KR102135071B1 - 피레나리아 부이사넨시스 추출물의 용도 - Google Patents

피레나리아 부이사넨시스 추출물의 용도 Download PDF

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Abstract

유효량의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함하는, 피부 미백, 피부 상태 개선 및/또는 피부 보호용 조성물이 제공된다. 유효량의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함하는, 피부 질환 치료, 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 신경퇴행성 질환 예방 및/또는 신경퇴행성 질환 치료용 약학 조성물이 또한 제공된다.

Description

피레나리아 부이사넨시스 추출물의 용도 {USES OF PYRENARIA BUISANENSIS EXTRACT}
본 출원은 2017년 10월 23일자로 미국 특허청에 제출된 미국 가출원 제62/575,900호 및 2018년 9월 19일자로 대만 특허청에 제출된 대만 특허 출원 제107132950호를 우선권으로 주장하며, 이들의 개시 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
본 발명은 피부 미백, 피부 상태 개선, 피부 보호 및/또는 피부 질환 치료에 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 사용을 포함하는, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 신경퇴행성 질환 예방 및/또는 신경퇴행성 질환 치료에서 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 용도에 관한 것이다.
외부 환경으로부터 유해한 요인에 대해 신체를 보호하는 제1 방어선인 피부는 수분 유지, 보온 및 감각에 중요한 역할을 한다. 자외선 (UV), 방사선 및 환경 오염과 같은 요인뿐만 아니라 나이 증가 모두 피부의 함수율을 감소시키고 콜라겐 및 엘라스틴의 손실을 유발하여 주름, 피부 처짐, 피부 둔감 및 거칠어짐과 같은 피부 노화 현상을 일으킬 수 있고, 피부 세포의 DNA를 파괴하여 피부 세포사를 가속화시키거나 피부 병변을 일으켜 피부암을 유발할 수 있다.
요즈음, 사람들은 피부 미백, 피부 보습 및 노화 방지 문제에 더 많은 관심을 기울이고 있으며, 그 때문에 콜라겐의 경구 투여, 히알루론산의 경피 투여 및 보툴리누스 주사와 같이 보다 많은 접근 방법과 다양한 미용 시판품이 있다. 그러나, 콜라겐 및 히알루론산의 분자 구조는 너무 커서 경구 또는 경피 투여에 의해 인체 내로 효과적으로 흡수되지 않고 따라서 콜라겐 및/또는 히알루론산의 보충 효과는 제한적이다. 보툴리누스 주사는 피부의 잔주름을 감소시킬 수 있지만 그 효과는 일시적이어서 정기적인 주사가 요구된다. 또한 보툴리눔 주사는 비용이 많이 들고 주사 부위 주변의 부종이나 울혈, 눈꺼풀 또는 눈썹 처짐, 두통, 앨러지, 얼굴 비대칭 및 부자연스러운 표정과 같은 부작용을 유발할 수 있다.
연구에 의해 SOD2, CAT, MSH2, Tgm1, Keratin14, FLG, GBA 및/또는 HAS3과 같은 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것이 세포의 항산화능 향상, 세포 내 손상된 DNA 및 단백질 회복, 세포 구조 유지, 히알루론산의 합성 증가, 및/또는 피부의 수분 함량 증가에 유익하다는 것이 밝혀졌다. 본 발명의 발명자들은 천연 물질을 이용하여 조사한 결과, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 SOD2, CAT, MSH2, Tgm1, Keratin14, FLG, GBAHAS3 유전자의 발현을 증가시키고, 피부의 항산화능을 향상시키며, 피부의 멜라닌을 감소시키고, 피부 처짐을 감소시키고, 피부의 수분 함량을 증가시킴으로써 피부 보습, 피부 미백, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소, 피부 노화 방지, 건조 피부 완화, 히알루론산 생성 촉진, 피부 건강 유지에 도움, 광손상 방지 및/또는 피부 조직 회복에 유용할 뿐만 아니라 상기 유전자와 관련된 질환 또는 생리 기능을 예방, 치료 또는 조절하는 데에도 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.
본 발명의 목적은 피부 보습, 피부 미백, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소, 피부 노화 방지, 건조 피부 완화, 히알루론산 생성 촉진 및 피부 건강 유지에 도움을 주는 것 중 적어도 하나에서 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 용도를 제공하는 것이다. 바람직하게는, 추출물은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)를 극성 용매로 추출함으로써 제공되며, 극성 용매는 물, C1-C4 알콜 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 추출물은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎 추출물이다. 바람직하게는, 추출물은 경피 또는 경구 경로를 통해 섭취된다.
본 발명의 다른 목적은 광손상 방지, 피부 조직 회복, 피부 질환 예방 및 피부 질환 치료 중 적어도 하나를 위한 약학 조성물의 제조에서 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 용도를 제공하는 것이다. 바람직하게는, 피부 질환은 건조한 피부와 관련된 질환이다. 바람직하게는, 약학 조성물은 경피 투여, 경구 투여 또는 피하 투여를 위한 형태로 제공된다.
본 발명의 또 다른 목적은 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 신경퇴행성 질환 예방 및 신경퇴행성 질환 치료 중 적어도 하나를 위한 약학 조성물의 제조에서 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 용도를 제공하는 것이다. 바람직하게는, 심혈관 질환은 뇌졸중이고, 신경퇴행성 질환은 알츠하이머병이다. 바람직하게는, 약학 조성물은 경피 투여, 경구 투여 또는 피하 투여를 위한 형태로 제공된다.
본 발명의 또 다른 목적은 SOD2 유전자, CAT 유전자, MSH2 유전자, Tgm1 유전자, Keratin14 유전자, FLG 유전자, GBA 유전자 및 HAS3 유전자 중 적어도 하나의 발현을 증가시키기 위한 약학 조성물의 제조에서 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 용도를 제공하는 것이다. 바람직하게는, 약학 조성물은 경피 투여, 경구 투여 또는 피하 투여를 위한 형태로 제공된다.
본 발명의 또 다른 목적은 피부 미백, 피부 상태 개선 및/또는 피부 보호를 위한 약학 조성물을 제공하는 것이다. 조성물은 유효량의 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함한다. 바람직하게는, 조성물은 피부 보습, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소 및/또는 건조 피부 완화를 위한 것이다. 바람직하게는, 조성물은 피부 노화 방지, 피부 건강 유지에 도움, 광손상 방지, 피부 조직 회복 및/또는 피부 질환 예방을 위한 것이다. 바람직하게는, 조성물은 스킨 케어 제품 조성물 또는 식품 조성물이고, 스킨 케어 제품 조성물은 경피 투여 또는 경구 투여를 위한 형태로 제공된다.
본 발명의 또 다른 목적은 피부 질환 치료, 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 신경퇴행성 질환 예방 및/또는 신경퇴행성 질환 치료를 위한 약학 조성물을 제공하는 것이다. 약학 조성물은 유효량의 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함한다. 바람직하게는, 피부 질환은 건조한 피부와 관련된 질환이고, 심혈관 질환은 뇌졸중이며, 신경퇴행성 질환은 알츠하이머병이다. 바람직하게는, 약학 조성물은 경피 투여, 경구 투여 또는 피하 투여를 위한 형태로 제공된다.
본 발명의 또 다른 목적은 SOD2 유전자, CAT 유전자, MSH2 유전자, Tgm1 유전자, Keratin14 유전자, FLG 유전자, GBA 유전자 및/또는 HAS3 유전자의 발현을 증가시키기 위한 약학 조성물을 제공하는 것이다. 약학 조성물은 유효량의 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함한다. 바람직하게는, 약학 조성물은 경피 투여, 경구 투여 또는 피하 투여를 위한 형태로 제공된다.
본 발명의 또 다른 목적은 유효량의 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 피부 미백, 피부 상태 개선, 피부 보호 및 피부 질환 치료 중 적어도 하나를 위한 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 방법에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 상술된 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 또는 약학 조성물로서 대상에게 투여될 수 있다. 바람직하게는, 상기 방법은 피부 보습, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소 및/또는 건조 피부 완화를 위한 것이다. 바람직하게는, 상기 방법은 피부 노화 방지, 피부 건강 유지에 도움, 광손상 방지, 피부 조직 회복 및/또는 피부 질환 예방을 위한 것이다. 바람직하게는, 피부 질환은 건조한 피부와 관련된 질환이다.
본 발명의 또 다른 목적은 유효량의 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 신경퇴행성 질환 예방 및 신경퇴행성 질환 치료 중 적어도 하나를 위한 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 방법에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 상술된 약학 조성물로서 대상에게 투여될 수 있다. 바람직하게는, 심혈관 질환은 뇌졸중이고, 신경퇴행성 질환은 알츠하이머병이다.
본 발명의 또 다른 목적은 유효량의 상기 언급된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, SOD2 유전자, CAT 유전자, MSH2 유전자, Tgm1 유전자, Keratin14 유전자, FLG 유전자, GBA 유전자 및/또는 HAS3 유전자의 발현을 증가시키기 위한 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 방법에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 상술된 약학 조성물로서 대상에게 투여될 수 있다.
본 발명을 위해 구현된 상세한 기술 및 바람직한 실시양태는 당업자들이 청구된 발명의 특징을 잘 이해할 수 있도록 첨부된 도면을 참조하여 다음 단락들에서 설명될 것이다.
도 1은 세포 내 ROS 함량을 감소시키는데 대한 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 효과를 나타내는 것으로서, 대조군의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하지 않은 배지에서 1시간 동안 배양하였고, "H2O2 군"의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하지 않은 배지에서 1시간 동안 배양시킨 후 H2O2로 1시간 처리하였으며, "H2O2 + 추출물 (1) 군" 및 "H2O2 + 추출물 (2) 군"의 세포는 독립적으로 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (각각 1 mg/mL 및 2 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 1시간 동안 배양시킨 후 H2O2로 1시간 처리하였다;
도 2는 세포 내 SOD 활성을 증진시키는데 대한 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 효과를 나타내는 것으로서, 대조군의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하지 않은 배지에서 24시간 동안 배양하였고, "H2O2 군"의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하지 않은 배지에서 24시간 동안 배양시킨 후 H2O2로 6시간 처리하였으며, "H2O2 + 추출물 (1) 군" 및 "H2O2 + 추출물 (2) 군"의 세포는 독립적으로 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (각각 1 mg/mL 및 2 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 24시간 동안 배양시킨 후 H2O2로 6시간 처리하였다;
도 3, 4 및 5는 SOD2, CATMSH2 유전자의 발현을 증가시키는데 대한 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 효과를 나타내는 것으로서, 도 3은 각 군에서 세포의 SOD2 유전자의 발현 수준을 나타내고, 도 4는 각 군에서 세포의 CAT 유전자의 발현 수준을 나타내며, 도 5는 각 군에서 세포의 MSH2 유전자의 발현 수준을 나타내고, 여기서 대조군의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하지 않은 배지에서 6시간 동안 배양하였고, "UVA 군"의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하지 않은 배지에서 6시간 동안 배양시킨 후 UVA로 6시간 조사시켰으며, "추출물 (1) - 6시간 군 및 추출물 (1) - 24시간 군"의 세포는 독립적으로 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (1 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 각각 6시간 및 24시간 동안 배양시킨 후 UVA로 6시간 조사시켰으며, "추출물 (2) - 6시간 군 및 추출물 (2) - 24시간 군"의 세포는 독립적으로 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (2 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 각각 6시간 및 24시간 동안 배양시킨 후 UVA로 6시간 조사시켰다;
도 6, 7 및 8은 Tgm1, Keratin14, FLG, GBAHAS3 유전자의 발현을 증가시키는데 대한 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 효과를 나타내는 것으로서, 도 6은 각 군에서 세포의 Tgm1 유전자 및 Keratin14 유전자의 발현 수준을 나타내고, 도 7은 각 군에서 세포의 FLG 유전자의 발현 수준을 나타내며, 도 8은 각 군에서 세포의 GBA 유전자 및 HAS3 유전자의 발현 수준을 나타내며, 여기서 대조군의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하지 않은 배지에서 6시간 동안 배양하였고, "추출물 군"의 세포는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 배지에서 각각 6시간 배양하였다;
도 9, 도 10 및 도 11은 각각 피부의 멜라닌 감소, 피부 처짐 감소 및 피부의 수분 함량 증가에 대한 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 효과를 나타낸다.
이하, 본 발명의 일부 실시양태를 상세하게 설명할 것이다. 그러나, 본 발명은 본 발명의 사상을 벗어남이 없이 다양한 실시양태들로 구체화될 수 있으며, 명세서에 기술된 실시양태들로 한정되지 않아야 한다. 또한 본원에서 달리 언급하지 않는 한, 본 발명의 명세서 (특히 청구범위)에 기재된 "a", "an", "the" 등의 표현은 단수 형태 및 복수 형태 모두를 포함하도록 의도된다. 본 명세서에서 사용되는 "치료하다" 또는 "치료하는"이라는 용어는 대상이 완전히 회복될 때까지 대상을 치료하는 것으로 해석되어서는 안되며, 질환의 진행 또는 증상을 실질적으로 정상적인 상태로 유지하거나, 대상의 회복 속도를 증가시키거나, 질병의 특정 상태의 중증성을 경감시키거나, 또는 환자의 삶의 질을 향상시키는 것을 포함시켜야 한다. 본 명세서에서 "예방하다" 또는 "예방하는"이라는 용어는 질병의 특정 상태가 발생하는 것을 예방 또는 피하거나, 민감한 대상에서 무병을 유지하거나, 또는 민감한 대상이 질환을 견딜 수 있는 능력을 확립하는 것을 지칭한다. 본 명세서에서 기술된 "조절하다" 또는 "조절하는"이란 용어는 대상의 생리 기능을 정상 상태로 상향 조절 (유도, 자극 및 증강 포함) 또는 하향 조절 (억제 및 약화 포함)하는 것을 지칭한다. 본 명세서에서 기술된 "대상"이라는 용어는 인간 및 비인간 동물을 포함한 포유동물을 의미한다.
연구에 의해 SOD2 유전자 (수퍼옥시다아제 디스뮤타아제 생성 유전자) 및 CAT 유전자 (카탈라아제 생성 유전자)의 발현 수준 증가는 세포의 항산화능을 향상시키는데 유익한 것으로 밝혀졌다. SOD2 유전자 및/또는 CAT 유전자의 저발현 또는 결실이 피부 노화 및 심혈관 질환, 당뇨병 및 알츠하이머병의 발병과 관련이 있다고 또한 알려졌으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 ["Anti-oxidant gene expression imbalance, aging and Down syndrome. Life Sciences. 76: 1407-1426 (2005)," "Catalase Deficiency and Type 2 Diabetes. Diabetes Care. 31(12): e93 (2008)," "SOD2 deficiency promotes aging phenotypes in mouse skin. AGING. 4(2): 116-118 (2012)," "SOD2 in Mitochondrial Dysfunction and Neurodegeneration. Free Radic Biol Med. 62: 4-12 (2013)," 및 "Sunlight damage to cellular DNA: Focus on oxidatively Generated lesions. Free Radical Biology and Medicine. 107: 110-124 (2017)"]에서 찾아볼 수 있다. 따라서, SOD2 및/또는 CAT 유전자의 발현을 효과적으로 증가시킬 수 있다면 피부 노화 방지 (예: 피부 광노화 방지), 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 알츠하이머병 예방 및 알츠하이머병 치료 등의 효과를 기대할 수 있다.
연구에 의해 세포의 MSH2 유전자의 발현 수준이 증가하면 손상된 DNA 및 단백질의 복구에 유리한 것으로 또한 밝혀졌으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 ["DNA repair mechanisms in dividing and non-dividing cells. DNA repair (Amst). 12(8): 620-636 (2013)" 및 "Repairing Double-Strand DNA Breaks. Nature Education. 3(9): 26 (2010)"]에서 찾아볼 수 있다. 또한 MSH2 유전자의 저발현 또는 결실이 피부 노화와 관련이 있다고도 알려졌으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 ["Rejuvenation of Gene Expression Pattern of Aged Human Skin by Broadband Light Treatment: A Pilot Study. Journal of Investigative Dermatology. 133: 394-402 (2013)"]에서 찾아볼 수 있다. 따라서, MSH2 유전자의 발현을 효과적으로 증가시킬 수 있다면, 피부 노화의 효과를 기대할 수 있다.
Tgm1Keratin14 유전자의 발현 수준의 증가는 세포 구조의 유지에 유리하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 ["A keratin scaffold regulates epidermal barrier formation, mitochondrial lipid composition, and activity. J. Cell Biol. 211(5): 1057-1075 (2015)" 및 "Transglutaminase Function in Epidermis. J Invest Dermatol. 124(3): 481-492 (2005)"]에서 찾아볼 수 있다. Tgm1 및/또는 Keratin14 유전자의 저발현 또는 결실이 피부 노화 및 건조한 피부와 관련된 질환의 발생과 관련이 있다고도 또한 알려져 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 ["Mutations in the gene for transglutaminase 1 in autosomal recessive lamellar ichthyosis. Nat Genet. 9(3): 279-283 (1995)," "Transglutaminase Function in Epidermis. J Invest Dermatol. 124(3): 481-492 (2005)," "Novel Mutations of the Transglutaminase 1 Gene in Lamellar Ichthyosis. J Invest Dermatol. 117(8): 214-218 (2001)," 및 "Disorders of keratinisation: from rare to common Genetic diseases of skin and other epithelial tissues. Ulster Med J. 76 (2): 72-82 (2007)"]에서 찾아볼 수 있다. 따라서, Tgm1 및/또는 Keratin14 유전자의 발현을 효과적으로 증가시킬 수 있다면, 피부 건강 유지, 피부 보습, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소, 건조 피부 완화, 피부 노화 방지, 건조한 피부와 관련된 질환의 예방 및 건조한 피부와 관련된 질환 치료의 효과를 기대할 수 있다.
GBA, FLG HAS3 유전자의 발현 수준의 증가는 피부 장벽의 형성, 히알루론산 합성의 증가, 및 세포의 수분 함량 증가에 유리하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 ["Hyaluronan Synthase 3 Regulates Hyaluronan Synthesis in Cultured Human Keratinocytes. The Journal of Investigative Dermatology. 118: 43-48 (2002)," "Toll-like receptor 3 activation is required for normal skin barrier repair following UV damage. J Invest Dermatol. 135(2): 569-578 (2015)," "Expression of differential Genes involved in the maintenance of water balance in human skin by Piptadenia colubrina extract. J Cosmet Dermatol. 9(1): 35-43 (2010)," "New concept of the pathogenesis of atopic dermatitis: Interplay among the barrier, allergy, and pruritus as a trinity. J Dermatol Sci. 70(1): 3-11 (2013)," 및 "Filaggrin in the frontline: role in skin barrier function and disease. Journal of Cell Science. 122(9): 1285-1294 (2009)"]에서 찾아볼 수 있다. GBA, FLG 및/또는 HAS3 유전자의 저발현 또는 결실이 피부 노화 및 건조 피부와 관련이 있는 것으로 알려져 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 ["HAS3 underexpression as an indicator of poor prognosis in patients with urothelial carcinoma of the upper urinary tract and urinary bladder. Tumor Biol. 36(7): 5441-5450 (2015)," "Specifically Neuropathic Gaucher's Mutations Accelerate Cognitive Decline in Parkinson's. Ann Neurol. 80(5): 674-685 (2016)," "Filaggrin in the frontline: role in skin barrier function 및 disease. Journal of Cell Science. 122(9): 1285-1294 (2009)," 및 "The filaggrin story: novel insights into skin-barrier function and disease. Trends Mol Med. 14(1): 20-27 (2008)"]에서 찾아볼 수 있다. 따라서, GBA, FLG 및/또는 HAS3 유전자의 발현을 효과적으로 증가시킬 수 있다면, 피부 건강 유지에 도움, 피부 보습, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소, 피부 노화 방지 및/또는 건조 피부 완화의 효과를 기대할 수 있다.
피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)는 동백나무과 (Theaceae) 피레나리아 (Pyrenaria) 속에 속하는 대만 고유종의 식물이다. 본 발명의 발명자들은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 SOD2, CAT, MSH2, Tgm1, Keratin14, FLG, GBA, 및 HAS3 유전자의 발현을 효과적으로 증가시킬 수 있음을 발견하였다. 따라서, 본 발명은 피부 보습, 피부 미백, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소, 피부 노화 방지, 건조 피부 완화 및/또는 피부 건강 유지에 도움을 주는데 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 사용하고, 약학 조성물을 제조하는데 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 사용하고, 유효량의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함하는 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 또는 약학 조성물을 제공하고, 유효량의 상기 언급된 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 또는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 방법을 제공하는 것을 포함하는, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따라 제공되는 스킨 케어 제품 조성물은 피부 보습, 피부 미백, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소, 피부 노화 방지 및/또는 건조 피부 완화를 위한 것이다. 본 발명에 따라 제공되는 식품 조성물은 피부 건강의 유지를 돕기 위한 것이다. 본 발명에 따라 제공되는 약학 조성물은 광손상 방지, 피부 조직의 회복, 피부 질환 예방 및/또는 피부 질환 치료를 위한 것이다. 본 발명에 따라 제공되는 약학 조성물은 또한 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 신경퇴행성 질환 예방 및 신경퇴행성 질환 치료 중 적어도 하나를 위한 것이다. 예를 들어, 약학 조성물은 건조 피부와 관련된 질환 (예를 들어, 어린선)을 예방하고, 건조한 피부와 관련된 질환을 치료하고, 뇌졸중을 예방하고, 뇌졸중을 치료하고, 알츠하이머병을 예방하고/하거나, 알츠하이머병을 치료하기 위한 것이다. 또한, 본 발명에 따라 제공되는 약학 조성물 및 방법은 SOD2, CAT, MSH2, Tgm1, Keratin14, FLG, GBA, 및/또는 HAS3 유전자의 발현을 증가시키기 위한 것이다.
본 발명에 따라 채택된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎을 극성 용매로 추출하여 제공할 수 있으며, 여기서 극성 용매는 물, C1-C4 알콜 또는 이들의 조합물일 수 있다. 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 유래되는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 부분에는 특별한 제한이 없다. 또한, 본 발명에 따라 채택된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 전체 식물 또는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 뿌리, 줄기, 잎 및/또는 꽃을 추출함으로써 제공될 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 제조하는데 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎이 사용된다. 또한, 추출 단계에서 사용되는 용매의 양은 중요하지 않고, 일반적으로 추출될 물질을 고르게 분산시킬 수 있으면 된다. 예를 들어, 추출 단계에서, 추출 용매와 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎은 1:1 내지 20:1의 중량비 (추출 용매:피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎)로 사용될 수 있다. 본 발명의 일 실시양태에서, 추출은 추출 용매와 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎을 10:1의 중량비 (추출 용매:피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎)로 사용하여 수행하였다.
추출 단계에서, 추출은 채택된 추출 용매에 따라 적절한 시간 동안 수행될 수 있다. 예를 들어, 추출 용매가 물이고, 물과 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎의 중량비가 약 1:1 내지 20:1 (물:피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎)인 경우, 추출은 보통 0.5 내지 2시간 동안 수행된다. 또한, 추출 단계를 수행하기 전 또는 수행하는 동안, 가열, 냉각, 교반 및 초음파 처리와 같은 하나 이상의 다른 작업이 임의로 수행될 수 있거나, 또는 추출 단계를 수행하기 전에 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 물질을 파쇄하여 추출 효율을 더 높일 수 있다. 예를 들어, 추출은 75 ℃ 내지 95 ℃에서 수행될 수 있다. 본 발명의 일 실시양태에서, 추출은 85 ℃에서 0.5시간 동안 수행되었다.
본 발명에 따라 채택된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 추출로부터 직접 얻어지는 원액 추출물일 수 있고, 또한 액체 추출물의 사용을 용이하게 하기 위해 원액 추출물에 여과, 멸균, 농축 및 희석과 같은 하나 이상의 임의의 단계를 수행하여 수득된 생성물일 수 있다. 가능한 한 높은 추출 효율을 달성하기 위해, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 물질은 임의로 동일하거나 상이한 추출 용매로 반복적으로 추출될 수 있으며, 이렇게 수득된 액체 추출물은 액체 추출물을 제공하도록 결합된다. 예를 들어, 액체 추출물은 보존 동안 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물 내 활성 성분의 안정성을 유지하기 위해 진공 농축될 수 있다. 또한, 진공 농축 온도는 임의로 조정될 수도 있다. 예를 들어, 진공 농축은 45 내지 70 ℃에서 수행할 수 있다. 본 발명의 일 실시양태에서, 진공 농축은 55 ℃ 내지 65 ℃에서 수행되었다.
소정 목적(들)에 따라, 본 발명에 따라 제공되는 스킨 케어 제품 조성물은 전신 또는 국소적으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여될 수 있으며, 특별한 제한 없이 임의의 적합한 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 스킨 케어 제품 조성물은 외용 에멀젼, 크림, 겔 (예: 하이드로 겔) 또는 용액 (예: 에센스, 로션)의 형태로 제공될 수 있지만, 이로 제한되지는 않는다.
본 발명의 식품 조성물은 특별한 제한 없이 임의의 적합한 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 식품 조성물은 건강 식품 및 미용 음료의 형태와 같이, 먹거나 마시기에 적합한 형태로 제조될 수 있지만, 이로 제한되지는 않는다.
본 발명에 따라 제공되는 약학 조성물은 전신 또는 국소적으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여될 수 있으며, 경구 약물 전달 시스템, 경피 약물 전달 시스템, 주사 약물 전달 시스템 등과 같은 다양한 약물 전달 시스템 (DDS)에 의해 전달될 수 있다. 예를 들어, 생체이용률을 높이고, 약물 방출 속도를 조절하고, 병변을 정확하게 표적화하고, 부작용을 감소시키기 위해, 약학 조성물은 리포솜, 마이크로캡슐, 나노입자 또는 미세바늘에 의해 전달될 수 있지만, 이로만 제한되지 않는다.
소정 목적(들)에 따라, 본 발명의 약학 조성물은 특별한 제한 없이 임의의 적합한 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 약학 조성물은 경구 또는 비경구 (예컨대 경피 투여 또는 피하 주사)에 의해 이를 필요로 하는 대상에게 투여될 수 있지만 이에만 제한되는 것은 아니다. 형태 및 목적(들)에 따라, 약학 조성물을 제공하기 위해 적절한 담체가 선택되고 사용될 수 있다. 담체의 예로는 부형제, 희석제, 보조제, 안정제, 흡수 촉진제, 붕해제, 굴수성제, 유화제, 항산화제, 접착제, 결합제, 점착제, 분산제, 현탁제, 윤활제, 흡습제 등을 들 수 있다.
경구 투여를 위한 형태로서, 약학 조성물은 활성 성분 (즉, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물)의 목적하는 효과에 부정적인 영향을 미치지 않을 임의의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 적합한 담체의 예로는 물, 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 또는 그의 유사체, 오일 (예: 올리브유, 피마자유, 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 배아유), 폴리에틸렌 글리콜, 전분, 카올리나이트, 벤토나이트, 시트르산나트륨, 젤라틴, 한천, 카복시메틸 셀룰로오스, 아라비아고무, 알긴산 및 그의 염, 글리세릴 모노스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 및 이들의 조합물을 들 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 약학 조성물은 임의의 적합한 방법에 의해 정제 (예: 당 코팅 정제), 환제, 캡슐, 과립제, 가루약, 유동 엑스제, 용액, 시럽, 현탁액, 팅크의 형태와 같은 경구 투여를 위한 임의의 적합한 형태로 제공될 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
경피 투여를 위한 형태로서, 본 발명에 따라 제공되는 약학 조성물은 또한 활성 성분 (즉, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물)의 목적하는 효과에 부정적으로 영향을 미치지 않을 임의의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 적합한 담체의 예로는 물, 광유, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 옥사이드, 액체 페트롤라튬, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60을 들 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 약학 조성물은 임의의 적합한 방법에 의해 경피 투여를 위한 임의의 적합한 형태, 예컨대 외용 패치, 에멀젼, 크림, 겔 (예: 하이드로겔), 페이스트 (예: 분산 페이스트, 연고), 스프레이, 용액 (예: 현탁액) 등의 형태로 제공될 수 있지만, 이들로만 제한되지는 않는다.
피하 투여에 적합한 주사 또는 드립제의 형태로서, 약학 조성물은 등장성 용액, 염-완충 염수 (예: 인산염 완충 염수 또는 시트르산염 완충 염수), 굴수성제, 유화제, 5% 당 용액 및 기타 담체를 포함할 수 있다. 대안적으로, 약학 조성물은 예비-주사 고형물로서 제조될 수 있다. 예비-주사 고형물은 다른 용액 또는 현탁액에 가용성인 형태 또는 유화가능한 형태로 제공될 수 있다. 예비-주사 고형물을 필요로 하는 대상에게 투여하기 전에 다른 용액 또는 현탁액에 용해시키거나 또는 유화시킴으로써 원하는 주사제가 제공된다.
임의로, 본 발명에 따라 제공되는 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물은 적당량의 첨가제, 예컨대 향미제, 토너 또는 식품 조성물이나 약학 조성물의 기호성 및 시지각적 인지를 향상시키기 위한 착색제, 및/또는 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 또는 약학 조성물의 안정성 및 저장성을 개선시키기 위한 완충제, 보존제, 방부제, 항균제 또는 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 스킨 케어 제품 조성물 및 약학 조성물은 스킨 케어 제품 조성물 및 약학 조성물의 효과를 추가로 증진시키거나, 또는 제공된 제제의 적용 유연성 및 적응성을 증가시키기 위해 하나 이상의 다른 활성 성분(들)을 추가로 포함할 수 있거나, 하나 이상의 다른 활성 성분(들)을 포함하는 약제와 결합하여 사용할 수 있는데, 단 이들 다른 활성 성분은 본 발명의 활성 성분 (즉, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물)의 목적하는 효과에 불리한 영향을 미치지 않아야 한다.
본 발명에 따라 제공되는 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물은 대상의 요구, 연령, 체중 및 건강 상태뿐 아니라 목적(들)에 따라 다양한 투여 빈도, 예를 들어 1일 1회, 1일 수회 또는 수 일에 한번씩 등등으로 투여될 수 있다. 또한, 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물 중 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물의 농도는 실제 적용 요건에 따라 조정될 수 있다.
본 발명에 따라 제공되는, 피부 보습, 피부 미백, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소, 피부 노화 방지, 건조 피부 완화 및/또는 피부 건강 유지를 돕는데 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 사용하는데 있어, 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 스킨 케어 제품 조성물 또는 식품 조성물로서 제공될 수 있다. 스킨 케어 제품 조성물 및 식품 조성물의 투여 유형, 투여 경로, 투여 형태, 투여 빈도 및 사용은 모두 상기 설명에 따른다.
상술한 바와 같이, 본 발명은 또한 유효량의 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 피부 미백, 피부 상태 개선, 피부 보호 및 피부 질환 치료의 적어도 하나를 위한 방법을 제공하며, 여기서, "이를 필요로 하는 대상"이란 용어는 피부 상태의 개선 및/또는 피부 상태가 악화되는 것을 방지하기 위한 요구를 갖는 대상, 피부 병변 현상을 갖는 대상, 피부 질환을 앓고 있는 대상 및/또는 피부 질환에 걸릴 위험이 높은 대상을 지칭한다. 예를 들어, 대상은 피부 각질 비대, 피부 주름 발생, 피부 흑점 발생, 피부 칙칙함, 피부 건조 및 박리, 피부 처짐, 및/또는 피부 노화가 있는 대상자, 옥외에서 장시간 작업하는 대상자, 건조한 피부와 관련된 질환을 앓고 있는 대상자 및/또는 건조한 피부와 관련된 질환의 위험이 높은 대상자이나 이에만 제한되지는 않는다. 상기 방법에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 상술한 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 또는 약학 조성물로서 대상에게 투여될 수 있다. 스킨 케어 제품 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물의 투여 유형, 투여 경로, 투여 형태, 투여 빈도 및 사용은 모두 상기 설명에 따른다.
본 발명은 유효량의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 심혈관 질환 치료, 심혈관 질환 예방, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 신경퇴행성 질환 예방 및 신경퇴행성 질환 치료의 적어도 하나를 위한 방법을 제공하며, 여기서, "이를 필요로 하는 대상"이란 용어는 심혈관 질환을 앓고 있는 대상자, 당뇨병을 앓고 있는 대상자, 신경퇴행성 질환을 앓고 있는 대상자, 심혈관 질환의 위험이 높은 대상자, 당뇨병의 위험이 높은 대상자 및/또는 신경퇴행성 질환의 위험이 높은 대상자를 지칭한다. 상기 방법에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 상술한 약학 조성물로서 대상에게 투여될 수 있다. 약학 조성물의 투여 유형, 투여 경로, 투여 형태, 투여 빈도 및 사용은 모두 상기 설명에 따른다.
본 발명은 유효량의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, SOD2 유전자, CAT 유전자, MSH2 유전자, Tgm1 유전자, Keratin14 유전자, FLG 유전자, GBA 유전자 및/또는 HAS3 유전자의 발현을 증가시키기 위한 방법을 제공하며, 여기서, "이를 필요로 하는 대상"이란 용어는 SOD2 유전자, CAT 유전자, MSH2 유전자, Tgm1 유전자, Keratin14 유전자, FLG 유전자, GBA 유전자 및/또는 HAS3 유전자가 결실, 돌연변이 또는 저발현된 대상을 지칭한다. 상기 방법에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물은 상술한 약학 조성물로서 이를 필요로 하는 대상에게 투여될 수 있다. 이 조성물의 투여 유형, 투여 경로, 투여 형태, 투여 빈도 및 사용은 모두 상기 설명에 따른다.
이하, 구체적인 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설명할 것이다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위해 제공되는 것일 뿐 본 발명의 범위가 이로 한정되지는 않는다. 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에서 제시될 것이다.
실시예
[ 제조예 ]: 피레나리아 부이사넨시스 ( Pyrenaria buisanensis ) 추출물의 제조
피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 식물은 Dr. Cecilia Koo Botanic Conservation Center (KBCC; 대만)에서 공급받았고, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 제공하기 위해 다음 단계를 거쳤다:
I. 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎을 역삼투 (RO) 수로 세척하고, 임의로 상기 세척 단계를 반복할 수 있다;
II. 세척한 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎을 물과 혼합하여 (피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎 대 물의 중량비 = 1:10) 혼합물을 제공한 후, 혼합물을 85 ℃에서 0.5시간 동안 추출하여 액체 추출물을 제공한다;
III. 액체 추출물을 실온으로 냉각시킨 후, 400 메쉬 필터로 여과하여 여액을 제공한다;
IV. 여액을 진공하에 55 ℃ 내지 65 ℃에서 농축하여 농축액 추출물 (즉, 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물)을 제공한다.
실시예 1: 피부의 항산화능 향상에 미치는 피레나리아 부이사넨시스 ( Pyrenaria buisanensis ) 추출물의 효과
피부 세포 내 과량의 활성 산소 종 (ROS)이 세포 조직 파괴 및 DNA 손상을 일으켜 피부 노화를 유발할 수 있다는 것이 알려졌다. 피부 세포에 대한 ROS의 독성을 피하기 위해, 유기체는 수퍼옥시다아제 디스뮤타아제 (SOD)와 같은 효소를 분비하여 신체 내 과도한 ROS를 분해할 것이다. 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 피부 세포에서 ROS 생성 억제 및 피부 세포에서 SOD 활성 증진에 미치는 영향을 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.
(1-1) ROS의 함유량 조사
인간 피부 섬유아세포 (CCD-966SK, ATCC로부터 구입)를 MEM 배지 (최소 필수 배지: Gibco 사로부터 구입, 제품 번호: 61100-061)에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 인간 피부 섬유아세포를 4개의 군으로 나누고 독립적으로 하기 처리를 하였다:
(1) 대조군: 세포를 MEM 배지에서 1시간 동안 배양하였다.
(2) "H2O2 군": 세포를 MEM 배지에서 1시간 동안 배양한 후, 배지에 H2O2를 (1 mM의 최종 농도로) 첨가하여 세포를 1시간 동안 연속 처리하였다.
(3) "H2O2 + 추출물 (2) 군": 세포를, [제조예]에 의해 제공된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (2 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 1시간 동안 배양한 후, 배지에 H2O2를 (1 mM의 최종 농도로) 첨가하여 세포를 1시간 동안 연속 처리하였다.
(4) "H2O2 + 추출물 (1) 군": 세포를, [제조예]에 의해 제공된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (1 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 1시간 동안 배양한 후, 배지에 H2O2를 (1 mM의 최종 농도로) 첨가하여 세포를 1시간 동안 연속 처리하였다.
그 후, 각 군의 세포를 DCFH-DA 염료로 15분간 처리한 후, 여기 파장 450 nm 내지 490 nm, 방출 파장 510 nm 내지 550 nm에서 유세포 분석에 의해 형광 강도를 검출하였다. ROS는 DCFH-DA (형광 없음)를 DCF (형광 있음)로 전환할 수 있기 때문에, 형광 강도는 세포 내 ROS의 함량을 나타낼 수 있으며 형광 강도가 높을수록 세포에서 ROS의 함량이 높다는 것을 나타낸다. 마지막으로, 데이터를 스튜던트 t-검정으로 분석하고, 대조군의 결과를 기초로 하여 다른 각 군의 세포에서의 ROS의 함량을 계산하였다. 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 대조군과 비교하여, "H2O2 군"에서 ROS 함량이 유의하게 증가하였으며, 이는 "H2O2 군"이 피부 세포에서 높은 과산화물 함량의 상황을 모방할 수 있음을 나타낸다. 그러나, "H2O2 군"에 비해, "H2O2 + 추출물 (2) 군" 및 "H2O2 + 추출물 (1) 군"에서 ROS 함량은 모두 유의하게 감소하였다. 이러한 결과는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 피부 세포에서 ROS의 함량을 효과적으로 감소시키고 따라서 항산화에 효과적일 수 있음을 나타낸다.
(1-2) SOD의 활성 조사
인간 피부 섬유아세포를 MEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 인간 피부 섬유아세포를 4개의 군으로 나누고 독립적으로 하기 처리를 하였다:
(1) 대조군: 세포를 MEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다.
(2) "H2O2 군": 세포를 MEM 배지에서 24시간 동안 배양한 후, 배지에 H2O2를 (1 mM의 최종 농도로) 첨가하여 세포를 6시간 동안 연속 처리하였다.
(3) "H2O2 + 추출물 (2) 군": 세포를, [제조예]에 의해 제공된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (2 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 24시간 동안 배양한 후, 배지에 H2O2를 (1 mM의 최종 농도로) 첨가하여 세포를 6시간 동안 연속 처리하였다.
(4) "H2O2 + 추출물 (1) 군": 세포를, [제조예]에 의해 제공된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (1 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 24시간 동안 배양한 후, 배지에 H2O2를 (1 mM의 최종 농도로) 첨가하여 세포를 6시간 동안 연속 처리하였다.
그 후, 효소 반응의 원리 및 비색법을 이용하여 각 군의 세포를 검출하였다. 구체적으로, 각 군의 세포를 SOD 활성 분석 키트 (Cayman 사로부터 구입, 제품 번호: 706002)로 다음과 같이 처리하였다:
(a) 배지를 제거하고, 세포를 인산염 완충 염수 (PBS)로 세척한 후, 트립신 (Thermo 사에서 구입, 제품 번호: 15400-054)을 배양 접시에 첨가하여 세포를 3분간 처리한 다음, 원심분리관에 플레이트로부터 분리된 세포를 수집하고, 400 g에서 5분간 원심분리하였다; 그 후, 관으로부터 상등액을 제거하여 PBS로 세포를 세척한 후, 400 g에서 5분간 원심분리한 다음, 다시 관으로부터 상등액을 제거하였다;
(b) 관에 50 μL의 세포 추출액을 가하고, 4 ℃에서 30분간 12000 g으로 원심분리한 후, 불용물을 제거하여 세포 액체 추출물을 제공하였다;
(c) 단계 (b)에서 얻은 세포 액체 추출물 10 μL와 테트라졸륨 염 용액 200 μL 및 크산틴 옥시다아제 용액 20 μL를 균일하게 혼합하여 30분간 반응시켰다.
(d) 450 nm의 파장에서 효소 결합 면역흡착 분석 (ELISA) 판독기 (Epoch 사로부터 구입, 제품 번호: 1212171)를 사용하여 단계 (c) 생성물의 흡광도를 측정하였다;
(e) 단계 (c)에서 사용된 세포 액체 추출물을 SOD 표준으로 대체하고, 단계 (c) 내지 (d)의 조작을 반복한 다음, 수득된 생성물의 흡광도 (이하, "SOD 표준 흡광도"라 함)를 기록하였다.
그 후, 단계 (e)에서 얻어진 SOD 표준 흡광도를 기초로 하여 SOD 활성 분석 키트 (Cayman 사로부터 구입, 제품 번호: 706002)의 사용 설명서에 제공된 식에 따라 각 군에서의 세포의 SOD 활성을 계산하였다. 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, "H2O2 군"에서 세포의 SOD 활성은 극히 낮았다. 그러나, H2O2에 의해 유도된 산화 스트레스 하에서, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물로 처리된 군 ("H2O2 + 추출물 (2) 군" 및 "H2O2 + 추출물 (1) 군"을 포함함)에서 세포의 SOD의 활성은 유의하게 증가하였다. 이러한 결과는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 피부 세포에서 SOD의 활성을 효과적으로 증진시키고 따라서 과산화물의 분해에 유리하며 항산화에 효과적일 수 있음을 나타낸다.
실시예 2: SOD2 , CAT MSH2 유전자의 발현 증가에 미치는 피레나리아 부이사넨시스 ( Pyrenaria buisanensis ) 추출물의 효과
인간 피부 섬유아세포를 MEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 인간 피부 섬유아세포를 6개의 군으로 나누고 독립적으로 하기 처리를 하였다:
(1) 대조군: 세포를 MEM 배지에서 6시간 동안 배양하였다.
(2) "UVA 군": 세포를 MEM 배지에서 6시간 동안 배양한 후, UVA (15 J/cm2)로 6시간 동안 조사하였다.
(3) "추출물 (1) - 6시간 군" 및 "추출물 (1) - 24시간 군": 세포를 독립적으로, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (1 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 각각 6시간 및 24시간 동안 배양한 후, UVA (15 J/cm2)로 6시간 동안 조사하였다.
(4) "추출물 (2) - 6시간 군" 및 "추출물 (2) - 24시간 군": 세포를 독립적으로, 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (2 mg/mL의 최종 농도로) 배지에서 각각 6시간 및 24시간 동안 배양한 후, UVA (15 J/cm2)로 6시간 동안 조사하였다.
그 후, 각 군의 세포를 수확하고, RNA 추출 키트 (Geneaid 사로부터 구입)로 RNA를 추출하였다. 이어, 제공된 RNA를 역전사효소 (SuperScript® III Reverse Transcriptase; Invitrogen 사로부터 구입)에 의해 cDNA로 전사시켰다. 이어서, 제공된 cDNA를 ABI Step One Plus 시스템 및 KAPA SYBR FAST qPCR 키트를 사용하여 정량적 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)을 행하여 SOD2, CATMSH2 유전자의 발현 수준을 결정하였다. 마지막으로, 데이터를 스튜던트 t-검정으로 분석하였고, 대조군의 결과를 기본으로 사용하여 (즉, 대조군의 유전자 발현 수준을 1-배로 설정하였다) 다른 군의 상대적 유전자 발현 수준을 계산하였다. 결과를 도 3 내지 5에 나타내었다.
도 3 내지 도 5에 나타낸 바와 같이, "UVA 군"과 비교하여, "추출물 (1) - 6시간 군", "추출물 (1) - 24시간 군", "추출물 (2) - 6시간 군" 및 "추출물 (2) - 24시간 군"에서 세포의 SOD2MSH2 유전자 발현 수준이 모두 유의하게 증가하였다. "추출물 (2) - 6시간 군" 및 "추출물 (2) - 24시간 군"에서 세포의 CAT 유전자 발현 수준이 또한 유의하게 증가하였다. 이러한 결과는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 SOD2, CATMSH2 유전자의 발현 수준을 효과적으로 증가시키고, 따라서 세포의 항산화능을 향상시키고 손상된 DNA 및 단백질의 회복을 도와줌으로써 피부 노화, 광손상 방지 및 피부 조직 회복의 효과를 제공할 수 있고, 또한 심혈관 질환 예방, 심혈관 질환 치료, 당뇨병 예방, 당뇨병 치료, 알츠하이머병 예방 및/또는 알츠하이머병 치료를 위해 사용될 수 있음을 제시한다.
실시예 3: FLG , HAS3 , GBA , Tgm1 Keratin14 유전자의 발현 증가에 미치는 피레나리아 부이사넨시스 ( Pyrenaria buisanensis ) 추출물의 효과
인간 일차 표피 각화세포 (HPEK-50, CELLnTEC 사로부터 구입, 제품 번호: PR3D-HPEK-50)를 Keratinocyte-SFM 배지 (Thermo 사로부터 구입, 제품 번호: 17005042)에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 인간 일차 표피 각화세포를 2개의 군으로 나누어 독립적으로 하기 처리를 하였다:
(1) 대조군: 세포를 Keratinocyte-SFM 배지에서 6시간 동안 배양하였다.
(2) "추출물 군": 세포를, [제조예]에 의해 제공된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 외부에서 첨가한 (0.03125 mg/mL의 최종 농도로) Keratinocyte-SFM 배지에서 6시간 동안 배양하였다.
그 후, 각 군의 세포를 수확하고, RNA 추출 키트 (Geneaid 사로부터 구입)로 RNA를 추출하였다. 이어, 제공된 RNA를 역전사효소 (SuperScript® III Reverse Transcriptase; Invitrogen 사로부터 구입)에 의해 cDNA로 전사시켰다. 이어서, 제공된 cDNA를 ABI Step One Plus 시스템 및 KAPA SYBR FAST qPCR 키트를 사용하여 정량적 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)을 행하여 FLG, HAS3, GBA, Tgm1Keratin14 유전자의 발현 수준을 결정하였다. 마지막으로, 데이터를 SCORE 법으로 분석하였고, 대조군의 결과를 기본으로 사용하여 (즉, 대조군의 유전자 발현 수준을 1-배로 설정하였다) 다른 군의 상대적 유전자 발현 수준을 계산하였다. 결과를 도 6 내지 8에 나타내었다.
도 6 내지 8에 나타낸 바와 같이, 대조군과 비교하여, "추출물 군"에서 세포의 Tgm1, Keratin14, FLG, GBA HAS3 유전자의 발현 수준이 모두 유의하게 증가하였다. 이러한 결과는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 Tgm1, Keratin14, FLG, GBA HAS3 유전자의 발현 수준을 효과적으로 증가시켜 세포 구조를 유지하고 피부 장벽 형성을 돕고, 히알루론산의 합성을 증가시키고, 세포의 수분 함량을 증가시킴으로써 피부 보습, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소 및/또는 건조 피부 완화 효과를 달성하기 위해 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 피부 노화 방지, 건조한 피부와 관련된 질환 예방 및/또는 건조한 피부와 관련된 질환을 치료하는 데에도 사용될 수 있음을 제시한다.
실시예 4: 인간 임상 시험
실험은 자기 제어 방식으로 수행되었다. 0주 (즉, 에센스의 총 중량에 기초하여 [제조예]에 의해 제공된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 1% 함유하는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 에센스의 적용 전)에, 10명의 지원자에게서 DermaLab® Combo 스킨 분석기와 수분 함량 측정 프로브를 사용하여 얼굴 피부의 수분 함량을 검출 및 기록하고, C+K 전자 Mexameter® MX18 분석기와 홍반 측정 프로브를 사용하여 얼굴 피부의 멜라닌을 검출 및 기록하고, C+K 전자 MPA580 피부 탄력 분석기를 사용하여 피부 처짐 수준을 검출 및 기록하였다. 그 후, 각 지원자의 얼굴 반쪽에 (에센스의 총 중량에 기초하여 [제조예]에 의해 제공된 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 1% 함유하는) 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 에센스를, 얼굴의 나머지 반쪽에는 플라시보 만을 함유한 에센스 (본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 없는 것만을 제외하고 나머지 성분은 모두 에센스와 동일)를 매일 아침과 저녁에 6주간 도포한 다음, 다기능 피부 분석기로 얼굴의 각 반쪽 피부에서 피부의 멜라닌, 피부 처짐 및 피부 수분 함량을 측정하고 기록하였다. 이어, 얻어진 데이터를 스튜던트 t-검정으로 분석하고, 0주의 결과를 기초로 하여 (즉, 0주의 결과를 100%로 함), 6주간 에센스를 도포한 피부의 멜라닌, 피부 처짐 및 피부의 수분 함량을 산출하였다. 결과를 도 9 내지 도 11에 나타내었다.
도 9 내지 도 11에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 함유하는 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 에센스를 피부에 6주간 도포한 후, 대상 피부의 멜라닌 및 피부 처짐이 현저히 감소하였고, 피부의 수분 함량이 상당히 증가하였다. 이러한 결과는 본 발명의 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물이 피부 보습, 피부 미백, 피부 탄력 및 피부 잔주름 감소에 효과적임을 제시한다.

Claims (11)

  1. 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함하는, 피부 미백, 피부 보습, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소 및 건조 피부 완화 중 적어도 하나를 위한 스킨 케어 제품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 추출물은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)를 물, C1-C4 알콜 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 극성 용매로 추출하여 제공되는 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 추출물은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎 추출물인 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 추출물은 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis)의 잎을 물, C1-C4 알콜 및 이들의 조합물로 구성된 군으로부터 선택된 극성 용매로 추출하여 제공되는 조성물.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 피레나리아 부이사넨시스 (Pyrenaria buisanensis) 추출물을 포함하는, 피부 미백, 피부 보습, 피부 탄력, 피부 잔주름 감소 및 건조 피부 완화 중 적어도 하나를 위한 식품 조성물.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
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