BG66608B1 - Полибактериален пробиотичен препарат - Google Patents
Полибактериален пробиотичен препарат Download PDFInfo
- Publication number
- BG66608B1 BG66608B1 BG110932A BG11093211A BG66608B1 BG 66608 B1 BG66608 B1 BG 66608B1 BG 110932 A BG110932 A BG 110932A BG 11093211 A BG11093211 A BG 11093211A BG 66608 B1 BG66608 B1 BG 66608B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- strain
- lactobacillus
- preparation
- polybacterial
- nbpmkk
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 30
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 29
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 62
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 claims abstract description 38
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 claims abstract description 35
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 26
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 3
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000000871 hypocholesterolemic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims abstract description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 3
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims 1
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 claims 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 40
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 32
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 23
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 17
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 abstract description 16
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 abstract description 16
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 13
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 abstract description 10
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 abstract description 8
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 abstract description 6
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 210000005081 epithelial layer Anatomy 0.000 abstract description 4
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 14
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 12
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 12
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 11
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 11
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 11
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 10
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 6
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 6
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 6
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 6
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 6
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002225 anti-radical effect Effects 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 4
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 IL-Ιβ Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 2
- 201000010538 Lactose Intolerance Diseases 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800001646 Protein n Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 2
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 2
- 208000005652 acute fatty liver of pregnancy Diseases 0.000 description 2
- 230000003627 anti-cholesterol Effects 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 235000021472 generally recognized as safe Nutrition 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N (1aR,1bS,4aR,7aS,7bS,8R,9R,9aS)-4a,7b,9,9a-tetrahydroxy-3-(hydroxymethyl)-1,1,6,8-tetramethyl-1,1a,1b,4,4a,7a,7b,8,9,9a-decahydro-5H-cyclopropa[3,4]benzo[1,2-e]azulen-5-one Chemical compound C1=C(CO)C[C@]2(O)C(=O)C(C)=C[C@H]2[C@@]2(O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@]3(O)C(C)(C)[C@H]3[C@@H]21 QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N 0.000 description 1
- AAXWBCKQYLBQKY-IRXDYDNUSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[(2-benzamidoacetyl)amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)C=1C=CC=CC=1)C1=CN=CN1 AAXWBCKQYLBQKY-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- WCBPJVKVIMMEQC-UHFFFAOYSA-N 1,1-diphenyl-2-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazine Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1NN(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WCBPJVKVIMMEQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXEKPEMOWBOYRF-QDBORUFSSA-N AAPH Chemical compound Cl.Cl.NC(=N)C(C)(C)\N=N\C(C)(C)C(N)=N LXEKPEMOWBOYRF-QDBORUFSSA-N 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108010068139 Ala-Leu-Pro-Met Proteins 0.000 description 1
- PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N Aldosterone Chemical compound C([C@@]1([C@@H](C(=O)CO)CC[C@H]1[C@@H]1CC2)C=O)[C@H](O)[C@@H]1[C@]1(C)C2=CC(=O)CC1 PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N 0.000 description 1
- PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N Aldosterone Natural products C1CC2C3CCC(C(=O)CO)C3(C=O)CC(O)C2C2(C)C1=CC(=O)CC2 PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000344 Angiotensin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101800000734 Angiotensin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 101000984728 Chiropsoides quadrigatus Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptide Proteins 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 208000036649 Dysbacteriosis Diseases 0.000 description 1
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010063907 Glutathione Reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100036442 Glutathione reductase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000917009 Lactobacillus rhamnosus GG Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical group [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 229920002582 Polyethylene Glycol 600 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 108020001027 Ribosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001237745 Salamis Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000252794 Sphinx Species 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229960002478 aldosterone Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N angiotensin I Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000003858 bile acid conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010016268 hippuryl-histidyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- XKLJHFLUAHKGGU-UHFFFAOYSA-N nitrous amide Chemical class ON=N XKLJHFLUAHKGGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N phorbol Natural products C[C@@H]1[C@@H](O)[C@]2(O)[C@H]([C@H]3C=C(CO)C[C@@]4(O)[C@H](C=C(C)C4=O)[C@@]13O)C2(C)C QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000015175 salami Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- RLNWRDKVJSXXPP-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-[(2-bromoanilino)methyl]piperidine-1-carboxylate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCCCC1CNC1=CC=CC=C1Br RLNWRDKVJSXXPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/145—Gasseri
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/147—Helveticus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Virology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
Abstract
Настоящото изобретение се отнася до полибактериален пробиотичен препарат, който включва нови щамове млечнокисели бактерии Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК No 8720, Lactobacillus plantarum F12, НБПМКК No 8722 и Lactobacillus helveticus A1, НБПМКК No 8721, и притежава следния комплекс от свойства: антиоксидантен ефект; хипохолестеролемичен ефект; противовъзпалителен имуномодулиращ ефект; способност за освобождаване на биоактивни пептиди, потискащи ангиотензин-конвертиращия ензим (АСЕ), отговорен за повишеното кръвно налягане. Предмет на изобретението също са посочените пробиотични щамове млечнокисели бактерии и бактериални препарати, получени с тях. Включеният в състава пробиотичен щам Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК No 8720 притежава съвкупност от свойства: силна адхезия към епителния слой на дебелото черво, способност за редукция на холестерола и противовъзпалителен ефект чрез редукция нивото на проинфламаторния цитокин интерлевкин-8. Изобретението се отнася и до използване на щамовете млечнокисели бактерии и бактериални препарати в производството на стартерни култури, хранителни добавки, храни, функционални продукти и фармацевтични препарати, предназначени за повлияване на здравословното състояние на хора и животни.
Description
(54) ПОЛИБАКТЕРИАЛЕН ПРОБИОТИЧЕН ПРЕПАРАТ (57) Настоящото изобретение се отнася до полибактериален пробиотичен препарат, който включва нови щамове млечнокисели бактерии Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК № 8720, Lactobacillus plantarum F12, НБПМКК № 8722 и Lactobacillus helveticus Al, НБПМКК № 8721, и притежава следния комплекс от свойства: антиоксидантен ефект; хипохолестеролемичен ефект; противовъзпалителен имуномодулиращ ефект; способност за освобождаване на биоактивни пептиди, потискащи ангиотензин-конвертиращия ензим (АСЕ), отговорен за повишеното кръвно налягане. Предмет на изобретението също са посочените пробиотични щамове млечнокисели бактерии и бактериални препарати, получени с тях. Включеният в състава пробиотичен щам Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК № 8720 притежава съвкупност от свойства: силна адхезия към епителния слой на дебелото черво, способност за редукция на холестерола и противовъзпалителен ефект чрез редукция нивото на проинфламаторния цитокин интерлевкин-8. Изобретението се отнася и до използване на щамовете млечнокисели бактерии и бактериални препарати в производството на стартерни култури, хранителни добавки, храни, функционални продукти и фармацевтични препарати, предназначени за повлияване на здравословното състояние на хора и животни.
претенции, 8 фигури
66608 Bl (54) ПОЛИБАКТЕРИАЛЕН ПРОБИОТИЧЕН ПРЕПАРАТ
Област на техниката
Настоящото изобретение се отнася към областта на биотехнологията и в частност до пробиотични щамове млечнокисели бактерии и полибактериален препарат, получен с тях, притежаващи комплекс от полезни за здравето ефекти и до използването им като хранителна добавка за профилактика на различни заболявания.
Предшестващо състояние на техниката
Пробиотиците са живи ядливи микроорганизми, които имат позитивен ефект върху човешкото здраве. Повечето пробиотици са лактобацили и/или бифидобактерии. Те са непатогенни бактерии, способни да колонизират върху гастроинтестиналния тракт. Доказано е, че лактобацилите и бифидобактериите са сред основните компоненти на човешката микрофлора (микробиота). Представители на двата рода могат да колонизират в мукосния слой на дебелото черво и да влияят върху поддържането на хомеостаза на интестиналната екосистема. Тяхното присъствие се асоциира с полезни за здравето ефекти като потискане на вредни микроорганизми, подобряване на храносмилането, имуностимулиращ ефект, снижаване на лактозния интолеранс, редуциране нивото на серумния холестерол, предпазване от диария и др. Някои щамове лактобацили произвеждат биоактивни пептиди, демонстриращи антихипертоничен ефект и калциево- и магнезиево-улавящ ефект. Пробиотичните ефекти не се отнасят към родовете Lactobacillus и Bifidobacterium, като цяло, а са щамово-специфични. При изучаването и доказването на полезните ефекти се извършва и прецизна видова и щамова идентификация на техните носители. Регистрирани са множество полезни за здравето ефекти при консумацията на продукти, съдържащи пробиотични щамове. По-долу са дадени най-важните от тях:
• Благоприятно влияние върху интестиналната микрофлора чрез стимулиране на полезните бактерии и потискане на вредните
Редица щамове млечнокисели бактерии произвеждат бактериоцини, които унищожават вредни микроорганизми като Clostridium tyrobutiricum, St. aureus, Listeria monocytogenes и др.
• Производство на късоверижни мастни киселини
В здравия човешки организъм дневно се произвеждат около 400 тМ късоверижни мастни киселини като най-важни са оцетната, пропионовата и маслената. Те влияят благоприятно върху pH в червата. Установено е, че бутиратът снижава риска от развитие на рак на дебелото черво чрез инхибиране на генотоксичния ефект на нитрозоамидите и водородния прекис. Освен това маслената киселина индуцира апоптозата в туморни клетки на дебелото черво. Маслената киселина редуцира експресията на проинфламаторните цитокини TNFa, IL-Ιβ, IL-6.
• Стимулиране на имуноотговора чрез имуномодулиране и усилване на вродения имунитет
Пробиотичните бактерии регулират деликатния баланс между необходимия и прекомерния имунен отговор. Пробиотични щамове, които водят до стимулиране индукцията на IL-10 са подходящи за хора, страдащи от имфламаторна болест на дебелото черво. Имуномодулаторният ефект е щамово-специфичен. Изследвани са щамове лактобацили и бифидобактерии, някои от които водят до понижаване на TNFa и повишаване на IL-10 (McCarthy, 2003).
• Подобряване усвояването на хранителните вещества от макроорганизма
Лактобацилите и бифидобактериите притежават бета-галактозидазна активност и чрез нея понижават концентрацията на лактозата. Това е полезно за хора, страдащи от лактозен нетолеранс. Производството на витамини от В-комплекса от някои щамове бифидобактерии е значимо и бе отбелязано по-горе. Чрез протеолитичния си комплекс лактобацилите допринасят за протеиновото разграждане и с това на усвояемостта на белтъците от човека. Някои бифидобактерии притежават способността да усвояват неорганичен азот и да снижават концентрацията на амоняк, който може да има канцерогенен ефект при високи нива.
• Антиоксидантен ефект
Увеличеното натрупване на кислородни радикали в тъканите може да причини увреждания на клетките. Формирането на активен кислород може да е свързано с някои фактори като употребата на някои лекарствени средства, повишена консумация на алкохол, стресови фактори и др. Повишената оксидация е свързана с
66608 Bl някои храносмилателни заболявания, възрастта, артериосклероза, канцерогенни заболявания. Организмът има няколко защитни системи срещу токсичния кислород, но е важно да се консумират антиоксидантни средства, за да се подобри функционирането на тези системи. Някои микроорганизми притежават ензими с антиоксидантно действие като супероксиддисмутази, каталази, глутатион-редуктази и др.
• Редуциране на серумния холестерол
Холестеролът се синтезира от интестинални клетки и се освобождава в тънкото черво. Друга част от холестерола е от жлъчната секреция и от храната. Микробиотата оказва влияние върху холестеролното ниво. Някои микроорганизми разграждат жлъчните соли, усвоявайки таурина и глицина. По този начин жлъчно-солевата циркулация се нарушава и черния дроб мобилизира допълнително холестерол за синтез на нови жлъчни соли, което води до снижаване на серумния холестерол. Gilliland et al. (1985) изследват способността на щам L. acipophilus да асимилира холестерола.
• Отделяне на биоактивни пептиди с антихипертонично действие и пептиди, подобряващи усвояването на калция и магнезия.
Разграждайки млечните протеини млечнокиселите бактерии освобождават нискомолекулни пептиди. Установено е, че някои от тях инхибират ангиотенсин-конвертиращия ензим (АСЕ). АСЕ отцепва дипептид от ангиотенсин I, превръщайки го в ангиотенсин II, който е вазоконстриктор и индуцира производството на алдостерон, което довежда до увеличаване на концентрацията на натриеви йони и на кръвното налягане. Най-добре изучен е антихипертоничният ефект на трипептидите Пе-Рго-Рго и ValPro-Pro, освобождавани при протеолитичната дейност на определени щамове L. helveticus. Те дават силно инхибиране на АСЕ. Антихипертоничният ефект е потвърден в клинични опити.
Понастоящем, няколко комерсиални пробиотика се използват успешно, например L. rhamnosus GG (Saxelin М. Lactobacillus GG - a human probiotic strain with thorough clinical documentation. Food Rev Int 1997; 13:293-313). Друг промишлен пробиотик e L. fermentum 39, използван за стабилизация на интестиналната микрофлора при дисбактериоза (1).
Съществува бактериален щам Lactobacillus fermentum МЕЗ, притежаващ супероксиддисмутазна активност и активност срещу патогенни микроорганизми (Mikelsaar et al., 2007).
Актуален проблем представлява идентифициране и подбор на пробиотични щамове млечнокисели бактерии и създаването с тях на полибактериален препарат, който да притежава съвкупност от полезни свойства като висока преживяемост в гастроинтестиналния тракт, антиоксидантен ефект, силна адхезия към епителния слой на дебелото черво, способност за редукция на холестерола, имуномодулиращ и противовъзпалителен ефект, АСЕ-инхибираща активност.
Техническа същност на изобретението
Целта на настоящото изобретение е да се идентифицират и подберат пробиотични щамове млечнокисели бактерии с полезни за здравето свойства и с тях да се създаде пробиотичен препарат, притежаващ комбинация от функционални ефекти.
Пробиотичният препарат, предмет на настоящото изобретение, представлява полибактериална комбинация, състояща се от три пробиотични щама млечнокисели бактерии: Lactobacillus gasseri 7/12, депозиран под № 8720 на 03.05.2011 г. в Национална банка за промишлени микроорганизми и клетъчни култури (НБПМКК), Lactobacillus plantarum Fl2, депозиран под № 8722 на 03.05.2011 г. в НБПМКК и Lactobacillus helveticus Al, депозиран под № 8721 на 03.05.2011 г. в НБПМКК. Препаратът притежава съвкупност от здравни ползи: антиоксидантен ефект; редукция на концентрацията на холестерола, дължаща се на хидролиза на жлъчни соли и на директното абсорбиране на холестерола; противовъзпалителен имуномодулиращ ефект чрез редукция на нивото на проинфламаторния цитокин интерлевкин-8; способност за освобождаване на биоактивни пептиди, потискащи ензима, отговорен за високото кръвно налягане (АСЕ).
Предмет на изобретението са също нови щамове Lactobacillus gasseri 7/12, № 8720 в НБПМКК, Lactobacillus plantarum Fl2, № 8722 в НБПМКК и Lactobacillus helveticus Al, № 8721 в НБПМКК и техните полезни свойства.
Пробиотичният щам Lactobacillus plantarum Fl2, № 8722 в НБПМКК, притежава едновре3
66608 Bl менно антиоксидантна активност и значителна адхезия към епителни клетки.
Пробиотичният щам Lactobacillus gasseri 7/12, № 8720 в НБПМКК, притежава съвкупност от следните полезни свойства: висока преживяемост в гастроинтестиналния тракт, силна адхезия към епителния слой на дебелото черво, способност за редукция на холестерола и противовъзпалителен ефект чрез редукция на нивото на проинфламаторния цитокин интерлевкин-8.
Пробиотичният щам Lactobacillus helveticus Al, № 8721 в НБПМКК, притежава силен антиАСЕ ефект.
Предмет на изобретението е и използването на новите пробиотични щамове, както и на пробиотичния полибактериален препарат във фармацевтичната и хранителната индустрия за профилактика на някои социално-значими заболявания като: повишеното кръвно налягане, артериосклерозата и хиперхолестероломията, отслабения имунитет и възпалителните процеси в интестиналния тракт, нарушения баланс в интестиналната микрофлора.
Lactobacillus gasseri 7/12, № 8720 в НБПМКК и Lactobacillus plantarum Fl2, № 8722 в НБПМКК, са изолирани от интестиналния тракт на здрави доброволци, a Lactobacillus helveticus A1, № 8721 в НБПМКК, е изолиран от домашно приготвено бяло саламурено сирене, което доказва техния GRAS (generally recognised as safe) статус. Видовата принадлежност и щамовата идентичност на трите щама са установени с помощта на прецизни ДНК-базирани методи (2) като секвениране на 16S рибозомалните гени, ARDRA, пулсова електрофореза, AFLP.
Фенотипното идентифициране на трите щама е проведено с помощта на API 50 CHL System (BioMerieux, France).
Щамовата идентичност е определена молекулярно, с помощта на AFLP и пулсова електрофореза. Двата основни молекулярни метода, използвани за идентификация на трите щама и за извеждане на техните щамово-специфични ДНК профили са описани в горецитираната статия (Dimitrov Zh. et al., 2008). Ha фиг. 1 е представен пулсово-електрофоретичния ДНК профил на Lactobacillus plantarum Fl2, № 8722 в НБПМКК, на фигура 2 - пулсово-електрофоретичния ДНК профил на Lactobacillus gasseri 7/12, № 8720 в НБПМКК и на фигура 3 - пулсово-електрофо ретичния ДНК профил на Lactobacillus helveticus Al, № 8721 в НБПМКК.
Lactobacillus plantarum F12, № 8722 в НБПМКК, образува бели S-колонии с размери 1-2 mm. Бактериалните клетки са къси (0,9-1,2 X 3-8 urn) със заоблени краища. Основна среда за култивиране е MRS бульон и arap (OXOID). Идентифициран е съгласно Bergey's Mannual (2009) при ползване на Api web база данни (стрипове API 50CHL) и MicroLog М5.1.1 база данни (Biolog AN Microplate). ARDRA профилът на щама е типичен за L. plantarum. Профилът на разтворимите клетъчни протеини е идентичен на L. plantarum (АТСС). Развива се в MRS бульон след инокулиране с 0,1%, като култивирането е при 37°С за 18-24 h, като не се нуждае от предварително анаеробизиране на бульонната среда и анаеробна атмосфера по време на култивиране. Върху MRS агар се развива за 48 h в анаеробна среда.
Lactobacillus gasseri 7/12, № 8720 в НБПМКК образува бели S-колонии с размери 1-2 mm. Бактериалните клетки са къси (0,6-0.8 X 3.0-5.0 um) със заоблени краища. Основна среда за култивиране е MRS бульон и arap (OXOID). Щамът е идентифициран съгласно Bergey's Mannual (2009) при ползване на Api web база данни (стрипове API 50CHL) и MicroLog М5.1.1 база данни (Biolog AN Microplate). ARDRA профилът на щама е типичен за L. gasseri. Профилът на разтворимите клетъчни протеини е идентичен с този на щам L. gasseri 33323 (АТСС). Lactobacillus gasseri 7/12 се развива в MRS бульон след инокулиране с 0,1 %, култивира се при 37°С за 18-24 h, като не се нуждае от предварително анаеробизиране на бульонната среда и анаеробна атмосфера по време на култивиране. Върху MRS агар се развива за 48 h в анаеробна среда.
Lactobacillus helveticus A1, № 8721 в НБПМКК образува бели R-колонии с размери 1-2 mm. Бактериалните клетки са с дължина 3,0-5,0 um. Основни среди за култивиране са MRS бульон и агар (OXOID) и стерилно обезмаслено мляко за микробиологични цели, 10% сухо вещество (OXOID). Щамът е идентифициран съгласно Bergey's Mannual (2009) при ползване на Api web база данни (стрипове API 50CHL) и MicroLog М5.1.1 база данни (Biolog AN Microplate). ARDRA профилът е типичен за вида L. helveticus. Профилът на разтворимите клетъчни протеини е идентичен с този на щам L. helveticus 15009
66608 Bl (АТСС). Lactobacillus helveticus Al се развива в MRS бульон след инокулиране с 0,1%, култивира се при 37°С за 18-24 h, като не се нуждае от предварително анаеробизиране на бульонната среда и анаеробна атмосфера по време на култивиране. Върху MRS агар се развива за 48 h в анаеробна среда. В мляко се развива след инокулиране с 0,1%, култивира се при 37°С за 18-24 h.
Функционални свойства на щам Lactobacillus plantarum Fl2, № 8722 в НБПМКК • Определяне на антиоксидантни свойства
Щамът L. plantarum F12 притежава антиоксидантни свойства и като такъв е селектиран измежду повече от 400 лактобацили. За извършване на подбор по отношение на антиоксидантните свойства щамовете са инкубирани в MRS бульон за 24 часа и центрофугирани при 3500 g за 10 min и 4°С. След промиване с физиологичен разтвор клетките се ресуспендират в 1.15% КС1 до 1 хЮ9 клетки за 1 ml. Клетъчната суспензия се подлага на соникация (Branson В-12 Sonic power Company) за 5 min в ледена баня, след което следва престой за 10 min при -20°С. Суспензията се центрофугира при 10000 g за 10 min и 4°С. Супернатантата се използва като безклетъчен екстракт. Определени са трите вида активности:
- Обща антиоксидантна активност - ORAC
Основен метод за определяне на общата антиоксидантна активност е ORAC (Oxygen radical absorbance capacity). Резултатът се изразява в TROLOX еквиваленти на 109 микробиални клетки. Използван е методът на Cao et al (1995). Принципът е следният: субстратът OIфикоеритрин (Sigma Chemical Co.) е подложен на оксидантна атака от генератора на радикали 2,2вТ)1-азобис (2-аминодипротан) дихидрохлорид (ААРН; Waco Chemical USA). Стандартният разтвор на TROLOX (6-хидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоксилна киселина, Trolox; Aldrich) бе приготвен чрез разтваряне на 5 mg субстанция в 200 mL 0.2 М фосфатен буфер (изходен разтвор). Работният разтвор се получава като се смесят 1 ml от изходния разтвор с 9 ml фосфатен буфер.
При наличие на проба с антиоксидантни свойства окислението на фикоеритрина се намалява в определена степен. Измерва се относителната флуоресценция при вълни 535 nm (възбуждане) и 595 nm (емисия) за 60-минутен период. Използва се формулата:
ORACvalue = XК(S , -Sh, V)/(S, , -Sh, .) 4 sample blank7 v trolox blank7
Където X е обемът проба в μΐ, a Κ - коефициент на разреждане. S са площите на флуоресцентната крива.
- Обща антирадикалова активност
Улавящите свободните радикали вещества за всеки от щамовете се определят на база на степента на редукция на интензитета на оцветяване на съединението 1,1 -дифенил-2-пикрилхидразин (DPPH). Силата на радикал-улавящата активност е пропорционална на степента на обезцветяване на пурпурния цвят на DPPH. Ферментиралите млека със съответния щам се центрофугират и супернатантата се екстрахира с диетилов етер. Следва изпаряване на етерния слой и разтваряне на остатъка в метанол. 0.1 ml от този разтвор се смесва с 1.4 ml DPPH разтвор (40 pg/ml в метанол). Радикал-улавящата активност се дефинира като разликата в абсорбцията при 517 nm на празната проба и пробата [А517(празна) - А517(проба)].
- SOD активност
Извършва се по Chang & Hasan, 1997. Щамовете се развиват на бульон (Ml 7 за стрептококи, MRS за лактобацили) и след инкубирането културите се центрофугират, промиват с фосфатен буфер с 0.1 мМ EDTA, pH 7.8, ресуспендират се в същия буфер и се соникират. Центрофугират се при 17000 g и се диализират срещу гореописания фосфатен буфер за 24 h. Отново се центрофугират при 20000 g. Общата протеинова концентрация на безклетьчния екстракт се определя по Lowry. Двете ензимни активности се определят с помощта на специални аналитични комплекти (SIGMA) според инструкциите на производителя. SOD се определя по цитохром С метода в спретната ензимна система с ксантиноксидаза. Принципът е: ксантиноксидазата окислява ксантина като същевременно се редуцира цитохром С. При наличие на проба със SOD активност редукцията на цитохром С се инхибира в определена степен, защото двата протона се свързват със супероксидния радикал от SOD вместо да се прехвърлят към цитохром С.
В Таблица 1 са представени резултатите от определянето на различни антиоксидантни активности: обща антиоксидантна активност чрез ORAC теста, обща антирадикалова активност и супероксиддисмутазна активност (SOD).
66608 Bl
Таблица 1.
| Вид активност | Интактни клетки | Безклетъчен екстракт |
| Обща антиоксидантна активност ORAC, trolox eq./Ю9 клетки | 1488 ±72 п=5 | 1764+ 110 п=5 |
| Обща антирадикалова активност, А51?(празна) - А5]7(проба) | 0.19 + 0.02 п=5 | 0.32 + 0.04 п=5 |
| Супероксиддисмутазна активност | 38.4 + 2.4 U/mg протеин п=3 |
Значима обща антиоксидантна активност се констатира както при интактните клетки на щама L. plantarum Fl2, така и при безклетъчния екстракт. По отношение на SOD активност безклетъчният екстракт от този щам превъзхожда всички тествани лактобацили от различни бактериални видове.
• Определяне на адхезията спрямо епителни клетки
Използвани са епителните клетъчни линии СаСо2 и НТ29, които се култивират като монослой в среда DMEM (Dilbecco’s modified Eagle’s medium, Gibco, UK), обезпечена c 10% фетален говежди серум. Температурата на инкубиране е 37°С във водонаситена атмосфера, съдържаща 5% СО2. При около 90% изграден монослой клетките се пасажират чрез инкубиране с 0.25% трипсин и 10 mM EDTA разтвор за 10 min при 37°С. За определяне на адхезията еукариотните клетки се посяват в 6-кладенчови кластери при концентрация 2x105 клетки/ml. Средата се сменя на всеки 2 дена в продължение общо на 10 дни като при това се изгражда не само монослоя (3-4 дена), но и става зреене на клетъчните рецептори. При извършване на адхезията монослоевете се промиват с PBS буфер двукратно. Бактериалните култури с концентрация 108 клетки/ml в 2 ml DMEM без антибиотици се добавят към монослоевете. Следва инкубиране за 60 min при 37°С във водонаситена атмосфера, съдържаща 5% СО2. След това кладенците се промиват петкратно с PBS и се фиксират с метанол за 3 min. Следва оцветяване по Gram и микроскопско оценяване на адхезията. Определя се броят на адхезиралите бактерии за 20 епителни клетки като се отчитат 10 микроскопски полета.
На Фигура 4 е представена снимка на адхезията на щама L. plantarum F12 към епителни клетки Сасо-2. Резултатите от изследването на адхезията за щама, изразени като среден брой адхезирали бактерии върху една еукариотна клетка, са представени в Таблица 2. Опитът е извършен трикратно за оценка на адхезията както върху клетъчна линия Сасо-2, така и върху линия НТ29 като резултатите са осреднени.
Таблица 2.
| Щам | Среден брой адхезирали бактерии върху Сасо-2 еукариотна клетка | Среден брой адхезирали бактерии върху НТ-29 еукариотна клетка |
| L. plantarum F12 | 25 | 29 |
66608 Bl
Функционални свойства на щама L. gasseri 7/12, № 8720 в НБПМКК • Определяне на адхезията спрямо епителни клетки
Методът е даден по-горе. На фигура 5 е представена снимка на адхезията на щама L. gasseri 7/12 към епителни клетки Сасо-2. Резултатите от изследването на адхезията за щама, изразени като среден брой адхезирали бактерии върху една еукариотна клетка, са представени в Таблица 3. Опитът е извършен трикратно за оценка на адхезията както върху клетъчна линия Сасо-2, така и върху линия НТ-29 като резултатите са осреднени.
Таблица 3.
| Щам | среден брой адхезирали бактерии върху Сасо-2 еукариотна клетка | среден брой адхезирали бактерии върху НТ-29 еукариотна клетка |
| L. gasseri 7/12 | 20 | _____________22__________ |
• Определяне на противовъзпалителния имуномодулиращ ефект
Провокирането на индукцията на инфламаторни цитокини е силно нежелано при хората с инфламаторна болест на дебелото черво. Синтезът на инфламаторни цитокини се потиска от сигналния пептид. Интерлевкин 10 (IL-10), който 25 се произвежда от наивни Т-хелперни клетки или макрофаги. Човешката моноцитна клетъчна линия U-937 се доказа като подходяща при оценката не само на индуцирането на цитоток30 сичните TNF-алфа и IL-1, но и при определяне индукцията на сигналния пептид IL-10.
Като мяра за имуномодулирането е използвано количественото определяне на експресията на два сигнални пептида TNF-α и IL-10 от антиген- 35 представящите клетки: диференцирани макрофаги от моноцитната човешка клетъчна линия U-937 (АТСС). Поддържането на клетъчната линия се извършва при 37°С и 5% СО2 на среда RPMI 1640 (АТСС 30-2001), съдържаща 10% фетален говежди серум (АТСС 30-2020), 4.5 g/1 40 глюкоза, 10 шМ HEPES, 1 тМ натриев пируват, 2 тМ L-глутамин, 1.5 g/Ι натриев бикарбонат, 100 U/ml пеницилин, 100 pg/ml стрептомицин. Поддържа се от 2 х 105 до 1 х 106 клетки на ml. При достигане на гъстота около 1 х 106 клетките се центрофугират и средата се обновява като клетъчното съдържание, отчитано с цитометьр, е 2 х 105. В 48-кладенчова платка за клетъчни линии 1 х 106 за ml клетки (5 х 105 за кладенец) се диференцират до макрофаги с помощта на 5 pg/ml РМА (форбол 12-пиристат-13-ацетат, 50 SIGMA), добавен към растежната среда, за 48 h в СО2 инкубатора. Диференцираните адхезирали макрофаги се промиват двукратно с PBS буфер (Dulbecco’s phosphate-buffered saline, GibcoBRL) и се инкубират с прясна среда без РМА за 48 h. След аспириране на средата към адхезиралите макрофаги се прибавят 0.5 ml за кладенче бактериални клетки с концентрация 1 х 106 за ml, суспендирани в растежната среда за макрофагите. Инкубират се за 24 h в СО2 инкубатора.
- Оценката на индукцията на сигналния пептид TNF-α от млечнокисела бактерия се извършва чрез сандвичова ELISA. След финала на инкубирането супернатантата се събира и се центрофугира за елиминиране на бактериалните и човешките клетки. 200 μΐ от получените супернатанти се използват за определяне на TNF-a чрез специален комплект на R&D Systems (Human TNF-a/TNFSFlA Immunoassay, Cat. # DTA00C), следвайки инструкциите на производителя. Накратко: имуноплатките са покрити с моноклонално антитяло срещу човешки TNF-a, което задържа специфично TNF-a и след промиване кладенците се третират с поликлонално антитяло срещу TNF-a, свързано с ензима хрямова пероксидаза; след промиване се добавят субстратите водороден пероксид и тетраметилбензидин и след провеждане на ензимната реакция на тъмно при стайна температура за 20 min следва стопиране на реакцията с 2N сярна киселина и измерване абсорбцията при 450 nm. За изчисляване концентрацията на TNF-a се използват стандарти и построена стандартна крива.
- Оценката на индукцията на сигналния пептид IL-6 от млечнокисела бактерия става
66608 Bl чрез сандвичова ELISA. Принципът на детекцията е аналогичен на гореописания. Използва се аналитичен ELISA комплект и количествената оценка се извършва според инструкцията на производителя.
- Оценката на индукцията на сигналния пептид IL-10 от млечнокисела бактерия е чрез сандвичова ELISA. Използва се аналитичен ELISA комплект и количествената оценка се извършва според инструкцията на производителя.
Оценката на петте цитокина TGF-бета, IL-8, IL-6, IL-10 и TNF-α за всеки един от изолираните щамове е извършена трикратно. В Таблица 4 са дадени осреднените резултати за индукция на петте цитокина. Щамът L. gasseri 7/12, който притежава умерена адхезия, е най-сполучливият като антиинфламаторен щам от изследваните.
Той притежава добро съотношение между IL10 и TNF-α, значима редукция на IL-8, и TGF-β и липса на значима индукция на IL-6. Проинфламаторният цитокин IL-8 се синтезира от епителни клетки. За оценката му са използвани клетъчните линии Сасо-2 и НТ-29. Увеличеното ниво на IL-8 може да доведе до увеличаване активността на неутрофилните клетки и оттам до възпалителни проблеми в дебелото черво. Откриването на щамове, способни да понижават нивото на IL-8 е от особена важност при създаването на бактериални препарати за профилактика на инфламаторните заболявания на интестиналния тракт и щамът L. gasseri 7/12 е ценен в това отношение. Резултатите от стимулацията на епителни клетки с L. gasseri 7/12 са представени в Таблица 5.
Таблица 4.
| Щам | IL-10 ng/ml | TNF-α ng/ml | TGF-β ng/ml | IL-6 ng/ml |
| контрола (U-937) | 0.10 | 0.2 | 0.88 | 27.2 |
| L. gasseri 7/12 | 2.3 | 0.7 | 0.82 | 28.7 |
Таблица 5.
| Щам | IL-8 ng/ml | TGF-β ng/ml |
| контрола (НТ-29) | 8.7 | 0.37 |
| L. gasseri 7/12 | 6.2 | 0.30 |
• Определяне на способността за редукция на холестерола
- Хидролизираща жлъчните соли активност (BSH) 40
Щамовете се култивират при оптималните условия в бульонни среди, както е дадено погоре, но в бульоните се добавят двете най-важни жлъчни соли: натриев таврохолат (ТСА) и натриев глюкохолат (GCA). Концентрацията на солите е 1 тМ и се добавят чрез микрофилтри- 45 ране след стерилизация на бульона. Инокулумът е 1%, а времето на инкубиране 24 h. Неинокулиран бульон се използва като контрола. BSH активността се измерва като деконюгираните наномолове ТСА и GCA за 1 min. Определянето е течнохроматографско (HPLC). Използваната колона е Ultrasphere ODS column, 80 angstrom, cm, 3 pm диаметър на зрънцата от пълнежа. Използваната конфигурация е SHIMADZU с UV детектор при 210 nm. Свободните и конюгираните жлъчни киселини се детектират при градиентен обратно-фазов режим. Солвент А е 65% метанол в 0.03 М натриев ацетат, при pH 4.3, нагласено с фосфорна киселина. Солвент В е метанол с HPLC качество. Елуентната програма е изократна стъпка за 8 min при 15% елуент В и после линеен градиент до 85% за 17 min. Следва изократна стъпка от 5 min при 85%. Инжектираното количество е 10 μΐ. Стойностите за BSH активността са изразени в микромоловете холинова киселина (СА) освободени от 1010 клетки за минута и 24 h инкубационно време.
- Директна редукция на холестерола Щамовете се инокулират с концентрация 1 %
66608 Bl в съответните среди за 24 h, като в бульонните среди се съдържат 0.3% Oxgal и 100 pg на ml водоразтворим холестерол (холестерол PEG 600, SIGMA). След инкубирането клетките се утаяват чрез центрофугиране и 0.5 ml от супернатантата се третира с 4 ml 2М метанолна КОН при нагряване за 20 min при 80°С. Следва екстракция с 5 ml хексан и 4 ml от хексановия слой се прехвърля в епруветки и се изпарява с азотен поток при 60°С. Сухият остатък се разтваря в 0.5 ml изопропанол и съдържащото се количество холестерол се определя е аналитичен комплект на Boeringer Manhaim. Определя се степента на редукция на холестерола на база на неинокулирани контролни 15 среди.
Изследвани са две основни активности, свързани с редуциране нивото на холестерола директното понижаване нивото на холестерола и индиректното редуциране нивото на серумния холестерол като следствие на деконюгиращата активност спрямо жлъчните соли (BSH). При директното елиминиране на холестерола, дължащо се най-вече на адсорбция върху компоненти от клетъчната стена на микроорганизмите, се измерва остатъчния холестерол както е дадено в методичната част. Измерването на концентрацията на холестерола се извършва с помощта на ензимен тест. Измерванията са извършени трикратно като резултатите са осреднени. В Таблица 6 са представени резултатите от директната антихолестеролна активност, изразени в процент на редукция на холестерола.
Таблица 6.
| Щам | % понижаване на холестерола |
| L. gasseri 7/12 | 36.2 |
BSH деконюгазната активност влияе индиректно върху нивото на серумния холестерол. Чрез хидролиза на жлъчните соли от щамове с BSH активност деконюгираните жлъчни киселини се отвеждат към изхода на интестиналния тракт. Поради това, че жлъчните соли се рециклират в организма, при редукция на тяхната 35 концентрация в черния дроб част от холестеро ла се ориентира към производство на жлъчни киселини и после жлъчни соли (конюгати на жлъчните киселини с аминокиселините таурин и глицин). При всичко това се очаква нивото на серумния холестерол да се понижи. На Таблица 7 са дадени резултатите от BSH активността на L. gasseri 7/12 след трикратно изпитване и осредняваме на резултатите.
Таблица 7.
| Щам | % деконюгиране на жлъчни соли |
| L. gasseri 7/12 | 60.1 |
Функционални свойства на щама L. helveticus Al, №8721 в НБПМКК • Определяне на способността за освобожда- ^5 ване на биоактивни АСЕ-инхибиторни пептиди
- АСЕ-инхибираща активност
Пречистените щамове с инокулум от 0.1 % се инкубират за 18 h в 9% обезмаслено мляко при 37°С. След нагласяне на pH на 4.3 с помощта на 50 50% млечна киселина пробите се центрофугират (5000 g, 10 min). Супернатантата се дозира на обратно-фазов патрон и промива с вода. Следва елуиране с помощта на 60% ацетонитрил в 0.1 % трифлуороцетна киселина. Следва изпарение и реконституиране на получения извлек. Той или негови разреждания се подлагат на анализ за инхибиране на АСЕ.
Приготвя се общ пептиден извлек. Ензимната реакция се провежда по конвенционалния
66608 Bl тест, но се използват различни разреждания на пептидните извлеци, като обемът им е 20 μΐ. Ензимният разтвор е 40 μΐ с активност 0.1 U/ml. Субстратът хипурил-хистидил-левцин е разтворен в боратен буфер с pH 8.3 и е с обем 190 μΐ. Крайната концентрация на субстрата е 6 mM, а на натриевия хлорид 300 шМ. Реакцията протече при 37°С за 30 min. Стопирането е със 100 μΐ 4n НС1, а екстракцията на освободената хипурова киселина се извърши с 1 ml етилацетат. След изпаряване на екстрагента, остатъкът се разтваря с 1 ml вода и се спектрофотометрира при 228 nm. Процентът на инхибиране на АСЕ ензима се отчита по формулата:
В-А в-с където А е абсорбцията по горната реакция,
С е абсорбцията без ензим, В е абсорбцията без участието на пептидни извлеци.
Построени са графики, като на абсцисата са нанесени микролитрите пептиден извлек - 20,10, 5; на ординатата - процентът на инхибиране. Силата на инхибиращия ефект се отчита графично като обемът пептиден извлек, предизвикващ 50% инхибиране на АСЕ ензима. Колкото по-малък е този обем, толкова по-силен АСЕ инхибитор е съответният продукт. В Таблица 8 са дадени важни пептидазни активности на щама L. helveticus Al, които до голяма степен са в основата на способността на този щам да освобождава биоактивни пептиди. В таблица 9 е посочена АСЕинхибираща активност на L. helveticus Al в % инхибиране на АСЕ, закръглени до цяло число.
Таблица 8.
| ЩАМ | Aminopep. N (PepN) | Xprolyl. | Glu. aminopep. | Pro. iminopep. | Oiigopept. | Endopept. | Protease |
| (PepX) | (PepA) | (PIP) | |||||
| L. helveticus Al | 690 | 405 | 3 | 14 | 7 | 2 | 10 |
Таблица 9.
| Щам | %ACEинхибиране |
| L. helveticus Al | 88% |
За L. helveticus Al е построена графика (фигура 5), на която е определен инхибиращият ефект на разреждания 1/2 и 1/4 от изследваните супернатанти. Основна цел е да се детектира силата на анти-АСЕ ефекта при разреждане на пробите. На абсцисата са нанесени микролитрите използвана супернатанта при опита, а на ординатата - процента на инхибиране на АСЕ. 45
Получените резултати показват, че щамът L. helveticus Al притежава силен анти-АСЕ ефект.
- Определяне секвенцията на АСЕ-инхибиращите пептиди от щама L. helveticus Al
Приготвяне на концентрирани пептидни екстракти $0
Получените от предната част супернатанти за всеки от щамовете се подлагат на центрофужна ултрафилтрация през специални ултрафилтрационни патрони с молекулна маса на отсичане 5000 Da. Нискомолекулните хидрофобни и средно-хидрофобни пептиди, сред които обикновено се търсят анти-АСЕ представители, се концентрират на обратно-фазови патрони. Поконкретно, след ултрафилтрацията към пробите се добавя трифлуорооцетна киселина до 0.1% и сместа се прекарва през патроните. Пептидите се задържат. След промиване с 0.1 % TFA следва елуиране на нискомолекулните пептиди с 60% ацетонитрил в 0.1% TFA. След изпаряване пептидите се ресуспендират в 10% ацетонитрил в 0.1% TFA и се дозират на препаративна обратно10
66608 Bl фазова HPLC колона Nucleosil Cl 8. Течно-хроматографската установка e SHIMADZU, екипирана с две помпи, модул за HPLC колоната с поддържане на определена температура, абсорбционен детектор и фракционен колектор. $
За всички концентрати се измерва антиАСЕ активността, за да се удостовери нейното присъствие.
Грубо фракциониране на пептидните концен- । θ трати след хроматографско разделяне.
Инжектираните проби в HPLC колоната, както е посочено в предната част, се подлагат на градиентно обратно-фазово фракциониране. Градиентът на ацетонитрил е от 0% до 80% в 0.1 % 15 TFA. Пептидите се детектират при дължина на вълната от 214 nm. С помощта на фракционния колектор се улавят фракции от по 1 ml. След края на грубото фракциониране тези фракции се изпаряват на вакуум-центрофуга и се ресуспендират в 0.1% TFA. Изпитва се анти-АСЕ активността на фракциите с цел да се отберат тези фракции, които притежават такава активност. Хроматограма, изобразяваща грубото фракциониране на 25 пептиден концентрат от щам L. helveticus А1 е показана на фигура 6.
Рефракциониране на избраните фракции за колекциониране на пречистени пептиди след високоефективна обратно-фазова хроматография.
Методично финото фракциониране се осъществява на същия принцип като грубото - обратно-фазов, но тук градиентът е по-полегат. 35 Градиентните условия за отбраните фракции от щама L. helveticus Al са 25-35% ацетонитрил. Използваната колона е полупрепаративна Nucleodur Sphinx.
На фигура 7 е изобразена хроматограма на фините обратно-фазови рефракционирания 4θ на предварително избраните груби пептидни фракции за щам L. helveticus Al. С удебелената линия е маркирана активната анти-АСЕ фракция след прилагане на ензимния тест за инхибиране на АСЕ. Последната стъпка за пречистване на избраните пептидни фракции е пречистването през йонообменна HPLC колона. Колоната е силно кисела катионобменна колона с бензенсулфонатни йонактивни групи в литиева форма. Елуирането се осъществява чрез pH градиент в цитратен буфер при pH от 3.0 до 9.0.
На фигура 8 е изобразена хроматограма на йонобменното пречистване за предварително избраната активна анти-АСЕ фракция на щама L.helveticus А1. С удебелената линия е маркиран единичният пептид с анти-АСЕ активност.
Секвениране на пептидите
Принципът на секвениране, който се използва, е класическата схема на ръчно секвениране с фенилизотиоцианат: начална дериватизация с фенилизотиоцианат на амино-края на пептида; отцепване на дериватизираната N-крайна аминокиселина (АК) с помощта на 100% трифлуорооцетна киселина (TFA); разделяне чрез екстракция на дериватизираната N-крайна аминокиселина от останалия пептид; конверсия на Ν-крайна аминокиселина до фенилтиохидантионно производно чрез третиране с 40% (TFA); HPLC анализ на съответната РТН-аминокиселина; следващ цикъл за новата Ν-крайна аминокиселина. В случая на малките хидрофобни пептиди, стъпката на разделяне чрез екстракция на дериватизираната Ν-крайна АК от остатъчния пептид е невъзможна. Затова се извършва предварително фиксиране на С-края на пептида към ариламин-PVDF мембрана. По този начин пептидът може да се секвенира до последната С-крайна аминокиселина откъм Ν-края. Фиксирането на пептида откъм СООН края става след активирането на СООН края чрез третиране с EDC (етил-диметиламинопропил карбодиимид и последващо реагиране на активираните карбокси групи с ариламинната молекула от мембраната. В Таблица 10 е представена секвенцията на антиАСЕ пептида, освободен от щама L. helveticus А1.
Таблица 10.
| Щам | Анти-АСЕ активност % | Пептидна секвенция |
| L. helveticus Al | 78.0 | Ala-Leu-Pro-Met |
и
66608 Bl
Пояснение на приложените фигури
Фигура 1. Пулсово-електрофоретичен щамово-специфичен ДНК профил на щама L. plantarum F12 след хидролиза с ензима Xhol. и импулси 1 s - 12 s за 24 h при 5 V/cm. Молекулен маркер - λ-DNA Hindlll (0.1-200 kbp). ДНК фрагменти в kbp: 183.9; 166.1; 125.1; 91.2; 87.3; 80.4; 74.5; 57.8; 54.8; 48.8; 43.2; 33.4; 31.4; 28.2; 24.3; 20.2; 16.1; 8.9.
Фигура 2. Пулсово-електрофоретичен щамово-специфичен ДНК профил на щама L. gasseri 7/12 след хидролиза с ензима Apal. и импулси 2 s - 28 s за 24 h при 5 V/cm. Молекулен маркер - λ-Ladder DNA (50-1000 kbp). ДНК фрагменти в kbp: 265.0; 198.1; 172.4; 152.8; 122.9; 108.6; 82.4; 66.6; 40.7.
Фигура 3. Пулсово-електрофоретичен щамово-специфичен ДНК профил на щама L.helveticus Al след хидролиза с ензима Smal. и импулси 5 s - 30 s за 26 h при 5.2 V/cm. Молекулни маркери - λ-Ladder DNA (50-1000 kbp) и λ-DNA Hindlll (0.1-200 kbp). ДНК фрагменти в kbp: 289.2; 272.1; 254.4; 161.0; 139.3; 126.2; 108.4; 98.1; 82.0; 71.2; 55.1; 52.4; 49.6; 41.9; 35.5; 29.3; 23.0.
Фигура 4. Адхезия на щама L. plantarum F12 към епителни клетки Сасо-2.
Фигура 5. Диаграма на АСЕ-инхибиращ ефект на L. helveticus Al. На абсцисата - μΐ пептиден извлек, на ординатата - % АСЕ-инхибиране.
Фигура 6. Грубо фракциониране на пептиден концентрат от щам L. helveticus А1.
Фигура 7. Фино обратно-фазово пречистване на пептидната фракция от предварителното фракциониране с най-висока анти-АСЕ активност за щама L. helveticus Al.
Фигура 8. Йонообменно пречистване на активната фракция от предшестващия цикъл на пречистване за щама L. helveticus Al.
Примери за изпълнение на изобретението
Полибактериалният препарат съдържа лиофилизирани щамове Lactobacillus gasseri 7/12, № 8720 в НБПМКК, Lactobacillus plantarum F12, № 8722 в НБПМКК и Lactobacillus helveticus Al, № 8721 в НБПМКК. Трите щама се култивират поотделно в лабораторни ферментори от 5 1 за натрупване на биомаса в среда от хидроли зирано с алкална протеаза мляко с добавка на 0.2% дрождев автолизат за хранителни цели (Springer Biotec), като посевното количество е 1%, a pH се поддържа на 5.7 с натриева основа. Инкубирането е до началото на стационарната фаза. С трите култури, съдържащи набогатена биомаса от около 109 за Lactobacillus plantarum Fl2 и Lactobacillus helveticus Al, и 2x108 за Lactobacillus gasseri 7/12, се инокулира промишлен ферментор в среда от хидролизирано с алкална протеаза мляко с добавка на 0.2% дрождев автолизат за хранителни цели (Springer Biotec), като посевното количество е 2%. pH се поддържа на 5.7 с натриева основа. Получената смес от биомаса от трите пробиотични щама се дозира в промишлен лиофилизатор. Сублимационното сушене протича при температура -28 до -29°С. Финалното загряване е до 30°С. Остатъчното влагосъдържание е 4%. Сместа се пакетира в инертна (азотна) атмосфера. Вземат се специални мерки за редуциране на смъртността на щамовете по време на технологичния цикъл. Оптимизирани са параметрите на ферментация, лиофилизация и пакетаж. Преживяемостта и активността на щамовете се контролира с помощта на съвременни молекулярно-биологични техники (real-time PCR). Наличието и силата на пробиотичните ефекти се контролират с прецизни техники Високоефективна течна хроматография (хидролиза на жлъчни соли, анализи на биоактивни пептиди), Газова хроматография (определяне на холестерол-редуциращата активност), Realtime PCR (определяне на виталитета на щамовете и техния брой), Спектрални съоръжения (определяне на антиоксидантни активности, детекция на имуномодулиращи активности).
Готовият лиофилизиран полибактериален препарат съдържа живи бактерии (брой живи клетки на 1 g) от трите пробиотични щама най-малко: 109 Lactobacillus gasseri 7/12, 2x10’ Lactobacillus helveticus Al, 9xl09 Lactobacillus plantarum Fl2.
В Таблица 11 са дадени резултатите от определянето на специфични антиоксидантни активности като: обща антиоксидантна активност, обща антирадикалова активност, супероксиддисмутазна активност (SOD) на готовия препарат.
66608 Bl
Таблица 11.
| Вид активност | Интактни клетки | Безклетъчен екстракт |
| Обща антиоксидантна активност ORAC, trolox eq./109 клетки | 1105 ±68 п=3 | 1320 ±95 п=3 |
| Обща антирадикалова активност, А517(празна) - А517(проба) | 0.12 ±0.02 п=3 | 0.22 ± 0.03 п=3 |
| Супероксиддисмутазна активност | 21.2 ±2.0 U/mg протеин п=3 |
В Таблица 12 и Таблица 13 са дадени ци- 15 клетъчни линии U-937 и НТ-29 от 108/ml бактетокиновите нива след индукция на човешките риални клетки от препарата.
Таблица 12.
| Продукт | IL-10 ng/ml | TNF-a ng/ml | TGF-β ng/ml | IL-6 ng/ml |
| Контрола (U-937) | 0.11 | 0.22 | 0.90 | 25.1 |
| Полибактериален препарат | 1.1 | 0.24 | 0.87 | 18.1 |
Таблица 13.
| Продукт | IL-8 ng/ml | TGF-β ng/ml |
| Контрола (НТ-29) | 8.9 | 0.40 |
| Полибактериален препарат | 7.7 | 0.35 |
В Таблица 14 са дадени антихолестеролните активности на полибактериалния препарат 35 по отношение способността за хидролиза на жлъчните соли и % понижение на холестерола.
Таблица 14.
| Продукт | % понижаване на холестерола | % деконюгиране на жлъчни соли |
| Полибактериален препарат | 21.0 | 42.4 |
В Таблица 15 е дадена АСЕ-инхибиращата активност на полибактериалния препарат.
Таблица 15.
| Продукт | % АСЕинхибиране |
| Полибактериален препарат | 65% |
66608 Bl
Приложение на изобретението
Полибактериалният препарат е лиофилизирана хранителна добавка с уникална комбинация от пробиотични свойства, подходяща за профилактика на някои социално-значими заболявания като: повишеното кръвно налягане, артериосклерозата и хиперхолестероломията, отслабения имунитет и възпалителните процеси в интестиналния тракт, нарушения баланс в интестиналната микрофлора. Производството на този препарат изисква съвместно използване на модерни промишлени съоръжения и високотехнологични научно-изследователски апаратури. Принципът на производство на продукта е описан в примера.
Claims (17)
1. Полибактериален препарат, характеризиращ се с това, че включва комбинация от щамове Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК № 8720, Lactobacillus plantarum Fl2, НБПМКК № 8722 и Lactobacillus helveticus Al, НБПМКК № 8721, и съдържа живи клетки в cfu/g, както следва за: Lactobacillus gasseri 7/12 най-малко 109, Lactobacillus helveticus Al най-малко 2x109 и Lactobacillus plantarum F12 най-малко 9x109.
2. Щам Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК № 8720, c щамово-специфичен ДНК профил със следните фрагменти в kbp: 265.0; 198.1; 172.4; 152.8; 122.9; 108.6; 82.4; 66.6; 40.7, продуцент на бактериален препарат.
3. Щам Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК № 8720, съгласно претенция 2, с хипохолестеролемична активност и противовъзпалителна имуномодулираща активност.
4. Щам Lactobacillus plantarum F12, НБПМКК № 8722, с щамово-специфичен ДНК профил със следните фрагменти в kbp: 183.9; 166.1; 125.1; 91.2; 87.3; 80.4; 74.5; 57.8; 54.8; 48.8; 43.2; 33.4; 31.4; 28.2; 24.3; 20.2; 16.1; 8.9, продуцент на бактериален препарат.
5. Щам Lactobacillus plantarum Fl2, НБПМКК № 8722, съгласно претенция 4, притежаващ антиоксидантна активност.
6. Щам Lactobacillus helveticus A1, НБПМКК № 8721 с щамово-специфичен ДНК профил със следните фрагменти в kbp: 289.2; 272.1; 254.4; 161.0; 139.3; 126.2; 108.4; 98.1; 82.0; 71.2; 55.1; 52.4; 49.6; 41.9; 35.5; 29.3; 23.0, продуцент на бактериален препарат.
7. Щам Lactobacillus helveticus Al, НБПМКК № 8721, съгласно претенция 6, притежаващ антихипертонична активност с инхибираща активност спрямо ангиотенсин-конвертиращия ензим (АСЕ).
8. Полибактериален препарат, съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че е под формата на лиофилизат или течна култура.
9. Метод за получаване на полибактериален препарат съгласно претенция 1, включващ култивиране на Lactobacillus gasseri 7/12 (НБПМКК № 8720), Lactobacillus plantarum F12 (НБПМКК № 8722) и Lactobacillus helveticus A1 (НБПМКК № 8721) поотделно в среда, състояща се от хидролизирано с алкална протеаза мляко с добавка на 0.2% дрождев автолизат за хранителни цели, като посевното количество е 1 %, a pH се поддържа на 5.7 с натриева основа и последващо култивиране на комбинацията от трите монокултури, съдържаща набогатена биомаса от Lactobacillus plantarum Fl2, Lactobacillus helveticus Al и Lactobacillus gasseri 7/12 в среда от хидролизирано с алкална протеаза мляко с добавка на 0.2% дрождев автолизат за хранителни цели, като посевното количество е 2%, a pH се поддържа на 5.7 с натриева основа.
10. Използване на полибактериален препарат, съгласно претенция 1, като пробиотик.
11. Използване на полибактериален препарат, съгласно претенция 10, като хранителна добавка и/или включен под каквато и да е форма в храни за хора и животни.
12. Използване на полибактериален препарат, съгласно претенция 10, за получаване на стартерни култури за производство на храни.
13. Използване на полибактериален препарат, съгласно претенция 10, в състава на функционални продукти и фармацевтични препарати, предназначени за повлияване на здравословното състояние на хора и животни.
14. Полибактериален препарат, съгласно претенция 1, за използване за подобряване на имунитета и за профилактика на възпалителните процеси в интестиналния тракт, за нормализиране на нивото на холестерола, за превенция срещу натрупването на свободни радикали и за инхибиране на ангиотензин-конвертиращия ензим.
15. Бактериален препарат, продуциран от щам Lactobacillus gasseri 7/12, НБПМКК № 8720, съгласно претенция 2, за използване за
66608 Bl подобряване на имунитета на организма и за профилактика на възпалителните процеси в интестиналния тракт и за нормализиране на нивото на холестерола.
16. Бактериален препарат, продуциран от щам Lactobacillus plantarum Fl2, НБПМКК № 8722, съгласно претенция 4, за използване за превенция срещу натрупването на свободни радикали в организма.
17. Бактериален препарат, продуциран от щам Lactobacillus helveticus Al, НБПМКК № 8721, съгласно претенция 6, за използване за инхибиране на ангиотензин-конвертиращия ензим.
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG110932A BG66608B1 (bg) | 2011-05-04 | 2011-05-04 | Полибактериален пробиотичен препарат |
| CA2834704A CA2834704C (en) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | Polybacterial preparation and method for obtaining thereof |
| US14/114,851 US20140072544A1 (en) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | Polybacterial preparation with health benefits: antioxidant effect, reduction of cholesterol concentration, anti-inflammatory immunomodulating effect and release of bioactive peptides inhibiting angiotensin-converting enzyme |
| RU2017126392A RU2672571C1 (ru) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | Штамм lactobacillus gasseri и бактериальный препарат с гипохолестеринемической и противовоспалительной иммуномодулирующей активностями |
| RU2013153578A RU2627651C2 (ru) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | Полибактериальный препарат с преимуществами для здоровья: c антиоксидантным эффектом, снижением концентрации холестерина, противовоспалительным иммуномодулирующим эффектом и высвобождением биоактивных пептидов, ингибирующих ангиотензин-конвертирующий фермент |
| EP12727221.9A EP2704733B1 (en) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | POLYBACTERIAL PREPARATION and method for obtaining thereof |
| CN201280033199.7A CN103796660B (zh) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | 多细菌制备物及获得其的方法 |
| KR1020137032046A KR101950187B1 (ko) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | 건강상의 이익을 갖는 다중 박테리아 제조물: 항산화 효과, 콜레스테롤 농도의 감소, 항염증 면역조절 효과 및 안지오텐신-전환 효소를 저해하는 생물활성 펩타이드의 방출 |
| PCT/BG2012/000014 WO2012149615A2 (en) | 2011-05-04 | 2012-05-03 | Polybacterial preparation with health benefits: antioxidant effect, reduction of cholesterol concentration, anti-inflammatory immunomodulating effect and release of bioactive peptides inhibiting angiotensin-converting enzyme |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG110932A BG66608B1 (bg) | 2011-05-04 | 2011-05-04 | Полибактериален пробиотичен препарат |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG110932A BG110932A (bg) | 2014-01-31 |
| BG66608B1 true BG66608B1 (bg) | 2017-10-16 |
Family
ID=46275601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG110932A BG66608B1 (bg) | 2011-05-04 | 2011-05-04 | Полибактериален пробиотичен препарат |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20140072544A1 (bg) |
| EP (1) | EP2704733B1 (bg) |
| KR (1) | KR101950187B1 (bg) |
| CN (1) | CN103796660B (bg) |
| BG (1) | BG66608B1 (bg) |
| CA (1) | CA2834704C (bg) |
| RU (2) | RU2627651C2 (bg) |
| WO (1) | WO2012149615A2 (bg) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109456909A (zh) * | 2018-08-17 | 2019-03-12 | 甘肃普诺贝康生物科技有限责任公司 | 一株具有降低胆固醇能力的瑞士乳杆菌 |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2966074A1 (en) * | 2013-11-05 | 2016-05-12 | Optibiotix Limited | Prebiotic composition and its method of production |
| KR101740583B1 (ko) | 2014-02-17 | 2017-05-29 | 경희대학교 산학협력단 | 비만 억제 효능을 갖는 신규 유산균 및 이의 용도 |
| KR101490657B1 (ko) * | 2014-06-23 | 2015-02-05 | 서울우유협동조합 | 유단백질 마이얄반응물의 발효물을 함유하는 심혈관질환 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN105018379B (zh) * | 2015-07-16 | 2018-12-28 | 山东凤凰生物有限公司 | 一株具高抗氧化活性的植物乳杆菌及其应用 |
| GB201519327D0 (en) | 2015-11-02 | 2015-12-16 | Optibiotix Health Ltd | Composition |
| WO2018112740A1 (zh) * | 2016-12-20 | 2018-06-28 | 深圳华大基因研究院 | 一种加氏乳杆菌及其培养方法和应用 |
| KR102005617B1 (ko) * | 2017-02-08 | 2019-07-31 | 부경대학교 산학협력단 | 항콜레스테롤 활성이 우수한 신규 락토바실러스 플란타룸 f.m.b #31 균주 및 이의 용도 |
| CN108546725B (zh) * | 2018-01-23 | 2021-08-27 | 北京联合大学 | 一种利用马血制备的生物活性肽及其制备方法 |
| AU2019274351B2 (en) * | 2018-05-23 | 2022-04-07 | Kobiolabs, Inc. | Lactobacillus gasseri KBL697 strain and use thereof |
| CN109504636B (zh) * | 2018-12-27 | 2022-04-12 | 内蒙古农业大学 | 一种植物乳杆菌p12及其用途 |
| TWI707689B (zh) * | 2019-06-11 | 2020-10-21 | 大江生醫股份有限公司 | 免疫調節之益生菌株及其用途 |
| CN113755357A (zh) * | 2020-06-04 | 2021-12-07 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 一种乳杆菌制剂及其用途 |
| CN112759635B (zh) * | 2021-01-21 | 2022-05-31 | 浙江辉肽生命健康科技有限公司 | 具有氨基酸结构vakvtggaaskl的生物活性肽及其制备方法和应用 |
| CN114847347B (zh) * | 2022-06-09 | 2023-11-03 | 陕西科技大学 | 一种含活性益生菌的发酵牛乳及其制备方法 |
| CN117402794B (zh) * | 2023-12-12 | 2024-02-27 | 四川厌氧生物科技有限责任公司 | 一种加氏乳杆菌及其应用 |
| CN118006485B (zh) * | 2024-01-23 | 2024-07-12 | 朗恒科技集团有限公司 | 一株植物乳杆菌st10-7及其应用 |
| CN117986337B (zh) * | 2024-02-02 | 2024-08-16 | 杭州御寿生物科技有限公司 | 一种提高免疫力的益生菌组合物以及在治疗疾病中的应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9501056D0 (sv) * | 1995-03-23 | 1995-03-23 | Probi Ab | Epithelial adherent lactobacilli |
| CN1304313A (zh) * | 1998-06-05 | 2001-07-18 | 若素制药株式会社 | 含乳酸菌的组合物、药物和食物 |
| KR100436355B1 (ko) * | 2001-08-14 | 2004-06-18 | 박정호 | 항산화물질, 옥타코사놀 및 베타글루칸을 함유한 발효음료및 그의 제조방법 |
| US20030091540A1 (en) * | 2001-10-16 | 2003-05-15 | Nawaz Ahmad | Compositions and methods for delivering antibacterial, antifungal and antiviral ointments to the oral, nasal or vaginal cavity |
| AU2003260281B2 (en) * | 2002-08-09 | 2007-11-29 | Chr. Hansen A/S | Process for preparing peptides with anti-hypertensive properties |
| JP2006075083A (ja) * | 2004-09-09 | 2006-03-23 | Toyo Shinyaku:Kk | ゴーヤから得られる発酵物 |
| WO2006045347A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-04 | Medinova Ag | Lactobacillus helveticus strain useful in the treatment or prevention of infections caused by urogenital pathogens |
| WO2006097949A1 (en) * | 2005-03-16 | 2006-09-21 | Actial Farmacêutica, Lda. | Mixture of at least 6 species of lactic acid bacteria and/or bifidobacteria in the manufacture of sourdough |
| EE05340B1 (et) * | 2008-05-13 | 2010-08-16 | O� Tervisliku Piima Biotehnoloogiate Arenduskeskus | Isoleeritud mikroorganismi tvi Lactobacillus plantarum Tensia DSM 21380 ja selle kasutamine antimikroobse ning verer?hku alandava probiootikuna ning ravimi valmistamiseks ning toiduaine realiseerimisaja pikendamiseks ja toiduaines kontamineerivatemi |
| US20120247993A1 (en) * | 2008-11-14 | 2012-10-04 | Unistraw Patent Holdings Limited | Probiotic Compositions, Methods and Apparatus for Their Administration |
| EP2485744A4 (en) * | 2009-10-09 | 2014-01-22 | Prothera Inc | COMPOSITIONS AND METHODS COMPRISING THE PEDIOCOCCUS TO REDUCE AT LEAST ONE SYMPTOM ASSOCIATED WITH DEVELOPMENT-INVASIVE DISORDER IN A PERSON IN WHICH A DEVELOPMENT-INVASIVE DISORDER HAS BEEN DIAGNOSED |
-
2011
- 2011-05-04 BG BG110932A patent/BG66608B1/bg unknown
-
2012
- 2012-05-03 EP EP12727221.9A patent/EP2704733B1/en active Active
- 2012-05-03 WO PCT/BG2012/000014 patent/WO2012149615A2/en active Application Filing
- 2012-05-03 RU RU2013153578A patent/RU2627651C2/ru active
- 2012-05-03 KR KR1020137032046A patent/KR101950187B1/ko active IP Right Grant
- 2012-05-03 US US14/114,851 patent/US20140072544A1/en not_active Abandoned
- 2012-05-03 CA CA2834704A patent/CA2834704C/en active Active
- 2012-05-03 CN CN201280033199.7A patent/CN103796660B/zh active Active
- 2012-05-03 RU RU2017126392A patent/RU2672571C1/ru active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109456909A (zh) * | 2018-08-17 | 2019-03-12 | 甘肃普诺贝康生物科技有限责任公司 | 一株具有降低胆固醇能力的瑞士乳杆菌 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013153578A (ru) | 2015-06-10 |
| US20140072544A1 (en) | 2014-03-13 |
| RU2627651C2 (ru) | 2017-08-09 |
| EP2704733B1 (en) | 2018-06-20 |
| KR101950187B1 (ko) | 2019-02-20 |
| BG110932A (bg) | 2014-01-31 |
| CA2834704A1 (en) | 2012-11-08 |
| WO2012149615A2 (en) | 2012-11-08 |
| RU2672571C1 (ru) | 2018-11-16 |
| WO2012149615A3 (en) | 2013-11-14 |
| CN103796660B (zh) | 2018-10-02 |
| CN103796660A (zh) | 2014-05-14 |
| EP2704733A2 (en) | 2014-03-12 |
| CA2834704C (en) | 2020-02-11 |
| KR20140040731A (ko) | 2014-04-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101950187B1 (ko) | 건강상의 이익을 갖는 다중 박테리아 제조물: 항산화 효과, 콜레스테롤 농도의 감소, 항염증 면역조절 효과 및 안지오텐신-전환 효소를 저해하는 생물활성 펩타이드의 방출 | |
| Elfahri et al. | Potential of novel Lactobacillus helveticus strains and their cell wall bound proteases to release physiologically active peptides from milk proteins | |
| US7186545B2 (en) | Probiotic strains from Lactobacillus salivarius and antimicrobial agents obtained therefrom | |
| Pan et al. | Antihypertensive peptides from skimmed milk hydrolysate digested by cell-free extract of Lactobacillus helveticus JCM1004 | |
| Singh et al. | Comparative evaluation of selected strains of lactobacilli for the development of antioxidant activity in milk | |
| SK284755B6 (sk) | Baktérie Lactobacillus helveticus produkujúce kyselinu mliečnu s vysokou produktivitou tripeptidu, fermentovaný mliečny výrobok a spôsob jeho výroby | |
| Stuknyte et al. | Potential immunomodulatory activity of bovine casein hydrolysates produced after digestion with proteinases of lactic acid bacteria | |
| WO2006025643A1 (en) | Lactobacillus plantarum with body-fat reducing activity and the foods containing them | |
| Guo et al. | Screening for cholesterol-lowering probiotic based on deoxycholic acid removal pathway and studying its functional mechanisms in vitro | |
| WO2006019222A1 (en) | Lactobacillus rhamnosus with body-fat reducing activity and the foods containing them | |
| CN110809411A (zh) | 包含通过涂敷丝素蛋白来使肠道内定殖性得以提高的乳酸菌的组合物 | |
| Kliche et al. | Screening for proteolytically active lactic acid bacteria and bioactivity of peptide hydrolysates obtained with selected strains | |
| Regazzo et al. | Les laits fermentés par Enterococcus faecalis TH563 et Lactobacillus delbrueckii bulgaricus LA2 montrent différents degrés d’activités anti-ACE et immunomodulatrice | |
| Mushtaq et al. | Phenotypic and probiotic characterization of isolated LAB from Himalayan cheese (Kradi/Kalari) and effect of simulated gastrointestinal digestion on its bioactivity | |
| US7662371B2 (en) | Composition for lowering the concentration of intestinal pathogenic peptides | |
| KR100910657B1 (ko) | 신규한 락토바실러스 브츠네리 및 이의 용도 | |
| CN113151364A (zh) | 一种从鸡肠源唾液乳杆菌分离的抑菌活性物质及应用 | |
| Ohn et al. | The potential probiotic and functional health effects of lactic acid bacteria isolated from traditional korean fermented foods | |
| KR100434610B1 (ko) | 락토바실러스 애시도필러스 30sc | |
| Abubakr et al. | Antioxidant activity of milk fermented with Lactobacillus plantarum and Leuconostoc mesenteroides isolated from non-dairy sources | |
| KR100222419B1 (ko) | Ace 저해 펩타이드를 생산하는 락토바실러스 카제이 hy418 | |
| WO2023173181A1 (en) | Bifidobacterium longum ssp. longum strain and a bifidobacterial preparation having hypolipidemic, anti-inflammatory immunomodulating and insulin resistance decreasing effects | |
| CN116675733A (zh) | 一种益生菌活性肽、益生菌活性肽组合物及其在制备具有增强免疫力的产品中的应用 | |
| Acharya | Production of functional food, Fruit ravioli with antihypertensive peptides | |
| CN116444605A (zh) | 一种活性肽、活性肽组合物及其在制备具有抗衰老作用的产品中的应用 |