KR102445381B1 - 혈관성 치매의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도 - Google Patents
혈관성 치매의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102445381B1 KR102445381B1 KR1020210155878A KR20210155878A KR102445381B1 KR 102445381 B1 KR102445381 B1 KR 102445381B1 KR 1020210155878 A KR1020210155878 A KR 1020210155878A KR 20210155878 A KR20210155878 A KR 20210155878A KR 102445381 B1 KR102445381 B1 KR 102445381B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- genes
- seq
- expression
- gene
- rho
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
본 발명은 허혈성 뇌질환의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도에 관한 것으로서, 본 발명의 신규한 바이오마커인 전염증성 유전자 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1), Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자인 Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2) 및 혈관신생 유전자인 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1)의 발현이 혈관성 치매 동물모델에서 증가한 것을 확인하였다. 또한, 밀착연접 유전자인 Occludin 및 Claudin-5의 발현이 혈관성 치매 동물모델에서 감소한 것을 확인하여, 본 발명의 신규한 바이오마커가, 허혈성 뇌질환의 진단에 유용하게 이용될 수 있는 것을 확인하였다.
Description
본 발명은, 혈관성 치매의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도에 관한 것이다.
다양한 신경계 질환이 보고되고 있으며, 특히 인구 고령화에 따라 65세 이상 노인 인구 10명 중 1명 꼴로 치매를 겪고 있어 이러한 신경계 질환들에 대한 관심이 높아지고 있다. 치매는 하나의 단일 질환이라기보다는 후천적으로 발생한 다발성 인지기능 저하로 인하여 사회생활 및 일상생활에 유의한 장애가 발생한 상태로서, 알츠하이머병, 뇌혈관질환, 우울증, 대사성 질환, 갑상선 질환, 비타민 결핍증, 감염성 뇌질환, 정상압수두증 등 다양한 원인질환을 가진다. 그러나 이러한 원인질환들은 복합적으로 작용하는 경우가 많고, 또 이러한 원인질환들이 발생하였다고 해서 반드시 치매의 발생을 의미하지는 않기 때문에 상기 원인질환에 기여하는 특정 인자(factor)가 치매에 있어서는 어떻게 작용하는지는 아직까지도 연구자들에게 많은 논란이 있고 연구를 요한다.
허혈성 뇌손상은 혈액순환에 의존적인데 뇌로 혈액을 공급하는 혈관에 여러 가지 병리학적 이상이 발생되어 정상적 뇌혈류(50 ml/gram/minute)의 장애가 초래되면 일과성 뇌허혈증(transient cerebral ischemia)으로부터 완전 뇌졸중(complete stroke)으로 급속히 발전, 사망한 것으로 보고되고 있다. 허혈성 뇌졸증은 갑자기 발생하고, 신경학적 이상을 동반하며 단시간내 급격하게 질병의 경과가 진행되어 응급 치료법인 색전용해술에 의해서도 완전 치유가 불가능하며 사망에 이르지 않더라도 부작용 및 후유증이 초래되어 직접간접적으로 심각한 사회, 경제적인 손실까지 야기되고 있으므로 예방이 매우 중요하게 인식되고 있다.
한편, 경도 인지 장애(MIC), 혈관의 허혈성 병변, 뇌졸중, 알츠하이머 치매, 혈관성 치매들 간에 일부 선후 관계가 보고되고 있으나, 이러한 선후 관계가 반드시 후 질병의 발생을 의미하지 않고 실제 어떤 인자가 선후 관계에 높은 개연성을 가지는지는 많은 논란이 있으며 연구적 필요성이 제기되고 있다. 일례로, 선행된 인지장애와 치매의 관련성이 보고 되고 있으나 기억상실성 경도인지장애로 진단받은 사람이 실제 혈관성 치매로 발전될 확률은 10 내지 15%년 정도이며, 일반인구 집단에서 예측 타당도는 낮은 것으로 알려졌다(Blossom CM Stephan et al., Beyond mild cognitive impairment: vascular cognitive impairment, no dementia (VCIND), Alzheimers Res Ther20091:4). 또한 일례로 혈관성 치매의 발병에 있어서 뇌의 허혈성 변화들이 그 원인 중의 하나로 보고 되고 있으나, 실제로 일과성 허혈발작이 발생한 후 6-12 개월 내에 혈관성 치매로 발전하는 경우는 30%정도이다 (Abhijeet Jagtap et al., Biomarkers in vascular dementia: A recent update, Biomarkers and Genomic Medicine (2015) 7, 43e56). 뿐만아니라 뇌졸중후 혈관성 치매로 발전하는 경우는 약 10 ~ 30% 정도에 불과하다(Pendlebury ST. et al., Dementia in patients hospitalized with stroke: rates, time course, and clinico-pathologic factors, Int J Stroke. 2012 Oct;7(7):570-81)
여러 가지 치매 유형 중, 혈관성 치매는 혈관성 위험인자들의 조절을 통해 인지기능장애를 예방할 수 있을 뿐만 아니라 호전될 수도 있기 때문에 조기 발견 및 진단이 매우 중요하다. 그러나 혈관성 치매를 임상에서 진단하기에는 많은 어려움이 있으며 이로 인해 효과적인 치료법도 그다지 많이 개발되지 못한 실정이다. 그러한 이유는 혈관성 치매가 단일 질환으로 보기 보다는 매우 다양한 질환들을 포함하고 있기 때문으로 생각된다. 흔히, 혈관성 치매가 단순히 뇌혈관 질환으로 발생한다고 생각하기 쉽지만 뇌혈관 질환이 있다고 해서 반드시 혈관성 치매가 발병하는 것은 아니다. 혈관성 치매가 발병하기 위해서는 실제로 여러 가지 요인들이 치매의 발병에 영향을 미친다. 이런 요인들에는 혈관성 위험인자, 대뇌 피질의 변화, 대뇌 백질의 변화, 개인의 특성 및 유전적 요소들이 관여한다.
최근 들어 생활습관 및 식습관의 서구화로 혈관 내에 병변이 생기는 동맥경화증 환자가 증가하고 있다. 특히, 목에 위치하여 대뇌에 혈류를 공급하는 혈관인 경동맥은 서서히 막혀가는 경동맥 협착증이 발생하면 뇌허혈이나 뇌졸중 등을 유발하는 것으로 알려져 있으며, 경동맥 협착으로 혈관성 인지장애 또는 혈관성 치매가 유발될 수 있다. 이러한 혈관성 치매의 현상인 뇌 허혈 모델을 이용하여, 혈관성 치매에 대하여 연구하고자 하는 시도가 꾸준히 이어지고 있으며, 양측 총경동맥을 마이크로 코일로 협착시켜 개발된 만성 혈관성 치매 모델인 bilateral common carotid artery stenosis model(BCAS model)을 이용하여, 혈관성 치매의 기본 메커니즘을 규명하기 위하여 주로 이용되고 있다.
특히, BCAS model을 이용하여, 조기에 혈관성 치매를 진단할 수 있는 바이오마커의 개발이 요구되고 있으며, 현재까지 만성 혈관성 치매 모델인 BCAS 마우스에서 대뇌 혈류량의 변화를 통해 뇌 허혈 상태를 확인하고 있으나, 만성 허혈성 치매 모델인 BCAS 마우스에서는 뇌혈관 질환 상태를 예측할 수 있는 바이오마커가 필요한 상황이며, 치매 증상을 구분하기 위한 다양한 마커들이 보고되고 있으나, 실질적으로 효용성 있는 마커에 대해서는 많은 논란이 있다. 일례로 호모시스테인(homocysteine)은 알츠하이머 환자들의 혈청에서 그 수준이 상승되는 것으로 알려져 있는 반면, 혈관성 치매 환자에서도 혈장 내 호모시스테인 수준이 상승되며 이것이 혈관성 치매 환자의 해마 및 대뇌 피질위축과 관련성이 있음이 보고되어(Abhijeet Jagtap et al., Biomarkers in vascular dementia: A recent update, Biomarkers and Genomic Medicine (2015) 7, 43e56), 호모시스테인의 역할에 대해 서 논란이 있다. 이처럼 구체적인 치매 종류를 차별적으로 진단해내기 위한 바이오마커들의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
본 발명의 목적은 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단을 위한 바이오마커를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단용 바이오마커 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자의 발현을 측정하는 제제;를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기의 조성물을 포함하는 허혈성 뇌질환 진단용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 1) 개체로부터 생물학적 시료를 분리하는 단계;
2) 상기 분리된 생물학적 시료로부터 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자의 발현을 측정하는 단계; 및
3) 상기 유전자의 발현을 대조군의 기준치와 비교하는 단계;를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단을 위한 정보제공 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 1) 허혈성 뇌질환이 유도된 동물모델 또는 세포에 후보 물질을 처리하는 단계;
2) 상기 후보 물질 처리 후, 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자의 발현을 측정하는 단계;
3) 상기 전염증성 유전자, Rock 유전자, 혈관신생 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 감소하고; 및
4) 상기 밀착연접 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 증가한 후보 물질을 선별하는 단계;를 포함하는 허혈성 뇌질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단을 위한 바이오마커를 제공한다.
또한, 본 발명은 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자의 발현을 측정하는 제제;를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기의 조성물을 포함하는 허혈성 뇌질환 진단용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 1) 개체로부터 생물학적 시료를 분리하는 단계;
2) 상기 분리된 생물학적 시료로부터 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자의 발현을 측정하는 단계; 및
3) 상기 유전자의 발현을 대조군의 기준치와 비교하는 단계;를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단을 위한 정보제공 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 1) 허혈성 뇌질환이 유도된 동물모델 또는 세포에 후보 물질을 처리하는 단계;
2) 상기 후보 물질 처리 후, 전염증성 유전자, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자의 발현을 측정하는 단계;
3) 상기 전염증성 유전자, Rock 유전자, 혈관신생 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 감소하고; 및
4) 상기 밀착연접 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 증가한 후보 물질을 선별하는 단계;를 포함하는 허혈성 뇌질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 신규한 바이오마커인 전염증성 유전자 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1), Rock(Rho-associated protein kinase)유전자인 Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2) 및 혈관신생 유전자인 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1)의 발현이 혈관성 치매 동물모델에서 증가한 것을 확인하였다 또한, 밀착연접 유전자인 Occludin 및 Claudin-5의 발현이 혈관성 치매 동물모델에서 감소한 것을 확인하여, 본 발명의 바이오마커는 허혈성 뇌질환의 진단 및 예후예측에 유용하게 이용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 마우스 모델(vascular dementia, VD)의 뇌 균질물에서, 전염증성 유전자의 발현을 실시간 역전사 PCR로 분석한 것이다(A: IL-6 발현 정량화, B: IL-1b 발현 정량화, C: Mcp-1 발현 정량화, D: Ccr2 발현 정량화, E: Vcam-1 발현 정량화).
도 2는 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 마우스 모델(vascular dementia, VD)의 뇌 균질물에서, Rock 유전자의 발현을 실시간 역전사 PCR로 분석한 것이다(A: Rock1 발현 정량화, B: Rock2 발현 정량화).
도 3은 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 마우스 모델(vascular dementia, VD)의 뇌 균질물에서, 혈관신생 유전자의 발현을 실시간 역전사 PCR로 분석한 것이다(A: Vegfa 발현 정량화, B: Kdr 발현 정량화, C: NrpI 발현 정량화).
도 4는 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 마우스 모델(vascular dementia, VD)의 뇌 균질물에서, 밀착연접 유전자의 발현을 실시간 역전사 PCR로 분석한 것이다(A: Occludin 발현 정량화, B: Claudin-5 발현 정량화).
도 2는 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 마우스 모델(vascular dementia, VD)의 뇌 균질물에서, Rock 유전자의 발현을 실시간 역전사 PCR로 분석한 것이다(A: Rock1 발현 정량화, B: Rock2 발현 정량화).
도 3은 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 마우스 모델(vascular dementia, VD)의 뇌 균질물에서, 혈관신생 유전자의 발현을 실시간 역전사 PCR로 분석한 것이다(A: Vegfa 발현 정량화, B: Kdr 발현 정량화, C: NrpI 발현 정량화).
도 4는 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 마우스 모델(vascular dementia, VD)의 뇌 균질물에서, 밀착연접 유전자의 발현을 실시간 역전사 PCR로 분석한 것이다(A: Occludin 발현 정량화, B: Claudin-5 발현 정량화).
본 발명은 전염증성 유전자, Rock 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단을 위한 바이오마커를 제공한다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 전염증성 유전자는, IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1)으로 이루어진 군에서 선택된 유전자인 것일 수 있고, 상기 전염증성 유전자의 발현이, 정상 대조군의 기준치와 비교하여, 고발현 되는 경우, 허혈성 뇌질환으로 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자는, Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 또는 Rock2(Rho-associated protein kinase 2)인 것일 수 있고, 상기 Rock 유전자의 발현이, 정상 대조군의 기준치와 비교하여, 고발현 되는 경우, 허혈성 뇌질환으로 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 혈관신생 유전자는, Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 또는 Nrp1(Neuropilin 1)인 것일 수 있고, 상기 혈관신생 유전자의 발현이, 정상 대조군의 기준치와 비교하여, 고발현 되는 경우, 허혈성 뇌질환으로 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 밀착연접 유전자는, Occludin 또는 Claudin-5인 것일 수 있고, 상기 밀착연접 유전자의 발현이, 정상 대조군의 기준치와 비교하여, 저발현 되는 경우, 허혈성 뇌질환으로 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 허헐성 뇌질환은, 혈관성 치매, 뇌경색, 뇌졸중, 뇌내출혈, 지주막하 출혈, 백질이상증, 뇌색전증, 뇌혈전증 및 뇌동맥경화증으로 이루어진 군에서 선택된 질환인 것일 수 있으며, 바람직하게는 혈관성 치매이나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 본 발명은 전염증성 유전자, Rock 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 조성물은, 상기 유전자의 발현을 측정하는 제제를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에서, 상기 "발현을 측정하는 제제"는 혈관성 치매 환자로부터 분리된 생체 시료로부터 상기의 유전자를 정량적으로 검출하기 위한 제제를 의미하며, 상기 제제는 특별히 제한되는 것은 아니며, 상기 유전자를 정량화할 수 있는 시약 또는 화학 물질일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 검출시약을 더 포함할 수 있다. 상기 검출시약은 발색효소, 형광물질, 방사성 동위원소 또는 콜로이드 등의 검출체로 표지된 접합체일 수 있다. 발색효소는 퍼록시다제, 알칼라인 포스파타제 또는 산성 포스파타제일 수 있고, 형광물질은 플루오레신카복실산(FCA), 플루오레신 이소티오시아네이트(FITC), 플루오레신 티오우레아(FTH), 7-아세톡시쿠마린-3-일, 플루오레신-5-일, 플루오레신-6-일, 2',7'-디클로로플루오레신-5-일, 2',7'-디클로로플루오레신-6-일, 디하이드로 테트라메틸로사민-4-일, 테트라메틸로다민-5-일, 테트라메틸로다민-6-일, 4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-에틸 또는 4,4-디플루오로-5,7-디페닐-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-에틸, Cy3, Cy5, 폴리 L-라이신-플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 로다민-B-이소티오시아네이트(RITC), PE(Phycoerythrin) 또는 로다민일 수 있다.
상기 검출시약은 추가로 상기 검출시약에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드를 포함할 수 있다. 상기 리간드는 발색효소, 형광물질, 방사성 동위원소 또는 콜로이드 등의 검출체로 표지된 접합체, 및 스트렙타비딘 또는 아비딘이 처리된 리간드일 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 서술한 바와 같은 검출시약 외에도 이들의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.
본 발명에서 용어 "프라이머"는 짧은 자유 3 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 핵산 서열로 상보적인 핵산의 주형(template)과 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 핵산 주형의 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 중합효소 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재 하에서 DNA 합성(증폭 반응)을 개시할 수 있다.
상기 프라이머 설계 시, 프라이머의 A, G, C, T 함량비, 프라이머 결합체(dimer) 형성 방지, 같은 염기 서열의 3회 이상 반복금지 등 여러 가지 제약이 따르며, 그 외에 단독 PCR 반응조건에 있어서 주형(template) DNA의 양, 프라이머의 농도, dNTP의 농도, Mg2+의 농도, 반응온도, 반응시간 등의 조건이 적정해야 한다.
상기의 프라이머는 기본 성질을 변화시키지 않은 추가의 특징을 혼입할 수 있다. 즉 핵산 서열이 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형될 수 있다. 이러한 변형의 예로는 메틸화, 캡화, 뉴클레오타이드의 하나 이상의 동족체로의 치환 및 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트 또는 카바메이트 등의 하전되지 않은 연결체나 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트 등의 하전된 연결체로의 뉴클레오타이드의 변형이 가능하다. 또한 핵산은 뉴클레아제, 독소, 항체, 시그날 펩타이드, 폴리 L 리신 등의 단백질, 아크리딘 또는 프소랄렌 등의 삽입제, 금속, 방사성 금속, 철 산화성 금속 등의 킬레이트화제 및 알킬화제 등의 하나 이상의 부가적인 공유 결합된 잔기를 가질 수 있다.
또한 본 발명의 프라이머 서열은 검출 가능한 시그날을 직접적 또는 간접적으로 제공할 수 있는 표지를 이용하여 변형시킬 수 있다. 상기 프라이머는 분광학, 광화학, 생화학, 면역화학 또는 화학적 수단을 이용하여 검출 될 수 있는 표지를 포함할 수 있다. 유용한 표지는 32P, 형광 염료, 전자 밀집 시약, 효소(일반적으로 ELISA 에 이용되는 것), 바이오틴 또는 합텐 및 항혈청 또는 단일클론성 항체가 이용가능한 단백질을 포함한다.
본 발명의 프라이머는 적절한 서열의 클로닝 및 제한효소 분해 및 나랭(Narang)등의 포스포트리에스테르 방법(1979, Meth, Enzymol. 68:90-99), 보카지(Beaucage)등의 디에틸포스포라미다이트 방법(1981, Tetrahedron Lett. 22: 1859-1862), 및 미국 특허 제 4458066호의 고형물 지지 방법과 같은 직접적인 화학적 합성법을 포함하는 임의의 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다.
상기 “증폭 반응”은 핵산 분자를 증폭하는 반응을 의미하며, 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)으로, 역전사-중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR), 리가아제 연쇄 반응(ligase chain reaction; LCR), Gap-LCR(WO 90/01069), 복구연쇄 반응(repair chain reaction; EP 439,182), 전사-중재 증폭 (transcription-mediatedamplification; TMA) (WO88/10315), 자가유지염기서열복제(self sustained sequence replication) (WO90/06995), 타깃 폴리뉴클레오티드 염기서열의 선택적 증폭(selective amplification of target polynucleotide sequences), 컨센서스 서열 프라이밍 중합효소 연쇄 반응(consensus sequence primed polymerase chain reaction; CP-PCR), 임의적 프라이밍 중합효소 연쇄 반응(arbitrarily primed polymerase chain reaction; AP-PCR), 핵산염기서열 기반 증폭 (nucleic acid sequence based amplification; NASBA), 가닥 치환 증폭 (strand displacement amplification) 및 고리-중재 항온성 증폭 (loop-mediated isothermal amplification; LAMP) 등의 증폭 방법일 수 있으며, 이에 한정되지는 않는다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 전염증성 유전자는, 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 프라이머 세트 및 서열번호 9 및 서열번호 10의 프라이머 세트로 이루어진 군에서 선택된 제제로 발현을 측정하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 Rock 유전자는, 서열번호 11 및 서열번호 12의 프라이머 세트; 또는 서열번호 13 및 서열번호 14의 프라이머 세트로 발현을 측정하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 혈관신생 유전자는, 서열번호 15 및 서열번호 16의 프라이머 세트; 서열번호 17 및 서열번호 18의 프라이머 세트; 또는 서열번호 19 및 서열번호 20의 프라이머 세트로 발현을 측정하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 밀착연접 유전자는, 서열번호 21 및 서열번호 22의 프라이머 세트; 또는 서열번호 23 및 서열번호 24의 프라이머 세트로 발현을 측정하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기의 조성물을 포함하는 허혈성 뇌질환 진단용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 1) 개체로부터 생물학적 시료를 분리하는 단계;
2) 상기 분리된 생물학적 시료로부터 전염증성 유전자, Rock 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자로 이루어진 군에서 선택된 유전자의 발현을 측정하는 단계; 및
3) 상기 유전자의 발현을 대조군의 기준치와 비교하는 단계;를 포함하는, 허혈성 뇌질환 진단을 위한 정보제공 방법을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 생물학적 시료는, 혈액, 전혈, 혈장, 혈청, 소변, 조직, 세포, 기관, 골수 및 타액으로 이루어진 군에서 선택된 시료인 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 유전자의 발현 측정은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction) 또는 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction)으로 측정하는 것일 수 있고, 바람직하게는 실시간 중합효소 연쇄반응이나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 본 발명은 1) 허혈성 뇌질환이 유도된 동물모델 또는 세포에 후보 물질을 처리하는 단계;
2) 상기 후보 물질 처리 후, 전염증성 유전자, Rock 유전자, 혈관신생 유전자 및 밀착연접 유전자의 발현을 측정하는 단계;
3) 상기 전염증성 유전자, Rock 유전자, 혈관신생 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 감소하고; 및
4) 상기 밀착연접 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 증가한 후보 물질을 선별하는 단계;를 포함하는 허혈성 뇌질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기의 후보 물질은, 펩티드, 단백질, 비펩티드성 화합물, 활성 화합물, 발효 생산물, 세포 추출액, 식물 추출액, 동물조직 추출액 및 혈장으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
<실시예 1> 혈관성 치매 동물모델
본 발명의 혈관성 치매(vascular dementia, VD) 동물모델을 제작하기 위하여, 구체적으로 양측 총경동맥 협착증 마우스 모델(bilateral common carotid artery stenosis mouse model, BCAS mouse model)을 제작하고자 하였다. 구체적으로, 이소플루란(하나약품, 한국)으로 마우스를 마취하였으며, 마취된 마우스를 현미경에 고정한 후, 경동맥의 정준선 절개를 통해 총경동맥(CCA)를 노출시키고, 시트에서 분리한 후 마이크로 코일을 경동맥과 조심스럽게 묶었다(양쪽 모두). 그 후 6-0 실크 봉합사로 봉합하였다. 상기의 과정은 가열 패드(25 ~ 26℃)에서 수행되었으며, 체중, 체온 및 마비는 수술 후 안정될 때까지 주2회 모니터링 하였다.
<실시예 2> BCAS 모델에서의 유전자 발현 차이 확인
<2-1> 전염증성 유전자 발현 확인
허혈성 뇌손상은 염증 반응의 증가가 동반되므로, 혈관성 치매의 진단을 위한 바이오마커로서, 전염증성 유전자 및 이의 수준을 확인하였으며, 이를 측정하는 제제로서, 프라이머 세트의 유용성을 확인하고자 하였다. 구체적으로, 상기 실시예 1에서 제작된 마우스를 인도적으로 희생하여, 뇌를 적출하였다. 구체적으로, 적출된 뇌를 이용하여 실시간 역전사 PCR 분석을 위하여, 적출된 뇌에 easy-BLUE™ Total RNA Extraction Kit(iNtRON, Daejeon, Korea)을 1 ml 첨가하여 tissue homogenizer로 뇌 균질물(brain lysate)를 제작하였으며, 뇌 균질물을 10초간 voltexing하여 완전히 용해시켰다. 그 후 클로로포름(chloroform) 200 μl를 첨가하고 상온에서 10초간 voltexing 한 후, 5분간 반응시켰다.
반응 종료 후 ALL-in-One 5 x First Strand cDNA Master Mix(CellScript, Madison, WI, USA)를 사용하여 cDNA를 합성하였다. 실시간 역전사 PCR을 수행하기 위하여, CFX Connect Real-Time PCR Detection System(Biorad, Hercules, CA, USA) 기기를 이용하여 실시간 역전사 PCR을 수행하였다. 전염증성 유전자명 및 대상 유전자의 발현 확인을 위하여 사용한 Primer는 하기 표 1에 나타내었다.
| Gene | Primer sequence(5’ to 3’) | Anneling Temperature(℃) | product size (bp) | 서열번호 |
| IL-6 | F: TACCACTTCACAAGTCGGAGGC R: CTGCAAGTGCATCATCGTTGTTC |
60 | 116 | F: 1 R: 2 |
| IL-1b | F: TGGACCTTCCAGGATGAGGACA R: GTTCATCTCGGAGCCTGTAGTG |
60 | 148 | F: 3 R: 4 |
| Mcp-1 | F: CACTCACCTGCTGCTACTCA R: CTTCTTGGGGTCAGCACAGA |
60 | 149 | F: 5 R: 6 |
| Ccr2 | F: TCCACTCTACTCCCTGGTATTC R: TGGCCAAGTTGAGCAGATAG |
60 | 119 | F: 7 R: 8 |
| Vcam-1 | F: GCACTCTACTGCGCATCTT R: CACCAGACTGTACGATCCTTTC |
60 | 96 | F: 9 R: 10 |
PCR 반응을 감지하기 위하여, TOPreal™ qPCR 2X PreMIX(Enzynomics, Daejeon, korea)를 사용하였으며, PCR의 조건은 초기 95℃에서 15분간 반응시킨 뒤, 95℃에서 10초(Denaturation), 60℃에서 20초(Annealing), 72℃에서 20초(Elongation)의 과정을 39 cycle 반복하였다. SYBR Green 형광값은 신장반응 단계(Elongation) 후에 측정되었다. PCR 산물은 melting curve에 의해 분석되었으며, PCR 산물의 녹는점은 서열 특이적이기 때문에 비특이적 반응과 구별할 수 있다. 각 mRNA의 quantification cycle(Cq)를 결정하기 위하여, 상기 PCR 산물의 녹는점을 이용하여, 형광갑 검출 지점을 지정할 수 있다. 전염증성 유전자의 발현량음 GAPDH 발현에 따라 2-ΔΔct 방법으로 평준화하여 분석하였으며, 측정된 전염증성 유전자의 발현량은 항존유전자(hous keeping gene)인 GAPDH의 발현량으로 평준화하여 비교하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 혈관성 치매가 유도된 동물모델(BCAS mouse model, VD)에서는 대조군과 비교하여, 전염증성 유전자인 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1)의 발현이 유의적으로 증가한 것을 확인하여, 면역 반응이 과활성화 된 것을 확인하였다. 따라서, 상기 IL-6, IL-1b, Mcp-1, Ccr2 및 Vcam-1은 혈관성 치매를 진단하는 바이오 마커 및 유전자로서 IL-6, IL-1b, Mcp-1, Ccr2 및 Vcam-1의 발현 수준을 확인하였으며, 이의 수준을 측정하는 프라이머 세트의 유용성을 확인하였다.
<2-2> Rock 유전자 발현 확인
허헐성 뇌손상 후, 손상된 혈관 내피 및 골격 구조를 복구하기 위하여, 세포 골격의 재구조화와 관련된 Rho-키나아제가 증가하기에, 혈관성 치매의 진단을 위한 바이오마커로서, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자 및 이의 수준을 확인하고, 이를 측정하는 제제로서 프라이머 세트의 유용성을 확인하고자 하였다. 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 Rock 유전자의 발현량을 확인하고자 하였으며, 대상 유전자명 및 실시간 역전사 PCR을 위한 primer는 하기 표 2에 나타내었다.
| Gene | Primer sequence(5’ to 3’) | Anneling Temperature(℃) | product size (bp) | 서열번호 |
| Rock1 | F: AGAATGAGGACAGCAGAAGAAG R: GGTCCGTTCGGTACTGATATTC |
60 | 99 | F: 11 R: 12 |
| Rock2 | F: GGAGGTACGACTTGGAAGAAAT R: GCTGCCGTCTCTCTTATGTTAT |
60 | 99 | F: 13 R: 14 |
그 결과 도 2에 나타낸 바와 같이, 혈관성 치매가 유도된 동물모델(BCAS mouse model, VD)에서는 대조군과 비교하여, Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2) 유전자의 발현이 유의적으로 증가한 것을 확인하여, 세포 골격구조의 재구조화가 진행되는 것을 확인하였다. 따라서, 상기 Rock1 및 Rock2는 혈관성 치매를 진단하는 바이오 마커 및 유전자로서 Rock1 및 Rock2의 발현 수준을 확인하였으며, 이의 수준을 측정하는 프라이머 세트의 유용성을 확인하였다.
<2-3> 혈관신생 유전자 발현 확인
허혈성 뇌손상에서, 허혈 후 재관류 및 허혈에서 상향된 혈관신생을 나타내기에, 혈관성 치매의 진단을 위한 바이오마커로서, 혈관신생 유전자 및 이의 수준을 확인하고, 이를 측정하는 제제로서 프라이머 세트의 유용성을 확인하고자 하였다. 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 혈관신생 유전자의 발현량을 확인하고자 하였으며, 실시간 역전사 PCR을 위한 primer는 하기 표 3에 나타내었다.
| Gene | Primer sequence(5’ to 3’) | Anneling Temperature(℃) | product size (bp) | 서열번호 |
| Vegfa | F: GCAGACCAAAGAAAGACAGAAC R: CAGTGAACGCTCCAGGATTTA |
60 | 105 | F: 15 R: 16 |
| Kdr | F: CGACATAGCCTCCACTGTTTAT R: TGTTCTTGTTCTCGGTGATGT |
60 | 107 | F: 17 R: 18 |
| Nrp1 | F: GAGGACAGAGACTGCAAGTATG R: CTGAAGACACCACAGGAGAAG |
60 | 115 | F: 19 R: 20 |
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 혈관신생과 관련된 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1) 유전자의 발현은, 혈관성 치매가 유도된 동물모델(BCAS mouse model, VD)에서 대조군과 비교하여 유의적으로 증가한 것을 확인하여, 혈관성 치매 동물모델에서, 혈관 신생이 증가한 것을 확인하였다. 따라서, 상기 Vegfa, Kdr 및 Nrp1은 혈관성 치매를 진단하는 바이오 마커 및 유전자로서 Vegfa, Kdr 및 Nrp1의 발현 수준을 확인하였으며, 이의 수준을 측정하는 프라이머 세트의 유용성을 확인하였다.
<2-4> 밀착연접 유전자 발현 확인
허혈성 뇌 손상은 혈뇌장벽(blood-brain barrier, BBB)의 투가성 증가가 동반되어, 뇌혈관 완전성과 장벽 기능의 유지가 감소하기에, BBB에서 세포 간극을 봉입하는 유전자인 밀착연접 유전자의 수준을 측정하여, 혈관성 치매의 진단을 위한 바이오마커로서, 밀착연접 유전자 및 이의 수준을 확인하고, 이를 측정하는 제제로서, 프라이머 세트의 유용성을 확인하고자 하였다. 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 밀착연접 유전자의 발현량을 확인하고자 하였으며, 실시간 역전사 PCR을 위한 primer는 하기 표 4에 나타내었다.
| Gene | Primer sequence(5’ to 3’) | Anneling Temperature(℃) | product size (bp) | 서열번호 |
| Occludin | F: GAGCTTACAGGCAGAACTAGAC R: CAGCCATGTACTCTTCACTCTC |
60 | 98 | F: 21 R: 22 |
| Claudin-5 | F: CCTTCCTGGACCACAACATC R: CGCCAGCACAGATTCATACA |
60 | 116 | F: 23 R: 24 |
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 밀착연접과 관련된 Occludin 및 Claudin-5의 발현이, 혈관성 치매가 유도된 동물모델(BCAS mouse model, VD)에서 대조군과 비교하여 유의적으로 감소한 것을 확인하여, 혈뇌장벽을 구성하는 밀착연접 단백질의 감소를 확인하였다. 따라서, 상기 Occludin 및 Claudin-5는 혈관성 치매를 진단하는 바이오 마커 및 유전자로서 Occludin 및 Claudin-5의 발현 수준을 확인하였으며, 이의 수준을 측정하는 프라이머 세트의 유용성을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 혈관성 치매가 유도된 동물모델에서, 전염증성 유전자인 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1)의 발현이 증가하고, Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자인 Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2)의 발현이 증가하며, 혈관신생 유전자인 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1)의 발현이 증가한 것을 확인하였다. 또한, 밀착연접 유전자인 Occludin 및 Claudin-5의 발현이 감소한 것을 확인하여, 상기의 신규한 마커 및 이를 발현 수준을 확인하는 제제들이, 허혈성 뇌질환의 진단을 위한 바이오마커 및 진단용 조성물로서 이용될 수 있는 것을 확인하였다.
<110> Soonchunhyang University Industry Academy Cooperation Foundation
<120> Novel biomarkers of vascular dementia and uses thereof
<130> PN2109-456
<160> 24
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-6 F primer
<400> 1
taccacttca caagtcggag gc 22
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-6 R primer
<400> 2
ctgcaagtgc atcatcgttg ttc 23
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-1b F primer
<400> 3
tggaccttcc aggatgagga ca 22
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-1b R primer
<400> 4
gttcatctcg gagcctgtag tg 22
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MCP-1 F primer
<400> 5
cactcacctg ctgctactca 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MCP-1 R primer
<400> 6
cttcttgggg tcagcacaga 20
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Ccr2 F primer
<400> 7
tccactctac tccctggtat tc 22
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Ccr2 R primer
<400> 8
tggccaagtt gagcagatag 20
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Vcam-1 F primer
<400> 9
gcactctact gcgcatctt 19
<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Vcam-1 R primer
<400> 10
caccagactg tacgatcctt tc 22
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rock1 F primer
<400> 11
agaatgagga cagcagaaga ag 22
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rock1 R primer
<400> 12
ggtccgttcg gtactgatat tc 22
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rock2 F primer
<400> 13
ggaggtacga cttggaagaa at 22
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rock2 R primer
<400> 14
gctgccgtct ctcttatgtt at 22
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Vegfa F primer
<400> 15
gcagaccaaa gaaagacaga ac 22
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Vegfa R primer
<400> 16
cagtgaacgc tccaggattt a 21
<210> 17
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Kdr F primer
<400> 17
cgacatagcc tccactgttt at 22
<210> 18
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Kdr R primer
<400> 18
tgttcttgtt ctcggtgatg t 21
<210> 19
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nrp1 F primer
<400> 19
gaggacagag actgcaagta tg 22
<210> 20
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nrp1 R primer
<400> 20
ctgaagacac cacaggagaa g 21
<210> 21
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Occludin F primer
<400> 21
gagcttacag gcagaactag ac 22
<210> 22
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Occludin R primer
<400> 22
cagccatgta ctcttcactc tc 22
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Claudin-5 F primer
<400> 23
ccttcctgga ccacaacatc 20
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Claudin-5 R primer
<400> 24
cgccagcaca gattcataca 20
Claims (33)
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 전염증성 유전자인 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1), Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자인 Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2), 혈관신생 유전자인 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1) 및 밀착연접 유전자인 Occludin 및 Claudin-5 유전자를 포함하는, 혈관성 치매 진단용 바이오마커 조성물.
- 제 11항에 있어서,
상기 조성물은, 상기 유전자의 발현을 측정하는 제제;를 포함하는, 혈관성 치매 진단용 바이오마커 조성물. - 삭제
- 제 11항에 있어서,
상기 전염증성 유전자는, 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 프라이머 세트; 서열번호 7 및 서열번호 8의 프라이머 세트 및 서열번호 9 및 서열번호 10의 프라이머 세트로 이루어진 군에서 선택된 제제로 발현을 측정하는 것인, 혈관성 치매 진단용 바이오마커 조성물. - 삭제
- 제 11항에 있어서,
상기 Rock 유전자는, 서열번호 11 및 서열번호 12의 프라이머 세트; 또는 서열번호 13 및 서열번호 14의 프라이머 세트로 발현을 측정하는 것인, 혈관성 치매 진단용 바이오마커 조성물. - 삭제
- 제 11항에 있어서,
상기 혈관신생 유전자는, 서열번호 15 및 서열번호 16의 프라이머 세트; 서열번호 17 및 서열번호 18의 프라이머 세트; 또는 서열번호 19 및 서열번호 20의 프라이머 세트로 발현을 측정하는 것인, 혈관성 치매 진단용 바이오마커 조성물. - 삭제
- 제 11항에 있어서,
상기 밀착연접 유전자는, 서열번호 21 및 서열번호 22의 프라이머 세트; 또는 서열번호 23 및 서열번호 24의 프라이머 세트로 발현을 측정하는 것인, 혈관성 치매 진단용 바이오마커 조성물. - 제 11항의 조성물을 포함하는 혈관성 치매 진단용 키트.
- 1) 개체로부터 생물학적 시료를 분리하는 단계;
2) 상기 분리된 생물학적 시료로부터 전염증성 유전자인 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1), Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자인 Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2), 혈관신생 유전자인 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1) 및 밀착연접 유전자인 Occludin 및 Claudin-5 유전자의 발현을 측정하는 단계; 및
3) 상기 유전자의 발현을 대조군의 기준치와 비교하는 단계;를 포함하는, 혈관성 치매 진단을 위한 정보제공 방법. - 삭제
- 제 22항에 있어서,
상기 단계 3)에서, IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1)유전자의 발현이 대조군의 기준치와 비교하여, 고발현되는 경우, 혈관성 치매로 진단하는 것인, 방법. - 삭제
- 제 22항에 있어서,
상기 단계 3)에서, Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2) 유전자의 발현이 대조군의 기준치와 비교하여, 고발현되는 경우, 혈관성 치매로 진단하는 것인, 방법. - 삭제
- 제 22항에 있어서,
상기 단계 3)에서, Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1) 유전자의 발현이 대조군의 기준치와 비교하여, 고발현되는 경우, 혈관성 치매로 진단하는 것인, 방법. - 삭제
- 제 22항에 있어서,
상기 단계 3)에서, Occludin 및 Claudin-5 유전자의 발현이 대조군의 기준치와 비교하여, 저발현되는 경우, 혈관성 치매로 진단하는 것인, 방법. - 제 22항에 있어서,
상기 단계 1)의 생물학적 시료는, 혈액, 전혈, 혈장, 혈청, 소변, 조직, 세포, 기관, 골수 및 타액으로 이루어진 군에서 선택된 시료인 것인, 방법. - 제 22항에 있어서,
상기 단계 2)의 유전자의 발현 측정은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction) 또는 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction)으로 측정하는 것인, 방법. - 1) 혈관성 치매가 유도된 동물모델 또는 세포에 후보 물질을 처리하는 단계;
2) 상기 후보 물질 처리 후, 전염증성 유전자인 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1), Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자인 Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2), 혈관신생 유전자인 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1) 및 밀착연접 유전자인 Occludin 및 Claudin-5 유전자의 발현을 측정하는 단계;
3) 상기 전염증성 유전자인 IL-6(interleukin 6), IL-1b(Interleukin 1 beta), Mcp-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1), Ccr2(C-C chemokine receptor type 2) 및 Vcam-1(vascular cell adhesion molecule 1), Rock(Rho-associated protein kinase) 유전자인 Rock1(Rho-associated protein kinase 1) 및 Rock2(Rho-associated protein kinase 2), 혈관신생 유전자인 Vegfa(Vascular endothelial growth factor A), Kdr(Kinase Insert Domain Receptor) 및 Nrp1(Neuropilin 1) 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 감소하고; 및
4) 상기 밀착연접 유전자인 Occludin 및 Claudin-5 유전자의 발현이 후보 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 증가한 후보 물질을 선별하는 단계;를 포함하는 혈관성 치매 치료제의 스크리닝 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210155878A KR102445381B1 (ko) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 혈관성 치매의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210155878A KR102445381B1 (ko) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 혈관성 치매의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102445381B1 true KR102445381B1 (ko) | 2022-09-20 |
Family
ID=83446595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020210155878A KR102445381B1 (ko) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 혈관성 치매의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102445381B1 (ko) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106619684A (zh) * | 2017-01-12 | 2017-05-10 | 青岛大学附属医院 | 胡黄连苷ii治疗缺血性脑卒中的应用 |
| KR20170125198A (ko) * | 2016-05-04 | 2017-11-14 | 전남대학교산학협력단 | 뇌-혈관 문맥 손상 진단용 마커 |
| JP2020515813A (ja) * | 2016-12-23 | 2020-05-28 | ジェナボン バイオファーマシューティカルズ エルエルシー | アルツハイマー病の診断および治療においてｇｍ６を使用する方法 |
-
2021
- 2021-11-12 KR KR1020210155878A patent/KR102445381B1/ko active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20170125198A (ko) * | 2016-05-04 | 2017-11-14 | 전남대학교산학협력단 | 뇌-혈관 문맥 손상 진단용 마커 |
| JP2020515813A (ja) * | 2016-12-23 | 2020-05-28 | ジェナボン バイオファーマシューティカルズ エルエルシー | アルツハイマー病の診断および治療においてｇｍ６を使用する方法 |
| CN106619684A (zh) * | 2017-01-12 | 2017-05-10 | 青岛大学附属医院 | 胡黄连苷ii治疗缺血性脑卒中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Acta Neurol Scand 2004: 110: 124-127 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11505822B2 (en) | Reagents for detecting Alu elements in cell-free DNA (cfDNA) | |
| RU2606758C2 (ru) | Маркеры тромбоэмболической болезни | |
| WO1997040462A2 (en) | Correlating polymorphic forms with multiple phenotypes | |
| AU2016361646B2 (en) | Method for assessing the risk of complications in patients with systemic inflammatory response syndrome (SIRS) | |
| AU2014203213A1 (en) | Diagnostic markers for ankylosing spondylitis and uses thereof | |
| KR102018369B1 (ko) | 근위축성측삭경화증에 대한 진단 마커로서의 돌연변이 유전자 및 이를 이용한 진단방법 | |
| KR102445381B1 (ko) | 혈관성 치매의 신규한 바이오 마커 및 이의 용도 | |
| KR101901365B1 (ko) | 장상피세포 내 특이적 발현 아토피피부염 유전자 ptgr2 | |
| KR20200102746A (ko) | 췌장암 진단용 조성물 | |
| CN104232650A (zh) | 特发性基底节钙化新的致病基因及其编码蛋白质和应用 | |
| JP2006230241A (ja) | 肺高血圧症発症関連遺伝子を用いた肺高血圧症の診断および治療 | |
| KR101700945B1 (ko) | 선천성 녹내장, 유전성 혈관 석회화 또는 골격 이상증에 대한 원인 유전자로서의 ddx58 돌연변이 유전자 및 이를 이용한 상기 질병의 진단방법 및 진단용 조성물 | |
| US20220259661A1 (en) | Kit for assessing the risk of complications in patients with systemic inflammatory response syndrome (sirs) | |
| WO2011063474A1 (en) | Diagnostic markers for spondyloarthropathies and uses thereof | |
| KR101046341B1 (ko) | 뇌졸중 예측용 ｔｍｅｍ５ 유전자 다형성 마커 및 이를 이용한 뇌졸중 예측 방법 | |
| WO2017039028A1 (ko) | 선천성 녹내장, 유전성 혈관 석회화 또는 골격 이상증에 대한 원인 유전자로서의 ddx58 돌연변이 유전자 및 이를 이용한 상기 질병의 진단방법 및 진단용 조성물 | |
| KR20210131242A (ko) | 상향조절된 mirna의 진단 및 치료를 위한 용도 | |
| KR101402919B1 (ko) | 중풍 분류용 뉴로펩타이드 ｙ 유전자 다형성 마커 및 이의 용도 | |
| KR20240099477A (ko) | 유전자 다형을 이용한 판정 방법 | |
| JP2001340082A (ja) | 自己免疫疾患の診断用試薬 | |
| KR101322918B1 (ko) | 뇌성마비 증세의 경감 또는 완화에 대한 바이오마커 | |
| JP4649163B2 (ja) | 気管支喘息の遺伝的素因検査方法 | |
| KR20210131243A (ko) | 하향조절된 mirna의 진단 및 치료를 위한 용도 | |
| WO2014028974A1 (en) | Diagnostic markers for spondyloarthropathies and uses thereof | |
| KR101046342B1 (ko) | 뇌졸중 예측용 ｌｉｐｇ 유전자 다형성 마커 및 이를 이용한 뇌졸중 예측 방법 |