KR102152790B1 - 멜라닌의 탈색 촉진용 조성물 - Google Patents

멜라닌의 탈색 촉진용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규한 트라메테스속 균주 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 나무 및 토양 등에서 분리되어 라카아제 활성을 갖는 신규한 트라메테스속 균주와, 이를 이용한 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 제공하는 균주의 배양액은 피부에 표출된 각질층의 멜라닌을 직접 탈색 및 분해하여 단기간에 미백효과를 볼 수 있고, 또한 멜라닌에 특이적으로 작용하기 때문에 부작용 및 독성 효과를 방지할 수 있다.

Description

멜라닌의 탈색 촉진용 조성물{Composition of decolorizationing of melanine}
본 발명은 멜라닌 탈색 효소를 생산하는 트라메테스속 균주 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 나무 및 토양 등에서 분리되어 라카아제 활성을 갖는 신규한 트라메테스속 균주와, 이를 이용한 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
피부는 신체조직 중 직접적으로 외부환경에 노출되어 있으며, 인체의 내부와 외부환경 사이의 방어벽 역할을 하여 화학물질이나 자외선을 포함한 외부 환경오염 물질 및 미생물의 침입을 방어함으로써 주위환경으로부터 생체를 보호한다. 또한 피부는 멜라닌, 헤모글로빈(hemoglobin), 카로틴(carotene) 등에 의해 색이 결정되는데 이 중에서도 멜라닌이 가장 중요한 역할을 한다. 멜라닌은 사람의 피부색을 결정하는 것 이외에도 자외선 흡수 작용, 자유 라디칼 소거제(free radical scavenger) 등과 같은 피부 보호 작용을 수행한다. 그러나 자외선의 과다 노출, 대기 오염, 스트레스 등과 같은 외부의 환경 변화에 의하여 멜라닌이 과다하게 생성되면 피부 내에서 색소 침착 현상을 일으켜 피부의 흑화(melanism) 또는 기미, 주근깨 등의 원인이 된다. 멜라닌이 국소적으로 과도하게 합성되거나, 피부 병변 및 노화에 따른 피부의 생리 기능이 떨어지게 되면, 멜라닌이 피부 표면에 침착되어 기미, 주근깨 및 다양한 색소 침착을 유발하게 된다. 상기한 바와 같이 피부 흑화의 원인과 기작이 밝혀지면서, 미백 화장료의 제조에 있어 피부 흑화 과정에 관여하는 효소인 티로시나아제의 활성 저해 효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 또는 멜라닌 생성 과정 중에서 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 일반적으로 사용되고 있다
멜라닌(melanine)은 동물, 식물, 곤충, 세균 및 곰팡이에 널리 존재하며 주로 외부 스트레스로부터 세포를 보호하는 기능을 수행한다. 구체적으로, 상기 동물의 경우 자외선으로부터 피하조직을 보호하고, 식물의 경우 세포벽의 구성 성분에 해당하며 곤충의 경우 표피 강화제로서 기능하며, 세균의 경우 항생제 저항성을 갖도록 하고 곰팡이의 경우 식물병 발생원으로서 기능하는 것으로 보고되어 있다. 상기 멜라닌은 멜라노사이트(melanocyte)의 멜라노솜(melanosome)으로부터 생성된다. 상기 멜라노솜에 생성된 멜라닌 과립은 멜라노솜 내에 포함된 상태로 수지상돌기의 말단으로 이동하며, 멜라노솜이 함유된 수상돌기의 말단은 각질형성세포(keratinocyte)의 식세포작용에 의해 각질형성세포로 전달된 후, 상기 각질형성세포의 핵 주위에 축적된다. 상기 멜라닌 과립의 이동 과정에 영향을 미치는 요인은 호르몬 및 자외선 등이 존재하나 일차적으로 유전적인 영향이 크게 작용한다.
피부 미백제는 알부틴, 식물유래 추출물인 감초 추출물, 닥나무 추출물 등의 티로시나제(tyrosinase) 저해제가 대부분을 차지하고, 항산화제(비타민C), 활성산소 제거제(코엔자임 Q10, SOD, 비타민 E) 등의 기존 고시 미백제들이 제품화되고 있지만, 미백 효과를 보기 위해서는 오랜 기간(1~2개월)이 소요되고, 최근에는 이들 성분들은 멜라닌 생성 억제작용 외에 피부괴사, 피부 세포 독성, 색소 세포 변성, 피부 자극 유발 등의 심각한 부작용을 동반하는 것으로 알려져 있다.
이에, 피부에 더욱 안전하고 멜라닌 구조에 근거한 특이적 고활성을 지닌 신규 피부 미백제가 필요로 되는 실정이다.
본 발명의 일 목적은 신규한 트라메테스속 균주, 이의 배양액 또는 그로부터 얻어진 추출물을 제공하고자 한다.
본 발명의 다른 목적은 상기한 신규한 트라메테스속 균주, 이의 배양액 또는 그로부터 얻어진 추출물의 라카아제 효소로의 용도를 제공하고자 한다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기한 신규한 트라메테스속 균주, 이의 배양액 또는 그로부터 얻어진 추출물의 피부 미백용 조성물로의 용도를 제공하고자 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명자들은 멜라닌과 리그닌이 유사한 구조를 갖는 생물 고분자인 것에 착안하여, 리그닌을 분해할 수 있는 효소를 생산할 수 있는 미생물 중에서 특히 트라메테스(Trametes) 속 미생물로부터 얻은 배양액을 이용하는 경우 멜라닌의 분해, 즉 멜라닌을 탈색할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다. 본 발명자들은 상기 미생물을 '트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18'로 명명하고, 이를 2018년 10월 18일자로 한국생명공학연구원(기탁번호: [KCTC13666BP])에 기탁하였다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, 신규한 트라메테스속 균주(Trametes sp. Strain)에 관한 것이다.
본 발명에서 제공하는 신규 균주는 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)일 수 있다.
본 발명에서 제공하는 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)는 서열번호 1로 표시되는 18s rRNA를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 배양물에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "배양물"이란 미생물을 공지의 액체 배지 또는 고체 배지에서 배양시켜 수득한 산물을 의미하여, 미생물이 포함되는 개념이다.
본 발명에서 배양물은 본 발명의 균주를 배지에서 배양시킨 후 얻어진 산물로서, 상기 배지는 방선균 배양에 사용되는 공지의 액체 배지 또는 고체 배지에서 선택될 수 있으며, 예를 들어 GYSM 배지, 흄산 한천 배지(Humic acid agar medium), 베네트 한천 배지(Bennett's agar medium) 또는 맥아 추출 한천 배지(Malt extract agar medium)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 배양액에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "배양액"이란 미생물을 공지의 액체 배지 또는 고체 배지에서 배양시켜 수득한 산물을 의미하여, 미생물이 포함되지 않는 개념이다.
본 발명에서 배양액은 소정의 균주를 배지에서 배양시킨 후 여과 또는 원심분리 등을 통해 균체를 제거한 액상의 산물로서, 상기 배지는 방선균 배양에 사용되는 공지의 액체 배지 또는 고체 배지에서 선택될 수 있으며, 예를 들어 GYSM 배지, 흄산 한천 배지(Humic acid agar medium), 베네트 한천 배지(Bennett's agar medium)일 수 있다.
본 발명에서 상기 여과의 방법은 특별히 제한하지 않으며 예를 들면 1회 내지 10회, 1회 내지 5회 또는 1회 내지 3회 수행될 수 있다. 또한, 본 발명에서 상기 여과는 포어 사이즈가 5 내지 10 μm인 여과지를 사용하여 수행될 수 있고, 혹은 포어 사이즈가 0.1 내지 1.0 μm인 필터를 사용하여 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 배양물 또는 배양액의 추출물에 관한 것이다.
본 발명에서 상기 배양액 추출물은 당업계에 공지된 통상의 추출 방법, 예를 들어 용매 추출법을 사용하여 제조될 수 있다. 여기서, 상기 용매 추출법에 이용되는 추출 용매는 물, 탄소 수가 1 내지 4인 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올) 또는 이들의 혼합물인 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 다이에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 다이클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 이중 물, 알코올, 함수 알코올, 다이에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 클로로포름 또는 헥산에서 선택될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명에서 상기 추출 용매로 함수 알코올을 사용하는 경우 알코올 함량은 50~90%인 것이 바람직하고, 60~85%인 것이 더 바람직하다. 한편, 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 배양액 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.
또한, 본 발명에서 상기 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 다른 추출 방법을 통해 얻어질 수 있다. 예를 들어, 이산화탄소를 이용한 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리 또는 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등과 같이 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양물 또는 이의 배양액 유래 폴리페놀 산화 효소에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "폴리페놀 산화 효소(polyphenol oxidase; PPO)"는 모노페놀 모노옥시제네이즈 또는 클로로플라스틱이라고도 불리우며, 벤젠 고리에 하나의 하이드록실 치환기를 포함하는 모노페놀 분자의 o-하이드록실레이션(o-hydroxylaiton)을 촉매화한다. 상기 폴리페놀 산화 효소는 o-디페놀을 산화하여 o-퀴논을 형성하기도 한다. 아미노산 티로신은 단일 페놀 고리를 포함하고 있는데, 이는 상기 폴리페놀 산화 효소에 의해 산화되어 o-퀴논을 형성할 수 있다. 따라서, 상기 폴리페놀 산화 효소를 티로시네이즈로 간주한다.
본 발명의 폴리페놀 산화 효소의 효소 활성을 높이기 위하여, L-시스테인(L-cysteine) 및 사이링알데하이드(syringaldehyde) 중 적어도 하나의 중간 매개체(mediator)를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양물 또는 이의 배양액 유래 라카아제(laccase) 효소에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어, "라카아제(Laccases)(EC 1.10.3.2)"는 구리를 포함하는 산화 효소로, 식물, 진균 및 미생물에서 발견된다. 라카아제는 페놀 또는 그 유사 화합물에 대하여 작용하여 하나의 전자 산화(one-electron oxidations)를 수행한다. 라카아제는 자연적으로 발생하는 페놀계에 해당하는 모노리그놀(monolignols)의 산화적 커플링을 촉진하여 리그닌을 형성한다. 하지만, 플레우로투스 오스트게아투스(Pleurotus ostreatus)로부터 생산되는 다른 라카아제의 경우 리그닌을 파괴하는 바, 리그닌-변형 효소로 분류된다. 라카아제는 효소 활성을 위하여 2차 기질로 산소를 요구한다.
본 발명의 라카아제의 효소 활성을 높이기 위하여, L-시스테인(L-cysteine) 및 사이링알데하이드(syringaldehyde) 중 적어도 하나의 중간 매개체(mediator)를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양물, 이의 배양액, 이의 추출물 또는 이의 유래 라카아제(laccase) 효소를 유효 성분으로 포함하는 항산화제에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어, "항산화"라 함은 세포 내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼(free radical) 또는 활성산소종(reactive oxygen species;ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 것을 말하며, 자유 라디칼 또는 활성산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다.
본 발명의 항산화제는 효소 활성을 높이기 위하여, L-시스테인(L-cysteine) 및 사이링알데하이드(syringaldehyde) 중 적어도 하나의 중간 매개체(mediator)를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양물, 이의 배양액, 이의 추출물 또는 이의 유래 라카아제(laccase) 효소를 유효 성분으로 포함하는 과다색소침착에 기인한 색소 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 상기 피부 색소 질환은 과다색소침착에 기인한 질환으로, 피부 또는 손발톱의 특정 부위에서 멜라닌의 과도한 증가에 의해 다른 부위에 비해 검거나 어둡게 되는 질환을 의미한다. 바람직하게는 상기 피부 색소 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 잡티, 모반 또는 일광흑색증(solar lentigines) 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서, "예방"은 본 발명의 조성물을 이용하여 항산화, 피부 미백 또는 과다색소침착에 기인한 색소 질환의 증상을 차단하거나, 그 증상의 억제 또는 지연시키는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
본 발명에서, "개선"은 본 발명의 조성물을 이용하여 항산화, 피부 미백 또는 과다색소침착에 기인한 색소 질환의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에서, "치료"는 본 발명의 조성물을 이용하여 항산화, 피부 미백 또는 과다색소침착에 기인한 색소 질환의 증상이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
일반적으로 라카아제(laccase)는 분자량이 대략 50~70 kDa으로 크기 때문에 기질의 페놀(phenolic) 부분만 산화할 수 있어 멜라닌(melanin)과 같은 복잡한 거대구조의 난분해성 물질을 단독으로 분해하기에는 효율이 떨어지는 단점이 있다. 따라서, 분자량이 작은 중간 매개체가 존재하는 경우 라카아제는 비페놀성 화합물(nonphenolic compound)까지 산화할 수 있어 난분해성 물질의 분해 효율이 상승할 수 있다.
이에 본 발명의 조성물은 상기 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP) 유래 라카아제 효소가 멜라닌 색소에 작용하여 탈색 반응을 일으킬 수 있도록, L-시스테인(L-cysteine) 및 사이링알데하이드(syringaldehyde) 중 적어도 하나의 중간 매개체(mediator)를 더 포함할 수 있으며, L-시스테인(L-cysteine)이 피부 안정성이 높아 바람직하다.
본 발명에서 상기 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP) 유래 라카아제는 피부에 표출된 각질층의 멜라닌을 직접 탈색 및 분해하여 단기간에 미백효과를 볼 수 있고, 또한 멜라닌에 특이적으로 작용하기 때문에 부작용 및 독성 효과를 방지할 수 있다.
본 발명에서 상기 과다색소침착에 기인한 색소 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물은 약학, 화장료 또는 식품 조성물의 다양한 용도로 이용될 수 있으며, 바람직하게는 약학 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양물, 이의 배양액, 이의 추출물 또는 이의 유래 라카아제(laccase) 효소를 유효 성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어, "피부 개선"은 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진, 및/또는 피부 보습 효과를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어, "미백 효과"라 함은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 말한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "주름 개선 효과"라 함은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "탄력 증진 효과"라 함은 피부에 대한 탄력성이 증가되는 것으로, 피부 탄력의 손실을 억제 또는 저해하거나, 이미 감소된 탄력을 완화시키는 것을 말한다.
본 발명의 조성물은 상기 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP) 유래 라카아제 효소가 멜라닌 색소에 작용하여 탈색 반응을 일으킬 수 있도록, L-시스테인(L-cysteine) 및 사이링알데하이드(syringaldehyde) 중 적어도 하나의 중간 매개체(mediator)를 더 포함할 수 있으며, L-시스테인(L-cysteine)이 피부 안정성이 높아 바람직하다.
본 발명에서 상기 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP) 유래 라카아제는 피부에 표출된 각질층의 멜라닌을 직접 탈색 및 분해하여 단기간에 미백 효과를 볼 수 있고, 또한 멜라닌에 특이적으로 작용하기 때문에 부작용 및 독성 효과를 방지할 수 있다.
본 발명에서 상기 피부 미백용 조성물은 약학, 화장료 또는 식품 조성물의 다양한 용도로 이용될 수 있으며, 바람직하게는 화장료 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기한 바와 같이 본 발명에 따른 각 용도의 조성물은 약학 조성물로 사용할 수 있다. 여기서 약학 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 약제적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다.
본 발명에서, "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여시간, 투여경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약무형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 의약 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기한 바와 같이 본 발명에 따른 각 용도의 조성물은 화장료 조성물로 사용할 수 있다. 여기서 상기 화장료 조성물은 화장수, 영양로션, 영양에센스, 마사지 크림, 미용목욕물첨가제, 바디로션, 바디밀크, 배스오일, 베이비오일, 베이비파우더, 샤워겔, 샤워크림, 선스크린로션, 선스크린크림, 선탠크림, 스킨로션, 스킨크림, 자외선차단용 화장품, 크렌징밀크, 탈모제{화장용}, 페이스 및 바디로션, 페이스 및 바디크림, 피부미백크림, 핸드로션, 헤어로션, 화장용크림, 쟈스민오일, 목욕비누, 물비누, 미용비누, 샴푸, 손세정제(핸드클리너), 약용비누{비의료용}, 크림비누, 페이셜 워시, 전신 세정제, 두피 세정제, 헤어린스, 화장비누, 치아미백용 겔, 치약 등의 형태로 제조될 수 있다. 이를 위해 본 발명의 조성물은 화장료 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 용매나, 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물 내에 더 추가될 수 있는 용매의 종류는 특별히 한정하지 않으나, 예를 들어, 물, 식염수, DMSO 또는 이들의 조합을 사용할 수 있고, 담체, 부형제 또는 희석제로는 정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산 알콜, 지방산 에스테르, 계면활성제, 흡습제(humectant), 증점제, 항산화제, 점도 안정화제, 킬레이팅제, 완충제, 저급 알콜 등이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 필요에 따라 미백제, 보습제, 비타민, 자외선 차단제, 향수, 염료, 항생제, 항박테리아제, 항진균제를 포함할 수 있다.
상기 오일로서는 수소화 식물성유, 피마자유, 면실유, 올리브유, 야자인유, 호호바유, 아보카도유가 이용될 수 있으며, 왁스로는 밀랍, 경랍, 카르나우바, 칸델릴라, 몬탄, 세레신, 액체 파라핀, 라놀린이 이용될 수 있다.
지방산으로는 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 올레산이 이용될 수 있고, 지방산 알콜로는 세틸 알콜, 옥틸 도데칸올, 올레일 알콜, 판텐올, 라놀린 알콜, 스테아릴 알콜, 헥사데칸올이 이용될 수 있으며 지방산 에스테르로는 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트가 이용될 수 있다. 계면 활성제로는 당업계에 알려진 양이온 계면활성제, 음이온 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용가능하며 가능한 한 천연물 유래의 계면활성제가 바람직하다.
그 외에도 화장품 분야에서 널리 알려진 흡습제, 증점제, 항산화제 등을 포함할 수 있으며, 이들의 종류와 양은 당업계에 공지된 바에 따른다.
본 발명에 있어서, 상기한 바와 같이 본 발명에 따른 각 용도의 조성물은 식품 조성물로 사용할 수 있다. 여기서 상기 식품 조성물은 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 과자, 떡, 빵 등의 형태로 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없는 식물추출물로 구성된 것이므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물이 식품 조성물에 포함될 때 그 양은 전체 중량의 0.1 내지 50%의 비율로 첨가할 수 있다.
여기서, 상기 식품 조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 상기 식품 조성물을 함유하는 것 외에 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 즉, 천연 탄수화물로서 포도당 등의 모노사카라이드, 과당 등의 디사카라이드, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜 등을 포함할 수 있다. 상기 향미제로서는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등) 등을 들 수 있다.
그 외 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명에서 제공하는 신규한 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양액 또는 그로부터 얻어진 추출물은 피부에 표출된 각질층의 멜라닌을 직접 탈색 및 분해하여 단기간에 미백효과를 볼 수 있고, 또한 멜라닌에 특이적으로 작용하기 때문에 부작용 및 독성 효과를 방지할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 1에서 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 균사체를 인간 머리카락 멜라닌 0.06%를 포함하는 MDB 아가 배지에서 배양한 후 멜라닌 탈색 활성을 나타낸 것으로, 도 1(A)는 배양 전 검은색 존(zone)을 나타낸 것이고, 도 1(B)는 배양 후 15일이 경과한 뒤 투명 존을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1에서 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 18s rRNA에 기반하여 계통수(phylogenetic tree)를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 실시예 4에서 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 발효 효소액에 의한 멜라닌 탈색율의 변화를 나타낸 것이다(발효 효소액 (●), 발효 효소액+L-cysteine (■), 발효 효소액+syringaldehyde (▼)).
도 4는 본 발명의 실시예 5에서 인간 피부세포에서의 멜라닌을 염색한 현미경 사진을 나타낸 것으로, 보다 상세하게는 Fontana-Masson 멜라닌 염색 키트에 의해 염색된 멜라닌의 현미경 사진을 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 실시예 5에서 인간 피부세포에서의 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 발효 효소액의 영향을 나타낸 것으로, 보다 상세하게는 24시간 동안 효소 반응 후 피부세포 멜라닌의 현미경 사진을 나타낸 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
[준비예 1] 인간 머리카락으로부터 멜라닌(human hair melanin)의 추출
합성 멜라닌은 지방족 탄소(aliphatic carbon)가 부재(不在)하여 천연 멜라닌과 구조적으로 다르므로, 효소에 의한 분해 양상도 달라진다. 본 연구에서는 사람 머리카락 유래의 천연 멜라닌 및 합성 멜라닌에 대하여 탈색 효능을 나타내는 진균류를 선별하고자 한다. 천연 멜라닌은 아래의 방법으로 인간의 머리카락으로부터 추출하였다.
500ml의 1M 수산화나트륨에, 작은 조각으로 자른 15g의 인간 머리카락을 첨가하고, 교반기를 이용하여 상기 혼합물을 24시간 동안 교반하였다. 2400 x g의 조건으로 15분 동안 상기 혼합물을 원심분리 한 뒤, 갈색을 띄는 상등액 만을 회수하였다. 상기 상등액에 0.1M 염산을 첨가하여, pH를 감소시킴으로써 멜라닌 침전을 유도하였다. 이렇게 얻어진 침전물은 2400 x g의 조건으로 15분 동안 원심분리한 뒤, 0.1M 염산을 첨가하여 pH를 감소시키면서 멜라닌 침전시켰다. 상기 침전물을 2400 x g의 조건으로 15분 동안 원심분리하였다. 그런 다음, 0.1M 염산으로 세척하고, 2M 수산화나트륨을 첨가하여 중화시킨 뒤, 다시 6M HCl를 첨가하여 원심분리(2400 x g 15min) 하였으며, 이와 같은 과정을 육안으로 관찰되는 상등액이 띄는 색이 사라질 때까지 약 5번 반복하여 수행하였다. 최종 과정 이후 얻어진 침전물에 6M 염산을 첨가하고, 6시간 동안 교반기를 이용하여 교반한 뒤, 2400 x g의 조건으로 15분 동안 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 상등액이 제거된 침전물은 에탄올을 이용하여 세척한 뒤, 메탄올을 이용하여 용해시키고 증발기(evaporator)를 이용하여 완전히 건조 시킨 뒤에 아래의 실시예에서 사용하였다.
[실시예 1] 멜라닌 탈색 기능을 갖는 균주의 선별
경상남도 삼림 지역의 토양 또는 썩은 나무 등에서 채취한 100여개의 샘플과, 인산완충식염수(phosphate buffered saline; PBS)를 혼합하고, 이를 감자즙 아가(potato dextrose agar; PDA) 평판배지에 도말한 뒤, 25℃의 조건에서 5일 동안 배양하였다. 그런 다음, 멜라닌 탈색 기능을 갖는 균주를 선별하기 위하여, 5mm의 코르크 보러(Cork borer)를 이용하여 상기 PDA 평판배지 위에 도말된 균사를 아가 플러그로 만들고, 이를 0.6 g/L의 인간 헤어 멜라닌이 첨가된 맥아추출물 한천 배지(malt extract dextrose; MDB) (글루코스 4g/L, 맥아 추출물 10g/L, 펩톤 4g/L, 아가 15g/L)에 접종하고, 25℃의 조건에서 1~2주 동안 배양하였다. 상기 배지 상에서 투명환을 형성하는 균주만을 선별하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
또한, 상기 선별된 균주를 헤어 멜라닌이 첨가된 맥아 추출물 한천 배지를 사용하여 계대 배양 하였다. 상기 균주는 균주의 rRNA 서열 분석을 수행하는 통상의 방법에 의해 18s rRNA 서열 분석(서열번호 1)을 통해 계통학적으로 동정하였으며, 아래의 추가 실험에 사용되기 전까지 4℃에서 보관하였다.
도 1에 도시된 바와 같이, 고목에서 분리된 진균류 1종에서 투명환을 형성한 균주가 선별된 것을 확인하였다
또한, 도 2에 도시된 바와 같이, 상기 고목에서 분리된 진균류에 해당하는 균주의 18s rRNA 서열 분석 결과(서열번호 1)를 계통학적으로 해석하였을 때, 이와 같은 균주는 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina)에 속하는 균주인 것을 확인하였다.
상기와 같이 선별된 균주는 멜라닌의 탈색 기능을 갖는 신규한 균주로서, 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18으로 새롭게 명명하였다.
[실시예 2] Trametes velutina JS18의 배양
상기 실시예 1에서 선별된 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18을 맥아 추출물 한천 배지 평판배지 상에 접종하여 25℃에서 5일 동안 배양하였다. 그런 다음, 5mm의 코르크 보러(Cork borer)를 이용하여 상기 PDA 평판배지 위에 도말된 균사를 아가 플러그로 만들고, 이를 50ml의 전배양용 배지(Glucose 10 g/L, Yeast extract 5 g/L, Peptone 5 g/L, MgSO4·7H₂2O 1 g/L, CuSO4 0.124 g/L, syringic acid 0.198 g/L, pH 5.0)가 포함된 250ml 삼각플라스크에 접종하고, 25℃, 150 rpm의 조건으로 5일 동안 진탕배양 하였다. 이후, 상기 진탕배양액 10ml을 전배양과 같은 조성의 배지 200ml이 들어있는 1L의 삼각플러스크에 접종하고, 25℃, 150 rpm의 조건으로 7일간 추가로 본배양을 수행하였다.
[실시예 3] 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 배양액의 멜라닌 탈색 효소 확인
트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 배양액을 whatman No. 1 여과지(pore size, 7 μm)를 사용하여 여과하고 0.45 μm 필터를 사용하여 한번 더 여과 시킨 후 이를 발효 효소액으로 사용하였다. 상기 발효 효소액에 대하여 멜라닌 탈색효소로 알려진 라카아제(laccase), 망간 퍼옥시데이즈(manganese peroxidase), 리그닌 퍼옥시데이즈(lignin peroxidase) 활성을 각각 조사하였다. 라카아제(Laccase) 활성은 50 mM 소디움 아세테이트 버퍼(sodium acetate buffer)(pH 4.5)에서 2 mM ABTS(2,2'-azino bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate))을 기질로 사용하여 37℃에서 10 분간 조효소와 반응시켰으며, ABTS의 산화에 의해 생성된 산화물은 420 nm (εmax=36,000 M-1·cm-1)에서 측정하였다. 효소활성의 단위는 분당 1 μM의 기질을 산화시키는 효소의 양을 1 unit (U)로 하여, 1ml 당 존재하는 효소의 양에 해당하는 효소활성의 단위 값을 도출하여, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
효소 종류 라카아제 망간퍼옥시데이즈 리그닌퍼옥시데이즈
효소 활성
(unit/ml)		 98 - -
상기 표 1에서 보는 바와 같이, 망간퍼옥시데이즈 및 리그닌퍼옥시데이즈의 활성은 전혀 측정되지 않는 반면, 라카아제의 경우에는 98unit/ml의 효소활성을 나타내는 것을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 본 발명에 따른 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18의 배양액에 생산되는 라카아제가 멜라닌의 환원을 유도함으로써 탈색 반응을 일으킬 수 있음을 알 수 있다.
[실시예 4] 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 배양액의 멜라닌 탈색 효과 확인
트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 배양액을 whatman No. 1 여과지(pore size, 7 μm)를 사용하여 여과하고 0.45 μm 필터를 사용하여 한번 더 여과 시킨 후 단백질 농축기(protein concentrator)(10K MWCO)를 사용하여 10배 농축한 것을 발효 효소액으로 사용하였다. 발효 효소액에 대한 멜라닌 탈색 활성을 조사하기 위하여 합성 멜라닌과 함께 37℃ 에서 7일간 반응하였고, 매일 멜라닌 탈색율을 조사하였다. 여기에 중간 매개체로 일반적으로 사용하는 사이링알데하이드(syringaldehyde)와 화장품에 사용 가능한 중간 매개체로 L-시스테인(L-cysteine)을 각각 첨가하여 멜라닌 탈색율을 조사하였다. 멜라닌 탈색 활성은 50 mM 소디움 아세테이트 버퍼(pH 4.5) 0.8 ml, 합성멜라닌 (0.2 mg/ml) 0.1 ml, 발효 효소액 0.1 ml을 혼합하여 37℃에서 7일간 반응하였다. 멜라닌의 탈색율은 540 nm에서 흡광도를 측정하여 다음 공식에 따라 구하였다.
탈색율 (%)=[(개시 흡광도값)-(반응 종결 후 흡광도값)]/(개시 흡광도값)Х100.
그 결과 도 3에서 보는 바와 같이, 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18의 발효 효소액을 단독으로 멜라닌과 반응시킨 경우, 7일 반응한 후에도 멜라닌이 거의 탈색되지 않는 반면, 중간 매개체로 사이링알데하이드 또는 L-시스테인을 첨가한 경우는 반응시간이 경과함에 따라 멜라닌 탈색율이 조금씩 증가하여 7일 만에 사이링알데하이드 첨가 시에는 61%, L-시스테인의 첨가 시에는 45%의 탈색율을 나타내었다.
첨가한 중간 매개체 중 특히 L-시스테인의 경우 피부 자극성이 없어 화장품 원료로 사용하기에는 적합하므로, 본 발명의 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 발효 효소액과 같이 화장품 제형에 첨가하여 사용할 경우 기미, 주근깨, 검버섯 등의 피부 색소 탈색에 높은 효능을 보일 것으로 판단된다.
[실시예 5] 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 배양액의 피부 세포에서 멜라닌 탈색 효과 확인
멜라닌 색소를 포함하는 인간 피부세포의 조직 절편(Melanin TISSUE-TROL?? Control Slides, Sigma사)을 대상으로 발효 효소액의 멜라닌 탈색효능을 시험하였다. 멜라닌 색소가 침착된 피부세포 조직절편을 Fontana-Masson 멜라닌 염색 키트(Abcam사)를 사용하여 피부 세포 속의 멜라닌을 염색한 후 현미경으로 관찰하였다. 이후 피부 세포에 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18의 발효 효소액(5 unit)을 첨가하여 37℃에서 48시간 반응시킨 후 현미경으로 관찰하였다.
그 결과, 도 4와 5에서 보는 바와 같이, 피부 세포에 존재하던 검은색의 멜라닌 색소(도 4)는 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18의 발효 효소액으로 2일간 반응시킨 결과 모두 사라진 것을 확인할 수 있었다(도 5). 따라서, 본 발명에서 제공하는 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18의 발효 효소액은 2일 이내의 짧은 시간 안에 피부 속의 멜라닌 색소를 탈색할 수 있는 것을 알 수 있었다.
[실시예 6] 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 배양액의 관능 평가
제조된 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18의 발효 효소액의 기미잡티에 대한 미백 효과를 파악하기 위하여 얼굴에 기미가 있는 남성 및 여성(35∼50세 5명)을 대상으로 관능 평가를 진행하였다. 본 시료는 발효 효소액에 보습 성분인 식물성 글리세린과 경피 흡수 촉진 물질인 프로필렌 글리콜을 각각 효소액의 5~10% (v/v)의 농도로 첨가하여 사용하였다. 보습 성분을 강화한 본 시료를 얼굴의 기미가 있는 부위에 2주간 1일 2회씩 바르도록 하고 냄새, 흡수력, 보습력, 미백 항목에 대해 5점 평가법으로 비교하여 점수의 평균치를 계산하였다.
실시예1 실시예2 실시예3 실시예4 실시예5
냄새 4 4 4 3 3
흡수력 3 2 2 3 2
보습력 2 1 2 2 1
미백 1 2 2 2 2
1. 아주 좋음 2. 좋음 3. 보통 4. 나쁨 5. 아주 나쁨
그 결과, 상기 표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 트라메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18의 발효 효소액은 흡수력, 보습력, 미백에서 높은 점수를 받았다. 따라서, 본 시료는 피부용 화장품에 사용시 기미를 개선할 수 있는 것으로 파악하였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
한국생명공학연구원 KCTC13666BP 20181018
<110> Dong-eui University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Composition of decolorizationing of melanine <130> WP183033 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 602 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Trametes velutina JS18 <400> 1 acctgcggaa ggatcattaa cgagttttga aacgggttgt agctggcctt ccgaggcatg 60 tgcacgccct gctcatccac tctacccctg tgcacttact gtaggttggc gtgggctcct 120 tcacgggagc attctgccgg cctatgtata ctacaaacac tttaaagtat cagaatgtaa 180 acgcgtctaa cgcatataat acaactttta gcaacggatc tcttggctct cgcatcgatg 240 aagaacgcag cgaaatgcga taagtaatgt gaattgcaga attcagtgaa tcatcgaatc 300 tttgaacgca ccttgcgctc cttggtattc cgaggagcat gcctgtttga gtgtcatgga 360 attctcaact tataaatcct tgtgatctat aagcttggac ttggaggctt gctggccctt 420 gcggtcggct cctcttgaat gcattagctc gattccgtac ggatcggctc tcagtgtgat 480 aattgtctac gctgtgaccg tgaagtgttt tggcgagctt ctaaccgtcc attaggacaa 540 tcttttaaca tctgacctca aatcaggtag gactacccgc tgaacttaag catatcaata 600 ag 602

Claims (15)

  1. 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양물 또는 이의 배양액을 유효 성분으로 포함하고,
    상기 균주는 멜라닌(melanin) 색소의 탈색 효과를 갖는 것인
    피부 미백용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 배양액은 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP)의 배양물로부터 균주를 제거한 것인
    피부 미백용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 배양액은 상기 배양물을 포어 사이즈가 5 내지 10 μm인 여과지 또는 포어 사이즈가 0.1 내지 1.0 μm인 필터를 사용하여 여과된 것인
    피부 미백용 화장료 조성물.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 제1항에 있어서,
    L-시스테인(L-cysteine) 및 사이링알데하이드(syringaldehyde) 중 적어도 하나를 더 포함하는
    피부 미백용 화장료 조성물.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 트레메테스 벨루티나(Trametes velutina) JS18 균주(수탁번호: KCTC 13666BP), 이의 배양물 또는 이의 배양액을 유효 성분으로 포함하는
    과다색소침착에 기인한 색소 질환의 예방 또는 치료용
    약학 조성물.
  14. 제13항에 있어서,
    L-시스테인(L-cysteine) 및 사이링알데하이드(syringaldehyde) 중 적어도 하나를 더 포함하는
    과다색소침착에 기인한 색소 질환의 예방 또는 치료용
    약학 조성물.
  15. 제13항에 있어서,
    상기 과다색소침착에 기인한 색소 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 잡티, 모반 또는 일광흑색증(solar lentigines)인
    과다색소침착에 기인한 색소 질환의 예방 또는 치료용
    약학 조성물.
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Biochemical Engineering Journal,제57권,13-22면 (2011) 1부.*

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