KR102138834B1 - 락토바실러스 가세리 kbl697 균주 및 그 용도 - Google Patents

락토바실러스 가세리 kbl697 균주 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 및 그 용도에 관한 것으로, 본 발명에 따른 락토바실러스 가세리 KBL697(기탁번호 KCTC 13520BP) 균주는 세포의 알레르기 반응을 약화시키고, 아토피 피부염에 대한 증상을 현저히 개선하며, 항염증 효과, 항진균 효과와 더불어 과민성 대장 증후군 및 장염과 같은 장 질환에 대한 치료 효과도 발휘하는바, 하나의 균주로 알레르기 질환 개선, 염증성 질환 개선 및 장 건강 개선을 위한 목적을 모두 달성할 수 있어 프로바이오틱 소재로 유용하게 활용될 수 있을 뿐 아니라, 상기 균주의 항진균 활성에 기초할 때, 진균에 의해 발생하는 다양한 피부 질환에 대한 피부 외용제, 기타 민감성 피부를 개선하기 위한 화장료 조성물 및 기능성 패치로도 유용하게 활용될 수 있을 것이다.

Description

락토바실러스 가세리 KBL697 균주 및 그 용도{Lactobacillus Gasseri KBL 697 and Use thereof}
본 발명은 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 및 그 용도에 관한 것으로, 더 상세하게는 신규한 프로바이오틱인 락토바실러스 가세리 KBL697 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 알레르기 증상 개선, 염증 증상 개선, 장 건강 개선 및 면역 조절로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 효과를 갖는 건강기능식품용 조성물, 항진균 조성물, 및 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및 자가면역 질환으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 질환의 치료를 위한 약학적 조성물에 관한 것이다.
프로바이오틱스(probiotics)는 장내 미생물 균형에 도움을 주는 항균 활성과 효소 활성을 가진 미생물 및 상기 미생물이 생산하는 생산물을 말한다. 아울러 프로바이오틱스는 건조세포나 발효산물 형태로 사람이나 동물에 공급되어, 장내 균총을 개선하는 단일 또는 복합 균주 형태의 생균으로 정의되고 있다. 프로바이오틱스가 갖추어야 할 특성은 인간의 장내를 서식지로 하고, 비병원성, 무독성의 특성을 가지며, 장으로 가는 동안 살아 남아야 한다. 더 나아가 전달 식품 안에서 소비되기 전에 생존율과 활성을 유지하고, 감염 예방으로 사용되는 항생제에 대해 민감해야 하며, 항생제 내성을 갖는 플라스미드를 보유하지 않아야 한다. 또한, 장내 환경에서 산, 효소, 담즙에 대한 내성을 갖추어야 한다.
이러한 프로바이오틱스로는 소화효소(amylase, protease, lipase, cellulase, phosphatase) 생성능력이 우수한 바실러스 종(Bacillus sp.), 젖산을 생성하는 락토바실러스 종(Lactobacillus sp.), 가축의 분변에 남아있는 악취 유발물질(암모니아, 황화수소, 아민류 등)을 대사과정에 이용하여 악취유발을 막는 광합성 박테리아(Photosynthetic bacteria) 등을 그 예로 들 수 있으며, 최근 프로바이오틱스는 장 건강 개선을 비롯한 다양한 건강 기능 개선 효과가 보고되면서 기존 화합물에 기초한 치료제를 대체할 수 있는 주요한 치료 물질로 각광받고 있다.
한편, 알레르기(allergy)란 이물질(항원, allergen)에 대한 특이하고 변형된 반응을 나타내는 생화학적 현상이며, 이때 이물질이 증상을 일으키게 되면 이를 알레르겐(Allergen)이라 하고, 그 결과 생긴 질환을 알레르기 질환이라고 한다. 알레르기(Allergy)는 발생원인인 항원 항체 반응의 결과로 나타나는 생체의 병적 과정이며, 일반적으로 반응을 일으키는데 필요한 시간 및 보체 관여의 유형으로부터 크게 4종류로 분류하고 있다. 이 중 제1형은 아나필락틱(anaphylactic;즉시형) 형태로 표적기관이 주로 소화장기, 피부 및 폐장으로 일반적인 증상은 위장관 알러지, 담마진, 위축성 피부염, 알러지성 비염 및 기관지성 천식 등이 있다. 제1형의 병리기전은 항원이 비만세포와 호염기구의 표면에 부착되어 있는 IgE 항체에 접촉됨으로써 표적세포를 활성화시켜 히스타민, 루코트리엔, PAF 등의 화학매체를 분비하여 혈관과 평활근을 수축시킨다고 알려져 있는데 이는 주로 제4형(지연형)과 복합되는 경우가 많다. 즉, 이 아나필락시스와 알레르기 반응은 비만 세포 등에서 일어나는 다양한 변화에 기인된다. 탈과립을 유도하는 비만세포의 활성화는 Fc 수용제에 대한 항원, 안티(anti)-IgE, 렉틴(lectin) 등의 결합, 아나필라톡신(anaphylatoxin)등의 자극, 칼슘이오노포어(calcium ionopore), compound 48/80, 코데인(codeine) 등 합성피질 자극 호르몬과 같은 약물에 의해 야기된다.
비만세포 및 혈중 호염구는 여러 가지 알레르기 질환 즉, 알레르기성 비염, 알레르기성 피부염, 천식, 음식 알레르기 및 아나필락틱 쇼크 등을 유발하는 주요체내 세포로 알려져 있다. 이들 세포는 세포 표면에 알레르기를 유발하는 항체인 IgE에 대한 수용체(FcRI)를 가지고 있고, 그것은 알레르기를 유발하는 물질(항원, allergen)에 의해 자극을 받아 자신이 가지고 있는 다양한 알레르기를 유발시키는 물질을 세포 바깥으로 분비한다(Kim K et al, Eur J Pharmacol, 581:191-203, 2008).
알레르기 질환 중, 아토피 피부염(Atopic Dermatitis)은 잘 알려진 바와 같이 신생아 또는 아동에게 발병하며 성인이 될 때까지 지속될 수도 있는 만성 재발성 피부 질환이다. 아토피 피부염은 천식이나 알레르기성 비염과 같이 IL-4 및 IL-5를 생산하는 T 임파구의 국소 침윤과 연관된 염증성 피부 질환으로, IL-4는 잘 알려진 바와 같이, T 헬퍼2(Th2) 표현형의 발달을 제어하며 그 결과 면역글로불린(Ig)의 과생산 및 호산구증가증을 야기하며, 혈청 IgE 수준이 증가한다. 식품 및 흡입성 알레르겐에 대한 피부 테스트가 양성인 대상자의 80-90%는 아토피 피부염에 걸린 것으로 입증되었다.
알레르기 질환 및 아토피 피부염을 치료 또는 예방하기 위한 다양한 치료법이 대두되고 있으나, 아직까지 효과적인 치료 방법이 존재하지는 않는다. 일부 약물 기반 치료법이 알려져 있으나, 치료를 위한 약물의 단기간 복용에도 내성을 보이고, 장기 복용시 상당한 부작용을 야기할 수 있기 때문에, 최근 약물에 대한 알레르기 질환 및 아토피 치료를 기피하고 있으며, 현재로서는 절대적이고도 확실한 효능을 갖는 치료법이 없이 알레르기 기타 피부 가려움이나 피부 발적과 같은 자극적인 증상들을 호전시키지 못하는 경우가 많다.
한편, 과민성 대장 증후군(IBS)은 복통 및/또는 변화된 장 거동 또는 배변 습관과 관련된 불편함을 특징으로 하는 증상으로, 이러한 증상은 구조적 또는 생화학적 이상으로는 설명되지 않는다. 긴박뇨, 복부 팽만 및 불완전한 장 운동의 느낌 역시 IBS의 일반적 증상이다. 따라서, 이 질환은 기능성 팽만감, 비심장성 흉통, 비-궤양성 소화불량 및 만성적인 변비 또는 설사 등의 질환을 포함하는 기능성 위장 장애로 분류된다. 특히, IBS는, 관련 증상이 환자의 안녕과 정상적인 기능성 측면 모두에 작용하기 때문에, 복통 및 불편함을 넘어 이환율과 삶의 질에 막대한 영향을 미친다.
염증성 장 질환(IBD)은 장관 내 비정상적인 만성 염증이 호전과 재발을 반복하는 질환으로서, 장의 모든 염증성 질환을 포함하며, 구체적인 예로 크론병(Crohn's disease), 궤양성 대장염 또는 베체트병(Behcet's disease)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. IBS 및 IBD를 치료하기 위한 약물 개발 분야에서 막대한 연구들이 수행되고 있다. 이와 관련하여, 다양한 항우울제들이, 임상 실험에서 그 효능은 보통 수준이고 이의 임상적인 활용성은 상당한 부작용으로 인해 제한적임에도 불구하고, 대중적으로 사용되고 있다. 세로토닌성 제제들에서도 전반적인 IBS 증상들에 대한 효능이 입증되고 있다. 그러나, 최근 안전성에 대한 문제들로 인해 그 적용이 여러가지로 제약 되고 있으며, 이에 IBS에 대한 새로운 치료제를 개발하는데 관심이 크게 증폭되고 있다.
WO 96/29083와 EP 554418은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 299v(DSM 6595) 및 락토바실러스 카세이 ssp. 람노수스(Lactobacillus casei ssp. rhamnosus) 271 (DSM 6594) 등의, 장에서 집락을 이루는 2종의 락토바실러스 균주를 개시하였다. EP 415941에서는 락토바실리와 혼합하기 전에 오트밀 죽(oat gruel)을 효소로 처리하는 것을 포함하는, 영양 조성물의 제조 방법을 개시하였다. 미국 특허 7195906에서는 염증 질환, 특히 IBD 및 IBS와 같은 위장 염증 작용을 치료하기 위해, 절제하여 세정한 인간 위장관에서 분리된 비피도박테리움 균주를 개시하였다.
그러나 염증성 장 질환 및 과민성 대장 증후군을 포함하는 장 건강 개선에 탁월한 효과를 보이는 균주는 아직 발견되지 않았고, 상기 효과를 보이는 균주를 찾기 위한 연구는 수많은 연구 기관에서 지속하고 있는 실정이다.
이에 본 발명자들은, 종래 만족할 만한 치료법이 없는 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환의 약물 기반 치료를 대체할 수 있는 방법으로 프로바이오틱스 연구에 매진하였고, 그 결과, 신규한 락토바실러스 가세리 균주가 아토피 피부염과 같은 알레르기 질환에 대한 우수한 치료 효과를 보임을 확인하였고, 이와 더불어 상기 균주가 항진균 활성, 장 건강, 면역 조절 및 염증 억제에도 우수한 효과를 발휘함을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 증상 개선, 염증 증상 개선, 항진균 활성, 장 건강 개선 및 면역 조절에 우수한 효과를 보이는 신규한 균주 및 이의 다양한 용도를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 락토바실러스 가세리 KBL697(기탁번호 KCTC 13520BP) 균주를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 식품용 또는 식품 첨가용 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 동물사료용 또는 동물사료 첨가용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 항진균 조성물, 예컨대, 비듬방지용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 미용용 패치 또는 의료용 패치를 제공한다.
본 발명에 따른 락토바실러스 가세리 KBL697(기탁번호 KCTC 13520BP) 균주는 세포의 알레르기 반응을 약화시키고, 아토피 피부염에 대한 증상을 현저히 개선하며, 항염증 효과, 면역 조절 효과, 항진균 효과와 더불어 과민성 대장 증후군 및 장염과 같은 장 질환에 대한 치료 효과도 발휘하는바, 하나의 균주로 알레르기 질환 개선, 염증성 질환 개선, 장 건강 개선 및 면역 조절을 위한 목적을 모두 달성할 수 있어 프로바이오틱 소재로 유용하게 활용될 수 있을 뿐 아니라, 상기 균주의 항진균 활성에 기초할 때, 진균에 의해 발생하는 다양한 피부 질환에 대한 피부 외용제, 기타 민감성 피부를 개선하기 위한 화장료 조성물 및 기능성 패치로도 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 EL4 세포주에 알레르기 반응을 유도한 후, 락토바실러스 가세리 KBL697 균주를 비롯한 다양한 락토바실러스 균주에 의한 IL-4 발현 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 2는 EL4 세포주에 알레르기 반응을 유도한 후, 락토바실러스 가세리 KBL697 균주를 비롯한 다양한 락토바실러스 균주에 의한 IL-5 발현 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 3은 RBL 2H3 세포주에 항원/항체 반응으로 히스타민 생성을 유도한 후, 다양한 락토바실러스 가세리 균주 및 항히스타민제인 케토티펜을 처리함에 따른 히스타민 분비 저해 효과를 확인한 결과이다.
도 4는 RAW 264.7 세포주에 염증반응을 유도한 후, 락토바실러스 가세리 균주를 처리한 경우, KBL697 균주의 처리에 의한 항염증성 및 면역조절 사이토카인인 IL-10의 현저한 분비량 증가 효과를 관찰한 결과이다.
도 5는 RAW 264.7 세포주에 염증반응을 유도한 후, 락토바실러스 가세리 균주를 처리한 경우, KBL697 균주의 처리에 의한 현저한 면역 조절 및 항염증 효과를 IL-10/TNF-α 수치로 확인한 결과이다.
도 6은 RAW 264.7 세포주에 염증반응을 유도한 후, 락토바실러스 가세리 균주를 처리한 경우, KBL697 균주의 처리에 의한 현저한 면역 조절 및 항염증 효과를 IL-10/IL-6 수치로 확인한 결과이다.
도 7은 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 항진균 활성을 Spot Assay로 확인한 결과이다.
도 8은 아토피 피부염이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 경구 투여에 따른 피부염 스코어 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 9는 아토피 피부염이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 경구 투여에 따른 가려움 완화 효과를 확인한 결과이다.
도 10은 아토피 피부염이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 경구 투여에 따른 귀 두께 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 11은 아토피 피부염이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 경구 투여에 따른 피부 두께 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 12는 아토피 피부염이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 경구 투여에 따른 혈중 IgE 농도의 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 13은 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 밀착 연접 강화 효과를 TEER Assay로 확인한 결과이다.
도 14는 장염이 유발된 마우스 모델에서 1 × 109 CFU의 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 경구 투여에 따른 체중 회복 효과를 관찰한 결과이다.
도 15는 장염이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 경구 투여에 따른 대장 길이 회복 효과를 관찰한 결과이다.
도 16은 건선이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 건선 중증도 완화 효과 및 부종 증상의 완화 효과를 관찰한 결과이다.
도 17은 건선이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 염증성 사이토카인(TNF-α, IFN-γ, IL-17)의 감소 효과를 측정한 결과이다.
도 18은 장염이 유발된 마우스 모델에서 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 및 인플릭시맙의 체중 회복 효과 및 대장 길이 회복 효과를 비교한 결과이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명에서는 인간 유래 미생물의 항알레르기 효과를 확인하여, 알레르기 억제 효과가 탁월한 락토바실러스 가세리 KBL697(기탁번호 KCTC 13520BP) 균주를 선별하였는데, 상기 균주의 16S rDNA를 분석한 결과, 상기 균주가 종래 공지된 바 없는 신규한 균주임을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서 신규한 프로바이오틱인 락토바실러스 가세리 KBL697(기탁번호 KCTC 13520BP) 균주에 관한 것으로, 상기 균주는 하기 서열번호 1로 표시되는 16s rDNA 서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
<서열번호 1> 락토바실러스 가세리 KBL697(기탁번호 KCTC 13520BP) 균주의 16s rDNA 서열
GGCAAGTGGGCGGCGTGCTATACATGCAGTCGAGCGAGCTTGCCTAGATGAATTTGGTGCTTGCACCAAATGAAACTAGATACAAGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAGAGACTGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAACAACACTAGACGCATGTCTAGAGTTTAAAAGATGGTTCTGCTATCACTCTTGGATGGACCTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGCAACGGCTTACCAAGGCAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGGTAGTGAAGAAAGATAGAGGTAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATTACTTAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGTGCAGGCGGTTCAATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGAGAATTGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGTGCAAACCTAAGAGATTAGGAGTTCCCTTCGGGGACGCTGAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGAAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGAAGCGAACCTGCGAAGGCAAGCGGATCTCTGAAAGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTCTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGATAACCTTTATAGGAGTCAGCCGTCTAAGTAGACAGATGTTA
이에, 본 발명에서는 상기 균주에 대한 효능 실험을 진행하였고, 그 결과 상기 균주는 아토피 피부염 증상을 비롯한 알레르기 억제 효과가 탁월할 뿐 아니라, 염증 반응도 개선하며, 항진균 활성을 가지고 있고, 면역 조절 및 장 질환 치료 효과도 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 또한 본 발명의 상기 균주가 생균 상태 뿐만 아니라, 저온 살균 또는 고온 살균된 상태로도 상기 효과를 발휘함을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 다른 관점에서 락토바실러스 가세리 KBL697(기탁번호 KCTC 13520BP) 균주, 상기 균주의 균체, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 식품용 조성물 또는 식품 첨가용 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 증상 개선, 염증 증상 개선, 장 건강 개선 및 면역 조절로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 효과를 갖는 건강기능식품용 조성물인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 식품용 또는 식품 첨가용 조성물은 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 증상 개선, 염증 증상 개선, 장 건강 개선 및/또는 면역 조절과 그 예방에 효과가 있는 식품, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 건강기능식품 또는 기능성 음료로 용이하게 활용할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
상기 식품용 조성물이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강기능식품 및 기능성 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.
본 발명에 따른 상기 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본원발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
상기 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 기능성 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며, 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 증상 개선, 염증 증상 개선, 장 건강 개선 및/또는 면역 조절과 예방을 위한 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
나아가 상기 기술한 것 이외에 본 발명의 식품용 또는 식품 첨가용 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 식품용 조성물을 함유하는 식품에 있어서, 상기 본 발명에 따른 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.001중량% 내지 100중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 1중량% 내지 99중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100 mL를 기준으로 0.001g 내지 10g, 바람직하게는 0.01g 내지 1g의 비율로 포함할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 식품용 조성물은 상기 락토바실러스 가세리 KBL697 균주를 독립적으로 또는 허용 가능한 담체에 첨가하거나, 인간 또는 동물이 섭취하기에 적합한 조성물 형태로 제조될 수 있다. 즉, 다른 프로바이오틱 세균을 함유하지 않은 식품 및 이미 몇 가지의 프로바이오틱 세균을 함유한 식품에 첨가되어 사용될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품을 제조함에 있어서, 본 발명의 균주와 함께 사용 가능한 다른 미생물들은 인간이나 동물이 섭취하기에 적합하고 섭취시 병원성 유해세균을 억제하거나 포유동물 장관 내의 미생물 균형을 개선시킬 수 있는 프로바이오틱 활성을 갖는 것들이며, 특별히 제한되지 않는다. 그러한 프로바이오틱 미생물의 예로는 사카로미세스(Saccharomyces), 칸디다(Candida), 피치아(Pichia) 및 토룰롭시스(Torulopsis)를 포함하는 효모(yeast), 아스퍼질러스(Aspergillus), 리조퍼스(Rhizopus), 뮤코(Mucor), 페니실린(Penicillium) 등과 같은 곰팡이 및 락토바실러스(Lactobacillus), 비피도박테리움(Bifidobacterium), 류코노스톡(Leuconostoc), 락토코커스(Lactococcus), 바실러스(Bacillus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 프로피오니박테리움(Propionibacterium), 엔테로코커스(Enterococcus), 페디오코커스(Pediococcus) 속에 속하는 세균 등이 있다. 적당한 프로바이오틱 미생물의 구체적인 예로는 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 바실러스 코아귤란스(Bacillus coagulans), 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 알리멘타리우스(Lactobacillus alimentarius), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델브루키(Lactobacillus delbruckii), 락토바실러스 존스니(Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 파시미누스(Lactobacillus farciminus), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici) 등을 들 수 있다. 바람직하게는, 우수한 프로바이오틱 활성을 가지면서 항 알레르기, 항염증, 면역 조절 및/또는 장 건강 증진 활성이 뛰어난 프로바이오틱 미생물 혼합균을 본 발명의 식품용 조성물에 추가로 포함함으로써 그 효과를 더욱 증진시킬 수 있다. 본 발명의 식품용 조성물에 사용될 수 있는 담체의 예로는 증량제, 고섬유 첨가제, 캡슐화제, 지질 등일 수 있으며 이러한 담체들의 예는 당업계에 충분히 공지되어 있다. 본 발명의 락토바실러스 가세리 KBL697 균주는 동결건조되거나 캡슐화된 형태 또는 배양 현탁액이나 건조분말 형태일 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한, 상기 균주를 함유하는 동물 사료용 첨가제 또는 이를 함유하는 동물사료의 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 동물 사료용 첨가제는 건조 또는 액체 상태의 제제 형태일 수 있으며, 상기 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 이외에 비병원성의 다른 미생물을 더 포함할 수도 있다. 첨가할 수 있는 미생물로는 예컨대 단백질 분해효소, 지질 분해효소 및 당 전환 효소를 생산할 수 있는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 고초균, 소의 위와 같은 혐기적 조건에서 생리적 활성 및 유기물 분해능이 있는 락토바실러스(Lactobacillus) 균주, 가축의 체중을 증가시키며 우유의 산유량을 늘리고 사료의 소화 흡수율을 높이는 효과를 보여주는 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae)와 같은 사상균(Slyter, L. L. J. Animal Sci.1976, 43. 910-926) 및 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)와 같은 효모(Johnson, D. E et al. J. Anim. Sci.,1983, 56, 735-739 ; Williams, P. E. V. et al,1990, 211) 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 동물 사료용 첨가제는 상기 락토바실러스 가세리 KBL697 균주 이외에 하나 이상의 효소제제를 더 포함할 수도 있다. 첨가되는 효소제제는 건조 또는 액체 상태가 모두 가능하며 효소제제로는 리파제(lipase)와 같은 지방 분해효소, 파이틱 애시드(phytic acid)를 분해하여 인산염과 이노시톨인산염을 만드는 파이타제(phytase), 녹말과 글리코겐(glycogen) 등에 포함되어 있는 α-1,4-글리코시드 결합(glycoside bond)을 가수분해하는 효소인 아밀라제(amylase), 유기인산에스테르를 가수분해하는 효소인 포스파타제(phosphatase), 셀룰로스(cellulose)를 분해하는 카르복시메틸셀룰라제(carboxymethylcellulase), 자일로스(xylose)를 분해하는 자일라제(xylase), 말토스(maltose)를 두 분자의 글루코스(glucose)로 가수분해하는 말타제(maltase) 및 사카로스(saccharose)를 가수분해하여 글루코스-프룩토스(glucose-fructose) 혼합물을 만드는 전환효소(invertase) 등과 같은 당 생성 효소 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 락토바실러스 가세리 KBL697 균주를 동물 사료용 첨가제로 사용함에 있어서, 사료용 원료로는 각종 곡물 및 대두 단백을 비롯한 땅콩, 완두콩, 사탕무우, 펄프, 곡물 부산물, 동물 내장 가루 및 어분 가루 등이 사용될 수 있으며, 이들은 가공되지 않거나 또는 가공된 것을 제한없이 사용할 수 있다. 가공과정은, 반드시 이에 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면 사료원료가 충진된 상태에서 가압 하에 일정한 배출구로 압축되는 공정으로, 단백질의 경우에는 변성이 되어 이용성이 증가되는 압출 성형(extrusion)을 사용하는 것이 바람직하다. 압출성형(extrusion)은 열처리 과정을 통해 단백질을 변성시키고 항효소인자를 파괴시키는 등의 장점을 갖는다. 또한, 대두 단백질과 같은 경우에는 압출 성형을 통해서 단백질의 소화율을 향상시키고 대두에 존재하는 단백질 분해효소의 저해제중의 하나인 트립신 저해제(trypsin inhibitor)와 같은 항 영양인자들을 불활성화시키며 단백질 분해효소에 의한 소화율 향상을 증가시켜 대두 단백의 영양적 가치를 증가시킬 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 항진균 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 말라세지아 퍼퍼(Malassezia furfur), 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa) 및 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta)로 구성된 군으로부터 선택된 하나에 항균 활성을 나타내는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
상기 조성물은, 지루성 피부염 또는 비듬의 예방, 개선 또는 치료용 조성물일 수 있으며, 상기 지루성 피부염은 지루성 두피염일 수 있다.
또한 상기 조성물은, 피부 진균감염으로 인한 두드러기, 발진, 부스럼, 완진, 또는 무좀의 예방, 개선 또는 치료용 조성물일 수 있다.
상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물은 총 중량을 기준으로, 0.1중량% ~ 50중량%로 포함될 수 있다.
상기 항진균성 조성물은, 약학적 조성물, 화장료 조성물 또는 건강식품 조성물일 수 있으며, 피부 외용제일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
상기 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 비타민, 고분자 펩티드, 분자 다당 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 물질을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한(制汗)제를 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01~5 중량%, 구체적으로 0.01~3 중량%일 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 본 발명의 항진균성 조성물은 피부 외용제 조성물, 예컨대, 크림, 연고, 샴푸, 트리트먼트일 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 균체, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 유효량 함유하는 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 약학적 조성물은 생균의 균체, 건조 균주의 형태, 균주의 배양물, 균주의 파쇄물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 담체 혹은 매체와 조합될 수 있는 조성물로 제공될 수 있다. 이용되는 담체 혹은 매체는 용매, 분산제, 코팅, 흡수 촉진제, 제어된 방출제(즉, 서방제), 및 1종 이상의 불활성 부형제(전분, 폴리올, 과립제, 극미세 셀룰로스(microfine cellulose), 미세결정형 셀룰로스(예컨대, 셀피어, 셀피어 비즈(Celphere beads), 희석제, 윤활제, 결착제(binder), 붕해제 등을 포함함) 등을 포함할 수 있다. 필요한 경우, 개시된 조성물의 정제 제형은 표준 수성 혹은 비수성 수법에 의해 코팅될 수도 있다. 약제학적으로 허용가능한 담체 및 약제학적으로 허용가능한 불활성 담체로서 이용하기 위한 부형제 그리고 상기 추가의 성분의 예로는, 결착제, 충전제, 붕해제, 윤활제, 항미생물제 및 코팅제를 들 수 있지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 연고, 크림, 페이스트제, 외용 액제, 글리세로젤라틴(glycerogelatins), 찰제(liniments), 외용산제, 에어로졸 및 경고제로 이루어진 군으로부터 선택된 제형을 포함하는 외용제로도 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 알레르기 질환은 IL-4 또는 IL-5의 발현과 연관된 알레르기 질환을 가리키며, 습진, 알레르기성 천식, 아토피 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 두드러기, 아나필락시스(anaphylaxis) 등을 포함한다. 바람직하게는, 유아 습진, 알레르기성 천식, 알레르기성 비염, 아토피 피부염, 알레르기성 결막염 및 음식 알레르기로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 장 질환은 복부 팽만감, 복부 불쾌감, 병원성 미생물에 의한 감염성 설사, 위장염, 염증성 장 질환, 신경성 장염 증후군, 과민성 대장 증후군, 소장 미생물 과성장증 및 장 급이성 설사로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있으며, 장의 정상적인 장벽 기능 손상에 의해 야기되는 질환을 포함한다.
염증성 장 질환(IBD)은 크론병, 베체트병에 수반되는 장 병변, 궤양성 대장염, 출혈성 직장 궤양 및 회장 낭염을 포함하며, 크론병 및 궤양성 결장염을 포함하는 질환 군을 지칭한다. 궤양성 결장염은 단지 대장에만 영향을 미친다. 궤양성 결장염에서의 염증 및 궤양은 대장의 4개 층 중 가장 안쪽에 있는 2개의 층인 점막층 및 점막하층에 제한된다. 크론병에서 염증 및 궤양은 소장 및 대장 둘 다에서 장벽의 모든 층을 통해 확장할 수 있다.
한편, 과민성 대장 증후군은 기질적 원인이 없이 장기간 반복되는 복부팽만감 등의 복부 불편감 및 복통과 더불어 설사, 변비 등의 배변 습관의 변화를 동반하는 만성 질환이며 그 증상이 정신적인 요인이나 스트레스를 유발하는 사회 환경에 의해서 악화되기도 한다.
본 발명에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증을 주 병변으로 하는 질병을 총칭하는 것으로서, 부종, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 만성 부비동염, 인후염, 편도염, 기관지염, 폐렴, 위궤양, 위염, 대장염, 통풍, 습진, 여드름, 아토피 피부염, 접촉성 피부염(contact dermatitis), 지루성 피부염(seborrheic dermatitis), 강직성 척수염, 류마티스성 열, 섬유근통(fibromyalgia), 골관절염, 건선 관절염, 류마티스성 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군, 중증 근무력증, 패혈증, 맥관염, 활액낭염, 측두 동맥염, 다발성 경화증 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
본 발명에 있어서, 자가면역 질환 및 면역 조절 효과에 의해 개선될 수 있는 증상은 류마티스성 관절염, 루프스, 전신성 경피증, 아토피 피부염, 건선, 건선 관절염, 천식, 길리안-바레 증후군(Guilian-Barre syndrome), 중증 근무력증, 피부근염, 다발성근염, 다발성 경화증, 자가면역성 뇌척수염, 결절성 다발성 동맥염, 하시모토 갑상선염, 다발성 경화증, 측두동맥염, 소아기 당뇨병, 원형탈모증, 천포창, 아프타구내염, 자가면역 용혈성 빈혈, 베게너 육아종증, 쇼그렌 증후군, 애디슨병, 크론병, 베체트병 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 균주에 의해 발휘되는 면역 조절, 또는 자가면역 질환 또는 염증성 질환의 개선, 치료 또는 예방의 효과는 염증 억제 및 면역 조절에 관여하는 사이토카인의 증가 또는 감소, 구체적으로, TNF-α, IFN-γ 및 IL-17의 분비 감소 및 IL-10의 분비 증가 중 어느 하나 이상의 기전에 의해 유도되는 것을 특징으로 할 수 있다.
TNF-α(tumor necrosis factor-α)는 세균 감염 및 종양 질환에 대한 숙주 면역 반응 중에 활성화된 대식세포 및 여러 다양한 세포에 의해 생성되는 17 kDa 펩티드이다. 이 사이토킨은 또한 면역 반응 및 염증 반응의 중요한 매개체로도 알려져 있는데, 류마티스성 관절염(RA), 건선성 관절염, 크론병, 건선, 강직성 척수염(AS)과 같은 자가면역 질환 및 염증성 질환에 중요한 역할을 담당하고 있는 전-염증성 사이토킨으로 알려져 있다.
한편, CD4+ T 세포는 특정 사이토카인과 전사인자의 발현에 따라 Th1(T helper type 1), Th2(T helper type 2), CD4+CD25+ 면역조절 T 세포 (regulatory T cell)와 Th17세포(T helper 17 cell) 등의 아형으로 구분될 수 있는데, 이 중 Th17세포에 의해 생산되는 IL-17은 자가면역질환이나 알레르기 반응, 세균이나 곰팡이 감염에 대한 숙주 방어 등에 주로 관여하는 것으로 알려져 있다.
또한, IL-10은 보조 T 세포, B 세포, 단핵세포 및 기타 세포에 의해 생성되는 35-40 kDa 펩티드로서, TNF-α, IFN-γ를 포함한 사이토카인 생성을 억제하는 등의 면역억제 및 항염증 특성을 갖고 있다.
상기 '치료하는'이란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본 발명에서 사용된 상기 '치료'란 용어는 '치료하는' 이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 질환의 치료 또는 치료요법은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:
(1) 질환의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,
(2) 질환의 확산을 예방함,
(3) 질환을 경감시킴,
(4) 질환의 재발을 예방함, 및
(5) 질환의 증상을 완화함(palliating).
본 발명에 따른 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 락토바실러스 가세리 KBL697 균주를 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "유효량(또는, 유효한 양)"은 바람직한 효과를 전달하기에는 매우 충분하지만 의학적 판단 범위 내에서 심각한 부작용을 충분히 방지할 정도로 적은 양을 의미한다. 본 발명의 조성물에 의하여 체내에 투여되는 미생물의 양은 투여 경로, 투여 대상을 고려하여 적절하게 조정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 대상 개체에 매일 일회 이상 투여될 수 있다. 단위 투여량은 사람 피험자 및 다른 포유동물을 위한 단위 투여에 적합하게 물리적으로 분리된 단위를 의미하며, 각 단위는 적절한 약제학적 담체를 포함하며 치료 효과를 나타내는 본 발명의 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 예정된 양을 함유한다. 성인 환자의 경구 투여용 투여 단위는 본 발명의 미생물 0.001 g 이상을 함유하는 것이 바람직하며, 본 발명의 조성물의 경구 투여량은 일회에 0.001 내지 10g, 바람직하게는 0.01 내지 5 g이다. 본 발명의 미생물의 약학적 유효량은 0.01 내지 10 g/1일이다. 그러나, 투여량은 환자의 질환의 심각도 및 함께 사용되는 미생물과 보조 유효 성분에 따라 가변적이다. 또한, 일일 총 투여량을 여러 횟수로 분할하여 필요에 따라 연속적으로 투여할 수 있다. 따라서, 상기 투여량 범위는 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하지 아니한다.
또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.
본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화 될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있고, 본 발명에 따른 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환의 치료용 조성물은 해당 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 특히, 경구용 단위 제형으로서 장용 피복된 장용성 제제로서 제공될 수 있다. 본 명세서에서의 "장용 피복"은 위산에 의해서는 분해되지 아니하여 피복이 유지되나, 소장에서는 충분히 분해되어 활성 성분이 소장내에 방출될 수 있도록 하는, 약제학상 허용 가능한 모든 종류의 공지의 피복을 포함한다. 본 발명의 "장용 피복"은 pH 1의 HCl 용액과 같은 인공 위즙을 36℃ 내지 38℃에서 접촉시킬 때, 2시간 이상 동안 그대로 유지되며, 바람직하게는 이후에 pH 6.8의 KH2PO4 완충 용액과 같은 인공 장즙에서 30분 이내에 분해되는 피복을 지칭한다.
본 발명의 장용 피복은 1개의 코어(core)에 약 16 내지 30, 바람직하게는 16 내지 20 또는 25 mg 이하의 양으로 피복된다. 본 발명의 장용 피복의 두께가 5 내지 100 ㎛, 바람직하게는 20 내지 80 ㎛인 경우가 장용 피복으로서 만족스러운 결과를 나타낸다. 장용 피복의 재료는 공지의 고분자 물질들 중에서 적당히 선택된다. 적당한 고분자 물질은 다수의 공지 문헌(L. Lachman 외, The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, 3판, 1986, pp. 365~373; H. Sucker 외, Pharmazeutische Technologie, Thieme, 1991, pp. 355-359; Hagers Handbuchder pharmazeutischen Praxis, 4판, Vol. 7, pp. 739 ~ 742, 및 766 ~ 778, (SpringerVerlag, 1971); 및 Remington's Pharmaceutical Sciences, 13판, pp. 1689 ~ 1691 (Mack Publ., Co., 1970))에 열거되어 있고, 셀룰로즈 에스테르 유도체, 셀룰로즈 에테르, 아크릴 수지의 메틸아크릴레이트 공중합체 및 말레산 및 프탈산 유도체의 공중합체가 이들에 포함될 수 있다.
본 발명의 장용 피복은 장용 피복 용액을 코어에 분무하는 통상적인 장용 피복법을 사용하여 제조될 수 있다. 장용 피복 공정에 사용되는 적당한 용매로는 에탄올과 같은 알콜, 아세톤과 같은 케톤, 다이클로로메탄(CH2Cl2)과 같은 할로겐화 탄화수소 용매이며 이들 용매들의 혼합 용매가 사용될 수도 있다. 디(di)-n-부틸프탈레이트 또는 트리아세틴과 같은 연화제를 1 대 약 0.05 내지 약 0.3 (코팅 재료 대 연화제)의 비율로 피복 용액에 첨가한다. 분무 과정을 연속적으로 수행하는 것이 적절하며 피복의 조건을 고려하여 분무량을 조절하는 것이 가능하다. 분무압은 다양하게 조절할 수 있고, 일반적으로 약 1 내지 약 1.5 바(bar)의 분무압으로 만족할만한 결과가 얻어진다.
한편 본 발명의 약학적 조성물은 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료 효과가 있는 것으로 알려진 종래의 약제와 병용 투여될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 약학적 조성물과 함께 병용될 수 있는 약제는 염증성 질환, 장 질환 또는 자가면역질환 등의 치료에 사용되는 항체의약품, 예컨대, 인플릭시맙(infliximab), 아달리무맙(adalimumab), 골리무맙 (golimumab), 압식시맙(abciximab), 알렘투주맙(alemtuzumab), 아틀리주맙(atlizumab), 바실릭시맙(basiliximab), 벨리무맙(belimumab), 베바시주맙(bevacizumab), 이필리무맙 (ipilimumab), 브렌툭시맙 베코틴(brentuximab vecotin), 카나키누맙(canakinumab), 캅로맙 펜데티드(capromab pendetide), 카투막소맙 (catumaxomab), 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙(cetuximab), 다클리주맙(daclizumab), 데노수맙(denosumab), 에쿨리주맙(eculizumab), 에드레콜로맙(edrecolomab), 에팔리주맙(efalizumab), 에푼구맙(efungumab), 에르투막소맙(ertumaxomab), 에타너셉트(etanercept), 에타라시주맙(etaracizumab), 폰톨리주맙 (fontolizumab), 겜투주맙 오조가미신(gemtuzumab ozogamicin), 기렌툭시맙(girentuximab), 이브리투모맙 티욱세탄(ibritumomab tiuxetan), 이고보맙(igovomab), 임시로맙(imciromab), 이필리무맙 (ipilimumab), 라베투주맙(labetuzumab), 메폴리주맙(mepolizumab), 모타비주맙(motavizumab), 나탈리주맙(natalizumab), 니모투주맙(nimotuzumab), 노페투모맙 머펜탄(nofetumomab merpentan), 오파투무맙(ofatumumab), 오말리주맙(omalizumab), 오레고보맙(oregovomab), 팔리비주맙 (palivizumab), 파니투무맙(panitumumab), 펨투모맙(pemtumomab), 페르투주맙(pertuzumab), 라니비주맙 (ranibizumab), 락시바쿠맙(raxibacumab), 리툭시맙(rituximab), 로벨리주맙(rovelizumab), 루플리주맙 (ruplizumab), 타카투주맙 테트락세탄(tacatuzumab tetraxetan), 테피바주맙(tefibazumab), 토실리주맙 (tocilizumab), 토시투모맙(tositumomab), 트라스투주맙(trastuzumab), 우스테키누맙(ustekinumab), 세쿠키누맙, 베돌리주맙, 비실리주맙(visilizumab), 보투무맙(votumumab), 잘루투무맙(zalutumumab) 및 자놀리무맙(zanolimumab)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 습진, 아토피성 피부염 등의 알레르기 질환의 치료를 위해, 항히스타민제, 스테로이드, 살리실산, 우레아, 타크롤리무스, 시클로포스포린, 광선 요법 등과 함께 병용될 수 있고, 염증성 장 질환 등의 장 질환 치료를 위하여, 설파살라진, 아자티오프린, 머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 시클로스포린, TNF 차단제(아달리무맙, 에타너셉트 등), 인테그린 항체 (베돌리주맙, 나탈리주맙 등) 등과 함께 병용될 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료에 사용되기 위한 상기 균주 또는 조성물의 용도 및 상기 질환 치료제의 제조를 위한 상기 균주 또는 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명에서, 용어 '예방'은 질병을 축소시키는 방지(averting), 지연(delaying), 방해(impeding) 또는 저해(hindering)와 관련된 것이다.
본 발명에서, 용어 '치료'는 질병의 증상을 개선, 치유 또는 감소 또는 질병의 진행을 감소 또는 정지시키기 위해 질병에 걸린 피험자를 돌보는 것과 관련된 것이다.
본 발명은 또 다른 관점에서 약학적 유효량의 상기 균주 또는 조성물을 아토피 피부염을 비롯한 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 및/또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료나 장 건강, 알레르기 반응, 염증 반응 또는 자가면역 반응의 개선이 요구되는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 상기 질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
상기 질환의 예방 또는 치료방법에 사용되는 약학적 조성물 및 투여 방법은 상기에서 설명하였으므로, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
한편, 상기 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 투여할 수 있는 개체는 인간을 포함한 모든 동물을 포함한다. 예를 들어, 개, 고양이, 마우스와 같은 동물일 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 균체, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 유효량 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 화장료 조성물은 피부 알레르기, 피부 두드러기, 아토피 피부염, 건선, 진균에 의한 감염 및 습진으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 민감성 피부를 개선하는 기능성을 갖는 것을 특징으로 할 수 있으나, 그 기능이 이에 한정되지는 않는다.
본 발명에 있어, '화장료 조성물'은 상기 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 균체, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 조성물로서 그 제형은 어떠한 형태라도 가능하다. 이러한 제형의 예로 상기 화장료 조성물을 이용하여 제조된 화장료는 크림류, 팩류, 로션류, 에센스류, 화장수류, 파운데이션류 및 메이크업 베이스류 등이고, 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 이러한 제형 중 어떠한 형태로도 제조되어 상용화될 수 있으며, 상기 예들에 한정되지 않는다. 본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 락토바실러스 가세리 KBL697 균주의 균체, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 기능성 패치에 관한 것으로, 상기 기능성 패치는 미용용 또는 의료용일 수 있다.
상기 패치는 피부 알레르기, 피부 두드러기, 아토피 피부염, 건선, 진균에 의한 감염 및 습진으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 민감성 피부를 개선하는 기능성을 갖는 것을 특징으로 할 수 있으나, 그 기능이 이에 한정되지는 않는다.
본 발명에서, 패치는 전형적으로 전달하고자 하는 물질을 함유하는 소형의 접착 붕대로, 이들 붕대는 다양한 형태를 취할 수 있다. 가장 단순한 형태는 지지체 위에 위치시킨 전달하고자 하는 물질을 함유하는 저장소를 포함하는 접착성의 단일체이다. 저장소는 전형적으로는 미용학 또는 제약적으로 허용되는 감압성의 접착제로부터 형성되지만, 일부 경우에는 피부 접촉 표면에 적합한 접착제 박층이 제공된 비접착성 재료로부터 형성될 수도 있다. 전달하고자 하는 물질이 이들 패치로부터 패치를 부착한 객체에 투여되는 속도는 전달하고자 하는 물질에 대한 피부의 투과성이 보통의 사람 및 피부 위치에 따라 달라지기 때문에 변화될 수 있으며, 이는 당업자가 용이하게 선택하여 적용할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. KBL697의 T 세포에서 Th2 type 사이토카인 억제에 따른 알레르기 반응 완화 및 치료 효과
IL-4, IL-5 등의 Type-2 helper T cell(Th2) 관련 사이토카인은 Th2 관련 면역 반응을 증가시키고 IgE의 생산을 증가시킴으로써 만성 알레르기 반응에 기여한다고 보고되어 있다 (Passante E, Inflamm. Res. 2009). 본 발명에서는 다양한 락토바실러스 균주의 IL-4, IL-5 분비 억제 효과를 검증함으로써, 만성 알레르기 질환을 비롯한 다양한 알레르기 질환 치료제로 활용 가능한 프로바이오틱 균주를 스크리닝 하고자 하였다. 이를 위하여, 마우스 T 세포주인 EL4 세포주를 이용하여 IL-4 및 IL-5의 분비 억제 효과를 하기와 같이 실험하였다.
1-1. EL-4 세포주의 배양
EL4(ATCC NO. TIB-39) 세포는 37℃, 5% CO2의 조건하에 10% FBS(Fetal bovine serum), penicillin(100 μg/mL), streptomycin(100 μg/mL)을 첨가한 DMEM 배지에서 배양하며 3일에 한번씩 계대 하였다. EL4 세포는 24 웰 플레이트에 4 x 105 cells/well의 농도로 분주하여 16~20시간 동안 배양한 뒤 알레르기 반응을 유도하고 균주를 처리하였다.
1-2. 균주의 배양 및 회수
사용된 락토바실러스 가세리 균주들은 0.5% 시스테인을 첨가한 MRS 배지에서 배양하였고, 18시간 간격으로 총 2회의 계대배양(subculture)을 통해 활성화시킨 뒤 실험에 사용하였다. 수득한 배양액을 15,000 × g, 3min 조건에서 원심분리 한 뒤, 그 침전물을 PBS 버퍼로 세척하였다. LIVE/DEAD™ BacLight™ Bacterial Viability and Counting Kit, for flow cytometry (Thermo Fisher Scientific, USA)를 사용하여 SYTO9과 PI로 균주를 15분 동안 염색하였다. 그 후 내장된 비드(bead)를 넣어주어 유세포분석기(Flow cytometry)로 염색된 생균수를 산출하였다.
1-3. 알레르기 반응 유도 후 균주 처리 및 IL-4, IL-5 분비량 측정
24 웰 플레이트에 미리 분주해 둔 EL4 세포에 알레르기 반응을 유도하기 위하여 PMA(20 ng/mL)와 ionomycin(1 μg/mL)를 각 웰 당 100 μL 처리하였다. 이후 미리 준비한 균주를 세포:균주가 1:10의 비율이 되도록 300 μL씩 처리하였다. 37 ℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하여 준 뒤, 상층액을 수거하고 mouse IL-4 ELISA set (Cat NO. 555232, BD OptEIATM)과 mouse IL-5 ELISA set (Cat NO. 555236, BD OptEIATM)를 이용하여 IL-4 및 IL-5의 분비량을 제조사 방식에 따라 측정하였다.
그 결과, 도 1 및 2에서와 같이 KBL697에서 IL-4 및 IL-5의 분비를 모두 효과적으로 억제하여, 알레르기 반응을 매개하는 Th2 유형 사이토카인 분비 억제를 통한 알레르기를 치료 및 예방 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
실시예 2. KBL697의 호염구에서 히스타민 분비 억제에 따른 알레르기 반응 완화 및 치료 효과
알레르기 반응에서 히스타민은 조직에서 발현되어 염증반응을 일으키고, 히스타민 분비를 억제하면 히스타민에 의한 반응을 차단하여 알레르기 증상이 완화된다고 보고되어 있다. 본 발명에서는 KBL697의 히스타민 분비 억제를 통한 알레르기 반응 완화 및 치료 효과를 추가로 확인하였다. 또한, 실시예 1에서 확인한 만성 알레르기 치료 및 예방 효과가 락토바실러스 가세리 고유의 특성인지, 또는 락토바실러스 가세리 중에서도 KBL697에서 특히 현저한 효과를 나타내는지 확인하고자, KBL697 외에도 추가 9종의 락토바실러스 가세리 균주에 대해 히스타민 분비 억제능을 함께 평가하였다. 히스타민 분비 억제능은 RBL-2H3 세포주를 배양하여 탈과립(degranulation)을 유도한 후 히스타민과 함께 분비되는 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 발현을 기질과의 발색반응으로 측정하여 확인하였다.
2-1. RBL-2H3 세포주의 배양
RBL-2H3(ATCC NO. CRL-2256) 세포는 37℃, 5% CO2의 조건하에 10% FBS(Fetal bovine serum), penicillin(100 μg/mL), streptomycin(100 μg/mL)을 첨가한 DMEM 배지에서 배양하며 3일에 한번씩 계대 하였다. RBL-2H3 세포는 6 웰 플레이트에 1 × 106 cells/well의 농도로 분주하여 3시간 동안 배양한 뒤 IgE(0.5 μg/mL)를 처리하여 16 - 20시간 배양하였다.
2-2. 균주의 배양 및 배양액의 준비
사용된 락토바실러스 가세리 균주들은 0.5% 시스테인을 첨가한 MRS 배지에서 배양하였고, 18시간 간격으로 총 2회의 계대배양(subculture)을 통해 활성화시킨 뒤 실험에 사용하였다. 수득한 배양액을 15,000 × g, 3min 조건에서 원심분리 하여 상층액을 수거하였다.
2-3. 균주 처리 후 탈과립 유도
6 웰 플레이트에 미리 분주해 둔 RBL-2H3 세포의 배지를 제거한 뒤, 1 mL의 시라가니안 버퍼(Siraganian buffer, pH7.2)로 2회 세척하였다. 이후 미리 준비한 균 배양액 혹은 양성대조군인 케토티펜(ketotifen, 20 μg/mL)을 각 웰 당 120 μL 처리하고, 37 ℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 20분 동안 배양하여 준 뒤, 항원(DNP-HAS, 1 μg/mL)를 60 μL 처리하여 항원-항체 반응에 따른 탈과립을 유도하였다. 음성 대조군으로는 시라가니안 버퍼를 120 μL 처리한 후 탈과립을 유도하였다. 반응은 37℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 20분 동안 진행시킨 뒤 상층액을 수거하였다.
2-4. 발색반응 확인
베타-헥소사미니다아제의 활성을 확인하기 위하여, 96 웰 플레이트에 실시예 2-3에서 수거된 상층액을 25 μL씩 각 웰에 옮겨 담은 다음, 각각 기질(p-nitrophenyl N-acetyl-D-glucosaminidase)을 25 μL씩 넣고 37 ℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 90분간 반응시켰다. 그 후 반응 중지 용액(Na2CO3/NaHCO3)을 200 μL 넣어 반응을 종료한 후 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 음성 대조군과 비교하여 각종 락토바실러스 가세리를 처리하였을 때의 흡광도 값을 백분율로 환산하여 탈과립 저해 정도로 나타내었다.
그 결과, 도 3 및 표 1에서 확인할 수 있듯이, KBL697은 다른 락토바실러스 가세리 균주에 비해 최대 4배 가량 낮은 베타-헥소사미니다아제 분비량을 나타내었고, 이는 양성대조군인 시판 항히스타민제인 케토티펜(ketotifen)보다도 낮은 수치로 확인되었다. 이로써, KBL697은 우수한 탈과립 방지 활성을 나타내어 히스타민의 과다 분비에 따른 알레르기 증상을 효과적으로 완화할 수 있음을 알 수 있었다.
Species 처리균주 또는 처리약물 β-hexosaminidase
(fold change)
- (Negative control) Siraganian buffer 1.0
- (Positive control) Ketotifen 0.3861
Lactobaciilus gasseri KBL697 0.2213
Lactobaciilus gasseri KBL695 0.4601
Lactobaciilus gasseri KBL698 0.4620
Lactobaciilus gasseri KBL685 0.4450
Lactobaciilus gasseri KBL686 0.4213
Lactobaciilus gasseri KBL688 0.4571
Lactobaciilus gasseri KBL373 0.5691
Lactobaciilus gasseri SNUG50243 0.5309
Lactobaciilus gasseri SNUG60080 1.0091
Lactobaciilus gasseri SNUG60134 0.9236
실시예 3. KBL697의 면역 조절 및 염증 억제 효과 분석
KBL697의 항알레르기 효능과 더불어 면역 조절 및 항염증 효과도 함께 확인 하였다. 이를 위하여 염증반응에서 중요한 역할을 하는 대식세포(macrophage)를 이용하여 면역 조절 기능을 가지는 대표적인 사이토카인 IL-10과 염증반응의 주요 지표가 되는 사이토카인 TNF-α 및 IL-6 간의 비율(IL-10/TNF-α, IL-10/IL-6)을 측정하였다.
3-1. RAW264.7 세포주의 배양
RAW264.7(ATCC NO. TIB-71) 세포는 37℃, 5% CO2의 조건하에 10% FBS, penicillin(100 μg/mL), streptomycin(100 μg/mL)을 첨가한 DMEM 배지에서 배양하며 3일에 한번씩 계대 배양하였다. 배양된 RAW264.7 세포를 24 웰 플레이트에 1 × 105 cells/well의 농도로 분주하여 16 - 20시간 동안 배양한 후 실시예 3-3에 사용하였다.
3-2. 균주의 배양 및 시료의 준비
사용된 시료는 동일한 생균수로 보정된 배양액을 생균(live bacteria), 저온살균(pasteurization), 고온살균(heat kill) 세 가지 시료로 준비하였다. 생균, 저온살균, 고온살균에 사용된 시료는 실시예 1-2와 동일한 방법으로 준비하였다. 그 후 저온살균 시료의 경우, 70℃에서 30분 동안 반응시켜 동일한 원심분리 과정으로 준비하였다. 고온살균 시료는 121℃에서 15분 동안 살균한 후 동일한 과정으로 준비하였다. 음성대조군으로는 0.5% 시스테인을 첨가한 MRS 배지를 사용하였다.
3-3. 염증 반응 유도 후 균주 처리 및 염증성 사이토카인 분비량 측정
24 웰 플레이트에 미리 분주해 둔 RAW264.7 세포에 염증반응을 유도하기 위하여 LPS(20 ng/mL)를 각 웰 당 500 μL 처리하였다. 이후 미리 준비한 균주를 세포:균주의 비율이 1:10이 되도록 300 μL 부피로 처리한 후 37℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포:균주 혼합물의 상층액을 수거하고 Mouse TNF ELISA Set II (Cat No. 558534, BD OptEIA™), Mouse IL-6 ELISA Set (Cat No. 555240, BD OptEIA™), Mouse IL-10 ELISA Set (Cat No. 555252, BD OptEIA™)를 이용하여 각 사이토카인의 양을 제조사 방식에 따라 측정하였다.
그 결과, 도 4에서와 같이, 락토바실러스 가세리 균주 중에서 특히 KBL697이 IL-10 분비를 유도하여 면역 조절 및 염증 반응 억제의 측면에서 우수한 효과를 나타내었으며, 도 5 및 도 6에 도시한 바와 같이, 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)인 TNF-α 및 IL-6 로 보정한 IL-10 분비능으로부터도 역시 KBL697 처리군에서 비교 실험군에 비해 매우 높은 염증 억제 효과 및 면역조절능력을 보임을 확인하였다. 따라서, KBL697은 IL-10 분비를 통한 면역 조절 및 염증 억제 활성이 있음을 알 수 있었다. 또한, 이와 같은 효과는 생균 뿐만 아니라 저온살균 또는 고온살균된 사균체에서도 유사하게 확인되어 (표 2 및 표 3), KBL697은 사균등의 다양한 형태로 염증반응 억제에 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
Figure 112019053179492-pat00001
Figure 112019053179492-pat00002
실시예 4. KBL697의 항진균 효과 분석
KBL697의 항진균 효과를 spot assay 방법으로 확인하였다. KBL697을 MRS 액체 배지에 약 1% 접종 후, 37℃ 배양기에서 혐기적 조건으로 약 24시간 동안 정치배양 하였다. 균체가 배양된 배양액은 혐기적 조건에서 제작된 MRS 고체 배지에 10 μL씩 spotting 후 37℃에서 혐기적 조건으로 약 24시간 동안 배양하였다. 진균성 미생물인 Malassezia furfur KCTC 7545는 호기적 조건에서 제작된 mYPG 액체 배지에 1%의 비율로 접종하여 37℃ 배양기에서 약 24 - 48시간 배양하여 준비하였다. 항진균 효능 평가에 사용될 mYPG soft 배지는 표 4의 성분으로 제작하였으며, 제작된 배지 2.5 mL에 500 μL의 M. furfur가 배양된 배양액을 접종하였다. M. furfur가 접종된 mYPG soft 배지 2.5 mL을 KBL697이 spotting 되어있는 MRS 배지에 부어준 후 1시간 동안 건조하였다. 건조된 배지는 37 ℃ 배양기에서 호기적 조건으로 24 - 48 시간 동안 배양하였다. 배양된 배지에 생성된 투명환(clear zone)이 확인되면 spotting한 유산균의 외부부터 투명환까지의 길이를 측정하여 항진균 활성도를 측정하였다. 투명환은 진균의 성장이 저해된 부분으로, 투명환까지의 길이를 통해 유산균에 의한 항진균 활성을 판단할 수 있다.
세 번의 반복 실험 결과, KBL697에 의해 spotting 된 부위에서 약 6.00 mm의 간격으로 투명환이 확인되었으며(도 7), 이에 KBL697이 진균성 미생물의 생장을 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
Components Proportion (g/l)
Malt extract 5.0
Peptone 10.0
Glucose 20.0
Tween 40 1.0
Tween 80 1.0
Agar 4.5
실시예 5. KBL697의 아토피 완화 효과
KBL697의 알레르기 개선 효과 중 아토피 완화 효과를 확인하고자 아토피성 피부질환 동물 모델인 NC/Nga 마우스 모델을 이용하였다.
NC/Nga 마우스를 각 그룹당 5마리씩 그룹핑 한 후, 마우스의 등을 귀 하단부에서부터 꼬리 상단부까지 제모하고 24시간 방치하였다. 그 후 1%의 DNCB(dinitrochlorobenzene) 용액 (아세톤:올리브 오일 = 3:1) 200 μL를 제모 부위에 1주일에 2회씩 도포하여 아토피 피부염을 유발하였다. 피부염 유발 3주차부터 대조군 마우스에는 PBS를 매일 200 μL씩 경구 투여하였고, 실험군 마우스에는 배양된 KBL697 균주를 원심분리, PBS 희석 후 회수 과정으로 세척한 후 200 μL의 PBS에 최소 2 × 109 (KBL697-9) / 2 × 108 (KBL697-8) / 2 × 107 (KBL697-7) CFU가 첨가되도록 준비하여 매일 200 μL씩 경구 투여하였다. 한편, 양성대조군 마우스에는 덱사메타손(Dexamethasone, 60 μg/mL)을 200 μL씩 투여하였다. 이후, 균을 투여하는 3주 동안, 대조군 및 실험군 마우스의 피부염 스코어(Dermatitis Score)를 매주 측정하였고, 균을 투여한 후 3주째 되는 날 마우스의 긁는 시간(scratching time)과 피부 두께 그리고 마우스를 부검하여 혈중 IgE 농도를 측정하였다.
5-1. 피부염 스코어의 측정
DNCB로 유발된 피부 병변의 평가를 위해 아래와 같은 방법을 통해 피부염 스코어를 측정하였다. 피부 상태는 균주를 투여하기 시작한 3주째부터 1주 간격으로 3주 동안 사진을 찍어 조사하였다. 피부의 건조상태(dryness), 부종(edema), 홍진과 출혈(erythema/hemorrhage) 그리고 미란과 상처(erosion/excoriation) 4가지 지표를 체크하여 병변이 없는 상태를 0점(none), 가벼운 상태를 1점(mild), 중간 상태를 2점(moderate), 심한 상태를 3점(severe)을 주었고, 총점으로 평가하였다.
그 결과 도 8에서 볼 수 있듯이, 아토피 피부염이 유도된 대조군(Negative)에 비해 KBL697을 투여한 균에서 DNCB를 통해 피부염 스코어가 유의하게 감소되었으며, 특히 KBL697을 2 × 109 CFU로 투여한 실험군(KBL697-9)에서는 양성대조군인 덱사메타손(Dexamethasone) 투여군보다도 낮은 수준의 피부염 스코어를 나타내었다. 이로써, KBL697 투여에 따른 아토피 피부염 치료 효과를 확인할 수 있었다.
5-2. 가려움 완화 효과
DNCB로 유발된 아토피 피부염 마우스 모델에서 KBL697 투여에 따른 가려움 완화 효과를 확인하고자, 균주 투여 3주 후 10분간 마우스 모델을 동영상 촬영하며 긁는 시간(scratching time)을 측정하였다.
그 결과, 도 9에서 볼 수 있듯이, KBL697을 투여한 실험군에서 모두 긁는 시간이 PBS 투여군에 비해 현저히 감소하는 것으로 나타나, KBL697의 섭취로 아토피 피부염의 가려움 증상이 많이 완화되는 것을 확인할 수 있었다.
5-3. 피부 두께의 감소
DNCB로 유발된 아토피 피부염 마우스 모델에서 KBL697의 투여에 따른 가려움 완화 효과를 확인하고자, 균주 투여 3주 후 양각기(calipers)을 이용하여 마우스의 귀 및 등 피부의 두께를 측정하고 아토피 피부염에 의한 부종 증상의 완화를 관찰하였다.
그 결과, 도 10 및 도 11에서 볼 수 있듯이, KBL697을 투여한 실험군 및 양성대조군에서 유의미하게 귀 및 피부의 두께가 감소되는 효과를 관찰할 수 있었다.
5-4. 혈중 IgE 농도의 감소
아토피 피부염 환자의 IgE 농도는 대부분 아토피 피부염의 임상적 중증도가 심해질수록 증가되었다고 밝혀져 있다(Matsumoto M, J. Immunol. 1999). 이에 아토피 피부염의 발생으로 나타나는 대표적인 혈액학적 인자인 IgE의 농도를 균주 투여 3주 후 혈액을 채취하여 혈장(serum)을 분리하고 Mouse IgE ELISA Set (Cat No. 555248, BD OptEIA™)을 사용하여 측정하였다.
그 결과, 도 12에서와 같이, KBL697을 경구 투여한 실험군에서 혈중 IgE 농도가 유의미하게 감소되는 것으로 나타나, KBL697의 투여에 따른 항 알레르기 효과를 확인할 수 있었다.
실시예 6. KBL697의 장간막 밀착 연접 강화 효과
장염 환자의 경우, 장세포의 밀착 연접(tight junction)에 관여하는 단백질의 발현이 감소하게 되어 세포 투과도가 높아져서 염증반응이 더 심하게 일어난다 (J. Landy, World J. Gastroenterol., 2016). 이에, 본 발명에서는 KBL697이 대표적 장 상피세포 모델인 Caco-2 세포주에서 밀착연접을 강화시킬 수 있는지 확인해 보고자 하였다.
6-1. Caco-2 세포주의 배양
Caco-2(ATCC NO. HTB-37) 세포는 37℃, 5% CO2의 조건하에 10% FBS(Fetal bovine serum), penicillin(100 μg/mL), streptomycin(100 μg/mL)을 첨가한 MEM 배지에서 배양하며 2일에 한번씩 배지를 교체해주고 4일에 한번씩 계대 배양하였다.
6-2. 밀착 연접 측정
Caco-2 세포는 24 트랜스 웰 플레이트 (Corning, USA)에 3 × 105 cells/mL의 농도로 200 μL씩 상층부에 분주하여 7일간 배양한 뒤, 그 다음날 FBS가 없는 MEM만 있는 배지로 교체해주고 밤새 배양 한 후 전극이 있는 집게를 삽입해 EVOM Epithelial Tissue Voltohmmeter (World Precision Instruments, Florida, USA) 로 TEER(transepithelial electrical resistance)를 측정하였다 (0h TEER). 그 후 세포:균주의 비율이 1:100이 되도록 균주를 처리하여 24시간 배양하고 TEER를 측정하였다 (24h TEER).
TEER(Ω·cm2) = (resistance(Ω) - background resistance(Ω)) × membrane area(cm2) 의 수식으로 계산한 후 아래와 같은 식을 적용하였다.
TEER change(%) = 24h TEER (Ω·cm2 )/ 0h TEER (Ω·cm2 ) × 100
그 결과, 도 13에서와 같이 KBL697을 처리한 Caco-2 세포주는 밀착 연접이 대조군에 비해 20% 정도 증가하는 것으로 나타나, KBL697은 장염으로 인한 장세포의 장간막 연접의 약화를 회복시키는 효과가 있음을 알 수 있었다. 한편, 이와 같은 효과는 다른 락토바실러스 가세리 균주인 KBL342 및 KBL381에서는 확인되지 않았다.
실시예 7. KBL697의 장염 치료 및 예방 효과
KBL697의 장염 치료 효과를 확인하고자, 장염이 유발된 마우스 모델을 이용하였다. 장염이 유발된 마우스 모델은 C57BL/6 마우스를 각 그룹당 5마리씩 그룹핑 한 후, 3% DSS를 수돗물에 용해하여 식수로 5일간 음용 시킴으로써 유도하였다. 이후, 양성 대조군 마우스에는 스테로이드 계열 약물 prednisolone을 1 mg/kg/day에 맞춰 200 μL의 PBS로 경구 투여하였으며, 실험군 마우스에는 실시예 5와 동일하게 준비된 배양된 KBL697 균주를 각각 5 × 109 CFU/mL, 5 × 108 CFU/mL, 5 × 107 CFU/mL이 되도록 희석시킨 후 매일 200 μL씩 경구 투여하였다. 대조군 마우스에는 PBS를 매일 200 μL씩 경구 투여하였다. 본 실시예에 사용된 PBS는 시스테인이 일부 세포에서 항염증과 관련이 있다는 보고에 따라 (Hasegawa, S et al., Clin Exp Immunol. 2012, 167, 269-274) 균주 배양액 조성에 포함되어 세척 이후에도 소량 남아있는 시스테인에 의한 영향을 배제하기 위해 0.05% 시스테인을 첨가되도록 제조되었다. DSS를 음용하기 시작한 날로부터 21일까지 대조군 및 실험군 마우스의 체중 변화를 매일 측정하였고, DSS를 공급한 후 21일째 되는 날 마우스를 부검하여 대장(colon)의 길이를 측정하였다.
그 결과 도 14에서와 같이, 1 × 109 CFU의 KBL697을 투여한 장염 유발 마우스는 대조군 마우스와 유사하게 10일까지는 몸무게가 급격히 감소하다가, 이후 서서히 몸무게가 회복되어 21일째에는 정상 수준으로 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 특히 도 15에서와 같이, 1 × 109 CFU의 KBL697을 경구 투여한 마우스(KBL697 × 10^9)에서 대장 길이가 Naive 군의 90% 수준으로 회복되어 80% 이하인 음성대조군에 비해 대장 길이 감소 현상이 현저히 완화되었음을 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과로부터, KBL697은 장염 질환 개선 효과를 발휘함을 알 수 있었다.
실시예 8. KBL697의 건선(psoriasis) 치료 및 예방 효과
KBL697의 건선 완화 효과를 확인하고자 Balb/c 마우스 모델을 이용하였다.
Balb/c 마우스를 각 그룹당 5마리씩 그룹핑 한 후, 대조군 마우스에는 PBS를 매일 200 μL씩 10일동안 경구 투여하였고, 실험군 마우스에는 각 시험 균주를 PBS에 최소 1x109 CFU/0.2 mL이 되도록 희석시킨 후 매일 200 μL씩 경구 투여하였다. 균주의 준비 및 대조군의 준비는 실시예 7과 동일하게 진행하였다. 균 투여 2주차가 되었을 때, 마우스의 등을 귀 하단부에서부터 등 중간부까지 제모하고 24시간 방치하였다. 그 후 5%의 이미퀴모드(imiquimod) 크림 62.5 mg을 제모 부위에 1일에 1회씩 도포하여 건선을 유발하였다. 건선 유발 이후 양성대조군 마우스에는 덱사메타손 (0.25 mg/mL)을 매일 200 μL씩 투여하였다. 건선이 유도되는 기간에도 KBL697은 동일한 양이 매일 투여되도록 하였다. 건선이 유도된 10일 동안, 대조군 및 실험군 마우스의 건선 중증도(PASI: psoriasis area and severity index)를 2일 간격으로 측정하였고, 건선을 유도한 후 10일째 되는 날 마우스의 피부 두께를 측정한 후 마우스를 부검하여 피부 조직 및 혈중 사이토카인의 농도를 측정하였다.
8-1. 건선 중증도(PASI) 측정 및 피부 두께의 변화
이미퀴모드로 유발된 피부 건선 병변의 평가를 위해 아래와 같은 방법을 통해 PASI 스코어를 측정하였다. 피부의 홍반(erythema), 인설(scaling), 두께(thickness) 3가지 지표를 체크하여 병변이 없는 상태를 0점(none), 가벼운 상태를 1점(mild), 중간 상태를 2점(moderate), 심한 상태를 3점(severe), 매우 심한 상태를 4점(very severe)을 주었고, 총점으로 평가하였다.
그 결과 도 16(A)에서 볼 수 있듯이, 건선이 유도된 대조군(NC)에 비해 KBL697을 투여한 군에서 이미퀴모드로 유도된 건선 중증도가 유의하게 감소되어 양성대조군인 덱사메타손 투여군(DXM)과 유사하게 유지됨을 확인할 수 있었다. 또한 양각기를 이용하여 마우스의 귀 및 등 피부의 두께를 측정하고 건선에 의한 부종 증상의 완화를 관찰한 결과, 도 16(B)에서 볼 수 있듯이 KBL697을 투여한 실험군에서 양성대조군과 유사하게 유의미한 귀 및 피부의 두께 감소 효과를 관찰할 수 있었다.
8-2. 사이토카인 측정
건선의 경우 IFN-γ, TNF-α 등 Th1 사이토카인 반응은 물론, IL-17로 대표되는 Th17 반응이 증상의 발생 및 병증의 악화에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다 (Brembilla NC, Front Immunol. 2018). 이미퀴모드로 피부 건선이 유발된 마우스를 부검하여 피부 조직 및 혈중에서의 사이토카인의 농도를 측정하였다. 사이토카인의 농도는 피부 조직에서 준비된 단백질 시료 및 혈액에서 실시예 5-4와 동일하게 준비된 혈장 시료를 사용하여 각각 Mouse TNF-α ELISA Set (Cat No. 555138, BD OptEIATM), Mouse IFN-γ ELISA Set (Cat No. 558534, BD OptEIATM), Mouse IgE ELISA Set (Cat No. 555248, BD OptEIATM), Mouse IL-17 DuoSet ELISA (Cat No. DY421-05, R&D SYSTEMS) kit를 사용하여 측정하였다.
도 17에서 볼 수 있듯, 건선이 유도된 마우스에서 증가된 피부 조직내 TNF-α, IFN-γ 등 염증성 사이토카인이 KBL697에 의해 감소되는 것을 확인하였다. 또한, Th17에 특이적인 IL-17 역시 건선이 유도된 피부조직(skin) 및 혈장(serum)에서 증가하였으나 KBL697 투여로 감소되는 것을 확인하였다. 이상의 결과로 KBL697의 투여가 건선 발병시 특이적으로 증가하는 염증성 사이토카인의 감소 효과를 통해 병증의 치료 혹은 예방 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
실시예 9. 장염 치료용 항체와 KBL697를 병행 투여한 경우의 장염 치료 및 예방 효과
인플릭시맙(제품명 레미케이드)는 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 궤양성 대장염, 성인 크론병, 소아 크론병, 건선, 건선성 관절염 등 자가면역성 질환에 주사제의 형태로 사용되는 치료용 재조합 항체의약품이다. KBL679과 인플릭시맙을 동시 투여한 경우 in vivo 상에서 장 질환 증상 개선 효과에 어떤 효과를 보이는지를 확인하고자 하였다.
C57BL/6 마우스를 각 8마리씩의 군집으로 구분한 후, 2% DSS를 수돗물에 용해하여 식수로 8일간(D0~D7) 음용시킴으로써 장염을 유도하였다. 이와 동시에 14일간(D0~D13) 대조군 마우스에는 PBS를 매일 200 μL씩 경구 투여하였고, KBL697 투여군 마우스에는 KBL697 균주를 PBS에 1 × 1010 CFU/mL이 되도록 희석시킨 후 매일 200 μL씩 경구 투여하여 일일 투여량이 2 × 109 CFU가 되도록 하였다. 치료용 항체 투여군에는 인플릭시맙 항체를 마우스당 5 mg/kg의 용량이 되도록 3일차에 한번 투여하였고, KBL697 균주가 투여되는 기간동안 매일 PBS를 200 μL씩 경구 투여하였다. 병행투여 실험군에는 KBL697 균주가 PBS에 1 × 1010 CFU/ml이 되도록 희석된 용액을 매일 200 μL씩 경구 투여하며, 3일차에 인플릭시맙 항체를 마우스당 5 mg/kg의 용량이 되도록 정맥 주사하였다. 인플릭시맙 항체를 투여하지 않은 실험군들에는 동일한 부피의 PBS를 정맥 주사하였다. DSS를 공급하여 장염이 유발되는 14일 동안, 대조군 및 각 실험군 마우스의 체중 변화를 매일 측정하였고, DSS를 공급하기 시작한 후 14일째 되는 날(D14) 마우스를 부검하여 대장(colon)의 길이를 측정하였다.
그 결과, 도 18(A)에 나타낸 바와 같이, 대장 길이 변화에 있어서 KBL697 단독투여군(DSS+KBL697) 및 인플릭시맙 단독투여군(DSS+IFX)에서 대조군 마우스(DSS+PBS)에 비해 대장 길이 감소 폭이 현저히 개선된 것을 확인하였다. 인플릭시맙과 KBL697을 동시에 투여한 군(DSS+Combine)에서는 인플릭시맙이나 KBL697을 단독으로 투여한 군에 대비하여 대장 길이의 유의한 개선 효과가 있는 것으로 확인되었다.
체중 변화에 있어서도, 도 18(B)에 나타낸 바와 같이 투여 후 14일이 경과했을 때 KBL697 단독투여군(DSS+KBL697) 및 인플릭시맙 단독투여군(DSS+IFX)에서 아무것도 처리하지 않은 대조군 마우스에 비해 유의한 체중 감소의 개선 효과를 나타내었으며, 인플릭시맙과 KBL697을 동시 투여한 군(DSS+Combine)에서는 투여가 진행된 3일 이후 DSS 가 투여된 모든 실험군 대비 높은 체중을 유지하는 것을 확인하여, 대장염 유발에 따른 체중 감소의 증상을 완화시키는 효과가 있음을 확인하였다. 따라서 상기 균주를 과민성 대장 증후군의 치료 용도로 활용함에 있어, 시판중인 치료용 항체와 병행 투여시 더욱 높은 치료 효과를 기대할 수 있음을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
한국생명공학연구원 KCTC13520BP 20180427
<110> Ko BioLabs, Inc. <120> Lactobacillus Gasseri KBL 697 and Use thereof <130> P18-B094 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1482 <212> DNA <213> Lactobacillus gasseri <400> 1 ggcaagtggg cggcgtgcta tacatgcagt cgagcgagct tgcctagatg aatttggtgc 60 ttgcaccaaa tgaaactaga tacaagcgag cggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac 120 ctgcccaaga gactgggata acacctggaa acagatgcta ataccggata acaacactag 180 acgcatgtct agagtttaaa agatggttct gctatcactc ttggatggac ctgcggtgca 240 ttagctagtt ggtaaggcaa cggcttacca aggcaatgat gcatagccga gttgagagac 300 tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360 atcttccaca atggacgcaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420 gctcgtaaag ctctgttggt agtgaagaaa gatagaggta gtaactggcc tttatttgac 480 ggtaattact tagaaagtca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540 gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagtgca ggcggttcaa taagtctgat 600 gtgaaagcct tcggctcaac cggagaattg catcagaaac tgttgaactt gagtgcagaa 660 gaggagagtg gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720 ggcgaaggcg gctctctggt ctgcaactga cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac 780 aggattagat accctggtag tccatgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tgggaggttt 840 ccgcctctca gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta cgaccgcaag 900 gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960 gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccagt gcaaacctaa gagattagga 1020 gttcccttcg gggacgctga gacaggtggt gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080 tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgtcatt agttgccatc attaagttgg 1140 gcactctaat gagactgccg gtgacaaacc ggagaaaggt ggggatgacg tcaagtcatc 1200 atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga cggtacaacg agaagcgaac 1260 ctgcgaaggc aagcggatct ctgaaagccg ttctcagttc ggactgtagg ctgcaactcg 1320 cctacacgaa gctggaatcg ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg aatacgttcc 1380 cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtctg taacacccaa agccggtggg 1440 ataaccttta taggagtcag ccgtctaagt agacagatgt ta 1482

Claims (19)

  1. 서열번호 1로 표시되는 16s rDNA 서열을 가지는 것을 특징으로 하는, 기탁번호 KCTC 13520BP인 락토바실러스 가세리 KBL697 균주.
  2. 삭제
  3. 제1항의 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 식품용 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 알레르기 증상 개선, 염증 증상 개선, 장 건강 개선 및 면역 조절로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 효과를 갖는 건강기능식품용 조성물인 것을 특징으로 하는 식품용 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 알레르기 증상은 아토피 피부염, 습진, 알레르기성 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 및 음식 알레르기로 구성된 군에서 선택되고; 상기 장 건강 개선은 복부 팽만감, 복부 불쾌감, 병원성 미생물에 의한 감염성 설사, 위장염, 염증성 장 질환, 신경성 장염 증후군, 과민성 대장 증후군, 소장 미생물 과성장증 및 장 급이성 설사로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 개선하는 것인 식품용 조성물.
  6. 제1항의 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 동물 사료용 조성물.
  7. 제1항의 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하며, 말라세지아 퍼퍼(Malassezia furfur)에 항균 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항진균 조성물.
  8. 삭제
  9. 제7항의 항진균 조성물을 포함하는 피부 외용제.
  10. 제1항의 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는, 피부 알레르기, 피부 두드러기, 아토피 피부염, 건선, 말라세지아 퍼퍼에 의한 감염 또는 습진을 개선하기 위한 의료용 패치.
  11. 제1항의 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 알레르기 질환, 염증성 질환, 장 질환 또는 자가면역 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물로서,
    상기 알레르기 질환은 IL-4, IL-5 및 히스타민의 분비 억제를 통해 치료 또는 예방될 수 있는 질환이고,
    상기 염증성 질환은 IL-10의 분비 촉진 및 TNF-α, IL-6의 분비 억제를 통해 치료 또는 예방될 수 있는 질환이고,
    상기 장 질환은 장 세포의 밀착 연접에 관여하는 단백질의 발현 증가를 통해 치료 또는 예방될 수 있는 질환이고,
    상기 자가면역 질환은 TNF-α, IFN-γ 및 IL-17의 분비 억제를 통해 치료 또는 예방될 수 있는 질환인, 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 알레르기 질환은 습진, 알레르기성 천식, 알레르기성 비염, 아토피 피부염, 알레르기성 결막염 및 음식 알레르기로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 염증성 질환은 부종, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 만성 부비동염, 인후염, 편도염, 기관지염, 폐렴, 위궤양, 위염, 대장염, 통풍, 습진, 여드름, 아토피 피부염, 접촉성 피부염(contact dermatitis), 지루성 피부염(seborrheic dermatitis), 강직성 척수염, 류마티스성 열, 섬유근통(fibromyalgia), 골관절염, 건선 관절염, 류마티스성 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군, 중증 근무력증, 패혈증, 맥관염, 활액낭염, 측두 동맥염 및 다발성 경화증으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  14. 제11항에 있어서, 상기 장 질환은 복부 팽만감, 복부 불쾌감, 병원성 미생물에 의한 감염성 설사, 위장염, 염증성 장 질환, 신경성 장염 증후군, 과민성 대장 증후군, 소장 미생물 과성장증 및 장 급이성 설사로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  15. 제11항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 건선, 건선 관절염, 류마티스성 관절염, 루프스, 전신성 경피증, 아토피 피부염, 천식, 길리안-바레 증후군(Guilian-Barre syndrome), 중증 근무력증, 피부근염, 다발성근염, 다발성 경화증, 자가면역성 뇌척수염, 결절성 다발성 동맥염, 하시모토 갑상선염, 다발성 경화증, 측두동맥염, 소아기 당뇨병, 원형탈모증, 천포창, 아프타구내염, 자가면역 용혈성 빈혈, 베게너 육아종증, 쇼그렌 증후군, 애디슨병, 크론병, 베체트병으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  16. 제11항에 있어서, 상기 약학적 조성물이 인플릭시맙(infliximab), 아달리무맙(adalimumab), 골리무맙 (golimumab), 압식시맙(abciximab), 알렘투주맙(alemtuzumab), 아틀리주맙(atlizumab), 바실릭시맙(basiliximab), 벨리무맙(belimumab), 베바시주맙(bevacizumab), 이필리무맙(ipilimumab), 브렌툭시맙 베코틴(brentuximab vecotin), 카나키누맙(canakinumab), 캅로맙 펜데티드(capromab pendetide), 카투막소맙 (catumaxomab), 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙(cetuximab), 다클리주맙(daclizumab), 데노수맙(denosumab), 에쿨리주맙(eculizumab), 에드레콜로맙(edrecolomab), 에팔리주맙(efalizumab), 에푼구맙(efungumab), 에르투막소맙(ertumaxomab), 에타너셉트(etanercept), 에타라시주맙(etaracizumab), 폰톨리주맙 (fontolizumab), 겜투주맙 오조가미신(gemtuzumab ozogamicin), 기렌툭시맙(girentuximab), 이브리투모맙 티욱세탄(ibritumomab tiuxetan), 이고보맙(igovomab), 임시로맙(imciromab), 이필리무맙 (ipilimumab), 라베투주맙(labetuzumab), 메폴리주맙(mepolizumab), 모타비주맙(motavizumab), 나탈리주맙(natalizumab), 니모투주맙(nimotuzumab), 노페투모맙 머펜탄(nofetumomab merpentan), 오파투무맙(ofatumumab), 오말리주맙(omalizumab), 오레고보맙(oregovomab), 팔리비주맙 (palivizumab), 파니투무맙(panitumumab), 펨투모맙(pemtumomab), 페르투주맙(pertuzumab), 라니비주맙 (ranibizumab), 락시바쿠맙(raxibacumab), 리툭시맙(rituximab), 로벨리주맙(rovelizumab), 루플리주맙 (ruplizumab), 타카투주맙 테트락세탄(tacatuzumab tetraxetan), 테피바주맙(tefibazumab), 토실리주맙 (tocilizumab), 토시투모맙(tositumomab), 트라스투주맙(trastuzumab), 우스테키누맙(ustekinumab), 세쿠키누맙, 베돌리주맙, 비실리주맙(visilizumab), 보투무맙(votumumab), 잘루투무맙(zalutumumab) 및 자놀리무맙(zanolimumab)에서 선택되는 하나 이상의 약제와 병용되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  17. 제1항의 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물 및 상기 균주의 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 화장료 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 화장료 조성물이 피부 알레르기, 피부 두드러기, 아토피 피부염, 건선, 말라세지아 퍼퍼에 의한 감염 또는 습진을 개선하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  19. 제17항에 있어서, 미용용 패치인 화장료 조성물.
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