KR101858464B1 - 광금전초 추출물을 포함하는 피부노화 방지 및 피부주름 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부노화 방지 및 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 광금전초 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이며 추가적으로 금앵자, 두충엽 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 항노화, 피부주름 개선, 피부상태개선의 효과가 뛰어나다.

Description

광금전초 추출물을 포함하는 피부노화 방지 및 피부주름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic compositions containing Desmodii Herba extaracts for prevention of skin aging and improvement of skin wrinkle}

본 발명은 피부노화 방지 및 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 광금전초 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이며 추가적으로 금앵자, 두충엽 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

인체의 가장 큰 기관으로서 전체 인체 부피의 약 16%를 차지하고 있는 피부는 외부환경과 직접 접해 있으면서, 인체 안으로 침입하려는 치명적인 많은 유해인자, 예를 들면, 온도, 습도 및 자외선 등으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당한다. 그러나, 나이가 들어감에 따라 각종 오염물질, 강한 자외선, 스트레스 및 영양결핍 등으로 인해 피부 세포들이 손상을 입게 되고, 세포 증식이 제대로 이루어지지 않게 되어 피부에 주름, 탄력 손실 및 각질화 등이 발생한다.

피부의 노화는 크게 내인적 노화(intrinsic aging)와 외인적 노화(extrinsic aging)로 대별된다(Cosmetics & Toiletories,111:31-37(1996)). 내인적 노화는 나이가 듦에 따라 피부의 생리적 기능이 점차 저하되어 자연적으로 나타나는 노화 현

상으로 임상학적으로 탄력이 감소하고, 피부결이 거칠어지며, 깊은 주름이 생기며 색소가 침착되는 특징이 있다(Arch Dermatol., 130:87-95(1994)). 외인적 노화는 자외선, 활성 산소종(reactive oxygen species) 및 스트레스 등의 외인적 요인에 의해 발생하는 노화 현상을 말한다. 이러한 요인들에 의해 피부의 노화가 급속히 진행되며, 그 결과 피부 표면에 거친 주름이 생성되고 탄력이 현저히 감소하게 된다.

피부의 노화 기작을 규명하기 위한 여러 연구들이 진행되어 여러 가지 피부 노화의 원인들이 밝혀졌다. 피부가 온도의 변화, 습도의 저하 또는 바람 등에 의해 건조하게 되면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 생리 활성이 저하되어 노화가 촉진된다. 또한, 유해 활성산소종 또는 자유 라디칼에 피부가 노출되면 체내의 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고 피부를 구성하는 여러 단백질들의 변형을 유발하게 된다. 한편 피부 진피의 대부분(피부 전체 건조 중량의 약 70-80%)을 차지하는 콜라겐과 신축성이 큰 엘라스틴 단백질은 섬유아세포에서 생성되는 주요 단백질로 피부 진피층에서 피부의 기계적 견고성, 조직의 결합력 및 탄력성 등에 관여한다(Journal of the american academy of dermatology, 21:610-613(1989)). 콜라겐은 연령이 증가할수록, 그리고 자외선에 노출이 많이 될수록 양적 감소를 보인다. 콜라겐은 형태와 구조적 특징에 따라서 분류되는데 이들 중에서, 가장 특징이 잘 알려진 것은 타입 I, II, III 그리고 IV이다. 콜라겐 타입 I과 III는 진피층의

세포간질의 구성성분을 이루고 콜라겐 타입 IV는 DEJ (Dermal Epidermal Junction)의 주요 구성물질이 된다. DEJ는 피부의 표피층과 진피층 사이에 위치하여 두 층간의 물질 투과와 수송을 조절해주며 인접한 피부세포의 분화를 조절하며 피부의 견고성을 유지시켜준다. 피부의 주요 구조적 성분인 콜라겐과 엘라스틴은 자연적 또는 외부 자극에 의해 구조가 변성되거나 생합성량이 감소하게 되는데 이로 인해 피부 노화가 가속화된다.

이러한 피부노화를 억제시키거나 진행 속도를 완화시키기 위하여, 레티놀, 레티노이드, 비타민 C, 플라보노이드 및 토코페롤 등의 여러 가지 피부 보호 성분이 함유된 화장료 또는 피부 보호제가 개발되고 있다. 그러나 이와 같은 화장료 또는 피부 보호제는 최종적인 제형에 있어서 역가가 떨어져 그 효능이 경미하고, 피부 자극이 심한 문제점을 지니고 있다.

피부는 다양한 외부자극과 접하는 기회가 많기 때문에 다른 기관들에 비해 주름이 발생하기 쉽다. 그 중에서도 얼굴 피부는 태양광선, 건조 외기 및 공해 물질 등에 직접적으로 노출되어 있어 그렇지 않은 피부보다 주름 등의 노화현상이 조기에 발생한다. 피부조직의 노화에 따른 가장 특징적인 변화는 피부기질(matrix)의 변화로서, 진피층에 있는 섬유아세포(human skin fibroblast)가 노화되어 섬유질과 기질의 생성능력이 줄어들게 된다. 기질의 양이 전반적으로 감소하여 피부의 두께가 얇아지며 피부의 탄력을 저하시켜 주름이 형성된다. 즉, 노화가 진행됨에 따라 피부는 탄력성의 저하, 혈액순환의 장애, 피부 장벽의 약화 등이 심해지게 된다. 이와 함께, 피부가 자외선에 노출되면 피부세포 손상의 주원인인 자유라디칼(free radical)과 활성산소종(reactive oxygen species)이 생성된다. 이들은 DNA의 손상을 유발하고, 세포막구조를 공격하여 노화반점을 발생시키며 피부를 촉촉하고 부드러우며 유연하게 탄력을 유지시키는 교원질과 섬유질을 공격하여 주름생성을 가속화할 수도 있다.

황진기외 9인, 유방암세포에서 광금전초 추출물의 암전이 억제효과, 동의생리병리학회지 제28권 제5호 494-498(2014)

본 발명은 피부노화 방지와 피부 주름 개선을 위해 사용될 수 있는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 광금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지 및 피부주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

그리고, 금앵자 추출물을 유효성분으로 더 포함하되, 광금전초 및 금앵자의 혼합물을 용매추출한 것을 특징으로 하는 피부노화 방지 및 피부주름 개선용 화장료 조성물인 것이 바람직하다.

그리고, 두충엽 추출물을 유효성분으로 더 포함하되, 광금전초 및 두충엽의 혼합물을 용매추출한 것이 바람직하다.

그리고, 본 발명은, 금앵자 및 두충엽 추출물을 유효성분으로 더 포함하되, 광금전초, 금앵자 및 두충엽의 혼합물을 용매추출한 것이 바람직하다.

또한, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물인 것이 바람직하다.

본 발명에서는 광금전초 추출물을 기본으로 하여, 금앵자, 두충엽 추출물을 추가적으로 포함할 수 있다.

광금전초(Desmodii Herba)는 두과 식물인 광금전초(Desmodium styracifolium )의 전초로 약용부위는 지상부이다. 줄기는 원주형이고 길이는 1m정도이다. 황색으로 짧고 부드러운 털로 빽빽하게 덮여있고 질은 약간 빡빡하며 자른 면을 보면 가운데에 수(髓)가 있다. 잎은 호생이고 소엽은 1~3이며 원형~둥근 네모꼴이고 지름 2~4cm이며 앞 끝은 약간 오목하고 기부는 심장형~완만한 원형이다. 위 표면은 황록색~회록색이며 털이 없고 아래 표면은 회백색으로 단단하게 붙어있는 융모가 있다. 맛은 달고 싱거우며 성질은 서늘하다. 성분은 Alkaloid, Flavonoid glycoside 등이고, 비뇨계 감염, 비뇨계 결석, 신염수종, 담낭염, 담결석, 소아감적, 옹종, 황달형간엽에 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 그러나 광금전초의 항산화 효과, 피부질의 개선효과 등에 대하여는 현재까지 알려진 바가 없다. 본 발명은 광금전초의 화장료 조성물로서의 가능성을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

금앵자(Rosa laevigata)는 장미과의 금앵자의 열매를 말한다. 열매로 도란형이며, 길이 2~3.5cm, 지름 1~2cm이다. 바깥 면은 황적색~적갈색이며, 가시가 떨어진 자국은 갈색의 작은 점으로 볼록하게 나와 있다. 위쪽에는 쟁반모양으로 된 꽃받침 자국이 남아 있고, 가운데에는 노란색의 꽃대 자국이 남아 있으며, 아래쪽은 점점 뾰족하다. 질은 단단하다. 잘린 면을 보면 꽃받침은 벽의 두께가 0.1~0.2cm이고, 안에는 단단하면서 작은 수과가 여러 개 들어 있으며, 내막과 수과에는 연한 노란색의 융모가 붙어 있다. 금앵자는 모든 새는 것을 수렴시키는 작용이 강하여 신체가 허약하고 하초가 부실하여 유정, 유뇨, 오줌이 잦은 것, 대하에 쓴다. 또한 이질, 설사, 자궁출혈을 비롯하여 폐가 허하여 기침이 나고 숨이 찬데, 절로 땀이 나거나 식은땀이 나는 데에 쓴다.

두충엽(杜沖葉)은 두충나무의 잎이다. 잎으로 타원형 또는 긴 달걀모양이고 길이 7~10cm, 너비 4~6cm이다. 윗면은 회록색~어두운 녹색이고 털이 없으며 아랫면은 회록색이다. 끝은 뾰족하고 밑부분은 둔하며 가장자리에 톱니가 있고, 잎자루가 있다. 질은 부서지기 쉽고 찢으면 실모양의 고무질이 늘어난다. 특유한 냄새가 난다. 성질은 따뜻하며 맛은 약간 맵다. 간신을 보하고 근골을 강하게 하며 혈압을 내리는 효능이 있다. 허리와 등의 동통, 발과 무릎이 시고 약하며 힘이 없을 때, 고혈압증에 쓴다. 두충엽은 클로로겐산, 카페산, 아우쿠빈, 고무질, 배당체인 로가닌, 플라보노이드, 알칼로이드, 유기산 등을 포함한다고 알려져 있다.

본 발명에서 용어, "추출물(extract)"은 천연물로부터 분리된 활성성분을 의미한다. 추출물은 물, 유기용매, 또는 이의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할 수 있으며, 추출액, 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다. 본 발명에서 광금전초 추출물 등은 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하여 사용할 수 있다. 바람직하게는 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출물인 것이 바람직하며, 특히 에탄올을 사용하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등이 있다. 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 추출액의 농축에는 감압농축, 역삼투압 농축 등의 방법이 사용될 수 있다. 농축 후 건조 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 추가의 분획 공정을 수행할 수 있다.

본 발명의 추출물이 피부노화 방지와 피부주름의 개선효과등이 있는지를 알아보기 위하여, 항산화 효과의 유무, 콜라게나제 발현의 억제효과, 엘라스티아제 활성의 억제효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 각질 형성세포 분화 촉진효과 등을 살펴보았으며, 본 발명의 추출물을 이용한 실제 화장품 제형을 통해 피부탄력, 피부주름개선, 피부보습력의 효과가 있는지 다시 한번 시험하였다. 그 결과 광금전초 추출물은 어느 정도의 우수한 효과를 보여주었으며, 금앵자와의 혼합추출물, 두충엽과의 혼합추출물, 그리고, 광금전초, 금앵자, 두충엽의 혼합추출물은 상승효과를 보여주었다. 각각의 추출물을 혼합하는 형태보다는 각 물질을 혼합하고 이를 함께 용매 추출하는 것이 보다 효과가 뛰어났다. 각각의 물질을 혼합하는 경우, 광금전초 100 중량부를 기준으로, 추가되는 물질을 50 내지 200 중량부를 혼합할 수 있다. 보다 바람직하게는 같은 양의 물질을 혼합하여 추출하는 것이 바람직하였다.

본 발명의 화장료 조성물은 항노화, 피부주름 개선, 피부상태개선의 효과가 뛰어나다.

이하, 실시예 및 시험예 등을 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 이러한 실시예 등은 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 예시의 목적으로 사용된 것이며, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 의해 제한되는 것은 아니다.

<광금전초 추출물의 제조>

서울 약재상에서 구입한 광금전초 3 ㎏을 음지 및 실온에서 5일간 건조하고 분쇄하였다. 상기 분쇄된 광금전초를 95% 에탄올(ethanol) 30 ℓ에 침지시키고 50℃에서 24시간 동안 추출하였다. 이것을 여과지를 통하여 여과한 후 45℃ 감압 조건에서 건조 및 농축하여 총 추출물 390 g을 수득하였다(실시예 1).

<금앵자, 두충엽 추출물의 제조>

서울 약재상에서 구입한 금앵자 3 kg을 사용하여 동일한 방법으로 추출하여, 총 추출물 490g을 수득하였다(실시예 2).

또한, 두충엽 3 kg을 사용하여 동일한 방법으로 추출하여 총 추출물 392 g을 수득하였다(실시예 3).

<혼합물 추출물의 제조>

광금전초 1.5 kg과 금앵자 1.5 kg을 혼합하고, 동일한 방법으로 추출하여 총 추출물 475g을 수득하였다(실시예 4).

광금전초 1.5 kg과 두충엽 1.5 kg을 혼합하고 동일한 방법으로 추출하여 총 추출물 473g을 수득하였다(실시예 5).

광금전초, 금앵자, 두충엽을 각각 1 kg을 사용하여 혼합하고 동일한 방법으로 추출하여 총 추출물 490g을 수득하였다(실시예 6)

<시험예 1> 항산화효과

본 발명의 실시예의 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위하여 자유라디컬 소거활성 실험을 실시하였다. 이는 자유라디컬인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)의 환원에 의해 발생되는 흡광도의 변화를 통해 DPPH 산화 억제 효능을 비교 측정함으로써 항산화능을 평가하는 방법으로 수행하였다. 양성 대조군으로는 널리 사용되고 있는 합성 항산화제인 토롤록스(Trolox)를 사용하였다.

100 μM(in ethanol) DPPH 용액 190 ㎕와 본 발명의 실시예의 추출물들 및 양성 대조군을 각각 10 ㎕씩 넣어 반응액을 만들고 37℃에서 30 분 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

트롤록스의 IC50은 47 ppm을 보여주었으며, 실시예 1의 IC50은 62를 보여주어 트롤록스와 대비할 때에 트롤록스 못지 않은 항산화 효과를 보여주었다. 실시예 2와 실시예 3의 IC50은 각각 107, 113을 보여주었다. 그러나, 실시예 4, 5, 6의 경우 51, 54, 46을 보여주어 혼합 추출물의 경우 매우 우수한 항산화 효과를 보여주었다.

<시험예 2> 콜라게나제 발현 억제효과

상기 실시예의 추출물의 콜라게나제 발현 억제능을 EGCG와 비교하여 측정하였다. EGCG는 항산화 물질로서 피부의 표피세포를 재생시켜 피부의 노화를 방지하는 기능이 있는 것으로 알려져 있다.

2.5% 우레아 혈청이 함유된 DMEM 배지가 들어있는 96-well plate에 인간의 섬유아세포를 well 당 5,000세포가 되도록 넣고 80% 자랄 때까지 배양하였다. 실시예 및 EGCG를 20 ㎍/㎖ 농도로 24시간 동안 처리한 다음 세포 배양액을 채취하였다. 상업적으로 이용가능한 콜라게나아제 측정기구를 이용하여 채취한 세포배약액의 콜라게나아제 생성정도를 측정하였다. 우선 콜라게나제 항체가 균일하게 도포된 96-well plate에 채취된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 그 후, 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-well plate에 넣고 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 발색반응을 중지시시켰다. 색깔은 노란색을 띠게 되며 반응 진행의 정도에 따라 노란생의 정도가 다르게 나타났다. 흡광도를 405 nm에서 측정하였으며, 처리군의 흡광도를 비처리군의 흡광도로 나누어 발현정도를 조사하였다. 콜라게나제의 발현 정도가 낮을수록 콜라게나제의 발현 억제능이 높고 피부내의 콜라겐의 분해가 적게 일어나 피부 탄력 감소가 저해되며 생성되는 주름의 양은 적어지는 것으로 보고 있다.

비처리군의 발현정도를 100으로 보았을 때, EGCG는 75%이었으며, 실시예 1은 69%로서 콜라게나제의 발현을 효과적으로 억제하고 있다. 실시예 2, 3의 경우 저해효과는 그다지 좋지 않았으나, 혼합추출물인 실시예 4, 5, 6은, 66, 67, 60으로서, 상당히 우수하였다.

<시험예 3-엘라스티아제 활성억제효과>

실시예들의 엘라스티아제 활성 저해능을 EGCG와 비교하여 측정하였다. Cannell 등의 방법을 응용하여 실험을 실시하였다(Cannell RJP, Kellan SJ, Owsianks AM, Walker JM. Results of a large scale screen of microalgae for the production of protease inhibitors. Planta Med. 1988;54(1):10-14). 기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 pnitroanilide의 생성량을 445nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 0.5㎖씩 시험관에 취하고, 50mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase(2.5U/㎖)용액 0.5㎖을 가한 후 기질로 50mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide(0.5㎎/㎖)을 첨가하여 20분 간 반응시켜 측정하였다. 엘라스티아제(Elastase) 저해활성은 (1 - 처리군의 흡광도/무처리군의 흡광도)*100 과 같이 하여 구하였다.

무처리군의 저해율을 0%로 보았을 때, EGCG는 21%, 실시예 1은 37%로 EGCG보다 현저히 우수하였다. 혼합추출물인 실시예 4, 5, 6은 48, 43, 54%로 매우 우수한 특성을 보여주었다.

<시험예 4 - 멜라닌 생성 억제 효과>

실시예들의 멜라닌 생성억제 효과를 공지된 미백 물질인 하이드로퀴논과 대비하여 측정하였다. C57BL/6 마우스 유래의 쥐의 색소세포(Mel-Ab cell)(Dooley, T.P. et al, Skin pharmacol, 7, pp 188-200)를 DMEM에 10% 우태반 혈청, 100nM 12-O-테트라데카노일포르볼(tetradecanoylphorbol)-13-아세테이트, 1nM 콜레라독소(cholera toxin)를 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다. 배양된 Mel-Ab 세포를 0.25% 트립신-EDTA로 떼어내고, 24-well plate 100 세포/웰(cells/well)의 농도로 세포를 배양한 다음, 이틀째부터 3일 연속으로 각 시험물질을 가하여 배양하였다. 시험물질로는 하이드로퀴논과 실시예를 10 ㎍/㎖ 농도로 하여 사용하였다. 그 다음 배양액을 제거하고, PBS로 세척한 후, 1N 수산화나트륨으로 세포를 녹여 400nm에서 흡광도를 측정한 다음, (1 - 처리군의 흡광도/무처리군의 흡광도)*100 과 같이 하여 구하였다.

무처리군의 멜라닌생성 억제율을 100으로 하였을 때, 하이드로퀴논의 억제율은 43% 였으며, 실시예 1은 38%를 보여주어 비교적 우수한 효과를 보여주었다. 실시예 2의 경우에도 39%를 보여주어 비교적 우수하였다. 혼합추출물의 경우, 실시예 4는 47%를 보여주어 상승효과가 있는 것으로 보이며, 실시예 6의 경우 56%로 추가적인 상승효과가 있는 것으로 보인다.

<시험예 5 - 각질형성세포 분화 촉진효과>

각질형성세포의 분화 촉진 효과를 알아보기 위해, 하기와 같이 각질형성세포의 분화시 생성되는 CE(Cornified Envelop)양을 흡광도를 이용하여 측정하였다. 먼저, 신생아의 표피로부터 분리해 일차 배양한 사람의 각질형성세포를 배양용 플라스크에 넣어 바닥에 부착시킨 뒤 실시예의 물질을 배양액에 10 ppm 농도로 처리한 후 세포가 바닥 면적의 80% 정도 자랄 때까지 5일간 배양하였다. 이때, 저칼슘(0.03mM) 처리군과 고칼슘(1.2mM) 처리군을 각각 음성 대조군, 양성 대조군으로 하였다. 그 다음 상기 배양한 세포를 수확하여 PBS(Phophate buffered saline)로 세척한 뒤 2%SDS(sodium dodecyl sulfate)와 20mM 농도의 DTT(Dithiothreitol)를 함유한 10mM 농도의 트리스-염산 완충액(Tris-HCl, pH 7.4) 1ml를 가하여 소니케이션(sonication), 보일링(boiling), 원심분리를 하고, 침전물을 다시 PBS 1ml에 현탁시켜 340nm에서의 흡광도를 측정하였다. 이와 별도로 상기 소니케이션 후의 용액을 일부 취하여 단백질 함량을 측정하고, 세포 분화정도 평가시 기준으로 삼았다.

음성대조군을 분화능 100으로 하였을 때, 양성대조군은 205, 실시예 1은 139, 실시예 2는 132, 실시예 3은 148을 보여주었으며, 실시예4, 5, 6은 상승효과가 있어서, 165, 161, 174를 보여주었다. 두충엽이 포함되는 경우 더욱 우수한 각질 형성 세포의 분화 촉진 효과가 있는 것으로 보인다.

상기 결과를 바탕으로, 실시예 1, 실시예 4, 5, 6을 사용하여 크림제형을 만들어 추가적으로 테스트를 하였다.

<제형예>

실시예 1의 추출물 5, 시토스테롤 1.7, 폴리글리세릴 2-올레이트 1.4, 세라마이드 0.6, 세테아레스-4 1.3, 디세틸포스페이트 0.5, 카르릭 트리 글리세라이드 10, 스테아릴 알코올 2, 산탄검 0.5, 향 미량, 트리에탄올 아민 0.2, 정제수 잔량의 조성으로 영양크림을 제조하였다(단위 중량%)(제형예 1).

실시예 4, 5, 6의 추출물을 각각 사용하여 상기 제형예 1과 동일한 방식으로 각각 제형예 2, 3, 4를 제조하였다.

<비교제형예>

제형예 1에서 실시예 1의 추출물을 제외하고 영양크림을 제조하였다(비교제형예).

<시험예 6 - 피부탄력효능>

사람에서의 피부 탄력 향상 효과를 확인하기 위하여 상기 제형예와 비교제형예로 다음과 같이 평가하였다. 40대의 건강한 여성 50명을 각각 10명씩 나누어 제형예와 비교제형에의 영양크림을 나누어 주고 매일 아침, 저녁으로 2회씩 6주간 안면 왼쪽에 도포하게 한 후, 피부탄력 측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co.,Germany)를 이용하여 피부탄력 개선 효과를 측정하였다. 결과값은 피부 점탄성의 성질을 나타낸다.

비교제형의 경우 0.18의 값을 나타내었으며, 제형예 1 내지 4는 각각 0.33, 0.39, 0.41, 0.54의 결과를 보여주었다. 광금전초 추출물을 함유하는 조성물은 피부 탄력 향상에 효과적임을 확인할 수 있었으며, 특히, 광금전초, 금앵자, 두충엽의 혼합추출물은 매우 효과적이었다.

<시험예 7 - 피부주름개선효능>

상기 시험예 6의 대상에 대하여, 추가적으로 본 발명의 조성물에 의한 사람에서의 주름 개선 효과를 평가하였다. 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 피부측정기(visiometer, SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)로 측정하여 화상분석하였다. 6주 후의 변수값에서 도포 전 변수값을 뺀 것의 평균을 구하였다. 주름등고선의 최고치와 최저치의 차이값(R1), 즈름 등고선을 임으로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값들의 평균(R2), 5개씩 나눈 R1값 중 최고치(R3), 주름 등고선의 기선에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값(R4), 주름 등고선의 기선에서 각 각의 주름 윤관을 뺀 값의 평균값(R5)을 구하게 되며, 이 값은 음수가 나올수록 주름개선 효과가 높다는 것을 의미한다.

비교제형예의 경우 양수가 나와 주름개선 효과가 거의 없는 것으로 나타났으며, 제형예들의 경우 모두다 주름개선효과가 있는 것으로 나타났다. 특히 제형예 4의 경우에는 상대적으로 피부 주름개선 효과가 특히 우수한 것으로 나타났다.

<시험예 8 - 피부보습력 효능>

본 발명의 추출물이 피부 보습력 증가에 미치는 효과를 측정하기 위하여, 상기 제형예와 비교제형예의 피부 보습 개선 효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 건조 피부로 분류된 50대 여성 50명을 각각 10명씩 나누어 각각 제형예 1 내지 4 및 비교제형예의 영양크림을 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하게 하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주, 2주, 4주 경과한 시점, 그리고 도포를 중지한 2주 경과(총 6주 경과) 후에 항온, 항습 조건(24℃, 상대습도 40%)에서 피부수분량측정기(Corneometer CM825, C+K Electronic Co., 독일)로 피부수분량을 측정하였다. 시험개시 직전에 측정한 피부 수분량 측정기 값을 기준으로 하여 일정기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 측정하여 살펴보았다.

비교제형예의 경우 도포가 이루어진 4주까지는 약 30% 정도의 수분 증가율을 보이지만, 도포를 중지한 경우 피부수분량이 감소하는 15% 정도로 감소하였다. 실시예의 제형예들은 전반적으로 30%이상의 수분 증가율을 보였으며, 4주 경과시점에서는 약 40% 정도의 수분증가율을 보여주었으며, 도포를 중지한 6주 경과시점에서도 30%이상의 수분증가율을 보여주여 피부보습상태의 개선효과가 지속됨을 확인할 수 있었다. 특히 비교제형예 3, 4의 경우 도포 중지후의 수분증가율의 유지상태가 35% 정도를 보여주었다.

이상의 결과들로부터 본 발명의 추출물은 피부상태의 개선을 통해 피부노화방지, 주름개선, 각질형성세포의 분화촉진, 피부보습력 증가 등의 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (5)

1. 광금전초, 금앵자 및 두충엽을 1 : 1 : 1의 중량비로 혼합하고, 해당 혼합물을 95% 에탄올(ethanol)로 추출한 추출물로 이루어진 화장료 조성물.
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