 우수하였다. 따라서 LPS에 의해 유도된 NO의 생성 억제효과는 비스코자임에 비해 펙티넥스 처리된 고춧잎 추출물에서 더욱 우수하다는 것을 확인하였다.

Claims (8)

  1. 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물:
    (1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
    (2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말에 물을 첨가한 혼합물에 펙티넥스(Pectinex)를 첨가한 후 가수분해하는 단계; 및
    (3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 에탄올을 처리하는 단계.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 상기 단계 (3) 이후에, 초고압 균질화하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 초고압 균질화는 100~120MPa의 압력하에서 수행하는 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 염증성 질환은 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 요도염, 방광염, 화상 염증, 피부염, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경 염증으로 구성되는 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  7. 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    (1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
    (2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말에 물을 첨가한 혼합물에 펙티넥스(Pectinex)를 첨가한 후 가수분해하는 단계; 및
    (3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 에탄올을 처리하는 단계.
  8. 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 고춧잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염증 완화용 화장료 조성물:
    (1) 고춧잎을 건조한 후 분쇄하여 고춧잎 분말을 제조하는 단계;
    (2) 상기 (1)단계의 제조한 고춧잎 분말에 물을 첨가한 혼합물에 펙티넥스(Pectinex)를 첨가한 후 가수분해하는 단계; 및
    (3) 상기 (2)단계의 가수분해물에 에탄올을 처리하는 단계.
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100487945B1 (ko) * 2001-08-31 2005-05-11 주식회사 경인제약 면역증강활성을 갖는 고추잎 추출물 및 그 제조방법
KR20170119818A (ko) * 2016-04-20 2017-10-30 (주)에스디생명공학 효소 처리된 싸주아리 쑥 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물

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Title
Mai Hazekawa 외 6명, Anti-inflammatory effects of water extract from bell pepper(Capsicum annuum L. var.grossum) leaves in vitro, Experimental and Therapeutic Medicine, 14(5), (2017.09.5) *

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