KR102221750B1

KR102221750B1 - 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102221750B1
Application number: KR1020190138537A
Authority: KR
Inventors: 장수윤
Original assignee: 장수윤
Priority date: 2019-11-01
Filing date: 2019-11-01
Publication date: 2021-03-02

Abstract

본 발명에 따른 니파야자 추출물 제조방법에 따라 제조된 니파야자 추출물은 제조 시 순차적으로 여러 차례에 걸쳐 일정한 범위의 온도에서 가열함으로써 니파야자의 유효성분 추출시간을 획기적으로 감소시킴과 동시에 벤조피렌이 생성되지 않는 상태에서 높은 함량의 폴리페놀 및 플라보노이드가 포함될 수 있다. 또한 티로시나아제의 활성을 억제함으로써 탁월한 미백효과를 발현하여 다양한 화장, 미용제품에 사용될 수 있다.

Description

폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물{A manufacturing method of nipa fruticans wurmb composition having a high polyphenol and flavonoid contents and a cosmetic composition having nipa fruticans wurmb composition}

본 발명은 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 니파야자에 포함되는 폴리페놀 및 플라보노이드의 함량을 증가시키기 위해 순차적으로 여러 차례에 걸쳐 일정한 범위의 온도에서 가열함으로써 벤조피렌이 생성되지 않는 상태에서 높은 함량의 폴리페놀 및 플라보노이드가 포함된 니파야자 추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

최근 생활수준이 높아지고 식생활이 서구화되면서 영양과잉, 운동부족 등으로 인한 비만, 당뇨, 고혈압 및 심장병 등과 같은 생활 습관병(성인병) 발병이 높아지고 있다. 또한, 평균수명 연장으로 인한 노령화 사회로의 진입 속도가 빨라지면서 건강증진에 대한 관심이 높아지고 있으며, 이에 따라 홍삼, 글루코사민, 비타민 등을 이용한 건강 기능성 식품 수요가 늘고 있다.

한편, 활성산소와 자유 라디칼에 따른 산화적 스트레스는 지질, 단백질, DNA, 효소 등의 변성 및 파괴를 유발하고 이로 인해 노화 및 각종 질병이 발생된다는 것이 알려져 왔다.

즉, 산화적 스트레스를 견딜 수 있는 항산화 물질의 생체방어력에 이상이 생기거나 과도한 활성산소 및 자유 라디칼에 노출될 경우, 균형이 깨어져서 기질, 단백질, DNA 등이 비가역적으로 파괴되고, 그 결과 노화 및 암, 복합성 동맥경화, 관절염 및 파킨슨병 등과 같은 각종 질병이 유발되게 된다.

이러한 산화적 스트레스에 기인한 질병을 예방하고 개선하기 위해서, 항산화제를 개발하거나, 또는 항산화 효소의 발현을 유도하거나 비효소계 항산화 물질을 함유하는 약학제제 및 기능성 조성물을 개발하는 방향 등의 연구가 진행되어 왔다.

대표적인 항산화물질로 폴리페놀과 이와 유사한 플라보노이드 등을 고려할 수 있는데, 이러한 대표적 항산화물질의 함량이 높은 식물로 해죽순이라 알려진 니파야자에 대한 관심 대두되고 있는 실정이다.

니파야자는 인도, 말레이시아, 동남아시아 등의 맹그로브지대 습지에서 자란다. 뿌리는 땅속에서 여러 개로 뿌리는 땅속에서 여러 개로 갈라지며, 잎은 지면에서 뭉쳐나고 광택이 있는 녹색을 띤다. 그리고 꽃은 암수한그루이며, 지면의 잎겨드랑이에서 나오는데, 보통 10월에서 이듬해 6월 사이에 꽃대가 올라온다.

일반적으로 항산화물질 추출하기 위한 니파야자는 3월에서 5월 사이에 수확된 니파야자이며, 이때에 수확된 니파야자는 9월에서 11월 사이에 수확된 니파야자보다 월등히 폴리페놀과 플라보노이드를 함유하고 있는 것으로 알려졌다.

일반적으로 니파야자에서 항산화물질을 추출하기 위하여 열수추출과정을 거친다. 즉, 니파야자를 세척 및 절단 후, 물을 가하여 100℃ 정도에서 20시간 동안 추출하고 농축시켜서 폴리페놀과 플라보노이드가 포함된 추출물을 생성시킨다. 그러나 종래기술에 따르면 폴리페놀과 플라보노이드가 포함된 기능성 조성물을 제조하는데 있어서 거의 하루 정도를 열수 추출해야하는 문제점이 있다.

나아가, 가공되지 않은 니파야자에 포함된 폴리페놀과 플라보노이드가 열수추출로 추출되지만, 열수추출로 추출된 추출물에는 추출되기 전 가공되지 않은 나파야자에 포함된 폴리페놀과 플라보노이드의 함량에 근접한 함량을 나타내는 바, 이러한 항산화물질의 함량 증대에 영향을 못 미치는 문제점이 있다.

대한민국 공개특허 제10-2018-0003047호 (2018년 01월 09일)

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 순차적으로 여러 차례에 걸쳐 일정한 범위의 온도에서 가열함으로써 니파야자의 유효성분 추출시간을 획기적으로 감소함과 동시에 벤조피렌이 생성되지 않는 상태에서 높은 함량의 폴리페놀 및 플라보노이드가 포함된 니파야자 추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물의 제공을 목적으로 한다.

본 발명은 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법 및 이로부터 제조된 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일 양태는,

a) 니파야자의 세척하고 절단하는 단계;

b) 상기 절단된 니파야자를 50 내지 150℃에서 30 내지 120분간 가열하는 단계;

c) 상기 b) 단계 니파야자를 용매에 투입한 후, 30 내지 95℃에서 3 내지 10시간 동안 가열하는 단계;

d) 상기 니파야자를 용매와 분리한 후, 상기 용매를 20 내지 40℃에서 3 내지 10일간 정치하는 단계; 및

e) 상기 d) 단계 용매를 감압 농축한 후, 동결 건조하여 분말화하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법에 관한 것이다.

본 발명에서 상기 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 에틸아세테이트 및 글리세린에서 선택되는 어느 하나 또는 복수이다.

또한 본 발명에서 상기 b) 단계는,

b1) 상기 절단된 니파야자를 50 내지 100℃에서 30 내지 60분간 가열하는 단계;

b2) 상기 b1) 단계 니파야자를 100 내지 150℃에서 20 내지 40분간 가열하는 단계;

를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한 상기 e) 단계는,

e1) 상기 용매를 여과하는 단계;

e2) 상기 여과된 용매를 500 내지 700 mmHg의 조건에서 0.1 내지 3시간 동안 감압 농축하는 단계; 및

e3) 상기 감압 농축된 용매를 -60 내지 -20℃에서 1 내지 60분간 동결 건조한 후, 이를 분쇄하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 양태는 상기에 따른 제조방법으로 제조된 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물로, 상기 화장료 조성물은 전체 100 중량% 중 니파야자 추출물을 0.1 내지 10 중량% 함유하며, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 계면활성제-함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 미용팩에서 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

이하, 실시예 및 비교예를 들어 본 발명에 따른 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 더욱 상세히 설명한다. 다만 다음에 소개되는 구체예들은 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 예로서 제공되는 것이다.

따라서 본 발명은 이하 제시되는 구체예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있으며, 이하 제시되는 구체예들은 본 발명의 사상을 명확히 하기 위해 기재된 것일 뿐, 본 발명이 이에 제한되는 것은 아니다.

이때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.

또한 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서 사용되는 단수 형태는 문맥에서 특별한 지시가 없는 한 복수 형태도 포함하는 것으로 의도할 수 있다.

본 발명자들은 폴리페놀과 같은 유효성분의 함량이 높은 니파야자 추출물의 제조에 있어서, 유효성분의 함량과 수율을 최대한 높이면서도 벤조피렌 등의 유해성분 생성을 억제할 수 있는 니파야자 추출물의 제조방법을 연구하던 중, 순차적으로 여러 차례에 걸쳐 일정한 범위의 온도에서 가열함으로써 니파야자의 유효성분 추출시간을 획기적으로 감소함과 동시에 벤조피렌이 생성되지 않는 상태에서 높은 함량의 폴리페놀 및 플라보노이드가 포함된 니파야자 추출물의 수득 조건을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에서 ‘화장료’란, 피부의 개선을 직접 목적으로 하는 것은 아니지만, 인체를 청결 또는 미화하기 위하여 도찰(塗擦), 살포 기타 이와 유사한 방법으로 사용되는 물품으로써, 예컨대 화장수, 유액, 크림, 클렌징, 팩, 오일 리퀴드, 마사지료, 세정제, 탈취제, 핸드크림, 립 크림 등의 스킨 케어 화장료, 메이크업 베이스, 백분(白粉), 리퀴드 파운데이션, 유성 파운데이션, 볼연지, 아이섀도, 마스카라, 아이라이너, 아이브로우(eyebrow), 립스틱 등의 메이크업 화장료, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 세팅제 등의 모발 화장료, 제한제, 자외선 차단 유액이나 자외선 차단 크림 등의 자외선 방어 화장료 등을 포함한다.

또한 이들 화장료의 형상으로서는, 액상, 유액상, 크림상, 고형상, 페이스트상, 겔상, 분말상, 프레스상, 무스상, 스프레이상, 스틱상, 펜슬상 등 여러 가지 형태일 수 있다.

본 발명에서 ‘유효성분’이란, 피부 상태에 적용하여 예방, 개선 또는 보완 효과를 제공하는 화장료 조성물의 성분을 의미한다.

본 발명에서 ‘추출물’이란, 천연물로부터 분리된 활성성분 즉, 목적하는 활성을 보이는 물질을 의미하며, 상기 추출물에는 상기 추출과정을 거친 추출액을 농축 및 분획한 것도 포함한다.

본 발명에 따른 니파야자 추출물 제조방법은,

a) 니파야자의 세척하고 절단하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에서 상기 니파야자(Nypa fruticans Wurmb)는 맹그로브 숲에서 서식하는 야자나무과 식물로, Nypa 속의 유일한 종이다. 동남아시아 및 오세아니아의 열대에서 아열대 지역에 걸쳐 분포하여 서식한다. 뿌리는 땅속에서 여러 개로 갈라지며, 잎은 지면에서 뭉쳐나고 광택이 있는 녹색을 띤다. 그리고 꽃은 암수한그루이며, 발아 후 3 내지 4년 후에 솟아나며, 꽃대가 지하경에서 돋아나는 모습이 죽순을 닮았다고 하여 국내에서는 해죽순(海竹筍)으로 판매되고 있다. 또한 꽃은 지면의 잎겨드랑이에서 나오는데, 보통 10월에서 이듬해 6월 사이에 꽃대가 올라온다.

동남아시아에서 니파야자는 다용도로 사용되는 식물로, 수액은 식용 및 발효하여 식초로 사용되고, 싹, 잎, 줄기, 뿌리는 두통, 치통, 헤르페스, 결핵, 해독 및 인후염 등의 치료에 사용된다.

미얀마에서는 전통적으로 치아염증에 쓰던 식물로서, 최근에 한국에 수입되고 있으며, 2015년 8월 식품의약품안전처에서 식품재료로 등록되었다.

선행 연구에 따르면 니파야자는 다량의 페놀산과 플라보노이드를 함유하고 있고, 그에 따라 항산화 효과 및 콜레스테롤 억제 효과 등이 탁월하다고 보고되고 있다. 니파야자에는 주요 성분으로 클로로겐산(chlorogenic acid), 프로토카테츄산(protocatechuic acid), 켐페롤(kaempferol) 등이 포함되어 있다고 보고되어 있으며, 니파야자는 대식세포 염증 시 발생하는 다량의 염증성 매개물질 억제와 염증성 매개 물질을 조절하는 주요 기전인 NF-kB의 활성 억제를 통한 아질산염(nitrite)과 전염증성 사이토카인의 생성을 억제하였다는 연구가 보고되었다.

또한 니파야자의 미성숙 과일은 디저트로 이용되고 있으며, 수액은 와인이나 식초로 개발되어 판매되고 있다. 전통적으로 말레이시아에서는 nipa palm vinegar를 당뇨병에 사용하였으며, 최근 연구결과 고혈당 강하작용이 있는 것으로 보고되었다. 그러나 니파야자는 국내에 자생하지 않는 식물로 인지도가 매우 낮고 이에 대한 체계적인 연구는 국내에서 아직 미비한 실정이다.

본 발명에서 상기 니파야자는 뿌리, 열매, 잎 등 사용 부위를 한정하지 않으나, 바람직하게는 꽃대를 사용하는 것이 좋다. 니파야자의 꽃대를 사용하는 이유는 니파야자의 다른 어떤 부위보다 꽃대에 폴리페놀 등의 항산화 성분이 풍부하고, 셀레늄 등의 각종 영양성분이 풍부할 뿐 아니라, 우수한 항염증 효능을 보이기 때문이다.

본 발명에서 상기 a) 단계는 니파야자를 흐르는 물에 세척하여 표면의 불순물을 제거한 후, 이를 적당한 크기로 절단한다. 이때 세척 조건 및 절단 조건은 본 발명에서 한정하지 않는다.

예를 들어 상기 a) 단계를 거친 니파야자는 상온의 흐르는 물에 세척하여 불순물을 제거한 후, 이를 분쇄기 또는 파쇄기 등을 이용하여 분말의 크기가 3㎝ 이하가 되도록 분쇄하는 것이 바람직하다. 분말의 크기가 너무 큰 경우 유효성분의 추출이 어려울 수 있으며, 너무 작은 경우 여과가 곤란해질 수 있다.

본 발명에서 상기 b) 단계는 절단 및 손질된 니파야자를 50 내지 150℃에서 30 내지 120분간 가열하는 단계이다. 이를 통해 상기 니파야자를 단순히 열수추출하였을 때보다 훨씬 증대된 폴리페놀 및 플라보노이드 등과 같은 유효성분을 수득할 수 있다.

본 발명에서 상기 b) 단계로 더욱 상세하게는,

b1) 상기 절단된 니파야자를 50 내지 100℃에서 30 내지 60분간 가열하는 단계; 및

를 포함하여 진행할 수 있다.

상기와 같이 니파야자를 가열할 때 저온가열과 고온가열을 반복하여 진행하는 것은 니파야자의 주 성분인 셀룰로스 때문이다.

이를 더욱 상세히 설명하면 일반적으로 셀룰로스는 수백에서 수천 개의 D-포도당 단위체들이 β-글리코사이드 결합으로 연결된 선형 사슬의 다당류로, 다양한 녹색식물의 1차 세포벽의 중요한 구성요소이다. 특히 셀룰로스는 꼬임이나 분지가 일어나지 않으며, 막대 모양의 입체구조를 가지며, 여러 개의 히드록시기는 같은 사슬 내 또는 이웃 사슬에 있는 다른 히드록시기 또는 산소 원자와 수소결합을 형성하여 높은 인장강도 및 결정성을 가진다.

또한 셀룰로스는 고분자 가닥 사이와 가닥 내 수소결합의 위치에 따라 결정질 구조가 달라질 수 있는데, 이러한 셀룰로스의 구조적 결정질 구조는 식물에 따라 인장강도, 파단강도 등이 서로 다른 원인이 된다.

특히 니파야자의 경우 열대 지방에선 전통 가옥의 지붕을 만드는데 쓰일 정도로 강도가 높으며 매우 거친 경직성의 섬유질로, 이 때문에 유효성분을 수득하기 쉽지 않다. 대표적인 유효성분인 폴리페놀의 경우 가열에 의해 조직이 연화되고 섬유가 벌어지면서 식물 밖으로 용출될 수 있는데, 가열 온도나 시간을 잘 조절하지 못하면 대부분의 폴리페놀이 파괴될 수 있다.

본 발명에 따른 니파야자 추출물의 제조방법은 상기와 같은 단점을 개선하기 위한 것으로, 용매에 열수 추출하기 전에 먼저 50 내지 100℃에서 30 내지 60분간 저온 가열하여 유효 성분의 파괴 없이 니파야자를 이루는 셀룰로스 섬유질을 연화시키고 유효성분이 원활히 추출되도록 하며, 저온 가열이 끝난 이후에 100 내지 150℃에서 20 내지 40분간 고온 가열하여 저온에서 가열된 셀룰로스 섬유의 연화 효과를 극대화하며, 폴리페놀과 같은 유효성분의 생성을 촉진함과 동시에 유효 성분이 니파야자 내부에서 표면 쪽으로 이동할 수 있도록 한다.

본 발명에서 상기 b) 단계는 상기와 같이 저온 가열의 경우 50 내지 100℃에서 30 내지 60분간 진행하는 것이 좋다. 상기 온도 범위 및 시간 범위를 벗어나는 경우, 셀룰로스 섬유질의 연화가 제대로 이루어지지 않아 유효성분의 추출량이 줄어들거나, 가열 과정에서 유효성분의 파괴가 발생할 수 있다.

또한 고온 가열도 마찬가지로 100 내지 150℃에서 20 내지 40분간 진행하는 것이 좋으며, 상기 온도 범위 및 시간 범위를 벗어나는 경우 셀룰로스 내 유효성분의 생성 및 용출이 제대로 이루어지지 않거나 지나친 가열로 인해 유효성분의 파괴 또는 승화가 일어날 수 있다.

본 발명에서 상기 b) 단계는 니파야자를 오븐과 같은 열공급기를 이용하여 가열하는 것이 바람직하며, 필요에 따라 가열 중간에 일정량의 물을 분무한 후에 다시 가열을 진행하는 것이 좋다.

본 발명에서 상기 b) 단계를 통해 가열된 니파야자는 전체 수분 함량이 3 중량% 이하를 유지하는 것이 바람직하다. 니파야자의 수분 함량이 3 중량%를 초과하는 경우 폴리페놀과 같은 유효성분의 농축이 제대로 이루어지지 않아 추출물 내 유효성분의 양이 감소할 수 있다.

상기와 같이 가열된 니파야자는 용매에 투입한 후 가열하여 열수추출을 진행할 수 있다. 열수추출을 통해 증가된 니파야자의 유효성분을 손실 없이 추출할 수 있다.

상기 c) 단계 진행 시 사용 가능한 용매는 본 발명에서 한정하지 않는다. 예를 들어 상기 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 에틸아세테이트 등의 극성 또는 비극성 용매를 포함할 수 있으며, 이들은 단독으로 또는 둘 이상 혼합하여 사용하여도 무방하다.

상기 용매로 더욱 바람직하게는 에탄올과 물을 혼합하여 사용하되, 전체 용매 100 중량% 중 에탄올이 10 내지 90 중량%, 더욱 바람직하게는 65 내지 75 중량%를 포함하도록 첨가하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 상기 용매는 첨가량을 한정하지 않으나, 상기 니파야자를 100 중량부로 하였을 때 500 내지 1,500 중량부를 첨가하는 것이 바람직하다. 용매의 첨가량이 500 중량부 미만인 경우 과포화로 인해 용매 내 유효성분의 함량을 최대로 유지하기 어려우며, 1,500 중량부 초과인 경우 여과시간 증가로 인해 가공 비용이 상승할 수 있다.

본 발명에서 상기 c) 단계는 용매에 투입한 후, 30 내지 95℃에서 3 내지 10시간 동안 가열하는 것이 바람직하다. 상기 c) 단계에서 니파야자의 가열 온도 및 가열 시간이 상기 범위 미만인 경우 폴리페놀과 같은 유효성분의 추출량이 크게 감소할 수 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우 과도한 가열에 의한 유효성분의 파괴 또는 승화가 발생할 수 있다.

상기와 같이 니파야자의 유효성분을 열수추출한 후, 상기 d) 단계와 같이 니파야자를 용매와 분리한 후, 상기 용매를 식혀 유효성분을 안정화할 수 있다. 이때 상기 용매는 여과 조건을 한정하는 것은 아니며, 일예로, 상기 용액은 약 55㎛의 필터를 거쳐 여과시킨 다음, 공지의 원심박막농축기로 농축시킨다. 상기 농축을 위한 조건은, 80℃의 온도에서 1,200rpm으로 회전하는 원심박막농축기를 통해 추출용액을 농축시킬 수 있다.

여과된 용매는 상온(20 내지 40℃)에서 3 내지 10일간 정치할 수 있다. 이때 정치 과정에서 용매에 침전물이 발생하는 경우, 용매를 다시 여과하여 침전물을 제거하는 공정을 1회 이상 반복하여 용매의 순도를 높일 수 있다.

다음으로 상기와 같이 제조된 용매를 감압 농축한 후, 이를 동결건조하여 분말화한다(e) 단계). 이때 상기 e) 단계는,

e1) 상기 용매를 여과하는 단계;

e2) 상기 여과된 용매를 500 내지 700 mmHg의 조건에서 0.1 내지 3시간 감압 농축하는 단계; 및

를 포함하는 것을 특징으로 한다.

e1) 단계는 1차적으로 여과한 용매에서 미립자의 불순물을 다시 제거하는 단계로, 본 발명에서 상기 e1) 단계의 조건을 한정하는 것은 아니나, 필터페이퍼(filter paper)로 완전히 용매를 여과하는 것이 바람직하다.

e2) 단계는 감압 농축하는 단계로, 감압농축기(vacuum rotation evaporator)로 500 내지 700 mmHg, 50 내지 100℃의 조건에서 0.1 내지 3시간 동안 감압 농축하는 것이 좋다. 상기 범위는 추출물의 농축효율 및 농축된 추출물에 함유되는 유효성분의 양과 품질 등을 고려한 것으로, 상기 범위 미만에서 농축하는 경우, 감압에 소요되는 에너지양에 비해 효율성이 떨어지거나 유효성분의 변질이 발생할 수 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우 유효성분의 농축이 제대로 이루어지지 않거나 유효성분의 탄화가 발생할 수도 있다.

감압 농축된 용매는 동결건조기(Freeze dryer)를 이용하여 -60 내지 -20℃에서 1 내지 60분간 동결건조하는 것이 바람직하다. 이때 상기 동결건조는 수분의 상변이를 돕기 위해 본 동결 전에 예비 동결을 진행하는 것이 바람직하다. 동결 건조가 끝난 추출물은 균질기를 이용하여 1 내지 100 메쉬(mesh)로 분쇄하는 것이 바람직하다.

본 발명은 상기와 같은 제조방법으로 제조된 니파야자 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 포함한다. 이때 상기 화장료 조성물은 전체 100 중량% 중 니파야자 추출물을 0.1 내지 10 중량% 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은 다양한 형태의 제형을 가질 수 있다. 구체적으로 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 계면활성제-함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 미용팩에서 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

이하, 실시예 및 비교예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 다만 하기 실시예 및 비교예는 본 발명을 더욱 상세히 설명하기 위한 하나의 예시일 뿐, 본 발명이 하기 실시예 및 비교예에 제한되는 것은 아니다.

실시예 및 비교예를 통해 제조된 시편의 물성을 다음과 같이 측정하였다.

(폴리페놀)

총 폴리페놀 함량 측정은 건강기능식품공전 방법(Korea Food and Drug Administration 2012)을 응용하여 측정하였다. 즉, 시료 일정량을 칭량하여 증류수를 가하여 초음파 처리하여 용해시킨 각각의 시료 1㎖에 증류수 7.5㎖와 Folin-Ciocalteau’regent(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO,USA) 0.5 ㎖, 35% Na2CO3(Sigma-Aldrich) 1㎖를 순서대로 가한 다음 암소에서 1시간 동안 반응시킨 후 UV/VIS분광광도계(UV-1700, Shimadzu Co., Kyoto, Japan)를 사용하여 760㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때 탄닌산(Sigma-Aldrich)을 표준물질로 사용하여 검량곡선을 작성하고 이로부터 총 폴리페놀 함량을 구하였다.

(항산화력)

DPPH 자유 라디칼(Sigma, St. Louis, USA)의 소거 활성을 기초로 하여 평가하였다. 구체적으로 각 20㎕의 시료를 180㎕의 DPPH 용액 (0.1 mM, in absolute ethanol)에 첨가하였다. 시료와 혼합후에 30분간 정치하고, 흡광도(optical density)를 518㎚에서 ELISA 리더(TECAN, Salzburg, Austria)를 사용하여 측정하였다.

자유 라디칼 소거 활성은 다음 식으로 표시하였으며, 억제율(%) = [1-(시료 O.D. / 대조군 O.D.)] ×100, IC₅₀ 값은 50％의 DPPH 자유 라디칼을 소거할 수 있는 농도로 정의하였다. 이때 각 시료는 L-아스코르브산(Vitamin C)을 양성대조군으로 사용하였다.

(세포 독성)

먼저 생쥐 섬유아세포(fibroblast: NIH 3T3)를 한국 세포주 은행에서 분양받아 사용하였다. 상기 세포는 10% 태우혈청, 스트렙토마이신 (100U/㎖) 및 페니실린 (100U/㎖)을 함유한 RPMI 1640 배지 (Gibco BRL)로 CO₂ 배양기에서 37℃로 배양하여 실험에 사용하였다. 실험군은 정상 대조군, 하기 실시예 및 비교예를 통해 제조된 시료로 나누어 실험하였다. 실험은 섬유아세포 (NIH 3T3 cell: 2×10⁵ cells/well)를 96 웰 플레이트에서 1일간 배양한 후 대조군에는 인산완충액(PBS)을 첨가하고, 각 시료(폴리페논 농도: 100, 200, 300 ㎍/㎖ PBS)로 나누어 각각 배양액에 첨가한 후 CO₂ 배양기에서 24시간 동안 배양한 후 세포활성(Cell viability)을 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)법으로 측정하였다. 대조군에 대한 실험군의 흡광도를 비율로 환산하여 세포활성을 평가하였고, 3회 반복 실험을 실시하였다

(미백 특성)

먼저 완충용액(0.1 M potassium phosphate buffer, pH 6.5) 220㎕에 실시예 및 비교예를 통해 제조된 시료 20㎕과 효소(mushroom tyrosinase, T3824-25KU, Sigma) 20㎕을 순서대로 투입한 후, 이 용액에 기질로 1.5mM의 L-tyrosinase(Sigma) 40㎕을 혼합하고 37℃에서 15분간 반응시켰다.

이와는 별개로 대조군으로 시료 무첨가구는 시료 대신 동일한 양의 0.1 M potassium phosphate buffer(pH 6.5)를 넣었으며, 양성 대조군으로는 시료 대신 동일한 양의 arbutin(TCI, Japan)을 사용하였다. 그리고 시료와 대조군을 UV/VIS spectrophotometer를 이용하여 490㎚에서 흡광도를 측정하고 하기 식 1에 대입하여 측정하였다.

[식 1]

(실시예 1 내지 4)

니파야자 추출 시 사용되는 용매의 종류 및 농도에 따른 총 폴리페놀의 함량을 알아보기 위해 먼저 3㎜의 얇은 절편 형태로 절단한 니파야자를 75℃에서 40분간 가열한 후, 다시 온도를 125℃로 올려 30분간 가열하여 니파야자의 수분함량을 3%로 조절하였다.

다음으로 상기 니파야자 200g에 용매 1ℓ를 혼합한 후, 65℃에서 6시간 동안 가열하여 열수추출하였다. 열수추출 후 용매와 니파야자를 분리한 후, 용매를 상온(20℃)에서 6일 동안 정치하고 이를 감압농축하여 용매를 제거한 뒤 -40℃에서 동결건조하여 분말화하였다. 이때 실시예에서 사용된 용매와 이에 따른 총 폴리페놀 함량은 하기 표 1에 기재하였으며, 실시예 1 내지 4의 항산화력은 하기 표 2에, 세포독성 실험 결과는 표 3, 미백 실험 결과는 표 4에 각각 기재하였다.

[표 1]

상기 표 1과 같이 본 발명에 따라 제조된 니파야자 추출물은 총 폴리페놀의 함량이 크게 증가된 것을 알 수 있다. 특히 니파야자의 열수추출 시 물과 에탄올이 30 : 70 중량비로 혼합된 용매를 사용한 4의 경우 다른 실시예들에 비해 총 폴리페놀 함량이 가장 많은 것을 알 수 있으며, 이에 반해 물과 에탄올이 50 : 50 중량비로 혼합된 용매를 사용한 2의 경우 오히려 가장 낮은 총 폴리페놀 함량을 보이고 있어 물과 에탄올이 30 : 70 중량비로 혼합된 것을 용매로 사용하는 것이 폴리페놀의 함량 측면에서 가장 우수한 것을 알 수 있다.

[표 2]

상기 표 2와 같이 본 발명에 따라 제조된 니파야자 추출물은 실시예 1 내지 4 모두 DPPH 소거능이 비교예인 녹차에 비해 우수한 것을 알 수 있다. 또한 IC₅₀은 추출물을 첨가하지 않은 대조군의 값을 50% 감소시키는 추출물의 농도를 나타낸 것으로 값이 작을수록 항산화활성이 높은 것임을 고려할 때, 실시예 1 내지 4의 추출물은 모두 항산화활성이 녹차에 비해 우수한 것을 알 수 있다.

[표 3]

상기 표 3과 같이 본 발명에 따라 제조된 니파야자 추출물(실시예 4)은 100㎍/㎖ 이하에서 세포 생존률 91% 이상을 보여 소량에서는 세포독성을 거의 나타내지 않는 것을 알 수 있다.

[표 4]

상기 표 4와 같이 본 발명에 따라 제조된 니파야자 추출물(실시예 4)은 저농도에서도 우수한 티로시나아제 저해활성을 보임을 알 수 있다. 특히 멜라닌 색소의 형성을 방해하는 성분인 알부틴(arbutin)과 비교 시 166 ㎍/㎖ 이하의 저농도에서는 니파야자 추출물의 티로시나제 저해활성 정도가 더 높으며, 166 ㎍/㎖ 보다 높은 농도에서는 알부틴이 더 높은 것을 알 수 있다.

(비교예 1)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 저온 가열을 진행하지 않은 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 2)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 저온 가열의 온도를 45℃에서 진행한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 3)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 저온 가열의 온도를 105℃에서 진행한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 4)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 저온 가열의 시간을 20분으로 한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 5)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 저온 가열의 시간을 70분으로 한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 6)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 고온 가열을 진행하지 않은 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 7)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 고온 가열의 온도를 95℃에서 진행한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 8)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 고온 가열의 온도를 155℃로 한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 9)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 고온 가열의 시간을 10분으로 한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

(비교예 10)

상기 실시예 4에서 추출물 제조 시 고온 가열의 시간을 50분으로 한 것을 제외하고 동일한 방법으로 추출물을 제조하였다.

[표 5]

상기 표 5와 같이 본 발명에 따라 제조된 니파야자 추출물은 열수 추출 전 저온 가열과 고온 가열을 선행하여 진행한 결과 총 폴리페놀 함량이 크게 증가하였으며, 이에 따라 높은 항산화력이 발현되는 것을 알 수 있다. 이와는 대조적으로 저온 가열이나 고온 가열을 아예 진행하지 않은 비교예 1, 6, 가열 시간 또는 가열 온도가 기준을 벗어난 비교예 2 내지 5 및 7 내지 10의 경우 모두 총 폴리페놀 함량이 감소하였으며, 이에 따라 본 발명에서 원하는 수준의 항산화력이 발현되지 않았음을 확인하였다.

이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다. 따라서 본 발명에 개시된 실시예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

a) 니파야자의 세척하고 절단하는 단계;
b) 상기 절단된 니파야자를 50 내지 150℃에서 30 내지 120분간 가열하는 단계;
c) 상기 b) 단계 니파야자를 물 25 내지 35 중량% 및 에탄올 65 내지 75 중량%로 혼합된 용매에 투입한 후, 30 내지 95℃에서 3 내지 10시간 동안 가열하는 단계;
d) 상기 니파야자를 용매와 분리한 후, 상기 용매를 20 내지 40℃에서 3 내지 10일간 정치하는 단계; 및
e) 상기 d) 단계 용매를 감압 농축한 후, 동결 건조하여 분말화하는 단계;
를 포함하되, 상기 b) 단계는,
b1) 상기 절단된 니파야자를 50 내지 100℃에서 30 내지 60분간 가열하는 단계;
b2) 상기 b1) 단계 니파야자를 100 내지 150℃에서 20 내지 40분간 가열하는 단계;
를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법.
삭제
삭제
제 1항에 있어서,
상기 e) 단계는,
e1) 상기 용매를 여과하는 단계;
e2) 상기 여과된 용매를 500 내지 700 mmHg의 조건에서 0.1 내지 3시간 동안 감압 농축하는 단계; 및
e3) 상기 감압 농축된 용매를 -60 내지 -20℃에서 1 내지 60분간 동결 건조한 후, 이를 분쇄하는 단계;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 증가된 니파야자 추출물 제조방법.
제 1항 또는 제 4항에 따른 제조방법으로 제조된 니파야자 추출물을 포함하는 화장료 조성물로, 상기 화장료 조성물은 전체 100 중량% 중 니파야자 추출물을 0.1 내지 10 중량% 함유하며,
용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 계면활성제-함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 미용팩에서 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.