RU2798872C2 - ШТАММ Lactobacillus gasseri KBL697 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к штамму Lactobacillus gasseri KBL697 и его применению. Предложен штамм Lactobacillus gasseri KBL697 идентификационный номер KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, заболеваний кишечника, а также инфекции Malassezia spp. Предложены также композиции, содержащие указанный штамм или культуру указанного штамма, способы лечения с использованием указанного штамма и применение композиции для лечения аллергического заболевания, воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, заболевания кишечника. Также указанный штамм используют в качестве средства для наружной обработки кожи против инфекции Malassezia spp., а также в косметической композиции и пластыре для смягчения, профилактики или лечения атопического дерматита. Изобретение может быть эффективно использовано в профилактике и лечении аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, заболеваний кишечника, а также инфекции Malassezia spp. 23 н. и 10 з.п. ф-лы, 18 ил., 4 табл., 9 пр.

Description

Область техники

[1] Настоящее изобретение относится к штамму Lactobacillus gasseri KBL697 и к его применению. Конкретнее, настоящее изобретение относится к функциональной оздоровительной пищевой композиции, обладающей по меньшей мере одним эффектом, выбранным из группы, состоящей из смягчения симптомов аллергии, смягчения симптомов воспаления, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции; противогрибковой композиции; и фармацевтической композиции для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из нового пробиотического штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[2]

Уровень техники

[3] Пробиотики относятся к микроорганизмам и полученным из них продуктам, обладающим антимикробной активностью и ферментативной активностью, помогающими соблюдать равновесие микроорганизмов кишечника. Кроме того, пробиотики по определению представляют собой живые бактерии в виде одного или нескольких штаммов, улучшающих кишечную микрофлору при введении человеку или животным в виде сухих клеток или продуктов ферментации. Пробиотики должны населять кишечник человека, являться непатогенными и нетоксичными и выживать в течение достаточно продолжительного времени до поступления в кишечник. Кроме того, пробиотики должны поддерживать жизнеспособность и активность до потребления с продуктами питания, являться чувствительными к антибиотикам, используемым для профилактики инфекций, а также не содержат плазмид устойчивости к антибиотикам. Кроме того, пробиотики должны быть устойчивы к кислотам, ферментам и желчи в среде, присутствующей в кишечнике.

[4] Такие пробиотики могут включать, например, Bacillus sp., обладающие замечательной способностью продуцировать гидролизующие ферменты, например, амилазу, протеазу, липазу, целлюлазу и фосфатазу, Lactobacillus sp., продуцирующие молочную кислоту, и фотосинтезирующие бактерии, предотвращающие появление неприятного запаха за счет использования неприятно пахнущих веществ (например, аммиака, сероводорода и аминов), присутствующих в фекалиях скота, в процессах метаболизма. Согласно недавнему сообщению, пробиотики обладают различными эффектами, улучшающими функции организма, включая улучшение состояния кишечника, и поэтому активно рассматриваются в качестве основных терапевтических веществ, которые могут заменять существующие терапевтические агенты на основе соединений.

[5]

[6] Аллергия является биохимическим явлением, характеризующимся уникальным искаженным ответом на чужеродное вещество (антиген, аллерген). Чужеродное вещество, вызывающее симптомы, называют аллергеном, а заболевания, при которых развиваются эти симптомы, называют аллергическими заболеваниями. Аллергия представляет собой патологический процесс в живом организме, причиной которого является реакция «антиген-антитело». В целом существует четыре типа аллергии в зависимости от периода времени, в течение которого возникает реакция, и вовлеченности комплемента. Аллергия 1 типа представляет собой реакцию анафилактического (немедленного) типа, при которой органами-мишенями в основном являются органы пищеварительной системы, кожа и легкие, а распространенные симптомы включают желудочно-кишечную аллергию, крапивницу, атрофический дерматит, аллергический ринит, бронхиальную астму и т.д. Известно, что патологические механизмы аллергии 1 типа развиваются следующим образом: при контакте антигенов с антителами IgE, присоединенными к поверхности тучных клеток и базофилов, клетки-мишени активируются и секретируют химические медиаторы, например, гистамин, лейкотриены и PAF с последующим сокращением кровеносных сосудов и гладких мышц. Такой механизм часто может наблюдаться в комбинации с аллергией 4 (замедленного) типа. Другими словами, такая анафилактическая и аллергическая реакция может возникать вследствие различных изменений в тучных клетках и т.д. Активация тучных клеток, ведущая к их дегрануляции, обусловлена связыванием антигена, антитела против IgE, лектина и т.д. с Fc-рецепторами, стимуляцией посредством анафилотоксина и т.д. или других лекарственных средств, например, кальциевого ионофора, соединения 48/80, кодеина и синтетического адренокортикотропина.

[7] Известно, что тучные клетки и базофилы крови являются основным клетками организма, вызывающими различные аллергические заболевания, например, аллергический ринит, аллергический дерматит, астму, пищевую аллергию и анафилактический шок. Эти клетки содержат на своей поверхности рецепторы (FcRI) для IgE, которые представляют собой антитела, вызывающие аллергию; данные клетки стимулируются веществами, вызывающими аллергию (антигенами, аллергенами и секретируют собственные вещества, вызывающие аллергию (Kim K et al., Eur J Pharmacol, 581:191-203, 2008).

[8] Среди аллергических заболеваний широко известен атопический дерматит, представляющий собой хроническое рецидивирующее кожное заболевание, которое возникает у новорожденных или детей и может сохраняться до зрелого возраста. Как и астма или аллергический ринит, атопический дерматит представляет собой воспалительное заболевание кожи, ассоциированное с местной инфильтрацией Т-лимфоцитов, продуцирующих ИЛ-4 и ИЛ-5. ИЛ-4, как хорошо известно, контролирует развитие T-хелперов 2 фенотипа (Th2), что приводит к избыточной продукции иммуноглобулинов (Ig) и эозинофилии, а также увеличению уровня IgE в сыворотке. Атопический дерматит обнаруживается у 80-90% субъектов с положительными результатами кожной пробы на пищевые и ингаляционные аллергены.

[9] Существуют различные средства для лечения или профилактики аллергических заболеваний и атопического дерматита, однако эффективный способ лечения пока не найден. Известны некоторые варианты медикаментозной терапии, однако даже кратковременное применение лекарственного средства может привести к развитию устойчивости, а долговременное применение может вызвать серьезные побочные эффекты, и поэтому в последнее время таких вариантов медикаментозной терапии аллергических заболеваний и атопического дерматита избегают. В данных обстоятельствах при отсутствии вариантов лечения, обеспечивающих абсолютный очевидный эффект, попытки улучшения симптомов раздражения, например, зуда и гиперемии при аллергии часто не дают эффекта.

[10]

[11] При этом синдром раздраженного кишечника (IBS) представляет собой симптом, характеризующийся болью в брюшной полости и/или раздражением, ассоциированным с изменениями перистальтики кишечника или стула, причем такие симптомы невозможно объяснить анатомическими или биохимическими патологиями. Распространенные симптомы IBS также включают императивные позывы к мочеиспусканию, вздутие живота и чувство неполной дефекации. Соответственно, IBS можно классифицировать как функциональные желудочно-кишечные расстройства, включающие такие состояния, как функциональное вздутие живота, некардиогенную боль в грудной клетке, неязвенную диспепсию и хронический запор или диарею. В частности, поскольку связанные с IBS симптомы влияют как на самочувствие, так и на функциональные аспекты состояния пациентов, данное заболевание оказывает выраженное воздействие на заболеваемость и качество жизни, даже не учитывая боли и дискомфорт в брюшной полости.

[12] Воспалительное заболевание кишечника (IBD) - это состояние, при котором развивается и рецидивирует хроническое воспаление в кишечнике, включающее все воспалительные кишечные заболевания, например, болезнь Крона, язвенный колит или болезнь Бехчета, но не ограничивается указанными. Многие исследователи работают в области разработки лекарственных средств для лечения IBS и IBD. В связи с этим широко используются различные антидепрессанты, несмотря на то, что их эффективность в клинических исследованиях является умеренной, а клиническая применимость - ограниченной вследствие значительных побочных эффектов. Кроме того, показано, что серотогенные лекарственные средства эффективно купируют общие симптомы IBS. Однако применение этих лекарственных средств ограничивается различным образом ввиду некоторых проблем с их безопасностью. Соответственно, имеет место растущий интерес к разработке нового терапевтического агента для лечения IBS.

[13] В заявках WO 96/29083 и EP 554418 описаны два типа штаммов Lactobacillus, образующие колонии в кишечнике, т.е. Lactobacillus plantarum 299v (DSM 6595) и Lactobacillus casei ssp. rhamnosus 271 (DSM 6594), и т.д. В заявке EP 415941 описан способ получения композиции питательных веществ, включающий обработку овсяной каши ферментами с последующим смешиванием с лактобациллами. В патенте США № 7195906 описан штамм Bifidobacterium, выделенный из удаленного при резекции и промытого желудочно-кишечного тракта человека, для лечения воспалительных заболеваний, особенно воспалительной активности в желудочно-кишечном тракте, например, IBD и IBS.

[14] Однако до сих пор не найдено ни одного штамма, обладающего исключительными свойствами в отношении улучшения состояния кишечника, например, лечения IBD и IBS, и над поиском штаммов с такими свойствами работают многие исследовательские учреждения.

[15]

[16] В данных обстоятельствах авторы настоящего изобретения сосредоточились на исследованиях пробиотиков с целью поиска способа замены терапевтических средств на основе лекарственных веществ для лечения аллергических заболеваний (в том числе атопического дерматита) для которых отсутствуют удовлетворительные способы лечения. Таким образом, настоящее изобретение выполнено посредством подтверждения того, что новый штамм Lactobacillus gasseri демонстрировал исключительное терапевтическое действие по отношению к аллергическим заболеваниям, например, атопическому дерматиту, а также подтверждения того, что указанный штамм также демонстрировал превосходное действие в отношении противогрибковой активности, состояния кишечника, иммунорегуляции и подавления воспаления.

[17]

[18] Краткое описание изобретения

[19] Цель настоящего изобретения - предложить новый штамм, демонстрирующий исключительное действие в отношении смягчения симптомов аллергии, например, атопического дерматита, смягчения симптомов воспаления, противогрибковой активности, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции, а также ряд вариантов его применения.

[20] Для достижения этой цели в настоящем изобретении предложен штамм Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP).

[21] Кроме того, в настоящем изобретении предложена пищевая композиция или композиция пищевой добавки, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[22] В настоящем изобретении предложена кормовая композиция или композиция кормовой добавки, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[23] Кроме того, в настоящем изобретении предложена противогрибковая композиция, например, композиция для лечения перхоти, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[24] Кроме того, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[25] Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ лечения аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, в организм субъекта, нуждающегося в этом.

[26] Кроме того, в настоящем изобретении предложена композиция, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, для применения при профилактике или лечении аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний.

[27] Кроме того, в настоящем изобретении предложено применение композиции для получения лекарственного средства для профилактики или лечения аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[28] Кроме того, в настоящем изобретении предложена косметическая композиция, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[29] Кроме того, в настоящем изобретении предложен косметический пластырь или медицинский пластырь, содержащий по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[30]

Краткое описание чертежей

[31] На фиг. 1 показан результат, подтверждающий эффект ингибирования экспрессии ИЛ-4 за счет различных штаммов Lactobacillus, в том числе штамма Lactobacillus gasseri KBL697, после индукции аллергической реакции в линиях клеток EL4.

[32] На фиг. 2 показан результат, подтверждающий эффект ингибирования экспрессии ИЛ-5 за счет различных штаммов Lactobacillus, в том числе штамма Lactobacillus gasseri KBL697, после индукции аллергической реакции в линиях клеток EL4.

[33] На фиг. 3 показан результат, подтверждающий эффект ингибирования секреции гистамина при обработке различными штаммами Lactobacillus gasseri и антигистаминным агентом кетотифеном после индукции продукции гистамина реакцией антиген-антитело в линиях клеток RBL 2H3.

[34] На фиг. 4 показан результат наблюдения значимого количественного увеличения секреции противовоспалительного иммунорегуляторного цитокина ИЛ-10 посредством обработки штаммом KBL697 при обработке штаммами Lactobacillus gasseri после индукции воспалительной реакции в линиях клеток RAW 264.7.

[35] На фиг. 5 показан результат, подтверждающий значимое иммунорегуляторное и противовоспалительное действие обработки штаммом KBL697 с учетом значения ИЛ-10/ФНО-α при обработке Lactobacillus gasseri после индукции воспалительной реакции в линиях клеток RAW 264.7.

[36] На фиг. 6 показан результат, подтверждающий значимое иммунорегуляторное и противовоспалительное действие обработки штаммом KBL697 с учетом значения ИЛ-10/ИЛ-6 при обработке различными штаммами Lactobacillus gasseri после индукции воспалительной реакции в линиях клеток RAW 264.7.

[37] На фиг. 7 показан результат капельного анализа, подтверждающий противогрибковую активность штамма Lactobacillus gasseri KBL697.

[38] На фиг. 8 показан результат, подтверждающий эффект снижения балльного показателя дерматита при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.

[39] На фиг. 9 показан результат, подтверждающий эффект смягчения зуда при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.

[40] На фиг. 10 показан результат, подтверждающий эффекты уменьшения толщины уха при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.

[41] На фиг. 11 показан результат, подтверждающий эффект уменьшения толщины кожи при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.

[42] На фиг. 12 показан результат, подтверждающий эффекты уменьшения концентрация IgE в крови при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.

[43] На фиг. 13 показан результат анализа TEER, подтверждающий эффект укрепления плотных контактов за счет штамма Lactobacillus gasseri KBL697.

[44] На фиг. 14 показан результат наблюдения эффекта восстановления массы тела при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 в количестве 1 × 10⁹ КОЕ модели мыши с индуцированным колитом.

[45] На фиг. 15 показан результат наблюдения эффект восстановления длины толстого кишечника при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 моделям мыши с индуцированным колитом.

[46] На фиг. 16 показан результат наблюдения эффекта смягчения симптомов PASI (индекса площади, пораженной псориазом, и его тяжести) и отека при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 моделям мыши с индуцированным псориазом.

[47] На фиг. 17 показан результат определения эффекта уменьшения уровня воспалительных цитокинов (ФНО-α, ИФН-γ, ИЛ-17) за счет штамма Lactobacillus gasseri KBL697 у моделей мыши с индуцированным псориазом.

[48] На фиг. 18 показан результат сравнения эффекта восстановления массы тела и длины толстого кишечника за счет штамма Lactobacillus gasseri KBL697 и инфликсимаба у моделей мыши с индуцированным колитом.

[49]

[50] Оптимальный способ выполнения изобретения

[51] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящей заявке, имеют значение, совпадающее ч общепринятым среди специалистов в данной области техники. В целом номенклатура, используемая в настоящей заявке, хорошо известна и широко используется в данной области техники.

[52]

[53] Настоящее изобретение позволило обнаружить противоаллергическое действие микроорганизмов, полученных из организма человека, причем выбранный штамм Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP) обладает исключительным действием в отношении подавления аллергии. Анализ 16S рДНК указанного штамма демонстрирует, что указанный штамм является новым штаммом, который никогда не был известен общественности.

[54]

[55] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к новому пробиотическому штамму Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP), и указанный штамм характеризуется наличием последовательности 16S рДНК SEQ ID NO: 1.

[56] <SEQ ID NO: 1> Последовательность 16S рДНК штамма Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP)

[57]

GGCAAGTGGGCGGCGTGCTATACATGCAGTCGAGCGAGCTTGCCTAGATGAATTTGGTGCTTGCACCAAATGAAACTAGATACAAGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAGAGACTGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAACAACACTAGACGCATGTCTAGAGTTTAAAAGATGGTTCTGCTATCACTCTTGGATGGACCTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGCAACGGCTTACCAAGGCAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGGTAGTGAAGAAAGATAGAGGTAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATTACTTAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGTGCAGGCGGTTCAATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGAGAATTGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGTGCAAACCTAAGAGATTAGGAGTTCCCTTCGGGGACGCTGAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGAAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGAAGCGAACCTGCGAAGGCAAGCGGATCTCTGAAAGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTCTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGATAACCTTTATAGGAGTCAGCCGTCTAAGTAGACAGATGTTA

[58] Таким образом, при разработке настоящего изобретения выполнены эксперименты касательно эффективности указанного штамма, подтвердившие, что указанный штамм обладает исключительным действием в отношении подавления аллергических расстройств, например, атопического дерматита, смягчает воспалительную реакцию и обладает противогрибковой свойствами, иммунорегуляторными свойствами и терапевтическими эффектами в отношении кишечных заболеваний. Кроме того, авторы настоящего изобретения подтвердили, что указанные эффекты можно получить не только в условиях, подходящих для живых бактерий, но и в условиях низкотемпературной стерилизации или высокотемпературной стерилизации.

[59]

[60] Соответственно, в еще одном варианте реализации настоящего изобретения настоящее изобретение относится к пищевой композиции или композиции пищевой добавки, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP), клеточных компонентов указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[61] Композиция может характеризоваться тем, что она представляет собой функциональную оздоровительную пищевую композицию, обладающую по меньшей мере одним эффектом, выбранным из группы, состоящей из смягчения симптомов аллергии, например, атопического дерматита, смягчения симптомов воспаления, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции.

[62] Указанную пищевую композицию или композицию пищевой добавки можно применять в качестве продукта питания, эффективно смягчающего симптомы аллергии, например, атопического дерматита, смягчающего симптомы воспаления, способствующего улучшению состоянию кишечника и/или иммунорегуляции, а также профилактике вышеуказанных явлений, например, в качестве основного или второстепенных ингредиентов продуктов питания, пищевых добавок, функциональной оздоровительной пищевой композиции или функциональных напитков, но не ограничиваясь указанными.

[63] Термин «пищевая композиция» относится к натуральному или искусственному продукту, содержащему по меньшей мере одно питательное вещество, и, более предпочтительно, относится к продукту, который стал съедобным в результате определенной обработки, и обычно охватывает все продукты питания, пищевые добавки, функциональную оздоровительную пищевую композицию и функциональные напитки.

[64] Продукт питания, который может содержать указанную пищевую композицию согласно настоящему изобретению в качестве добавки, может включать, например, различные типы продуктов питания, напитков, жевательной резинки, чая, витаминного комплекса или функциональных продуктов питания. Кроме того, продукты питания согласно настоящему изобретению включают специальные обогащенные продукты питания (например, модифицированное молоко, детское питание), переработанные мясные продукты, рыбные продукты, тофу, мук, лапшу (например, лапшу-рамен, азиатскую лапшу), хлебобулочные изделия, биологически активные пищевые добавки, приправы (например, соевый соус, соевую пасту, пасту из красного перца, смешанную пасту), соусы, кондитерские изделия (например, закусочные продукты), конфеты, шоколад, жевательные резинки, мороженое, молочные продукты (например, ферментированное молоко, сыр), другие обработанные пищевые продукты, кимчхи, соленые продукты (например, различные виды кимчхи, маринованные продукты), напитки (например, фруктовый сок, овощной сок, соевое молоко, напитки, получаемые при брожении) и натуральные приправы (например, бульонный порошок для лапши-рамен), но не ограничиваясь указанными. Указанные продукты питания, напитки или пищевые добавки можно получать обычными способами.

[65] Термин «функциональная оздоровительная пищевая композиция» представляет собой группу продуктов питания, эффективность которых повышается за счет возможности проявления и выражения их функции для заранее определенной цели с использованием физических, биохимических или биоинженерных методик, или обработанные пищевые продукты, разработанные с учетом того, чтобы регулирующие функции соответствующей пищевой композиции in vivo, например, функция регулировки ритма дефекации при профилактике заболевания и выздоровлении, проявлялись в достаточной степени. Такой функциональный продукт питания может содержать пищевые добавки, приемлемые с точки зрения диетологии, и может дополнительно содержать подходящие носители, вспомогательные вещества и разбавители, обычно используемые при их производстве.

[66] В настоящем изобретении термин «функциональные напитки» в совокупности относится к напиткам, предназначенным для утоления жажды или для наслаждения вкусом. Конкретные ограничения данного термина отсутствуют, за исключением того, что указанные напитки должны содержать композицию для смягчения симптомов аллергии, например, атопического дерматита, смягчения симптомов воспаления, улучшения состоянию кишечника и/или иммунорегуляции, а также для профилактики указанных явлений в качестве основных ингредиентов в указанном соотношении, а также, как и обычные напитки, могут содержать различные вкусоароматические добавки или натуральные углеводы в качестве дополнительных ингредиентов.

[67] В дополнение к вышесказанному, продукт питания, содержащий пищевую композицию или композицию пищевой добавки согласно настоящему изобретению, может содержать различные питательные вещества, витамины, минералы (электролиты), вкусоароматические добавки, например, синтетические и натуральные вкусоароматические добавки, красители и наполнители (сыр, шоколад и т.д.), пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, коллоидные загустители, агенты для контроля pH, стабилизирующие агенты, консерванты, глицерин, спирт, агенты для карбонизации, используемые в газированных напитках, и т.п., причем каждый из вышеуказанных ингредиентов можно использовать отдельно или в комбинации друг с другом.

[68] Продукт питания, содержащий пищевую композицию согласно настоящему изобретению, может содержать композицию согласно настоящему изобретению в количестве от 0,001 масс. % 100 мл масс. %, предпочтительно от 1 масс. % до 99 масс. % в пересчете на общую массу продукта питания; в случае напитков оно может составлять от 0,001 г до 10 г, предпочтительно от 0,01 г до 1 г из расчета на 100 мл. Однако при длительном приеме в оздоровительных или гигиенических целях или в целях поддержания состояния здоровья количество продукта может быть ниже вышеуказанного диапазона; и поскольку у эффективных ингредиентов нет проблем с точки зрения профиля безопасности, их можно использовать в количестве, превышающем указанный диапазон, и их количество не ограничивается вышеуказанным диапазоном.

[69] Пищевая композиция согласно настоящему изобретению может содержать штамм Lactobacillus gasseri KBL697 сам по себе или в комбинации с приемлемым носителем, или может быть изготовлена в форме композиции, подходящей для употребления человеком или животными. Таким образом, указанную композицию можно добавлять к продукту питания, не содержащему пробиотических бактерий или пары пробиотических бактерий. Например, микроорганизмы, которые можно применять в комбинации со штаммом согласно настоящему изобретению при получении продуктов питания согласно настоящему изобретению, должны подходить для употребления человеком или животными и обладать пробиотической активностью в отношении подавления патогенных, вредных бактерий или улучшения баланса микрофлоры в кишечном тракте млекопитающих при приеме внутрь, но не ограничиваютсяуказанными. Такие пробиотические микроорганизмы могут включать, например, дрожжи, например, Saccharomyces, Candida, Pichia или Torulopsis, грибы, например, Aspergillus, Rhizopus, Mucor или Penicillium, и бактерии родов Lactobacillus, Bifidobacterium, Leuconostoc, Lactococcus, Bacillus, Streptococcus, Propionibacterium, Enterococcus или Pediococcus. Подходящие конкретные пробиотические микроорганизмы могут включать, например, Saccharomyces cerevisiae, Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbruckii, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, or Pediococcus acidilactici. Пищевая композиция согласно настоящему изобретению предпочтительно может дополнительно содержать смесь пробиотических микроорганизмов, обладающих выраженной пробиотической активностью и превосходной противоаллергической, противовоспалительной, иммунорегуляторной активностью или способностью улучшать состояния кишечника, дополнительно усиливающей их эффекты. Носители, которые можно включать в пищевую композицию согласно настоящему изобретению, могут включать, например, наполнители, добавки с высоким содержанием клетчатки, инкапсулирующие агенты и липиды, широко известные в данной области техники. Штамм Lactobacillus gasseri KBL697 согласно настоящему изобретению может находиться в лиофилизированной или инкапсулированной форме, либо в форме суспензий или сухих порошков культуры.

[70]

[71] Композиция согласно настоящему изобретению также может быть представлена в форме кормовой добавки или корма, содержащих указанный штамм.

[72] Кормовая добавка согласно настоящему изобретению может находиться в форме сухого или жидкого состава и, кроме того, содержать другие непатогенные микроорганизмы в дополнение к указанному штамму Lactobacillus gasseri KBL697. Микроорганизмы, которые можно добавлять к кормовой добавке, могут включать, например, Bacillus subtilis, которая может продуцировать протеазу, липазу и ферменты, преобразующие углеводы, штамм Lactobacillus, обладающий физиологической активностью и способностью к разложению органических соединений в анаэробных условиях, например, в желудке коровы, мицелиальные грибы, например, Aspergillus oryzae, демонстрирующие влияние на увеличение массы тела животных, надои и усвояемость корма (Slyter, L. L. J. Animal Sci., 1976, 43. 910-926), и дрожжи, например, Saccharomyces cerevisiae (Johnson, D. E et al. J. Anim. Sci., 1983, 56, 735-739 ; Williams, P. E. V. et al., 1990, 211).

[73]

[74] Кормовая добавка согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере один ферментативный агент в дополнение к указанному штамму Lactobacillus gasseri KBL697. Дополнительные ферментативные агенты могут находиться в сухой или жидкой форме и могут включать, например, стеатолитические ферменты, например, липазу, фитазу, образующую фосфат и инозитфосфат при разложении фитиновой кислоты, амилазу, т.е. фермент для гидролиза α-1,4-гликозидной связи в составе, например, крахмала и гликогена, фосфатазу, т.е. фермент для гидролиза сложного органического эфира фосфорной кислоты, карбоксиметилцеллюлазу для разложения целлюлозы, ксилазу для разложения ксилозы, мальтазу для гидролиза мальтозы на две молекулы глюкозы и ферменты, продуцирующие углеводы, например, инвертазу, образующую смесь глюкозы и фруктозы при гидролизе сахарозы.

[75] При использовании штамма Lactobacillus gasseri KBL697 согласно настоящему изобретению в качестве кормовых добавок можно применять кормовое сырье, например, арахис, горох, свеклу, жмых, продукты переработки зерна, порошок кишок животных и рыбную муку, а также различные зерновые и соевый белок. Они могут быть обработанными или необработанными, и их можно использовать без ограничений. Обработка может включать такой процесс, при котором кормовое сырье загружают и продавливают под давлением через заданное отверстие, а для белков предпочтительно можно использовать экструзию, при которой белки подвергают дегенерации для увеличения их доступности. Экструзия денатурирует белки за счет термообработки с целью разрушения антиферментных факторов, что является выгодным. Кроме того, перевариваемость белков сои можно улучшить путем экструзии с целью инактивации веществ, снижающих питательность корма, например, ингибитора трипсина, одного из ингибиторов протеаз, присутствующего в сое. Кроме того, экструзия может способствовать улучшению гидролизуемости под действием протеаз, что повышает питательную ценность белков сои.

[76]

[77] В соответствии с еще одним вариантом реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к противогрибковой композиции, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[78] Композиция может характеризоваться проявлением противогрибковой активности по отношению к одному из организмов, выбранному из группы, состоящей из Malassezia furfur, Malassezia globosa и Malassezia restricta, но не ограничиваясь указанными.

[79] Композиция может представлять собой композицию для профилактики, смягчения или лечения себорейного дерматита или перхоти, и указанный себорейный дерматит может располагаться на коже свода черепа.

[80] Кроме того, указанная композиция может представлять собой композицию для профилактики, смягчения или лечения крапивницы, сыпи, дерматофитоза туловища, пахового дерматофитоза или дерматофитоза стоп, вызванных грибковой инфекцией.

[81] Указанный штамм и культуры указанного штамма, лизаты указанного штамма и экстракты указанного штамма могут содержаться в композиции в количестве от 0,1 масс. % до 50 масс. % от общей массы композиции.

[82] Указанная противогрибковая композиция может представлять собой фармацевтическую композицию, косметическую композицию или оздоровительную пищевую композицию, а также может представлять собой вещество для наружной обработки кожи.

[83] Указанная косметическая композиция может быть представлена во всех лекарственных формах, подходящих для местного применения, например, в форме жидкости, эмульсии типа «масло в воде», эмульсии типа «вода в масле», суспензии, твердого вещества, геля, порошка, пасты, пены или аэрозоля. Указанные композиции вышеупомянутых лекарственных форм можно получить традиционными способами, используемыми в данной области техники.

[84] Кроме вышеупомянутых ингредиентов, указанная композиция может содержать другие ингредиенты в количестве, не мешающем проявлению основного эффекта, предпочтительно в количестве, обеспечивающем синергический эффект по отношению к основному эффекту. Композиция согласно настоящему изобретению может содержать вещество, выбранное из группы, состоящей из витаминов, полипептидов, полисахаридов и сфинголипида. Кроме того, косметическая композиции согласно настоящему изобретению может содержать увлажнитель, мягчительный агент, поверхностно-активное вещество, поглотитель ультрафиолета, консервант, стерилизатор, антиоксидант, рН-регулирующий агент, органические или неорганические пигменты, вкусоароматическую добавку, охлаждающий агент или агент-антиперспирант. Специалисты в данной области техники могут выбрать комбинированное процентное содержание указанных ингредиентов в диапазоне, не мешающем достижению цели и проявлению эффекта согласно настоящему изобретению, и оно может находиться в диапазоне от 0,01 масс. % до 5 масс. %, конкретнее, от 0,01 масс. % до 3 масс. % от общей массы композиции.

[85] Согласно вышеупомянутому варианту реализации, противогрибковая композиция согласно настоящему изобретению может представлять собой средство для наружной обработки кожи, например, крем, мазь, шампунь или лекарственное средство.

[86]

[87] Согласно еще одному варианту реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения или профилактики аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[88] Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть представлена в форме клеточных компонентов живых бактерий, сухого штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма или композиции в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или средой. Носители или среды, которые можно использовать в настоящем изобретении, могут включать растворитель, диспергатор, покрытие, усилитель, состав с контролируемым высвобождением (т.е. состав с замедленным высвобождением) или по меньшей мере одно инертное вспомогательное вещество том числе крахмал, полиол, гранулы, мелкодисперсную целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, например, Celphere, гранулы Celphere, разбавитель, смазывающее вещество, связующее, разрыхлитель. На таблетку из вышеуказанной композиции можно при желании нанести покрытие с использованием стандартной водной или неводной методики. Примеры фармацевтически приемлемого носителя и вспомогательного вещества для применения в качестве фармацевтически приемлемого инертного носителя и указанных дополнительных ингредиентов могут включать, например, связующее вещество, наполнитель, разрыхлитель, смазывающее вещество, противомикробный агент и агент для получения покрытия, но не ограничиваются указанными.

[89] Кроме того, фармацевтическую композицию согласно настоящее изобретению можно применять в качестве средства для наружного применения, содержащего лекарственную форму, выбранную из группы, состоящей из мазей, кремов, паст, жидкостей и растворов для нанесения на кожу, глицерожелатинов, мазей для растирания, порошков для нанесения на кожу, аэрозолей и пластырей.

[90] В настоящем изобретении указанные аллергические заболевания относятся к состояниям, ассоциированным с экспрессией ИЛ-4 или ИЛ-5, и могут включать, например, экзему, аллергическую астму, атопический дерматит, аллергический ринит, аллергический конъюнктивит, крапивницу или анафилактическую реакцию. Настоящее изобретение предпочтительно может характеризоваться тем, что указанные заболевания выбраны из группы, состоящей из экземы у детей, аллергической астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, аллергического конъюнктивита и пищевой аллергии, но не ограничиваются указанными.

[91] Настоящее изобретение может характеризоваться тем, что указанные заболевания кишечника выбраны из группы, состоящей из метеоризма, дискомфорта в области живота, инфекционной диареи, вызванной патогенными микроорганизмами, гастроколита, воспалительных заболеваний кишечника, неврогенного кишечного синдрома, синдрома раздраженного кишечника, избыточного роста микроорганизмов тонкого кишечника и кишечной пищевой диареи, и указанные заболевания также включают заболевания, вызванные нарушением барьерной функции кишечника.

[92] Воспалительное заболевание кишечника (IBD) может включать болезнь Крона, поражения кишечника, сопровождающееся болезнью Бехчета, язвенный колит, геморрагическую язву прямой кишки и резервуарный илеит и относится к группе заболеваний, включающих болезнь Крона и язвенный колит. Язвенный колит поражает только толстый кишечник. Воспаление и язвы при язвенном колите ограничиваются двумя внутренними слоями (слизистой и подслизистой) из четырех слоев толстого кишечника. Воспаление и язвы при болезни Крона могут распространяться через все слои стенки как тонкого, так и толстого кишечника.

[93] Синдром раздраженного кишечника представляет собой хроническое состояние, сопровождающееся не только стойким рецидивирующим дискомфортом и болью в брюшной полости, например, вздутием живота, но и изменениями стула, например, диареей или запором. Эти симптомы могут осложняться психологическими факторами или стрессовыми социальными обстоятельствами.

[94] В настоящем изобретении воспалительные заболевания в совокупности относятся к состояниям, при которых воспаление является основным патологическим изменением, и могут включать, например, отек, конъюнктивит, пародонтит, ринит, отит среднего уха, хронический синусит, фаринголарингит, тонзиллит, бронхит, пневмонию, язву желудка, гастрит, колит, подагру, экзему, угри, атопический дерматит, контактный дерматит, себорейный дерматит, анкилозирующий спондилит, ревматизм, фибромиалгию, остеоартрит, псориатический артрит, ревматоидный артрит, периартрит плечевого сустава, тендинит, тендосиновит, миозит, гепатит, цистит, нефрит, синдром Шегрена, миастению гравис, сепсис, васкулит, бурсит, височный артериит и рассеянный склероз, но не ограничиваются указанными.

[95] В настоящем изобретении аутоиммунные заболевания и симптомы, которые можно смягчить за счет иммунорегуляторного эффекта, могут включать, например, ревматоидный артрит, волчанку, системную склеродермию, атопический дерматит, псориаз, псориатический артрит, астму, синдром Гийена-Барре, миастению гравис, дерматомиозит, полимиозит, рассеянный склероз, аутоиммунный энцефаломиелит, узелковый периартериит, тиреоидит Хашимото, рассеянный склероз, височный артериит, юношеский диабет, очаговую алопецию, пузырчатку, афтозный стоматит, аутоиммунную гемолитическую анемию, гранулематоз Вегенера, синдром Шегрена, болезнь Аддисона, болезно Крона и болезнь Бехчета, но не ограничиваются указанными.

[96] Настоящее изобретение может характеризоваться тем, что эффекты иммунорегуляции или облегчения, лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний или воспалительных заболеваний, обусловленные штаммом согласно настоящему изобретению, можно индуцировать посредством по меньшей мере одного механизма, выбранного из повышения и снижения уровня цитокинов, ассоциированных с ингибированием воспаления и иммунорегуляции, конкретно, снижения секреции ФНО-α, ИФН-γ и ИЛ-17 и увеличения секреции ИЛ-10.

[97] ФНО-α (фактор некроза опухолей-α) представляет собой пептид массой 17 кДа, продуцируемый макрофагами и различными другими клетками, активируемыми во время иммунных реакций хозяина на бактериальные инфекции и онкологические заболевания. Известно, что данный цитокин является важным медиатором иммунных и воспалительных реакций, а также провоспалительным цитокином, играющим важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний и воспалительных заболеваний, например, ревматоидного артрита (РА), псориатического артрита, болезни Крона, псориаза и анкилозирующего спондилита (AS).

[98] С другой стороны, CD4⁺ T-клетки можно классифицировать на такие подтипы, как Th1 (T-хелперы 1 типа), Th2 (T-хелперы 2 типа), CD4⁺ CD25⁺ иммунорегуляторные T-клетки и Th17-клетки (T-хелперы 17) в зависимости от экспрессии специфических цитокинов и факторов транскрипции. Известно, что ИЛ-17, продуцируемый Th17-клетками, в наибольшей степени вовлечен в аутоиммунные заболевания, аллергические реакции или защиту хозяина от бактериальной или грибковой инфекции.

[99] Кроме того, ИЛ-10 представляет собой пептид массой 35-40 кДа, продуцируемый T-хелперами, B-клетками, моноцитами и другими клетками, и обладает иммунодепрессивными и противовоспалительными свойствами, например, ингибирует продукцию цитокинов, в том числе, ФНО-α и ИФН-γ.

[100]

[101] Термин «лечение», относится к купированию или смягчению заболеваний или состояний, используемых вместе с указанным термином, или одного или более из их симптомов, подавлению их прогрессирования или их профилактике, если он не употребляется в ином смысле. Термин «терапия» в настоящем изобретении относится к акту «лечения», определение которого приведено выше. Соответственно, схемы лечения или терапии заболевания у млекопитающих могут включать одно или более из следующего:

[102] (1) Подавление прогрессирования заболевания, т.е. подавление его развития

[103] (2) Предотвращение распространения заболевания

[104] (3) Смягчение заболевания

[105] (4) Предотвращение рецидива заболевания и

[106] (5) Временное облегчение симптома заболевания

[107]

[108] Композиция согласно настоящему изобретению для профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний может содержать фармацевтически эффективное количество штамма Lactobacillus gasseri KBL697 самого по себе или в комбинации с по меньшей мере одним из фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ или разбавителей.

[109]

[110] В настоящем изобретении термин «эффективное количество» означает количество, достаточно высокое для вызывания желательного эффекта, но достаточно низкое для предотвращения серьезных побочных эффектов, согласно оценкам медиков. Количество микроорганизмов, вводимых в организм с композицией согласно настоящему изобретению, можно корректировать соответственно пути введения и цели введения.

[111]

[112] Композицию согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту один или более раз в день. Лекарственная форма означает физически дискретную единицу, подходящую для стандартного введения субъектам-людям и другим млекопитающим, причем каждая единица содержит подходящий фармацевтический носитель и заранее определенное количество штамма Lactobacillus gasseri KBL697 согласно настоящему изобретению, обеспечивающее терапевтический эффект. Лекарственная форма для перорального введения взрослому пациенту предпочтительно содержит 0,001 г или более микроорганизма согласно настоящему изобретению, и дозировка композиции согласно настоящему изобретению для перорального применения составляет о 0,001 г до 10 г, предпочтительно от 0,01 г до 5 г на дозу. Фармацевтически эффективное количество микроорганизма согласно настоящему изобретению составляет от 0,01 г до 10 г/день. В то же время дозировка зависит от тяжести заболевания пациента, микроорганизма и совместно используемых вспомогательных эффективных ингредиентов. Кроме того, общую суточную дозировку можно разделить в несколько раз и постоянно вводить по мере необходимости. Соответственно, вышеуказанные диапазоны дозировок никоим образом не ограничивают рамки настоящего изобретения.

[113]

[114] Кроме того, используемый выше термин «фармацевтически приемлемый» относится к композиции, которая является физиологически приемлемой и не вызывает аллергической реакции, например, желудочно-кишечного расстройства, головокружения или аналогичной реакции при введении человеку.

[115] Композицию согласно настоящему изобретению можно составить с использованием способов, известных в данной области техники, обеспечивающих быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активных ингредиентов после введения млекопитающему. Лекарственные формы могут представлять собой порошки, гранулы, таблетки, эмульсии, сиропы, аэрозоли, мягкие или твердые желатиновые капсулы, стерильные растворы для инъекций или стерильные порошки. Кроме того, композицию согласно настоящему изобретению для профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний можно вводить различными путями, включая пероральное, трансдермальное, подкожное, внутривенное или внутримышечное введение. Дозировку активных ингредиентов можно выбирать в зависимости от различных факторов, например, пути введения, возраста, пола, массы тела пациента и тяжести его состояния. Композицию согласно настоящему изобретению для лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний можно вводить в комбинации с известным соединением, способным предотвращать, смягчать или лечить соответствующие симптомы.

[116]

[117] Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть представлена, в частности, в виде лекарственной формы для перорального применения в составе с кишечнорастворимым покрытием. В настоящем документе термин «кишечнорастворимое покрытие» включает любое фармацевтически приемлемое покрытие, которое может сохраняться в желудке, не поддаваясь разрушению под действием кислого желудочного сока, и может в достаточной степени разрушаться в кишечнике, высвобождая там активные ингредиенты. «Кишечнорастворимое покрытие» согласно настоящему изобретению относится к покрытию, которое может сохраняться в течение 2 часов или более при контакте с искусственным желудочным соком, например, раствором HCl с pH 1 при 36-38 °C, и в дальнейшем может разрушаться, предпочтительно в искусственном кишечном соке, например, буферном растворе KH₂PO₄ с pH 6,8 в течение 30 минут.

[118] Кишечнорастворимое покрытие согласно настоящему изобретению наносят на одно ядро в количестве от приблизительно 16 мг до 30 мг, предпочтительно от 16 мг до 20 мг или 25 мг или менее. При толщине кишечнорастворимого покрытия согласно настоящему изобретению от 5 мкм до 100 мкм, предпочтительно от 20 мкм до 80 мкм можно получить удовлетворительные результаты. Материал кишечнорастворимого покрытия можно выбрать из известных полимерных материалов. Подходящие полимерные материалы перечислены в ряде известных документов [L. Lachman et al., The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, 3^rd ed., 1986, pp. 365~373; H. Sucker et al., Pharmazeutische Technologie, Thieme, 1991, pp. 355-359; Hagers Handbuchder pharmazeutischen Praxis, 4^th ed., Vol. 7, pp. 739 ~ 742, and 766 ~ 778, (SpringerVerlag, 1971); and Remington's Pharmaceutical Sciences, 13^th ed., pp. 1689 ~ 1691 (Mack Publ., Co., 1970)], и в них можно включать производные сложных эфиров целлюлозы, простые эфиры целлюлозы, сополимер акриловой смолы и метилакрилата и сополимер малеиновой кислоты и производных фталевой кислоты.

[119] Кишечнорастворимое покрытие согласно настоящему изобретению можно получить с использованием общепринятого способа нанесения кишечнорастворимого покрытия, при котором раствор кишечнорастворимого покрытия напыляют на ядро. Подходящие растворители, используемые в процессе получения кишечнорастворимого покрытия, представляют собой спирты, например, этанол, кетоны, например, ацетон, галогенированные углеводородные растворители, например, дихлорметан (CH₂Cl₂), и смеси этих растворителей. Пластификатор, например, ди-n-бутилфталат или триацетилглицерин, добавляют к раствору покрытия в соотношении от приблизительно 1 : 0,05 до приблизительно 1 : 0,3 (материал покрытия : пластификатор) Допустимо выполнять процесс напыления непрерывно, и можно регулировать распыляемое количество с учетом условий нанесения покрытия. Давление распыления можно регулировать различным образом, и в общем случае удовлетворительные результаты можно получить при давлении распыления от приблизительно 1 бар до приблизительно 1,5 бар.

[120]

[121] Между тем, фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации с обычными лекарственными средствами, которые, как известно, оказывают профилактическое или терапевтическое действие в отношении аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний. Например, лекарственные средства, которые можно вводить в комбинации с фармацевтической композицией согласно настоящему изобретению, могут включать лекарственные средства на основе антител, используемые для лечения воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника или аутоиммунных заболеваний, например, инфликсимаб, адалимумаб, голимумаб, абциксимаб, алемтузумаб, атлизумаб, базиликсимаб, белимумаб, бевацизумаб, ипилимумаб, брентуксимаб ведотин, канакинумаб, капромаб пендетид, катумаксомаб, цертолизумаб пэгол, цетуксимаб, даклизумаб, деносумаб, экулизумаб, эдреколомаб, эфализумаб, эфунгумаб, эртумаксомаб, этанерцепт, этарацизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, гирентуксимаб, ибритумомаб тиуксетан, иговомаб, имциромаб, ипилимумаб, лабетузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, натализумаб, нимотузумаб, нофетумомаб мерпентан, офатумумаб, омализумаб, ореговомаб, паливизумаб, панитумумаб, пемтумомаб, пертузумаб, ранибизумаб, раксибакумаб, ритуксимаб, ровелизумаб, руплизумаб, такатузумаб тетраксетан, тефибазумаб, тоцилизумаб, тозитумомаб, трастузумаб, устекинумаб, секукинумаб, ведолизумаб, визилизумаб, вотумумаб, залутумумаб и занолимумаб, но не ограничиваются указанными.

[122] Кроме того, фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно применять в комбинации с антигистаминными средствами, стероидами, салициловой кислотой, мочевиной, такролимусом, циклофосфорином, фототерапией и т.п. для лечения экземы и аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, и можно применять в комбинации с сульфасалазином, азатиоприном, меркаптопурином, метотрексатом, циклоспорином, блокаторами ФНО (адалимумабом, этанерцептом и т.д.) или антителами против интегрина (ведолизумабом, натализумабом и т.д.) для лечения заболеваний кишечника, например, воспалительных заболеваний кишечника.

[123]

[124] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения в настоящем изобретении предложено применение указанного штамма или указанной композиции для профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, и применению указанного штамма или указанной композиции для получения терапевтического агента для лечения вышеупомянутых заболеваний.

[125] Конкретно, в настоящем изобретении предложена композиция, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, для применения при профилактике или лечении аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника, например, колита, и/или аутоиммунных заболеваний, например, псориаза.

[126] Кроме того, настоящее изобретение относится к применению композиции для получения лекарственного средства для профилактики или лечения аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника, например, колита, и/или аутоиммунных заболеваний, например, псориаза, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[127] В настоящем документе термин «профилактика» связан с предотвращением, задержкой, препятствованием или замедлением заболеваний с целью ослабления их влияния.

[128] В настоящем документе термин «лечение» связан с уходом за субъектом, страдающим от заболеваний, с целью смягчения, излечивания или ослабления симптомов заболеваний или ослабления или остановки прогрессирования заболеваний.

[129]

[130] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен способ профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, включающий введение фармацевтически эффективного количества указанного штамма или указанной композиции в организм субъекта, нуждающегося в профилактике или лечении указанных заболеваний или в смягчении состояния кишечника, аллергических реакций, воспалительных реакций или аутоиммунных реакций.

[131] Конкретно, в настоящем изобретении предложен способ лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника, например, колита, и/или аутоиммунных заболеваний, например, псориаза, включающий введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма в организм субъекта, нуждающегося в этом.

[132] Поскольку фармацевтическая композиция, применяемая в способе профилактики или лечения указанных заболеваний, а также способ ее введения описаны выше, перекрывающиеся элементы композиции и способа не будут включены в настоящий документ во избежание избыточной сложности настоящего описания.

[133] Указанный субъект, которому можно вводить композицию для профилактики или лечения указанных заболеваний, включает всех животных, в том числе человека. Например, субъект может представлять собой животное, например, собаку, кошку или мышь.

[134]

[135] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения настоящее изобретение относится к косметической композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.

[136] Косметическая композиция может характеризоваться функцией смягчения по меньшей мере одного состояния чувствительной кожи, выбранного из группы, состоящей из кожной аллергии, крапивницы, атопического дерматита, псориаза, грибковой инфекции и экземы, но не ограничивается указанными.

[137] В настоящем документе термин «косметическая композиция» относится к композиции, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, которая может быть представлена в виде лекарственной формы любого типа. Например, косметика, полученная с использованием указанной косметической композиции, может включать кремы, тампоны, лосьоны, эссенции, тоники, кремы-основы и косметические основы, и может быть коммерциализована в виде любых вышеперечисленных лекарственных форм для достижения цели настоящего изобретения, но не ограничивается указанными. Ингредиенты, содержащиеся в косметической композиции согласно настоящему изобретению, в дополнение к вышеупомянутым ингредиентам включают ингредиенты, обычно используемые в косметических композициях, например, традиционные адьюванты, например, антиоксиданты, стабилизаторы, солюбилизаторы, витамины, пигменты и ароматизаторы, а также носители.

[138]

[139] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения настоящее изобретение относится к функциональному пластырю, содержащему по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, причем указанный функциональный пластырь можно использовать для косметической или медицинской цели.

[140] Пластырь может характеризоваться функцией смягчения по меньшей мере одного состояния чувствительной кожи, выбранного из группы, состоящей из кожной аллергии, крапивницы, атопического дерматита, псориаза, грибковой инфекции и экземы, но не ограничивается указанными.

[141] В настоящем изобретении пластырь обычно представляет собой небольшой липкий пластырь, содержащий доставляемые вещества, причем указанный пластырь может быть представлен в различных формах. Простейшая форма представляет собой липкое цельное изделие, содержащее резервуар, содержащий доставляемые вещества, помещенные на подложку. Резервуар обычно образован косметически или фармацевтически приемлемым самоклеящимся материалом, однако в некоторых случаях он также может быть образован неадгезивными материалами, представленными в тонком липком слое, подходящем для поверхности, контактирующей с кожей. Скорость введения веществ, доставляемых из пластыря в организм субъекта, носящего пластырь, можно изменить, поскольку проницаемость кожи для доставляемых веществ, обычно зависит от индивидов и места на коже, которое могут выбрать специалисты в данной области техники.

[142]

[143] Настоящее изобретение будет подробно описано далее в настоящем документе посредством примеров. Эти примеры приведены исключительно в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и для специалистов в данной области техники очевидно, что не следует считать, что сущность настоящего изобретения ограничивается этими примерами.

[144]

[145] Пример 1. Эффекты смягчения и терапевтические эффекты, оказываемые KBL697 по отношению к аллергическим реакциям, обусловленные ингибированием цитокинов Th2-типа в Т-клетках.

[146] Согласно сообщениям, цитокины, имеющие отношение к T-хелперам 2 типа (Th2), например, ИЛ-4 и ИЛ-5, вносят вклад в хронические аллергические реакции за счет усиления иммунных реакций, имеющих отношение к Th2, и увеличения продукции IgE (Passante E, Inflamm. Res. 2009). В настоящем изобретении выполнена попытка скрининга пробиотических штаммов, которые можно использовать в качестве терапевтических агентов для лечения различных аллергических заболеваний, включая хронические аллергические заболевания, путем проверки эффекта ингибирования секреции ИЛ-4 и ИЛ-5 различными штаммами Lactobacillus. С этой целью эффект ингибирования секреции ИЛ-4 и ИЛ-5 тестировали следующим образом, используя линию клеток EL4, представлявшую собой линию T-клеток мыши.

[147]

[148] 1-1. Инкубирование линий клеток EL-4

[149] Клетки EL4 (ATCC NO. TIB-39) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS (эмбриональной телячьей сыворотки), пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO₂, а затем пересевали раз в три дня. Клетки EL4 высевали на 24-луночный планшет в концентрации 4 × 10⁵ клеток/лунку, затем культивировали в течение 16 - 20 часов для индукции аллергических реакций и обрабатывали штаммами.

[150]

[151] 1-2 Инкубирование штаммов и восстановление

[152] Используемые штаммы Lactobacillus gasseri культивировали в среде MRS с добавлением 0,5% цистеина, активировали на протяжении в общей сложности двух пересевов с 18-часовым интервалом, а затем использовали в экспериментах. Полученный культуральный раствор центрифугировали при 15000 × g в течение 3 минут, осадок промывали PBS-буфером. Штаммы окрашивали в течение 15 минут SYTO9 и PI с использованием набора для подсчета и оценки жизнеспособности бактерий LIVE/DEAD™ BacLight™ для проточной цитометрии (Thermo Fisher Scientific, США). Затем добавляли гранулы, содержащиеся в наборе, и рассчитывали количество окрашенных живых бактерий с использованием анализа на основе проточной цитометрии.

[153]

[154] 1-3. Обработка штаммов и количественное измерение секреции ИЛ-4 и ИЛ-5 после индукции аллергических реакций

[155] Для индукции аллергических реакций в клетках EL4, ранее высеянных на 24-луночный планшет, каждую лунку обрабатывали 100 мкл PMA (20 нг/мл ) и иономицина (1 мкг/мл). Затем выполняли обработку 300 мкл ранее полученных штаммов в соотношении клетки:штамм, равном 1:10. После инкубирования в течение 24 часов в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37 °C собирали надосадочную жидкость и использовали наборы для твердофазного ИФА Mouse IL-4 (№ в каталоге 555232, BD OptEIA™) и Mouse IL-5 (№ в каталоге 555236, BD OptEIA™) для измерения количества секретированных ИЛ-4 и ИЛ-5 в соответствии с инструкциями производителя.

[156]

[157] В результате, как показано на фиг. 1 и 2, получили подтверждение того, что KBL697 эффективно ингибировал секрецию как ИЛ-4, так и ИЛ-5, и его терапевтическое и профилактическое действие в отношении аллергии могло достигаться за счет ингибирования секреции цитокина Th2-типа, опосредующего аллергическую реакцию.

[158]

[159] Пример 2. Эффекты смягчения и лечения, оказываемые KBL697 по отношению к аллергическим реакциям, обусловленные ингибированием секреции гистамина в базофилах.

[160] Согласно сообщениям, при аллергической реакции в тканях продуцируется гистамин, вызывающий воспалительную реакцию, и подавление секреции гистамина приводит к смягчению симптомов аллергии за счет блокирования реакции, вызываемой гистамином В настоящем изобретении получено дальнейшее подтверждение смягчения аллергических реакций и терапевтического эффекта по отношению к ним путем ингибирования секреции гистамина за счет KBL697. Кроме того, чтобы подтвердить, является ли терапевтический и профилактический эффект в отношении хронических аллергических заболеваний, выявленный в примере 1, является характерным признаком Lactobacillus gasseri, или характерен ли место выраженный эффект конкретно для KBL697 среди штаммов Lactobacillus gasseri, выполнили оценку способности подавлять секрецию гистамина для еще девяти штаммов Lactobacillus gasseri в дополнение к KBL697. После индукции дегрануляции после культивирования клеток линии RBL-2H3 проверяли способность подавлять секрецию гистамина путем измерения активности β-гексозаминидазы, совместно секретируемой с гистамином, с помощью колориметрической реакции с субстратом.

[161]

[162] 2-1. Инкубирование линий клеток RBL-2H3

[163] Клетки RBL-2H3 (ATCC NO. CRL-2256) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS, пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO₂, а затем пересевали раз в три дня. Клетки RBL-2H3 высевали на 6-луночный планшет в концентрации 1 × 10⁶ клеток/лунку, затем культивировали в течение 3 часов, а затем обрабатывали IgE (0,5 мкг/мл) и инкубировали в течение 16 - 20 часов.

[164]

[165] 2-2. Инкубирование штаммов и получение культурального раствора

[166] Используемые штаммы Lactobacillus gasseri культивировали в среде MRS с добавлением 0,5% цистеина, активировали на протяжении в общей сложности двух пересевов с 18-часовым интервалом, а затем использовали в экспериментах. Полученный культуральный раствор центрифугировали при 15000 × g в течение 3 минут, а затем собирали надосадочную жидкость.

[167]

[168] 2-3. Индукция дегрануляции после обработки штаммами

[169] После удаления среды для клеток RBL-2H3, ранее высеянных на 6-луночный планшет, клетки дважды промывали 1 мл буфера Сираганяна (pH 7,2). Затем клетки обрабатывали 120 мкл ранее полученного культурального раствора бактерий или, в группе положительного контроля - кетотифеном (20 мкг/мл) в каждой лунке, инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37° C, а затем обрабатывали 60 мкл антигена (DNP-HAS, 1 мкг/мл) для индукции дегрануляции за счет реакции антиген-антитело. В качестве отрицательного контроля дегрануляцию индуцировали после обработки 120 мкл буфера Сираганяна. Реакцию выполняли в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37 °C в течение 20 минут, а затем собирали надосадочную жидкость.

[170]

[171] 2-4. Выявление цветной реакции

[172] Для выявления активности β-гексозаминидазы 25 мкл надосадочной жидкости, собранной в примере 2-3, переносили в каждую лунку 96-луночного планшета, а затем в каждую лунку добавляли 25 мкл субстрата (p-нитрофенил-N-ацетил-D-глюкозаминидазы) с последующей реакцией при 37 °C в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ в течение 90 минут. Затем добавляли 200 мкл стоп-раствора Na₂CO₃/NaHCO₃) для остановки реакции и измеряли поглощение при 405 нм. Поглощение после обработки Lactobacillus gasseri каждого типа сравнивали с группой отрицательного контроля и преобразовывали в процентный показатель для демонстрации уровня ингибирования дегрануляции.

[173]

[174] В результате, как можно видеть на фиг. 3 и в таблице 1, KBL697 демонстрировал количественное снижение секреции β-гексозаминидазы до 4-кратного по сравнению с другими штаммами Lactobacillus gasseri, для которых подтвержденный эффект был ниже по сравнению с доступным для приобретения антигистаминным агентом кетотифеном - положительным контролем. В результате обнаружено, что KBL697 демонстрировал замечательную активность в отношении предотвращения дегрануляции для эффективного смягчения симптомов аллергии, вызванных избыточной секрецией гистамина.

[175]

[176]

Таблица 1

Вид	Штамм или лекарственное средство, используемое для обработки	β-гексозаминидаза (кратность изменения)
- (Отрицательный контроль)	Буфер Сираганяна	1,0
- (Положительный контроль)	Кетотифен	0,3861
Lactobacillus gasseri	KBL697	0,2213
Lactobacillus gasseri	KBL695	0,4601
Lactobacillus gasseri	KBL698	0,4620
Lactobacillus gasseri	KBL685	0,4450
Lactobacillus gasseri	KBL686	0,4213
Lactobacillus gasseri	KBL688	0,4571
Lactobacillus gasseri	KBL373	0,5691
Lactobacillus gasseri	SNUG50243	0,5309
Lactobacillus gasseri	SNUG60080	1,0091
Lactobacillus gasseri	SNUG60134	0,9236

[177]

[178] Пример 3. Анализ иммунорегуляторных эффектов и эффектов ингибирования воспаления KBL697

[179] В дополнение к антиаллергической эффективности KBL697, также проверяли его иммунорегуляторные эффекты и эффекты ингибирования воспаления. С этой целью измеряли соотношение между ИЛ-10, типичным цитокином, обладающим иммуномодулирующей функцией, и ФНО-α и ИЛ-6, представляющими собой цитокины - основные индикаторы воспалительной реакции (ИЛ-10/ФНО-α, ИЛ-10/ИЛ-6), с использованием макрофагов, играющих важную роль в воспалительной реакции.

[180]

[181] 3-1. Инкубирование линий клеток RAW264.7

[182] Клетки RAW264.7 (ATCC NO. TIB -71) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS, пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO2, а затем пересевали раз в три дня. Инкубированные клетки RAW264.7 высевали на 24-луночный планшет в концентрации 1 × 10⁵ клеток/лунку, затем культивировали в течение 16 - 20 часов, а затем использовали для примера 3-3.

[183]

[184] 3-2. Инкубирование штаммов и получение образцов

[185] Культуральные растворы корректировали из расчета одинакового количества живых бактерий, а затем получали в виде трех образцов: живых бактерий, бактерий после пастеризации и бактерий, убитых нагреванием. Образцы живых бактерий, бактерий после пастеризации и бактерий, убитых нагреванием получали в соответствии со способом, использованным в примере 1-2. Затем на образец для пастеризации воздействовали температурой 70 °C в течение 30 минут, и получали образец с использованием того же процесса центрифугирования. Образец бактерий, убитых нагреванием, стерилизовали при 121 °C в течение 15 минут, и получали с использованием того же процесса. В качестве группы отрицательного контроля использовали среду MRS с добавлением 0,5% цистеина.

[186]

[187] 3-3. Обработка штаммов и измерение количества секретированных воспалительных цитокинов после индукции воспалительных реакций

[188] Для индукции воспалительных реакций в клетках RAW264.7 ранее высеянных на 24-луночный планшет, каждую лунку обрабатывали 500 мкл LPS (20 нг/мл). Затем выполняли обработку 300 мкл ранее полученных штаммов в соотношении клетки:штамм, равном 1:10, и инкубировали в течение 24 часов в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37 °C. Надосадочную жидкость культивированной смеси клетки-штамм собирали и использовали набор для твердофазного ИФА ФНО мыши (Mouse TNF ELISA Set II, № в каталоге 558534, BD OptEIA™), набор для твердофазного ИФА ИЛ-6 мыши (Mouse IL-6 ELISA Set, № в каталоге 555240, BD OptEIA™) и набор для твердофазного ИФА ИЛ-6 мыши (Mouse IL-10 ELISA Set, Cat No. 555252, BD OptEIA™) для измерения количества каждого цитокина в соответствии с инструкциями производителя.

[189]

[190] В результате, как показано на фиг. 4, получили подтверждение того, что среди штаммов Lactobacillus gasseri KBL697 особенно эффективно индуцировал секрецию ИЛ-10 и тем самым оказывал замечательный эффект с точки зрения иммунорегуляции и подавления воспалительной реакции. Как показано на фиг. 5 и 6, на основании способности к секреции ИЛ-10 с поправкой на провоспалительные цитокины ФНО-α и ИЛ-6 получили подтверждение того, что группа, обработанная KBL697, демонстрировала значительно усиленный эффект подавления воспаления способность к иммунорегуляции по сравнению с контрольной группой. Соответственно, обнаружено, что KBL697 обладал иммунорегуляторной и противовоспалительной активностью за счет секреции IL-10. Кроме того, эти эффекты аналогичным образом подтвердили не только у живых бактерий, но и у бактерий после пастеризации или бактерий, убитых нагреванием (см. таблицу 2 и таблицу 3), что указывает на возможность использования KBL697 для подавления воспалительных реакций в различных формах, например, в форме мертвых бактерий.

[191]

[192] Таблица 2

ИЛ-10/ФНО-α
	Живые	Убитые нагреванием	Пастеризованные
Контроль	-2,4509342 (Н/О)	-2,0474707 (Н/О)	-1,9242497 (Н/О)
KBL697	1,81114395	6,28130388	4,43515847

Н/О: не определяли

[193] Таблица 3

ИЛ-10/ИЛ-6
	Живые	Убитые нагреванием	Пастеризованные
Контроль	-6,010433 (Н/О)	-4,6669667(Н/О)	-4,5960301 (Н/О)
KBL697	2,4709538	8,1665268	5,65489003

Н/О: не определяли

[194]

[195] Пример 4. Анализ противогрибкового действия KBL697

[196] Противогрибковое действие KBL697 подтверждали с помощью капельного анализа. Приблизительно 1% KBL697 инокулировали в жидкую среду MRS, а затем инкубировали в инкубаторе при 37 °C в течение приблизительно 24 часов в анаэробных условиях для стационарного культивирования. Капли культурального раствора, в котором инкубировали клетки, наносили на твердую среду MRS, полученную в анаэробных условиях, в количестве 10 мкл за раз, а затем инкубировали при 37 °C в анаэробных условиях в течение приблизительно 24 часов. Malassezia furfur KCTC 7545, микроскопический грибок, получали путем посева в жидкую среду mYPG, полученную в аэробных условиях, в количестве 1% с последующим инкубированием в инкубаторе при 37 °C в течение приблизительно 24 - 48 часов. Мягкий агар mYPG для использования при оценке противогрибковой эффективности получали с добавлением компонентов, указанных в таблице 4, и 2,5 мл полученной культуральной среды засевали культуральным раствором, в котором инкубировали 500 мкл M. furfur. 2,5 мл мягкого агара mYPG, засеянного M. furfur, выливали на среду MRS с нанесенными каплями KBL697 и высушивали в течение 1 часа. Высушенную среду инкубировали в аэробных условиях C в инкубаторе при 37 °C в течение 24 - 48 часов. При выявлении чистой зоны в культуральной среде определяли противогрибковую активность путем измерения расстояния от внешней границы нанесенной капли с молочнокислыми бактериями до чистой зоны. Чистая зона представляет собой область с ингибированным ростом грибов, и противогрибковую активность молочнокислых бактерий определяли на основании расстояния до чистой зоны.

[197] В результате трех повторных экспериментов выявили чистые зоны с интервалом приблизительно 6,00 мм в области нанесенных капель KBL697 (фиг. 7), что указывало на способность KBL697 эффективно подавлять рост микроскопических грибов.

[198]

[199] Таблица 4

Компоненты	Доля (г/л)
Солодовый экстракт	5,0
Пептон	10,0
Глюкоза	20,0
Твин-40	1,0
Твин-80	1,0
Агар	4,5

[200]

[201] Пример 5. Влияние KBL697 на смягчение атопических состояний

[202] С целью проверки смягчающего влияния на атопические состояния в ряду эффектов KBL697, улучшающих состояние при аллергии, использовали мышей NC/Nga - модель атопического заболевания кожи у животных.

[203] После разделения мышей NC/Nga на группы по пять мышей на спине каждой мыши от нижней части уха до верхней части хвоста удаляли шерсть и оставляли мышей на 24 часа. Затем на область с удаленной шерстью наносили 200 мкл 1% раствора DNCB (динитрохлорбензола) (ацетон: оливковое масло = 3:1) два раза в неделю для индукции атопического дерматита. С третьей недели индукции дерматита мышам в контрольной группе раз в день перорально вводили 200 мкл PBS; культивируемый штамм KBL697 центрифугировали, промывали путем разбавления PBS и восстановления, а затем получали образцы, содержавшие по меньшей мере 2 × 10⁹ (KBL697-9) / 2 × 10⁸ (KBL697-8) / 2 × 10⁷ (KBL697-7) КОЕ на 200 мкл PBS, которые перорально вводили мышам в экспериментальной группе в количестве 200 мкл/день. При этом мышам в группе положительного контроля вводили 200 мкл дексаметазона (60 мкг/мл). Затем в течение трех недель введения бактерий еженедельно измеряли балльный показатель дерматита у мышей в контрольной и экспериментальных группах, и на 3 неделе после введения бактерий измеряли время почесывания мышей, толщину кожи и концентрацию IgE в крови после выполнения аутопсии.

[204]

[205] 5-1. Выполнение балльной оценки дерматита

[206] Для оценки поражений кожи, вызванных DNCB, измеряли балльный показатель дерматита следующим образом. Состояние кожи отслеживали, получая снимки в течение 3 недель с недельным интервалом, начиная с 3 недели после введения штамма. Проверяли четыре показателя - сухость, отек, эритему/кровотечение и эрозию/отделение кожи. Состояние без поражений оценивали как 0 баллов, легкое состояние - как 1 балл, умеренное состояние - как 2 балла, а тяжелое состояние - как 3 балла, и выполняли оценку общего балльного показателя.

[207] В результате, как показано на фиг. 8, балльный показатель дерматита, вызванного DNCB, значимо снижался в группе, получавшей штамм KBL697, по сравнению с контрольной группой (отрицательный контроль), где индуцировали атопический дерматит, и, в частности, экспериментальная группа (KBL697-9), получавшая KBL697 в количестве 2 × 10⁹ КОЕ, демонстрировала даже более низкий балльный показатель дерматита по сравнению с положительной контрольной группой, получавшей дексаметазон. В результате проверили эффект лечения атопического дерматита при введении штамма KBL697.

[208]

[209] 5-2 Влияние на облегчение зуда

[210] С целью проверки смягчающего влияния на зуд при введении штамма KBL697 моделям мышей, страдающим атопическим дерматитом, вызванным DCNB, измеряли время почесывания, снимая видеозапись моделей мыши в течение 10 минут через 3 недели после введения штамма.

[211] В результате, как можно видеть на фиг. 9, оказалось, что время почесывания значимо снизилось во всех экспериментальных группах, получавших KBL697, по сравнению с группой, получавшей PBS, что подтвердило выраженное смягчение симптомов зуда при атопическом дерматите за счет введения штамма KBL697.

[212]

[213] 5-3. Уменьшение толщины кожи

[214] С целью проверки эффекта уменьшения толщины кожи после введения KBL697 моделям мышей, страдающим атопическим дерматитом, вызванным DCNB, штангенциркулем измеряли толщину уха мыши и толщину кожи на спине через три недели после введения штамма и наблюдали снижение симптомов отека вследствие атопического дерматита.

[215] В результате, как можно видеть на фиг. 10 и 11, наблюдали значимое снижение толщины уха и кожи на спине в экспериментальной группе, получавшей KBL697, и группе положительного контроля.

[216]

[217] 5-4. Уменьшение концентрации IgE в крови

[218] Обнаружено, что концентрация IgE у пациентов с атопическим дерматитом в основном увеличивалась с увеличением клинической тяжести атопического дерматита (Matsumoto M, J. Immunol. 1999). Поэтому концентрацию IgE, типичного гематологического фактора, появляющегося при атопическом дерматите, измеряли путем сбора крови через три недели после введения штамма, отделяя сыворотку и используя набор для твердофазного ИФА IgE мыши (№ по каталогу 555248, BD OptEIA™).

[219] В результате, как показано на фиг. 12, обнаружили, что концентрация IgE в крови значимо снижалась в экспериментальной группе, перорально получавшей KBL697, что указывало на противоаллергический эффект после введения KBL697.

[220]

[221] Пример 6. Влияние KBL697 на укрепление плотных контактов клеток брыжейки

[222] В случае пациентов с колитом экспрессия белков, вовлеченных в формирование плотных контактов энтероцитов, снижается, что приводит к более высокой проницаемости клеток и, таким образом, к увеличению тяжести воспалительных реакций (J. Landy, World J. Gastroenterol., 2016). В связи с этим в настоящем изобретении выполнена попытка проверки способности KBL697 усиливать плотные контакты в линиях клеток Caco-2 - типичной модели эпителиальных клеток кишечника.

[223]

[224] 6-1. Инкубирование линий клеток Caco-2

[225] Клетки Caco-2 (ATCC NO. HTB -37) инкубировали в среде MEM с добавлением 10% FBS, пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO₂, заменяя среду раз в 2 суток, а затем пересевали раз в 4 дня.

[226]

[227] 6-2. Измерение плотного контакта

[228] 200 мкл клеток Caco-2 высевали в верхний слой 24-луночного планшета Transwell (Corning, США) в концентрации 3 × 10⁵ клеток/мл, а затем инкубировали в течение семи дней. На следующий день после замены среды на среду, содержащую только MEM без FBS, клетки инкубировали в течение ночи и вставляли в них набор палочковидных электродов для измерения TEER (трансэпителиального электрического сопротивления) с помощью вольтомметра для эпителиальной ткани EVOM Epithelial Tissue Voltohmmeter (World Precision Instruments, Флорида, США) (0 ч TEER). Затем выполняли обработку штаммами так, чтобы соотношение клетки:штамм составляло 1:100, и инкубировали в течение 24 часов, а затем измеряли TEER (24 ч TEER).

[229] После расчета по уравнению:

TEER (Ом·см²) = (сопротивление (Ом) – фоновое сопротивление (Ом)) × площадь мембраны (см²), использовали следующее уравнение:

[230] Изменение TEER (%) = 24 ч TEER (Ом·см²)/0 ч TEER (Ом·см²) × 100

[231] В результате, как показано на фиг. 13, линии клеток Caco-2, обработанные KBL697, демонстрировали усиление плотных контактов на 20% по сравнению с контрольной группой, что указывало на то, что KBL697 оказывает влияние на восстановление ослабленных межклеточных контактов между энтероцитами при колите. С другой стороны, такой эффект не обнаруживался у других штаммов Lactobacillus gasseri - KBL342 и KBL381.

[232]

[233] Пример 7. Терапевтический и профилактический эффект KBL697 по отношению к колиту

[234] С целью проверки терапевтического действия KBL697 при колите использовали модели мышей с индуцированным колитом. С этой целью модельных мышей разделили на группы по пять мышей C57BL/6, а затем давали им водопроводную воду с 3% раствором DSS в течение 5 дней, тем самым вызывая у них колит. Затем мышам в группе положительного контроля перорально вводили стероидное лекарственное средство преднизолон в 200 мкл PBS из расчета 1 мг/кг/сут, а мышам в экспериментальной группе ежедневно перорально вводили 200 мкл штамма KBL697, полученного таким же образом, что и в примере 5, а затем разбавленного до концентрации 5 × 10⁹ КОЕ/мл, 5 × 10⁸ КОЕ/мл и 5 × 10⁷ КОЕ/мл. Мышам в контрольной группе перорально вводили 200 мкл PBS раз в день. PBS, использованный в данном примере, получали с добавлением 0,05% цистеина для исключения влияния небольших количеств цистеина, содержащихся в композиции культурального раствора штамма и остававшегося в ней даже после отмывки, в соответствии с сообщением о том, что цистеин ассоциирован с противовоспалительными эффектами в некоторых клетках (Hasegawa, S et al., Clin Exp Immunol. 2012, 167, 269-27). С дня начала потребления DSS до 21 дня ежедневно измеряли изменения массы мышей в контрольной группе и экспериментальной группе, а на 21 день после подачи DSS мышей подвергали аутопсии с целью измерения длины толстой кишки.

[235] В результате, как показано на фиг. 14, обнаружили, что у мышей с индуцированным колитом, получавших 1 × 10⁹ КОЕ KBL697, как и у мышей в контрольной группе, масса тела быстро снижалась до 10 дня, а затем постепенно восстанавливалась, достигая нормального уровня на 21 день. В частности, как показано на фиг. 15, обнаружили, что у мышей, которым перорально вводили 1 × 10⁹ КОЕ KBL697 (KBL697 × 10^9), длина толстой кишки восстанавливалась до 90% уровня по сравнению с группой, не подвергавшейся воздействию, а симптом уменьшения длины толстой кишки значительно смягчался, составляя менее 80% по сравнению с группой отрицательного контроля. В результате обнаружили, что KBL697 демонстрировал эффект улучшения состояния при колите.

[236]

[237] Пример 8. Терапевтический и профилактический эффект KBL697 по отношению к псориазу

[238] Для проверки влияния KBL697 на смягчение псориаза использовали модельных мышей Balb/c.

[239] После разделения мышей Balb/c на группы по пять особей мышам контрольной группы перорально вводили 200 мкл PBS раз в день в течение десяти дней, тогда как мышам в экспериментальной группе перорально вводили раз в день 200 мкл каждого исследуемого штамма, разбавленного PBS до концентрации не менее 1 × 10⁹ КОЕ/0,2 мл. Штаммы и контрольную группу получали таким же образом, как в примере 7. Через две недели после введения бактерий на спине каждой мыши удаляли шерсть от нижней части уха до середины спины, после чего мышей оставляли на 24 часа. Затем на часть тела с удаленной шерстью раз в день наносили 62,5 мг 5% крема имиквимода, вызывая псориаз. После индукции псориаза мышам в группе положительного контроля ежедневно вводили 200 мкл дексаметазона (0,25 мг/мл). Аналогичное количество KBL697 ежедневно вводили даже во время индукции псориаза. В течение десяти дней в ходе индукции псориаза с двухдневными интервалами измеряли площадь, пораженную псориазом, и индекс тяжести (PASI) мышей в контрольной и экспериментальной группах, а на 10 день после индукции псориаза измеряли толщину кожи у каждой мыши, после чего мышь подвергали аутопсии для определения концентрации цитокинов в тканях кожи и в крови.

[240]

[241] 8-1. Измерение PASI и изменений толщины кожи

[242] Для оценки псориатических поражений кожи, вызванных имиквимодом, измеряли показатель PASI следующим образом. Проверяли три показателя: эритему, шелушение и толщину кожи. Состояние без поражений оценивали как 0 баллов, легкое состояние - как 1 балл, умеренное состояние - как 2 балла, тяжелое состояние - как 3 балла, а очень тяжелое состояние - как 4 балла, и выполняли оценку общего балльного показателя.

[243] В результате, как показано на фиг. 16 (A), PASI был значительно понижен в группе с псориазом, индуцированным имиквимодом, получавшей дозу KBL697, аналогично группе положительного контроля, получавшей дексаметазон (DXM), по сравнению с контрольной группой (NC) мышей с индуцированным псориазом. Кроме того, в результате измерения толщины кожи уха и спины мышей с помощью штангенциркуля и наблюдения за эффектом ослабления симптома отека, вызванного псориазом, как показано на фиг. 16(B), обнаружили, что толщина кожи уха и спины значительно уменьшилась в экспериментальной группе, получавшей дозу KBL697, аналогично группе положительного контроля.

[244]

[245] 8-2. Измерение цитокинов

[246] Известно, что в развитии и обострении симптомов псориаза важную роль играют реакции цитокинов Th1, например, ИФН-γ и ФНО-α, а также ответы Th17, в типичном случае - IL-17 (Brembilla NC, Front Immunol. 2018). Мышей с псориазом, индуцированным имиквимодом, подвергали аутопсии для определения концентрации цитокинов в тканях кожи и в крови. Концентрацию цитокинов определяли с использованием образца белка, полученного из тканей кожи, и образца сыворотки, полученного из крови, так же, как в примере 5-4, с использованием набора для твердофазного ИФА ФНО-α мыши (№ в каталоге 555138, BD OptEIA™), набора для твердофазного ИФА ИФН-γ мыши (№ в каталоге 558534, BD OptEIA™), набора для твердофазного ИФА IgE мыши (№ в каталоге 555248, BD OptEIA™) и набора для твердофазного ИФА ИЛ-17 DuoSet (№ в каталоге DY421-05, R&D SYSTEMS).

[247] Как можно видеть на фиг. 17, получено подтверждение того, что уровни воспалительных цитокинов, например, ФНО-α и ИФН-γ, повышенные в тканях кожи у мышей с индуцированным псориазом, снижались за счет KBL697. Кроме того, получено подтверждение того, что уровень Th17-специфичного ИЛ-17 также увеличивался в тканях кожи и сыворотке при индукции псориаза, но снижался при введении KBL697. В результате получили подтверждение возможности снижения уровня воспалительных цитокинов, повышающихся, в частности, в начале развития псориаза, за счет введения KBL697, и продемонстрированы терапевтические или профилактические эффекты в отношении данного заболевания за счет эффекта ослабления признаков.

[248]

[249] Пример 9. Терапевтический и профилактический эффект по отношению к колиту при одновременном введении антител для лечения колита и KBL697

[250] Инфликсимаб (название продукта Remicade) представляет собой лекарственное средство на основе терапевтического рекомбинантного антитела, используемый в виде инъекций при таких аутоиммунных заболеваниях, как ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилит, язвенный колит, болезнь Крона у детей, псориаз и псориатический артрит. Цель настоящего исследования заключалась в подтверждении эффекта улучшения симптомов заболевания кишечника in vivo при одновременном введении KBL697 и инфликсимаба.

[251] После разделения мышей C57BL/6 на группы по восемь мышей им давали водопроводную воду с 2% раствором DSS в течение 8 дней (с D0 до D7), вызывая у них колит. В то же время мышам в контрольной группе в течение 14 дней (с D0 до D13) раз в день перорально вводили 200 мкл PBS, в то время как мышам в экспериментальной группе, получавшей KBL697, раз в день перорально вводили 200 мкл штамма KBL697, разбавленного PBS до концентрации 1 × 10¹⁰ КОЕ/мл, так что ежедневно вводимое количество можно было задать как 2 × 10⁹ КОЕ. В группе введения терапевтического антитела антитело инфликсимаб вводили раз в 3 дня в дозе 5 мг/кг на мышь, и перорально вводили 200 мкл PBS раз в день в течение периода введения штамма KBL697. В экспериментальной группе одновременного введения перорально вводили раз в день 200 мкл раствора штамма KBL697, разбавленного PBS до концентрации 1 × 10¹⁰ КОЕ/мл, а на третий день внутривенно вводили антитело инфликсимаб в дозе 5 мг/кг на мышь. Экспериментальным группам без введения антитела инфликсимаб внутривенно вводили такой же объем PBS. В течение 14 дней происходила индукция колита за счет DSS, ежедневно измеряли изменения массы тела мышей в контрольной группе и каждой экспериментальной группе, а на 14 день после подачи DSS (D14) мышей подвергали аутопсии с целью измерения длины толстой кишки.

[252] В результате, как показано на фиг. 18(А), в отношении изменения длины толстой кишки, отмечено значительное улучшение степени уменьшения длины толстой кишки в группах, получавших штамм KBL697 сам по себе (DSS + KBL697) и инфликсимаб сам по себе (DSS+IFX), по сравнению с мышами в контрольной группе (DSS + PBS). В группе, одновременно получавшей инфликсимаб и KBL697 (DSS + комбин.), подтвердили значительное улучшение длины толстой кишки по сравнению с группой, получавшей инфликсимаб или KBL697 по отдельности.

[253] В отношении изменения массы тела, как показано на фиг.18 (B), через 14 дней после введения влияние на снижение массы тела значительно улучшилось в группах, получавших только KBL697 (DSS + KBL697) и только инфликсимаб (DSS + IFX) по сравнению с мышами в контрольной группе, не получавшими лечения. Через три дня после введения подтвердили сохранение высокой массы тела в группе, одновременно получавшей инфликсимаб и KBL697 (DSS + комбин.), по сравнению со всеми экспериментальными группами, получавшими DSS, что позволило подтвердить эффект смягчения симптома снижения массы тела из-за индукции колита. Соответственно, в отношении применения указанного штамма для лечения синдрома раздраженного кишечника исследование подтвердило возможность получения выраженного терапевтического эффекта при введении штамма в комбинации с доступными для приобретения терапевтическими антителами.

[254]

[255] Специфические аспекты настоящего изобретения подробно описаны выше, и для специалистов в данной области техники очевидно, что эти специфические аспекты являются лишь конкретными вариантами реализации, которые не ограничивают рамки настоящего изобретения. Таким образом, рамки настоящего изобретения в значительной степени определяются следующей формулой изобретения с эквивалентами пунктов формулы

[256]

[257] Название депонирующей организации: Корейский исследовательский институт биологических наук и биотехнологии (Korea Research Institute of Bioscience & Biotechnology)

[258] Индетификационный номер: KCTC13520BP

[259] Дата доступа: 20180427

[260]

Возможность промышленного применения

[261] Штамм Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP) в соответствии с настоящим изобретением ослабляет аллергические клеточные реакции, значительно улучшает симптомы атопического дерматита, и обладает противовоспалительным, иммунорегуляторным и противогрибковым действием, а также терапевтическим действием по отношению к заболеваниям кишечника, например, синдрому раздраженного кишечника. Таким образом, указанный одиночный штамм сам по себе может обеспечивать достижение всех целей смягчения аллергических заболеваний и воспалительных заболеваний, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции и за счет этого успешно находить применение в качестве пробиотического вещества. Кроме того, указанный штамм на основании его противогрибковой активности можно успешно использовать в качестве средства для наружной обработки кожи против различных заболеваний кожи, вызванных грибками, а также в косметической композиции и функциональном пластыре для смягчения чувствительности кожи.

Текст списка последовательностей

[262] Электронный файл списка последовательностей прилагается

[263]

--->

Список последовательностей

<110> Ko BioLabs, Inc.

<120> Штамм Lactobacillus Gasseri KBL 697 и его применение

<130> P18-B094

<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 1482

<212> ДНК

<213> Lactobacillus gasseri

<400> 1

ggcaagtggg cggcgtgcta tacatgcagt cgagcgagct tgcctagatg aatttggtgc 60

ttgcaccaaa tgaaactaga tacaagcgag cggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac 120

ctgcccaaga gactgggata acacctggaa acagatgcta ataccggata acaacactag 180

acgcatgtct agagtttaaa agatggttct gctatcactc ttggatggac ctgcggtgca 240

ttagctagtt ggtaaggcaa cggcttacca aggcaatgat gcatagccga gttgagagac 300

tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360

atcttccaca atggacgcaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420

gctcgtaaag ctctgttggt agtgaagaaa gatagaggta gtaactggcc tttatttgac 480

ggtaattact tagaaagtca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540

gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagtgca ggcggttcaa taagtctgat 600

gtgaaagcct tcggctcaac cggagaattg catcagaaac tgttgaactt gagtgcagaa 660

gaggagagtg gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720

ggcgaaggcg gctctctggt ctgcaactga cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac 780

aggattagat accctggtag tccatgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tgggaggttt 840

ccgcctctca gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta cgaccgcaag 900

gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960

gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccagt gcaaacctaa gagattagga 1020

gttcccttcg gggacgctga gacaggtggt gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080

tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgtcatt agttgccatc attaagttgg 1140

gcactctaat gagactgccg gtgacaaacc ggagaaaggt ggggatgacg tcaagtcatc 1200

atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga cggtacaacg agaagcgaac 1260

ctgcgaaggc aagcggatct ctgaaagccg ttctcagttc ggactgtagg ctgcaactcg 1320

cctacacgaa gctggaatcg ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg aatacgttcc 1380

cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtctg taacacccaa agccggtggg 1440

ataaccttta taggagtcag ccgtctaagt agacagatgt ta 1482

<---

Claims (34)

1. Штамм Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения аллергического заболевания.

2. Штамм по п. 1, характеризующийся тем, что указанный штамм содержит последовательность 16S рДНК SEQ ID NO: 1.

3. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения воспалительного заболевания.

4. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения заболевания кишечника.

5. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения аутоиммунного заболевания.

6. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения инфекции Malassezia spp.

7. Пищевая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по любому из пп. 1-6 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.

8. Пищевая композиция по п. 7, характеризующаяся тем, что указанная композиция представляет собой функциональную оздоровительную пищевую композицию, обладающую по меньшей мере одним эффектом, выбранным из группы, состоящей из смягчения симптомов аллергии, смягчения симптомов воспаления, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции.

9. Пищевая композиция по п. 8, характеризующаяся тем, что указанные симптомы аллергии выбраны из группы, состоящей из атопического дерматита, экземы, аллергической астмы, аллергического ринита, аллергического конъюнктивита и пищевой аллергии; указанное смягчение состояния кишечника представляет собой смягчение по меньшей мере одного состояния, выбранного из группы, состоящей из метеоризма, дискомфорта в области живота, инфекционной диареи, вызванной патогенными микроорганизмами, гастроколита, воспалительных заболеваний кишечника, неврогенного кишечного синдрома, синдрома раздраженного кишечника, избыточного роста микроорганизмов тонкого кишечника и кишечной пищевой диареи.

10. Кормовая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по любому из пп. 1-6 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.

11. Противогрибковая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 6 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель,

причем указанная композиция проявляет противогрибковую активность в отношении Malassezia spp.

12. Противогрибковая композиция по п. 11, характеризующаяся тем, что указанная композиция проявляет противогрибковую активность в отношении Malassezia furfur.

13. Средство для наружной обработки кожи для смягчения, профилактики или лечения инфекции кожи Malassezia spp, содержащее эффективное количество противогрибковой композиции по п. 11 и приемлемый носитель.

14. Медицинский пластырь для смягчения, профилактики или лечения атопического дерматита, содержащий резервуар, содержащий эффективное количество доставляемых веществ, помещенных на подложку, причем указанные доставляемые вещества представляют собой меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма.

15. Фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения аллергических заболеваний, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.

16. Фармацевтическая композиция по п. 15, характеризующаяся тем, что указанные аллергические заболевания выбраны из группы, состоящей из экземы, аллергической астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, аллергического конъюнктивита и пищевой аллергии.

17. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных заболеваний, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 3 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.

18. Фармацевтическая композиция по п. 17, характеризующаяся тем, что указанные воспалительные заболевания выбраны из группы, состоящей из отека, конъюнктивита, пародонтита, ринита, отита среднего уха, хронического синусита, фаринголарингита, тонзиллита, бронхита, пневмонии, язвы желудка, гастрита, колита, подагры, экземы, угрей, атопического дерматита, контактного дерматита, себорейного дерматита, анкилозирующего спондилита, ревматизма, фибромиалгии, остеоартрита, псориатического артрита, ревматоидного артрита, периартрита плечевого сустава, тендинита, тендосиновита, миозита, гепатита, цистита, нефрита, синдрома Шегрена, миастении гравис, сепсиса, васкулита, бурсита, височного артериита и рассеянного склероза.

19. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний кишечника, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 4 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.

20. Фармацевтическая композиция по п. 19, характеризующаяся тем, что указанные заболевания кишечника выбраны из группы, состоящей из метеоризма, дискомфорта в области живота, инфекционной диареи, вызванной патогенными микроорганизмами, гастроколита, воспалительных заболеваний кишечника, неврогенного кишечного синдрома, синдрома раздраженного кишечника, избыточного роста микроорганизмов тонкого кишечника и кишечной пищевой диареи.

21. Фармацевтическая композиция для лечения аутоиммунных заболеваний, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 5 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.

22. Фармацевтическая композиция по п. 21, характеризующаяся тем, что указанные аутоиммунные заболевания выбраны из группы, состоящей из псориаза, псориатического артрита, ревматоидного артрита, волчанки, системной склеродермии, атопического дерматита, астмы, синдрома Гийена-Барре, миастении гравис, дерматомиозита, полимиозита, рассеянного склероза, аутоиммунного энцефаломиелита, узелкового периартериита, тиреоидита Хашимото, рассеянного склероза, височного артериита, юношеского диабета, очаговой алопеции, пузырчатки, афтозного стоматита, аутоиммунной гемолитической анемии, гранулематоза Вегенера, синдрома Шегрена, болезни Аддисона, болезни Крона и болезни Бехчета.

23. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 15-22, характеризующаяся тем, что указанную фармацевтическую композицию применяют в комбинации с по меньшей мере одним лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из инфликсимаба, адалимумаба, голимумаба, абциксимаба, алемтузумаба, атлизумаба, базиликсимаба, белимумаба, бевацизумаба, ипилимумаба, брентуксимаба ведотина, канакинумаба, капромаба пендетида, катумаксомаба, цертолизумаба пэгола, цетуксимаба, даклизумаба, деносумаба, экулизумаба, эдреколомаба, эфализумаба, эфунгумаба, эртумаксомаба, этанерцепта, этарацизумаба, фонтолизумаба, гемтузумаба озогамицина, гирентуксимаба, ибритумомаба тиуксетана, иговомаба, имциромаба, ипилимумаба, лабетузумаба, меполизумаба, мотавизумаба, натализумаба, нимотузумаба, нофетумомаба мерпентана, офатумумаба, омализумаба, ореговомаба, паливизумаба, панитумумаба, пемтумомаба, пертузумаба, ранибизумаба, раксибакумаба, ритуксимаба, ровелизумаба, руплизумаба, такатузумаба тетраксетана, тефибазумаба, тоцилизумаба, тозитумомаба, трастузумаба, устекинумаба, секукинумаба, ведолизумаба, визилизумаба, вотумумаба, залутумумаба и занолимумаба.

24. Способ лечения аллергических заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.

25. Способ лечения воспалительных заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 3 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.

26. Способ лечения заболеваний кишечника, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 4 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.

27. Способ лечения аутоиммунных заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 5 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.

28. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против аллергических заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма.

29. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против воспалительных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 3 и культур указанного штамма.

30. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против заболеваний кишечника, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 4 и культур указанного штамма.

31. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 5 и культур указанного штамма.

32. Косметическая композиция для смягчения или профилактики атопического дерматита, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.

33. Косметическая композиция по п. 32, отличающаяся тем, что указанная косметическая композиция представлена в виде косметического пластыря.

Images