KR102465346B1 - 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 구절초 꽃 및 꾸지뽕 열매 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은, 구절초 꽃 또는 꾸지뽕 열매 단독 추출물 보다 현저히 상승된 염증 억제 효능이 있으며, 또한, 이의 열수 추출물 보다 월등한 염증 억제 효능을 지니기에, 항염증용 조성물로서 널리 활용될 수 있을 것이다.

Description

구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물 {A composition comprising Chrysanthemum zawadskii and Cudrania tricuspidata Bureau having anti-inflammation activity}

본 발명은 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.

현대에는 경제발전과 더불어 식생활의 형태가 급변하고 평균수명 연장에 따른 인구의 고령화와 질병의 많은 변화로 웰빙 바람과 함께 건강에 대한 관심이 어느 때보다 높아짐에 따라, 천연물을 기원으로 하는 생약을 한방에서의 질병 치료제나 보약 처방으로 널리 사용하여 왔으나 최근 들어서는 예방의학적 차원에서 건강과 영양까지 고려한 각종 기능성 식품 등의 소재로 다양하게 개발하고 있다.

구절초는 (Chrysanthemum zawadskii) 국화과에 속하는 다년생 쌍떡잎식물로, 구절초는 전국 각처의 산지와 고원지에서 자생하고 중국, 러시아, 몽골, 일본 등지에서 자란다고 알려져 있다. 구절초는 그 줄기와 잎을 말려 예로부터 월경불순, 자궁냉증, 불임증의 부인병과 위장병 등에 효능을 가지는 생약으로 사용되고 있다.

일 예로, 국내등록특허 10-2132655에서는 구절초 추출물을 포함하는 조성물의 항산화 효능에 관하여 개시하고 있으나, 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증에 대한 상승효과에 관하여는 본 발명자에 의하여 최초로 규명되었다.

또한, 꾸지뽕 나무는 뽕나무과에 속한 작은키나무로, 생김새가 뽕나무를 닮아 ‘꾸지뽕나무’라는 이름을 갖게 되었으며, 우리나라를 포함하여 중국, 일본 등 동아시아에 널리 분포하는 뽕나무과 낙엽 교목으로 다양한 약리 작용이 있는 것으로 알려져 있다. 이렇게 최근 그 효능들이 과학적으로 밝혀지면서 각광받고 있는 꾸지뽕 나무는 우리의 고유 식물자원으로 식물 자체가 가진 면역력 때문에 농약을 치지 않아도 병충해를 입지 않는 열매로 알려진 천혜의 유기농 농산물로서 꾸지뽕나무는 예로부터 한방에서 신선들이 즐겨 먹었다는 이야기가 있었을 정도로 귀하고 항산화, 항당뇨, 감기 예방, 항암, 노화 방지 등의 효능을 가지고 있다고 알려져 있다.

일 예로, 국내등록특허 10-1773249에서는 꾸지뽕 나무의 잎과 열매 추출물이 혼합 조성된 꾸지뽕 건강식품의 제조방법에 관하여 개시하고 있으나, 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증에 대한 상승효과에 관하여는 본 발명자에 의하여 최초로 규명되었다.

한편, 인체 내에서 대식세포는 병원체에 반응하여 종양 괴사 인자-α(tumor necrotic factor-α, TNF-α), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-1β(IL-1β) 등과 같은 염증유발인자를 생성하고, 유도성 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)와 사이클로옥시게나제-2(cyclooxygenase-2, COX-2)를 합성하여 일산화질소(NO) 및 프로스타글란딘(prostaglandin E2, PGE2)을 생성한다. 생리학적으로 NO는 세균과 종양을 제거하고 혈압을 조절하거나 신경 전달을 매개하는 등 다양한 역할을 한다. 그러나 염증 반응이 일어나게 되면 관련 세포들에서 iNOS의 발현이 증가하여 많은 양의 NO가 생성되고, 과도하게 생성된 NO는 조직의 손상, 유전자 변이, 신경 손상 등을 유발하며, 혈관 투과성을 증가시켜 부종 등의 염증 반응을 촉진시킨다. 이러한 염증 반응을 줄이기 위해 새로운 항염증 물질에 대한 다양한 연구가 이루어지고 있다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 새로운 항염증 효능을 가지는 천연물 유래 소재를 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물에서 항염증 상승효과를 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공하는 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는, 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

구체적으로, 상기 구절초 추출물은 생화, 건화, 또는 꽃잎줄기 추출물일 수 있으며, 바람직하게는, 생화 또는 건화일 수 있고, 보다 구체적으로, 상기 구절초 추출물은 전체 중량 대비 80 내지 99.99 중량% 포함되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 상기 꾸지뽕 추출물은 꾸지뽕 열매 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 전체 중량 대비 0.1 내지 20 중량% 포함되는 것일 수 있다.

또한, 상기 조성물은 추가로 항산화 효능을 갖는 것일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물의 용매는 에탄올인 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서의 용어, “구절초(Chrysanthemum zawadskii)”는 국화과에 속하는 여러해살이풀로서, 우리나라 전역에 야생하고 있으며 동속으로는 바위구절초, 산구절초, 포천구절초, 및 서홍 구절초 등이 있다. 민간에서는 주로 부인병의 냉증, 월경통, 월경불순 등에 치료효과가 있는 것으로 사용되어져 왔으나 구절초 추출물의 항염증 효능에 대하여는 본 발명자에 의해 최초로 규명되었다.

본 발명에 있어서, 상기 구절초 추출물의 항염증 효능을 위하여 바람직하게는 구절초의 생화 또는 건화를 사용한 것일 수 있다.

본 발명에서의 용어, “꾸지뽕(Cudrania tricuspidata Bureau)”은 뽕나무과에 속한 작은키나무로, 생김새가 뽕나무를 닮아 ‘꾸지뽕나무’라는 이름을 갖게 되었으며, 꾸지뽕 열매는 9월쯤 덩어리를 이루다 빨갛게 익으며 당뇨, 고혈압, 부인병 치료제 등에 쓰였다고 알려져 있다.

우리나라를 포함하여 중국, 일본 등 동아시아에 널리 분포하는 뽕나무과 낙엽 교목으로 다양한 약리 작용이 있는 것으로 알려져 있으며 이렇게 최근 그 효능들이 과학적으로 밝혀지면서 각광받고 있는 꾸지뽕 나무는 우리의 고유 식물자원으로 식물 자체가 가진 면역력 때문에 농약을 치지 않아도 병충해를 입지 않는 열매로 알려진 천혜의 유기농 농산물로서 꾸지뽕나무는 예로부터 한방에서 신선들이 즐겨 먹었다는 이야기가 있었을 정도로 귀하고 항산화, 항당뇨, 감기 예방, 항암, 노화 방지 등의 효능을 가지고 있어 각종 질병을 치료하는 탁월한 효능이 있다고 알려져 있으나, 이의 항염증 효능에 대하여는 본 발명자에 의하여 최초로 규명되었다.

본 발명에 있어서, 상기 꾸지뽕의 항염증 효능을 위하여 바람직하게는 꾸지뽕 열매를 사용한 것일 수 있다.

본 발명에서의 용어, “복합 추출물”은 두 가지 이상의 추출물이 하나로 합쳐진 추출물을 의미한다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 구절초 및 꾸지뽕 추출물을 하나로 합친 것일 수 있으며, 또는, 상기 구절초 및 꾸지뽕을 혼합하여 추출한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서의 용어, “추출물”은 어떤 물질을 추출 처리하여 얻어지는 물질을 의미하는 것으로, 구체적으로 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나, 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

상기 추출 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

본 발명에서 추출에 사용되는 추출용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 추출용매는 에탄올일 수 있다.

본 발명에서의 용어, “유효성분”은 단독으로 목적으로 하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체 등과 함께 목적으로 하는 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 발명에서의 용어, “항염증”은 염증을 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 염증 반응의 조절은 대단히 복잡한 것으로 알려져 있는데, 이는 생체 내 복구체계의 증강 및 손상을 감소시키기 위한 것으로 알려져 있다. 그러나 반복되는 조직의 손상이나 재생에 의해 염증반응이 지속되면, 염증관련 세포에서 ROS와 RNS가 과다 생성되고 그 결과로 영구적인 유전자의 변형이 야기된다. 이처럼 ROS와 RNS는 생체 내 여러 가지 세포의 작용을 조절하는 염증 반응과 깊이 관련되어 있다. 염증 과정 중에는 많은 양의 염증유도 사이토카인(proinflammatory cytokines), 아질산(nitric oxide, NO) 그리고 프로스타글란딘(prostaglandin E2, PGE2)이 유도성 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)와 사이클로옥시게나아제(cyclooxygenase-2, COX-2)에 의해 생성된다.

본 발명의 일 실시예에서는, 구절초를 용매별로 추출하여(도 1), 용매별 추출물의 DPPH 및 ABTS 어세이를 통한 구절초 에탄올 추출물의 항산화 효능을 확인하고(도 2), 세포 독성 평가를 실시하였으며(도 3), 항산화 효능 및 항염증 효능을 확인한 뒤(도 4), 동일한 방법으로 꾸지뽕 열매를 용매별로 추출하고(도 5), DPPH 및 ABTS 어세이를 통해 꾸지뽕 추출물별 항산화 효능을 확인하고(도 6), MTT 어세이를 통한 꾸지뽕 추출물별 세포 독성 평가를 실시하였으며(도 7), 항염증 효능을 확인하고(도 8), 상기 구절초 및 꾸지뽕을 혼합한 복합 추출물의 상승효과를 확인하고자, 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 세포 독성 평가를 실시하고(도 9), 염증매개 유전자 발현 측정을 통해 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증 효능을 확인하였으며(도 10 내지 도 11), 또한, 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 세포 독성 평가를 실시하고(도 12), 염증매개 유전자 발현 측정을 통해 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증 효능을 확인하였다(도 13 내지 도 14).

이를 통해, 구절초 생화, 건화, 건조 꽃잎줄기 및 꾸지뽕 열매 용매별 단독 추출물의 항산화, 세포독성, 및 항염증 효능을 확인하였으며, 구절초 및 꾸지뽕 복합 추출물이 단독 추출물 보다 우수한 항염증 효능이 있음을 확인하고, 상기 복합 추출물의 최적의 혼합 비율을 확인하였다.

본 발명의 다른 하나의 양태는 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 약학 조성물을 제공한다.

이때, 상기 용어 “추출물”, “유효성분”, 및 “항염증”은 상기에서 상술한 바와 같다.

본 발명에서의 용어, “약학 조성물”은 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있는데, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다.

구체적으로, “약학적으로 허용가능한 담체”는 생물체를 자극하지 않고 본 발명 조성물의 피부과색소 침착성 질환 증상의 예방 또는 치료 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약학적 담체로는, 멸균, 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 하나 이상의 성분을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.

또한, 본 발명의 약학적으로 허용가능한 담체는 비자연적 담체를 포함할 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 폴리카프로락톤(polycaprolactone), 폴리락틱액시드(Poly Lactic Acid), 폴리-L-락틱액시드(poly-L-lactic acid), 광물유 등을 들 수 있다.

상기 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 담체의 형태로는 각종 부정형의 담체, 마이크로 스피어, 나노파이버 등을 포함할 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.

경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 상기 용어, “약학적으로 유효한 양”은 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 단독으로 투여하거나 공지된 익상편 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 식품 조성물을 제공한다.

이때, 상기 용어 “추출물”, “유효성분”, 및 “항염증”은 상기에서 상술한 바와 같다.

본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 식품학적으로 허용 가능한식품 보조 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 천연물 유래 화합물로부터 합성한 화합물을 유효성분으로 하므로 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.

본 발명에서의 용어, “식품 조성물”은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 기능성 식품, 건강기능식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.

본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 화합물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 화합물을 일성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.

또한, 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.

본 발명에서의 용어, "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, '기능성'은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 한편, 건강식품은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품은 건강 보조 목적의 식품을 의미하는데, 경우에 따라, 건강기능식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 혼용될 수 있다.

보다 구체적으로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 비만의 예방 또는 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 식품학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 보조 식품류 등이 있다. 상기 식품 조성물에는 비만의 예방 또는 개선 효과에 방해가 되지 않는 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다.

예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

또한, 상기 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용된다.

본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.

이때, 상기 용어 “추출물”, “유효성분”, 및 “항염증”은 상기에서 상술한 바와 같다.

본 발명에서의 용어, “화장료 조성물”은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 상기 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 상기 가용화 제형으로는 유연화장수 등이 있다. 적합한 제형은 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 바이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태일 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태일 수 있다.

상기 화장료 조성물은 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 항염증 용도를 제공한다.

이때, 상기 용어 “추출물”, “유효성분”, 및 “항염증”은 상기에서 상술한 바와 같다.

본 발명의 구절초 꽃 및 꾸지뽕 열매 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은, 구절초 꽃 또는 꾸지뽕 열매 단독 추출물 보다 현저히 상승된 염증 억제 효능이 있으며, 또한, 이의 열수 추출물 보다 월등한 염증 억제 효능을 지니기에, 항염증용 조성물로서 널리 활용될 수 있을 것이다.

도 1은 구절초 추출물의 추출 방법을 나타내는 모식도이다.
도 2A는 DPPH 및 ABTS 어세이를 통한 구절초 에탄올 추출물의 항산화 효능을 나타내는 그래프이다.
도 2B는 DPPH 및 ABTS 어세이를 통한 구절초 열수 추출물의 항산화 효능을 나타내는 그래프이다.
도 3A는 구절초 생화 에탄올 추출물 세포 독성 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3B는 구절초 건화 에탄올 추출물 세포 독성 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3C는 구절초 건조 꽃잎줄기 에탄올 추출물 세포 독성 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4A는 구절초 에탄올 추출물의 항산화 효능을 나타내는 그래프이다.
도 4B는 염증매개 유전자 발현 측정을 통해 구절초 에탄올 추출물의 항염증 효능을 나타내는 사진이다.
도 5는 꾸지뽕 추출물의 추출 방법을 나타내는 모식도이다.
도 6은 DPPH 및 ABTS 어세이를 통해 꾸지뽕 추출물별 항산화 효능을 나타내는 그래프이다.
도 7은 MTT 어세이를 통해 꾸지뽕 추출물별 세포 독성 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 꾸지뽕 추출물별 항염증 효능을 나타내는 사진이다.
도 9는 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 세포 독성 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 10은 염증매개 유전자 발현 측정을 통해 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증 효능을 나타내는 사진이다.
도 11은 염증매개 유전자 발현 측정을 통해 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증 효능을 나타내는 그래프이다.
도 12는 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 세포 독성 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 13은 염증매개 유전자 발현 측정을 통해 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증 효능을 나타내는 사진이다.
도 14는 염증매개 유전자 발현 측정을 통해 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 항염증 효능을 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 구절초 시료 준비

구절초 생화와, 건조시킨 구절초의 꽃(건화), 및 건조시킨 꽃잎줄기를 분쇄하여, 에탄올 또는 물을 이용한 추출물 시료를 준비하였다.

보다 구체적으로, 생 또는 건조시킨 구절초를 분쇄하여 99% 에탄올에 용해한 후, 60℃에서 초음파를 40kHz, 300W로 가하여 2시간동안 추출하여, 에탄올 추출물을 준비하였다.

또한, 열수 추출물은 생 또는 건조시킨 구절초를 분쇄한 뒤, 121℃의 물에서 0.1MPa의 압력을 가하며, 1시간 동안 추출하여 준비하였다(도 1).

또한, 준비한 추출물은 건조시킨 후 수득율을 측정하였다(표 1).

이를 통해, 용매별 구절초 추출물을 준비하였으며, 이후, 에탄올 추출물은 DMSO에, 열수 추출물은 물에 용해하여 실험에 사용하였다.

실시예 2. 구절초 시료별 항산화능 분석

상기에서 준비한 구절초 시료별 항산화능을 DPPH 및 ABTS 어세이를 통해 분석하였다. 구체적으로, DPPH 어세이는 보라색 화합물인 DPPH를 항산화 활성이 있는 물질과 반응하여 구조변화가 일어나면 520 nm에서 광흡수가 일어나지 않는 노란색을 띄게 되어, 이를 측정하여 라디칼 소거능을 확인하는 어세이이며, ABTS 어세이는 페놀성 화합물과 반응하여 양이온을 띄고, 색상의 변화가 나타나면, 이를 600 ~ 750 nm에서 측정하여 항산화 활성을 확인하는 어세이이다.

그 결과, 도 2에서 볼 수 있듯이, 구절초 생화 에탄올 추출물의 경우, 200μg/mL에서 50%의 라디컬 감소 효능이 있었으며, 구절초 건조 꽃잎줄기 에탄올 추출물의 경우, 500μg/mL에서 70% 라디컬 감소 효능을 확인하였다.

반면, 구절초 건화 에탄올 추출물에서는 라디컬 감소 효능이 나타나지 않았다.

또한, 열수 추출물의 경우, 구절초 생화 추출물 2000 μg/mL에서 20%의 라디컬 감소 효능을 확인하였으며, 건화 및 건조 꽃잎줄기 열수 추출물에서는 라디컬 효능이 미비한 것을 확인하였다.

이를 통해, 구절초 에탄올 추출물에서는 항산화능이 나타나는 반면, 구절초 열수 추출물에서는 항산화능이 낮은 것을 확인하였으며, 이후 실험을 위하여 구절초 에탄올 추출물을 선택하였다.

실시예 3. 구절초 시료별 세포 독성 분석

상기에서 선택한 구절초 에탄올 추출물의 세포 독성을 확인하였다.

보다 구체적으로, 피부세포주인 HaCaT 세포와 대식세포주인 RAW 264.7 세포에 구절초 생화, 건화, 건조 꽃잎줄기 각각의 에탄올 추출물을 1, 10, 및 100 ug/ml 로 처리한 후, 24 및 48시간 뒤에 MTT 어세이를 진행하였다.

그 결과, 도 3에서 볼 수 있듯이, 상기 구절초 건화 에탄올 추출물에서 다소 세포 독성이 나타나는 것을 확인하였으나, 구절초 생화/ 건조 꽃잎줄기 에탄올 추출물에서는 상기 추출물을 세포에 처리하고 48시간 후, 세포생존률이 전반적으로 높은 것을 통해 세포 독성이 없음을 확인하였다.

이를 통해, 구절초 에탄올 추출물의 낮은 세포 독성을 확인하였다.

실시예 4. 구절초 시료별 항산화 및 항염증 효능 분석

상기에서 선택한 구절초 에탄올 추출물의 세포 항산화 효능을 확인하였다.

구체적으로, DCF-DA를 이용한 어세이를 진행하였다. 세포 투과성을 가진 fluorescein이 화학적으로 환원된 형태인 DCF-DA는 세포 내 발생된 ROS와 반응하면 아세트산기가 절단되어 형광도가 높은 DCF로 변환된다. 이를 마이크로플레이트 리더기를 이용하여 Ex 492, Em 527 에서 형광 발현 정도를 측정해, 세포 내 발생된 ROS의 양을 확인하였다.

보다 구체적으로, 구절초 생화, 건화, 및 건조 꽃잎줄기를 100 μg/mL 처리하고, LPS로 24시간 동안 자극한 뒤, DCF-DA가 첨가된 배지로 교체하여 30분 간 처리한 뒤, 세포를 수거하여 ROS 생성 변화를 관찰하였다.

그 결과, 도 4A에서 볼 수 있듯이, 모든 구절초 에탄올 추출물이 LPS 자극으로 생성되는 ROS를 다른 에탄올 추출물보다 월등히 감소시키는 것을 확인하였다.

또한, 상기에서 선택한 구절초 에탄올 추출물의 세포 항염증 효능을 확인하였다. 구절초 생화 10, 100, 500,μg/mL, 구절초 건화 1, 10, 100,μg/mL, 구절초 건조 꽃잎줄기 1, 10, 100 μg/mL를 처리하였다.

구체적으로, 세포로부터 RNA를 추출한 뒤, cDNA를 합성하고, PCR을 통해, iNOS, COX-2, IL-6, 및 β-actin의 유전자 발현 변화를 확인하였다.

그 결과, 도 4B에서 볼 수 있듯이, 모든 구절초 에탄올 추출물에서 농도의존적으로 상기 염증매개 유전자들의 발현을 감소시켰다.

이를 통해, 구절초 에탄올 추출물이 항산화 및 항염 효능이 있음을 확인하였다.

실시예 5. 꾸지뽕 시료 준비

꾸지뽕의 에탄올 또는 물을 이용한 추출물 시료를 준비하였다.

보다 구체적으로, 꾸지뽕 열매를 분쇄하여 99% 에탄올에 용해한 후, 60℃에서 초음파를 40kHz, 300W로 가하여 2시간동안 추출하여, 에탄올 추출물을 준비하였다.

또한, 열수 추출물은 상온 또는 121℃(가온)의 물에서 0.1MPa의 압력을 가하며, 1시간 동안 추출하여 준비하였다(도 5).

또한, 준비한 추출물은 건조시킨 후 수득율을 측정하였다(표 2).

이를 통해, 용매별 꾸지뽕 추출물을 준비하였으며, 이후, 에탄올 추출물은 DMSO에, 물 추출물은 물에 용해하여 실험에 사용하였다.

실시예 6. 꾸지뽕 시료별 항산화능 분석

상기 실시예 2의 방법과 동일하게 준비한 꾸지뽕 시료별 항산화능을 DPPH 및 ABTS 어세이를 통해 분석하였다.

구체적으로, 꾸지뽕 에탄올 추출물은 0.6, 1.1, 2.8, 5.6, 35, 및 566 μg/mL을 처리하였고, 꾸지뽕 상온 또는 가온 물 추출물은 1.25, 25, 50, 100, 200, 및 500 μg/mL을 처리하여 DPPH 어세이 및 ABTS 어세이를 진행하였다.

그 결과, 도 6에서 볼 수 있듯이, 꾸지뽕 에탄올 추출물은 0.6 μg/mL부터 자유 라디칼 소거능을 보이고, 566μg/mL에서는 90% 가까이 감소시키는 것을 확인하였다. 반면, 상온 및 가온 물 추출물에서는 항산화 효능이 없는 것을 확인하였다.

실시예 7. 꾸지뽕 시료별 세포 독성 분석

상기에서 선택한 꾸지뽕 에탄올 추출물의 세포 독성을 확인하였다.

구체적으로, 실시예 3과 동일한 방법으로 피부세포주인 HaCaT 세포와 대식세포주인 RAW 264.7 세포에서 MTT 어세이를 통해 확인하였다.

그 결과, 도 7에서 볼 수 있듯이, 모든 꾸지뽕 추출물에서 전반적으로 세포 독성이 나타나지 않는 것을 확인하였다.

이를 통해, 꾸지뽕 추출물의 낮은 세포 독성을 확인하였다.

실시예 8. 꾸지뽕 시료별 항염증 효능 분석

상기에서 선택한 꾸지뽕 에탄올 추출물의 세포 항염증 효능을 확인하였다.

구체적으로, 실시예 4와 동일한 방법으로 세포로부터 RNA를 추출한 뒤, cDNA를 합성하고, PCR을 통해, iNOS, COX-2, IL-6, 및 β-actin의 유전자 발현 변화를 확인하였다.

보다 구체적으로, 꾸지뽕 에탄올 추출물은 0.56, 5.6, 및 55.6 μg/mL을, 상온 및 가온 물 추출물은 1, 10, 및 50μg/mL을 처리하였으며, LPS는 100ng/mL을 처리하여 염증반응을 유도하였다.

그 결과, 도 8에서 볼 수 있듯이, 꾸지뽕 에탄올 추출물은 0.56 μg/mL 에서부터 염증매개 유전자의 발현을 감소시키는 것으로 나타났다. 반면, 꾸지뽕 물(상온/가온) 추출물에서는 항염 효능이 없는 것을 확인하였다.

이를 통해, 꾸지뽕 에탄올 추출물이 물 추출물보다 월등히 우수한 항염 및 항산화 효능을 가지는 것을 확인하였다.

실시예 9. 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 세포 독성 및 항염증 효능 분석

상기 실시예를 통해 구절초 생화 에탄올 추출물 및 꾸지뽕 에탄올 추출물의 우수한 항산화 및 항염증 효능을 확인하였기에, 상기 추출물을 혼합한 복합 추출물의 세포 독성 및 항염증 상승 효능을 확인하였다.

구체적으로, 구절초 생화 에탄올 추출물 1, 10 μg/mL과 꾸지뽕 에탄올 추출물 0.05, 0.1 μg/mL을 각각 혼합하여 처리한 뒤, MTT 어세이를 통해 RAW264.7 세포 내 독성을 확인하였다.

그 결과, 도 9에서 볼 수 있듯이, 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 여러 농도에서 전반적으로 높은 세포 생존률이 나타나는 것을 확인하였다.

이를 통해, 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물은 세포독성을 가지지 않음을 확인하였다.

또한, 상기 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 추출물을 처리하여, LPS에 의해 유도되는 염증매개 유전자(iNOS, COX-2, 및 IL-6)의 발현 변화를 확인하였다.

그 결과, 도 10 내지 도 11에서 볼 수 있듯이, 구절초 생화 에탄올 추출물 및 꾸지뽕 에탄올 추출물을 단독으로 처리할 때보다 복합 추출물을 처리할 때, 상기 LPS에 의해 유도된 염증매개 유전자들의 발현 감소가 더 증가하는 것을 확인하였으며, 특히 구절초 생화 1μg/mL + 꾸찌뽕 0.1μg/mL, 구절초 생화 10μg/mL + 꾸찌뽕 0.1μg/mL 군에서 가장 우수하게 상기 유전자들의 발현을 감소시키는 것을 확인하였다.

이를 통해, 구절초 생화 및 꾸지뽕 복합 에탄올 추출물의 항염증에 대한 우수한 상승효과를 확인하였다.

실시예 10. 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 세포 독성 및 항염증 효능 분석

실시예 9에 이어, 구절초 건화 에탄올 추출물 1, 10 μg/mL과 꾸지뽕 에탄올 추출물 0.05, 0.1 μg/mL을 각각 혼합하여 처리한 뒤, MTT 어세이를 통해 RAW264.7 세포 내 독성을 확인하였다.

그 결과, 도 12에서 볼 수 있듯이, 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물의 여러 농도에서 전반적으로 높은 세포 생존률이 나타나는 것을 확인하였다.

이를 통해, 구절초 건화 단독 에탄올 추출물에서는 세포 독성이 다소 높았으나, 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물에서는 세포독성을 가지지 않음을 확인하였다.

또한, 상기 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 추출물을 처리하여, LPS에 의해 유도되는 염증매개 유전자(iNOS, COX-2, 및 IL-6)의 발현 변화를 확인하였다.

그 결과, 도 13 내지 도 14에서 볼 수 있듯이, 구절초 건화 에탄올 추출물 및 꾸지뽕 에탄올 추출물을 단독으로 처리할 때보다 복합 추출물을 처리할 때, 상기 LPS에 의해 유도된 염증매개 유전자들의 발현 감소가 더 증가하는 것을 확인하였으며, 특히 구절초 건화 10μg/mL + 꾸지뽕 0.1μg/mL 군에서 가장 우수하게 상기 유전자들의 발현을 감소시키는 것을 확인하였다.

이를 통해, 구절초 건화 및 꾸지뽕 복합 에탄올 추출물의 항염증에 대한 우수한 상승효과를 확인하였다.

다시 말해, 본 발명에서는 구절초 에탄올 추출물 및 꾸지뽕 열매 에탄올 단독 추출물 및 복합 추출물을 비교하여, 항염증에 대한 시너지 효능을 확인하였다.

또한, 구절초 생화는 원물 확보에 시기적 제한이 있으며, 비용이 높다는 단점이 있으나, 구절초 건화 및 꾸지뽕 열매 복합 추출물이 상승효과로 인해, 구절초 생화 및 꾸지뽕 열매 복합 추출물의 항염증 효능과 비슷한 효능을 가지는 것을 확인하였으며, 구절초 건화 단독 에탄올 추출물에서는 다소 높았던 세포 독성이 구절초 건화 및 꾸지뽕 열매 복합 추출물에서는 세포 독성이 낮은 것을 확인하여, 우수한 항염증 효능 상승효과 및 안전성을 확인하였다.

즉, 구절초 생화 또는 건화 단독 에탄올 추출물이 지니는 항염증 효능 및 세포 독성은 서로 차이가 있으나, 꾸지뽕 열매 에탄올 추출물과 혼합할 경우, 생화/건화 차이 없이 우수한 항염증 효능 및 높은 안전성을 갖는 것을 확인하여, 상기 시기적 제한 및 비용의 단점을 해결하였다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (8)

1. 구절초 및 꾸지뽕 복합 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 구절초 에탄올 추출물은 생화, 또는 건화 에탄올 추출물인 것인, 항염증용 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 구절초 에탄올 추출물은 전체 중량 대비 80 내지 99.99 중량% 포함되는 것인, 항염증용 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 꾸지뽕 에탄올 추출물은 꾸지뽕 열매 에탄올 추출물인 것인, 항염증용 조성물.
   
5. 제1항에 있어서, 상기 꾸지뽕 에탄올 추출물은 전체 중량 대비 0.01 내지 20 중량% 포함되는 것인, 항염증용 조성물.
   
6. 삭제
7. 제1항에 있어서, 상기 항염증 효능은 iNOS, COX-2, 또는 IL-6 발현 감소능에 의해 이루어지는 것인, 항염증용 조성물.
   
8. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 추가로 항산화 효능을 갖는 것인, 항염증용 조성물.

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