KR102431819B1 - 당유자 및 황칠 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천연 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 당유자 및 황칠 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 및 미백 기능용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 다양한 세포실험 및 수율, 유효성분의 함량을 비교한 결과 발효 공정을 거친 경우 탁월한 활성의 증가를 확인하였으며, 유효성분의 함량 역시 증가하는 것을 확인하였다. 따라서, 천연 추출물의 발효 과정으로 좀 더 안전하고 탁월한 화장료 기능성 성분으로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

당유자 및 황칠 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물 {Cosmetic composition comprising fermented extract of Citrus grandis Osbeck and Dendropanax morbifera}

본 발명은 천연 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 당유자 및 황출 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 및 미백 기능용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 기관을 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주는 기능을 가지고 있다. 그러나, 나이가 들어감에 따라 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하며 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되고, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선에 자외선 함량이 증가하게 되고 환경오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써 생기는 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스 등은 피부의 정상기능을 저하시키고 멜라닌 침착에 의한 기미, 주근깨 등이 생성되며, 피부의 노화현상을 촉진하여 피부를 손상시키게 된다.

특히, 고령화 사회에 접어들면서 안티에이징에 대한 소비자의 관심과 자연성, 식물성, 천연성을 선호하는 니즈가 크게 강화되면서 실제 피부개선, 노화방지 등의 기능성 효과가 우수한 원료의 개발의 지속적으로 요구되고 있다. 비타민 C 및 유도체, 알부틴(arbutin), 코지산(kojic acid)등이 개발되어 이를 함유한 미백화장품이 시판되고 있으나 저농도로의 사용만 허가되고 있으며, 기능성 화장품의 주원료였던 많은 소재들의 안전성 문제에 따른 시장에서의 쇠퇴 이후 현재까지 안정성과 효과성을 만족하는 원료는 부족한 실정이다. 최근 기능성 기존 고시성분과 관련하여 물질의 불안전성, 알레르기 유발, 피부의 영구 탈색, 발암성 물질, 피부 효소에 의한 분해 등의 문제점이 부각되면서 기능성 비고시 성분에 대한 관심이 매우 높아지고 있다.

따라서, 피부미백 및 주름개선 기능이 강조된 화장품 소재 및 제품 개발이 활발히 이루어지고 있으며, 기능성화장품은 소재에 의해 차별화가 이루어지기 때문에 소재의 효능과 안전성을 모두 충족시킬 수 있는 차별화된 독특한 소재에 대한 연구개발이 절실한 상황이다. 국내 중심으로 전통의약을 근거로 한 천연물 연구가 활발히 진행되고 있으며, 이를 산업화, 제품화 및 세계화로 연계하려는 노력들이 진행되고 있는 실정임 피부주름방지나 피부개선을 위한 효능성분은 주로 천연물소재보다는 합성의약품 분야가 많은 연구가 진행되고 있어서 천연물이 가지는 낮은 독성, 다양한 화합물군, 천연색소 등의 장점을 이용한 피부노화방지 화장품 개발이 필요하다.

현재까지 여러 가지 기능성물질이 개발되어 사용되고 있으나, 실질적인 임상효과는 만족스럽지 못한 상황이며, 일부 천연소재가 개별적 기능성을 인증 받아 사용 중에 있으나 식약청고시 사용 기능성물질이 제한적이어서 시장 성장률과 매출확대에 비해 핵심물질 개발의 걸림돌로 작용하고 있으며 개발되는 천연소재의 경우 비교적 고가의 소재가 많다. 천연물은 합성원료보다 부작용이 적고 안전하며, 소재를 화장품에 적용 시 안전하면서 특정 기능성이 강화된 제품개발이 용이하다.

따라서, 안전성이 보장될 수 있는 천연물을 이용하여 미백 및 주름 개선과 같은 복합 기능을 가지는 새로운 소재 개발이 필요하며, 그 기능 성분을 극대화하고 수율을 증진 및 경제성을 가질 수 있는 공정개선과 기능성 성분들을 충분한 임상효과의 입증이 따라야 할 것이다.

본 발명자들은 주름 개선 및 미백 효과가 매우 우수하면서도, 안전성을 보장 될 수 있는 새로운 천연 추출물 소재의 화장료 또는 약학적 조성물 및 그 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 당유자 및 황칠 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 당유자 및 황칠 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 a) 당유자 및 황칠을 혼합하여 준비하는 단계;

b) 상기 a)단계에서 준비된 혼합물을 추출하는 단계; 및

c) 혼합 추출물을 발효하는 단계;를 포함하는 화장료 조성물 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 다양한 세포실험 및 수율, 유효성분의 함량을 비교한 결과 발효 공정을 거친 경우 탁월한 활성의 증가를 확인하였으며, 유효성분의 함량 역시 증가하는 것을 확인하였다. 특히 천연물에 함유된 기능 성분들이 효과적으로 추출될 수 있도록 발효 공정의 최적화를 통한 수율 증가 및 기능강화 효과를 개선시킬 수 있었다. 결국, 천연 추출물을 이용하여 안전하면서도 탁월한 피부 개선효과를 가지는 피부 외용 기능성 성분으로 화장료, 약학 및 세정용등의 다양한 용도로 활용될 수 있을 것이다.

도1(a)는 HPLC 헤스페리딘 표준품을 보여주는 것이며, (b) 실시예 1의 추출물의 헤스페리딘 함량을 보여주는 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.

본 명세서에서 "추출물"이라 함은, 천연물로부터 그 안의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질이라면, 뽑아내는 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함한다. 예컨대, 물이나 유기 용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출해 낸 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함하는 광의의 개념이다.

본 명세서에서 "발효"라 함은 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해 시키는 과정을 의미한다.

본 발명은 당유자 및 황칠 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 일 측면으로, 상기 조성물은 주름 개선 및 미백용인 것이다.

일 측면으로, 상기 추출물은 물, 유기용매 및 물과 유기용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 추출한 것이며, 바람직하게는 50 내지 70% (v/v) 에탄올로 추출된 것이다.

일 측면으로, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50 중량%로 함유되는 것이다.

일 측면으로, 상기 발효는 유산균, 바실러스속 균, 효모균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 발효 미생물로 이루어지는 것이다.

일 측면으로, 상기 추출물은 당유자와 황칠이 건조중량으로 각각 1:1 내지 1:10의 조성으로 혼합되는 것이며, 바람직하게는 1:5로 혼합되는 것이다.

일 측면으로, 상기 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 크림, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디크림 및 팩으로 구성된 군에서 선택된 어느 하나의 제형을 가지는 것이다.

당유자(Citrus grandis Osbeck)는 제주도 재래 감귤류로 제주도에서 왕귤 또는 뎅유지라고 불리는 제주 재래 감귤로서, 분류학상 운향과, 감귤아과에 속하는 과수이며 인체에 기능성을 가지는 많은 유효성분등을 함유하고 있으며 최근 유자 및 당유자를 이용한 기능성식품 개발 및 생리활성에 대한 연구가 보고되고 있다. 본 발명의 일측면에서, 당유자는 잎, 가지, 줄기, 꽃, 열매, 과피, 뿌리 또는 뿌리 껍질을 예로 들 수 있는 모든 부위를 포함한다.

황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)는 두릅나무과 나무로, 만병통치 나무라는 뜻의 학명 덴드로 파낙스(Dendropanax morbifera)를 가지고 있을 정도로 그 약리학적 효능이 매우 뛰어난 약용식물이다. 세계에서 오직 한국에서만 서식하며, 한국에서도 해남 완도 등의 남부지역과 제주도에서만 자생하며 겨울에도 낙엽이지지 않는 수종으로 매우 귀한 약용식물이다.

본 발명의 일측면에서, 당유자 추출물 또는 황칠 발효 추출물은 각각 물, 유기 용매 및 물과 유기 용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 추출한 추출물을 포함한다. 상기 유기 용매는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 알코올은 C1~C5의 저급 알코올을 포함하며, C1~C5의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필알코올, n-부탄올 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 추출물을 제조하는 방법은 본 발명 기술 분야에 알려져 있는 통상의 방법을 선정하거나 그로부터 응용하여 적용할 수 있다. 일 측면에서 바람직하게는 50 내지 70% (v/v) 에탄올이며, 20℃ 내지 50℃에서 2일 내지 10일간, 구체적으로 25℃ 내지 35℃에서 3일 내지 5일간 추출될 수 있다. 용매의 사용량에는 특별한 제한이 있는 것은 아니나, 추출 효율, 조성물의 효능 또는 경제성 등을 고려할 때 용매의 양은 추출 대상 약재의 건조 중량 대비 1 내지 1000배 정도 사용할 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 당유자 또는 황칠 추출물의 발효물은 혼합 추출물을 미생물로 발효시킨 발효물을 포함한다. 상기 미생물은 유산균, 바실러스속 균, 효모균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 발효 미생물로 이루어지는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는 사카로마이세스(Saccharomyces) 속, 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 바실러스(Bacillus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 누룩곰팡이속(Aspergillus), 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것이며, 더 바람직하게는 사카로마이세스 속 균주로 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 락티스(Saccharomyces lactis) 및 사카로마이세스 프라질리스(Saccharomyces fragilis)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 균주인 것이며, 더욱 더 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae, KCCM 35053)이다. 일 구현예에서는 상기 발효 추출물은 감압고온추출, 열탕추출, 상온추출, 열수추출, 냉침 추출, 환류추출, 초음파 추출 또는 증기추출 방법으로 추출한 것이다. 본 발명의 다른 일측면에서, 발효는 본 발명 기술 분야에 알려져 있는 통상의 방법을 선정하거나 그로부터 응용하여 이루어질 수 있으며, 바람직하게는 20℃ 내지 50℃, 구체적으로 25℃ 내지 35℃에서 1 내지 7일간 이루어지는 것이며, 더 바람직하게는 30℃에서 3일간 이루어지는 것일 수 있다. 이와 같은 발효를 통해 천연물의 유효성분의 함량이 더 높아질 수 있으며, 그 기능이 강화될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 피부 미백 효과를 상승시킬 수 있는 알부틴, 아스코르브산 유도체를 더 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한(制汗)제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 50 중량%, 구체적으로 0.01 내지 30 중량%일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물 내에 더 추가될 수 있는 담체, 부형제, 방부제, 향료, 염료, 수렴제 등이 추가될 수 있다. 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다.

상기 오일로서는 수소화 식물성유, 피마자유, 면실유, 올리브유, 야자인유, 호호바유, 아보카도유가 이용될 수 있으며, 왁스로는 밀랍, 경랍, 카르나우바, 칸델릴라, 몬탄, 세레신, 액체 파라핀, 라놀린이 이용될 수 있다.

지방산으로는 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 올레산이 이용될 수 있고, 지방산 알콜로는 세틸 알콜, 옥틸 도데칸올, 올레일 알콜, 판텐올, 라놀린 알콜, 스테아릴 알콜, 헥사데칸올이 이용될 수 있으며 지방산 에스테르로는 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트가 이용될 수 있다. 계면 활성제로는 당업계에 알려진 양이온 계면활성제, 음이온 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용가능하며 가능한 한 천연물 유래의 계면활성제가 바람직하다.

본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도우에서 선택된 화장품에 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어 비누 조성물로서 파악될 수 있으며, 구체적으로 목욕비누, 물비누, 미용비누, 샴푸, 손세정제{핸드클리너}, 약용비누{비의료용}, 크림비누, 페이셜워시, 헤어린스, 화장비누 등이 될 수 있다.

본 발명의 조성물이 비누 조성물로서 파악될 경우에, 첨가제로서 피부 보습제, 유화제, 경수연화제 등을 포함하여 제조될 수 있다.

상기 비누 기재로서는 야자유, 팜유, 대두유, 파마자유 올리브유, 팜핵류 등의 식물유지 또는 우지, 돈지, 양지, 어유 등의 동물유지 등이 사용될 수 있고, 상기 피부 보습제로서는 글리세린, 에리트리톨, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 헥실글리콜,이소프로필미리스테이트 , 실리콘 유도체, 알로에베라, 솔비톨 등이 사용될 수 있으며, 상기 유화제로서는 천연오일, 왁스 지방알콜, 탄화수소류, 천연식물 추출물 등이 사용될 수 있고, 상기 경수연화제로서는 테트라소듐 이디티에이 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 비누 조성물은 또한 첨가제로서 항균제, 분산제, 거품억제제, 용매, 물 때 방지제, 부식 방지제, 향료, 색소, 금속이온 봉쇄제, 산화방지제, 방부제 등을 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 비누 조성물에 있어서, 비누 기재나 첨가제는 당업계에 일반적으로 사용되고 있는 함량으로 포함될 수 있는데, 비누 기재는 일반적으로 비누 조성물의 전체 중량을 기준으로 하였을 때 99.999 중량 % 내지 50 중량 %로 참가 될 수 있으며, 첨가제는 1 중량 % 내지 20 중량 %로 첨가될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형은 액상, 에멀젼상, 크림상, 페이스트상, 거품상, 젤상 및 고상 등을 포함할 수 있으며 제한되지 않는다. 한편, 상기 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조한 후 이러한 분말을 사용할 수도 있음은 물론이다.

또한, 본 발명은 당유자 추출물 및 황칠 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

일 측면으로, 상기 조성물은 피부 주름 개선 및 미백용인 것이다.

일 측면으로, 상기 조성물은 현탁액, 연고, 로션, 스프레이로 구성된 군에서 선택된 어느 하나의 제형을 가지는 것이다.

상기 약학 조성물은 피부 미백 및 주름개선 효과를 나타낼 수 있으며, 구체적으로 콜라겐 생성, 기미, 주근깨, 점, 피부 색소 침착을 개선 또는 치료할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 제형은 정제(錠劑), 환제(丸劑), 연질 및 경질 캅셀제, 과립제(顆粒劑), 산제, 세립제, 액제, 유탁제(乳濁濟) 또는 펠렛제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 용액제, 현탁제, 유액제, 겔, 주사제, 점적제, 좌제(坐劑), 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 계면 활성제, 부형제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제 또는 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, a) 당유자 및 황칠을 혼합하여 준비하는 단계;

b) 상기 a)단계에서 준비된 혼합물을 추출하는 단계; 및

c) 혼합 추출물을 발효하는 단계;를 포함하는 화장료 조성물 제조방법에 관한 것이다.

일 측면으로, 상기 a)단계에서 당유자와 황칠이 건조중량으로 각각 1:1 내지 1:10의 조성으로 혼합되도록 하는 것이며, 바람직하게는 1:5의 조성으로 혼합되는 것이다.

일 측면으로, 상기 b)단계는 물, 유기용매 및 물과 유기용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 용매로 추출한 것이며, 바람직하게는 상기 용매는 50 내지 70% (v/v) 에탄올인 것이다. 일 측면으로, 바람직하게는 20℃ 내지 50℃에서 2일 내지 10일간, 구체적으로 25℃ 내지 35℃에서 3일 내지 5일간 추출될 수 있다.

일 구현예에서는 상기 추출물은 감압고온추출, 열탕추출, 상온추출, 열수추출, 냉침 추출, 환류추출, 초음파 추출 또는 증기추출 방법으로 추출한 것이다. 일 구현예에서는 상기 b)단계의 추출은 감압고온추출, 열탕추출, 상온추출, 열수추출, 냉침 추출, 환류추출, 초음파 추출 또는 증기추출 방법으로 추출한 것이다. 바람직하게는 상기 추출은 에탄올에서 초음파 추출로 이루어지는 것이다.

일 구현예에서는 상기 c)단계에서 발효는 유산균, 바실러스속 균, 효모균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발효 균주로 발효된 것이다. 본 발명의 다른 일측면에서, 발효는 본 발명 기술 분야에 알려져 있는 통상의 방법을 선정하거나 그로부터 응용하여 이루어질 수 있다.

상기 발효물에 효소반응을 높이기 위하여 당 및 미생물을 혼합할 수 있으며, 이때 이들의 혼합비율은 중량비를 기준으로 발효물 : 당 = 1 : 0.5 내지 2인 것이 바람직하고, 상기 미생물의 사용량은 상기 1발효물과 당을 혼합한 전체 중량을 기준으로 1 내지 10 중량% 인 것이 바람직하고, 3 내지 5 중량% 인 것이 더 바람직하다.

바람직하게는 상기 발효는 20 내지 50 ℃의 온도 조건 하에서 1 내지 7일간 이루어지는 것이며, 더 바람직하게는 발효는 30℃에서 3일간 이루어지는 것이다. 발효가 1일보다 적으면 충분한 발효가 일어나지 않으며, 7일을 초과하는 경우 부패의 우려가 있다. 이와 같은 발효를 통해 천연물의 유효성분의 함량이 더 높아지고 유효성분의 효과를 극대화시키며 미백이나 주름 개선효과를 증가되게 된다.

일 측면으로, 상기 발효는 유산균, 바실러스속 균, 효모균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 발효 미생물로 이루어지는 것이다. 바람직하게는 사카로마이세스(Saccharomyces) 속, 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 바실러스(Bacillus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 누룩곰팡이속(Aspergillus), 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것이며, 바람직하게는 사카로마이세스 속 균주로 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 락티스(Saccharomyces lactis) 및 사카로마이세스 프라질리스(Saccharomyces fragilis)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 균주인 것이며, 더 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae, KCCM 35053)이다.

일 구현 예에서, 본 발명의 조성물은 각각의 천연물(이때, 각 천연물는 추출 전 분쇄기로 분쇄하거나 잘게 자른 것을 이용할 수 있다)를 적정한 용매를 이용하여 추출한 후 이를 혼합하여 제조될 수도 있으며, 혼합 천연물을 함께 추출하여 추출 당시부터 각 추출물이 혼합된 형태로 제조할 수 있다.

다음으로, 상기 발효 추출물을 여과하여 불순물을 제거한다. 상기 여과 방법으로는 특별히 제한은 없으며, 당업계의 통상적인 방법을 사용하여 여과할 수 있다. 구체적으로 50 내지 200 mesh의 미세 여과지를 통과시킴으로써 불순물이 제거된 추출물을 얻을 수 있다. 따라서 본 발명에 있어서, 추출물은 상기 a), b) 및 c) 단계를 거쳐 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

한편, 상기 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조한 후 이러한 분말을 사용할 수도 있음은 물론이다.

이하, 발명의 구체적인 실시예를 통해, 발명의 작용 및 효과를 보다 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 이러한 실시예는 발명의 예시로 제시된 것에 불과하며, 이에 의해 발명의 권리범위가 정해지는 것은 아니다.

추출물의 제조

당유자 과피 및 황칠나무를 건조중량으로 각각 150g, 750g (1 : 5)으로 혼합한 후 대하여 믹서기로 분쇄 후 50% 에탄올 2L를 넣고 상온에서 3일간 추출하고 시료를 여과포 여과와 원심분리를 통해 분리하고 분리된 여액을 감압 농축기를 이용하여 농축하여 혼합 추출물 1L을 제조하였다. 이 추출물을 5% 원료 추출물로 121℃에서 15분간 배지 멸균한 후 1차 종균 배양을 위하여 사카로마이세스 속 균주 Saccharomyces cerevisiae (KCCM 35053)을 UV spectrophotometer를 이용하여 OD=600에서 1.0이 되도록 농도 조절한 후 2%를 접종하여 배양온도 30^oC에서 3일간 발효시켜 최종 발효 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1의 공정에서 당유자 및 황칠의 혼합비율을 건조 중량비로 1:0으로 하는 것을 제외하고 동일한 공정으로 수행하여 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1의 공정에서 당유자 및 황칠의 혼합비율을 건조 중량비로 5:1으로 하는 것을 제외하고 동일한 공정으로 수행하여 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1의 공정에서 배양온도를 30℃가 아닌 50℃에서 추출하는 하는 것을 제외하고 동일한 공정으로 수행하여 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1의 공정에서 배양온도를 30℃가 아닌 20℃에서 추출하는 하는 것을 제외하고 동일한 공정으로 수행하여 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1의 공정에서 발효 균주를 황국균(Aspergillus oryzae)(KCCM 12698) 으로 하는 것을 제외하고 동일한 공정으로 수행하여 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1의 공정에서 발효 균주를 고초균(Bacillus subtilis) (KCCM 10839)으로 하는 것을 제외하고 동일한 공정으로 수행하여 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1에서 발효를 1일간 수행하는 것 이외에 동일한 공정으로 발효 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1에서 발효를 5일간 수행하는 것 이외에 동일한 공정으로 발효 추출물을 제조하였다.

상기 실시예 1에서 발효를 7일간 수행하는 것 이외에 동일한 공정으로 발효 추출물을 제조하였다.

[비교예 1]

상기 실시예 1에서 발효 공정없이 에탄올 추출만으로 혼합추출물을 제조하였다.

[실험예]

1. 항산화 및 티로시나제(Tyrosinase) 억제 활성

항산화 활성을 측정하기 위하여DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼 소거 활성은 각 추출물의 DPPH에 대한 전자 공여능은 Bondet(1997)방법에 의해 측정하였다. 실시예 조성물 40 ㎕를 300 μM DPPH/EtOH 760 ㎕에 첨가한 후 30분간 37℃에서 방치한 후 UV/Visible spectrophotometer (Berkman, USA)을 이용하여 515 nm 에서 흡광도를 측정하였다.

ABTS(2,2-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diamonium salt) 라디칼 소거활성은 Roberty 등(1999)의 방법에 의해 측정하였다. ABTS 농도는 734 nm에서 1.500가 되도록 조제 하였고, 실시예 조성물과 실온에서 10분간 반응 후 대조구와의 흡광도 차이에 의하여 활성을 측정하였다.

타이로시네이즈(tyrosinase)는 멜라닌 생성 첫 단계를 일으키는 중요한 효소로, tyrosin (타이로신)이 3, 4-dihydroxy phenylalanine (DOPA, 도파)를 거쳐 DOPAquinone (도파퀴논)으로 전환되고, DOPAquinone 으로부터 자동 산화 반응과 효소 반응으로 DOPAchrome (도파크롬)을 거쳐 흑갈색의 공중합체인 멜라닌을 생성하게 된다. 멜라닌 생성의 주요 효소인 타이로시네이즈 (tyrosinase) 활성을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제시켜 미백효과를 유도할 수 있다.

Tyrosinase 저해활성 측정은 반응구는 1/15M sodium phosphate buffer (pH 6.8) 0.5mL에 10mM L-DOPA을 녹인 기질액 0.2mL 및 실시예 조성물 0.1mL의 혼합액에 mushroom tyrosinase (110U/mL) 0.2mL 첨가하여 25℃에서 2분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 475nm에서 측정함. Tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타었다.

당유자 및 황칠의 혼합비율에 따른 효과를 확인하기 위하여 실시예 1 내지 10 및 비교예 1의 조성물에 대한 활성을 각각 측정한 결과는 하기 표1에 나타내었다.

혼합비율 (당유자:황칠)	DPPH scavenging activity(%)	ABTS radical scavenging activity (%)	Tyrosinase inhibition activity (%)
실시예 1	85.6	81.5		90.1
실시예 2	28.9	21.2		18.4
실시예 3	68.8	62.3		32.7
실시예 4	74.4	71.8		68.5
실시예 5	81.8	78.6		59.3
실시예 6	81.0	69..4		48.8
실시예 7	82.5	71.3		56.6
실시예 8	68.9	65.8		74.5
실시예 9	86.4	80.8		87.1
실시예 10	70.5	75.6		78.9
비교예 1	49.8	39.7		34.5

상기 결과에서와 같이, 당유자 또는 황칠의 1:5의 비율로 혼합한 조성물에서 다른 혼합비율에 비하여 활성이 높았으며, 발효 균주, 발효온도 및 시간에 따라 활성이 다소 차이가 나기는 하였지만, 대체적으로 우수한 활성을 보여주었다. 특히, 발효공정을 거지치 않은 추출물조다 전반적으로 발효공정을 거친 경우 우수한 활성을 보여주었다.

2. 페놀성 화합물의 함량 변화

총 페놀 함량은 Folin-Denis 방법을 참고하여 측정하였으며, 실시예 조성물 50 ㎕와 증류수 950 ㎕, folin (folin-ciocalteu 시약) 500 ㎕를 혼합한 후, 20% sodium carbonate 2.5 ml를 넣어 40분간 실온에서 반응시키고 반응 후 상징액을 UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 725 nm에서 흡광도를 측정하여 표준곡선에서 양을 환산하였으며 표준품은 tannic acid를 사용하였고, 정량 직선방정식을 사용하여 측정하였다.

그 결과는 표2에 기술하였으며, 발효 조건에 따라 일부 수치값의 변화가 있었으나 발효공정을 거친 추출물의 경우 전반적으로 우수한 수율과 높은 페놀성 화합물 함량을 보였으며 특히 당유자와 황칠의 1:5의 비율에서 가장 우수한 효과를 보였다.

	총페놀성 화합물 함량 (mg/kg)	추출수율
실시예 1	63.8	28.5
실시예 2	52.4	15.8
실시예 3	39.1	12.7
실시예 4	54.2	21.0
실시예 5	49.5	22.4
실시예 6	51.5	19.8
실시예 7	58.4	20.4
실시예 8	50.6	22.8
실시예 9	64.7	26.5
실시예 10	49.8	21.3
비교예 1	40.8	16.0

8. 발효로 인한 유효성분 함량변화

발효공정을 거치지 않은 실시예 2 및 발효공정을 거친 실시예 11 내지 13의 추출물에서 당유자 및 황칠이 유효성분인 헤스페리딘, 루틴을 분석하기 위해 Waters 2695/2487 시스템을 사용하였으며, 칼럼은 Xbridge C18 (250 mm X 6 mm, 5 um), 이동상[A:Acetonitile, B : Water(1% acetic acid)]은 A:B 1:9(0-10min),1:1(10-20, gradient),1:1(20-30) 조건으로 분석하였으며, 335nm에서 헤스페리딘, 루틴 표준품과 비교하여 확인하였다. 그 결과는 표3에 나타내었다.

	헤스페리딘 함량(ppm)	루틴 함량(ppm)
실시예 1	31	39
실시예 2	18	21
실시예 3	20	17
실시예 4	26	32
실시예 5	22	30
실시예 6	24	29
실시예 7	26	35
실시예 8	27	31
실시예 9	29	41
실시예 10	25	27
비교예 1	21	15

헤스페리딘의 함량변화를 HPLC 분석을 통해 확인한 결과는 도 1에 나타내었으며, 발효공정을 통해 헤스페리딘의 함량이 증가되는 것으로 확인할 수 있었다. 도6(a): HPLC 헤스페리딘 표준품, (b) 실시예 1의 추출물

이상에서 본 발명의 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만, 본 발명은 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.

Claims (18)

1. 당유자 및 황칠이 건조중량으로 각각 1:5의 조성으로 혼합되는 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 주름 개선 및 미백용인 것을 특징으로 하는 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 50 내지 70% (v/v) 에탄올로 추출된 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 발효는 유산균, 바실러스속 균, 효모균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 발효 미생물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 삭제
6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 크림, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디크림 및 팩으로 구성된 군에서 선택된 어느 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 삭제
8. 삭제
9. 삭제
10. a) 당유자 및 황칠을 건조중량으로 각각 1:5의 조성으로 혼합하여 준비하는 단계;
    b) 상기 a)단계에서 준비된 혼합물을 추출하는 단계; 및
    c) 혼합 추출물을 발효하는 단계;를 포함하는 화장료 조성물 제조방법.
11. 삭제
12. 제 10항에 있어서, 상기 b)단계는 물, 유기용매 및 물과 유기용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 제조방법.
13. 제 12항에 있어서, 상기 용매는 50 내지 70% (v/v) 에탄올인 것을 특징으로 하는 제조방법.
14. 제 10항에 있어서, 상기 b)단계에서 추출온도는 25 내지 35℃인 것을 특징으로 하는 제조방법.
15. 제 10항에 있어서, 상기 c)단계에서 발효는 유산균, 바실러스속 균, 효모균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 발효 미생물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법.
16. 제 15항에 있어서, 상기 발효는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae, KCCM 35053)으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법.
17. 제 10항에 있어서, 상기 c)단계에서 발효는 20 내지 50 ℃의 온도 조건 하에서 1 내지 7일간 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법.
18. 제 17항에 있어서, 상기 발효는 30℃에서 3일간 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법.
    

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