KR102265798B1 - 코로나 바이러스에 연관된 감염의 치료를 위한 항바이러스 조성물 - Google Patents

코로나 바이러스에 연관된 감염의 치료를 위한 항바이러스 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV (중동 호흡기 증후군 코로나바이러스) 에 의한 감염의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물에 관한 것이다.

Description

코로나 바이러스에 연관된 감염의 치료를 위한 항바이러스 조성물
본 발명은 인간 및 동물에서 MERS-CoV (중동 호흡기 증후군) 코로나 바이러스-관련 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다.
MERS-CoV 코로나바이러스는 중증 급성 호흡기 증후군 및 신부전의 원인인, 사우디 아라비아에서 2012 년에 확인된 신규 출현 바이러스이다. 이의 확인 이래로, 이 바이러스는 주로 중동에서, 26 개국에서 1806 건의 감염 사례를 일으켰다. 이는 세계 보건 기구 (WHO Source, 28 September 2016) 에 따르면 35.6% 의 사망률에 달하는 643 명의 사망을 일으켰다.
MERS-CoV 는 니도비랄레스 (Nidovirales) 목, 코로나비리다에 (Coronaviridae) 계열, 및 베타코로나바이러스 (Betacoronavirus) 속에 속한다.
코로나바이러스는 나선형 대칭을 갖는 캡시드 (capside) 를 갖는, 외피형 바이러스 (enveloped virus) 이다. 이는 단일-가닥 포지티브 센스 RNA 게놈을 가지며, 조류 및 포유류로부터의 세포를 감염시킬 수 있다. 이러한 매우 넓은 계열의 구성원인 바이러스는 감기 (예를 들어, hCoV 및 OC43 바이러스), 세기관지염 (예를 들어, NL63 바이러스) 또는 심지어 유행성 SARS (예컨대 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스, SARS-CoV) 동안 관찰되는 것으로서 여러 폐렴의 일부 형태에 관한 원인 인자인 것으로 공지되어 있다.
비록 이들이 동일한 바이러스 계열에 속하기는 하지만, 상이한 코로나바이러스 사이에는 유전적 및 구조적 수준 모두에 있어서, 또한 항바이러스 분자에 대한 민감성 및 생물학에 관하여서도 유의한 차이가 존재한다 (문헌 Dijkman & van der Hoek 2009; de Wit et al., 2016 참조).
비록 인간에서의 MERS-CoV 의 대부분의 경우가 인간-대-인간 전염에 의한 것이기는 하지만, 낙타는 영구적 MERS-CoV 감염된 중간 동물 숙주이고 이에 따라 인간에서의 주요 감염 동물 소스를 구성하는 것으로 드러났다.
현재까지, 전염병 가능성을 갖는 이러한 유행성 호흡기 바이러스 병원체를 효율적으로 치료하는 것에 대한 예방적 또는 치료적 해결책이 없다.
여러 치료적 경로가 최근에 연구되었다: 리바비린, 인터페론 또는 심지어 마이코페놀산의 사용. 불행하게도, 이러한 화합물 대부분은 감염된 환자에서 사용되었을 때 (Al-Tawfiq 등, 2014) 또는 예방적 치료의 범주 내에서 (de Wit 등, 2014), 충분한 효율을 보이지 않았다.
MERS-CoV 에 대한 활성 화합물을 식별하기 위한 첫 번째 전략은, 수많은 공지된 항바이러스 분자 중에서, SARS-CoV 와 싸우는데 사용된 것을 시험하였다. 따라서, 표적 세포에서 바이러스 복제 억제제, 예컨대 프로테아제 억제제, 헬리카아제 억제제, 및 바이러스 진입 억제제가 시험관내 (in vitro) 에서 시험되었다 (리뷰 Adedeji & Sarafianos, 2014, 및 Kilianski & Baker, 2014 참조).
Dyall 등 (Dyall 등, 2014) 은 SARS 및/또는 MERS-COV 코로나바이러스에 대해 활성인 항바이러스제를 식별하는 목적으로 상이한 카테고리의 약물을 시험하였다. 시험된 상이한 작용제 부류 중에서, 일부 항-염증성 작용제는 SARS-CoV 증식을 억제하는 한편, MERS-CoV 는 오히려 일부 이온 수송 억제제, 튜불린 억제제, 또는 세포자멸사 억제제에 의해 억제된다는 것이 나타났다. 시험된 290 개의 화합물 중에서, MERS-CoV 에 대해 항바이러스 활성을 갖는 오로지 33 개의 화합물이 세포 배양에서 확인되었다.
그러나, 수많은 문헌 데이터는 SARS-CoV 에 대해 유효한 항바이러스 화합물이 MERS-CoV 에 대해 시스템적으로 활성이 아니고, 그 반대로도 마찬가지이며; 이러한 바이러스는 단백질 조성 및 숙주 세포와의 기능적 상호작용 모두에 관하여 차이가 있다는 것을 나타낸다 (Dijkman & van der Hoek 2009; Dyall et al., 2014).
새로운 치료적 분자를 식별하기 위한 대안적 전략은, 바이러스가 표적으로 하는 세포 신호, 생물발생 및 대사 경로에 대한 작용을 갖는 분자를 시험하고/하거나, 이의 복제 사이클을 가지는 이의 이점을 성공적인 결론으로 전환하는 것이다. Josset 등 (Plos One, 2010) 의 논문에서 제시된 이러한 전략은, 특허 출원 FR 2 953 410, FR 3 033 701 및 FR 3 049 861 에 제시된 분자와 같이, 식별되는 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 분자를 이미 가능하게 하였다.
다른 한편으로는, Josset 등은 MERS-CoV 가 이것이 감염시키는 표적 세포의 유전자 발현 프로파일을 유도하고, 이는 SARS-CoV 에 의해 유도된 것과 상당히 상이하다는 사실을 강조하였다. 이러한 연구에 따르면, 글루코코르티코이드 및 키나아제 억제제는 MERS-COV 코로나바이러스에 대한 활성 항바이러스 화합물에 대한 연구에 선호되는 약학적 부류일 수 있다 (Josset 등, 2013).
지금까지, MERS-CoV 바이러스 감염과 싸우기 위해 보건 당국에 의해 인정 및/또는 승인된 치료적 분자는 없거나 거의 없다.
다른 한 편으로는, 시판되고 있는 MERS-CoV 에 대한 백신은 없다. 일부 후보가 현재 임상 시험 1 단계에서 시험되고 있다 (Phase I, Open Label Dose Ranging Safety Study of GLS-5300 in Healthy Volunteers - Full Text View - ClinicalTrials.gov," accessed March 24, 2016, https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02670187?term=MERS+coronavirus&rank=7).
이러한 상황 하에서, MERS-COV 코로나바이러스 감염에 대한 새로운 예방적 및/또는 치료적 해결책이 요구되고 있다.
본 발명의 범주 내에서, 일부 화합물이 바이러스 감염 세포 시험에서 선택 및 시험되었다. 이에 의해, 일부 화합물은 MERS-CoV 코로나바이러스에 대해 예상치 못한 항바이러스 효과를 가졌다.
선택된 화합물은 기타 치료적 용도로 이전에 기재되었다. 놀랍게도, 이러한 화합물은 단독으로 또는 조합으로, MERS-CoV 에 대해 항바이러스 활성을 갖고, 이러한 코로나바이러스에 의한 감염이 치료 및/또는 예방될 수 있게 한다는 것이 이제 밝혀졌다.
본 발명은 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV (중동 호흡기 증후군) 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 아피게닌, 베르베린 및 모넨신, 또는 이러한 화합물 중 둘 이상의 조합으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV (중동 호흡기 증후군) 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물에 관한 것이다.
이러한 약학적 또는 수의학적 조성물은 유리하게는 적어도 또다른 항바이러스제 및/또는 항균제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 또다른 항바이러스제는 아피게닌, 베르베린 및 모넨신과 다른 작용제이다. 또한, 본 발명의 목적을 위해, 항균제는 아피게닌, 베르베린 및 모넨신과 다른 작용제이다.
본 발명의 또다른 목적은 또한 아피게닌, 베르베린 및 모넨신, 또는 이러한 화합물 중 둘의 조합, 또는 이러한 3 개의 화합물의 조합으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물과의 조합으로 적어도 하나의 항바이러스제를 포함하는 약학적 또는 수의학적 조성물에 관한 것이다.
특히, 상기 조성물은 하기로부터 선택되는 적어도 2 개의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함한다:
(a) 항바이러스제; 및
(b) 아피게닌, 베르베린, 및 이 둘의 조합으로부터 선택되는 화합물.
본 발명의 또다른 목적은 또한 베르베린 및 모넨신의 조합을 적합한 약학적 비히클에 포함하는, 약학적 또는 수의학적 조성물이다.
본 발명의 특정 양상에 따르면, 상기 조성물은 흡입에 의한 투여가 의도된 투약 형태이다.
도 1. 감염된 비처리 대조군 세포의 감염 역가 (infectious titre) 에 비한, (모넨신, 베르베린 또는 아피게닌에 의해) 처리된 세포에 대한 감염후 24 시간에서의 MERS-CoV 감염 역가 측정. 감염 역가는 한계 희석 감염 기술 (limit dilution infection technique), 및 리드 및 무네흐 방법 (Reed and Muench method) 에 의한 계산에 의해 얻어졌다.
A) 결과는 log10 TCID/mL (50 % 조직 배양 감염 용량) 로 표현된다.
B) 결과는 TCID/mL 로 표현된다.
도 2. MERS-CoV 코로나바이러스에 의해 감염된 VeroE6 세포에 대한 시험된 화합물 (A- 모넨신, B- 베르베린, C- 아피게닌) 의 IC50 (정규화된 바이러스 생성의 50 % 를 얻는데 필요한 농도) 의 측정. 감염 역가는 한계 희석 감염 기술, 및 리드 및 무네흐 방법에 의한 계산에 의해 얻어졌다.
도 3. MERS-CoV 코로나바이러스에 의해 감염된 A549 인간 호흡기 상피 세포에 대한 시험된 화합물 (A- 모넨신, B- 아피게닌, C- 베르베린) 의 항바이러스 효율의 측정: 감염 역가는 한계 희석 감염 기술, 및 리드 및 무네흐 방법에 의한 계산에 의해 얻어짐. 정규화된 바이러스 생성은 사용되는 화합물의 농도의 함수로서, 세포 생존률에 병행하여 측정된다.
본 발명은 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV (중동 호흡기 증후군) 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 조성물은 특히 MERS-CoV 코로나바이러스 감염을 치료하는데 사용하는 것이 의도된다.
"MERS-CoV 코로나바이러스 감염" 으로써, 이는 인간 또는 동물 유기체가 MERS-CoV 코로나바이러스에 의해 감염되는 세포를 가짐을 의미한다. 감염은 특히 호흡기 샘플로부터 검출 및/또는 바이러스 적정을 수행하거나, 혈액-순환 MERS-CoV-특이적 항체를 검정함으로써 확립될 수 있다. 이러한 특정 바이러스에 의해 감염된 개체에서의 검출은 당업자에 익히 공지된, 특히 분자 생물학의 통상적인 진단 방법 (PCR) 에 의해 이루어진다.
용어 "치료/치료하는" 은 인간 또는 동물 유기체에서 MERS-CoV 코로나바이러스 감염과 싸우는 것을 나타낸다. 본 발명에 따른 적어도 하나의 조성물의 투여에 의해, 유기체에서의 바이러스 감염률 (감염 역가) 은 감소할 것이고, 바람직하게는 바이러스는 유기체로부터 완전히 사라질 것이다. 용어 "치료하는 치료" 는 또한 바이러스 감염과 연관된 증상 (호흡기 증후군, 신부전, 열 등...) 을 약화시키는 것을 나타낸다.
본 발명에 따른 조성물은 또한 MERS-CoV 감염을 예방하는데 사용되는 것이 의도된다.
본 발명의 목적을 위해, 용어 "예방/예방하는" 은 MERS-CoV 에 의한 인간 또는 동물 유기체에서의 감염의 발생의 가능성을 중단 또는 적어도 감소시키는 것을 나타낸다. 본 발명에 따른 적어도 하나의 조성물의 투여에 의해, 상기 유기체의 인간 또는 동물 세포는 감염에 덜 관대해지고, 이에 따라 상기 코로나바이러스에 의해 감염되지 않을 가능성이 더 크다.
본 발명에 따른 조성물은, 인간에게 투여되는 것이 의도된 약학적 유형, 또는 비인간 동물에게 투여되는 것이 의도된 수의학적 유형일 수 있다.
동물과 관련하여, MERS-CoV (중동 호흡기 증후군) 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 수의학적 조성물은 이러한 코로나바이러스에 의해 감염된 동물에게 투여되는 것이 의도됨이 이해된다. 이러한 조성물은 특히 포유류, 특히 상업적 동물, 및 특히 낙타과의 포유류 및 더욱 특히 낙타 (카멜러스 (Camelus) 속) 에 대해 의도된다.
본 발명에 따르면, 용어 "적합한 약학적 비히클" 은 비히클 또는 부형제, 즉 본원에서 고려되는 감염에 대해 특유한 작용을 갖지 않는 화합물을 나타낸다. 이러한 비히클 또는 부형제는 약학적으로 허용가능한데, 이는 이들이 유의한 해로운 효과를 생성하지 않으면서 개체 또는 동물에게 투여될 수 있음을 의미한다.
제 1 양상에 따르면, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물은 적어도 하나의 유효량의 아피게닌을 포함한다.
제 2 양상에 따르면, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물은 적어도 하나의 유효량의 베르베린을 포함한다.
"유효량" 으로써, 이는 본 발명의 목적을 위해 코로나바이러스의 증식 및/또는 복제 및/또는 유기체 내에서의 바이러스 감염의 발생을 억제하는데 충분한 활성 화합물의 양을 의미한다. 이러한 억제는 본 출원의 실시예에서 나타나는 바와 같이 예를 들어 바이러스 역가를 측정함으로써 정량화될 수 있다.
본 발명의 바람직한 양상에 따르면, 상기 언급된 바와 같은 사용을 위한 상기 약학적 또는 수의학적 조성물은 하기 화합물 중 적어도 2 개의 조합을 포함하는 것을 특징으로 한다: 아피게닌, 베르베린 및 모넨신.
상기 약학적 조성물은 특히 하기 조합 중 하나를 포함할 수 있다:
- 아피게닌 및 베르베린;
- 아피게닌 및 모넨신;
- 베르베린 및 모넨신; 또는
- 아피게닌, 베르베린 및 모넨신.
본 발명의 특정 양상에 따르면, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적 조성물은 상기 언급된 바와 같은 화합물의 조합 중 하나, 및 적합화된 약학적 비히클로 이루어질 것이다.
이러한 화합물은 이하 제시되는 바와 같이, MERS-CoV 코로나바이러스에 대한 항바이러스 활성과 크게 관련 없는 기타 치료적 적용에서의 사용에 관해 공지되어 있다.
아피게닌
아피게닌은 파슬리, 질경이, 서양톱풀, 시계꽃 또는 심지어 로즈마리에서 발견되는, 플라본 계열 (플라보노이드) 로부터의 천연 화합물이다.
이의 화학적 구조식은 하기에 도시되어 있다:
Figure 112019050566219-pct00001
이러한 분자는 심지어 이의 작용 방식이 상세하게 공지되어 있지 않은 경우에도, 이의 항염증 특성에 관해 공지되어 있다. 일부 연구는 아피게닌이 시토크롬 P450 을 억제함으로써 작용함을 나타낸다.
아피게닌은 일부 바이러스, 예컨대 HVC (C 형 간염 바이러스) (Shibata 등 2014), 엔테로바이러스 71 (Lv 등 2014) 또는 심지어 감마 헤르페스 바이러스 (WO 2016/013793) 에 대한 이의 효능을 나타냈다.
베르베린
베르베린은 많은 식물에서 발견되는 천연 알칼로이드이다.
이의 화학적 구조식은 하기에 도시되어 있다:
Figure 112019050566219-pct00002
이러한 분자는 이의 항진균, 항균 및 항염증 특성에 관하여, 아시아 약전에서 널리 사용된다.
비록 완전히 밝혀지지는 않았지만, 이의 작용 메카니즘은 실질적으로 AMP 키나아제 (아데노신 모노포스페이트 활성화된 단백질 키나아제) 활성화에 관한 것일 것이다. 이러한 보편적인 효소는 세포 에너지 항상성에서 역할을 한다. AMPK 활성화는 주로 (i) 간 지방산 및 케톤체 생성의 촉진, (ii) 콜레스테롤 합성, 트리글리세리드 지방 생성 및 합성의 억제, (iii) 골격근 및 근육 글루코오스 흡수에서의 지방산 산화의 촉진, 및 (iv) 췌장 베타 세포에 의한 인슐린 분비의 조절을 야기한다.
베르베린은 HSV 바이러스 (Song 등 2014) 및 인플루엔자 바이러스 (Wu 등 2011) 에 대한 항바이러스 활성을 갖는다.
또한, 베르베린은 비록 실험 데이터가 이용가능하지 않더라도, SARS-CoV 에 대한 항바이러스 작용을 가질 수 있다 (http://apps.who.int/medicinedocs/fr/d/Js6170e/ 및 WO 2013/185126).
모넨신
모넨신은 스트렙토마이세스 (Streptomyces) 속으로부터의 박테리아에서 단리된 폴리에테르 항생제이다. 이러한 분자는 콕시디아증 유형 감염을 예방하기 위해, 반추동물 사료 (상표명 Rumensin®) 에서의 첨가제로서 매우 널리 사용된다.
이의 화학적 구조식은 하기에 도시되어 있다:
Figure 112019050566219-pct00003
모넨신은 세포내 교통을 방해함으로써 이오노포어로서 작용할 것이다.
이러한 분자는 높은 농도로 사용될 때 유의한 세포독성을 갖는 것으로 공지되어 있다. 동물에서, LD50 (치사량 50%) 의 매우 유의한 차이가 존재한다. 예를 들어, 말에서, LD50 은 반추동물에서보다 100 배 낮으며, 이는 일부 농장에서 매우 높은 사료 교차 오염 중독 문제를 야기한다.
증가하는 수의 문헌 데이터는 또한 항-말라리아 활성, 뿐만 아니라 여러 바이러스에 대한: 인플루엔자 바이러스에 대한 (FR 3 033 701 및 FR 3 049 861), 더욱 특히 외피형 바이러스, 예컨대 코로나바이러스 계열의 구성원인 일부 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 나타낸다.
특허 출원 US 2009/0149545 은 코로나바이러스 감염에 대한 그 치료적 작용에 관하여 많은 화합물, 특히 모넨신을 언급한다.
코로나바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 화합물에 대한 연구와 관련하여 특허 출원 WO 2015/157223 은, 모넨신이 MERS-CoV 에 대항해 사용될 수 있음을 보고하나, 이러한 결론을 이끌어낼 수 있는 실험적 결과는 없다.
항바이러스제
본 발명의 목적을 위해, 용어 "항바이러스제" 또는 "항바이러스 화합물" 로써, 이는 감염된 유기체 내에서, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 복제 및/또는 전파를 직접적 또는 간접적으로 억제함으로써, 바이러스 부하 (load) (또한 감염 역가로 칭함) 에 대해 작용하는 활성제를 의미한다.
"항바이러스 활성" 또는 "항바이러스 작용" 으로써, 이는 바이러스 또는 이의 표적 세포에 대한 작용, 특히 바이러스의 복제 사이클 또는 숙주 세포에서 감염되고 복제되는 이의 능력을 억제하는 작용을 의미하고, 여기서 이러한 항바이러스 효과는 표적 세포의 유전자의 수를 조절함으로써 얻어질 수 있다.
"표적 세포" 로써, 이는 코로나바이러스로 감염된 및/또는 감염된 세포와의 근접성으로 인해 가까운 미래에 감염될 수 있는 세포를 의미한다.
또다른 활성제와의 조합
본 발명에 따른 사용을 위한 조성물은 아피게닌 및/또는 베르베린을 포함하고, 이는 또한 적합한 약학적 비히클 이외에 다른 활성 화합물을 포함할 수 있음이 이해된다.
실제로, 아피게닌, 베르베린 및 모넨신, 또는 이의 혼합물은, 치료에서 단독으로, 또는 적어도 또다른 활성제와의 조합으로 사용될 수 있다.
이는 이러한 화합물의 활성을 개선될 수 있게 하는 화합물, 또는 심지어 특정 활성으로 공지된 기타 활성제일 수 있다.
이러한 추가 활성 화합물은, 출원 WO 2015/157223 에 언급된 작용제의 약학적 부류, 즉 항균제, 항기생충제, 신경전달 억제제, 에스트로겐 수용체 억제제, DNA 합성 및 복제 억제제, 단백질 성숙 억제제, 키나아제 경로 억제제, 세포골격 억제제, 지질 대사 억제제, 항염증제, 이온 채널 억제제, 세포자멸사 억제제 및 카텝신 억제제로부터 선택될 수 있다.
이러한 활성 화합물은 특히 항균제, 이온 채널 억제제, 면역 억제제 및 항바이러스제로부터 선택될 수 있다. 항바이러스제로서, 아시클로비르가 특히 언급될 수 있다.
본 발명의 특정 양상에 따르면, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물은, 아피게닌 및/또는 베르베린 이외에, 적어도 또다른 항바이러스제를 포함한다.
본 발명의 또다른 특정 양상에 따르면, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 또는 수의학적 조성물은, 아피게닌, 베르베린 및 모넨신으로부터 선택되는 적어도 2 개의 화합물의 조합 이외에, 적어도 또다른 항바이러스제를 포함한다.
이러한 항바이러스제는 항바이러스 작용을 갖는데 필요한 투약량으로 사용될 것이며, 이러한 투약량은 "유효" 한 것으로 나타내어지고, 이러한 투약량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있음이 이해된다.
본 발명의 목적을 위해, 항바이러스제는 관련된 바이러스 감염의 억제 및/또는 감속 및/또는 예방에 의하여, 바이러스에 작용하는 화합물을 나타낸다.
항바이러스제는 이의 작용 방식에 따라 상이한 카테고리로 분류된다. 이는 특히 하기를 포함한다:
- DNA 또는 RNA 합성을 방해 또는 중단시키는 뉴클레오티드 유사체; 및 DNA 또는 RNA 합성에 관여하는 효소의 억제제 (헬리카아제, 레플리카아제);
- 이의 복제 사이클 동안 바이러스 성숙 단계를 억제하는 화합물;
- 세포막 결합 또는 숙주 세포에서의 바이러스 진입을 방해하는 화합물 (융합 또는 진입 억제제);
- 바이러스가 이의 진입 이후 숙주 세포 내에서 발현되는 것을, 세포 내에서의 이의 분해를 차단함으로써, 방지하는 작용제;
- 다른 세포로의 바이러스 전파를 제한하는 작용제.
표적 세포에서의 프로테아제 억제제, 헬리카아제 억제제 및 MERS-CoV 바이러스 세포 진입 억제제와 같은 RNA 바이러스와 싸우도록 의도된, 당업자에 익히 공지된 항바이러스제가 특히 언급될 수 있다.
당업자에 익히 공지된 항바이러스제 중에서, 더욱 정확하게는 리바비린, 넓은 항바이러스 스펙트럼을 갖는 구아노신 뉴클레오시드 유사체; 및 숙주 세포에서 바이러스 복제를 억제함으로써 작용하는 인터페론이 언급될 수 있다.
본 발명의 특정 양상에 따르면, 약학적 또는 수의학적 조성물은 다른 항바이러스제가 하기 화합물: 리바비린, 인터페론 또는 이들 둘 모두의 조합으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 목적을 위해, "한 인터페론" 또는 "인터페론" 으로써, 이는 면역 시스템의 세포에 의해 분비되는, 당단백질인 인터페론 계열에 속하는 화합물을 의미한다.
인터페론은 약 15 000 내지 21 000 달톤의 분자량을 갖는 작은 단백질 분자의 계열이다. 하기 3 개의 주요 인터페론 부류가 식별되었다: 알파, 베타 및 감마. 이러한 3 개의 주요 부류는 그 자체가 상동하지는 않으며, 여러 상이한 인터페론 분자 종을 모을 수 있다. 14 개 초과의 유전적으로 상이한 인간 알파 인터페론이 식별되었다.
본 발명에 따른 약학적 또는 수의학적 조성물에서, 사용되는 인터페론은 실험실에서 합성되는 재조합 폴리펩티드일 것임이 이해된다.
특히, 사용되는 인터페론은, 생체내 (in vivo) 및 시험관내 (in vitro) 바이러스 복제에 대한 효율이 입증된 재조합 인터페론 알파-2b 일 것이다.
상기 항바이러스제는 시판되고, 이의 사용 조건은 [Le Dictionnaire Vidal] 과 같은 참고 서적에 기재되어 있다.
따라서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적 조성물은 하기 조합 중 하나를 포함할 수 있다:
- 아피게닌, 베르베린 및 리바비린;
- 아피게닌, 베르베린 및 인터페론;
- 아피게닌, 베르베린, 인터페론 및 리바비린;
- 아피게닌, 모넨신 및 리바비린;
- 아피게닌, 모넨신 및 인터페론;
- 아피게닌, 모넨신, 인터페론 및 리바비린;
- 베르베린, 모넨신 및 리바비린;
- 베르베린, 모넨신 및 인터페론;
- 베르베린, 모넨신, 인터페론 및 리바비린;
- 아피게닌, 베르베린, 모넨신 및 리바비린;
- 아피게닌, 베르베린, 모넨신 및 인터페론;
- 아피게닌, 베르베린, 모넨신, 인터페론 및 리바비린.
본 발명의 특정 양상에 따르면, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적 조성물은 상기 언급된 바와 같은 활성제의 조합, 및 적합화된 약학적 비히클로 이루어질 것이다.
약학적 또는 수의학적 조성물의 투여 방식
본 발명에 따른 사용을 위한 약학적 또는 수의학적 조성물은, 경구, 설하, 흡입, 피하, 근육내, 정맥내, 경피, 안구 또는 직장 투여에 적합화된다.
본 발명의 특정 실행에 따르면, 본 발명에 따른 사용을 위한 약학적 또는 수의학적 조성물은 흡입에 의한 투여가 의도된 투약 형태인 것을 특징으로 한다.
흡입은 기도에 의한 흡수를 나타낸다. 이는 특히 가스, 마이크로-액적 또는 현탁 분말로서의 일부 물질의, 치료 목적을 위한 화합물의 흡수 방법이다.
흡입 (즉 비강 및/또는 경구 기도에 의함) 에 의한 약학적 또는 수의학적 조성물의 투여는 당업자에 익히 공지되어 있다.
흡입에 의한 투여의 하기 두 가지 유형이 구별된다:
● 조성물이 분말의 형태일 때 흡입제 (insufflation) 에 의한 투여, 및
● 조성물이 에어로졸의 형태 (현탁액) 또는 용액의 형태, 예를 들어 가압 수용액인 경우, 분무 (nebulisation) 에 의한 투여. 분무기 (nebuliser) 또는 분사기 (sprayer) 의 사용은 이에 따라 약학적 또는 수의학적 조성물의 투여기로 추천될 것이다.
따라서 본원에서 고려되는 투약 형태는 하기로부터 선택된다: 분말, 액적의 수용액 또는 가압 용액.
조합 생성물
본 발명은 또한 인간 또는 동물에서, MERS-CoV 코로나바이러스 감염을 예방 및/또는 치료하기 위한 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한, 하기를 포함하는 조합 생성물에 관한 것이다:
- 임의로는 모넨신의 존재 하에, 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 포함하는 본 발명에 따른 조성물, 및
- 적어도 하나의 항바이러스제.
상기 조합 생성물은, 동시, 개별 또는 순차적 사용의 범주 내에서, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다. 따라서, 조합 생성물에 포함된 적어도 2 개의 활성제는 동시, 개별 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
앞에서 언급된 2, 3 또는 4 개의 활성 화합물의 모든 조합은 각각 조합 생성물의 형태일 수 있는데, 즉 2, 3 또는 4 개의 활성 화합물은 동시, 개별 또는 순차적으로 투여되어, MERS-CoV 코로나바이러스 감염을 예방 및/또는 치료할 수 있다.
본 발명은 또한 아피게닌 및 베르베린, 또는 이 둘 모두의 혼합물로부터 선택되는 화합물의 유효량이 임의로는 모넨신과 공동으로 환자에게 투여되는, 인간에서의 MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료를 위한 치료적 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 화합물의 유효량이 임의로는 모넨신과 공동으로 동물에게 투여되는, 동물에서의 MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료를 위한 치료적 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물의 제조를 위한, 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 화합물의, 임의로는 모넨신과 공동으로의 사용에 관한 것이다.
약학적 또는 수의학적 조성물
본 발명은 또한 하기로부터 선택되는 적어도 2 개의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함하는, 약학적 또는 수의학적 조성물에 관한 것이다:
(a) 항바이러스제; 및
(b) 아피게닌, 베르베린, 및 이 둘의 조합으로부터 선택되는 화합물.
특히, 항바이러스제는 MERS 코로나바이러스 감염과 싸우는 것이 의도된다.
바이러스 작용제는 특히 하기로부터 선택될 수 있다:
- DNA 또는 RNA 합성을 방해 또는 중단시키는 뉴클레오티드 유사체; 및 DNA 또는 RNA 합성에 관여하는 효소의 억제제 (헬리카아제, 레플리카아제);
- 이의 복제 사이클 동안 바이러스 성숙 단계를 억제하는 화합물;
- 세포막 결합 또는 숙주 세포에서의 바이러스 진입을 방해하는 화합물 (융합 또는 진입 억제제);
- 바이러스가 이의 진입 이후 숙주 세포 내에서 발현되는 것을, 세포 내에서의 이의 분해를 차단함으로써, 방지하는 작용제;
- 다른 세포로의 바이러스 전파를 제한하는 작용제.
표적 세포에서의 프로테아제 억제제, 헬리카아제 억제제 및 바이러스 세포 진입 억제제와 같은 RNA 바이러스와 싸우는 것이 의도된, 당업자에 익히 공지된 항바이러스제가 특히 언급될 수 있다.
당업자에 익히 공지된 항바이러스제 중에서, 더욱 정확하게는 리바비린, 넓은 항바이러스 스펙트럼을 갖는 구아노신 뉴클레오시드 유사체; 및 숙주 세포에서 바이러스 복제를 억제함으로써 작용하는 인터페론이 언급될 수 있다.
본 발명의 특정 양상에 따르면, 조성물은 항바이러스제로서 인터페론, 리바비린, 또는 이 둘 모두의 조합을 함유한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 또한 모넨신을 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 하기 조합 중 하나를 포함할 수 있다:
- 아피게닌 및 리바비린;
- 아피게닌 및 인터페론;
- 아피게닌, 인터페론 및 리바비린;
- 베르베린 및 리바비린;
- 베르베린 및 인터페론;
- 베르베린, 인터페론 및 리바비린;
- 아피게닌, 베르베린 및 리바비린;
- 아피게닌, 베르베린 및 인터페론;
- 아피게닌, 베르베린, 인터페론 및 리바비린;
- 아피게닌, 모넨신 및 리바비린;
- 아피게닌, 모넨신 및 인터페론;
- 아피게닌, 모넨신, 인터페론 및 리바비린;
- 베르베린, 모넨신 및 리바비린;
- 베르베린, 모넨신 및 인터페론;
- 베르베린, 모넨신, 인터페론 및 리바비린;
- 아피게닌, 베르베린, 모넨신 및 리바비린;
- 아피게닌, 베르베린, 모넨신 및 인터페론;
- 아피게닌, 베르베린, 모넨신, 인터페론 및 리바비린.
본 발명의 특정 양상에 따르면, 본 발명에 따른 약학적 또는 수의학적 조성물은 상기 언급된 바와 같은 활성제의 조합, 및 적합화된 약학적 비히클로 이루어질 것이다.
더욱 특히, 본 발명에 따른 약학적 또는 수의학적 조성물은, 인터페론, 모넨신, 아피게닌 및 베르베린의 적어도 하나의 조합을 적합한 약학적 비히클에 포함할 것이다.
상기 조성물은 임의의 유형의 치료적 또는 예방적 용도로 사용될 수 있고, 특히 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용될 것이다.
본 발명에 따른 조성물은, 인간에게 투여되는 것이 의도된 약학적 유형, 또는 비인간 동물에게 투여되는 것이 의도된 수의학적 유형일 수 있다.
동물과 관련하여, 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 특히 포유류, 특히 상업적 동물, 특히 낙타과의 포유류 및 더욱 특히 낙타 (카멜러스 속) 에 대해 의도된다.
그러나, 모넨신은 말 (에쿠스 (Equus) 속) 에서 강한 독성을 갖고, 모넨신을 포함하는 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 에쿠스 속에 속하는 포유류에 대한 투여가 의도되지 않음에 유의해야 한다.
상기 조성물은 특히 코로나바이러스 감염, 더욱 특히 MERS-CoV 코로나바이러스에 의한 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용될 수 있다.
본 발명의 특정 실행에 따르면, 상기 조성물은 흡입에 의한 투여가 의도된 투약 형태일 수 있다.
베르베린 및 모넨신 조합
본 발명은 또한 베르베린 및 모넨신의 조합을 적합한 약학적 비히클에 포함하는, 약학적 또는 수의학적 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 임의의 유형의 치료적 또는 예방적 용도로 사용될 수 있고, 특히 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용될 것이다.
베르베린 및 모넨신의 조합을 포함하는 상기 조성물은, 특히 코로나바이러스 감염, 더욱 특히 MERS-CoV 코로나바이러스에 의한 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용될 수 있다.
본 발명의 특정 실행에 따르면, 이러한 조성물은 흡입에 의한 투여가 의도된 투약 형태일 수 있다.
실시예
이하 제시되는 실시예는 상기 언급된 화합물이 예상치 못하게도, 중등도 세포독성 조건 하에서, 2 개의 별개의 포유류 세포 모델에 있어서 시험관내에서, MERS-CoV 에 대해 유의한 항바이러스 활성을 가짐을 입증한다.
먼저, 화합물은 MERS-CoV 균주 France-UAE/1612/2013, Genbank 등록 번호 KF745068 에 의한 VERO-E6 세포의 감염의 맥락에서, 문헌에서 통상 사용되는 농도로, 시험관내에서 시험되었다.
VERO-E6 세포는 원숭이 신장 상피 세포로부터 유래하고, MERS-CoV 감염에 민감하다. 이는 문헌에서 널리 사용된 연구 세포 모델 중 하나를 구성한다.
감염 매개변수는 가능한 항바이러스 효과를 관찰하기 위한 최상의 조건을 얻기 위하여 사전에 결정되었다.
VERO-E6 세포는 시험된 화합물의 존재 또는 부재 하에, 5% CO2 하에 37 ℃ 에서 24 h 의 기간 동안 0.5 의 MOI (감염의 다중도) 에서 감염되었다.
24 h 인큐베이션 이후, 감염 역가 (log10 DITC50/mL 또는 DITC50/mL) 는 감염된 세포의 배양 상청액에서 측정된다.
감염 역가는 도 1A (log10 TCID50/mL) 및 도 1B (TCID50/mL) 에서 TCID50/mL (50% 조직 배양 감염 용량) 로 나타내어진다. 이는 한계 희석 감염 기술, 및 리드 및 무네흐 방법에 의한 계산에 의해 얻어졌다.
세포독성 시험 및 코로나바이러스 정량화 시험이 24 h 인큐베이션 이후 이루어진다. 상이한 화합물의 세포독성은 생존력 시험 (MTS 시험, Promega) 에 의한 비감염 세포의 플레이트에 대해 각각의 시험에서 측정된다. 이러한 시험은 세포의 대사 활성의 측정을 기반으로 하며, 이는 기질 (MTS 테트라졸륨) 을 매질에 가용성인 생성물 (포르마잔 (Formazan)) 로 변형시키며, 이의 490 nm 에서 측정된 흡광도는 생 세포의 수를 비례하여 반영한다. 대조군 세포 (화합물에 의해 처리되지 않음) 의 웰의 평균 흡광도에 대한 각각의 웰에서의 흡광도의 비율이 계산되고, 세포 생존률 지수 (상대적 세포 생존률) 로서 도식에 나타내어진다.
시험관내 바이러스 생성에 대한 효과는, VERO-E6 세포에서 생성된 감염 역가 (TCID50/mL) 를 측정함으로써 측정되고, 역가는 리드 및 무네흐 기술에 따라 계산된다. 각각의 조건 하의 감염 역가의 비율은 대조군 조건 (처리 없음) 하에 측정된 감염 역가의 함수로서 표현되었다.
결과를 도 1A (log10 TCID50/mL 로 표현된 감염 역가) 및 1B (TCID50/mL 로 표현된 역가) 에 제시한다.
시험된 화합물의 존재 하에 실험 조건 하에서 측정된 감염 역가는, 세포가 감염되지만 처리되지 않은 대조군 조건에 비하여 강하게 감소된다.
실제로, 모넨신 (6μM), 베르베린 (12.5μM) 및 아피게닌 (15μM) 은 대조군에 비해 각각 감염 역가의 97.8%, 78.4% 및 97.8% 감소를 허용한다 (도 1 참조).
이러한 결과로부터, 유효한 농도 범위를 측정하기 위해, 더 넓은 농도 범위가 동일한 실험 조건 하에 VeroE6 세포에서 3 개의 화합물 각각에 대하여 시험되었고, 이에 따라 IC50 (최대 억제 농도의 절반), 즉 50 % 바이러스 생성 억제를 얻는데 필요한 투약량을 결정한다 (도 2 참조).
하기와 같이 이러한 3 개의 화합물에 대해 IC50 값을 측정할 수 있었다:
- 모넨신의 경우 1.25μM,
- 베르베린의 경우 3.8μM, 및
- 아피게닌의 경우 1.7μM.
이러한 IC50 값은 감염 분야 밖에서의 이의 적용에서 이러한 화합물에 관해 공지된 통상적인 농도에 비해 비교적 낮다. 이러한 값은 또한 세포독성 농도와 매우 거리가 멀다 (CC50).
유사한 효율 결과가 또한 인간 호흡기 상피 세포주 A549 의 것인, 또다른 프리미엄 세포 모델에서 이러한 3 개의 화합물에 대해 얻어졌다 (도 3).
참고문헌
특허
FR 2 953 410
FR 3 033 701
FR 3 049 861
WO 2016/013793
WO 2013/185126
US 2009/0149545
WO 2015/157223
비특허
Figure 112019050566219-pct00004
Figure 112019050566219-pct00005

Claims (12)

  1. 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV (중동 호흡기 증후군) 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 하기 화합물: 아피게닌, 베르베린 및 모넨신 중 적어도 둘의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서, 리바비린, 인터페론 또는 이들 둘 모두의 조합으로부터 선택되는 적어도 또다른 항바이러스제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 흡입에 의한 투여가 의도된 투약 형태인 것을 특징으로 하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물.
  5. 제 2 항에 있어서, 베르베린 및 모넨신의 조합을 적합한 약학적 비히클에 포함하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물.
  6. 제 3 항에 있어서, 모넨신, 아피게닌 및 베르베린 중 적어도 둘의 조합 및 인터페론을 적합한 약학적 비히클에 포함하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물.
  7. 제 5 항 또는 제 6 항에 있어서, 흡입에 의한 투여가 의도된 투약 형태인 것을 특징으로 하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물.
  8. 아피게닌 및 베르베린으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 적합한 약학적 비히클에 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV (중동 호흡기 증후군) 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 수의학적 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서, 하기 화합물: 아피게닌, 베르베린 및 모넨신 중 적어도 둘의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 수의학적 조성물.
  10. 제 9 항에 있어서, 리바비린, 인터페론 또는 이들 둘 모두의 조합으로부터 선택되는 적어도 또다른 항바이러스제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 수의학적 조성물.
  11. 제 9 항에 있어서, 베르베린 및 모넨신의 조합을 적합한 약학적 비히클에 포함하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 수의학적 조성물.
  12. 제 10 항에 있어서, 모넨신, 아피게닌 및 베르베린 중 적어도 둘의 조합 및 인터페론을 적합한 약학적 비히클에 포함하는, MERS-CoV 코로나바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 수의학적 조성물.
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