JP2001340082A - 自己免疫疾患の診断用試薬 - Google Patents

自己免疫疾患の診断用試薬

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JP2001340082A JP2000162858A JP2000162858A JP2001340082A JP 2001340082 A JP2001340082 A JP 2001340082A JP 2000162858 A JP2000162858 A JP 2000162858A JP 2000162858 A JP2000162858 A JP 2000162858A JP 2001340082 A JP2001340082 A JP 2001340082A
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勝士 徳永
Naoyuki Tsuchiya
尚之 土屋
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Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 ＩＬ−２制御型ＰＰ６（または遺伝子）
に対して特異的親和性を有する物質、ＴＮＩＫ（または
遺伝子）に対して特異的親和性を有する物質、ＦＬＩＰ
（または遺伝子）に対して特異的親和性を有する物質、
ＧＲα（または遺伝子）に対して特異的親和性を有する
物質等からなる、病変部位に特異的に発現増強される蛋
白質（または遺伝子）に対して特異的親和性を有する物
質群の少なくとも１種を含む、自己免疫疾患、特にクロ
ーン病の診断用診断薬。 【効果】 病変部位に特異的に発現増強される遺伝子に
注目してその挙動を調べることにより、より簡便にま
た、迅速に当該疾患の診断が可能となる。さらに疾患に
係わる遺伝子に注目することで、自己免疫疾患、特にク
ローン病の予防治療薬のスクリーニングに利用できる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、自己免疫疾患の診
断用試薬ならびに自己免疫疾患を発症しているか、その
おそれのある動物を同定するための分析方法に関する。
より詳細にはクローン病の診断用試薬ならびにその同定
のための分析方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】自己免疫疾患とは、生体防御機構である
免疫系が自己の細胞を攻撃してしまう現象である。自己
抗原と反応する抗体やリンパ球が誘導され、その結果組
織障害や病変が生じる。自己免疫疾患は、臓器特異性の
ない疾患と、特異性のある疾患の２つに大別される。自
己免疫の関与が示唆されているものの原因が明らかでな
いものも多く、それらの発症機序を含め、診断方法等、
解決すべき課題は多い。自己免疫疾患には、自己抗原に
対する免疫反応およびアレルギーが関与していると考え
られてはいるが、その原因が明らかにされていない疾患
の一つとして、クローン病がある。この疾患は、炎症性
腸疾患であり、消化管壁全層にわたって炎症性変化がみ
られ、非連続性に深い潰瘍が生じ、組織学的には非乾酪
性肉芽腫を特徴とする。また、病変部位がスキップする
という特徴を呈する。現在、クローン病の確定診断とし
ては、その症状、Ｘ線、内視鏡、組織像を総合して行な
われているが、いずれも症状が進行してからの診断とな
り、より早期の診断が望まれている。さらに、他の炎症
性の腸疾患、例えば急性または慢性虫垂炎、腸結核、潰
瘍性大腸炎、虚血性腸炎等との鑑別が必要である。
【０００３】一方、サイトカインや接着性分子の発現に
注目した分子生物学的なアプローチから、インターロイ
キン２（ＩＬ−２）受容体、トランスフェリン受容体、
Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１(endothelial leukocyte
adhesion molecule-1)とも称される）、ＶＣＡＭ−１
(vascular cell adhesion molecule-1)、Ｌ−セレクチ
ン、ＣＤ１１、ＯＸ４０およびＯＸ４０リガンド等の膜
蛋白質や、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、ＩＬ
−２、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイ
キン１５（ＩＬ−１５）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−
α）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インター
ロイキン８（ＩＬ−８）、ＭＣＰ−１、ＥＮＡ−７８等
のサイトカインやケモカインの遺伝子が、クローン病に
おいてアップレギュレーションされているという報告が
ある。しかしながら、報告にあるこれらの遺伝子の殆ど
は、クローン病における炎症に伴う非特異的な免疫応答
によりアップレギュレーションを受けるものであって、
クローン病に特異的な現象ではない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、自己
免疫疾患、特にクローン病の診断に有用な方法ならびに
診断用試薬を提供することにある。さらに本発明の別の
目的は、自己免疫疾患、特にクローン病の治療に有用な
薬剤のスクリーニング方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
に鑑み、早期診断、他の疾患との識別を可能とするべ
く、自己免疫疾患、特にクローン病における遺伝子レベ
ルでの発現プロファイルを鋭意検討した。すなわち、病
変部と非病変部とが肉眼的に明瞭に区別でき、同一個体
において病変部と非病変部での発現される遺伝子を比較
し得るクローン病に注目し、ディファレンシャルディス
プレイ法（Liang, P., and Pardee, A.B.Science 257:9
67-971 (1992)、Liang, P., and Pardee, A.B. Curr. O
pin. Immunol. 7:274-280 (1995)）を用いて、病変部と
非病変部における発現遺伝子プロファイルを比較した。
結果、ある種の遺伝子が病変部で特異的にその発現が増
強されていることを見出し、さらに該遺伝子を同定して
本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち本発明は以下の通りである。 （１）(1)インターロイキン２制御型プロテインホスフ
ァターゼタイプ６（type6 protein phosphatase regula
ted by IL-2；以下ＩＬ−２制御型ＰＰ６ともいう）遺
伝子に対して特異的親和性を有する物質、(2)Ｔｒａｆ
２・Ｎｃｋ相互作用型キナーゼ（Traf2 and Nck intera
cting kinase；以下ＴＮＩＫともいう）遺伝子に対して
特異的親和性を有する物質、(3)ＦＬＩＣＥ阻害蛋白質
（ＦＬＩＣＥ inhibitory protein；以下ＦＬＩＰとも
いう）遺伝子に対して特異的親和性を有する物質、およ
び(4)グルココルチコイド受容体α（以下ＧＲαともい
う）遺伝子に対して特異的親和性を有する物質からなる
群より選択される少なくとも1種、あるいは全てを含ん
でなる、自己免疫疾患の診断用試薬。 （２）さらに、(5)チトクロームオキシダーゼサブユニ
ットＩ 遺伝子に対して特異的親和性を有する物質、お
よび(6)チトクロームｂ遺伝子に対して特異的親和性を
有する物質からなる群より選択される少なくとも1種を
含んでなる、上記（１）記載の自己免疫疾患の診断用試
薬。 （３）特異的親和性を有する物質が、オリゴまたはポリ
ヌクレオチドプローブ、あるいはオリゴまたはポリヌク
レオチドプライマー対である、上記（１）または（２）
記載の自己免疫疾患の診断用試薬。 （４）(1)ＩＬ−２制御型ＰＰ６に対して特異的親和性
を有する物質、(2)ＴＮＩＫに対して特異的親和性を有
する物質、(3)ＦＬＩＰに対して特異的親和性を有する
物質、および(4)ＧＲαに対して特異的親和性を有する
物質からなる群より選択される少なくとも1種、あるい
は全てを含んでなる、自己免疫疾患の診断用試薬。 （５）さらに、(5)チトクロームオキシダーゼサブユニ
ットＩ に対して特異的親和性を有する物質、および(6)
チトクロームｂに対して特異的親和性を有する物質から
なる群より選択される少なくとも1種を含んでなる、上
記（４）記載の自己免疫疾患の診断用試薬。
【０００７】（６）特異的親和性を有する物質が、抗体
またはその断片である上記（４）または（５）記載の自
己免疫疾患の診断用試薬。 （７）自己免疫疾患がクローン病である上記（１）〜
（６）のいずれかに記載の自己免疫疾患の診断用試薬。 （８）自己免疫疾患を発症しているか、そのおそれのあ
る動物を同定するための分析方法であって、(1)ＩＬ−
２制御型ＰＰ６遺伝子、(2)ＴＮＩＫ遺伝子、(3)ＦＬＩ
Ｐ遺伝子、および(4)ＧＲα遺伝子からなる群より選択
される少なくとも1種の、該動物から採取した生体試料
における発現状況を解析することを含む分析方法。 （９）さらに、(5)チトクロームオキシダーゼサブユニ
ットＩ 遺伝子、および(6)チトクロームｂ遺伝子からな
る群より選択される少なくとも1種の発現状況を解析す
ることを含む、上記（８）記載の分析方法。 （１０）自己免疫疾患を発症しているか、そのおそれの
ある動物を同定するための分析方法であって、(1)ＩＬ
−２制御型ＰＰ６、(2)ＴＮＩＫ、(3)ＦＬＩＰ、および
(4)ＧＲαからなる群より選択される少なくとも1種の、
該動物から採取した生体試料における発現状況を解析す
ることを含む分析方法。
【０００８】（１１）さらに、(5)チトクロームオキシ
ダーゼサブユニットＩ、および(6)チトクロームｂから
なる群より選択される少なくとも1種の発現状況を解析
することを含む、上記（１０）記載の分析方法。 （１２）生体試料が、該動物由来の腸組織である、上記
（８）〜（１１）のいずれかに記載の分析方法。 （１３）自己免疫疾患がクローン病である上記（８）〜
（１２）のいずれかに記載の分析方法。 （１４）動物由来組織をスクリーニングすべき薬剤で処
理した後、当該組織中の、(1)ＩＬ−２制御型ＰＰ６遺
伝子、(2)ＴＮＩＫ遺伝子、(3)ＦＬＩＰ遺伝子、および
(4)ＧＲα遺伝子からなる群より選択される少なくとも
１種の遺伝子の発現の変化を解析することを含む、自己
免疫疾患の予防治療薬のスクリーニング方法。 （１５）さらに、(5)チトクロームオキシダーゼサブユ
ニットＩ 遺伝子、および(6)チトクロームｂ遺伝子から
なる群より選択される少なくとも1種の遺伝子の発現の
変化を解析することを含む、上記（１４）記載の自己免
疫疾患の予防治療薬のスクリーニング方法。
【０００９】（１６）動物由来組織をスクリーニングす
べき薬剤で処理した後、当該組織中の、(1)ＩＬ−２制
御型ＰＰ６、(2)ＴＮＩＫ、(3)ＦＬＩＰ、および(4)Ｇ
Ｒαからなる群より選択される少なくとも１種の蛋白質
の発現の変化を解析することを含む、自己免疫疾患の予
防治療薬のスクリーニング方法。 （１７）さらに、(5)チトクロームオキシダーゼサブユ
ニットＩ、および(6)チトクロームｂからなる群より選
択される少なくとも1種の蛋白質の発現の変化を解析す
ることを含む、上記（１６）記載の自己免疫疾患の予防
治療薬のスクリーニング方法。 （１８）動物由来組織が腸組織である上記（１４）〜
（１７）のいずれかに記載の自己免疫疾患の予防治療薬
のスクリーニング方法。 （１９）自己免疫疾患がクローン病である上記（１４）
〜（１８）のいずれかに記載の自己免疫疾患の予防治療
薬のスクリーニング方法。 （２０）上記（１４）〜（１８）のいずれかに記載のス
クリーニング方法によって得られ得る自己免疫疾患の予
防治療薬。
【００１０】（２１）上記（１９）記載のスクリーニン
グ方法によって得られ得るクローン病の予防治療薬。
【００１１】本発明において、自己免疫疾患とは、病変
部位で特異的に(1)ＩＬ−２制御型ＰＰ６、(2)ＴＮＩ
Ｋ、(3)ＦＬＩＰ、(4)ＧＲα、(5)チトクロームオキシ
ダーゼサブユニットＩ 、および(6)チトクロームｂから
なる群より選択される少なくとも１種の発現増強（ｍＲ
ＮＡレベルあるいは蛋白質レベルで）が認められるもの
であれば特に限定されないが、特に(1)ＩＬ−２制御型
ＰＰ６、(2)ＴＮＩＫ、(3)ＦＬＩＰ、および(4)ＧＲα
の特異的な発現増強が観察されるクローン病が適当な診
断対象となる。
【００１２】本発明における遺伝子とは、特に断りのな
い限りいかなる態様のものであってもよい。例えば、ｍ
ＲＮＡに加えて、ｍＲＮＡから調製される相補ＤＮＡ
（ｃＤＮＡ）等が含まれる。
【００１３】以下、本発明の診断用試薬に含め得る各構
成要素について詳細に説明する。(1)ＩＬ−２制御型ＰＰ６ （type 6 protein phosphatas
e regulated by IL-2；Filali, M., et al., J. Cell.
Biochem. 73:153-163 (1999)に記載の３６ｋＤａの蛋白
質） ＩＬ−２制御型ＰＰ６とは、ヒトＰＰ６とアミノ酸レベ
ルで９８％の相同性があるリン酸化蛋白質であり、末梢
Ｔ細胞においてＩＬ−２により発現が誘導される。正確
な機能は未だ明らかにされていないが、細胞増殖に関与
することも示唆されている（Filali, M., et al., (199
9) 上述）。
【００１４】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含め
られるＩＬ−２制御型ＰＰ６遺伝子に対して特異的親和
性を有する物質としては、例えば当該遺伝子に特異的親
和性を有するオリゴまたはポリヌクレオチドプローブ
（以下、便宜上単にプローブともいう）、ならびにオリ
ゴまたはポリヌクレオチドプライマー対（以下、便宜上
単にプライマー対ともいう）が挙げられ、その特異的親
和性とは、目的の遺伝子にのみハイブリダイズする性質
を意味し、従って当該遺伝子の全部もしくは一部に完全
相補的なものか、もしくは上記性質を満たす範囲で１乃
至数個のミスマッチを含んでいても良い。該プローブ、
プライマー対は、当該遺伝子に特異的親和性を有するも
のであれば特に限定されないが、例えば当該遺伝子の塩
基配列の全部もしくは一部、ならびにそれらの相補配列
を含むオリゴまたはポリヌクレオチド等が挙げられ、検
出すべき遺伝子の形態に応じて適宜選択する。後述する
が、本発明の診断用試薬を用いてＰＣＲ等を行なう場合
には、配列表配列番号１および配列表配列番号２に記載
の両オリゴヌクレオチドをプライマー対として用いるこ
とができる。当該オリゴまたはポリヌクレオチドは当該
遺伝子との特異的親和性を有している限りはその由来は
特に限定されず、合成されたものであっても、当該遺伝
子から必要な部分を切り出し、通常行なわれる方法によ
って精製されたものであってもよい。これらのオリゴま
たはポリヌクレオチドは、蛍光物質、酵素やラジオアイ
ソトープ等で標識されていてもよい。
【００１５】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含め
られるＩＬ−２制御型ＰＰ６に対して特異的親和性を有
する物質としては、例えば当該蛋白質に特異的親和性を
有する抗体またはその断片が挙げられ、その特異的親和
性とは抗原・抗体反応により該蛋白質を特異的に認識
し、結合する能力のことである。該抗体またはその断片
は、当該蛋白質と特異的に結合可能なものであれば特に
限定されず、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体
およびそれらの機能的断片のいずれであってもよい。こ
れらの抗体あるいはその機能的断片は、通常当分野で行
なわれている方法によって製せられる。例えばポリクロ
ーナル抗体を用いる場合であれば、該蛋白質をマウスや
ウサギといった動物の背部皮下あるいは腹腔内あるいは
静脈等に注射して免疫し、抗体価が上昇するのを待った
後に抗血清を採取する方法が挙げられ、またモノクロー
ナル抗体を用いる場合であれば、常法に従いハイブリド
ーマを作製して、その分泌液を採取する方法が挙げられ
る。抗体断片を製造する方法としてはクローニングした
抗体遺伝子断片を微生物等に発現させる方法がよく用い
られている。当該抗体、抗体断片等の純度は、当該蛋白
質との特異的親和性を保持している限り、特に限定され
ない。これらの抗体またはその断片は、蛍光物質、酵素
やラジオアイソトープ等で標識されていてもよい。さら
に、これらは市販されているものを用いても良い。
【００１６】(2)ＴＮＩＫ（Traf2 and Nck interacting
kinase；Fu, C.A., et al., J. Biol. Chem. 274:3072
9-30737 (1999)に記載のＧＣＫファミリーキナーゼ） ＴＮＩＫとはＴｒａｆ２とＮｃｋとに相互作用を示すキ
ナーゼであり、ＪＮＫを活性化する分子として最近同定
された。本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含められ
るＴＮＩＫ遺伝子に対して特異的親和性を有する物質と
しては、例えば当該遺伝子に特異的親和性を有するプロ
ーブ、ならびにプライマー対が挙げられる。ここで遺伝
子に特異的親和性を有するとは上述の通りであり、該プ
ローブ、プライマー対は、上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の
項で述べた様にして、当該遺伝子の塩基配列を元に適宜
設定、修飾することができる。本発明の診断用試薬を用
いてＰＣＲ等を行なう場合には、配列表配列番号３およ
び配列表配列番号４に記載の両オリゴヌクレオチドをプ
ライマー対として用いることができる。
【００１７】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含め
られるＴＮＩＫに対して特異的親和性を有する物質とし
ては、例えば当該蛋白質に特異的親和性を有する抗体ま
たはその断片が挙げられる。ここで蛋白質に特異的親和
性を有するとは上述の通りであり、当該抗体ならびにそ
の機能的断片は上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項で述べた
方法と同様な方法により調製される。
【００１８】(3)ＦＬＩＰ（ＦＬＩＣＥ inhibitory pro
tein；Irmler, M., et al., Nature388:190-195 (1997)
に記載、ヒトＦＬＩＰL：GenBank accession No. U9707
4、ヒトＦＬＩＰS：GenBank accession No. U97075） ＦＬＩＰとは、ＦＬＩＣＥの構造類似体で、ＦＡＤＤと
ＦＬＩＣＥとの会合を阻害することで、アポトーシスを
抑制することが報告されている（Irmler, M.,et al.,
(1997) 上述、Hu, S., et al., J. Biol. Chem. 272:17
255-17257 (1997)）。ロングフォーム（ＦＬＩＰL）と
ショートフォーム（ＦＬＩＰS）が存在する。本発明の
自己免疫疾患の診断用試薬に含められるＦＬＩＰ遺伝子
に対して特異的親和性を有する物質としては、例えば当
該遺伝子に特異的親和性を有するプローブ、ならびにプ
ライマー対が挙げられる。ここで遺伝子に特異的親和性
を有するとは上述の通りであり、該プローブ、プライマ
ー対は、上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項で述べた様にし
て、当該遺伝子の塩基配列を元に適宜設定、修飾するこ
とができる。本発明の診断用試薬を用いてＰＣＲ等を行
なう場合には、配列表配列番号５および配列表配列番号
６に記載の両オリゴヌクレオチドを（ＦＬＩＰLに対し
て）、配列表配列番号７および配列表配列番号８に記載
の両オリゴヌクレオチドを（ＦＬＩＰSに対して）、そ
れぞれプライマー対として用いることができる。
【００１９】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含め
られるＦＬＩＰに対して特異的親和性を有する物質とし
ては、例えば当該蛋白質に特異的親和性を有する抗体ま
たはその断片が挙げられる。ここで蛋白質に特異的親和
性を有するとは上述の通りであり、当該抗体ならびにそ
の機能的断片は上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項で述べた
方法と同様な方法により調製される。
【００２０】(4)ＧＲα（グルココルチコイド受容体
α；Hollenberg, S. M., et al., Nature318:635-641
(1985) に記載される９４ｋＤａの蛋白質） ＧＲαとは、グルココルチコイドをリガンドとする核内
受容体スーパーファミリーに属する受容体であり、リガ
ンド依存的に標的遺伝子の転写を促進する転写制御因子
である。本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含められ
るＧＲα遺伝子に対して特異的親和性を有する物質とし
ては、例えば当該遺伝子に特異的親和性を有するプロー
ブ、ならびにプライマー対が挙げられる。ここで遺伝子
に特異的親和性を有するとは上述の通りであり、該プロ
ーブ、プライマー対は、上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項
で述べた様にして、当該遺伝子の塩基配列を元に適宜設
定、修飾することができる。本発明の診断用試薬を用い
てＰＣＲ等を行なう場合には、配列表配列番号９および
配列表配列番号１０に記載の両オリゴヌクレオチドをプ
ライマー対として用いることができる。
【００２１】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含め
られるＧＲαに対して特異的親和性を有する物質として
は、例えば当該蛋白質に特異的親和性を有する抗体また
はその断片が挙げられる。ここで蛋白質に特異的親和性
を有するとは上述の通りであり、当該抗体ならびにその
機能的断片は上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項で述べた方
法と同様な方法により調製される。
【００２２】(5)チトクロームオキシダーゼサブユニッ
トＩ （Sanger, F., et al., J. Mol.Biol. 143(2), 16
1-178 (1980)、Anderson, S., et al., Nature 290 (58
06), 457-465 (1981)に記載される） チトクロームオキシダーゼは、ミトコンドリア内膜に存
在する電子伝達系の末端酸化酵素であり、７〜１３個の
サブユニットからなり、ＡＤＰと無機リンからＡＴＰを
合成するのに必須の酵素である。炎症部位で産生される
ＮＯは、酸素分子と競合的にチトクロームオキシダーゼ
サブユニットＩ に結合することが知られている。本発
明の自己免疫疾患の診断用試薬に含められるチトクロー
ムオキシダーゼサブユニットＩ 遺伝子に対して特異的
親和性を有する物質としては、例えば当該遺伝子に特異
的親和性を有するプローブ、ならびにプライマー対が挙
げられる。ここで遺伝子に特異的親和性を有するとは上
述の通りであり、該プローブ、プライマー対は、上記Ｉ
Ｌ−２制御型ＰＰ６の項で述べた様にして、当該遺伝子
の塩基配列を元に適宜設定、修飾することができる。本
発明の診断用試薬を用いてＰＣＲ等を行なう場合には、
配列表配列番号１１および配列表配列番号１２に記載の
両オリゴヌクレオチドをプライマー対として用いること
ができる。
【００２３】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含め
られるチトクロームオキシダーゼサブユニットＩ に対
して特異的親和性を有する物質としては、例えば当該蛋
白質に特異的親和性を有する抗体またはその断片が挙げ
られる。ここで蛋白質に特異的親和性を有するとは上述
の通りであり、当該抗体ならびにその機能的断片は上記
ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項で述べた方法と同様な方法に
より調製される。
【００２４】(6)チトクロームｂ（Anderson, S., et a
l., Nature 290 (5806), 457-465 (1981)に記載され
る） チトクロームとは電子伝達を行なう一群のヘム蛋白質を
いい、チトクロームｂはｃ1やａ3等とともにミトコンド
リア内膜に存在し、電子伝達系を構成する。本発明の自
己免疫疾患の診断用試薬に含められる、チトクロームｂ
遺伝子に対して特異的親和性を有する物質としては、例
えば当該遺伝子に特異的親和性を有するプローブ、なら
びにプライマー対が挙げられる。ここで遺伝子に特異的
親和性を有するとは上述の通りであり、該プローブ、プ
ライマー対は、上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項で述べた
様にして、当該遺伝子の塩基配列を元に適宜設定、修飾
することができる。本発明の診断用試薬を用いてＰＣＲ
等を行なう場合には、配列表配列番号１３および配列表
配列番号１４に記載の両オリゴヌクレオチドをプライマ
ー対として用いることができる。
【００２５】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬に含め
られるチトクロームｂに対して特異的親和性を有する物
質としては、例えば当該蛋白質に特異的親和性を有する
抗体またはその断片が挙げられる。ここで蛋白質に特異
的親和性を有するとは上述の通りであり、当該抗体なら
びにその機能的断片は上記ＩＬ−２制御型ＰＰ６の項で
述べた方法と同様な方法により調製される。
【００２６】本発明の自己免疫疾患、特にクローン病の
診断用試薬に含め得る各構成要素（上記(1)〜(6)）は1
種類を単独で含めることもできるが、好ましくはよりク
ローン病に特異性の高い上記(1)〜(4)、すなわちＩＬ−
２制御型ＰＰ６あるいは該遺伝子に対して特異的親和性
を有する物質、ＴＮＩＫあるいは該遺伝子に対して特異
的親和性を有する物質、ＦＬＩＰあるいは該遺伝子に対
して特異的親和性を有する物質、ＧＲαあるいは該遺伝
子に対して特異的親和性を有する物質のいずれか1種あ
るいは全部を含むことが好ましい。所望により上記(5)
〜(6)、すなわちチトクロームオキシダーゼサブユニッ
トＩあるいは該遺伝子に対して特異的親和性を有する物
質およびチトクロームｂあるいは該遺伝子に対して特異
的親和性を有する物質からなる群より選択される少なく
とも1種を含んでいても良い。複数の物質を用いる場合
には、それらを混合し、１つの試薬として用いても良
く、また別々の試薬として用いても良い。複数の物質を
混合して１つの試薬とした場合でも、目的蛋白質の分子
量の違い、あるいは目的遺伝子の長さの違いに基づいて
容易に個々の発現を識別することができる。特に診断の
対象となる自己免疫疾患の遺伝子発現プロファイルに個
体差がある場合や、迅速、且つ簡便に測定することが要
求される場合には各物質を混合して１つの試薬として用
いることが好ましい。また、詳細な今後の治療方針をも
含めた診断が要求される場合には各構成要素を別個に含
む診断用試薬を用いることが好ましい。
【００２７】本発明はまた、自己免疫疾患を発症してい
るかまたはそのおそれのある動物を同定するための分析
方法を提供する。本明細書において「動物」とは、ヒト
を含めた各種哺乳類ならびに鳥類を意味し、具体的に
は、ヒト、サル、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、マウ
ス、ウサギ、ニワトリ等が例示される。本発明の分析方
法は具体的には、上述の自己免疫疾患の診断用試薬を用
いることで好適に実施することができる。具体的には、
まず分析対象となる動物の生体試料を採取する。ここ
で、生体試料としては、上記一連の自己免疫疾患に特異
的な遺伝子あるいは蛋白質に顕著な変化が観察されるも
のであれば特に限定されないが、具体的には、生体から
採取される細胞、組織あるいは尿や血液等が用いられ
る。好適には当該生体試料は、上記一連の自己免疫疾患
に特異的な遺伝子の顕著な発現増強が確認される、回腸
部分ならびに結腸部分の組織であり、より好ましくは結
腸部分の組織である。特にクローン病を発症しているか
またはそのおそれのある動物を同定する場合には、当該
動物由来の腸組織、好ましくは回腸部分ならびに結腸部
分、より好ましくは結腸部分の組織を用いる。次いで、
該試料からｍＲＮＡあるいは蛋白質の抽出を行なう。ｍ
ＲＮＡを抽出した場合には、本発明のプローブを含む診
断用試薬を用いてノザンブロット等、当分野で通常行な
われる手法を用いて、その発現状況を調べる。また、本
発明のプライマー対を含む診断用試薬を用いてＲＴ−Ｐ
ＣＲ法等を実施することもできる。一方、蛋白質を抽出
した場合には、本発明の抗体またはその断片を含む診断
用試薬を用いてイムノブロット、ウエスタンブロット
等、当分野で通常行なわれる手法を用いて、その発現状
況を調べる。
【００２８】また、分析対象から採取した腸組織を用い
て組織切片を作製し、本発明のプローブを含む診断用試
薬や抗体を含む診断用試薬等を用いて組織染色を行なう
ことによっても、自己免疫疾患の病変部位の有無、ある
いはその特定が可能である。
【００２９】上述の如く調べた遺伝子あるいは蛋白質に
ついて、高い発現が観察された場合には、該動物は自己
免疫疾患、とりわけクローン病を発症しているか、もし
くはその可能性が極めて高いと判定する。より正確な判
定を要する場合には、当該一連の自己免疫疾患に特徴的
な遺伝子あるいは蛋白質の発現増強がみられないと予想
される部位（例えば小腸）と対比することが望ましい。
【００３０】本発明においては、上述の本発明の診断用
試薬に加え、当該試薬を使用する各種分析方法に応じて
必要な試薬等を併せて梱包し、キットとすることが好ま
しい。例えば、遺伝子レベルでの発現状況の分析が行な
われる場合には、界面活性剤、蛋白質分解酵素等の生体
試料から遺伝子を単離する試薬、緩衝液等も併せてキッ
トとすることができる。蛋白質レベルでの発現状況の分
析が行なわれる場合には、例えば生体試料から蛋白質を
抽出する試薬、緩衝液等、必要であれば二次抗体や発色
試薬等も一緒にしてキット化できる。
【００３１】本発明は、さらに、自己免疫疾患、特にク
ローン病に有用な薬剤のスクリーニング方法を提供す
る。当該スクリーニング方法の具体的な手法は上述の、
自己免疫疾患を同定するための分析方法に準じて実施で
きる。当該スクリーニングには対象となる動物由来の組
織が好適に使用される。本明細書において、「組織」と
は、薬剤で処理することができ、且つその変化を観察す
ることが可能な細胞の集団を意図し、ヒト以外の動物
（マウス、ウサギ等）の個体レベルでの使用、あるいは
各種初代培養あるいは樹立株等の細胞レベルでの使用も
包含される。当該組織は、標的とする遺伝子が主として
発現する部位に応じて適宜選択される。所定の動物由来
の組織を採取あるいは準備し、スクリーニングを行なう
所定の薬剤で処理後、当該組織におけるＩＬ−２制御型
ＰＰ６あるいは該遺伝子、ＴＮＩＫあるいは該遺伝子、
ＦＬＩＰあるいは該遺伝子、ＧＲαあるいは該遺伝子、
チトクロームオキシダーゼサブユニットＩあるいは該遺
伝子およびチトクロームｂあるいは該遺伝子のいずれか
少なくとも１種、あるいは全部の発現状況を調べる。蛋
白質レベルでの発現状況、遺伝子レベルでの発現状況を
パラレルに測定することも可能であり、それによって当
該スクリーニングを実施した薬剤の作用機序を予測する
こともできる。当該スクリーニング方法に用いる為の、
本発明の診断用試薬についても一連の操作に必要な試薬
を併せて梱包しキットとすることができる。
【００３２】本発明においては、上記スクリーニングに
より、自己免疫疾患、特にクローン病の予防治療薬が得
られる。例えば、当該一連の遺伝子あるいは蛋白質の発
現を抑制することが本発明のスクリーニング法によって
確認された薬剤は、自己免疫疾患、特にクローン病の予
防治療薬として有用である。
【００３３】
【実施例】以下、本発明を実施例にて具体的且つ詳細に
説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものでは
ない 実施例１：病変部位特異的に発現が増強される遺伝子の
同定 １．実験材料・実験方法 クローン病下行結腸切除標本１例（社会保険中央総合病
院（東京）における外科手術により切除されたもの）の
病変部と非病変部をディファレンシャルディスプレイ法
（Delta Differential Display Kit, Clontech, CA）に
より解析した。両部位での組織からの全ＲＮＡの抽出
は、TRIZOL reagent (Life Technologies,MD)を用いて
添付のマニュアルに従って行なった。１．５μｇのオリ
ゴ（ｄＴ） 15プライマー、１ｍＭｄＮＴＰミックスおよ
び３００単位のＭＭＬＶ逆転写酵素（Clontech, CA）を
含む終容量１５μｌの反応液中で４２℃１時間、続いて
７５℃で１０分間インキュベートして、３μｇの全ＲＮ
Ａから第１ｃＤＮＡ鎖を合成した。
【００３４】ディファレンシャルディスプレイ法を実施
するためにＰＣＲを行なった。プライマーはアンカーオ
リゴ（ｄＴ）２９−ｍｅｒ（Ｔプライマー）と、非特異
的５’オリゴヌクレオチド２５−ｍｅｒ（Ｐプライマ
ー）（共にClontech）を用いた。１０種のＰプライマー
と９種のＴプライマーを適宜組み合わせて、異なる９０
通りの非特異なＰＣＲプライマー対を用いてｃＤＮＡを
増幅した。すなわち、０．０１または０．００２５μｇ
の全ＲＮＡから合成したｃＤＮＡを５０μＭｄＮＴＰミ
ックス（Clontech）、１μＭのＰプライマー、１μＭの
Ｔプライマー、およびAdvantage KlenTaq Polymerase
ミックス（５０Ｘ）（Clontech）を含む終容量１０μｌ
の反応液中、以下の反応条件でＰＣＲ増幅した（サーマ
ルサイクラーＭＰ, タカラ）。
【００３５】（条件）最初の３サイクルは低ストリンジ
ェンシー条件下で行なった； ９４℃、５分→４０℃、５分→６８℃、５分（１サイク
ル） ９４℃、３０秒→４０℃、３０秒→６８℃、５分（２サ
イクル）。 次いで得られた産物について、残りのサイクルを高スト
リンジェンシー条件下で行なった； ９４℃、２０秒→６０℃、３０秒→６８℃、１分（３０
サイクル）。
【００３６】増幅したｃＤＮＡを６％変性スタンダード
シークエンシングポリアクリルアミドゲル(Roche Molec
ular Biochemicals-Boehringer, Mannheim)を用いて断
片サイズに応じて分離し、銀染色（Promega, WI）によ
って可視化した。
【００３７】２．結果 銀染色により、非病変部位と病変部位とのパターンに明
らかな違いが観察された。
【００３８】３．病変部位特異的に発現増強される遺伝
子の同定 銀染色により観察された病変部位で強く検出されたバン
ドを切り出しＤＮＡを抽出し、同じプライマーを用いて
再び増幅した。切り出したバンドには同サイズの異なる
複数の遺伝子断片が含まれているので、増幅した断片を
ＳＳＣＰ法（Hatta, Y, et al., Immunogenetics 49:28
0-286 (1999)）により選別した。再増幅したＰＣＲ産物
をｐＣＲ−ＴＯＰＯベクター（ＴＯＰＯ ＴＡ cloning
kit, Invitrogen, Netherlands）にクローニングし、dy
e-terminator 法（ABIPRISMTM dRhodamine Terminator
Cycle Sequencing-Ready Reaction Kit）に準じ、マニ
ュアルに従ってfluorescence-based automated cycle s
equencing (ABI310, Applied Biosystems, Foster cit
y, CA)に付し、シークエンシングを行なった。得られた
データをもとにＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋデータベー
ス、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴプログラム(National Librar
y of Medicine, Bethesda, MD)を用いてホモロジー検索
を行なった。結果、クローン病腸組織において新たにＩ
Ｌ−２制御型ＰＰ６ｍＲＮＡ、ＴＮＩＫｍＲＮＡ、ＦＬ
ＩＰｍＲＮＡ、ＧＲαｍＲＮＡ、チトクロームオキシダ
ーゼサブユニットＩ ｍＲＮＡ、およびチトクロームｂ
ｍＲＮＡの発現の増強が確認された。
【００３９】実施例２：半定量的ＲＴ−ＰＣＲ １．実験材料・実験方法 クローン病下行結腸切除標本６例（社会保険中央総合病
院（東京）における外科手術により切除されたもの）の
病変部と非病変部から、TRIZOL reagent (LifeTechnolo
gies, MD)を用い、添付のマニュアルに従って全ＲＮＡ
を抽出した。１．５μｇのオリゴ（ｄＴ）15プライマ
ー、１ｍＭｄＮＴＰミックスおよび３００単位のＭＭＬ
Ｖ逆転写酵素（Clontech, CA）を含む終容量１５μｌの
反応液中で４２℃１時間、続いて７５℃で１０分間イン
キュベートを行なって、３μｇの全ＲＮＡから第１ｃＤ
ＮＡ鎖を合成した。得られた第１ｃＤＮＡ鎖を鋳型にし
て半定量的ＲＴ−ＰＣＲを行なった。対照としてはＧＡ
ＰＤＨｍＲＮＡを用いた。表１に示す各プライマー対、
GeneAmp reagents およびAmpliTaq Gold DNA polymeras
e (Perkin-Elmer, Norwalk, CT)を用いてＰＣＲ増幅を
行なった(サーマルサイクラーＭＰ, タカラ)。
【００４０】
【表１】
【００４１】ＰＣＲ条件 ９４℃、１０分間 ９４℃、３０秒→アニーリング（３０秒、温度は表１参
照）→７２℃、３０分 （３０サイクル） ７２℃、１０分間
【００４２】得られたＰＣＲ産物をポリアクリルアミド
ゲル上で電気泳動を行ない分離し、SYBR Gold (Eugene
OR)で染色した。走査型デンシトメーター（Molecular I
mager FX, BIO-RAD, Hercules, CA）を用いてＰＣＲ産
物を定量した。
【００４３】クローン病下行結腸切除標本６例（Ｎｏ．
１〜Ｎｏ．６）の病変部と非病変部とにおける各遺伝子
の発現状況を調べた。結果をｍＲＮＡ比として表２に示
す。
【００４４】
【表２】
【００４５】病変部でのＩＬ−２制御型ＰＰ６遺伝子、
ＴＮＩＫ遺伝子、ＦＬＩＰ遺伝子、ＧＲα遺伝子、チト
クロームオキシダーゼサブユニットＩ 遺伝子、および
チトクロームｂ遺伝子の発現の増強が確認された。さら
に結腸部で特にその差が顕著であった。
【００４６】実施例３：免疫組織染色 １．実験材料・方法 クローン病下行結腸切除標本１例（社会保険中央総合病
院（東京）における外科手術により切除されたもの）の
病変部と非病変部の組織を５０％ＯＣＴ(Tissue-Tek, S
akura Finetech, Torrance, CA)／ＰＢＳ中につけ、液
体窒素で瞬時に凍結させ、使用時まで−７０℃で保存し
た。該凍結試料から連続切片（厚さ：５μｍ）を作製
し、スライドガラス上で風乾し、アセトン中で２０分間
固定した。該切片を５％過酸化水素含有ＰＢＳでプレイ
ンキュベーションして、次いで１次抗体と４５分間イン
キュベートした。抗体には、ヒトＦＬＩＰLの２０１−
３５０アミノ酸に相当するエピトープに対するウサギポ
リクローナル抗体(Santa Cruz, CA)を、ＰＢＳで５０倍
希釈したものを用いた。１次抗体との反応後、ＰＢＳで
３回洗浄し、次いでペルオキシダーゼ標識されたヤギ抗
ウサギＩｇＧ抗体（ニチレイ）で３０分間インキュベー
トし、次いで発色試薬(Histofine simplestainPO[R],
ニチレイ)とインキュベートし、発色させた。
【００４７】２．結果 病変部位でＦＬＩＰLの発現が増強されていることが確
認された。
【００４８】
【発明の効果】本発明の自己免疫疾患の診断用試薬は、
特にクローン病の診断に有用であり、病変部位に特異的
に発現増強される遺伝子に注目してその挙動を調べるこ
とにより、より簡便にまた、迅速に当該疾患の診断が可
能となる。さらに疾患に係わる注目すべき遺伝子を見出
したことにより自己免疫疾患、特にクローン病に有用な
薬剤のスクリーニングにも利用できる。
【００４９】
【配列表フリーテキスト】配列番号１：ＩＬ−２制御型
ＰＰ６ ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プライマーとして作
用すべく設計されたオリゴヌクレオチド。 配列番号２：ＩＬ−２制御型ＰＰ６ ｍＲＮＡのＲＴ−
ＰＣＲ用プライマーとして作用すべく設計されたオリゴ
ヌクレオチド。 配列番号３：ＴＮＩＫ ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プラ
イマーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチ
ド。 配列番号４：ＴＮＩＫ ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プラ
イマーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチ
ド。 配列番号５：ＦＬＩＰL ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プラ
イマーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチ
ド。 配列番号６：ＦＬＩＰL ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プラ
イマーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチ
ド。 配列番号７：ＦＬＩＰS ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プラ
イマーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチ
ド。 配列番号８：ＦＬＩＰS ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プラ
イマーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチ
ド。 配列番号９：ＧＲα ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プライ
マーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチド。 配列番号１０：ＧＲα ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プラ
イマーとして作用すべく設計されたオリゴヌクレオチ
ド。 配列番号１１：チトクロームオキシダーゼサブユニット
Ｉ ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プライマーとして作用す
べく設計されたオリゴヌクレオチド。 配列番号１２：チトクロームオキシダーゼサブユニット
Ｉ ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ用プライマーとして作用す
べく設計されたオリゴヌクレオチド。 配列番号１３：チトクロームｂ ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣ
Ｒ用プライマーとして作用すべく設計されたオリゴヌク
レオチド。 配列番号１４：チトクロームｂ ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣ
Ｒ用プライマーとして作用すべく設計されたオリゴヌク
レオチド。
【００５０】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Welfide Corporation <120> Reagent for Diagnosis of Autoimmune Diseases <130> A-4291 <140> JP <141> 2000-05-31 <160> 14 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of PP6 regula ted by IL-2 mRNA. <400> 1 acccattttt ctgccctctt 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of PP6 regula ted by IL-2 mRNA. <400> 2 tcgtgcccac tgaataacaa 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of TNIK mRNA. <400> 3 tggttcacac actggtttcc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of TNIK mRNA. <400> 4 ccggccatag gtgtttacat 20 <210> 5 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of FLIPL mRNA . <400> 5 ctccaagcag caatccaaa 19 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of FLIPL mRNA . <400> 6 gattcctagg ggcttgctct 20 <210> 7 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Olignucleotide designed to act as primer for RT-PCR of FLIPS mRNA. <400> 7 tgcctaaaga acatccacag aa 22 <210> 8 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of FLIPS mRNA . <400> 8 cacatggaac aatttccaag aa 22 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of GRα mRNA. <400> 9 cctaaggacg gtctcaagag c 21 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of GRα mRNA. <400> 10 gccaagtctt ggccctctat 20 <210> 11 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of cytochrome oxidase subunit I mRNA. <400> 11 acgcactctc ccctgaact 19 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of cytochrome oxidase subunit I mRNA. <400> 12 ggggaatgct ggagattgta 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of cytochrome b mRNA. <400> 13 cacatcaagc ccgaatgata 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide designed to act as primer for RT-PCR of cytochrome b mRNA. <400> 14 gtctgcggct aggagtcaat 20
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ｃ１２Ｑ 1/26 Ｃ１２Ｑ 1/26 1/42 1/42 1/48 Ｚ 1/48 1/68 Ａ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ 33/50 33/53 Ｍ 33/53 33/566 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｆターム(参考） 2G045 AA35 BB20 BB46 BB51 DA13 FA11 FB02 FB03 GC12 4B024 AA01 AA11 CA01 CA04 CA09 CA11 CA20 EA04 4B063 QA01 QA19 QQ08 QQ21 QQ41 QQ43 QQ53 QQ61 QQ89 QR08 QR32 QR35 QR40 QR42 QR56 QR62 QR66 QR77 QS16 QS25 QS33 QS34 QX02 4C084 AA17 NA14 ZA682 ZB072 ZB132 ZB212 ZC202

Claims (24)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 (1)インターロイキン２制御型プロテイ
    ンホスファターゼタイプ６遺伝子に対して特異的親和性
    を有する物質、(2)Ｔｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型キナ
    ーゼ遺伝子に対して特異的親和性を有する物質、(3)Ｆ
    ＬＩＣＥ阻害蛋白質遺伝子に対して特異的親和性を有す
    る物質、および(4)グルココルチコイド受容体α遺伝子
    に対して特異的親和性を有する物質からなる群より選択
    される少なくとも1種を含んでなる、自己免疫疾患の診
    断用試薬。
  2. 【請求項２】 (1)インターロイキン２制御型プロテイ
    ンホスファターゼタイプ６遺伝子に対して特異的親和性
    を有する物質、(2)Ｔｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型キナ
    ーゼ遺伝子に対して特異的親和性を有する物質、(3)Ｆ
    ＬＩＣＥ阻害蛋白質遺伝子に対して特異的親和性を有す
    る物質、および(4)グルココルチコイド受容体α遺伝子
    に対して特異的親和性を有する物質を含んでなる請求項
    １記載の自己免疫疾患の診断用試薬。
  3. 【請求項３】 さらに、(5)チトクロームオキシダーゼ
    サブユニットＩ 遺伝子に対して特異的親和性を有する
    物質、および(6)チトクロームｂ遺伝子に対して特異的
    親和性を有する物質からなる群より選択される少なくと
    も1種を含んでなる、請求項１または２記載の自己免疫
    疾患の診断用試薬。
  4. 【請求項４】 特異的親和性を有する物質が、オリゴま
    たはポリヌクレオチドプローブである、請求項１〜３の
    いずれかに記載の自己免疫疾患の診断用試薬。
  5. 【請求項５】 特異的親和性を有する物質が、オリゴま
    たはポリヌクレオチドプライマー対である、請求項１〜
    ３のいずれかに記載の自己免疫疾患の診断用試薬。
  6. 【請求項６】 (1)インターロイキン２制御型プロテイ
    ンホスファターゼタイプ６に対して特異的親和性を有す
    る物質、(2)Ｔｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型キナーゼに
    対して特異的親和性を有する物質、(3)ＦＬＩＣＥ阻害
    蛋白質に対して特異的親和性を有する物質、および(4)
    グルココルチコイド受容体αに対して特異的親和性を有
    する物質からなる群より選択される少なくとも1種を含
    んでなる、自己免疫疾患の診断用試薬。
  7. 【請求項７】 (1)インターロイキン２制御型プロテイ
    ンホスファターゼタイプ６に対して特異的親和性を有す
    る物質、(2)Ｔｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型キナーゼに
    対して特異的親和性を有する物質、(3)ＦＬＩＣＥ阻害
    蛋白質に対して特異的親和性を有する物質、および(4)
    グルココルチコイド受容体αに対して特異的親和性を有
    する物質を含んでなる請求項６記載の自己免疫疾患の診
    断用試薬。
  8. 【請求項８】 さらに、(5)チトクロームオキシダーゼ
    サブユニットＩ に対して特異的親和性を有する物質、
    および(6)チトクロームｂに対して特異的親和性を有す
    る物質からなる群より選択される少なくとも1種を含ん
    でなる、請求項６または７記載の自己免疫疾患の診断用
    試薬。
  9. 【請求項９】 特異的親和性を有する物質が、抗体また
    はその断片である請求項６〜８のいずれかに記載の自己
    免疫疾患の診断用試薬。
  10. 【請求項１０】 自己免疫疾患がクローン病である請求
    項１〜９のいずれかに記載の自己免疫疾患の診断用試
    薬。
  11. 【請求項１１】 自己免疫疾患を発症しているか、その
    おそれのある動物を同定するための分析方法であって、
    (1)インターロイキン２制御型プロテインホスファター
    ゼタイプ６遺伝子、(2)Ｔｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型
    キナーゼ遺伝子、(3)ＦＬＩＣＥ阻害蛋白質遺伝子、お
    よび(4)グルココルチコイド受容体α遺伝子からなる群
    より選択される少なくとも1種の、該動物から採取した
    生体試料における発現状況を解析することを含む分析方
    法。
  12. 【請求項１２】 さらに、(5)チトクロームオキシダー
    ゼサブユニットＩ遺伝子、および(6)チトクロームｂ遺
    伝子からなる群より選択される少なくとも1種の発現状
    況を解析することを含む、請求項１１記載の分析方法。
  13. 【請求項１３】 自己免疫疾患を発症しているか、その
    おそれのある動物を同定するための分析方法であって、
    (1)インターロイキン２制御型プロテインホスファター
    ゼタイプ６、(2)Ｔｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型キナー
    ゼ、(3)ＦＬＩＣＥ阻害蛋白質、および(4)グルココルチ
    コイド受容体αからなる群より選択される少なくとも1
    種の、該動物から採取した生体試料における発現状況を
    解析することを含む分析方法。
  14. 【請求項１４】 さらに、(5)チトクロームオキシダー
    ゼサブユニットＩ 、および(6)チトクロームｂからなる
    群より選択される少なくとも1種の発現状況を解析する
    ことを含む、請求項１３記載の分析方法。
  15. 【請求項１５】 生体試料が、該動物由来の腸組織であ
    る請求項１１〜１４のいずれかに記載の分析方法。
  16. 【請求項１６】 自己免疫疾患がクローン病である請求
    項１１〜１５のいずれかに記載の分析方法。
  17. 【請求項１７】 動物由来組織をスクリーニングすべき
    薬剤で処理した後、当該組織中の、(1)インターロイキ
    ン２制御型プロテインホスファターゼタイプ６遺伝子、
    (2)Ｔｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型キナーゼ遺伝子、(3)
    ＦＬＩＣＥ阻害蛋白質遺伝子、および(4)グルココルチ
    コイド受容体α遺伝子からなる群より選択される少なく
    とも１種の遺伝子の発現の変化を解析することを含む、
    自己免疫疾患の予防治療薬のスクリーニング方法。
  18. 【請求項１８】 さらに、(5)チトクロームオキシダー
    ゼサブユニットＩ 遺伝子、および(6)チトクロームｂ遺
    伝子からなる群より選択される少なくとも1種の遺伝子
    の発現の変化を解析することを含む、請求項１７記載の
    自己免疫疾患の予防治療薬のスクリーニング方法。
  19. 【請求項１９】 動物由来組織をスクリーニングすべき
    薬剤で処理した後、当該組織中の、(1)インターロイキ
    ン２制御型プロテインホスファターゼタイプ６、(2)Ｔ
    ｒａｆ２・Ｎｃｋ相互作用型キナーゼ、(3)ＦＬＩＣＥ
    阻害蛋白質、および(4)グルココルチコイド受容体αか
    らなる群より選択される少なくとも１種の蛋白質の発現
    の変化を解析することを含む、自己免疫疾患の予防治療
    薬のスクリーニング方法。
  20. 【請求項２０】 さらに、(5)チトクロームオキシダー
    ゼサブユニットＩ、および(6)チトクロームｂからなる
    群より選択される少なくとも1種の蛋白質の発現の変化
    を解析することを含む、請求項１９記載の自己免疫疾患
    の予防治療薬のスクリーニング方法。
  21. 【請求項２１】 動物由来組織が腸組織である請求項１
    ７〜２０のいずれかに記載の自己免疫疾患の予防治療薬
    のスクリーニング方法。
  22. 【請求項２２】 自己免疫疾患がクローン病である請求
    項１７〜２１のいずれかに記載の自己免疫疾患の予防治
    療薬のスクリーニング方法。
  23. 【請求項２３】 請求項１７〜２１のいずれかに記載の
    スクリーニング方法によって得られ得る自己免疫疾患の
    予防治療薬。
  24. 【請求項２４】 請求項２２記載のスクリーニング方法
    によって得られ得るクローン病の予防治療薬。
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