KR101743566B1 - 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 누에고치를 이용하여 인삼열매를 발아시켜 특정 진세노사이드 가 강화되고, 피부개선활성이 증가된 발아 인삼열매 혼합발효추출물을 제조하는 방법에 관한 것으로서, 이와 같이 제조된 발아 인삼열매 혼합발효추출물은 우수한 피부주름개선, 피부보습 및 피부톤 개선활성을 나타낸다.

Description

발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물{Method for preparing fermented extract of germinated ginseng berry and cosmetic composition containing the same}

본 발명은 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 인삼열매를 누에고치 반죽으로 감싸 발아시킨 후, 누에고치 반죽 및 인삼 꽃과 혼합하여 발효하고 추출하여 혼합발효추출물을 제조하고, 이를 피부주름개선, 피부보습 및 피부 톤 개선용 화장료 조성물 제조에 이용하는 기술에 관한 것이다.

인삼은 다년생 반음지성 식물로 오가피과에 속하는 것으로서 중국, 한국의 다양한 의서에서 그 효능이 널리 알려져 있어 예로부터 많은 분야의 한약재로 사용되어 왔으며, 인삼의 성분은 탄수화물(60~70%), 함질소화합물(12~16%), 사포닌(3~6%), 지용성성분(1~2%), 회분(4~6%), 비타민(0.005%) 등을 함유하고 있다. 인삼의 생리 활성은 최근 체계적인 약리학적 접근으로 자양 강장 효과, 성기능 및 생식기능 부전 개선 효과, 항고혈압 및 항동맥경화 효과, 조혈기능 하인 및 빈혈치료 효과, 혈당 대사 및 당뇨병 개선 효과, 항암효과, 간장기능 부전 개선효과, 숙취해소 효과, 기생충 감염 방지 효과, 진통 소염 작용 등이 있다. 현대에 와서 인삼에 대해 널리 연구한 바, 인삼에는 다량의 진세노사이드(Ginsenoside)가 함유되어 있는 것으로 알려져 예로부터 사용되는 약재 이외에도 근래에는 식품에 적용하여 건강식품의 재료로 많이 사용하고 있다. 인삼은 보통 재배기간이 4년 이상 소요되며, 또한 최고 품질의 인삼을 얻기 위해서는 6년간 재배하여야 하는데 재배기간이 오래 걸리고, 또한 재배하는 동안 각종 병충해, 자연재해 등 여러 가지 이유로 인해 최초 재배량보다 수확량이 적게 되어 가격이 비싸며, 인삼을 얻기까지 많은 시간이 소요되는 단점이 있다.

인삼은 3년차 이상에서 인삼의 꽃이 피기 시작하며, 5월경에는 초록빛 색깔의 열매가 생기게 된다. 7월 중순이 되면 인삼의 초록빛 열매가 무르익으면서 붉게 변하면서 결실하게 된다. 인삼재배 농가에서는 인삼의 뿌리를 주로 활용하기 때문에 생식 성장보다는 뿌리의 성장을 촉진하기 위해 인삼 열매가 생기기 시작하면 인삼열매를 따서 버리고 있는 실정이며, 인삼 꽃 또한 개화 전후, 열매 생성 전에 제거하여 버리는 농업폐기물로 인식되어 있다. 하지만, 인삼열매와 인삼 꽃에도 진세노사이드(ginsenoside)가 다량 함유되어 있으나 그에 대한 연구는 미흡한 실정이다.

한편, 예로부터 동의보감을 비롯한 동양 의약서에는 애벌레, 번데기, 누에고치, 누에똥, 뽕잎, 실크 등 누에 및 이와 관련된 여러 가지 부산물들이 소갈증, 고혈압 및 불면증에 효과가 있다고 기록하고 있으며, 실크단백질이 체중감소 및 체지방 감소, 항산화 활성, 뇌기능 활성, 당뇨, 혈압 및 항종양 효과가 있는 것으로 보고하였다. 이러한 누에는 다른 천연물과 달리 재배시의 청결상태와 농약 등에 매우 민감하여 안정성 검정용 실험곤충으로서 주로 이용되는 등 재배에서부터 이미 무공해의 천연제품으로 알려져 있다. 이에, 현재 누에 및 부산물들은 피부코팅효과, 보습, 항산화능, 피부친화력 등의 효과를 갖고 있는 세리신(sericin)과 피브로인(Fibroin) 단백질을 가수분해하여 화장품의 주재료로 사용되고 있다.

이에 본 발명자들은 상기와 같은 기술에 착안하여, 누에고치를 활용하여 인삼열매를 발아시키는 방법에 대하여 연구하였으며, 인삼열매를 누에고치 반죽으로 감싸 발아시켜 단백질 성분을 함유하게 하고, 인삼 꽃을 더하여 발효하고 추출하는 경우 특정 진세노사이드 성분이 강화되며, 피부개선활성이 증가시킬 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

대한민국 등록특허 제10-0887631호(2009.03.02.) 대한민국 등록특허 제10-1366498호(2014.02.13.)

본 발명은 누에고치를 이용하여 인삼열매를 발아시켜 특정 진세노사이드 함량이 강화되고, 피부개선활성이 증가된 발아 인삼열매 발효추출물의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 발아 인삼열매 발효추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명에 따르면, (A)누에고치를 파쇄하여 분말화한 후 정제수를 가하여 누에고치 반죽을 제조하는 단계; (B)인삼열매를 누에고치 반죽에 묻어 수분을 공급하고 15~25℃의 온도를 유지하며 발아시키는 단계; (C)상기 발아된 인삼열매를 누에고치 반죽 및 인삼 꽃과 함께 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 이용하여 30~35℃에서 24~72시간 동안 옹기에서 발효하는 단계; 및 (D)용매로 추출하는 단계를 포함하는 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법이 제공된다.

상기 (B)단계에서 상기 인삼열매와 누에고치 반죽은 1:4~6 중량비율로 사용하는 것이 바람직하다. 상기 (C)단계에서 발아된 인삼열매, 누에고치 반죽 및 인삼 꽃은 동일 중량비로 사용하는 것이 바람직하다. 상기 (C)단계에서 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물은 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)인 것이 바람직하다.

상기 (D)단계에서 용매는 정제수, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에탄올, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 정제수를 용매로 사용한다.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따르면 상기 발아 인삼열매 혼합발효추출물을 조성물 총중량에 대해서 0.005~50중량%, 바람직하게는 0.01~20중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 상기 화장료 조성물은 피부주름개선용, 피부보습용 또는 피부 톤 개선용으로 사용할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.

본 발명의 방법으로 제조된 발아 인삼열매 혼합발효추출물은 진세노사이드 함량 및 단백질 성분이 강화되며, 피부 주름 개선 및 보습효과, 피부 톤 개선 효과가 우수하여 피부 개선용 화장료 조성물로 유용하다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 진세노사이드 함량을 나타내는 그래프이다.

이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명은 활용도가 낮은 인삼 열매 및 인삼 꽃을 특정한 방법으로 발효시켜 피부개선활성이 우수한 화장료로 이용하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따르면, (A)누에고치를 파쇄하여 분말화한 후 정제수를 가하여 누에고치 반죽을 제조하는 단계; (B)인삼열매를 누에고치 반죽에 묻어 수분을 공급하고 15~25℃의 온도를 유지하며 발아시키는 단계; (C)상기 발아된 인삼열매를 누에고치 반죽 및 인삼 꽃과 함께 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 이용하여 30~35℃에서 24~72시간 동안 옹기에서 발효하는 단계; 및 (D)용매로 추출하는 단계를 포함하는 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법이 제공된다.

각 단계를 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 먼저, 누에고치를 분쇄하여 분말화 한다. 여기에 정제수를 가하여 인삼열매의 발아에 이용할 누에고치 반죽을 제조한다.

이어서, 특정 유효성분을 강화하고, 추출의 효율성을 높이기 위해 인삼열매를 발아시킨다. 이때, 누에고치를 분쇄하여 정제수를 가하여 반죽형태로 제조된 누에고치 반죽을 활용한다. 과피와 과육을 분리하지 않은 인삼열매를 누에고치 반죽에 묻어, 누에고치 반죽이 인삼열매를 감싸도록 한다. 이때 인삼열매와 누에고치 반죽은 1:4~6 중량비율로 사용할 수 있다. 인삼열매를 묻어 15~25℃의 온도에서 수분을 공급하여 발아시킨다. 이와 같은 발아 과정을 거침으로써 발아에 따른 진세노사이드와 같은 유효성분의 변화 뿐 아니라, 누에고치 반죽의 유효성분이 발아 인삼열매에 흡수되는 효과가 있으며, 인삼열매의 추출효율을 증가시킬 수 있다는 장점이 있다.

상기 발아된 인삼열매는 다시 누에고치 반죽 및 인삼 꽃과 함께 혼합하여 발효시킨다. 본 발명의 일 구체예에 따르면, 발아 인삼열매, 누에고치 반죽 및 인삼 꽃을 동일 중량비로 혼합하여 사용한다. 이때 발효균으로는 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 이용하며, 바람직하게는 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)로 발효한다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 30~35℃에서 24~72시간 동안 옹기에서 발효한다. 이때 48시간 동안 발효한 경우에 진세노사이드와 단백질의 함량이 가장 높게 나타나 최적의 발효조건으로 확인되었다.

발효 후, 추출용매를 이용하여 발효추출물을 제조한다. 이때 용매로는 정제수, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에탄올, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 정제수를 용매로 사용한다.

상기 방법에 의해 제조된 혼합발효추출물은 우수한 콜라겐 생성 활성촉진 및 MMP-1 발현 억제, Hyalruronic acid 생성 촉진, tyrosinase 활성 억제 효과를 나타내었다. 상기 발아 인삼열매 발효추출물은 화장료 조성물 총중량에 대해서 0.005~50중량%, 바람직하게는 0.01~20중량% 함유된다.

상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.

[실시예]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 누에고치 반죽 제조

번데기를 제거한 누에고치를 분쇄하여 분말화한 후, 누에고치 분말 중량의 2배에 해당하는 정제수를 가하여 누에고치 반죽을 제조하였다.

실시예 1: 발아 인삼열매 혼합발효추출물 제조

건조된 인삼열매를 중량의 5배에 해당하는 누에고치 반죽(제조예 1)으로 감싼 후 20℃의 온도 조건하에서 수분을 공급하며 21일 동안 발아하였다. 발아과정을 거친 인삼열매와 동일 중량의 누에고치 반죽, 인삼 꽃을 혼합한 후 Aspergillus oryzae를 가하여 옹기에서 30℃에서 48시간 동안 발효하였다. 발효한 상기 인삼열매와 누에고치, 인삼 꽃 혼합물을 8배 중량의 정제수에 넣고 60℃에서 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Paper No.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압 농축하여 발아인삼열매 발효추출물을 제조하였다.

비교예 1: 인삼열매 혼합추출물

종자를 분리하여 제거한 인삼 열매의 과육과 과피의 건조물과 동일 중량의 인삼 꽃을 혼합한 후, 8배 중량의 정제수에 넣고 60℃에서 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Paper No.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압 농축하여 인삼열매 혼합추출물을 제조하였다.

비교예 2: 인삼열매 혼합발효추출물

종자를 분리하여 제거한 인삼 열매의 과육과 과피의 건조물과 동일 중량의 인삼 꽃을 혼합한 후, Aspergillus oryzae를 가하여 옹기에서 30℃에서 48시간 동안 발효하였다. 발효한 상기 인삼열매와 인삼 꽃 혼합물을 8배 중량의 정제수에 넣고 60℃에서 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Paper No.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압 농축하여 인삼열매 발효혼합추출물을 제조하였다.

비교예 3: 인삼열매 혼합발효추출물 제조

건조된 인삼열매와 인삼 꽃을 누에고치 반죽과 동일 중량으로 혼합하여 Aspergillus oryzae 균주를 가한 후 옹기에서 30℃에서 48시간 동안 발효하였다. 발효한 상기 인삼열매와 누에고치, 인삼 꽃 혼합물을 8배 중량의 정제수에 넣고 60℃에서 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출한 뒤 여과지(Qualitive Filter Paper No.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압농축하여 제조하였다.

시험예 1: 추출 효율 및 단백질 함량 측정

상기 실시예 1 및 비교예 3의 방법으로 제조된 인삼열매 혼합발효추출물의 추출 수율 및 단백질 함량을 측정하였다.

시료명	추출 수율(%)	단백질 함량(%)
실시예 1	12.3	31.80
비교예 3	8.6	28.94

상기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 누에고치 반죽으로 발아를 시킨 인삼열매를 함유한 혼합발효추출물 실시예 1에서 발아를 하지 않은 인삼열매 혼합발효 추출물인 비교예 3에 비하여 추출 수율과 단백질 함량이 높게 나타났다.

시험예 2: 진세노사이드 함량 측정

상기 실시예 1 및 비교예 3의 방법으로 제조된 인삼열매 혼합발효추출물에 함유된 생리활성물질인 진세노사이드 Rg2와 Rg3의 함량을 측정하였다.

도 1에서 확인되는 바와 같이, 누에고치 반죽으로 발아를 시킨 실시예 1의 발아 인삼열매 혼합발효추출물은 발아를 하지 않은 비교예 1의 인삼열매 혼합발효추출물에 비하여 진세노사이드 Rg2와 Rg3 함량이 높게 나타났다.

시험예 3: 엘라스테이즈 활성 억제 효과 시험

0.1 중량% Elastin-Congo red(Sigma, USA)가 포함된 2.5 중량% agar에 시료 및 엘라스테이즈 효소 용액(1,000 units/mL, Sigma, USA)을 혼합하고 상온에서 10분간 반응시킨 용액 10 ul 씩 주입 후 37℃에서 18시간 배양하였다. 배양 종료 후 엘라스테이즈의 활성에 의해 Elastin-Congo red agar 주변에 투명대가 형성되면 그 헤일로(halo)의 직경을 측정하여 엘라스테이즈 활성 저해 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기의 표 2에 나타내었다.

시료 농도 (㎍/㎖)	Halo diameter(cm)
	실시예 1	비교예 1	비교예 2	비교예 3	Elastase	Retinol Crystal
200	1.5	1.8	1.6	1.6	1.9	0.9
500	1.2	1.7	1.5	1.4
1000	1.0	1.5	1.3	1.1

헤일로 직경(Halo diameter)이 클수록 엘라스틴의 분해가 많이 된 것인데, 상기 표 2에서 확인되는 바와 같이 특히 실시예 1에서 헤일로 직경(Halo diameter)이 감소하여 가장 우수한 엘라스타제 억제 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

시험예 4: 콜라겐 생합성 촉진 효과 시험

사람의 정상 섬유아세포(CCD-986sk cell)를 48-well plate에 1×10⁵cells/well되게 접종하고 24시간 배양하였다. 각 시료를 serum이 없는 DMEM 배지에 농도별로 첨가하여 교체한 후 24시간 동안 더 배양하여 세포 배양액을 취하였다. 세포 배양액 내 콜라겐 양은 procollagen type I C-peptide(PIP) EIA kit(Takara Bio, Japan)을 사용하여 정량하였다. 측정된 콜라겐 양은 Lowry assay으로 구한 총 단백질 양으로 보정하였다. 그 결과를 표 3에 나타내었다.

시료명	처리 농도 (%)	Collagen 발현율(%)
실시예 1	0.1	86.6
비교예 1	0.1	70.3
비교예 2	0.1	76.1
비교예 3	0.1	80.4
아데노신	0.05	81.2

누에고치 반죽으로 발아시킨 후 누에고치 반죽과 인삼 꽃을 혼합한 후 발효 추출한 실시예 1의 발아 인삼열매 혼합발효추출물은, 인삼열매와 인삼 꽃을 혼합 후 정제수로 추출한 비교예 1의 인삼열매 혼합추출물, 인삼열매와 인삼 꽃을 혼합 후, 발효 추출한 비교예 2의 인삼열매 혼합발효추출물, 인삼열매를 발아시키지 않고 누에고치 반죽, 인삼 꽃과 혼합하여 발효 추출한 비교예 3의 인삼열매 혼합발효추출물에 비하여 우수한 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타내었다.

시험예 5: Hyaluronic acid 생성량 측정

HaCaT 세포를 6 well plate에 1×10⁶cells/well의 농도로 분주하여 배양한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. HaCaT 세포에 각 시료 50ug/m씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 회수한 배양액은 ELISA kit를 이용하여 hyaluronic acid(HA)의 생성량을 측정하였다. 그 결과를 표 4에 나타내었다.

시료명	처리 농도 (%)	HA 생성율 (%)
실시예 1	0.1	54.7
비교예 1	0.1	39.8
비교예 2	0.1	44.5
비교예 3	0.1	49.3
히알루론산	0.05	54.0

상기 표 4에서 확인되는 바와 같이 특히 실시예 1에서 가장 높은 hyaluronic acid(HA)의 생성율을 나타내어, 누에고치 반죽으로 발아시킨 후 발효추출한 발아 인삼열매 혼합발효추출물은 보습효과가 우수함을 알 수 있었다.

시험예 6: Tyrosinase 활성 억제 시험

Tyrosianse 억제 효과는 dopachrome 방법을 이용하여 측정하였다. 15ul의 mushroom tyrosinase-150 unit, 225ul의 2.5mM L-tyrosine, 225ul의 0.4M hepes buffer (pH 6.8), 그리고 ethanol용액 혹은 시료(1mg/ml)용액을 섞은 후 배양 전과 15분간 배양 후 각각의 흡광도를 475nm에서 측정하여 억제되는 정도를 살펴보았다. Tyrosinase 억제 정도는 다음과 같이 계산하였다.

A: 시료가 첨가된 용액의 배양 전 흡광도

B: 시료가 첨가된 용액의 배양 후 흡광도

C: 시료가 첨가되지 않은 용액(기준용액)의 배양 전 흡광도

D: 시료가 첨가되지 않은 용액(기준용액)의 배양 후 흡광도

(tyrosinase 억제효과는 100으로 나타낼 때 완전한 억제를 의미하며, 0일 때 전혀 억제를 하지 못하는 것을 의미한다.)

시료 농도 (㎍/㎖)	Inhibition ratio (%)
	실시예 1	비교예 1	비교예 2	비교예 3	Ascorbic acid
50	48.5	34.9	40.1	43.4	64.8
100	52.0	38.7	44.5	49.6	65.1
200	59.9	43.6	48.8	55.7	68.4
500	65.6	49.2	53.6	60.3	71.6

상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 실시예 1에서 가장 높은 티로시나제 저해율을 나타내었다.

실시예 2: 인삼열매 혼합추출물 함유하는 크림 제조

상기 실시예 1과 비교예 1~3을 포함한 크림을 하기 표 6의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성 분	함량(중량%)
	대조예	실시예 2	비교예 4	비교예 5	비교예 6
실시예 1	-	3.0	-	-	-
비교예 1	-	-	3.0	-	-
비교예 2	-	-	-	3.0	-
비교예 3	-	-	-	-	3.0
친유형 모노스테아린산글리세린	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
스테아릴알콜	2.2	2.2	2.2	2.2	2.2
스테아린산	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
밀납	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
솔비탄스테아레이트	0.6	0.6	0.6	0.6	0.6
정화식물유	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
스쿠알란	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
광물유	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
디메치콘	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
소듐마그네슘실리케이트	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
글리세린	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
베타인	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
트리에탄올아민	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
소듐히아루로네이트	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
방부제, 향, 색소	미량	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량
합계	100	100	100	100	100

시험예 7: 피부 주름 개선 효과 확인

인삼열매 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부주름 개선효과를 확인하기 위하여 건강한 30세에서 50세의 여성 50명을 대상으로 시험하였다.

피부주름 개선 효과를 확인하기 위해, 각 10명씩 나누어 상기 대조예, 비교예 및 실시예의 제형을 안면부에 하루 2회씩(아침 및 저녁) 4주간 도포하였다. 4주 후 주름의 개선 정도를 주름의 영상 분석을 통해 평가하였다.

주름의 영상분석에 의한 평가는 실험이 시작되기 전 눈 밑의 레플리카를 채취하고 실험이 종료된 직후의 레플리카를 눈 밑의 동일 부위에서 채취하여 영상분석을 통해 주름의 2차원적 분석으로 주름의 밀도를 측정하였다. 영상분석에 의한 주름 밀도의 측정 결과는 사용 전과 비교한 주름 밀도에 대한 감소율로 하기의 표 7에 나타내었다.

구분	주름 밀도 감소율 (%)
대조예	8
실시예 2	46
비교예 4	32
비교예 5	37
비교예 6	41

상기 표 7로부터 확인되는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1의 발아인삼열매 혼합발효추출물을 함유하는 실시예 2의 크림을 사용한 경우에 가장 높은 주름 개선 효과를 나타내었다.

시험예 8: 피부 보습 개선 효과 확인

생약복합추출물을 함유하는 화장료 조성물의 보습효과를 확인하기 위하여 건강한 30세에서 50세의 여성 50명을 대상으로 시험하였다.

피부보습 효과를 확인하기 위해, 각 10명씩 나누어 상기 대조예, 비교예 및 실시예의 제형을 안면부에 하루 2회씩(아침 및 저녁) 2주간 도포하였다. 실험이 시작되기 전, 측정하고자 하는 2부위를 정하고 피부의 수분량을 각각 3회에 걸쳐 측정한 후 2주간 도포(2회/일) 한 후, 피부 수분함량 측정 장치를 이용하여 각질층 바로 아래의 표피층의 수분을 측정하였다. 상기 측정결과를 표 8에 정리하였다.

구분	초기(D0) 평균	2주(D14) 평균	수분 증가량(%)
대조예	34	38	11.8
실시예 2	33	48	45.5
비교예 4	33	40	21.2
비교예 5	34	43	26.5
비교예 6	35	49	40.0

상기 표 8로부터 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예 2의 크림을 사용한 경우에 가장 우수한 보습효과를 나타내었다.

시험예 9: 피부 톤 개선 효과 확인

생약복합추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 톤 개선효과를 확인하기 위하여 건강한 30세에서 50세의 여성 50명을 대상으로 시험하였다.

피부 톤 개선 효과를 확인하기 위해, 각 10명씩 나누어 상기 대조예, 비교예 및 실시예의 제형을 안면부에 하루 2회씩(아침 및 저녁) 4주간 도포하였다. 실험이 시작되기 전, 측정하고자 하는 피부의 톤을 측정한 후 4주간 도포(2회/일) 한 후, 피부의 톤 개선도를 색차계를 사용하여 그 효과를 측정하였다. 색을 표시하는 데에는 L*, a*, b*표색계를 쓰며 본 실험에서는 주로 L*값(명도)을 지표로 하였다. L*값은 검정색(L*=0)으로부터 흰색(L*=100) 까지를 나타내며 4주 후의 ΔL*를 구하여, 그 결과를 하기 표 9에 정리하였다.

구분	ΔL*
대조예	0.44
실시예 2	12.34
비교예 4	4.23
비교예 5	8.76
비교예 6	11.09

상기 표 9에서 확인되는 바와 같이, 실시예 2의 크림에서 가장 우수한 피부 톤 개선 효과를 나타내었다.

Claims (8)

1. (A)누에고치를 파쇄하여 분말화한 후 정제수를 가하여 누에고치 반죽을 제조하는 단계;
   (B)인삼열매를 누에고치 반죽에 묻어 수분을 공급하고 15~25℃의 온도를 유지하며 발아시키는 단계;
   (C)상기 발아된 인삼열매를 누에고치 반죽 및 인삼 꽃과 함께 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 이용하여 30~35℃에서 24~72시간동안 옹기에서 발효하는 단계; 및
   (D)용매로 추출하는 단계를 포함하는 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법.
2. 제1항에 있어서, (B)단계에서 상기 인삼열매와 누에고치 반죽은 1:4~6 중량비율로 사용하는 것임을 특징으로 하는 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법.
3. 제1항에 있어서, (C)단계에서 상기 발아된 인삼열매, 누에고치 반죽 및 인삼 꽃은 동일 중량비로 혼합하는 것임을 특징으로 하는 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법.
4. 제1항에 있어서, (C)단계에서 상기 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물은 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)인 것을 특징으로 하는 발아 인삼열매 혼합발효추출물의 제조방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 의하여 제조되는 발아 인삼열매 혼합발효추출물을 조성물 총중량에 대해서 0.005~50중량% 함유하는 화장료 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부주름 개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
7. 제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부보습용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
8. 제5항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 톤 개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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