KR102244710B1

KR102244710B1 - 식물을 원료로 포함하는 겔의 용도

Info

Publication number: KR102244710B1
Application number: KR1020190069648A
Authority: KR
Inventors: 조정웅; 김병국; 이소헌; 김예향; 차소윤; 박혜림; 고정남; 신송석
Original assignee: 주식회사 현대바이오랜드
Priority date: 2019-06-12
Filing date: 2019-06-12
Publication date: 2021-04-23
Also published as: KR20200142397A

Abstract

본 발명은 식물을 원료로 포함하는 겔의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 식물겔은 종래의 식물추출물 조성물과 같이 식물종류에 따른 개별적인 추출 및 분획 공정 없이도, 다양한 식물 종류에 대해서 일괄적으로 동일한 공정을 통하여 식물 분말을 원료로 사용하는 겔상의 조성물을 제조할 수 있다는 점에서 공정상의 효율성이 뛰어나며, 각 식물겔의 원료성분에 따라 피부보습효과, 피부장벽 강화효과, 피부노화 방지 효과, 자외선 보호효과, 및 미백효과 등 다양한 화장료로서의 유용성을 가지는 바, 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

식물을 원료로 포함하는 겔의 용도{Use of Gel Comprising Plant As Raw Material}

본 발명은 식물을 원료로 포함하는 겔의 용도에 관한 것이다.

종래로부터 천연물, 특히 식물을 원료로 한 식품 및 미용 용도를 포함하는 다양한 용도의 조성물이 개발되어 왔다. 식물을 원료로 한 조성물의 경우, 식물 원료를 분쇄한 식물 분말을 구성성분으로 포함하거나, 또는 식물로부터 유효성분을 추출한 추출물을 구성성분으로 포함하여 제조되었다. 그러나, 식물의 분말 자체를 화장료 조성물의 구성성분으로 사용하는 경우에는 조성물의 용액 중의 식물 분말의 분산성이 낮아, 용액 중에서 침전되거나 용매와 분말이 서로 분리되는 층분리 현상이 쉽게 일어났다. 한편, 식물추출물을 조성물의 유효성분으로 포함하는 경우에는 유효성분을 추출하는 추출공정이 복잡하고 고가의 설비 및 비용이 들어 경제적이지 않으며, 식물의 종류마다 유효성분의 성질이 서로 다르기 때문에 구비한 추출설비 및 추출공정을 다양한 식물에 적용할 수 없다는 문제가 있었다. 따라서, 식물을 원료로 한 조성물의 제조방법에 있어서 추출공정을 거치지 않으면서, 다양한 식물에도 적용이 가능한 식물 분말에 대한 용액 내 분산성 개선 방안이 절실히 필요한 실정이다.

대한민국 등록특허 제10-0854691호

Kim et al., J Ginseng Res 44 (2020) 115e122 (2018.10.06. 온라인 게재)

본 발명자들은 상술한 문제를 해결하기 위하여 미세분쇄한 각종 식물의 분말에 산화 공정을 도입하면 별도의 분산제 또는 안정화제를 첨가하지 않고도 분산안정성 및 사용감이 우수한 겔상의 조성물의 제조방법을 개발하였고, 나아가 이러한 식물성 겔에 피부보습효과, 노화방지효과 및 미백효과 등 화장료로서의 효능 또한 우수함을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 목적은 산화된 미세분쇄(pulverized) 식물 분말 및 잔량의 용매를 포함하는 식물겔 화장료 조성물 및 이들의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 산화된 미세분쇄(pulverized) 식물 분말 및 잔량의 용매를 포함하는 식물겔 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서 "식물"은 육상식물 또는 해양식물일 수 있다. 상기 육상식물은 육지에서 자생하는 식물을 의미하고, 상기 해양식물은 바다의 수중, 또는 바다의 토양에서 자생하는 식물을 의미한다.

본 발명에서 상기 육상식물 또는 해양식물은 사용하고자 하는 부위에 따라 지상부 식물, 지하부 식물, 및 전초 식물로 나눌 수 있으나, 같은 종류의 식물이라도 사용목적에 따라 용도가 상이한 바, 반드시 명확하게 구별되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 지상부 식물은 식물의 줄기, 잎, 꽃, 열매, 열매 또는 씨앗의 피(박) 등을 사용하는 식물을 의미한다. 그러나, 상기 식물의 줄기, 잎, 꽃, 열매, 열매 또는 씨앗의 피(박)에만 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 지하부 식물은 식물의 뿌리나, 지하에서 자라는 줄기 등을 사용하는 식물을 의미한다.

본 발명에서 상기 전초 식물은 식물의 지상부와 지하부를 모두 사용하는 식물을 의미한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 미세분쇄 식물 분말은 미세분쇄된 육상식물의 분말이다.

본 발명의 다른 일 구현예에 있어서, 상기 조성물의 산화된 미분쇄 식물 분말은 식물겔 화장료 조성물 전체 총 중량을 기준으로 0.1-30%(w/v)의 농도로 포함될 수 있다.

본 발명자들은 각 육상식물/해양식물의 사용하고자 하는 부위 별로 식물겔을 제조한 결과, 각 육상식물의 부위마다 겔이 잘 형성되는 산화 미분쇄 식물 분말의 농도가 상이함을 알게 되었다. 예를 들면, 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)의 경우 조성물 전체 총 중량을 기준으로 1-25%(w/v)의 산화된 미분쇄 식물 분말을 포함하여야 겔이 형성되고, 육상식물의 잎, 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)의 경우 조성물 전체 총 중량을 기준으로 상기 전초, 뿌리, 줄기인 경우보다 더 높은 농도인 5-30%(w/v)의 산화된 미분쇄 식물 분말을 포함하여야 겔이 잘 형성되며, 해양식물의 경우에는 이보다 낮은 1-20%(w/v)의 농도로 산화된 미분쇄 식물 분말을 포함하여야 겔이 잘 형성되었다.

따라서, 본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 육상식물은 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)이고, 이때 상기 조성물은 조성물 전체 총중량을 기준으로 1-25%(w/v)의 산화된 미분쇄 식물 분말을 포함한다.

상기 조성물이 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)의 산화된 미분쇄(pulverized) 식물 분말을 포함하는 경우에는, 조성물 전체 총 중량을 기준으로 1-25, 1-20, 1-15, 1-10, 3-25, 3-20, 3-15, 3-10, 5-25, 5-20, 5-15, 5-10, 10-25, 10-20, 10-15, 15-25, 15-20%(w/v)의 산화된 미분쇄 식물 분말을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 단, 본 발명의 조성물이 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)의 산화된 미분쇄(pulverized) 식물 분말을 포함하는 경우에는 적어도 1%(w/v) 이상의 농도로 식물 분말이 포함되어야 겔 형성이 잘 되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 식물 분말이 25%(w/v)를 초과하는 경우에는 너무 농도가 높아 사용감이 좋지 않았다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 전초, 뿌리, 또는 이들의 피(박)은 홍삼, 인삼, 홍경천, 당귀, 황기, 백출, 우슬, 당삼, 산양삼, 더덕, 잔대, 도라지, 삽주, 칡, 백하수오, 마, 둥굴레, 토복령, 천궁, 감초, 작약, 지황, 및 이들의 피(박)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 육상식물은 익모초, 삼지구엽초, 구절초, 꿀풀, 애기똥풀 등은 전초 식물로, 주로 식물의 잎과 줄기가 사용되나, 잎과 줄기, 뿌리와 꽃, 열매까지 모두 포함하여 사용될 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 줄기 또는 이의 피(박)은 철피석곡, 미화석곡, 유채, 담쟁이덩굴, 사탕수수, 계피나무, 황벽나무, 닥나무, 대나무, 병풀, 및 이들의 피(박)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 병풀, 양지꽃, 엉겅퀴, 왕고들빼기 등은 지상부 식물로 주로 줄기와 잎이 모두 사용되나, 상술한 바와 같이 줄기만 사용되거나, 후술될 바와 같이 잎만 사용될 수도 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)은 홍삼, 인삼, 병풀, 및 이들의 피(박)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 조성물은 피부보습용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 홍감겔, 인삼겔, 병풀겔은 피부 표피내 보습과 관련된 인자들의 발현을 증가시키므로 피부보습용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)은 인삼, 홍삼, 병풀, 및 이들의 피(박)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 조성물은 피부장벽 강화용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 홍삼겔, 병풀겔은 피부장벽 강화와 관련된 인자들의 발현을 증가시키므로 피부장벽 강화용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)은 홍삼, 인삼, 유채, 병풀, 철피석곡, 및 이들의 피(박)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 조성물은 피부노화 방지용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 홍삼겔, 인삼겔, 유채겔, 병풀겔, 철피석곡겔은 피부주름과 관련된 유전자의 발현량을 감소시키고, 피부탄력과 관련된 유전자의 발현량을 증가시키므로 피부노화 방지용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)은 인삼, 병풀, 및 이들의 피(박)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 조성물은 자외선 보호용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 인삼겔, 병풀겔은 자외선(UVA 및 UVB) 조사 후 피부주름과 관련된 유전자의 발현량 감소, 세포기능의 향상 및 세포재생 효과가 우수하므로, 자외선 보호용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 전초, 뿌리, 줄기, 또는 이들의 피(박)은 철피석곡이고, 상기 조성물은 피부미백용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 철피석곡겔은 멜라닌 생성과 관련된 유전자의 발현을 감소시키므로, 피부미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 육상식물은 육상식물의 잎, 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)이고, 이때 상기 조성물은 조성물 전체 총중량을 기준으로 5-30%(w/v)의 산화된 미분쇄 식물 분말을 포함한다.

상기 조성물이 육상식물의 잎, 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)의 산화된 미분쇄(pulverized) 식물 분말을 포함하는 경우에는, 조성물 전체 총 중량을 기준으로 5-30, 5-25, 5-20, 5-15, 5-10, 10-30, 10-25, 10-20, 10-15, 15-30, 15-25, 15-20, 20-30, 25-30%(w/v)의 산화된 미분쇄 식물 분말을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 단, 본 발명의 조성물이 육상식물의 잎, 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)의 산화된 미분쇄(pulverized) 식물 분말을 포함하는 경우에는 적어도 5%(w/v) 이상의 농도로 식물 분말이 포함되어야 겔 형성이 잘 되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 식물 분말이 30%(w/v)를 초과하는 경우에는 너무 농도가 높아 사용감이 좋지 않았다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 잎은 동백잎, 녹차잎, 뽕나무잎, 및 박하잎으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)은 제주푸른콩, 장단콩, 강낭콩, 작두콩, 렌틸콩, 완두콩, 서리태, 서목태, 동부콩, 땅콩, 녹두, 병아리콩, 팥 등의 콩과 식물의 콩, 석류, 오미자, 구기자, 산수유, 다래, 머루, 대추, 살구, 감귤, 비파열매, 오가피 열매, 으름, 돌배, 모과, 복분자, 산딸기 및 이들의 피(박)로 이루어진 군으로부터 선택된 것이나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 열매는 상술한 피 뿐만 아니라 과육 또한 포함한다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 상기 육상식물의 잎, 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)은 동백잎, 녹차잎, 또는 이들의 조합이고, 상기 조성물은 피부보습용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 동백잎겔, 녹차잎겔은 피부 표피내 보습과 관련된 인자들의 발현을 증가시키므로 피부보습용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 잎, 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)은 동백잎, 녹차잎, 제주푸른콩, 및 이들의 피(박)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 조성물은 피부노화 방지용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 동백잎겔, 녹차잎겔, 제주푸른콩겔은 피부주름과 관련된 유전자의 발현량을 감소시키고, 피부탄력과 관련된 유전자의 발현량을 증가시키므로 피부노화 방지용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 육상식물의 잎, 열매, 씨앗, 또는 이들의 피(박)은 제주푸른콩이고, 상기 조성물은 피부미백용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 제주푸른콩겔은 멜라닌 생성과 관련된 유전자의 발현을 감소시키므로, 피부미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 미세분쇄 식물 분말은 미세분쇄 해양식물의 분말이다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 해양식물은 조성물 전체 총 중량을 기준으로 1-20%(w/v)의 산화된 미세분쇄 식물 분말을 포함하는 것인, 식물겔 화장료 조성물. 상기 조성물이 해양식물의 산화된 미세분쇄 식물 분말을 포함하는 경우에는, 조성물 전체 총 중량을 기준으로 1-20, 1-15, 1-10, 3-20, 3-15, 3-10, 5-20, 5-15, 5-10, 10-20, 10-15, 15-20%(w/v)의 산화된 미세분쇄 식물 분말을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 단, 본 발명의 조성물이 해양식물의 산화된 미세분쇄 식물 분말을 포함하는 경우에는 적어도 1%(w/v) 이상의 농도로 식물 분말이 포함되어야 겔 형성이 잘 되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 식물 분말이 20%(w/v)를 초과하는 경우에는 너무 농도가 높아 사용감이 좋지 않았다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 해양식물은 해양 저서식물을 의미한다. 해양 저서식물은 해조류(거대조류, macroalgae)와 해산 현화식물(marine angiosperms)로 분류된다.

본 발명에서 상기 해조류(거대조류, macroalgae)는 녹조류, 갈조류, 홍조류, 남조류 등으로 분류된다. 녹조류에는 가시파래, 홑파래, 매생이, 청각 등이 있고, 갈조류에는 미역, 다시마, 모자반, 톳, 감태, 지충이 등이 있으며, 홍조류에는 김, 우뭇가사리, 불등가사리, 새빨간검둥이, 작은구슬상호말 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서 상기 해산 현화식물은 해초류(sea grasses), 염습지 식물(salt marsh plant), 및 망그로브류(mangroves)로 분류된다. 해초류에는 거북말, 잘피, 및 말잘피가 있고, 염습지 식물에는 염색 목초, 골풀, 및 쌍자엽 관목이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 해양식물은 우뭇가사리이고, 상기 조성물은 피부보습용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 우뭇가사리겔은 피부 표피내 보습과 관련된 인자들의 발현을 증가시키므로 피부보습용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 해양식물은 우뭇가사리이고, 상기 조성물은 피부노화 방지용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 우뭇가사리겔은 피부주름과 관련된 유전자의 발현량을 감소시키고, 피부탄력과 관련된 유전자의 발현량을 증가시키므로 피부노화 방지용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 구현예에 있어서, 상기 해양식물은 감태이고, 상기 조성물은 피부미백용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 입증한 바와 같이, 본 발명의 감태겔은 멜라닌 생성과 관련된 유전자의 발현을 감소시키므로, 피부미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 식물겔은 조성물은 다음 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조된다:

(a) 미세분쇄 된 식물 분말에 적어도 하나의 산화제를 첨가하여 반응시키는 단계;

(b) 식물 분말을 정제하고 정제수에 희석시키는 단계;

(c) 식물 분말 희석액을 균질화하고 농축 또는 여과하여 식물겔을 제조하는 단계.

본 발명의 식물겔 제조단계에서 상기 (a) 단계의 미세분쇄 된 식물 분말의 입경은 1 내지 300 μm 이하이다.

본 발명의 일구현예에 있어서, 상기 산화제는 차아할로겐산 또는 그 금속염, 또는 아할로겐산 또는 그 금속염이고, 상기 차아할로겐산 또는 그 금속염, 및 아할로겐산 또는그 금속염의 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬, 요오드이다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 차아할로겐산 금속염, 및 아할로겐산 금속염의 금속은 리튬, 칼륨, 나트륨 등의 알칼리 금속; 칼슘, 마그네슘, 스트론튬 등의 알칼리토금속이고, 보다 구체적으로 상기 차아할로겐산염은 차아염소산나트륨, 차아염소산칼륨, 차아염소산 칼슘, 차아염소산마그네슘, 차아염소산스트론튬, 차아염소산암모늄이나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 식물겔 제조단계에서 상기 (a) 단계는 촉매로서 니트록시 라디칼 화합물을 첨가하여 수행되는, 식물겔의 제조방법.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 니트록시 라디칼 화합물은 (2,2,6,6-Tetramethylpiperidin-1-yl)oxyl 또는 이의 유도체이고, 상기 니트록시 라디칼 화합물의 유도체는 구체적으로 4-Acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Amino--2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d₁₇-1-oxyl; 4-Amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl; 2-Azaadamantane-N-oxyl; 4-Carboxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d₁₇-1-oxyl; 4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl benzoate; 4-(2-Iodoacetamido)-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Isothiocyanato-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Maleimido-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Methoxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Oxo-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Oxo-,2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d₁₆-1-oxyl; 4-Phosphonooxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Methacryloyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl; 및 2,2,6,6-Tetramethyl-4-(methylsulfonyloxy)-1-piperidinooxy 로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 화합물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 식물겔 제조단계에서, 상기 (b) 단계의 정제는 (a) 단계의 반응액에 알코올을 첨가하여 식물 분말을 침전시킨 후, 침전된 식물 분말을 여과하는 단계를 포함한다. 상기 알코올은 C1 내지 C5의 저가 알코올이다.

본 발명의 식물겔 제조단계에서, 상기 (b) 단계의 정제는 (a) 단계의 반응액에 정제수를 첨가하여 멤브레인 여과하는 단계를 포함한다.

본 발명의 식물겔 제조단계에서, 상기 (c) 단계의 균질화는 800 내지 1000 bar의 압력에서 수행된다.

또한, 본 발명의 식물겔 제조단계에서, 상기 (c) 단계의 농축은 50-65℃에서 감압농축하여 수행된다.

본 발명의 식물겔 제조단계에서, 상기 (c) 단계의 여과는 멤브레인 여과하여 수행되는 것인 식물겔의 제조방법.

본 발명의 식물겔 제조단계에서, 상기 (c) 단계에서 제조된 식물겔의 식물 분말 함유량은 0.1-30 %(w/v)이다.

이하 본 발명의 식물겔의 제조방법을 상세히 설명한다.

단계 (a): 미세분쇄 식물 분말의 산화 단계

먼저 미세분쇄 된 식물 분말을 수득한다. 미세분쇄 된 식물의 분말은 구입하거나 또는 건조된 식물을 그라인더로 분쇄하여 얻을 수 있다.

본 발명에서 상기 (a) 단계의 미세분쇄 된 식물 분말의 입경은 1 내지 300 μm 이하로 제조될 수 있다. 상기 미세분쇄 된 식물 분말의 입경은 그 크기가 작을수록 산화반응이 단시간에 높은 비율로 이루어지는 이점이 있다.

본 발명의 단계에서는 식물 분말에 적어도 하나의 산화제를 첨가하여 산화반응을 진행한다. 상기 산화제는 차아할로겐산 또는 그 금속염, 또는 아할로겐산 또는 그 금속염일 수 있다.

본 발명의 일 구현예에서, 상기 차아할로겐산 또는 그 금속염, 및 아할로겐산 또는 그 금속염에서의 할로겐은 염소, 브롬, 요오드일 수 있다. 따라서 구체적으로는 차아염소산, 차아브롬산, 차아요오드산, 아염소산, 아브롬산, 아요오드산일 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에서, 상기 차아할로겐산 금속염, 및 아할로겐산 금속염에서의 금속은 리튬, 칼륨, 나트륨 등의 알칼리 금속; 칼슘, 마그네슘, 스트론튬 등의 알칼리토금속일 수 있다. 따라서 상기 차아할로겐산염의 구체적인 예로는 차아염소산나트륨, 차아염소산칼륨, 차아염소산 칼슘, 차아염소산마그네슘, 차아염소산스트론튬, 차아염소산암모늄 등을 들 수 있다. 아할로겐산염의 구체적인 예로는 아염소산의 경우, 아염소산리튬, 아염소산칼륨, 아염소산나트륨, 아염소산칼슘, 아염소산마그네슘, 아염소산스트론튬, 아염소산암모늄 등을 들 수 있다. 또한 상기 아염소산염에 대응하는 아브롬산염, 아요오드산염을 이용할 수도 있다.

본 단계의 산화 반응은 촉매로서 니트록시 라디칼 화합물을 첨가하여 수행될 수 있다. 상기"니트록시 라디칼 화합물"은 니트록시 라디칼 화합물 또는 이의 유도체일 수 있다. 구체적으로 상기 니트록시 라디칼 화합물은 (2,2,6,6-Tetramethylpiperidin-1-yl)oxyl 이고, 니트록시 라디칼 화합물의 유도체는 4-Acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d₁₇-1-oxyl; 4-Amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl; 2-Azaadamantane-N-oxyl; 4-Carboxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d₁₇-1-oxyl; 4-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl benzoate; 4-(2-Iodoacetamido)-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Isothiocyanato-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl; 4-Maleimido-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Methoxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Oxo-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Oxo-,2,2,6,6-tetramethylpiperidine-d₁₆-1-oxyl; 4-Phosphonooxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy; 4-Methacryloyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl; 및 2,2,6,6-Tetramethyl-4-(methylsulfonyloxy)-1-piperidinooxy 로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 화합물일 수 있다.

본 단계의 산화 반응은 보조촉매로서 할로겐과 알칼리 금속의 염(알칼리 금속염), 할로겐과 알칼리 토류 금속의 염(알칼리 토류 금속염), 암모늄염을 첨가하여 수행될 수 있다.

상기 알칼리 금속염, 알칼리 토류 금속염, 암모늄염을 형성하기 위한 할로겐으로서는, 염소, 브롬, 요오드를 들 수 있다. 알칼리 금속염을 형성하는 알칼리 금속으로서는, 리튬, 칼륨, 나트륨 등을 들 수 있다. 알칼리 토류 금속염을 형성하는 알칼리 토류 금속으로서는, 칼슘, 마그네슘, 스트론튬 등을 들 수 있다.

보다 구체적으로는, 브롬화리튬, 브롬화칼륨, 브롬화나트륨, 요오드화리튬, 요오드화칼륨, 요오드화나트륨, 염화리튬, 염화칼륨, 염화나트륨, 브롬화칼슘, 브롬화마그네슘, 브롬화스트론튬, 요오드화칼슘, 요오드화마그네슘, 요오드화스트론튬, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화스트론튬 등을 들 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 암모늄염으로서는, 브롬화암모늄, 요오드화암모늄, 염화암모늄을 들 수 있다. 이들 보조촉매는 단독 또는 2종 이상의 조합으로 사용할 수 있으며, 이들의 보조촉매는 수화물을 형성하고 있어도 좋다.

본 발명의 단계 (a)의 산화 반응은 pH를 9-11로 유지하면서 2 내지 4 시간 동안 수행될 수 있다.

단계 (b): 산화된 식물 분말의 정제 및 희석 단계

이어서 산화된 식물 분말에서 미반응 원료와 불순물(반응에 사용된 니트록시 라디칼, NaBr, NaClO 등의 원료 및 NaCl 등의 반응 부가생성물)을 제거하기 위하여 식물 분말을 정제하고 추가적인 미세입자화(균질화)를 위하여 정제수에 희석시킨다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 (b) 단계의 정제는 (a) 단계의 반응액에 알코올을 첨가하여 식물 분말을 침전시킨 후, 침전된 식물 분말을 여과하는 단계로 수행될 수 있다. 여기에서 상기 알코올은 C1 내지 C5의 저가 알코올이 사용될 수 있으며, 또한 알코올 첨가-식물 분말 침전-여과 단계는 2회 이상 반복하여 수행될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 (b) 단계의 정제는 (a) 단계의 반응액에 정제수를 첨가하여 멤브레인 여과(한외 여과)하는 단계로 수행될 수 있다. 멤브레인 여과 방법을 사용하면 상기 알코올 침전 및 정제수 희석 단계를 수행하지 않아도 단일한 과정으로 식물 분말의 산화 단계에서 발생한 미반응 원료와 불순물을 제거할 수 있다.

단계 (c): 식물 분말 희석액의 균질화 및 식물겔의 제조 단계

마지막으로 식물 분말 희석액을 고압균질기(microfluidizer)를 통하여 균질화(미세입자화) 하고 농축 또는 여과하여 본 발명의 식물겔을 제조하였다. 상기 (c) 단계의 균질화는 800 내지 1000 bar의 압력에서 수행될 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 균질화 후 농축 단계는 50-65℃에서 감압 농축 또는 진공 농축하여 수행될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 균질화 후 여과 단계는 (b) 단계에서와 동일하게 멤브레인 여과하여 수행될 수도 있다.

또한, 최종적으로 제조된 식물겔의 식물 분말 함유량은 0.1-30 %(w/v)일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 미세입자화된 산화된 식물 분말을 0.1 - 30 %(w/v)의 농도를 가지도록 조절하면 겔상을 나타내면서도 식물 원료 자체의 기능성을 나타낼 수 있다. 상기 제조된 식물겔의 식물 분말 함유량이 0.1 %(w/v) 미만인 경우 식물 분말 첨가에 따른 식물 원료 자체의 효능을 기대하기 어렵고, 30 %(w/v)를 초과하는 경우 첨가량 대비 효능의 증대가 미미하여 경제적이지 못하다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 산화된 미세분쇄(pulverized) 식물 분말 0.1-30 %(w/v) 및 잔량의 용매를 포함하는 식물겔을 제공한다.

본 발명의 식물겔이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 화장수, 겔, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 스프레이, 수중유 (O/W)형 또는 유중수 (W/O)형의 기초화장료 제형; 수중유형 또는 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 파우더, 립스틱, 립글로스, 아이새도, 치크칼라 또는 아이브로우 펜슬류의 색조화장품 제형; 및, 두피용 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있다.

본 발명 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이 인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로 카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 식물겔과 담체 성분 이외에, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에서 식물겔의 양은 특별히 한정되지 않으며, 바람직하게는 식물 원료가 가진 효능을 달성하는 데 충분한 양으로 포함된다.

도 1a 및 1b는 본 발명의 식물겔 중 병풀로 제조된 병풀겔의 세포 재생 효능을 조사하기 위하여 병풀겔을 0, 5, 10, 20 μg/ml의 농도로 첨가하여 인간 정상 섬유아세포를 배양한 결과를 나타낸 도이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.

실험재료

본 발명의 식물겔 조성물에 사용된 재료는 다음과 같다. 본 발명의 식물원료인 홍삼, 인삼, 유채, 병풀, 동백잎, 녹차잎, 제주푸른콩, 철피석곡, 감태, 우뭇가사리는 ㈜삼도피앤에프 (Korea) 및 한약재시장에서 구매하여 사용하였다. (2,2,6,6-Tetramethylpiperidin-1-yl)oxyl (TEMPO) 시약은 Alfa Aesar사의 제품을 사용하였고, NaClO의 경우 대정화금㈜, NaBr 및 NaOH, HCl, 에탄올은 덕산약품공업㈜의 제품을 사용하였다.

실시예 1: 본 발명의 홍삼겔 조성물의 제조

건조한 홍삼을 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 홍삼 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 홍삼 분말 15 g에 정제수 300 mL를 넣어 교반하였다. 그 후 TEMPO 0.47 g, NaBr 3.09 g을 넣어 용해시켰다. NaClO 100 mL를 적가한 후 NaOH로 pH가 10~11이 되도록 유지하며 상온에서 15시간동안 산화시켰다. 상기 산화된 홍삼 반응액에 HCl을 넣어 pH 6~7이 되도록 중화시키고 상기 산화반응에 사용된 원료 및 반응부가 생성물을 제거하여 홍삼 분말을 정제하였다. 정제는 크게 두 가지 방식으로 진행하였다.

첫번째 방법(에탄올 침전법)으로는 반응액에 에탄올 300 mL을 넣어 침전시킨 뒤 여과하여 여과물을 얻었다. 여과물을 50% 에탄올에 넣고 교반하여 세척한 뒤 여과하는 과정을 반복하여 정제하였다. 두번째 방법(멤브레인 여과법)으로는 반응액을 멤브레인 여과기(FMX-B5, UF의 일종, ㈜부강테크)를 이용하여 불순물이 제거될 때까지 정제수를 계속 첨가하며 정제하였다.

상기 정제한 홍삼 분말에 정제수 3 L를 넣어 호모게나이저(PRIMIX, ROBOMIXER) 를 이용하여 2500 RPM에서 30분간 교반하여 분산시켰다. 상기 홍삼 분말 분산액을 고압균질기(M-110Y microfluidizer, Microfluidics Corporation, USA)를 이용하여 800~1000 bar에서 5회 통과시켜 미세화시켰다. 상기 미세화한 홍삼 조성물을 감압농축기(R-210 set, BUCHI) 또는 멤브레인 여과기(FMX-B5, ㈜부강테크)로 농축하여 본 발명의 홍삼 겔 205g을 얻었다.

실시예 2: 인삼겔의 제조

건조한 인삼을 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 인삼 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 인삼 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 인삼겔 210 g을 얻었다.

실시예 3: 유채겔의 제조

건조한 유채를 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 유채 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 유채 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 유채겔 125 g을 얻었다.

실시예 4: 병풀겔의 제조

건조한 병풀을 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 병풀 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 병풀 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 병풀겔 160 g을 얻었다.

실시예 5: 동백잎겔의 제조

건조한 동백잎을 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 동백잎 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 동백잎 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 동백잎겔 108 g을 얻었다.

실시예 6: 녹차잎겔의 제조

건조한 녹차잎을 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 녹차잎 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 녹차잎 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 녹차잎겔 55 g을 얻었다.

실시예 7: 제주푸른콩겔의 제조

건조한 제주푸른콩을 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 제주푸른콩 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 제주푸른콩 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 제주푸른콩겔 40 g을 얻었다.

실시예 8: 철피석곡겔의 제조

건조한 철피석곡을 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 철피석곡 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 철피석곡 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 철피석곡겔 285 g을 얻었다.

실시예 9: 감태겔의 제조

건조한 감태를 그라인더로 분쇄한 뒤, 150 Mesh로 체별하여 100 μm 이하의 감태 분말을 얻었다. 상기 분쇄한 감태 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 감태겔 190 g을 얻었다.

실시예 10: 우뭇가사리겔의 제조

건조한 우뭇가사리를 그라인더로 분쇄한 뒤, 분말 15 g을 실시예1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 우뭇가사리겔 204 g을 얻었다.

실시예 11: 석류겔의 제조

건조한 석류를 그라인더로 분쇄한 뒤, 분말 15 g을 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 석류겔 185 g을 얻었다.

실시예 12: 홍경천겔의 제조

건조한 홍경천을 그라인더로 분쇄한 뒤, 분말 15 g을 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하여 본 발명의 홍경천겔 110 g을 얻었다.

실시예 13. 본 발명의 식물분말의 정제방법 1 (에탄올 침전법)

TEMPO 반응 후 반응액 부피대비 동량의 에탄올을 넣고 교반한 후 여과를 진행하였다. 여과된 습체 케이크를 앞 공정의 동일 부피(반응액+에탄올)의 50% 에탄올을 넣고 교반한 후 여과를 진행하였다. 여과된 습체 케이크를 정제수를 이용하여 희석한 후 고압균질기(Microfluidizer)로 5회 균질화를 수행하였다. 미세입자화 된 식물 분말 용액을 감압농축하여 고형분을 3-30% 포함하는 식물겔을 얻었다.

실시예 14. 본 발명의 식물 분말의 정제방법 2 (멤브레인 여과법)

TEMPO 반응 후 반응액을 멤브레인 여과기(FMX-B5, ㈜부강테크)를 사용하여 미반응 원료 및 불순물(반응에 사용된 TEMPO, NaBr, NaClO 등의 원료 및 반응 부가생성물 NaCl등)을 제거하고 정제수를 이용하여 희석하였다. 희석액을 고압균질기(Microfluidizer)를 이용하여 5회 균질화(미세화)하였다. 미세 입자화 된 식물 분말 용액을 다시 멤브레인 여과기(FMX-B5, ㈜부강테크)를 사용하여 물을 제거함으로써 고형분을 3-30% 포함하는 식물 겔을 수득하였다.

실험예

실험예 1: 식물겔의 피부보습 효능평가

실험예 1-1: 피부 표면 수분을 공급하는 water channel 아쿠아 포린3(Aquaporin-3, APQ-3)에 대한 유전자 발현양 조사

피부보습 효능평가를 위해 아쿠아포린-3(Aquaporin-3, AQP-3) 유전자 발현 확인을 위한 실험을 수행하였다. 60 mm culture dish(corning)에 Normal human keratinocyte (gibco)를 4.5X10⁵ cells를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%) 동안 배양한 뒤 Serum-free 배지(Epilife, gibco)로 교체하였다. 24시간 뒤, 시료를 농도 별로 처리하고 24시간 동안 37℃, CO₂ 5% 배양기에서 배양하였다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 μg의 RNA로 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시하였다. PCR에 사용된 Aquaporin-3, β-Actin primer 는 코스모진텍사 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 표 1에 나타내었다. 양성대조군으로는 Retinoic acid를 사용하였다. 발현양의 결과를 표 2에 나타내었다.

Primers

Primer	Sequence (5' to 3')	SEQ ID NO
β-actinsense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2
Aquaporin-3(AQP-3)Sense	GGG ACC AGT CGG AAG GGA T	3
Aquaporin-3(AQP-3)Antisense	CAC AGA TGG ACA GGC TGC CT	4

AQP-3 mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	AQP-3 mRNA Expression rate (%)
Control	-	100.0
Retinoic acid	100 nM	135.5
실시예 1 (홍삼겔)	10	111.4
	25	115.1
	50	145.4
실시예 5 (동백잎겔)	10	161.36
실시예 5 (동백잎겔)	25	197.06
실시예 6 (녹차잎겔)	25	492.37
	50	504.65
	100	430.31
실시예 10 (우뭇가사리겔)	5	197.83
	10	281.45
	25	204.86

식물겔의 보습관련 AQP-3 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 5, 실시예 6, 실시예 10 경우 여러 농도에서 유전자 발현이 증가함에 따라 피부 보습 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 1-2: 피부보습 인자 중 하나인 히알루론산 메커니즘 관련 유전자 발현양 조사

1) 히알루론산 합성 효소 Hyaluronic acid synthase -2 (HAS- 2)에 대한 유전자 발현양 조사

피부보습 효능평가를 위해 Hyaluronic acid synthase-2 (HAS-2)의 유전자 발현 확인을 위한 실험을 수행하였다. 60 mm culture dish(corning)에 Normal human keratinocyte (gibco)를 4.5X10⁵ cells를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지(Epilife, gibco)로 교체하였다. 24시간 뒤, 시료를 농도 별로 처리하여 24시간 동안 37℃, CO₂ 5% 배양기에서 배양하였다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 μg의 RNA로 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시하였다. PCR에 사용된 Hyaluronic acid synthase-2 (HAS-2), β-Actin primer는 코스모진텍사 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 표 3에 나타내었다. 양성대조군으로는 Retinoic acid를 사용하였다. 발현량의 결과를 표 4에 나타내었다.

HAS-2 Primers

Primer	Sequence (5' to 3')	SEQ ID NO
Hyaluronic acid-2 (HAS-2) Sense	ACA ACA CCT TAG TTC CTC TA	5
Hyaluronic acid-2 (HAS-2) antisense	AGC AGT GAT ATG TCT CCT	6
β-actin Sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

HAS-2 mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	HAS-2 mRNA Expression rate (%)
Control	-	100.0
Retinoic acid	100 nM	165.1
실시예 1 (홍삼겔)	10	111.3
	25	120.0
	50	127.5

식물겔의 보습관련 HAS-2 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 1 처리 시 농도 의존적으로 유전자 발현이 증가함에 따라 피부 보습 효능이 있는 것으로 확인되었다.

2) 히알루론산 수용체 CD-44 에 대한 유전자 발현양 조사

피부 hydration에 결정적으로 기여하는 보습 인자 중 하나인 히알루론산의 수용체인 CD-44의 유전자 발현 확인을 위한 실험을 수행하였다. 60 mm culture dish(corning)에 Normal human keratinocyte (gibco)를 4.5X10⁵ cells를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지(Epilife, gibco)로 교체하였다. 24시간 뒤, 시료를 농도 별로 처리하여 24시간 동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양하였다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 μg의 RNA로 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시하였다. PCR에 CD-44, β-Actin primer 는 코스모진텍사 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 표 5에 나타내었다. 양성대조군으로는 Retinoic acid를 사용하였다. 발현량의 결과를 표 6에 나타내었다.

CD-44 Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
CD-44 sense	GCT ATT GAA AGC CTT GCA GAG	7
CD-44 antisense	CGC AGA TCG ATT TGA ATA TAA CC	8
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

CD-44 mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	CD-44 mRNA Expression rate (%)
Control	-	100.0
Retinoic acid	50 nM	134.13
실시예 6 (녹차잎겔)	25	145.10
실시예 6 (녹차잎겔)	50	161.70

식물겔의 보습관련 CD-44 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 6 처리 시 농도 의존적으로 유전자 발현이 증가함에 따라 피부 보습 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 1-3: 피부 표피 내 천연 보습 인자(natural moisturizing factor; NMF) 합성에 대한 보습 효능 평가 조사

1) 피부 표피 내 천연 보습 인자 전사체 프로필라그린 (Pro Filaggrin , Pro FLG) 발현에 대한 평가

피부보습 효능평가를 위해 천연 보습인자 전세차 Pro filaggrin (Pro FLG)의 유전자 발현 확인을 위한 실험을 수행하였다. 60 mm culture dish(corning)에 Normal human keratinocyte (gibco)를 4.5X10⁵ cells를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지(Epilife, gibco)로 교체하였다. 24시간 뒤, 시료를 농도 별로 처리하여 24시간 동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양하였다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 μg의 RNA로 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시하였다. PCR에 사용된 Pro-filaggrin (Pro FLG), β-Actin primer 는 코스모진텍사 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 표 7에 나타내었다. 발현량의 결과를 표 8에 나타내었다.

Pro FLG Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
Pro filaggrin (Pro FLG) sense	CTG ATG GTA TTC AAG TTG GCT	9
Pro filaggrin (Pro FLG) antisense	ACT GTG CTT TCT GTG CTT GT	10
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

Pro FLG mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	Pro FLG mRNA Expression rate (%)
Control		100.0
실시예 1 (홍삼겔)	10	103.4
	25	118.2
	50	134.0
실시예 5 (동백잎겔)	25	143.92
실시예 6 (녹차잎겔)	25	129.50
	50	154.96
	100	171.06
실시예 10 (우뭇가사리겔)	5	173.06
	10	233.13
	25	275.59

식물겔의 보습관련 Pro FLG 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 5, 실시예 6, 실시예 10 처리 시 다양한 농도에서 유전자 발현이 증가함에 따라 피부 보습 효능이 있는 것으로 확인되었다.

2) 피부 표피 내 천연 보습 인자 전사체 필라그린(Filaggrin)발현에 대한 평가

100 mm 디쉬에 인간성장인자 (human growth factor, gibco)가 포함된 Epilife (gibco) 배지와 인간 케라틴 세포 3.5X10⁵ cells를 접종하여 24시간 동안 37℃, 5% 이산화탄소 조건에서 배양하였다. 24시간 후, 시료를 무혈청 (serum-free) 배지에 농도 별로 처리하여 3~5일 동안 배양하였다. 칼슘 클로라이드를 본 실험의 양성 대조군으로 사용되었다.

세포를 스크래퍼(scrapper)를 이용하여 긁어낸 후, 원심분리를 통해 펠렛(pellet)을 가라앉혔다. 이후, 단백질추출용액 (protein extraction solution)을 넣고 인큐베이션한 뒤, QubitTM fluorometer를 이용하여 단백질을 정량하였다. 정량한 단백질에 로딩 버퍼 (loading buffer)를 첨가한 후, SDS-PAGE에 로딩하였다.

iBlot Dry Blotting 시스템을 이용하여 트랜스퍼(transfer)한 후, 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1차 (Filaggrin, β-actin) 및 2차 (GAM-HRP) 항체를 처리하였다. 항체 처리 후, west save cold ECL 용액을 처리한 후, chemi doc LuminoGraphⅡ (ATTO)로 밴드를 촬영하고 이를 수치화 한 값을 정량하여 표 9에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	FLG/β-actin (%)
Control	-	100.0
Calcium chloride	1.2 mM	202.8
실시예 1 (홍삼겔)	10	139.8
	25	184.0
	50	274.8
실시예 2 (인삼겔)	50	112.1
실시예 2 (인삼겔)	100	184.6
실시예 4 (병풀겔)	0.5	207.9
실시예 4 (병풀겔)	1	262.3

식물겔의 보습관련 Filaggrin 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 2, 실시예 4 처리 시 다양한 농도에서 단백질 발현이 증가함에 따라 피부 보습 효능이 있는 것으로 확인되었다.

3) 피부 표피 내 천연 보습 인자합성에 관여하는 효소 Caspase -14 발현에 대한 평가

iBlot Dry Blotting 시스템을 이용하여 트랜스퍼(transfer)한 후, 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1차 (caspase-14, β-actin) 및 2차 (GAM-HRP) 항체를 처리하였다. 항체 처리 후, west save cold ECL 용액을 처리한 후, chemi doc LuminoGraphⅡ (ATTO)로 밴드를 촬영하고 이를 수치화한 값을 정량하여 표 10에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	Casapse-14/β-actin (%)
Control	-	100.0
Calcium chloride	1.2 mM	140.1
실시예 2 (인삼겔)	25	150.1
	50	156.1
	100	166.3

식물겔의 보습관련 Caspase-14 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 2, 처리 시 농도의존적으로 단백질 발현이 증가함에 따라 피부 보습 효능이 있는 것으로 확인되었다.

4) 피부 표피 내 천연 보습 인자 합성에 관여하는 효소 블레오마이신 하이드로라아제 (Bleomycin hydrolase, BLMH)발현에 대한 평가

iBlot Dry Blotting 시스템을 이용하여 트랜스퍼(transfer)한 후, 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1차 (Bleomycin hydrolase, β-actin) 및 2차 (GAM-HRP) 항체를 처리하였다. 항체 처리 후, west save cold ECL 용액을 처리한 후, chemi doc LuminoGraphⅡ (ATTO)로 밴드를 촬영하고 이를 수치화한 값을 정량하여 표 11에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	BLMH/β-actin (%)
Control	-	100.0
Calcium chloride	1.2 mM	179.0
실시예 2 (인삼겔)	25	117.5
	50	141.7
	100	169.9
실시예 4 (병풀겔)	0.5	119.8
	1	119.9
	5	140.6

식물겔의 보습관련 BLMH 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 2, 실시예 4 처리 시 다양한 농도에서 단백질 발현이 증가함에 따라 피부 보습 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 2: 식물겔의 피부장벽 강화 효능평가

실험예 2-1: 식물겔의 피부장벽 강화에 관여하는 Tight junction protein 에 대한 발현량 조사

1) Tight junction protein 중 하나인 오클루딘 ( Occludin , OCDN ) 발현에 대한 평가

본 실험예에서는 식물겔의 피부장벽 강화 효과를 측정하기 위해 장벽 기능에 결정적으로 기여하는 Tight Junction(TJ) protein 관련 유전자 오클루딘(Occludin, OCDN) 발현 실험을 수행하였다. 60 mm culture dish(corning)에 Normal human keratinocyte (gibco)를 4.5X10⁵ cells를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지(Epilife, gibco)로 교체한다. 24시간 뒤, 시료를 농도 별로 처리하여 3~5일 동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양한다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리한다. 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 μg의 RNA로 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시한다. PCR에 사용된 Occludin, β-Actin primer 는 코스모진텍사 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 표 12에 나타내었다. 양성대조군으로는 Lactoeferrin을 사용하였다. 발현량의 결과를 표 13에 나타내었다.

OCDN Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
Occludin(OCDN) sense	CCA CCT ATC ACT TCA GAT CAA CAA A	11
Occludin (OCDN) antisense	TTC CTG TAG GCC AGT GTC AAA AT	12
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

시험군	실험농도 (μg/ml)	OCDN mRNA Expression rate (%)
Control	-	100.0
Lactoferrin	0.1 μM	155.7
실시예 2 (인삼겔)	25	114.0
	50	108.5
	100	118.2

식물겔의 피부장벽 관련 OCDN 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 2, 처리 시 다양한 농도에서 유전자 발현이 증가함에 따라 피부장벽 강화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 2-2: 식물겔의 피부보습 장벽 강화에 관여하는 세라마이드 합성 관련 유전자 발현량 조사

1) 세라마이드 합성에 관여하는 효소 세린 팔미토일 트랜스퍼라아제 ( Serine Palmitoyl Transferase, SPT)의 발현에 대한 평가

본 실험예에서는 식물겔의 피부장벽 강화 효과를 측정하기 위해 피부 내

수분 유실을 막는 세라마이드 합성 경로 관련 유전자에 대한 발현을 확인 하였다. 그 중 세라마이드 합성에 결정적으로 관여하는 효소인 세린 팔미토일 트랜스퍼라아제 (Serine Plamitoyl Transferase, SPT) 발현을 확인하였다. 60 mm culture dish(corning)에 Normal human keratinocyte (gibco)를 4.5x10⁵ cells를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지(Epilife, gibco)로 교체한다. 24시간 뒤, 시료를 농도 별로 처리하여 3~5일 동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양한다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리한다. 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 μg의 RNA로 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시한다. PCR에 사용된 SPT, β-Actin primer 는 코스모진텍사 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 표 14에 나타내었다. 양성대조군으로는 Retinoic acid를 사용하였다. 발현량을 표 15에 나타내었다.

Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
Serine Palmitoyl Transferase(SPT) sense	TGG TCA TTT GGC CCA GGT C	13
Serine Palmitoyl Transferase (SPT) antisense	TCC CAA CCA TTG GCT TCA CAT C	14
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

시험군	실험농도 (μg/ml)	SPT mRNA Expression rate (%)
Control	-	100.0
Retinoic acid	50 nM	131.7
실시예 1 (홍삼겔)	10	105.3
	25	111.7
	50	117.1

식물겔의 피부장벽 관련 SPT 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 1, 처리 시 농도 의존적으로 유전자 발현이 증가함에 따라 피부장벽 강화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

2) 세라마이드 합성에 관여하는 효소 Ceramide synthase -3 ( CERS3 )의 발현에 대한 평가

iBlot Dry Blotting 시스템을 이용하여 트랜스퍼(transfer)한 후, 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1차 (CERS3, β-actin) 및 2차 (GAR-HRP, GAM-HRP) 항체를 각각 처리하였다. 항체 처리 후, west save cold ECL 용액을 처리한 후, chemi doc LuminoGraphⅡ (ATTO)로 밴드를 촬영하고 이를 수치화한 값을 정량하여 표 16에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	CERS3/β-actin (%)
Control	-	100.0
Calcium chloride	1.8 mM	141.6
실시예 1 (홍삼겔)	10	177.4
	25	308.6
	50	373.6
실시예 4 (병풀겔)	0.5	183.7
	1	212.0
	5	237.6

식물겔의 피부장벽 관련 CERS3 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 4 처리 시 다양한 농도에서 단백질 발현이 증가함에 따라 피부장벽 강화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 2-3: 식물겔의 피부장벽 강화에 관여하는 Tight junction protein 에 대한 발현량 조사

1) 피부장벽 형성에 관여하는 효소 트렌스글루타미나아제 -1(Transglutaminase-1, TGase-1)의 유전자 발현에 대한 평가

식물겔의 피부장벽 강화 효과를 측정하기 위해 피부장벽 형성에 관여하는 효소 중 하나인 트렌스글루타미나아제-1(Transglutaminase-1, TGase-1) 발현을 확인하기 휘해 본 실험을 수행하였다. 60 mm culture dish(corning)에 Normal human keratinocyte (gibco)를 4.5x10⁵ cells를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지(Epilife, gibco)로 교체한다. 24시간 뒤, 시료를 농도 별로 처리하여 3~5일 동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양한다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리한다. 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 μg의 RNA로 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시한다. PCR에 사용된 TGase-1, β-Actin primer 는 코스모진텍사 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 표 17에 나타내었다. 양성대조군으로는 Lactoferrin을 사용하였다. 발현량을 표 18에 나타내었다.

TGase-1 Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
Transglutaminse-1 (TGase-1) sense	TGA ATA GTG ACA AGG TGT ACT GGC A	15
Transglutaminse-1 (TGase-1) antisense	TTG TGA CAA TGA GTG TGC CGA T	16
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

시험군	실험농도 (μg/ml)	TGase-1 mRNA Expression rate (%)
Control	-	100.0
Lactoferrin	0.1 μM	155.8
실시예 2 (인삼겔)	25	135.7
	50	147.8
	100	103.9

식물겔의 피부장벽 관련 TGase-1 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 2, 처리 시 다양한 농도에서 유전자 발현이 증가함에 따라 피부장벽 강화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

2) 피부장벽 형성에 관여하는 효소 트렌스글루타미나아제 -1(Transglutaminase-1, TGase-1)의 단백질 발현에 대한 평가

iBlot Dry Blotting 시스템을 이용하여 트랜스퍼(transfer)한 후, 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1차 (TGase-1, β-actin) 및 2차 (GAM-HRP) 항체를 처리하였다. 항체 처리 후, west save cold ECL 용액을 처리한 후, chemi doc LuminoGraphⅡ (ATTO)로 밴드를 촬영하고 이를 수치화 한 값을 정량하여 표 21에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	TGase-1/β-actin (%)
Control	-	100.0
Calcium chloride	1.8 mM	198.5
실시예 4 (병풀겔)	0.5	140.5
실시예 4 (병풀겔)	5	150.7

식물겔의 피부장벽 관련 TGase-1 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 4, 처리 시 다양한 농도에서 단백질 발현이 증가함에 따라 피부장벽 강화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

3) 피부장벽을 구성하는 단백질 중 하나인 인볼루크린 ( Involucrin , INV )의 발현에 대한 평가

iBlot Dry Blotting 시스템을 이용하여 트랜스퍼(transfer)한 후, 블로킹(blocking)하였다. 이후, 1차 (INV, β-actin) 및 2차 (GAM-HRP) 항체를 처리하였다. 항체 처리 후, west save cold ECL 용액을 처리한 후, chemi doc LuminoGraphⅡ (ATTO)로 밴드를 촬영하고 이를 수치화 한 값을 정량하여 표 20에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	INV/β-actin (%)
Control	-	100.0
Calcium chloride	1.8 mM	160.4
실시예 4 (병풀겔)	0.5	144.2
실시예 4 (병풀겔)	5	145.0

식물겔의 피부장벽 관련 INV 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 4, 처리 시 다양한 농도에서 단백질 발현이 증가함에 따라 피부장벽 강화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 3: 식물겔의 항 피부노화 효능 평가

실험예 3-1: 식물겔의 피부주름 관련 유전자에 대한 발현량 조사

1) MMP-1, 2, 9 발현 감소 효과

인간 정상 섬유아세포를 culture dish에 분주하고 10% 소혈청을 포함하는 IMDM 배지로 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 배양하였다. 배지를 HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Gibco, USA)로 교체하고 UVA 6 J/ cm² 를 조사하여 소혈청이 함유되지 않은 IMDM으로 교체한 후 시료를 첨가하고 24시간 37℃에서 배양한다. 세포를 QIAzol?? (Qiagen, USA)로 모아서 제조사 방법에 따라 진행한다. RNA Pellet에 DEPC가 처리된 정제수를 적당량 넣어 녹인 후 Qubit™ fluorometer (Invitrogen, USA)와 Qubit^ⓡRNA BR Assay Kit (Invitrogen, USA)를 사용하여 정량한 다음 cDNA를 합성하여 Realtime PCR을 실시하였다. cDNA합성은 cDNA 합성 Kit (qPCRBIO cDNA Synthesis kit, PCRBIOSYSTEMS, UK)를 사용하였고 Kit의 방법에 의해 실험을 수행하였다. Realtime PCR은 Realtime PCR Kit (2x qPCRBIO SyGreen Blue mix Lo-ROX, PCRBIOSYSTEMS, UK)를 사용하였고 Kit의 방법에 의해 실험을 수행하였으며, Applied Biosystems 7500 FAST Real-Time PCR System을 이용해 유전자를 증폭한 후 증폭산물을 정량 분석하였다. PCR에 사용된 MMP-1, 2, 9, collagen type I 및 β-actin primer는 코스모진텍 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며, sequence는 표 21에 나타내었다. 발현량을 표 22, 23, 24, 25에 나타내었다. EGCG는 양성대조군으로 사용하였다.

Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
MMP-1 sense	CCA CCT ATC ACT TCA GAT CAA CAA A	17
MMP-1 antisense	TTC CTG TAG GCC AGT GTC AAA AT	18
MMP-2 sense	GAT GCG GTA TAC GAG GCC C	19
MMP-2 antisense	GAT CCA GTA TTC ATT CCC TGC AA	20
MMP-9 sense	AAC ATC TTC GAC GCC ATC G	21
MMP-9 antisense	AAT CGC CAG TAC TTC CCA TCC	22
collagen type I sense	AGC AAG AAC CCC AAG GAC AA	23
collagen type I antisense	CGA ACT GGA ATC CAT CGG TC	24
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

MMP-1 mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	MMP-1 mRNA expression rate (%)
비조사군	-	49.3
UVA 조사군	-	100.0
UVA + 실시예 1(홍삼겔)	100	89.8
	250	81.8
	500	56.3
UVA + 실시예 2(인삼겔)	25	80.4
	50	70.6
	100	50.1
UVA + 실시예 3(유채겔)	50	84.5
	100	77.9
	250	62.5
UVA + 실시예 4(병풀겔)	25	58.0
UVA + 실시예 4(병풀겔)	50	49.8
UVA + 실시예 5(동백잎겔)	25	78.4
UVA + 실시예 5(동백잎겔)	50	68.4
UVA + 실시예 6(녹차잎겔)	2.5	86.8
UVA + 실시예 7(제주푸른콩겔)	100	66.7
UVA + 실시예 8(철피석곡겔)	100	64.0
UVA + 실시예 10(우뭇가사리겔)	50	46.6
	100	76.1
	250	81.1
UVA + EGCG	2.5	51.8

식물겔의 피부노화 관련 MMP-1 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 2, 실시예 3, 실시예 4, 실시예 5, 실시예 6, 실시예 7, 실시예 8, 실시예 10 처리 시 다양한 농도에서 유전자 발현이 감소함에 따라 피부노화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

MMP-2 mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	MMP-2 mRNA expression rate (%)
비조사군	-	61.2
UVA 조사군	-	100.0
UVA + 실시예 1(홍삼겔)	100	84.3
	250	74.6
	500	69.7
UVA + 실시예 2(인삼겔)	25 (효과 없음)	92.2
	50	68.0
	100	73.2
UVA + EGCG	2.5	76.2

MMP-9 mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	MMP-9 mRNA expression rate (%)
비조사군	-	66.6
UVA 조사군	-	100.0
UVA + 실시예 1(홍삼겔)	100	89.8
	250	80.2
	500	78.0
UVA + 실시예 2(인삼겔)	25	77.2
	50	54.6
	100	56.2
UVA + EGCG	2.5	79.7

식물겔의 피부노화 관련 MMP-9 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 2 처리 시 다양한 농도에서 유전자 발현이 감소함에 따라 피부노화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

Collagen type I mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	Col-I mRNA expression rate (%)
비조사군	-	100.0
UVA 조사군	-	78.0
UVA + 실시예 5(동백잎겔)	25	99.3
UVA + 실시예 5(동백잎겔)	50	97.3
UVA + 실시예 10(우뭇가사리겔)	50	100.7

식물겔의 피부노화 관련 Col-I 유전자 발현을 확인한 바, 실시예5, 실시예10 처리 시 다양한 농도에서 유전자 발현이 증가함에 따라 피부노화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

2) MMP-2, 9 효소 활성 저해 효과

인간 정상 섬유아세포를 culture dish에 분주하고 10% 소혈청을 포함하는 IMDM 배지로 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 배양하였다. 배지를 HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Gibco, USA)로 교체하고 UVA 6 J/cm² 를 조사하여 소혈청이 함유되지 않은 IMDM으로 교체한 후 시료를 첨가하고 24시간 37℃에서 배양한다. 세포 배지를 Amicon® Ultra-4 centrifugal filter tube로 모으고 4℃, 3,000 rpm, 3~4시간 원심분리하여 농축하였다. 이 후, Qubit?? fluorometer (Invitrogen, USA)와 Qubit® protein BR Assay Kit (Invitrogen, USA)를 사용하여 정량한다. 적정량의 단백질을 10% gelatin zymogram gel을 이용하여 분리시킨 후 renaturation하고 37℃에서 development 하였다. Gel을 coomassie blue 용액으로 염색한 후 destaining 용액으로 교체하여 밴드 모양을 확인하고 Chemi doc LuminoGraphⅡ (ATTO)으로 밴드를 촬영하였다. 효소 활성을 표 26, 27에 나타내었다.

MMP-2 효소 활성 측정

시험군	실험농도 (μg/ml)	MMP-2 Inactive form activity (%)	MMP-2 Active form activity (%)
비조사군	-	84.3	76.7
UVA 조사군	-	100.0	100.0
UVA + 실시예 1(홍삼겔)	250	75.5	90.4
UVA + 실시예 1(홍삼겔)	500	73.1	79.5
UVA + EGCG	2.5	76.8	24.2

식물겔의 피부노화 관련 MMP-2 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 1 처리 시 다양한 농도에서 단백질 발현이 감소함에 따라 피부노화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

MMP-9 효소 활성 측정

시험군	실험농도 (μg/ml)	MMP-9 activity (%)
비조사군	-	33.6
UVA 조사군	-	100.0
UVA + 실시예 1(홍삼겔)	100	72.7
	250	60.0
	500	47.9
UVA + 실시예 2(인삼겔)	25	47.4
	50	44.4
	100	66.5
UVA + EGCG	2.5	84.4

식물겔의 피부노화 관련 MMP-9 단백질 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 2 처리 시 다양한 농도에서 단백질 발현이 감소함에 따라 피부노화 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 3-2: 식물겔의 피부탄력 관련 유전자에 대한 발현량 조사

1) Collagen Type I, Elastin 발현 증가 효과

Collagen Type I과 Elastin 유전자의 발현 정도를 측정하기 위하여 Applied Biosystems 7500 FAST Real-Time PCR System (Applied Biosystems, CA, USA)을 실시하였다. 인간 정상 섬유아세포를 60 mm plate에 1×10⁶의 밀도로 10% 소혈청을 포함하는 IMDM 배지로 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 배양하였다. 그 후, 배지를 HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Gibco, USA)로 2번 washing한 다음 소혈청이 함유되지 않은 IMDM으로 교체한 후 시료를 첨가하여 24시간 37℃에서 배양한다. 배양 후 세포를 TRIzol (Invitrogen, USA) 1 ml로 모아 1.5 ml tube에 옮기고, Chloroform (Sigma, USA) 200 μl를 첨가하여 vortex하여 상온에 5분 방치한다. 이 후 4℃, 15,000 rpm으로 30분 원심분리하여 상층액을 새로운 tube로 옮기고 동량의 2-propanol과 섞어 상온에서 5분 방치 후 4℃, 15,000 rpm에서 20분 원심분리한다. 원심분리 후 2-propanol은 버리고 75% 에탄올 1 ml을 첨가하여 4℃, 13,000 rpm에서 10분 원심분리하고 RNA pellet을 상온에서 말려 남아있는 에탄올을 제거한다. Pellet에 DEPC가 처리된 정제수를 적당량 넣어 녹인 후 Qubit^TM fluorometer (Invitrogen, USA)와 Qubit^ⓡRNA BR Assay Kit (Invitrogen, USA)를 사용하여 정량한 다음 cDNA (complementary DNA)를 합성하여 Real-time PCR을 실시하였다. cDNA합성은 cDNA 합성 Kit (High Capacity RNA-to-cDNA Kit, Applied Biosystems, USA)를 사용하였고 Kit의 방법에 의해 실험을 수행하였다. Real-time PCR은 Real-time PCR Kit (2x qPCRBIO SyGreen Blue mix Lo-ROX, PCRBIOSYSTEMS, London, UK)를 사용하였고 Kit의 방법에 의해 실험을 수행하였으며, Applied Biosystems 7500 FAST Real-Time PCR System을 이용해 유전자를 증폭한 후 증폭산물을 정량 분석하였다. PCR에 사용된 Collagen Type I, Elastin 및 β-actin primer는 코스모진텍 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며, sequence는 표 28에 나타내었다.

Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
collagen type I sense	AGC AAG AAC CCC AAG GAC AA	23
collagen type I antisense	CGA ACT GGA ATC CAT CGG TC	24
Elastin sense	GGC CAT TCC TGG TGG AGT TCC	25
Elastin antisense	AAC TGG CTT AAG AGG TTT GCC TCC A	26
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

cDNA 합성 반응 조건은 Collagen Type I, Elastin 및 β-actin 모두 95℃에서 5초, 60℃에서 25초, 40 사이클이다. 대조군으로 사용된 Vitamin C는 Collagen Type I, Elastin의 발현을 증가시키는 물질로 사용되고 있다. 발현양의 결과를 표 29, 30에 나타내었다.

Collagen Type I mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	Col-I mRNA expression rate (%)
대조군	-	100.0
Vitamin C	100	117.7
실시예 1 (홍삼겔)	100	120.9
	250	119.9
	500	140.7
실시예 4 (병풀겔)	50	120.5
실시예 4 (병풀겔)	100	132.7

식물겔의 피부탄력 관련 Col-I 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 1, 실시예 4 처리 시 다양한 농도에서 Collagen 합성이 증가함에 따라 피부탄력 효능이 있는 것으로 확인되었다.

Elastin mRNA 발현량

시험군	실험농도 (μg/ml)	Elastin mRNA expression rate (%)
대조군	-	100.0
Vitamin C	100	122.2
실시예 2 (인삼겔)	50	115.9
실시예 2 (인삼겔)	100	116.4
실시예 3 (유채겔)	50	157.0
	100	113.8
	250	117.1
실시예 4 (병풀겔)	25	173.9
실시예 8 (철피석곡겔)	25	181.5
	50	180.7
	100	190.7

식물겔의 피부탄력 관련 Elastin 유전자 발현을 확인한 바, 실시예 3, 실시예 7, 실시예 8 처리 시 다양한 농도에서 Elastin 합성이 증가함에 따라 피부탄력 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 3-3: Skin photo-protection 평가

인간 정상 섬유아세포를 plate에 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 배양하였다. 그 후, 배지를 HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Gibco, USA)로 세척한 다음 시료를 첨가하여 1시간 37℃에서 배양하였다. UVB 50 mJ/cm²를 조사하고 소혈청이 함유되지 않은 배지로 교체한 후 시료를 첨가하여 24시간 37℃에서 배양하였다. 세포의 배지 제거 후 HBSS로 세척하고 JC-1 dye가 첨가된 소혈청이 함유되지 않은 배지로 교체하여 차광 상태를 유지하면서 1 시간 동안 배양하였다. HBSS로 세척한 다음 ELISA reader 기로 형광 측정 (Red: Ex=530 nm, Em=590 nm / Green: Ex=485 nm, Em=530 nm) 을 하고 형광 현미경으로 촬영하였다.

측정 결과를 표 31에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	Red/green (%)
비조사군	-	100.0
UVB 조사군	-	73.9
UVB + 실시예 2(인삼겔)	25	102.2
	50	99.4
	100	102.9
UVB + Adenosine	7	86.1

실험결과, 표 31에 나타난 바와 같이, 실시예 2 처리 시 UVB 조사로 감소된 세포 기능이 크게 증가되면서 회복되는 것을 보여주었다.

실험예 3-4: 세포 재생 효능 조사

인간 정상 섬유아세포를 plate에 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 배양하였다. Scar?? Scratcher(SPL)로 긁은 후 HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Gibco, USA)로 세척하고 소혈청이 함유되지 않은 배지로 교체하여 실시예 4(병풀겔)의 시료를 0, 5, 10, 20 μg/ml 의 농도로 첨가하여 48시간 37℃에서 배양하였다. 배양 후 세포 사진을 현미경(Leica)을 이용하여 촬영하였다. 결과는 도 1에 나타내었다. 실험결과, 실시예 4(병풀겔)를 5 μg/ml 처리 시 대조군 대비 손상된 세포가 재생되는 것으로 나타났다.

실험예 3-5: 세포 기능 활성화 측정

인간 정상 섬유아세포를 plate에 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 배양하였다. 그 후, 배지를 HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Gibco, USA)로 세척한 다음 UVB 50 mJ/cm²를 조사하고, 소혈청이 함유되지 않은 배지로 교체한 후 시료를 첨가하여 24시간 37℃에서 배양하였다. 세포의 배지 제거 후 HBSS로 세척하고 JC-1 dye가 첨가된 소혈청이 함유되지 않은 배지로 교체하여 차광 상태를 유지하면서 1 시간 동안 배양하였다. HBSS로 세척한 다음 ELISA reader 기로 형광 측정 (Red: Ex=530 nm, Em=590 nm / Green: Ex=485 nm, Em=530 nm) 을 하고 형광 현미경으로 촬영하였다. 측정 결과를 표 32에 나타내었다.

시험군	실험농도 (μg/ml)	Red/green (%)
비조사군	-	100.0
UVB 조사군	-	63.6
UVB + 실시예 4(병풀겔)	10	75.0
UVB + Adenosine	7	73.1

실험결과, 표 32에 나타난 바와 같이, 실시예 4 처리 시 UVB 조사로 감소된 세포 기능이 최대 11.4% 증가되면서 회복되는 것을 보여주었다.

실험예 4: 식물겔의 피부미백 효능평가

실험예 4-1: 멜라닌 생합성 억제 효과 측정

식물겔의 미백 효능을 측정하기 위해서 마우스의 멜라노마(B16-F1) 세포에 시료를 처리하여 실험을 실시하였다. 6 well plate에 10% 소혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium) 배지와 멜라노마(B16-F1) 세포를 1X10⁵세포/well 농도로 분주하고 24시간 동안 37℃, 5% CO₂조건에서 배양하였다. 24시간 후 시료를 α-Melanocyte stimulate hormone(α-MSH)과 10% 소혈청이 포함된 새로운 DMEM 배지에 농도 별로 희석하여 72시간 동안 배양한다. 72시간 배양 후 배지 모두 제거한 세포를 PBS(phosphate buffer, saline) 2㎖로 세척하고 1N NaOH 0.5㎖을 처리하여 세포를 1.5㎖ tube로 수거하여 세포 내 멜라닌을 얻었다. 수거한 세포를 96 well plate에 옮긴 후 450nm에서 흡광도를 측정하여 일정 단백질당 멜라닌양을 구하였다. Control은 용해 용매로 사용된 1,2-hexandiol을 처리한 것을 사용하였으며, α-MSH 처리군은 α-MSH와 용해 용매로 사용된 1,2-hexandiol을 함께 처리한 것을 사용하였다. 양성대조군으로는 Arbutin(SK Bioland)을 사용하였다. 멜라닌 생합성 저해 테스트 결과는 표 33에 나타내었다.

멜라닌 생성량 측정

시험군	실험농도 (μg/ml)	Melanin formation rate per cell (%)
Control		52.70
α-MSH 처리군		100.00
α-MSH + 실시예7(제주푸른콩겔)	50	85.11
α-MSH + 실시예8(철피석곡겔)	50	78.76
	100	72.76
	250	76.89
α-MSH + 실시예9(감태겔)	25	84.64
	50	78.93
	100	78.53
α-MSH + Arbutin	100	64.76

식물겔의 멜라닌 생성율을 확인한 바, 실시예 7, 실시예 8, 실시예 9 처리 시 α-MSH 로 인해 증가된 멜라닌 생성율을 감소함에 따라 멜라닌 생성 저해 효능이 있는 것으로 확인되었다.

실험예 4-2: 멜라닌을 생성하는 경로인 melanogenesis 관련 Tyrosinase , TRP-1, TRP-2 mRNA 발현량 조사

식물겔의 melanogenesis 관련 미백 효과를 측정하기 위해서 마우스의 멜라노마(B16-F1) 세포에 시료를 처리하여 실험을 실시하였다. 6 well plate에 10% 소혈청이 함유된 DMEM 배지와 멜라노마(B16-F1) 세포를 3X10⁵ cells/well 농도로 분주하고 24시간 동안 37℃, 5% CO₂조건에서 배양하였다. 24시간 후 시료를 α-MSH과 10% 소혈청이 포함된 새로운 DMEM 배지에 농도 별로 희석하여 24시간 동안 배양한다. 24시간 배양 후 배지 모두 제거한 세포를 PBS 2 ml로 세척하고 세포를 QIAzol^® (QIAGENL^®, USA)로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 Qubit^® fluoremeter with RNA BR Assay kit 를 이용하여 정량한 뒤 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시하였다. cDNA합성은 cDNA 합성 Kit (qPCRBIO cDNA Synthesis Kit, PCRBIOSYSTEMS, London, UK)를 사용하였고 Kit의 방법에 따라 실험을 수행하였다. Real-time PCR은 Real-time PCR Kit (2x qPCRBIO SyGreen Blue mix Lo-ROX, PCRBIOSYSTEMS, London, UK)를 이용하여 유전자를 증폭한 후 증폭산물을 정량 분석하였다. PCR에 사용된 Tyrosinase, Tyrosinase-related protein 1(TRP-1) 및 Tyrosine-related protein 2(TRP-2)와 GAPDH primer는 코스모진텍 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며, sequence는 아래 표 34에 나타내었다.

Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
Tyrosinase sense	TAT AAA CTC AGT GTT TCC CTT TAT CAC AA	27
Tyrosinase antisense	TCT ATG ATG ACA TGA AGT GGC AAA	28
TRP-1 sense	GTT CAA TGG CCA GGT CAG GA	29
TRP-1 antisense	CAA CGC AGC CAC TAC AGC A	30
TRP-2 sense	TGG CTC ACT CCT TCC TGA ATG	31
TRP-2 antisense	CAA ACA CAG GGT CGT TGG CT	32
GAPDH sense	GGC ATC TTG GGC TAC ACT GAG	33
GAPDH antisense	GGA AGA GTG GGA GTT GCT GTT G	34

cDNA 합성 반응 조건은 Tyrosinase, TRP-1 및 TRP-2와 GAPDH 모두 95℃에서 5초, 60℃에서 25초, 40 사이클이다. Control은 용해 용매로 사용된 1,2-hexandiol을 처리한 것을 사용하였으며, α-MSH 처리군은 α-MSH와 용해 용매로 사용된 1,2-hexandiol을 함께 처리한 것을 사용하였다. 양성대조군으로 사용된 Arbutin는 melanogenesis 관련 유전자 발현을 저해하는 물질로 사용되고 있다. 발현양의 결과를 표 35, 36, 37에 나타내었다.

Tyrosinase mRNA 발현량

시험군	Conc. (μg/ml)	Tyrosinase mRNA Expression rate (%)
Control	-	68.37
α-MSH 처리군	-	100.00
α-MSH + 실시예8(철피석곡겔)	50	77.23
	100	73.52
	250	72.70
α-MSH + 실시예9(감태겔)	25	76.10
	50	60.65
	100	73.57
α-MSH + Arbutin	100	83.45

TRP-1 mRNA 발현량

시험군	Conc. (μg/ml)	TRP-1 mRNA Expression rate (%)
Control		62.89
α-MSH 처리군		100.00
α-MSH + 실시예8(철피석곡겔)	50	80.35
	100	78.37
	250	75.75
α-MSH + 실시예9(감태겔)	25	85.52
	50	63.03
	100	80.18
α-MSH + Arbutin	100	86.97

식물겔의 melanonogenesis 관련 유전자 발현을 확인한 바, 실시예8, 실시예9 처리 시 α-MSH 인해 증가된 Tyrosinase 및 TRP-1 유전자 발현량이 감소하는 것으로 보아 멜라닌을 생성하는 경로인 melanonogenesis 저해에 의한 미백 효능이 있는 것을 확인하였다.

실험예 4-3: 멜라노좀을 전달하는 경로인 melanosome transfer 관련 PAR-2 mRNA 발현량 조사

식물겔의 melanosome transfer 관련 미백 효과를 측정하기 위해서 60 mm culture dish(corning)에 10% 소혈청이 함유된 DMEM 배지와 Immortalized human keratinocyte인 HaCaT를 2X10⁶ cells/well 농도로 분주하고 24시간 동안 37℃, 5% CO₂조건에서 배양하였다. 24시간 뒤, HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Gibco, USA)로 2번 washing한 후, HBSS를 넣고 UVB 30 mJ/cm²을조사한 다음 소혈청이 포함되지 않은 DMEM 배지로 시료를 농도 별로 처리하여 8시간 동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양한다. 8시간 배양 후 배지 모두 제거한 세포를 PBS 2 ml로 세척하고 세포를 QIAzol® (QIAGENL®, USA)로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 Qubit® fluoremeter with RNA BR Assay kit 를 이용하여 정량한 뒤 cDNA를 합성하여 Real-time PCR을 실시하였다. cDNA합성은 cDNA 합성 Kit (qPCRBIO cDNA Synthesis Kit, PCRBIOSYSTEMS, London, UK)를 사용하였고 Kit의 방법에 따라 실험을 수행하였다. Real-time PCR은 Real-time PCR Kit (2x qPCRBIO SyGreen Blue mix Lo-ROX, PCRBIOSYSTEMS, London, UK)를 이용하여 유전자를 증폭한 후 증폭산물을 정량 분석하였다. PCR에 사용된 Protease activated receptor 2 (PAR-2) 와 β-actin primer는 코스모진텍 (Korea)에서 합성하여 사용하였으며, sequence는 아래 표 37에 나타내었다.

Primers

Primer	Sequense (5' to 3')	SEQ ID NO
PAR-2 sense	TGC TAG CAG CCT CTC TCT CC	35
PAR-2 antisense	CCA GTG AGG ACA GAT GCA GA	36
β-actin sense	GGC ACC CAG CAC AAT GAA G	1
β-actin antisense	CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG	2

cDNA 합성 반응 조건은 PAR-2와 β-actin 모두 95℃에서 5초, 60℃에서 25초, 40 사이클이다. Control은 용해 용매로 사용된 1,2-hexandiol을 처리한 것을 사용하였으며, α-MSH 처리군은 α-MSH와 용해 용매로 사용된 1,2-hexandiol을 함께 처리한 것을 사용하였다. 양성대조군으로 사용된 EGCG는 PAR-2 유전자 발현을 저해하는 물질로 사용되고 있다. 발현양의 결과를 표 38에 나타내었다.

PAR-2 mRNA 발현량

시험군	Conc. (μg/ml)	PAR-2 mRNA Expression rate (%)
Control	-	51.01
UVB 조사군	-	100.00
UVB + 실시예7(제주푸른콩겔)	50	54.47
	100	55.85
	250	63.19
UVB + EGCG	3.5	66.26

식물겔의 melanonosome transfer 관련 유전자 발현을 확인한 바, 실시예7 처리 시 UVB 조사로 인해 증가된 PAR-2 유전자 발현량이 감소하는 것으로 보아 멜라노좀을 전달하는 경로인 melanonosome transfer 저해에 의한 미백 효능이 있는 것을 확인하였다.

제제예

한편, 본 발명의 식물겔을 포함하는 화장료 조성물의 제제예를 하기에 기술하였다. 다만, 하기의 제제예는 본 발명의 사용예를 구체적으로 설명하고자 하는 것일 뿐, 본 발명의 권리범위를 하기의 제제예로 한정하고자 하는 것은 아님은 당업자에게 자명하다.

제제예 1: 영양 화장수 (로션)의 제조

하기 표 39에 기재된 바와 같이, 실시예 1 내지 12에서 수득한 식물겔을 함유하는 영양화장수 (로션)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	원료	함량 (중량%)
1	실시예 1-12	10.0
2	시토스테롤	1.7
3	폴리길리세릴 2-올레이트	1.5
4	세테아레스-4	1.2
5	콜레스테롤	1.5
6	디세틸포스페이트	0.4
7	글리세롤	5.0
8	카르복시비닐폴리머	10.0
9	선플라워 오일	0.2
10	산탄검	0.3
11	방부제	미량
12	향료	미량
13	정제수	잔량

제제예 2: 유연 화장수 (스킨)의 제조

하기 표 40에 기재된 바와 같이, 실시예 1 내지 12에서 수득한 식물겔을 함유하는 유연화장수 (스킨)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	원료	함량 (중량%)
1	실시예 1-12	5.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌글리콜	2.0
4	프로필렌글리콜	2.0
5	폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유	1.0
6	에탄올	10.0
7	프리에탄올아민	0.1
8	방부제	미량
9	색소	미량
10	향료	미량
11	정제수	잔량

제제예 3: 영양크림 제조

하기 표 41에 기재된 바와 같이, 실시예 1 내지 12에서 수득한 식물겔을 함유하는 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	원료	함량 (중량%)
1	실시예 1-12	10.0
2	시토스테롤	4.0
3	폴리길리세릴 2-올레이트	3.0
4	세테아레스-4	2.0
5	콜레스테롤	3.0
6	디세틸포스페이트	0.4
7	농글리세롤	5.0
8	선플라워 오일	22.0
9	카르복시비닐폴리머	0.5
10	트리에탄올아민	0.5
11	방부제	미량
12	향료	미량
13	정제수	잔량

제제예 4: 에센스의 제조

하기 표 42에 기재된 바와 같이, 실시예 1 내지 12에서 수득한 식물겔을 함유하는 에센스를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	원료	함량 ( 중량% )
1	실시예 1-12	5.0
2	시토스테롤	1.7
3	폴리길리세릴 2-올레이트	1.5
4	세테아레스-4	2.0
5	콜레스테롤	3.0
6	디세틸포스페이트	0.4
7	농글리세롤	5.0
8	선플라워 오일	22.0
9	카르복시비닐폴리머	0.5
10	트리에탄올아민	0.5
11	방부제	미량
12	향료	미량
13	정제수	잔량

제제예 5: 파운데이션의 제조

하기 표 43에 기재된 바와 같이, 실시예 1 내지 12에서 수득한 식물겔을 함유하는 파운데이션을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	원료	함량 ( 중량% )
1	실시예 1-12	1.0
2	밀납	2.0
3	사이크로메치콘	2.0
4	유동파라핀	5.0
5	스쿠알란	5.0
6	스테아린산	2.0
7	친유성 모노스테이린산 글리세린	3.0
8	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
9	글리세린	4.0
10	프로필렌글리콜	3.0
11	부틸렌글리콜	3.0
12	트리에탄올아민	1.0
13	알루미늄마그네슘실리케이트	0.5
14	안료	12
15	방부제	미량
16	향료	미량
17	정제수	잔량

제제예 6: 헤어컨디셔너의 제조

하기 표 44에 기재된 바에 같이, 실시예 1 내지 12에서 수득한 식물겔을 함유하는 헤어컨디셔너를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	원료	함량 ( 중량% )
1	실시예 1-12	5.0
2	에탄올	3.5
3	글리세린	1.5
4	프로필렌글리콜	2.5
5	염화스테아릴트리에틴암모늄	2.0
6	색소	미량
7	향료	미량
8	정제수	잔량

<110> SK bioland Co., Ltd. <120> Use of Gel Comprising Plant As Raw Material <130> PN190183 <160> 36 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin sense primer <400> 1 ggcacccagc acaatgaag 19 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin antisense primer <400> 2 ccgatccaca cggagtactt g 21 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Aquaporin-3(AQP-3) sense primer <400> 3 gggaccagtc ggaagggat 19 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Aquaporin-3(AQP-3) antisense primer <400> 4 cacagatgga caggctgcct 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hyaluronic acid-2 (HAS-2) sense primer <400> 5 acaacacctt agttcctcta 20 <210> 6 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hyaluronic acid-2 (HAS-2) antisense primer <400> 6 agcagtgata tgtctcct 18 <210> 7 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CD-44 sense primer <400> 7 gctattgaaa gccttgcaga g 21 <210> 8 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CD-44 antisense primer <400> 8 cgcagatcga tttgaatata acc 23 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pro filaggrin (Pro FLG) sense primer <400> 9 ctgatggtat tcaagttggc t 21 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pro filaggrin (Pro FLG) antisense primer <400> 10 actgtgcttt ctgtgcttgt 20 <210> 11 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Occludin(OCDN) sense primer <400> 11 ccacctatca cttcagatca acaaa 25 <210> 12 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Occludin(OCDN) antisense primer <400> 12 ttcctgtagg ccagtgtcaa aat 23 <210> 13 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Serine Palmitoyl Transferase(SPT) sense primer <400> 13 tggtcatttg gcccaggtc 19 <210> 14 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Serine Palmitoyl Transferase(SPT) antisense primer <400> 14 tcccaaccat tggcttcaca tc 22 <210> 15 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Transglutaminse-1(TGase-1) sense primer <400> 15 tgaatagtga caaggtgtac tggca 25 <210> 16 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Transglutaminse-1(TGase-1) antisense primer <400> 16 ttgtgacaat gagtgtgccg at 22 <210> 17 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 sense primer <400> 17 ccacctatca cttcagatca acaaa 25 <210> 18 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 antisense primer <400> 18 ttcctgtagg ccagtgtcaa aat 23 <210> 19 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 sense primer <400> 19 gatgcggtat acgaggccc 19 <210> 20 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 antisense primer <400> 20 gatccagtat tcattccctg caa 23 <210> 21 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-9 sense primer <400> 21 aacatcttcg acgccatcg 19 <210> 22 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-9 antisense primer <400> 22 aatcgccagt acttcccatc c 21 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> collagen type I sense primer <400> 23 agcaagaacc ccaaggacaa 20 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> collagen type I antisense primer <400> 24 cgaactggaa tccatcggtc 20 <210> 25 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Elastin sense primer <400> 25 ggccattcct ggtggagttc c 21 <210> 26 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Elastin antisense primer <400> 26 aactggctta agaggtttgc ctcca 25 <210> 27 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tyrosinase sense primer <400> 27 tataaactca gtgtttccct ttatcacaa 29 <210> 28 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tyrosinase antisense primer <400> 28 tctatgatga catgaagtgg caaa 24 <210> 29 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP-1 sense primer <400> 29 gttcaatggc caggtcagga 20 <210> 30 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP-1 antisense primer <400> 30 caacgcagcc actacagca 19 <210> 31 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP-2 sense primer <400> 31 tggctcactc cttcctgaat g 21 <210> 32 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP-2 antisense primer <400> 32 caaacacagg gtcgttggct 20 <210> 33 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH sense primer <400> 33 ggcatcttgg gctacactga g 21 <210> 34 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH antisense primer <400> 34 ggaagagtgg gagttgctgt tg 22 <210> 35 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PAR-2 sense primer <400> 35 tgctagcagc ctctctctcc 20 <210> 36 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PAR-2 antisense primer <400> 36 ccagtgagga cagatgcaga 20

Claims

산화된 미세분쇄(pulverized) 홍삼 분말 및 잔량의 용매를 포함하는 식물겔 화장료 조성물에 있어서,
상기 조성물은 i) 피부보습용, ii) 피부장벽 강화용, 또는 iii) 피부노화방지용인, 조성물.
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