KR20200022987A - 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 금강송 아임계 수 추출물은 열수 추출물에 비해 LPS에 의해 유도된 NO의 생성을 억제하는 효과가 현저하므로, 아임계 수 추출을 통해 항염증 효과가 증진된 금강송 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 항염증용 건강기능식품, 염증성 질환의 치료제 또는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장품의 소재로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물{Composition for anti-inflammation comprising Geumgangsong subcritical water extract as effective component}
본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.
염증(inflammation)은 물리적인 상처나 미생물에 감염되었을 때 일어나는 정상적인 생체의 방어기전(defense mechanism)의 일종이며, 이 염증작용을 통하여 발병요인(pathogen)을 중화시키거나 제거하고, 손상된 조직을 복구시켜 정상적인 구조와 기능을 하게 한다. 염증을 동반하는 대부분의 질환은 조직의 손상, 통증 및 가려움증과 같은 삶의 질을 떨어뜨리는 결과를 초래하고, 만성적인 염증상태는 관절염, 천식, 뇌와 척수의 다발성 경화증, 염증성 장 질환 및 동맥 경화증을 일으킨다.
대식세포는 선천면역을 담당하는 주요 세포로, 사이토카인 및 박테리아 지질다당류 내독소(lipopolysaccharide, LPS) 같은 수많은 인자에 의해 활성화되고, 활성화된 대식세포는 산화질소(nitric oxide, NO) 및 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2, PGE2) 같은 염증 인자는 물론 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-6(interleukin-6), IL-1(interleukin-1) 같은 전염증성 사이토카인을 생산한다. NO는 자유 라디칼(free radical)의 일종으로 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)에 의해 합성되며, eNOS(endothelial NOS), nNOS(neuronal NOS) 및 iNOS(inducible NOS)의 3개의 동형 단백질(isoform)이 존재한다(Cho 등. 2014. Biomol. Ther. 22: 288-294). IL-1, TNF-α, 인터페론-감마(interferon-gamma) 같은 전염증성 사이토카인들은 iNOS 발현을 유발하고 NO 생산을 일으킬 수 있다. 뇌암, 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암 및 흑색종 같은 많은 악성 암들이 iNOS 발현과 연관되어 있고, 과도한 NO의 생산은 상피세포암, 돌연변이 및 DNA 구조 손상을 일으킬 수 있다.
한편, 금강송(Pinus densiflora for. erecta)의 서식 분포지역은 금강산 줄기의 계곡과 산복에서 태백산맥을 따라 경북 북부의 울진, 봉화군 일대와 강원 남부의 강릉, 삼척 등지에 넓게 분포하였으나, 벌목과 화전으로 크게 훼손돼 오늘날은 울진 소광리 일대에 국내 최대의 군락지가 형성되어 있다. 소나무는 한국, 일본, 만주 등에 자생하고 있고, 예로부터 잎, 솔방울, 꽃가루, 송진, 껍질 등 모든 부위가 구황식물로 이용되었다. 특히, 쉽게 채취할 수 있는 솔잎은 민간요법 등에 이용되어 고혈압, 당뇨병, 피부질환, 신경통 등의 성인병 치료와 불로장수를 위한 건강식품으로 이용되어 왔다.
현재 울진 지역의 관광지 조성과 육림 및 관리를 위해 지속적으로 이루어지는 간벌작업으로 인해 무한한 양의 금강송 간벌 부산물이 생산되고 있으며, 생산된 부산물은 대부분 퇴비나 톱밥제조 등에 사용되고 있다. 현재 송엽의 기능성에 대한 보고는 많이 있지만, 간벌 부산물인 송엽과 송절 혼합물의 기능성 연구는 활발하게 이루어지지 않아 기능성에 대한 과학적인 검증이 요구되고 있다. 또한, 불용자원인 간벌 부산물의 기능 연구를 통해 경제성이 우수한 기능성 식품 및 고부가가치 상품을 개발함으로써 새로운 소득원으로의 이용 가능성이 기대된다.
최근 아임계 수를 이용하여 기능성 성분을 추출하는 방법이 알려져 있으나, 금강송 추출물과 관련된 연구는 거의 없는 실정이다. 아임계 수 추출(subcritical water extraction)은 물의 임계점(374℃, 22.1MPa) 이하의 온도와 압력 조건에서 이온화된 물을 이용하여 물질을 분해하고 추출하는 방법으로 PHWE(pressurized hot water extraction) 또는 PLPW(pressurized low polarity water extraction)라고도 한다. 이러한 아임계 추출의 장점은 사용 용매가 물이라는 점과, 추출에 소요되는 시간이 5~30분 정도로 짧다는 것이며, 페놀 화합물 같은 비극성 물질을 추출하는데 효율적인 것으로 알려져 있다.
따라서 본 발명자들은 아임계 추출을 통해 우수한 효능소재인 금강송 추출물의 활성물질에 의한 효과를 더욱 증진시키고, 불용자원인 금강송 간벌 부산물을 자원화하고자 하였다.
한편, 한국공개특허 제2012-0077889호에는 송엽 또는 송절의 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 대하여 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 및 이의 제조방법을 제공하고, 상기 조성물이 금강송 열수 추출물에 비해 항염증 효과가 우수하다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
(1) 금강송 건조분말을 아임계 추출기에 투입한 후, 물을 주입하고 가열하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 가열된 아임계 추출기에 압력을 가해 금강송 추출물을 제조하는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 제조된 금강송 추출물을 동결건조하는 단계;를 포함하는 항염증 효과가 증진된 금강송 아임계 수 추출물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 금강송 아임계 수 추출물은 열수 추출물에 비해 LPS에 의해 유도된 NO의 생성을 억제하는 효과가 현저하므로, 아임계 수 추출을 통해 항염증 효과가 증진된 금강송 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 항염증용 건강기능식품 조성물, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물; 또는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물로 사용될 수 있다.
도 1은 금강송 열수 및 아임계 수 추출물의 세포독성을 확인한 결과이다. CON은 음성 대조군이다.
도 2는 아임계 추출 온도 및 농도(100, 200 및 400㎍/㎖)에 따른 금강송 아임계 수 추출물의 NO 생성 억제효과를 확인한 결과이다. CON은 음성 대조군이고, LPS를 처리하여 NO의 생성을 유도하였다. ###은 control에 비해 LPS 처리군의 NO의 생성량이 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. $$$은 금강송 열수 추출물 처리군의 NO의 생성량이 LPS 단독 처리군에 비해 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. *, **, ***은 금강송 열수 추출물 처리군에 비해 금강송 아임계 수 추출물 처리군의 NO의 생성량이 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다.
본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 금강송 아임계 수 추출물은 송엽(금강송의 잎) 및 송절(금강송의 가지와 줄기)의 혼합물로부터 추출한 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 송엽 10 중량부에 대하여 송절 3~10 중량부로 혼합한 혼합물로부터 추출한 것이며, 더욱더 바람직하게는 송엽 10 중량부에 대하여 송절 5 중량부로 혼합한 혼합물로부터 추출한 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 아임계 수 추출은 90~200℃로 가열하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는 90~170℃로 가열하여 추출할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 90~150℃로 가열하여 추출할 수 있으며, 가장 바람직하게는 90~120℃로 가열하여 추출하는 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 아임계 수 추출은 1500~2000psi의 압력으로, 5~15분 동안 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1600~1800psi의 압력으로, 7~13분 동안 추출할 수 있으며, 더 바람직하게는 1700psi의 압력으로 10분 동안 추출하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 염증성 질환이란 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 요도염, 방광염, 화상 염증, 피부염, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경 염증 중에서 선택된 하나 이상인 것을 의미한다.
본 발명의 약학 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있으며, 이러한 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여의 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 농도는 치료 목적, 환자의 상태, 필요기간 등을 고려하여 결정할 수 있으며, 특정 범위의 농도로 한정되지 않는다.
본 발명의 약학조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 주사제, 크림, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 피부 염증용 화장료 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨 토너, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징워터, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누 및 파우더 중에서 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은
(1) 금강송 건조분말을 아임계 추출기에 투입한 후, 물을 주입하고 가열하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 가열된 아임계 추출기에 압력을 가해 금강송 추출물을 제조하는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 제조된 금강송 추출물을 동결건조하는 단계;를 포함하는 항염증 효과가 증진된 금강송 아임계 수 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 항염효과가 증진된 금강송 추출물의 제조방법은
(1) 금강송 건조분말 1~3g에 동량의 규조토를 혼합한 후 유리섬유(glass fiber) 필터에 넣고, 아임계 추출기에 장착된 22㎖ 용량의 셀(cell)에 투입한 후, 물을 주입한 다음 90~200℃가 될 때까지 가열하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 가열된 아임계 추출기에 1500~2000psi의 압력을 가해 5~15분 동안 추출하는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 제조된 금강송 추출물을 동결건조하는 단계;를 포함하여 제조할 수 있으며,
바람직하게는
(1) 금강송 건조분말 1~3g에 동량의 규조토를 혼합한 후 유리섬유(glass fiber) 필터에 넣고, 아임계 추출기에 장착된 22㎖ 용량의 셀(cell)에 투입한 후, 물을 주입한 다음 90~150℃가 될 때까지 가열하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 가열된 아임계 추출기에 1600~1800psi의 압력을 가해 7~13분 동안 추출하는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 제조된 금강송 추출물을 동결건조하는 단계;를 포함하여 제조할 수 있으며,
더욱 바람직하게는
(1) 금강송 건조분말 1~3g에 동량의 규조토를 혼합한 후 유리섬유(glass fiber) 필터에 넣고, 아임계 추출기에 장착된 22㎖ 용량의 셀(cell)에 투입한 후, 물을 주입한 다음 90~120℃가 될 때까지 가열하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 가열된 아임계 추출기에 1700psi의 압력을 가해 10분 동안 추출하는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 제조된 금강송 추출물을 동결건조하는 단계;를 포함하여 제조할 수 있지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명에서, 상기 단계 (1)의 규조토는 금강송 건조분말에 남아있는 수분의 흡수와 함께 시료의 공극(void volume 또는 air gap)을 최소화하는데 사용된다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 금강송 추출물의 제조
(1) 금강송 열수 추출물의 제조
송엽 및 송절이 2:1의 중량비로 혼합된 금강송 간벌 부산물을 건조하여 분쇄한 후, 상기 분쇄물 2g에 20㎖의 물을 넣고, 95℃에서 3시간 동안 열수 추출한 후, 필터하여 동결건조하였다.
(2) 금강송 아임계 수 추출물의 제조
본 발명은 아임계 추출을 위해 Thermo사의 ASE 350 기기를 사용하였다. 보다 상세하게는, 분쇄 후 60 메쉬의 체를 쳐서 통과한 부분의 금강송 분쇄물 2g에 동량의 규조토를 혼합한 후 유리섬유(glass fiber) 필터에 넣고, 아임계 추출기에 장착된 22㎖ 용량의 셀(cell)에 투입하였다. 기기의 오븐은 설정된 온도로 예열하고, 그 후 상기 금강송 분쇄물이 포함된 셀을 오븐에 투입한 후 증류수를 셀에 주입한 다음 100, 130, 160 또는 180℃가 될 때까지 각각의 셀을 가열하였다. 그 후 압력을 가해 압력이 1700psi까지 도달하면 10분 동안 추출되게 설정하여 금강송 아임계 수 추출물을 획득하였다. 획득한 금강송 아임계 수 추출물은 바로 동결건조하였다.
실시예 1. 세포생존율( cell viability ) 측정
제조예 1의 금강송 열수 및 아임계 수 추출물이 세포생존에 미치는 영향을 확인하기 위하여 Mosmann(1983)의 방법을 이용하여 MTT(3-(4,5-dimeth-ylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석을 실시하였다.
마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 100㎕의 DMEM 배지가 담긴 96-웰 플레이트에 1일 동안 배양한 후, 제조예 1의 금강송 열수 추출물 및 금강송 아임계 수 추출물(100, 200 및 400㎍/㎖)을 처리하여 24시간 배양하였다. 그 후, 각 웰에 5㎎/㎖의 MTT 용액을 10㎕씩 분주한 후 3시간 동안 배양하면서 환원반응을 유도하였으며, 100㎕의 DMSO(dimethyl sulfoxide) 용액을 첨가하여 보라색의 포르마잔(formazan) 결정을 완전히 용해하였다. 그 후, 분광광도계를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 금강송 추출물 무처리군(CON)의 생존율 100%를 기준으로 금강송 열수 및 아임계 수 추출물 처리군의 상대적 세포 생존율을 계산하였다.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 제조예 1의 금강송 열수 추출물 및 금강송 아임계 수 추출물은 세포 생존율에 크게 영향을 주지 않은 것으로 보아, 본 발명의 금강송 아임계 수 추출물은 세포 독성이 거의 없다는 것을 알 수 있었다.
실시예 2. 금강송 아임계 수 추출물의 NO ( nitric oxide ) 생성 억제효과
제조예 1의 금강송 열수 및 아임계 수 추출물의 항염효과를 검증하기 위해 마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 96-웰 플레이트에 1×106cells/㎖가 되도록 접종하고, 37℃에서 5% CO2가 유지되는 배양기를 이용하여 24시간 동안 배양하였다. 이후 각 웰에 제조예 1의 금강송 추출물을 100, 200 또는 400㎍/㎖의 농도로 1시간 동안 처리하고, 그 후 2㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액의 상징액을 얻고, 상징액과 그리스(griess) 시약을 반응시킨 후, 분광광도계를 이용하여 540㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. NO 생성율은 LPS 단독 처리군 대비 백분율로 나타내었다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 금강송 열수 추출물에 비해 금강송 아임계 수 추출물의 NO 생성 억제효과가 높은 것을 확인할 수 있었으며, 특히 100~130℃, 그 중에서도 100℃로 가열하여 아임계 추출한 금강송 아임계 수 추출물은 금강송 열수 추출물 및 160~180℃로 가열하여 아임계 추출한 금강송 아임계 수 추출물에 비해 NO 생성 억제효과 현저히 우수하다는 것을 확인하였다.
또한, 금강송 추출물을 400㎍/㎖ 처리한 경우 금강송 아임계 수 추출물은 아임계 추출온도에 상관없이 열수 추출물에 비해 현저히 우수한 NO 생성 억제효과를 나타냈다.

Claims (10)

  1. 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 금강송 아임계 수 추출물은 송엽 및 송절의 혼합물로부터 추출한 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 송엽 및 송절 혼합물은 송엽 10 중량부 당 송절 3~10 중량부로 혼합된 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 아임계 수 추출은 90~200℃로 가열하여 추출하는 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 아임계 수 추출은 1500~2000psi의 압력으로, 5~15분 동안 추출하는 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
  6. 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 염증성 질환은 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 요도염, 방광염, 화상 염증, 피부염, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경 염증 중에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 금강송 아임계 수 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  9. (1) 금강송 건조분말을 아임계 추출기에 투입한 후, 물을 주입하고 가열하는 단계;
    (2) 상기 단계 (1)에서 가열된 아임계 추출기에 압력을 가해 금강송 추출물을 제조하는 단계; 및
    (3) 상기 단계 (2)에서 제조된 금강송 추출물을 동결건조하는 단계;를 포함하는 항염증 효과가 증진된 금강송 아임계 수 추출물의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서,
    (1) 금강송 건조분말 1~3g에 동량의 규조토를 혼합한 후 유리섬유(glass fiber) 필터에 넣고, 아임계 추출기에 장착된 22㎖ 용량의 셀(cell)에 투입한 후, 물을 주입한 다음 90~200℃가 될 때까지 가열하는 단계;
    (2) 상기 단계 (1)에서 가열된 아임계 추출기에 1500~2000psi의 압력을 가해 5~15분 동안 추출하는 단계; 및
    (3) 상기 단계 (2)에서 제조된 금강송 추출물을 동결건조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 효과가 증진된 금강송 아임계 수 추출물의 제조방법.
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