KR102066358B1

KR102066358B1 - 디글루-플라티코딘 디 제조용 조성물, 디글루-플라티코딘 디 제조방법 및 디글루-플라티코딘 디의 용도

Info

Publication number: KR102066358B1
Application number: KR1020180102317A
Authority: KR
Inventors: 오덕근; 신경철; 강수환
Original assignee: 건국대학교 산학협력단
Priority date: 2018-08-29
Filing date: 2018-08-29
Publication date: 2020-01-14

Abstract

본 발명은 고온성 미생물 유래 β-글루코시다아제를 포함하는 디글루-플라티코딘 D 제조용 조성물 및 이를 이용한 디글루-플라티코딘 D 제조방법과, 디글루-플라티코딘 D를 포함하는 염증성 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.

Description

디글루-플라티코딘 디 제조용 조성물, 디글루-플라티코딘 디 제조방법 및 디글루-플라티코딘 디의 용도{COMPOSITION FOR PRODUCING DEGLU-PLATYCODIN D AND METHOD FOR PRODUCING DEGLU PLATYCODIN D AND USE OF DEGLU PLATYCODIN D}

도라지(Platycodon grandiflorum)는 동아시아 지역에 자생 또는 재배되는 초롱꽃과(Campanualaceae)에 속하는 다년생 초본류로서, 주로 뿌리가 전통적인 생약재 및 식품으로 활용되고 있으며 주요 활성 물질은 사포닌 계열의 화합물로 알려져있으며 도라지의 함유 성분의 약 2% 정도 존재하고 있는데, 이들 사포닌 성분들이 도라지의 다양한 약리 효능의 유효 성분으로 주목받고 있다. 이 중에서 많이 연구되어온 물질은 플라티코딘(platycodin)과 폴리갈라신(polygalacin)으로 가지고 있는 당 잔기의 차이에 따라 다양한 형태로 존재한다.

도라지는 주로 폐질환, 가래, 기침, 천식, 진통, 해열 등의 증상의 치료제로 사용되어 왔으며, 항염증 효과, 항암 효과, 통증 완화 효과, 소화효소분비 억제효과, 콜레스테롤 대사 개선효과, 간기능 보호 및 개선 효과, 면역기능 조절 활성 효과 등의 약리효능이 있는 것으로 알려져 있다.

도라지의 주요 성분으로는 플라티코사이드 E 등이 있는데, 기존에는 상업용 효소를 이용하여 플라티코사이드 E로부터 플라티코딘 D3를 거쳐 플라티코딘 D로 최종적으로 전환시킨 연구가 진행된바 있고, 최근들어 고온성 미생물인 칼디셀룰로시럽터 베시(Caldicellulosiruptor bescii) 균주 유래 β-글루코시다아제를 이용하여 플라티코사이드 E로부터 플라티코딘 D3를 거쳐 플라티코딘 D로 최종적으로 전환시킨 연구가 진행된바 있다.

이때, 플라티코사이드 E(도 1(a) 참고), 플라티코딘 D3(도 1(b) 참고) 및 플라티코딘 D(도 1(c) 참고)의 3번 위치 글루코오스가 모두 가수분해된 형태가 디글루-플라티코딘 D(도 1(d) 참고)인데, 디글루-플라티코딘 D는 인간 장내 미생물을 이용하여 플라티코딘 D의 제조시 중간 물질로 제안된바 있으나, 정량적인 생산 및 기능성에 대해서는 알려진 바가 전혀 없다. 뿐만 아니라, 디글루-플라티코딘 D는 도라지 추출물로부터 분리되기 어려워, 생산이 필요한 물질이며, 효능에 대한 연구는 진행된바 없다.

본 발명은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 포함하는 디글루-플라티코딘 D(deglu-platycodin D) 제조용 조성물 등을 제공하고자 한다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 포함하는 디글루-플라티코딘 D(deglu-platycodin D) 제조용 조성물을 제공한다.

상기 β-글루코시다아제는 딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum ; Dt) 유래일 수 있다.

상기 조성물은 도라지 추출물에 처리하기 위한 것일 수 있다.

상기 도라지 추출물은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E), 플라티코사이드 E(platycoside E), 플라티코딘 D3(platycodin D3), 플라티코딘 D(platycodin D), 플라티코딘 A(platycodin A), 폴리갈락신 D(polygalacin D) 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로, 서열번호 2로 기재되는 염기 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자를 포함하는 디글루-플라티코딘 D 제조용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 조성물을 기질에 처리하는 단계를 포함하는 디글루-플라티코딘 D 제조방법을 제공한다.

상기 기질은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E), 플라티코사이드 E(platycoside E), 플라티코딘 D3(platycodin D3), 플라티코딘 D(platycodin D), 플라티코딘 A(platycodin A), 폴리갈락신 D(polygalacin D) 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다.

상기 처리는 pH 5.0~7.5 및 70~90℃ 조건에서 수행되는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 서열번호 2로 기재되는 염기 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자를 포함하는 디글루-플라티코딘 D 제조용 재조합 발현 벡터를 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 숙주세포에 상기 재조합 발현 벡터가 형질전환된 형질전환체를 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 염증성 질환은 기관지염, 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따라 고온성 미생물인 딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum) 유래 β-글루코시다아제를 이용하여 도라지 추출물로부터 디글루-플라티코딘 D를 제조하는 경우, 높은 반응 온도 및 빠른 반응 속도를 유지하여 반응 배지에서 다양한 오염원을 배제시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 도라지 추출물에 존재하는 주요 플라티코사이드인 플라티코사이드 E의 3번 위치 글루코오스를 가수분해하여 플라티코딘 D3 및 플라티코딘 D를 거쳐 희귀 플라티코사이드인 디글루-플라티코딘 D로 최종적으로 전환시킬 수 있다.

상기 디글루-플라티코딘 D는 의약, 식품 및 화장품 등 다양한 산업 분야에서 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대되고, 특히, 상기 디글루-플라티코딘 D는 염증 저해 효과를 가지는바, 항염증 예방, 개선 또는 치료에 이용될 수 있다.

도 1은 (a) 플라티코사이드 E, (b) 플라티코딘 D3, (c) 플라티코딘 D 및 (d) 디글루-플라티코딘 D의 구조식을 나타낸 것이다.
도 2(a)는 디글루-플라티코딘 D의 MS 결과를 나타낸 것이고, 도 2(b)는 디글루-플라티코딘 D의 MS/MS 결과를 나타낸 것이며, 도 2(c)는 디글루-플라티코딘 D의 1D NMR 중 1H NMR 결과(좌) 및 13C NMR 결과(우)를 나타낸 것이다.
도 3(a)는 Dt 유래 β-글루코시다아제의 pH 변화에 따른 활성도를 보여주는 것이고, 도 3(b)는 Dt 유래 β-글루코시다아제의 온도 변화에 따른 활성도를 보여주는 것이다.
도 4는 Dt 유래 β-글루코시다아제의 온도 안정성에 따른 활성도를 보여주는 것이다.
도 5는 Dt 유래 β-글루코시다아제를 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물에 처리한 결과, 디글루-플라티코딘 D의 제조를 보여주는 것이다.

본 발명자들은 희귀 플라티코사이드인 디글루-플라티코딘 D의 제조방법에 대한 연구를 수행한 결과, 고온성 미생물인 딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum) 유래 β-글루코시다아제를 클로닝하여 재조합 발현 벡터 및 이로부터 형질전환된 미생물을 제작하고, 이를 이용하여 효소액을 생산한 다음, 이를 기질에 처리함으로써 디글루-플라티코딘 D를 제조할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본원 명세서 내 "디글루-플라티코딘 D(deglu-platycodin)"이라 함은 하기 화학식 1로 표시된다: 이러한 구조식은 도 2(a)의 MS 결과, 도 2(b)의 MS/MS 결과 및 도 2(c)의 1D NMR 결과로부터 확인된다.

[화학식 1]

이때, 상기 디글루-플라티코딘 D는 도라지 추출물로부터 분리되기 어려운 희귀 플라티코사이드로서, 플라티코사이드 E, 플라티코딘 D3 및 플라티코딘 D의 3번 위치 글루코오스가 모두 가수분해된 형태를 말한다. 즉, 디글루-플라티코딘 D는 플라티코사이드 E, 플라티코딘 D3 및 플라티코딘 D와 모핵과 연결되는 글리코시드(glycoside)의 수에 차이를 가지는바, 이러한 구조적인 차이는 효능면에서 차이를 유발한다고 볼 수 있다.

디글루 - 플라티코딘 D 제조용 조성물

본 발명은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum ; Dt) 유래 β-글루코시다아제를 포함하는 디글루-플라티코딘 D(deglu-platycodin D) 제조용 조성물을 제공한다.

상기 Dt 유래 β-글루코시다아제는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 것뿐만 아니라, 이의 기능적 동등물, 즉, 상기 서열에 하나 이상의 치환, 결손 등의 돌연변이를 유발하여 본 발명의 목적을 달성하는 모든 돌연변이체를 포함하는 것을 의미하며, 상기 Dt 유래 β-글루코시다아제는 서열번호 2로 기재되는 염기서열로 이루어진 유전자로부터 발현된 산물일 수 있다. 이때, 상기 Dt 유래 β-글루코시다아제의 최적 활성 pH는 5.0 내지 7.5, 바람직하게 6.0 내지 7.0이고, 최적 활성 온도는 70℃ 내지 90℃, 바람직하게 75℃ 내지 80℃이다. 상기 Dt 유래 β-글루코시다아제는 도라지 추출물에 존재하는 주요 플라티코사이드인 플라티코사이드 E의 3번 위치 글루코오스를 가수분해하여 플라티코딘 D3 및 플라티코딘 D를 거쳐 희귀 플라티코사이드인 디글루-플라티코딘 D로 최종적으로 전환시키기 위한 역할을 한다.

상기 Dt 유래 β-글루코시다아제는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 암호화하는 유전자 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 미생물을 배양하고, 미생물 내에서 과발현된 Dt 유래 β-글루코시다아제를 수득하여 사용하는 것이 바람직하며, 구체적으로 수득된 Dt 유래 β-글루코시다아제를 추가로 분리 및 정제하여 사용하는 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 재조합 벡터로서, 유전자 재조합을 위하여 당업계에서 사용되고 있는 플라스미드 벡터라면 어느 벡터를 사용해도 무방하고, 구체적으로 pET-28(+)a 플라스미드를 사용하는 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 형질전환된 미생물로서, 재조합 벡터로 형질전환하여 목적하는 단백질을 과발현하는 시스템으로 당업계에 사용되고 있는 미생물이라면 어느 미생물을 사용해도 무방하고, 구체적으로 대장균을 사용하는 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 Dt 유래 β-글루코시다아제를 추가로 분리 및 정제하는 과정은 ⅰ) 상기 미생물의 배양액 내 세포를 파쇄하는 단계; ⅱ) 상기 세포 파쇄물을 1차 원심분리하여 1차 상등액을 얻는 단계; ⅲ) 상기 1차 상등액을 고온 열처리한 후 2차 원심분리하여 2차 상등액을 얻는 단계; 및 ⅳ) 상기 2차 상등액을 여과하는 단계를 포함할 수 있다. 구체적으로, ⅰ) 단계에서 파쇄는 프렌치 프레서 등 당업계 공지된 기기를 사용하여 15,000 lb/in² 내외의 범위에서 수행될 수 있고, ⅲ) 단계에서 고온 열처리는 70℃ 및 10분 내외로 수행될 수 있으며, ⅳ) 단계에서 여과는 0.45 ㎛ 내외의 여과지를 사용하여 수행될 수 있다.

또한, 상기 조성물은 도라지 추출물에 처리하기 위한 것일 수 있고, 상기 도라지 추출물은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E), 플라티코사이드 E(platycoside E), 플라티코딘 D3(platycodin D3), 플라티코딘 D(platycodin D), 플라티코딘 A(platycodin A), 폴리갈락신 D(polygalacin D) 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것이 바람직하고, 상기 도라지 추출물은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E) 0.01~0.20 ㎎/㎖, 플라티코사이드 E(platycoside E) 1.00~2.00 ㎎/㎖, 플라티코딘 D3(platycodin D3) 0.01~0.20 ㎎/㎖, 플라티코딘 D(platycodin D) 0.10~0.50 ㎎/㎖, 플라티코딘 A(platycodin A) 0.10~0.50 ㎎/㎖, 폴리갈락신 D(polygalacin D) 0.50~1.50 ㎎/㎖ 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2) 0.10~0.50 ㎎/㎖를 포함하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

구체적으로, 상기 도라지 추출물은 도라지의 뿌리, 열매, 줄기 또는 잎을 용매 추출한 것일 수 있다. 이때, 용매 추출은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 수행될 수 있고, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있다. 본 발명에서는 도라지 추출물로 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물을 사용하였다.

또한, 본 발명은 서열번호 2로 기재되는 염기 서열로 이루어진 딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum ; Dt) 유래 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자를 포함하는 디글루-플라티코딘 D 제조용 조성물을 제공한다.

상기 Dt 유래 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자는 서열번호 2로 기재되는 염기 서열로 이루어진 것뿐만 아니라, 이의 기능적 동등물, 즉, 상기 서열에 하나 이상의 치환, 결손 등의 돌연변이를 유발하여 본 발명의 목적을 달성하는 모든 돌연변이체를 포함하는 것을 의미한다.

디글루 - 플라티코딘 D 제조방법

본 발명은 상기 조성물을 기질에 처리하는 단계를 포함하는 디글루-플라티코딘 D 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 디글루-플라티코딘 D 제조방법은 상기 조성물을 기질에 처리하는 단계를 포함한다.

상기 조성물은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 포함하거나, 서열번호 2로 기재되는 염기 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자를 포함하는 것으로, 구체적인 내용에 대해서는 전술한 바와 같다.

또한, 본 발명에 따른 디글루-플라티코딘 D 제조방법에서 사용되는 상기 기질은 도라지 추출물일 수 있고, 상기 도라지 추출물은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E), 플라티코사이드 E(platycoside E), 플라티코딘 D3(platycodin D3), 플라티코딘 D(platycodin D), 플라티코딘 A(platycodin A), 폴리갈락신 D(polygalacin D) 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것이 바람직하고, 상기 도라지 추출물은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E) 0.01~0.20 ㎎/㎖, 플라티코사이드 E(platycoside E) 1.00~2.00 ㎎/㎖, 플라티코딘 D3(platycodin D3) 0.01~0.20 ㎎/㎖, 플라티코딘 D(platycodin D) 0.10~0.50 ㎎/㎖, 플라티코딘 A(platycodin A) 0.10~0.50 ㎎/㎖, 폴리갈락신 D(polygalacin D) 0.50~1.50 ㎎/㎖ 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2) 0.10~0.50 ㎎/㎖를 포함하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 처리는 pH 5.0~7.5 및 70~90℃ 조건에서 수행될 수 있다. 상기 처리를 위한 pH 조건은 pH 6.0~7.0인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 pH 조건을 유지하기 위해서 반응용매로 맥킬바인(Mcilvaine) 완충용액을 사용할 수 있다. 또한, 상기 처리를 위한 온도 조건은 75~85℃인 것이 바람직하고, 75~80℃인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 조건을 유지함으로써, 사용되는 효소를 최적으로 활성화시킬 수 있어, 최종적으로 디글루-플라티코딘 D를 고생산성 및 고수율로 제조할 수 있다.

또한, 상기 처리는 10시간 이상 수행되는 것이 바람직하고, 60 시간 이상 수행되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 특히, 상기 처리를 위한 반응시간이 60 시간 이상인 경우, 디글루-플라티코딘 D로의 전환율이 100%일 수 있다.

디글루 - 플라티코딘 D의 용도

본 발명은 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 무기산, 유기산 또는 염기와 반응시켜 형성된 부가염뿐만 아니라, 수화물 또는 용매화물을 포함하는 개념으로, 예를 들면, 염기로서 알칼리 및 알칼리 토금속염인 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등을, 무기산으로서 염산, 황산 등을, 유기산으로서 아세트산, 말레산 등을 사용할 수 있다.

본 발명에서, 용어 "염증성 질환" 은 리폭시게나제 활성 억제 효과를 측정을 통해 확인될 수 있는 것으로, 구체적으로, 기관지염, 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

먼저, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구제 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화되어 사용할 수 있고, 제형화를 위하여 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.

상기 담체 또는, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리게이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제는 상기 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 제조할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용할 수 있다.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용하는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등을 사용할 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등을 사용할 수 있다.

상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 약학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해서 투여할 수 있다.

다음으로, 본 발명에 따른 건강기능식품에 있어서, 상기 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 건강기능식품의 첨가물로 사용하는 경우 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 예방, 건강 또는 치료 등의 각 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물의 제형은 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태뿐만 아니라 일반 식품 또는 음료의 형태 어느 것이나 가능하다.

상기 식품의 종류에는 특별히 제한은 없고, 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있다.

일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 상기 상기 디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 원료 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 또한 본 발명은 천연물질을 이용하는 점에서 안전성 면에서 문제가 없으므로 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물 중 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 상기 음료 100 mL당 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g일 수 있다.

상기 외에 상기 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제를 함유할 수 있다. 그 밖에 상기 건강기능식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 제한되지 않으나 본 발명의 건강기능식품 100 중량부 대비 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

다음으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 및, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산 dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴 또는 케라틴이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등)이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 갈조 엑기스, 홍조 엑기스 또는 녹조 엑기스이 바람직하고, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨 또는 아르긴산칼륨이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다. 상기 다른 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알코올, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제 또는 정제수가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지 또는 식물 유지가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴 또는 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스 또는 와셀린 등의 탄화 수소계 유지가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유 또는 아미노 변성 실리콘유가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린 또는 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자 또는 지용성 고분자가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n=2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n=2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n=2 이상), 락트산 또는 락트산염이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤 또는 콜레스테롤에스테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산 또는 덱스트린 이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르 또는 고분자 실리콘이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산 또는 라놀린지방산콜레스테릴에스테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제 또는 양성 계면활성제가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지

방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEPOP (폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드 또는 수소첨가대두인지질이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염 또는 퍼플루오로알킬인산에스테르가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드 또는 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형 또는 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 또는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠스티렌 공중합체, 사불화에틸렌가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert -부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p -(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진 또는 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301호, 모노니트로과이어콜나트륨 또는 운데시렌산이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필 또는 엘리소르빈산이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨 또는 인산일수소나트륨이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 0.01 ~ 5% 중량 백분율로 배합되는 것이 바람직하고, 0.01 ~ 3% 중량 백분율로 배합되는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물은 용액, 유화물 또는 점성형 혼합물의 형상을 취할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액 또는 모발화장료로 제조될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 구체적으로, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클린저의 제형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연이 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트가 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기한 바와 같이, 본 발명에 따라 고온성 미생물인 딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum) 유래 β-글루코시다아제를 이용하여 도라지 추출물로부터 디글루-플라티코딘 D를 제조하는 경우, 높은 반응 온도 및 빠른 반응 속도를 유지하여 반응 배지에서 다양한 오염원을 배제시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 도라지 추출물에 존재하는 주요 플라티코사이드인 플라티코사이드 E의 3번 위치 글루코오스를 가수분해하여 플라티코딘 D3 및 플라티코딘 D를 거쳐 희귀 플라티코사이드인 디글루-플라티코딘 D로 최종적으로 전환시킬 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 딕티오글로무스 툴기듐 ( Dictyoglomus turgidum ; Dt ) 유래 β-글루코시다아제의 발현

(1) 재조합 발현 벡터 및 형질전환 미생물의 제작

본 발명에서는 Dt 유래 β-글루코시다아제를 제조하기 위하여, 먼저, Dt 유래 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자를 분리하였다.

구체적으로, 염기 서열 및 아미노산 서열이 이미 특정되어 있는 딕티오글로무스 툴기둠(Dictyoglomus turgidum)을 선발하고, 이로부터 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자의 염기 서열[서열목록 참조; 진뱅크 수탁번호 ACK41548.1(Genebank Accession No. ACK41548.1)]을 기초로 하였으며, β-글루코시다아제의 재조합 발현 벡터를 만들기 위하여 Gibson assembly method를 이용하여 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자의 염기 서열을 기초로 한 프라이머(primer)(F:CTTTAAGAAGGAGATATACATATGGCTAGCATGAGTGTGGATATAAAAAAGCTCATATCT, R: ATCTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGGCTATTAAGTTCTCTCAGTAGGTTTTCTAC)를 고안하여 중합효소 연쇄반응(PCR)을 실시하였으며, 재조합 플라스미드 벡터 pET 28(+)a(Novagen사 제품) 또한 중합효소 연쇄반응을 실시하여 제한효소 없이 ligation하여 pET 28(+)a/β-글루코시다아제를 제작하였다. 형질전환된 재조합 대장균은 디글루-플라티코딘 D의 제조를 위한 배양을 실시하기 전에 20% 글리세린(glycerine) 용액을 첨가하여 -70 ℃에 냉동 보관하였다.

(2) Dt 유래 β-글루코시다아제의 발현 및 정제

효소의 단백질 발현을 위한 형질전환된 재조합 대장균은 500 ml의 LB(Difco, Sparks, MD, USA) 배지와 50 μg/ml의 카나마이신을 가지는 플라스크에서 200 rev/min의 통기조건 하에서 37℃에서 배양하였다. 박테리아의 흡광도가 600 nm에서 0.6에서 0.8에 도달할 때, β-글루코시다아제의 과발현을 유도하기 위해 최종농도 0.1 mM IPTG를 첨가한 후 그 배양액을 16시간 동안 16℃에서 150 rev/min로 교반하면서 배양하였다.

배양된 β-글루코시다아제를 포함하는 대장균 세포를 모아서 사용하였다. 또한, 과발현된 β-글루코시다아제는 형질전환된 균주의 배양액을 3000 rpm으로 4℃에서 30분 동안 원심분리하여 0.85% 염화나트륨(NaCl)으로 두 번 세척한 다음 디글루-플라티코딘 D의 제조에 사용할 효소의 정제를 위해 사용하였다.

이후 이러한 효소를 정제하기 위하여, 형질전환된 균주의 배양액을 13,000 rpm으로 4℃에서 10분 동안 원심분리한 다음 상기 세포 용액을 프렌치 프레서로 15,000 lb/in²에서 파쇄하였다. 세포 파쇄물은 다시 13,000 rpm 로 4℃에서 10분 동안 원심분리하고 고온인 70℃에서 10분 동안 열처리한 다음, 이로부터 얻은 열 처리물을 13,000 rpm 으로 4℃에서 0분 동안 다시 원심분리하였다. 그 결과 얻은 상등액은 0.45 ㎛ 여과지로 여과하여 디글루-플라티코딘 D의 제조에 사용할 효소액으로 분리하였다.

실시예 2: Dt 유래 β-글루코시다아제의 pH 및 온도 변화에 따른 활성도 확인

본 발명에서는 실시예 1에서 분리한 Dt 유래 β-글루코시다아제의 pH 및 온도 변화에 따른 활성도를 다음과 같이 확인하였다. 다양한 pH 및 온도 조건 하에서 Dt 유래 β-글루코시다아제와 기질을 반응시키고, Dt 유래 β-글루코시다아제의 활성도를 비교하였다.

(1) Dt 유래 β-글루코시다아제에 대한 pH 효과 확인

Dt 유래 β-글루코시다아제에 대한 pH 효과를 확인하기 위하여, Dt 유래 β-글루코시다아제 0.005 mg/ml 및 플라티코사이드 E 0.4 mg/ml가 함유된 맥킬바인(Mcilvaine) 완충용액을 pH 5.0 내지 7.5의 범위에서 80℃에서 10분 동안 반응시켰다. 이후, n-부탄올을 첨가하여 반응을 종료시킨 다음, Dt 유래 β-글루코시다아제의 활성도를 측정하였다.

그 결과, 도 3(a)에 나타난 바와 같이, 최적 pH는 6.5인 것으로 확인된다.

(2) Dt 유래 β-글루코시다아제에 대한 온도 효과 확인

Dt 유래 β-글루코시다아제에 대한 온도 효과를 확인하기 위해서, Dt 유래 β-글루코시다아제 0.005 mg/ml 및 플라티코사이드 E 0.4 mg/ml가 함유된 맥킬바인(Mcilvaine) 완충용액(pH 6.5)을 70℃ 내지 90℃의 범위에서 10분 동안 반응시켰다. 이후, n-부탄올을 첨가하여 반응을 종료시킨 다음, Dt 유래 β-글루코시다아제의 활성도를 측정하였다.

그 결과, 도 3(b)에 나타난 바와 같이, 최적 온도는 80℃인 것으로 확인된다.

실시예 3: Dt 유래 β-글루코시다아제의 온도 안정성 확인

본 발명에서는 실시예 1에서 분리한 Dt 유래 β-글루코시다아제의 온도 안정성을 확인하기 위하여, Dt 유래 β-글루코시다아제 0.005 mg/ml 및 플라티코사이드 E 0.4 mg/ml가 함유된 맥킬바인(Mcilvaine) 완충용액(pH 6.5)을 70℃ 내지 90℃의 범위에서 Dt 유래 β-글루코시다아제의 활성도가 절반 이하로 줄어들 때까지 반응시켰다. 이후, n-부탄올을 첨가하여 반응을 종료시킨 다음, Dt 유래 β-글루코시다아제의 활성도를 측정하였다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 70℃에서는 40시간, 75℃에서는 27시간, 80℃에서는 17시간, 85℃에서는 2시간 경과시, Dt 유래 β-글루코시다아제의 활성도가 절반으로 줄어드는 것으로 확인된다(●: 70℃, ○: 75℃, ▲: 80℃, △: 85℃, ■: 90℃).

실시예 4: 도라지 뿌리 추출물의 성분 함량 분석 및 Dt 유래 β-글루코시다아제를 이용한 디글루 - 플라티코딘 D의 제조

본 발명에서는 실시예 1에서 분리한 Dt 유래 β-글루코시다아제를 이용한 디글루-플라티코딘 D의 제조에 앞서, 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물의 성분 함량을 분석하였다. 구체적으로, 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물은 MeOH 1 L에 100 g의 건조된 도라지 뿌리 가루를 넣고 80℃에서 12시간동안 추출한 후 필터링과 농축을 거쳐 1 L의 2차 증류수에 녹여져 제조되었다.

먼저, 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물의 성분 함량 분석 결과, 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물은 디아피-플라티코사이드 E 0.09 mg/ml, 플라티코사이드 E 1.35 mg/ml, 플라티코딘 D3 0.06 mg/ml, 플라티코딘 D 0.36 mg/ml, 플라티코딘 A 0.23 mg/ml, 폴리갈락신 D 0.99 mg/ml 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2 0.21 mg/ml를 함유하고 있는 것으로 분석된다.

이후, Dt 유래 β-글루코시다아제 0.005 mg/ml를 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물에 처리함에 있어, 최적 pH(pH 6.5) 및 Dt 유래 β-글루코시다아제의 활성도가 절반 이하로 줄어든 시간을 고려한 온도(75℃)에서 반응시켰다.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 도라지 뿌리 메탄올 10% 추출물 내 플라티코사이드 E, 플라티코딘 D3, 플라티코딘 D를 디글루-플라티코딘 D로 100% 전환시킨 것으로 확인된다.

실시예 5: 디글루 - 플라티코딘 D의 염증 저해 효과 확인

인체 내에서는 아라키돈산에 리폭시게나제가 작용하면 루코트리엔이 만들어지는데 루코트리엔의 양이 많을수록 염증이 많이 일어난다. 따라서, 리폭시게나제 활성을 억제시키면 염증을 감소시킬수 있다.

이에 따라, 본 발명에서는 디글루-플라티코딘 D의 염증 저해 효과를 확인하기 위하여, 리폭시게나제 활성 억제 효과를 측정하였다.

리폭시게나제 활성 억제 실험은 리폭시게나제 활성 저해 선별용 측정 키트(lipoxygenase inhibitor screening assay kit, Cayman Chemical)를 사용하여 실시하였다. 키트에서 상업적으로 제공되는 15-LOX 용액(10μl), 시험 샘플로서, 디글루-플라티코딘 D, 플라티코사이드 E, 플라티코딘 D 및 바이칼레신(Baicalein; 5,6,7-trihydroxyflavone)(10μl), 분석 완충용액(980μl)을 시험 웰에 넣었으며 기질 용액(아라키돈산)(10μl)을 첨가하는 것으로 반응을 5분간 처리하였다. 크로모겐(100μl)을 첨가하는 것으로 효소 촉매 작용을 멈추고 반응 종료 후 490 nm의 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도는 기질로부터 리폭시게나제에 의해 생성된 하이드로 퍼옥사이드(HP) 수준을 나타내며, 리폭시게나제 활성 억제 효과(%)는 하기 방정식을 사용하여 계산하였고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

시험 샘플(㎍/㎖)		리폭시게나제 활성 억제 효과(%)
디글루-플라티코딘 D	0.5	39.6 ± 3.7
디글루-플라티코딘 D	5.0	54.6 ± 2.1
플라티코사이드 E	0.5	29.7 ± 2.8
플라티코사이드 E	5.0	40.6 ± 2.5
플라티코딘 D	0.5	33.7 ± 4.1
플라티코딘 D	5.0	49.3 ± 3.1
바이칼레신(Baicalein)	0.5	34.1 ± 3.4
바이칼레신(Baicalein)	5.0	44.0 ± 2.7

표 1에 나타난 바와 같이, 디글루-플라티코딘 D의 리폭시게나제 활성 억제 효과는 플라티코딘 D 및 플라티코사이드 D에 비해 우수한 것으로 확인되며, 대표적인 항염증제에 해당하는 바이칼레신(Baicalein)에 비해서도 우수한 것으로 확인된다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

<110> Konkuk University Industrial Cooperation Corp <120> COMPOSITION FOR PRODUCING DEGLU-PLATYCODIN D AND METHOD FOR PRODUCING DEGLU PLATYCODIN D AND USE OF DEGLU PLATYCODIN D <130> 1064438 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 750 <212> PRT <213> Dictyoglomus turgidum <400> 1 Met Ser Val Asp Ile Lys Lys Leu Ile Ser Gln Met Thr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ser Leu Cys Ser Gly Leu Asp Phe Trp His Thr Lys Pro Ile 20 25 30 Glu Arg Leu Gly Ile Pro Ser Ile Arg Met Ser Asp Gly Pro His Gly 35 40 45 Leu Arg Lys Glu Glu Thr Met Phe Ser Lys Thr Val Pro Ala Thr Cys 50 55 60 Phe Pro Thr Ala Val Thr Ile Ala Ala Ser Trp Asp Lys Ser Leu Ala 65 70 75 80 Glu Lys Met Gly Lys Ala Ile Gly Glu Glu Cys Gln Ala Glu Asn Val 85 90 95 Gln Ile Leu Leu Gly Pro Gly Val Asn Ile Lys Arg Ser Pro Leu Cys 100 105 110 Gly Arg Asn Phe Glu Tyr Tyr Ser Glu Asp Pro Leu Leu Ala Gly Glu 115 120 125 Leu Ala Ala His Phe Ile Lys Gly Val Gln Ser Glu Gly Val Gly Thr 130 135 140 Ser Leu Lys His Phe Ala Ala Asn Asn Gln Glu His Arg Arg Leu Thr 145 150 155 160 Val Asn Ala Ile Ile Asp Glu Arg Thr Leu Arg Glu Ile Tyr Leu Ser 165 170 175 Ala Phe Glu Arg Ala Val Lys Glu Ala Lys Pro Trp Thr Val Met Cys 180 185 190 Ser Tyr Asn Arg Val Asn Gly Thr Tyr Ala Ser Glu Asn Glu Phe Leu 195 200 205 Leu Thr Lys Val Leu Lys Glu Glu Trp Gly Phe Glu Gly Phe Val Val 210 215 220 Ser Asp Trp Gly Ala Val Asn Asp Arg Val Met Gly Leu Ser Ala Gly 225 230 235 240 Leu Asp Leu Gln Met Pro Tyr Asp Gly Gly Tyr Gly Asp Lys Lys Ile 245 250 255 Ile Glu Ala Val Lys Ser Gly Lys Ile Pro Glu Glu Val Leu Asp Arg 260 265 270 Ala Val Glu Arg Ile Leu Arg Ile Val Phe Lys Ala Ile Glu Asn Lys 275 280 285 Lys Glu Asn Ala Thr Tyr Asp Lys Glu Thr His His Lys Ile Ala Arg 290 295 300 Glu Ile Ala Arg Glu Cys Phe Val Leu Leu Lys Asn Glu Gly Asp Ile 305 310 315 320 Leu Pro Leu Lys Lys Glu Gly Lys Ile Ala Leu Ile Gly Ala Phe Ala 325 330 335 Lys Asn Pro Gln Ile Gln Gly Gly Gly Ser Ala His Val Asn Pro Thr 340 345 350 Met Val Asp Asp Ala Val Glu Glu Ile Arg Lys Met Val Glu Gly Lys 355 360 365 Ala Glu Ile Leu Tyr Ala Asp Gly Tyr His Ile Glu Lys Asp Glu Val 370 375 380 Asp Glu Arg Leu Ile Glu Glu Ala Lys Glu Val Ala Lys Val Ala Asp 385 390 395 400 Val Val Val Ile Phe Ala Gly Leu Pro Glu Arg Tyr Glu Ser Glu Gly 405 410 415 Phe Asp Arg Pro His Met Lys Met Pro Glu Ser His Asn Arg Leu Ile 420 425 430 Glu Glu Ile Ser Lys Val Asn Glu Asn Leu Val Val Val Leu Ser Asn 435 440 445 Gly Ala Pro Ile Glu Met Pro Trp Leu Glu Lys Pro Lys Ala Ile Leu 450 455 460 Glu Thr Tyr Arg Gly Gly Gln Ala Trp Gly Gly Ala Val Ala Asp Val 465 470 475 480 Leu Phe Gly Val Val Ser Pro Ser Gly Lys Leu Pro Glu Thr Phe Pro 485 490 495 Lys Lys Leu Ser Asp Asn Pro Ser Tyr Leu Phe Phe Pro Gly Glu Asp 500 505 510 Asp Arg Val Glu Tyr Arg Glu Gly Ile Phe Val Gly Tyr Arg Tyr Tyr 515 520 525 Asp Lys Lys Glu Met Glu Val Leu Phe Pro Phe Gly Tyr Gly Leu Ser 530 535 540 Tyr Thr Thr Phe Glu Tyr Ser Asp Leu Lys Leu Asp Lys Lys Glu Met 545 550 555 560 Arg Asp Asp Glu Val Leu Lys Val Ser Val Lys Val Lys Asn Thr Gly 565 570 575 Lys Val Lys Gly Lys Glu Val Val Gln Leu Tyr Val Arg Asp Val Glu 580 585 590 Ser Ser Tyr Ile Arg Pro Glu Lys Glu Leu Lys Gly Phe Glu Lys Val 595 600 605 Glu Leu Glu Pro Gly Glu Glu Lys Glu Val Val Phe Tyr Leu Asp Lys 610 615 620 Arg Ala Phe Ala Phe Tyr Asn Ile Asp Ile Lys Asp Trp Tyr Val Glu 625 630 635 640 Asp Gly Asp Phe Glu Ile Leu Ile Gly Lys Ser Ser Arg Asp Ile Val 645 650 655 Leu Arg Asp Lys Val Phe Val Lys Ser Thr Thr Lys Ile Lys Arg Thr 660 665 670 Tyr His Ile Asn Ser Thr Ile Gly Asp Ile Met Arg Asp Pro Ile Ala 675 680 685 Trp Glu Lys Phe Lys Asp Ile Leu Gln Gln Phe Ala Ser Ala Phe Pro 690 695 700 Ala Phe Ser Ser Glu Glu Ala Ile Met Asn Phe Ala Glu Met Met Lys 705 710 715 720 Tyr Met Pro Leu Arg Ser Leu Ile His Phe Gly Gln Gly Lys Ile Thr 725 730 735 Pro Glu Ile Val Glu Asn Leu Leu Arg Glu Leu Asn Ser Glx 740 745 750 <210> 2 <211> 2250 <212> DNA <213> Dictyoglomus turgidum <400> 2 atgagtgtgg atataaaaaa gctcatatct caaatgaccc ttgaggaaaa ggcaagcctt 60 tgttctgggc ttgacttttg gcatacaaaa cccattgaaa gacttggaat accatctata 120 agaatgtcgg atggtcctca tggacttaga aaagaagaaa ccatgtttag taagactgtt 180 cctgctacat gcttccctac tgctgtaact attgcagcat cctgggataa atcccttgct 240 gagaagatgg gaaaggctat tggcgaagaa tgccaggctg aaaatgtaca aatactcctt 300 ggacctggag ttaacataaa aagatctccc ctttgtggaa gaaactttga atactactct 360 gaagatccac tccttgcagg agaacttgca gcccatttta ttaagggagt acaaagtgag 420 ggagtaggaa cttctcttaa acattttgca gcaaacaacc aagaacatag aaggcttact 480 gtaaatgcca tcattgacga gagaaccttg agagagattt atctttctgc ctttgagagg 540 gcagtaaaag aggcaaaacc atggaccgtt atgtgctcat acaatagagt aaatgggact 600 tatgcatcag agaatgaatt tcttctcaca aaggtattga aagaagaatg gggatttgaa 660 ggatttgtag tatccgattg gggagcagta aatgataggg taatgggact ttctgcagga 720 cttgatcttc aaatgcctta tgatggtgga tatggagaca aaaagatcat tgaggcagta 780 aaaagtggaa aaattcctga ggaggttctt gatagggctg tagaaagaat tcttaggatt 840 gtattcaagg caatagaaaa caaaaaagaa aatgccacct atgacaagga aactcatcat 900 aaaattgcaa gagagattgc aagggaatgt tttgtgcttc tcaaaaatga aggggacatt 960 cttccactga aaaaagaagg aaagattgca ttaataggag cctttgctaa gaaccctcaa 1020 atacaaggag gaggaagtgc ccatgtaaat ccaaccatgg tagatgatgc agtagaagag 1080 ataagaaaga tggtagaagg aaaggcagag attctttatg ccgatggata tcatatagaa 1140 aaggatgagg tagatgaaag acttatagag gaggcaaaag aggttgcaaa ggtagcggat 1200 gtggtggtaa tttttgcagg acttcccgaa agatacgaat cggaaggctt tgacaggcct 1260 cacatgaaga tgcctgaaag ccacaatagg ctaatagaag aaatctcaaa ggtaaatgaa 1320 aatcttgtgg tggtacttag caatggagca cctatagaga tgccatggtt agagaagcca 1380 aaggcaatcc ttgagaccta cagaggagga caagcctggg gaggagcagt tgcagatgtt 1440 ctttttggag tagtaagtcc ttctggaaag cttccagaga cctttccaaa gaagctaagt 1500 gataatccgt cttacttatt cttcccaggg gaggatgacc gagtagagta cagggaaggg 1560 atatttgtag gatataggta ttatgataag aaggagatgg aagtattgtt tccctttgga 1620 tatggtcttt cctatactac ctttgagtat tcagacttaa agcttgacaa gaaagagatg 1680 agagatgatg aagtacttaa ggtaagtgtg aaggtaaaga atacggggaa ggtaaaaggt 1740 aaagaagtag tgcagttata tgtgagggat gtggaaagta gctatataag gcctgagaag 1800 gagctaaagg gatttgagaa ggtagagctt gagccaggag aagaaaagga agtagtgttt 1860 tatcttgata agagggcttt tgccttctat aacatagaca taaaggattg gtatgtggag 1920 gatggagatt ttgagatatt aattgggaag tcatcaaggg atattgtgct aagggataaa 1980 gtatttgtta agtctaccac aaagataaag agaacttacc atattaattc tactattggg 2040 gatattatga gggaccctat agcatgggag aagtttaagg atatactaca gcagtttgca 2100 agtgcctttc ctgccttttc atcggaagaa gcaatcatga actttgcaga gatgatgaaa 2160 tacatgcctc ttcgaagcct tattcacttt ggtcaaggaa aaatcacacc agaaatagta 2220 gaaaacctac tgagagaact taatagctaa 2250

Claims

딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum; Dt) 유래 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 포함하고,
상기 β-글루코시다아제는 pH 6.0~7.0 및 75~85℃ 조건에서 활성화되는 것을 특징으로 하는
디글루-플라티코딘 D(deglu-platycodin D) 제조용 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 조성물은 도라지 추출물에 처리하기 위한 것인
디글루-플라티코딘 D 제조용 조성물.
제3항에 있어서,
상기 도라지 추출물은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E), 플라티코사이드 E(platycoside E), 플라티코딘 D3(platycodin D3), 플라티코딘 D(platycodin D), 플라티코딘 A(platycodin A), 폴리갈락신 D(polygalacin D) 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는
디글루-플라티코딘 D 제조용 조성물.
딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum; Dt) 유래 서열번호 2로 기재되는 염기 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자를 포함하고,
상기 β-글루코시다아제는 pH 6.0~7.0 및 75~85℃ 조건에서 활성화되는 것을 특징으로 하는
디글루-플라티코딘 D 제조용 조성물.
제1항 또는 제5항에 따른 조성물을 기질에 pH 6.0~7.0 및 75~85℃ 조건에서 처리하는 단계를 포함하는
디글루-플라티코딘 D 제조방법.
제6항에 있어서,
상기 기질은 디아피-플라티코사이드 E(deapi-platycoside E), 플라티코사이드 E(platycoside E), 플라티코딘 D3(platycodin D3), 플라티코딘 D(platycodin D), 플라티코딘 A(platycodin A), 폴리갈락신 D(polygalacin D) 및 2"-O-아세틸폴리갈락신 D2(2"-O-acetyl polygalacin D2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 도라지 추출물인
디글루-플라티코딘 D 제조방법.
삭제
딕티오글로무스 툴기듐(Dictyoglomus turgidum; Dt) 유래 서열번호 2로 기재되는 염기 서열로 이루어진 β-글루코시다아제를 코딩하는 유전자를 포함하고,
상기 β-글루코시다아제는 pH 6.0~7.0 및 75~85℃ 조건에서 활성화되는 것을 특징으로 하는
디글루-플라티코딘 D 제조용 재조합 발현 벡터.
숙주세포에 제9항에 따른 재조합 발현 벡터가 형질전환된 형질전환체.
디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제11항에 있어서,
상기 염증성 질환은 기관지염, 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상인 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.
디글루-플라티코딘 D 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물.