KR102162592B1 - 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 향장품 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 향장품의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 무독성, NO(Nitric oxide) 생성 억제, DPPH 라디칼 소거능 및 환원력이 우수한 항산화용 향장품의 제조방법에 관한 것이다.
Description
며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 향장품에 관한 것으로, 보다 상세하게는 무독성, NO(Nitric oxide) 생성 억제, DPPH 라디칼 소거능 및 환원력이 우수한 항산화 조성물에 관한 것이다.
생체가 살아가기 위해서는 영양분의 섭취는 물론, 활발하게 호흡해야 하는데 이 호흡을 통하여 들어간 산소가 영양성분을 연소시켜 에너지를 방출함으로써 육체적인 운동을 포함한 두뇌활동도 가능하게 된다.
이때 소량의 여러 가지 활성 산소종들과 반응성이 큰 여러 가지 유리기가 생기는데, 나이를 먹는다든지 또는 여러 가지 내외적인 요인에 의해서 활성산소나 유리기에 의한 조직손상이 증가한다.
활성산소는 단백질의 SH기와 반응해서 효소의 활성을 잃게 되거나 가교결합의 형성, DNA, RNA, 효소 및 세포막을 구성하고 있는 불포화 지방산을 산화시켜 과산화지질을 형성하게 하는데, 과산화지질은 생체에 매우 유독하여 생체의 기능을 저하시켜서 결국에는 동맥경화, 혈액순환장애, 피로, 당뇨병, 심장병, 간장장애, 발암, 암전이 등과 같은 질병의 원인이 되고 궁극적으로 노화의 원인이 된다. 이와 같이, 지질의 과산화를 막아주는 물질을 항산화 물질이라 한다.
현재 이러한 질병을 치료하기 위한 합성의약품이 널리 사용되고 있으나 독성 및 안전성이 문제시되면서 천연 유래의 보다 안전하고 효능이 있는 생리화학물질(phytochemicals)의 개발과 더불어 그를 이용한 다양한 기능성식품(functional foods, nutraceuticals)의 개발이 활발히 이루어지고 있다.
특히, 신체의 항산화력이 증가하면 자유 라디칼(free radical) 등 활성산소 종에 의한 피해를 감소시켜 암과 심장병 등 각종 질병의 위험을 감소시킬 수 있다는 보고 등으로부터, 항산화 활성이 높은 식품을 섭취하려는 소비자가 증가하고 있으며, 이러한 특허문헌으로 한국공개특허 제10-2004-0006823호 등이 있다.
이에 본 출원인은 항산화 활성을 높인 항산화 조성물 연구를 통해, 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화 조성물 및 이를 포함하는 건강식품을 제공하고자 한다.
상기한 바와 같은 목적은 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화 향장품 제조방법으로, 무독성, NO(Nitric oxide) 생성 억제, DPPH 라디칼 소거능 및 환원력이 우수한 항산화용 향장품의 제조방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 일 실시 예에 따른 항산화 조성물은 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 할 수 있다.
또한, 상기 며느리밑씻개 추출물은, 70중량% 에탄올로 추출될 수 있다.
또한, 상기 며느리밑씻개 추출물은 50~100 ug/ml이 될 수 있다.
또한, 상기 며느리밑씻개 추출물은 농도 의존적으로 NO생성억제, DPPH 라디칼 소거능 및 환원력이 증가될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시 예에 따른 건강식품은 며느리밑씻개추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 향장품을 포함할 수 있다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 향장품의 제조방법은 무독성이고, NO(Nitric oxide) 생성 억제, DPPH 라디칼 소거능 및 환원력이 우수하여 항산화 활성이 있다.
도 1은 며느리밑씻개 추출물의 세포 생존률을 나타낸다.
도 2는 며느리밑씻개 추출물의 NO 생성억제를 나타낸다.
도 3은 며느리밑씻개 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성을 나타낸다.
도 4는 며느리밑씻개 추출물의 환원력을 나타낸다.
도 2는 며느리밑씻개 추출물의 NO 생성억제를 나타낸다.
도 3은 며느리밑씻개 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성을 나타낸다.
도 4는 며느리밑씻개 추출물의 환원력을 나타낸다.
본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
따라서 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
이하, 도면을 참조하여 설명하기에 앞서, 본 발명의 요지를 드러내기 위해서 필요하지 않은 사항 즉 통상의 지식을 가진 당업자가 자명하게 부가할 수 있는 공지 구성에 대해서는 도시하지 않거나, 구체적으로 기술하지 않았음을 밝혀둔다.
며느리밑씻개(Polygonum thunbergii)는 크기 1~2m로서 들에서 흔히 자란다. 가지가 많이 갈라지면서 1~2m 뻗어가고 붉은빛이 돌며 네모진 줄기와 더불어 갈고리 같은 가시가 있어 다른 물체에 잘 붙는다. 잎은 어긋나고 삼각형으로 가장자리가 밋밋하며 잎 같은 턱잎이 있다.
꽃은 양성(兩性)이고 7~8월에 피며 가지 끝에 모여 달리고 꽃대에 잔털과 선모(腺毛)가 있다. 꽃잎이 없고 꽃받침은 깊게 5개로 갈라지며 연한 홍색이지만 끝부분은 적색이다. 수술은 8개, 암술은 3개이다. 열매는 수과로 둥글지만 다소 세모지고 흑색이며 대부분 꽃받침으로 싸여 있다. 어린 순을 나물로 한다. 한국, 일본, 중국에 분포한다.
본 발명은 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 향장품의 제조방법에 관한 것으로, 며느리밑씻개 전초를 건조한 다음 분말을 제조하는 단계; 상기 며느리밑씻개 전초 분말에 10배 중량의 70중량% 에탄올을 실온에서 24시간 동안 2회에 걸쳐 추출하는 단계; 상기 추출물을 여과기를 통해 여과시키는 단계; 및 상기 여과액을 증발기로 농축한 뒤 동결건조하는 단계를 포함하여 구성된다. 며느리밑씻개 추출물은 다음과 같이 추출하여 이용하였다.
<실시예1. 며느리밑씻개 추출물의 제조>
며느리밑씻개 전초 건조 분말에 10배 중량의 70중량% 에탄올을 실온에서 24시간 동안 2회 추출 후 여과기(Whatman No.2)를 통해 여과한 여액을 증발기(rotary vacuum evaporator:EYELA. Japan)로 농축 후 동결건조하여 실험 때까지 20℃에 보관한 후 사용하였다.
70중량% 에탄올로 추출된 며느리밑씻개 추출물의 항산화 활성을 확인하기 위해, 며느리밑씻개 추출물의 세포 생존률, NO 생성억제, DPPH 라디칼 소거활성 및 환원력에 대한 실험을 하였다.
<실험예1. 며느리밑씻개 추출물의 세포 생존률 실험>
며느리밑씻개 추출물이 세포의 생존률에 미치는 영향을 측정하기 위해 MTT 분석을 수행하여 실험하였다.
이를 위해, RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 2.0x105 cell/ml로 조절한 후 24웰 플레이트(well plate)에 분주 배양하고, 며느리밑씻개 추출물을 농도별(0, 25, 50, 75, 100 ug/ml의 농도)로 처리하여 24시간 배양하였다.
이후 MTT(5mg/ml)를 50ul를 가하여 침전물을 완전히 용해시킨 후, 마이크로 플레이트 판독기(Micro plate reader)를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
| 대조군 | 며느리밑씻개 추출물 농도 0ug/ml(며느리밑씻개 첨가하지 않음) |
| 시료군1 | 며느리밑씻개 추출물 농도 25ug/ml |
| 시료군2 | 며느리밑씻개 추출물 농도 50ug/ml |
| 시료군3 | 며느리밑씻개 추출물 농도 75ug/ml |
| 시료군4 | 며느리밑씻개 추출물 농도 100ug/ml |
상기 흡광도 측정은 복수 횟수(3회 이상) 반복 수행하였으며, 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하고, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포 생존률을 평가하였다. 이때, 세포생존율(Viability)(%) = (추출물 처리시의 흡광도/대조군의 흡광도)× 100을 이용하여 산출하였다.그 결과 도 1과 같이, 며느리밑씻개 추출물은 마우스의 대식세포의 생존률에 영향이 미치지 않는 것으로 독성이 없음을 확인하였다.
<실험예2. 며느리밑씻개 추출물의 NO(Nitric oxide) 생성 억제 실험>
며느리밑씻개 추출물에서 LPS로 유도된 NO 생성 억제 영향을 측정하기 위하여 ELISA 분석을 수행하였다.
RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 2.0x105 cell/ml로 조절한 후 24 웰플레이트(well plat)e에 분주 배양하고, LPS(500ng/ml)를 처리하고 1시간 후 추출물 시료를 농도(0, 25, 50, 75, 100 ug/ml의 농도)별로 처리하여 24시간 배양하였다.
이에 생성된 일산화질소(NO; Nitric oxide)는 그리스(Griess) 시약[1% (w/v) 설파닐아마이드(sulfanilamide), 0.1% (w/v) 나프틸에틸렌디아민(naphthylethylen
ediamine) in 2.5% (v/v) 포스포릭산(phosphoric acid)]를 사용하여 세포배양액에 녹아있는 NO2 -의 형태로 측정하였다.
이후, 세포배양액 100ul와 그리스(Griess)시약 100ul를 혼합하여 96 well plate에서 20분간 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과 도 2와 같이, 며느리밑씻개 추출물의 처리는 LPS에 의해 과생성된 NO의 생성을 억제하는 결과를 확인하였다.
<실험예3. 며느리밑씻개 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성 실험>
며느리밑씻개 추출물을 0, 25, 50, 75, 100 ug/ml의 농도로 메탄올에 녹여 제조한 시료에 0.2 mM의 DPPH를 가하고 실온에서 30분간 반응하였다. 반응이 끝난 뒤 515nm에서 흡광도를 측정하여 농도에 따른 DPPH 라디컬 소거능을 아래식으로 확인하였다. 시료를 첨가하지 않은 음성대조군과 비교하여 자유라디칼 소거활성을 백분율로 나타내었다.
| 대조군 | 며느리밑씻개 추출물농도 0ug/ml로 메탄올에 녹여 제조한 시료에 0.2 mM의 DPPH를 가하고 실온에서 30분간 반응 |
| 시료군1 | 며느리밑씻개 추출물 농도 25ug/mlug/ml로 메탄올에 녹여 제조한 시료에 0.2 mM의 DPPH를 가하고 실온에서 30분간 반응 |
| 시료군2 | 며느리밑씻개 추출물 농도 50ug/mlug/ml로 메탄올에 녹여 제조한 시료에 0.2 mM의 DPPH를 가하고 실온에서 30분간 반응 |
| 시료군3 | 며느리밑씻개 추출물 농도 75ug/mlug/ml로 메탄올에 녹여 제조한 시료에 0.2 mM의 DPPH를 가하고 실온에서 30분간 반응 |
| 시료군4 | 며느리밑씻개 추출물 농도 100ug/mlug/ml로 메탄올에 녹여 제조한 시료에 0.2 mM의 DPPH를 가하고 실온에서 30분간 반응 |
자유라디칼 소거 활성률(Scavenging rate)(%) = [1-(A1-A2)/A0]x100여기서, A0는 대조군의 흡광도, A1은 시료군의 흡광도, A2는 Blank(without sample)의 흡광도가 될 수 있다.
그 결과 도 3과 같이, 며느리밑씻개 추출물은 농도 의존적으로 DPPH radical 소거능이 증가한 것으로, 항산화 활성이 있음을 확인할 수 있다.
<실험예4. 며느리밑씻개 추출물의 환원력 실험>
며느리밑씻개 추출물의 환원력은 일반적인 환원력 실험에 따라 실험하였다.
환원력이 강한 물질은 생성된 활성 산소를 다시 환원시켜 항산화제로서의 역할을 할 수 있으며, 이는 활성산소에 의해 발생되는 많은 질병의 치료에 유용하게 사용될 것으로 기대된다. 이에, 며느리밑씻개 추출물의 환원력을 측정한 결과, 도 4와 같이 며느리밑씻개 추출물의 농도 의존적으로 환원력이 증가된 것을 확인할 수 있다. 이에, 항산화 활성이 있음을 확인할 수 있다.
한편, 항산화 활성이 확인된 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화 조성물을 건강식품, 향장품 및 의약품 등의 제조시 이용함으로써, 항산화 활성을 높인 건강식품, 향장품 및 의약품 등을 제공할 수 있다.
한편, 상기에서 도 1 내지 도 4를 이용하여 서술한 것은, 본 발명의 주요 사항만을 서술한 것으로, 그 기술적 범위 내에서 다양한 설계가 가능한 만큼, 본 발명이 도 1 내지 도 4의 구성에 한정되는 것이 아님은 자명하다.
Claims (1)
- 며느리밑씻개 전초를 건조한 다음 분말을 제조하는 단계;
상기 며느리밑씻개 전초 분말에 10배 중량의 70중량% 에탄올을 실온에서 24시간 동안 2회에 걸쳐 추출하는 단계;
상기 추출하는 단계를 통해 수득된 추출물을 여과기를 통해 여과시키는 단계;
상기 여과시키는 단계를 통해 수득된 여과액을 증발기로 농축한 뒤 동결건조하는 단계를 포함하여 구성되는 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 향장품의 제조방법에 있어서,
상기 며느리밑씻개 추출물은 농도가 25~100 ug/ml이 되는 것을 특징으로 하는 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 향장품의 제조방법.
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| KR1020200025897A KR102162592B1 (ko) | 2020-03-02 | 2020-03-02 | 며느리밑씻개 추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 향장품 |
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| KR101405429B1 (ko) | 2012-10-29 | 2014-06-11 | 정다운 | 야생초 화장품 |
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| KR20040006823A (ko) | 2002-07-15 | 2004-01-24 | 주식회사 케이티앤지 | 항산화 기능성 건강식품 및 그의 제조방법 |
-
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