KR102439440B1

KR102439440B1 - 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR102439440B1
Application number: KR1020200070849A
Authority: KR
Inventors: 김기태; 유정민; 임희연; 손미린; 이영미
Original assignee: 주식회사 아이코맥스
Priority date: 2020-06-11
Filing date: 2020-06-11
Publication date: 2022-09-02
Also published as: KR20210153916A

Abstract

본 발명은, 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와; 단백질, 탄수화물을 비롯하여 항산화성 색소 성분인 클로로필, 항염 및 항산화성 담즙색소인 피코사이아닌, 카로티노이드, 토코페롤, 베타카로틴, 황산화 효소(SOD) 및 감마리놀렌산(GLA)을 포함하는 항염, 항산화 및 피부노화억제 활성성분을 함유하고 있는 스피루리나 추출물과; Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피 추출물;을 포함하여 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 내인성 노화 및 광노화에 의한 피부 노화방지 및 콜라겐 생성촉진에 의한 피부재생 효과, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성을 나타내는 피부보호를 위한 우수한 효과가 있는 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

Description

산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물 및 그 제조방법{A skin cosmetic composition comprising goat's milk, Spirulina extract and Paeonia Suffruticosa Andrew extract and the manufacuring method thereof}

일반적으로 화장품은 피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용되는 제품이지만 화장품 조성물을 자세하게 살펴보면 본래의 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 제품형성에 필수 불가결한 사용된다.

예를 들면 가용화제 및 유화제, 방부제, 향료, 자외선차단제 및 기타 효능, 효과를 부여하기 위해 쓰이는 여러 가지 부가물을 들 수 있다. 이러한 성분들은 일반적으로 피부에 염증이나, 뾰루지, 부종, 알러지 등을 유발하는 주원인으로 알려져 있다.

따라서, 화장품에 있어서 피부 부작용 유발요인은 항상 잠재되어 있으며 이를 해결 하고자 여러가지 연구가 진행되어 왔으나, 항염제로 쓰이는 인도메타신(indomethacin)은 화장료에는 사용할 수 없는 물질이고, 하이드로코티존은 사용량이 제한되어 있으며, 감초산 및 그 유도체는 안정화시키기 어렵거나 용해도가 좋지 않아 실제 적용시 농도의 제한으로 인하여 실질적인 효과를 거두기가 어려운 점이 있는 등 지금까지 알려진 항염제는 피부안전성 면이나 화장료 배합시의 안정성면에서 대부분 문제점을 가지고 있어서 그 사용이 제한되고 있다.

또한, 화장품에 그 사용의 안전성이 확인되었다 하더라도 화장품이 사용될 때의 온도, 습도 등의 환경 조건과 잘못된 사용방법, 사용자의 체질과 신체 상태가 원인이 되어 염증과 알러지가 생기는 경우도 많다.

한편, 세월의 흔적이 모든 피부층에 나이테를 새기는 노화현상을 나타낸다. 피부의 세포 분열이 완만해져 각질 세포의 탈락률이 대치율보다 많아지고 피부에 볼륨을 만들어주는 점액 다당류 등 기질 성분이 감소해 피부가 건조해지면서 얇아진다. 진피를 지탱하는 콜라겐 섬유와 탄력 섬유가 줄어들거나 변성돼 피부의 탄력성이 떨어져 주름이 잡힌다. 게다가 피하지방 세포가 위축돼 볼륨이 더욱 감소할 뿐 아니라 중력의 작용으로 눈꺼풀이 쳐지고 목살이 늘어난다.

또한, 땀샘과 기름샘의 기능도 저하돼 피부를 보호해주는 수분-지질 에멀전층이 감소함으로써 각질이 일어난다. 손상된 피부의 자체 복구능력이 감소해 창상 치유도 느려진다. 이 같은 피부노화는 내인성 피부노화(chronological aging)와 누적된 햇빛 노출에 의해 야기되는 광노화(photoaging)에 의한 것이다. 광노화는 피부노화의 주원인이며 여러가지 미용의 문제를 야기한다. 그 밖에 환경요인, 유전요인, 삶의 방식(life style)이 피부노화 정도를 부추기기도 하고 억제하기도 한다. 타고난 피부의 내구성, 호르몬, 햇볕, 추위, 바람, 스모그(smog), 흡연이나 생활습관 등이 피부노화에 영향을 미치기 때문이다. 환경요인에 의한 노화에 가장 영향을 미치는 인자는 단연코 햇볕이다.

즉, 햇빛 노출에 관계 없이 나이에 따른 내인성노화는 전반적인 생리적 퇴행을 수반한다. 건조(dryness), 주름(wrinkling), 이완(laxity), 양성 종양 발생 등의 피부 변화를 초래한다. 내인성 피부노화는 멜라닌 생산이 감소돼 색상이 얇아지고 표피가 위축돼 얇아지며 피부건조, 모발 성장 변화, 피지선 확장을 초래한다. 콜라겐 합성이 감소하고 탄력섬유가 소실돼 점진적으로 피부의 질이 떨어진다. 피부의 견고성이 줄고 주름이 생긴다. 표피와 진피의 경계 부위가 편평해지고 피하 지방층도 얇아져 피부가 하부로 늘어나고 처진다. 아래 눈꺼풀이 불룩해지고(eye bag) 안와골 하부의 테두리가 뚜렷해지며 턱 밑살(jowl)이 처진다. 혈관이 약해져 사소한 외상에도 쉽게 멍이 든다.

반면에, 외인성 노화는 그 원인이 외부에 있다는 뜻이며, 피부의 경우 그 원인이 대부분 햇볕이므로 광노화라고도 한다. 광노화의 정도는 개인차가 있으며 흡연 및 기타 환경 요인에 의해 심화된다. 햇볕에 반복 노출되면 탄력섬유의 퇴행이 촉진돼 피부의 견고성(Firmness)이 떨어지고 주름이 악화된다. 자외선 노출에 의한 피부 노화의 핵심은 프로 콜라겐 합성을 방해하고 콜라겐이 파괴되는 결체 조직의 손상이다. 콜라겐 섬유가 파괴되면 세포외 기질에 불균형을 야기해 '햇볕 흉터'(solar scar)를 만들기 때문이다. 주름은 피부라는 건물이 변형된 것이다.

뿐만 아니라, 피부의 자외선 손상은 활성산소도 일부 책임이 있다. 활성산소가 콜라겐, 엘라스틴 및 GAG을 손상시켜 피부 재생 능력과 수분 저장 능력을 감소시켜 주름과 처짐을 유발한다. 피부 표면에는 저분자량 항산화제(LMWA ; Low molecular weight antioxidant)가 존재하는데 자외선은 저분자량 항산화제의 수준 및 활성을 감소시킨다.

아울러, 내인성 노화 피부와 광노화 피부를 감별하는 방법은 햇볕에 노출이 거의 없는 상완부 내측 피부와 햇볕에 노출이 가장 많은 손등을 비교해 보는 것이다. 햇볕의 영향을 거의 받지 않은 상완부 내측 피부는 부드럽고 젊어 보이나 손등은 탄력성의 감소와 색소 침착 및 주름이 많다. 광 노화는 피부색, 피부결(texture)은 물론 피부 기능의 변화를 야기한다.

특히, 햇볕에 의한 노화 피부는 피부 건조, 거칠어짐, 깊은 주름, 이완, 얼룩진 과색소 및 저색소 침착, 모세혈관 확장, 자반, 팔과 손등에 주로 발생하는 가성 반흔이며 피부암 등이 특징이다. 흡연은 광노화에 의한 피부 변화를 촉진시킨다. 흡연이 탄력섬유를 변성시키고 각질층의 수분 함량을 떨어뜨려 피부건조 및 위축의 원인이 된다. 곱게 늙은(aged well) 피부의 소유자는 추하게 늙은(aged poorly) 피부의 소유자 보다 더 건강하고 즐거운 삶을 영위하며 매사에 자신감이 있고 삶에 만족감을 느끼고 사회적으로 활동적이지만, 혐오감이나 거부감을 초래할 만큼 문제가 있는 피부 소유자는 우울증, 열등감, 자기 비하 등을 불러일으키고 대인관계에도 심대한 타격을 입는다. 곱게 정돈된 노화 피부로 매력적인 모습을 유지하는 것은 삶의 질을 위해 필수적이다.

상기와 같은 햇볕에 의한 노화 피부를 방지하기 위하여, 최근에는 자외선을 흡수하여 피부에 직접 자외선이 닿는 것을 억제하는 효과가 탁월한 스피루리나 추출물을 이용한 화장료 조성물이 개발되었는데, Spirulina 추출물은 다양한 비타민, 무기물, 아미노산이 풍부하게 함유되어 있어 활성산소에 대한 항산화 효과와 미백효과가 크며 특히, 천연색소인 Chlorophyll과 phycocyanin이 함유되어 있어 이들 색소성분이 1차적으로 자외선을 흡수하여 피부에 직접 자외선이 닿는 것을 억제하여 피부를 보호하고 비타민류와 아미노산이 세포막 산화를 방지하고 멜라닌생성을 억제하며 콜라겐 합성을 촉진하여 세포손상과 주름, 색소침착을 억제하고 세포재생을 촉진하게 되는 효과를 나타낸다.

상기 스피루리나 추출물을 이용한 화장료 조성물에 관한 종래기술로서, 한국등록특허 10-0974627(등록일자 2010년08월02일)에는 스피루리나 세포 건조물을 균질화하고, 상기 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 50 내지 100℃의 열수를 가하여 스피루리나 추출물을 제조하는 단계; 및 상기 스피루리나 추출물을 김치로부터 분리된 락토바실러스 플란타럼 (P23) 균주로 발효시키는 단계를 포함하며, 상기 열수는 상기 파쇄 혼합물 1 중량부에 대해서 5 내지 15 중량부이고, 상기 락토바실러스 플란타럼 (P23) 균주는 상기 스피루리나 추출물 100 중량부에 대해서 0.5 내지 5 중량부의 함량으로 접종되는 것을 특징으로 하는 기능성 화장품용 스피루리나 발효 추출물의 제조방법이 공지된 바 있다.

또한, 한국등록특허 10-1851623(등록일자 2018년04월18일)에는 스피루리나 추출물을 유효성분으로 포함하는 380~500nm 영역의 블루라이트 차단 및 피부 미백용 화장료 조성물로서, 상기 스피루리나 추출물은, (a) 스피루리나를 건조한 후 분쇄하는 단계; (b) 상기 (a) 단계에서 분쇄된 스피루리나를 용매와 혼합하여 추출 반응기에 투입하여 40~100℃의 온도에서 2~15시간 가열 추출하는 단계; 및 (c) 상기 (b) 단계의 추출물을 여과하고 50~70℃의 온도에서 감압농축 하는 단계;를 통해 수득된 추출물인 블루 라이트 차단용 화장료 조성물이 공지되어 있다.

또한, 한국등록특허 10-2085930(등록일자 2020년03월02일)에는 정제수 7.91 중량%, 조단백질 60.43 중량%, 조지방 3.03 중량%, 조섬유 0.01 중량%, 조회분 7.48 중량%, 칼슘 (Ca) 0.19 중량%, 인(P) 1.02 중량%, 불소(F) 19.93 중량%를 포함하는 스피루리나 열수 추출물을 포함하여, 상기 스피루리나 열수 추출물 5중량%, 정제수 60.995중량%, 부틸렌글라이콜 10중량%, 다이글리세린 4.765중량%, 하이드록시에틸우레아 1.0중량%, 글리세린 0.49중량%, 알지닌 0.24중량%, 카보머 0.22중량%, 다이소듐이디티에 이 0.02중량%, 호호바씨오일 4.0중량%, 스쿠알란 4.0중량%, 카프릴릭(카프릭트라이글리세라이드) 2.0중량%, 세 테아릴알코올 1.5중량%, 스테아릭애씨드 1.5중량%, 글리세릴스테아레이트 1.02중량%, 비즈왁스 1.0중량%, 다이 메티콘 0.8중량%, 폴리솔베이트 60 0.5중량%, 피이지 -100 스테아레이트 0.48중량%, 솔비탄세스퀴올리에이트 0.3중량%, 카프릴 하이드록사믹애씨드 0.075중량%, 카프릴릴글라이콜 0.025중량%, 보스웰리아수지추출물 0.025 중량%, 1,2-헥산다이올 0.025중량%, 향료 0.020중량% 를 포함하는 화장품 조성물의 제조방법에서 있어서, 정제수, 스피루리나 열수 추출물, 부틸렌 글라이콜, 다이글리세린, 하이드록시에틸우레아, 글리세린, 알지닌, 및 다이소듐이디티에이를 수상용해조에서 섭씨 75도의 온도로 교반 혼합하여 용해시키는 제 1 단계; 카보머를 교반기에서 교반하여 용해시키는 제 2 단계; 상기 제 2 단계에서 카보머가 완전히 용해되면 상기 제 1 단계의 수상용해조에 투입하여 교반 혼합하는 제 3 단 계; 호호바씨오일, 스쿠알란, 카프릴릭(카프릭트라이글리세라이드), 세테아릴알코올, 스테아릭애씨드, 글리세릴스테아레이트, 비즈왁스, 다이메티콘, 폴리솔베이트60, 피이지-100스테아레이트, 솔비탄세스퀴올리에이트, 카프릴하 이드록 사믹애씨드, 및 카프릴릴글라이콜을 유상융해조에서 섭씨 75도의 온도로 교반 혼합하여 용해시키는 제 4 단계; 상기 제 3 단계의 수상용해조와 상기 제 4 단계의 유상용해조의 용해가 확인되면 상기 유상용해조의 혼합용액을 상기 수상용해조에 투입하고 섭씨 75도를 유지하며 유화과정을 거치는 제 5 단계; 상기 제 5 단계의 수상용해조에서 유화과정을 거쳐 유화상태가 확인되면 섭씨 40도가 될때까지 상기 유화과정이 완료된 수상용해조를 냉각하는 제 6 단계; 상기 제 6 단계의 냉각된 수상용해조에 보스웰리아수지추출물, 1,2-헥산다이올, 및 향료를 투입하여 교반 혼합하는 제 7 단계; 및 상기 제 7 단계의 수상용해조를 섭씨 35도까지 냉각시킨 후 완성된 조성물을 배출하는 제 8 단계;를 포함하고, 상기 스피루리나 열수 추출물은, 스피루리나 분말과 정제수를 2 : 98의 중량비로 교반기에 넣고 섭씨 70도 내지 80도의 온도에서 6시간동안 교반 혼합하는 단계; 여과입자 크기가 11마이크로미터(㎛)인 여과망을 이용하여 상기 교반혼합된 스피루리나 혼합물을 필터링 하는 단계; 상기 필터링된 스피루리나 혼합물의 전체 중량에 대해 2.5 중량%의 1,2-헥산다이올을 첨가하여 방부처리하는 단계; 및 스피루리나 추출액을 추출하는 단계;를 포함하여 형성되는 것을 특징으로 하는 스피루리나 열수 추출물을 함유 하여 피부 보습기능을 향상시킨 화장품 조성물의 제조방법이 공지되어 있다.

그러나,상기 스피루리나 추출물은 다양한 비타민들이 다량 함유되어 있어 항산화성 뛰어난 비타민E, 비타민A가 풍부하여 자외선에 의한 광손상과 활성산소에 대한 피부세포의 산화를 막아 주름과 멜라닌 색소 생성을 억제하는 작용이 뛰어나지만, 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy)효과를 나타내지 못하는 문제점이 있었다.

이에 본 발명자들은 상기 스피루리나 추출물의 자외선에 의한 광손상과 활성산소에 대한 피부세포의 산화를 막아 주름과 멜라닌 색소 생성을 억제하는 작용을 이용하면서, 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와 Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피 추출물을 이용하여 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 내인성 노화 및 광노화에 의한 피부 노화방지 및 콜라겐 생성촉진에 의한 피부재생 효과, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성을 나타내는 피부화장료 조성물을 개발하고 본 발명을 완성하였다.

[특허문헌 001] 한국등록특허 10-0974627(등록일자 2010년08월02일) [특허문헌 002] 한국등록특허 10-1851623(등록일자 2018년04월18일) [특허문헌 003] 한국등록특허 10-2085930(등록일자 2020년03월02일)

본 발명은 상기 종래 문제점들을 해결하기 위하여, 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와; 단백질, 탄수화물을 비롯하여 항산화성 색소 성분인 클로로필, 항염 및 항산화성 담즙색소인 피코사이아닌, 카로티노이드, 토코페롤, 베타카로틴, 황산화 효소(SOD) 및 감마리놀렌산(GLA)을 포함하는 항염, 항산화 및 피부노화억제 활성성분을 함유하고 있는 스피루리나 추출물과; Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피 추출물;을 포함하여 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 내인성 노화 및 광노화에 의한 피부 노화방지 및 콜라겐 생성촉진에 의한 피부재생 효과, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성을 나타내는 피부보호를 위한 우수한 효과가 있는 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물 및 그 제조방법을 제공하는 것을 해결하고자 하는 과제로 한다.

본 발명은 상기 과제를 해결하기 위하여, 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와; 단백질, 탄수화물을 비롯하여 항산화성 색소 성분인 클로로필, 항염 및 항산화성 담즙색소인 피코사이아닌, 카로티노이드, 토코페롤, 베타카로틴, 황산화 효소(SOD) 및 감마리놀렌산(GLA)을 포함하는 항염, 항산화 및 피부노화억제 활성성분을 함유하고 있는 스피루리나 추출물과; Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피 추출물;을 포함하여 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 내인성 노화 및 광노화에 의한 피부 노화방지 및 콜라겐 생성촉진에 의한 피부재생 효과, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성을 나타내는 피부보호를 위한 우수한 효과가 있는 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물은 산양유(goat's milk) 30~50중량부, 스피루리나 추출물 30~50중량부, 목단피 추출물 5~20중량부를 포함하는 것을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 스피루리나 추출물은 스피루리나를 잘게 분쇄하고, 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 스피루리나 중량당 5~7배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 50~100℃에서 2~20시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조 한 것을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 목단피 추출물은 목단피를 건조한 뒤 목단피 중량당 10 배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 60~80℃에서 20~24 시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조 한 것을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양 로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌 징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 과제의 해결수단으로 한다.

또한, 본 발명은 산양유(goat's milk)를 준비하는 단계; 스피루리나를 잘게 분쇄하고, 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 스피루리나 중량당 5~7배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 50~100℃에서 2~20시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조하여 스피루리나 추출물을 준비하는 단계; 목단피를 건조한 뒤 목단피 중량당 10 배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 60~80℃에서 20~24 시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조하여 목단피 추출물을 준비하는 단계; 상기 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 균질 혼합하는 단계;를 포함하는 피부화장료 조성물의 제조방법을 과제의 해결수단으로 한다.

본 발명의 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물은 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와; 단백질, 탄수화물을 비롯하여 항산화성 색소 성분인 클로로필, 항염 및 항산화성 담즙색소인 피코사이아닌, 카로티노이드, 토코페롤, 베타카로틴, 황산화 효소(SOD) 및 감마리놀렌산(GLA)을 포함하는 항염, 항산화 및 피부노화억제 활성성분을 함유하고 있는 스피루리나 추출물과; Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피 추출물;을 포함하여 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 내인성 노화 및 광노화에 의한 피부 노화방지 및 콜라겐 생성촉진에 의한 피부재생 효과, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성을 나타내는 피부보호를 위한 우수한 효과가 있다.

도 1은 본 발명의 피부화장료 조성물의 MMP-1 활성 억제 시험 측정결과 그래프
도 2는 본 발명의 피부화장료 조성물의 DPPH에 의한 프리라디칼 소거능력 시험 측정결과 그래프
도 3은 본 발명의 피부화장료 조성물의 콜라겐 합성 효과 측정결과그래프
도 4는 본 발명의 피부화장료 조성물의 3차원 생인공피부에서의 항염증(IL-1α 방출량 측정) 시료제조과정도
도 5는 본 발명의 피부화장료 조성물의 3차원 생인공피부에서의 항염증(IL-1α 방출량 측정) 결과그래프
도 6은 본 발명의 피부화장료 조성물의 히스타민방출억제(Histamine release inhibition test)시료제조도
도 7은 본 발명의 피부화장료 조성물의 히스타민 방출억제 (Histamine release inhibition test)결과그래프
도 8은 본 발명의 피부화장료 조성물의 멜라민 생성억제효과(tyrosinase 활성 억제) 측정결과그래프

본 발명은, 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와; 단백질, 탄수화물을 비롯하여 항산화성 색소 성분인 클로로필, 항염 및 항산화성 담즙색소인 피코사이아닌, 카로티노이드, 토코페롤, 베타카로틴, 황산화 효소(SOD) 및 감마리놀렌산(GLA)을 포함하는 항염, 항산화 및 피부노화억제 활성성분을 함유하고 있는 스피루리나 추출물과; Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피 추출물;을 포함하여 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 내인성 노화 및 광노화에 의한 피부 노화방지 및 콜라겐 생성촉진에 의한 피부재생 효과, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성을 나타내는 피부보호를 위한 우수한 효과가 있는 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물은 산양유(goat's milk) 30~50중량부, 스피루리나 추출물 30~50중량부, 목단피 추출물 5~20중량부를 포함하는 것을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 스피루리나 추출물은 스피루리나를 잘게 분쇄하고, 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 스피루리나 중량당 5~7배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 50~100℃에서 2~20시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조 한 것을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 목단피 추출물은 목단피를 건조한 뒤 목단피 중량당 10 배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 60~80℃에서 20~24 시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조 한 것을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양 로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌 징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 기술구성의 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 산양유(goat's milk)를 준비하는 단계; 스피루리나를 잘게 분쇄하고, 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 스피루리나 중량당 5~7배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 50~100℃에서 2~20시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조하여 스피루리나 추출물을 준비하는 단계; 목단피를 건조한 뒤 목단피 중량당 10 배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 60~80℃에서 20~24 시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조하여 목단피 추출물을 준비하는 단계; 상기 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 균질 혼합하는 단계;를 포함하는 피부화장료 조성물의 제조방법을 기술구성의 특징으로 한다.

이하에서는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예 및/또는 도면을 통하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 여기에서 설명하는 실시예 및/또는 도면에 한정되지 않는다.

우선, 본 발명의 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물은, 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와; 단백질, 탄수화물을 비롯하여 항산화성 색소 성분인 클로로필, 항염 및 항산화성 담즙색소인 피코사이아닌, 카로티노이드, 토코페롤, 베타카로틴, 황산화 효소(SOD) 및 감마리놀렌산(GLA)을 포함하는 항염, 항산화 및 피부노화억제 활성성분을 함유하고 있는 스피루리나 추출물과; Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피 추출물;을 포함하여 구성된다.

이때, 상기 산양유에 관하여, 지구상에 존재하는 여러 포유동물 중 모유(human milk)는 약 2억 년 동안 다양한 환경 하에서 오랜 자연선택과 정을 통해 얻어진 천연식품이다.

최근 들어 의학, 생화학, 영양학 등 생명과학 분야의 빠른 발전과 더불어 모유의 생물학적 특성과 다양한 성분들이 연구되면서 모유 중에 함유된 각 성분들의 화학적 구조는 물론 영양학적으로 유익한 효능들이 밝혀지게 되었다.

한편, 모유와 자주 비교되는 우유는 모유를 대체 할 수 있을 정도로 인체에 다양한 영양소를 골고루 공급하는 식품으로 인식되어 왔다. 그러나 지구상 많은 인종 중에는 우유 섭취 후 민감한 반응을 보이는 유당불내증(lactose intolerance) 환자들이 많기 때문에 인간이 식품으로 이용하는 포유동물의 유즙들을 모유의 성분들과 비교하면서, 모유 성분 및 조성과 가장 가까운 유즙들이 주목을 끌게 되었다.

그 중 하나가 산양유(Goat milk)이다. 산양유는 에너지가 63Kcal/100g 으로서 모유 또는 우유와 유사하여 모유를 대신 할 수 있다. 산양유는 개발도상국 특히 우유가 생산되지 않거나 조제분유가 너무 비싼 지역에서 영양이 부족한 유아에게 우유 대체식으로 매우 귀중한 가치가 있다.

깨끗하고 넓은 초원에서 방목되는 산양 한 마리에서 얻을 수 있는 산양유의 양은 0.3~3L 이며 단백질, 지방 회분이 많고 단백질 중에서는 알부민의 비율이 높다. 또한, 산양유의 지방은 우유 지방에 비해 지방 크기가 작아 쉽게 소화되어 장에서 흡수 장애가 있는 유아도 별 무리 없이 마실 수 있다. 우유 알레르기 유발물질로 알려진 알파 S1-카제인을 우유보다 적게 함유해 알레르기나 아토피를 일으킬 확률도 낮다. 산양유에는 무기염류인 셀레늄이 우유보다 20~28% 이상 더 들어 있다. 한국, 일본에서는 음용하는 것이 대부분이지만 유럽에서는 치즈, 버터로 가공하는 경우가 많고 요즘 한국에서도 산양유뿐만 아니라 제2차 가공식품도 많이 나오고 있다. 또한, 산양유의 장점 중 하나인 피부노화 방지, 피부미용효과가 주목 받고 있어 여성들에게도 큰 인기를 끌고 있다.

특히, 산양유는 민감하고 연약한 피부에 적용되어 피부의 면역력 증진에 큰 효과를 나타내는데, 산양유가 가지는 다음 4가지 성분은 면역력 증진에 큰 도움을 준다.

1) 베타 카제인

산양유는 일반 우유와 달리 베타 카제인의 구성 비율이 높다. 이 베타 카제인은 면역 증강 효능을 가진다.

2) 알칼리성 식품

일반적으로 우유는 산성음식이며 산양유는 알칼리성 음식이다. 면역력을 높이기 위해서는 인체도 알칼리화 되어야 하는데, 이에 알칼리성 식품인 산양유는 인체의 면역력 증진에도 큰 도움을 준다.

3) 모유와 흡사한 성분

산양유는 모유와 가장 가까운 식품으로 사람의 인체에 가장 적합한 식품이라 할 수 있다. 이러한 산양유에는 모유의 항산화 성분인 CLA, 뉴클레오타이드, 스핑고마이엘린, L-카르니틴, 성장 인자 IgF가 함유되어 있어 면역 기능을 돕는다.

4) 다양한 영양소 및 생리활성 물질

산양유는 산양유에는 지방, 탄수화물, 단백질, 무기질, 각종비타민과 다양한 생리활성물질이 다른 식품에 비해 고루 들어있어 몸에 좋은 식품이라 할 수 있다. 특히 산양유는 몸이 정상적으로 작동하게 하는 일을 하므로, 우리 몸의 면역력 강화에 도움을 준다.

상기와 같이 산양유의 알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 성분이 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성효과를 나타내는 효능을 이용하는 것이 본 발명의 구성상 특징이다.

또한, Spirulina는 시아노박테리아(남조류)의 일종으로 길이 0.3-0.5mm, 폭 0.005-0.008mm의 원핵 다세포 미생물로서 멕시코와 아프리카 등지에서 자생한다. 바닷물보다 6-7배 더 짠 염호와 섭씨 40℃의 고온과 pH 9-11의 강알칼리성 환경에서도 잘 자라는 강한 생명력을 가지고 있으며 인공배양이 가능하고 광생물반응기를 이용한 고농도 배양이 가능하여 다량의 원료를 효율적으로 얻을 수 있다.

Spirulina의 구성성분은 단백질60-70%, 지질 6-9%, 탄수화물 15-20%로 이루어져 있으며 다양한 비타민류를 포함하고 있다. 따라서 아미노산이 풍부할 뿐 아니라 그 중 필수아미노의 함량이 콩이나 소고기보다 1.5-5배의 높은 함량을 나타낸다. Spirulina에 함유되어 있는 비타민은 비타민A, B1, B2, B6, B12, E, 니코틴산, 엽산, 판토텐산 등이며 그 중 세포막 산화에의한 세포손상을 방지하는 항산화제인 비타민E와 진피내에 새로운 콜라겐 합성을 촉진하여 주름을 억제하고 멜라닌 생성을 감소시키는 비타민A가 피부의 노화를 방지한다.

Spirulina는 광합성을 하는 조류인 만큼 카르티노이드, 클로로필, 피코시아닌 등의 색소가 함유되어있으며 이러한 색소들은 항산화제로써의 기능뿐 아니라 면역력을 증강시키고 색소자체가 자외선을 흡수함으로써 피부를 자외선으로부터 보호하는 기능이 있다. 해양미세조류는 세포내 구성물질 외에 세포외 다당류(extracelluar polysaccharide,EPS)를 생산한다. EPS는 자외선, 세균 등 외부자극으로부터 자신을 보호하기 위해 생산하는 물질로 Spirulina와 같이 열악한 환경에서 자라는 조류는 자외선으로부터 세포를 보호하고 수분을 유지시키는 등의 다양한 보호작용을 하며 이 세포외 다당류는 미백효과가 있는 것으로 보고되어 있다.

본 발명에서는 스피루리나를 잘게 분쇄하고, 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 스피루리나 중량당 5~7배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 50~100℃에서 2~20시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조하여 스피루리나 추출물로 제조하여 사용한다.

여기서, 상기 스피루리나 추출물의 피부작용 메카니즘을 살펴 보면, 다음 그림에서 나타난 바와 같이, 자외선에 대한 지질과 조직의 노출은 단일산소와 프리라디칼을 야기시키고, 조직 내 콜라겐 파괴, 피부주름생성, 표피의 건조와 과각화, 멜라닌 과잉생산과 같이 지질과 조직에 광산화적 손상을 입힌다. Spirulina 추출물은 다양한 비타민, 무기물, 아미노산이 풍부하게 함유되어 있어 활성산소에 대한 항산화 효과와 미백효과가 크며 특히, 천연색소인 Chlorophyll과 phycocyanin이 함유되어 있어 이들 색소성분이 1차적으로 자외선을 흡수하여 피부에 직접 자외선이 닿는 것을 억제하여 피부를 보호하고 비타민류와 아미노산이 세포막 산화를 방지하고 멜라닌생성을 억제하며 콜라겐 합성을 촉진하여 세포손상과 주름, 색소침착을 억제하고 세포재생을 촉진하게 된다.

보다 구체적으로, 상기 스피루리나 추출물의 성분과 wkryd을 보면, 스피룰리나에는 다양한 비타민들이 다량 함유되어 있는데 특히, 항산화성 뛰어난 비타민E, 비타민A가 풍부하여 자외선에 의한 광손상과 활성산소에 대한 피부세포의 산화를 막아 주름과 멜라닌 색소 생성을 억제하는 작용이 뛰어나다. 또한 비타민B1, 비타민B2, 비타민B6, 비타민B12가 풍부하여 피부의 대사작용을 증신시키며 혈액순환을 원활히 하여 맑고 건강하게 만들어 준다.

또한, Spirulina는 단백질 함량이 70%이상이며 아미노산은 자외선으로 손상된 피부조직을 재생시키는 작용을 한다. 아르기닌과 프롤린은 피하결합조직인 콜라겐의 합성을 촉진하여 주름이 생기는 것을 억제하고 시스테인은 멜라노사이트에서 과잉생산된 멜라닌을 제거하는 작용을한다. 또한 강력한 항산화제로 알려진 글루타치온의 구성 아미노산인 시스테인은 글루타민과 글리신이 풍부하게 함유되어 있어 노화방지 효과가 뛰어나다.

또한, 스피루리나는 E.P.S(Extracellar polysaccharide) 성분이 풍부한데, 이는 해양 미세조류에서 생성되는 세포외 다당류로 주로 외부 환경에 대하여 보호작용을 하는 물질이다. Spirulina는 열대성의 악조건에서도 잘 자라는 조류로 Spirulina에서 생성되는 EPS는 세포를 보호하고 수분을 유지시키는 작용을 한다. 이것은 자외선으로인한 피부의 과각화를 방지하는 효과가 있다.

한편, 상기 목단피(Moutan Root Bark)는 모란(학명 ; Paeonia Suffruticosa Andrews)의 뿌리껍질로, 한의학에서 약재로 사용 되고 있는 인체에 무해한 식물이다. 목단피는 혈열로 인한 생리불순, 생리통, 멍들었을 때, 토혈, 코피, 반점이 나타나는 증상, 허열로 인해 뼛골이 쑤시는 증상, 혈압상승, 어혈제거, 타박상, 소염진통, 종기치료, 맹장염초기 등에 사용하며 가슴답답증을 없애준다.

상기 목단피의 약리작용으로 진통, 진정, 해열, 항경련, 항염증, 항혈전, 항알레르기, 위액분비억제, 자궁점막충혈, 항균작용 등이 보고되었다.

생김새는 관상의 껍질조각으로 바깥 면은 어두운 갈색 또는 자색을 띤 갈색이며 가로로 길고 작은 타원형의 곁뿌리 자국과 세로주름이 있다. 안쪽 면은 엷은 회갈색이나 어두운 자색을 띠고 편평하며 꺾은 면은 거칠다. 안쪽 면 및 꺾은 면에는 때때로 흰색의 결정이 붙어 있다.

특히, 목단피 (Root Cortex of Paeonia Suffruticosa Andrews; PSA)는 血熱로 인한 瘀血停滯를 치료하는 효능이 있어서 내외의 화농성 질환 및 피부질환에 응용되고 있으며, 특히, 목단피는 Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있어 피부노화방지 미백효과가 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서는 상기 목단피를 건조한 뒤 목단피 중량당 10 배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 60~80℃에서 20~24 시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 목단피 추출물로 제조하여 사용한다.

특히, 본 발명의 피부화장료 조성물은 산양유(goat's milk) 30~50중량부, 스피루리나 추출물 30~50중량부, 목단피 추출물 5~20중량부를 포함하여 조성되는 것이 바람직한데, 이는 산양유(goat's milk), 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물 각각의 활성성분이 균형있게 작용하는데 있어서 바람직하기 때문이다.

[본 발명의 피부화장료 조성물의 제조]

스피루리나 500g을 잘게 분쇄하고, 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 3리터의 정제수를 가하여 추출반응기에서 80℃에서 15시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조하여 스피루리나 추출물을 제조하였다.

다음, 목단피 300g을 건조한 뒤 3리터의 정제수를 가하여 추출반응기에서 80℃에서 20 시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조하여 목단피 추출물을 제조하였다.

다음, 산양유 50g을 준비하고, 여기에 상기 스피루리나 추출물 50g, 목단피 추출물 20g을 혼합하고, 정제수 500g에 균질혼합하여 본 발명의 피부화장료 조성물을 제조하였다.

[본 발명의 피부화장료 조성물의 Photoprotect효과 측정(MMP-1 활성 억제 시험)]

MMP-1의 합성은 배양된 세포의 배양액을 채취하여 ELISA kit(Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany)를 사용하여 측정하였다. 섬유아세포를 24-well multi plate에 well 당 5 Х 10⁴개 넣고, 10% FBS를 첨가한 DMEM배지에 24시간 정치하였다(pH 7.4). 이후 FBS를 첨가하지 않은 DMEM배지에 [실시예 1]의 피부화장료 조성물을 10^-7 M 농도로 첨가하여 48시간 동안 배양하고 상층액을 회수하였다. 그 후 회수된 상층액을 이용하여 kit에서 제공된 96-well plate에 coating하고, 4℃에서 12시간 정치한 후, TPBS로 3회 세척하고, 3% BSA를 넣고 2시간 blocking하였다. Primary antibody 인 anti-collagen antibody를 37℃에서 90분간 처리한 후,TPBS로 3회 세척하였다. Secondary antibody인 anti-mouse IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 90분간 반응시킨 후 TPBS로 3회 세척하였다. Alkaline phosphatease substrate solution(1 mg/mL p-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer)을 상온에서 30분간 반응시킨 후 microplate reader로 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 다음 [표 1] 및 [도 1]에 나타내었다.

	MMP-1(OD/mg protein)
Non-Treated	0.38
[실시예] 조성물 0.1%	0.32
[실시예] 조성물 0.2%	0.29
[실시예] 조성물 0.5%	0.21
[실시예] 조성물 1%	0.18
[실시예] 조성물 3%	0.15

상기 [표 1] 및 [도 1]에 도시한 바와 같이, 본 발명의 피부화장료 조성물은 MMP-1의 활성을 억제하여 광노화방지 효과를 나타냄을 알 수 있다.

[본 발명의 피부화장료 조성물의 항산화 효과 측정(DPPH에 의한 프리라디칼 소거능력 시험)]

1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)용액을 2X10^-4M in Ethanol 로 조제하고 이 용액 4㎖에 [실시예 1]의 피부화장료 조성물을 각 농도별로 에탄올에 용해 시킨후 1㎖과 DPPH와 혼합한 후 실온에 30분간 방치한 후 517nm에서 흡광도를 측정하고 그 결과를 다음 [표 1] 및 [도 2]에 나타내었다.

EC₅₀	[실시예 1]	크로렐라	비타민C
단위 mM	19.39±0.65	14.04±0.65	0.2±0.54

상기 [표 1] 및 [도 2]에 도시한 바와 같이, 본 발명의 피부화장료 조성물은 대표적인 항산화제인 비타민 C에 비하여 96배 이상의 강력한 항산화력을 나타냄을 알 수 있다.

[본 발명의 피부화장료 조성물의 콜라겐 합성 효과 측정]

콜라겐 (type Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ)들은 프로콜라겐이라는 전구물질의 형태로 합성된다. 프로 콜라겐은 아미노 말단과 카르복시 말단에 프로 펩타이드라는 펩티드 염기서열을 포함한다. 프로펩티드의 기능은 소포체내에서 프로콜라겐 분자의 folding을 도와줌과 동시에 콜라겐 중합반응이 일어날 때 콜라겐 분자로부터 절단, 분리된다고 알려져 있다. 그래서 분리된 프로펩타이드의 양을 측정함으로써, 세포내에서 콜라겐 생합성 정도를 파악할 수 있다. 그 시험 방법은 다음과 같다.

Human normal fibroblast cells을 6well dish에 일정수의 세포를 seeding한 후 하루동안 배양하였다. 다음, FBS가 0.05% 들어있는 각각의 well에 시료를 농도별로 처리한뒤 48시간동안 다시 배양하고 세포배지를 수집하였다. 수집한 각 sample의 100ul를 microplate의 각 well에 넣고, 37도씨에서 2시간동안 incubation한 후, 각 well를 PBS 400ul로 3회 세척하였다. 용액Ⅰ을 각 well에 100ul 씩 넣고 37도씨에서 1시간 동안 incubation 시키고, 각 well을 PBS 400ul로 3회 세척하였다. 기질용액(TMBZ) 100ul를 각 well에 첨가한 후 상온에서 15분간 incubation 하였다. 1N H2SO4 100ul를 각 well에 첨가한 후 잘 섞은 다음, 450nm에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하고 그 결과를 다음 [표 3] 및 [도 3]에 나타내었다.

농도(ug/ml)	OD 450nm
0	0.3
1	0.48
10	0.55
100	0.68
500	0.81

상기 [표 3] 및 [도 3]에 도시한 바와 같이, 본 발명의 피부화장료 조성물은 콜라겐합성효과가 우수함을 알 수 있다.

[본 발명의 피부화장료 조성물의 3차원 인공피부 내에서의 IL-1α 방출 억제로 인한 항염 효과 측정]

본 발명의 [실시예 1]의 피부화장료 조성물의 항염효과를 측정하기 위하여, IL-1α(interleukin-1α)는 전염증 작용인자 (pre-inflammatory mediator)로 작용하는 세포간 신호물질(cytokine)으로 염증, 감염 등에 의한 자극에 골형성세포, 단핵세포, 대식세포, 각질형성세포, 간세포, 섬유아세포 등이 일시적으로 증가 생산한다. 또한 IL-1α는 상처(wound)의 재상피화(re-epithelialization)의 잠재적인 유도체로서 작용할 뿐만 아니라 알레르기 반응과 염증성 반응 조절인자로서 백혈구 운동을 촉진시키는 leukotriene B4, 5-, 12-, 15 HETE 같은 arachidonic acid lipoxygenase metabolites 생산을 증진시키는 것으로 알려져 있다. 따라서, 3차원 인공피부를 배양하여 자극을 유발시킨 후 본 발명의 피부화장료 조성물의 IL-1α의 방출양을 측정하였다.

우선, [도 4]와 같이, TypeⅠ collagen matrix(Bioland, Korea)와 5배로 농축된 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle Medium, GIBCO BRL, USA), 그리고 2.2% NaHCO₃와 200mM HEPES, 0.05N NaOH로 제조된 완충용액을 7:2:1로 섞어 만든 human fibroblasts cell line(ATCC, CRL-2076) 을 density 1x10⁵ cells/ml로 혼합하여 직경 10mm의 insert에 각각 200ul의 fibroblasts가 혼합된 collagen solution을 넣어 진피를 제조하였다. 진피 제조 후 10% FBS를 함유하는 DMEM를 2일마다 교체하여 7일간 배양하였다. 배양된 진피위에 normal keratinocyte를 3x10⁵ cells/insert로 접종하였다.

DMEM(10% FBS)와 K-SFM(Keratinocyte Serum Free Medium, GIBCO, USA)(supplemented with EGF (epidermal growth factor) and BPE(bovine pituitary extract)를 1:1로 섞은 배지를 넣고 7일간의 submerge culture 후 기액 계면에서 배양 (air-liquid interface culture)하기 위하여 insert안의 배지는 제거하고 insert 밖에만 submerge culture시 사용한 배지를 사용하여 14일 동안 air-liquid interface culture 하였다. 배양된 인공피부의 배양배지를 모두 제거한 다음 새 배지를 조직 배양 용기밖에 1.5 ㎖을 넣었다. Insert 내에 10 ㎕의 피부자극물질(SLS : sodium lauryl sulfate)을 투여하고 4 시간 뒤, 10 ㎍/ml, 50 ㎍/ml 농도의 [실시예 1]의 피부화장료 조성물을 10 ㎕ 적용한 후 37℃, 5% CO₂에서 24 시간 동안 배양하였다. SLS 와 [실시예 1]의 피부화장료 조성물의 용매는 DMSO를 사용하였다. IL-1α는 배지 표본을 취하여 Human IL-1α assay kit (Endogen Inc. Boston, MA, USA)을 이용하였으며 ELISA-reader (enzyme-linked immunosorbent assay)로 450 nm에서 측정하였다. 그 결과는 [도 5]에 나타내었다.

[도 5]에 나타난 바와 같이 [실시예 1]의 피부화장료 조성물은 농도가 높아질수록 IL-1α의 방출양이 현저히 저하되어 항염효과가 우수하게 발현되는 것을 확인할 수 있다.

[본 발명의 피부화장료 조성물의 Histamine 방출 저해에 의한 항알러지 효과 측정]

본 발명의 [실시예 1] 피부화장료 조성물의 면역증강효과에 의한 항알러지 효과 측정을 위하여, [도 6]과 같이, 쥐에서 정제한 mast cell 현탁액에 항난백 알부민과 본 발명의 [실시예 1] 피부화장료 조성물을 100 ㎍/ml, 200 ㎍/ml 농도로 하여 10㎍/㎖를 넣은 후 난백 알부민을 가하여 항온자극을 시켰다. 유리된 히스타민은 σ-phthalaldehyde 형광 측정법으로 정량하고, 그 결과를 [도 7]에 나타내었다.

[도 7]에 나타난 바와 같이 [실시예 1]의 피부화장료 조성물은 농도가 높아질수록 Histamine 방출 저해율이 증가하여 항알러지효과가 우수하게 발현되는 것을 확인할 수 있다.

[본 발명의 피부화장료 조성물의 멜라민 생성억제효과(tyrosinase 활성 억제) 측정]

Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase 의 억제활성 효과는 mushroom tyrosinase 를 효소원으로 하여 기질인 L-3,4-dihydroxyphenylalanine(L-DOPA) 과의 반응으로 생성된 L-dopaquinone 의 흡광도를 측정하여 tyrosinase 활성억제를 알아본 결과 그 결과를 [도 8]에 나타내었다.

[도 8]에 나타난 바와 같이, [실시예 1]의 피부화장료 조성물 25, 50 그리고 100 ppm 처리했을 때 tyrosinase 활성이 무처리군인 대조군과 비교하여 농도의존적으로 유의적 억제를 나타내었다. 그러나, 300 ppm 과 500 ppm 처리군은 대조군보다는 tyrosinase 활성이 유의적으로 억제되었으나, 가장 높은 억제 효과를 나타낸 100 ppm 처리군과 비교하여 오히려 증가하였는데, 이를 감안하면 tyrosinase 억제를 나타내는 목단피 성분의 농도는 고농도가 바람직하지 않으므로 산양유나 스피루리나 추출물보다 목단피 추출물의 사용량이 적게 사용하여야 함을 알 수 있다.

이상의 설명은 본 발명의 기술사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 발명에 개시된 실시예 및/또는 도면들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예 및/또는 도면에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

알파에스 카제인(alpha S casein), 베타 카제인(beta casein) 및 감마 카제인(gamma casein)을 포함하는 면역증강(immunity-boosting), 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성성분을 함유하고 있는 산양유(goat's milk)와; 단백질, 탄수화물을 비롯하여 항산화성 색소 성분인 클로로필, 항염 및 항산화성 담즙색소인 피코사이아닌, 카로티노이드, 토코페롤, 베타카로틴, 황산화 효소(SOD) 및 감마리놀렌산(GLA)을 포함하는 항염, 항산화 및 피부노화억제 활성성분을 함유하고 있는 스피루리나추출물과; Melanin 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제활성성분을 함유하고 있는 목단피추출물;을 포함하되,
상기 산양유(goat's milk) 30~50중량부, 스피루리나 추출물 30~50중량부, 목단피 추출물 5~20중량부를 포함하는 피부화장료 조성물로서,
상기 스피루리나 추출물은 스피루리나를 잘게 분쇄하고, 스피루리나 세포를 초음파로 파쇄한 다음, 스피루리나 중량당 5~7배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 50~100℃에서 2~20시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조한 것이고,
상기 목단피추출물은 목단피를 건조한 뒤 목단피 중량당 10 배의 에탄올 또는 정제수를 가하여 추출반응기에서 60~80℃에서 20~24 시간 동안 추출한 후, 여과하고 감압 농축하여 동결건조한 것으로, 피부 면역증강에 의하여 피부 보습을 유지함과 동시에, 내인성 노화 및 광노화에 의한 피부 노화방지 및 콜라겐 생성촉진에 의한 피부재생 효과, 아토피 피부염 등에 대한 항염증(anti-inflammatory) 및 항알러지(anti-allergy) 활성을 나타내는 피부보호를 위한 우수한 효과가 있는 것을 특징으로 하는 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물
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제1항에 있어서,
상기 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양 로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌 징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 산양유, 스피루리나 추출물 및 목단피 추출물을 함유하는 피부화장료 조성물
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