WO2021215440A1

WO2021215440A1 - ヒアルロン酸産生促進剤

Info

Publication number: WO2021215440A1
Application number: PCT/JP2021/016058
Authority: WO
Inventors: 真紀子新妻; 勝田　雄治; 彰五十里
Original assignee: 株式会社資生堂
Priority date: 2020-04-22
Filing date: 2021-04-20
Publication date: 2021-10-28
Also published as: CN115315242A; JPWO2021215440A1

Abstract

本発明は、新規のヒアルロン酸産生促進剤およびヒアルロン酸の産生を促進する皮膚外用剤、治療剤を提供する。具体的には、マグネシウム化合物を有効成分として用いることで、ヒアルロン酸産生促進剤およびヒアルロン酸の産生を促進する皮膚外用剤、治療剤を調製し、ヒト皮膚の老化防止（皮膚のハリや弾力保持）、関節炎等の予防・治療、熱傷の初期の治療等のための美容又は非治療的方法において用いることができる。

Description

ヒアルロン酸産生促進剤

　本発明はヒアルロン酸産生促進剤およびそれを用いる化粧、美容または非治療的方法に関する。

　近年、老化に関する研究が進められている。皮膚老化の原因は、マクロ的にみれば加齢が重要な因子であるが、それに加えて乾燥、酸化、太陽光（紫外線）等による影響も皮膚老化に関わる直接的な因子として挙げられる。皮膚老化の具体的な現象としては、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類の減少、コラーゲンの架橋反応、紫外線による細胞の損傷などが知られている。

　なかでもヒアルロン酸は、細胞間隙への水分の保持、組織内にジェリー状のマトリックスを形成することに基づく細胞の保持、組織の潤滑性と柔軟性の保持、機械的障害等の外力に対する抵抗、および細菌感染の防止など、多くの機能を有している。例えば、皮膚のヒアルロン酸量は加齢とともに減少し、それに伴い、小ジワやかさつき等の皮膚老化が現れるといわれている。そのため、このような老化した皮膚の改善剤として、ヒアルロン酸やコラーゲンを配合した化粧料が数多く提案されている。しかしながらこれら従来の化粧料は、皮膚表面における保湿効果を発揮するだけであり、本質的に老化肌を改善し得るものではない。また、皮膚細胞賦活剤として各種のビタミン類や生薬類を配合した化粧料が提案されているが、これらもやはり老化肌を改善、治療し得るまでには至っていないのが現状である。

　さらに、関節液中に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、関節機能の円滑な作動に役立っている。正常人関節液中のヒアルロン酸濃度は約２．３ｍｇ／ｍＬであるが、慢性関節リウマチの場合、関節液中のヒアルロン酸濃度は約１．２ｍｇ／ｍＬと低下し、同時に関節液の粘度も著しく低下する（非特許文献１）。また、化膿性関節炎や痛風性関節炎などでも慢性関節リウマチの場合と同様、ヒアルロン酸含量の低下が起こることが知られている（非特許文献２）。上記疾患において、潤滑機能の改善、関節軟骨の被覆・保護、疼痛抑制および病的関節液の改善若しくは正常化のために、関節液中のヒアルロン酸量を増加させることが考えられる。例えば、慢性関節リウマチ患者にヒアルロン酸ナトリウムの関節注入療法を行うと上記の改善が認められることが報告されている（非特許文献３）。同様に、外傷性関節炎、骨関節炎や変形性関節炎においても、ヒアルロン酸の関節注入療法により上記の改善効果が報告されている。（非特許文献４）。

　しかしながら、上記疾患の治療は長期にわたり、しかも医師の処方を必要とする。従って、日常生活のなかで手軽に治療することができるヒアルロン酸産生促進剤を含有させた皮膚外用剤が望まれていた。

　また、熱傷受傷後の治癒過程で、壊死組織の下方から増生してくる肉芽組織の初期から組織全体が肉芽組織に置き換えられるまでの期間では、肉芽中にヒアルロン酸が著しく増加することが知られており（非特許文献５）、熱傷の初期の治療薬としても、ヒアルロン酸産生促進剤が期待されている。

　一方、ヒト細胞のヒアルロン酸産生を促進する薬剤としては、インシュリン様成長因子－１や上皮成長因子（非特許文献６）およびインターロイキン－１（非特許文献７）などのサイトカイン、あるいはフォルボールエステル（非特許文献８）などが知られているが、いずれも化粧品、入浴剤や医薬品等として簡便にかつ安心して使用することができるものではない。

　一方、マグネシウム塩とカルシウム塩とからなる皮膚バリア機能回復促進剤が皮膚バリア機能を極めて短時間のうちに回復させることで、皮膚の表皮機能の低下による表皮増殖性異常等を防止することは報告されている（特許文献１）。しかし、マグネシウム化合物が、ヒト細胞においてヒアルロン酸量を増加させる作用を有することは、これまで知られていなかった。

特開２０００－２９０１３５号公報

"Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ"、ｖｏｌ．１０、ｐ．３５７（１９６７）「結合組成」、金原出版、４８１頁、１９８４年「炎症」、日本炎症学会、１１巻、１６頁、１９９１年「結合組織と疾患」、講談社、２４６頁、１９８０年「結合組織と疾患」、講談社、１５３頁、１９８０年 "Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ"、１０１４、ｐ．３０５（１９８９）「日本産科婦人科学会」雑誌、４１巻、１９４３頁、１９８９年 "Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ"、ｖｏｌ．１４８、ｐ．３７７（１９８３）

　本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、ヒアルロン酸産生能を促進させてヒアルロン酸量を増加させるヒアルロン酸産生促進剤を提供することを目的とする。

　本発明者らは、ヒトケラチノサイト由来のＨａＣａＴ細胞を用いて、皮膚の分化や保湿に関わる因子の遺伝子発現に対するマグネシウムの効果を検討したところ、マグネシウム化合物に優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することをはじめて見出した。そして、マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤を発明した。

　そこで、本発明は以下の発明に関する：
［１］　マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸産生促進剤。
［２］　マグネシウム化合物が、塩化マグネシウム、乳酸マグネシウムまたは硫酸マグネシウムである、項目１に記載のヒアルロン酸産生促進剤。
［３］　表皮細胞および／またはケラチノサイトにおけるヒアルロン酸の産生を促進するために用いられる、項目１または２に記載のヒアルロン酸産生促進剤。
［４］　マグネシウム化合物を有効成分として含有するヒアルロン酸産生促進剤を適用することを含む、美容方法または非治療的方法。
［５］　ヒアルロン酸の産生を促進するためのマグネシウム化合物の使用。
［６］　マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸の産生を促進する皮膚外用剤。
［７］　マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸の異常分解またはヒアルロン酸産生能の低下による疾病を治療するための治療剤。
［８］　ヒアルロン酸の産生を促進する化合物のスクリーニング方法であって、
　細胞と該化合物を接触させる工程、
　細胞内マグネシウム濃度を測定する工程、
　該化合物の有無による細胞内マグネシウム濃度の増加の有無を決定する工程
を含む方法。
［９］　ヒアルロン酸の産生量の変化を測定する工程をさらに含む、項目８に記載の方法。

　マグネシウム化合物を用いて細胞内のヒアルロン酸の産生を促進することができる。さらには、ヒアルロン酸の産生を促進することで、ヒト皮膚の老化防止（皮膚のハリや弾力保持）、関節炎等の予防・治療、熱傷の初期の治療等に有効に適用され得る。

図１は、マグネシウム化合物の取り込みによって細胞内のヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ）の発現およびヒアルロン酸産生が促進されるメカニズムを示す。図２は、マグネシウム化合物の取り込みによって細胞内のヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ）の発現およびヒアルロン酸産生が促進されるメカニズムを示す。図３は、マグネシウム化合物によるヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ）の発現の促進を示す。ＨａＣａＴ細胞を高マグネシウム培地に暴露するとＨＡＳ２とＨＡＳ３の発現が促進され、低マグネシウム培地に暴露するとＨＡＳ２とＨＡＳ３の発現が低下することを示す。図４は、マグネシウム化合物によってヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ）の発現量が定量的に促進される結果を示す。ＨａＣａＴ細胞を高マグネシウム培地に暴露するとＨＡＳ２とＨＡＳ３の相対タンパク質量が増加し、低マグネシウム培地に暴露するとＨＡＳ２とＨＡＳ３の相対タンパク質量が低下することを示す。図の横軸のＣは、コントロール、Ｈは、高マグネシウム濃度、Ｌは、低マグネシウム濃度を示す。Ａは、マグネシウム化合物によってヒアルロン酸の合成が促進される結果を示す。ＨａＣａＴ細胞を高マグネシウム培地に暴露すると細胞外ヒアルロン酸量が増加し、低マグネシウム培地に暴露すると細胞外ヒアルロン酸量が低下することを示す。横軸のＣは、コントロール、Ｈは、高マグネシウム濃度、Ｌは、低マグネシウム濃度を示す。Ｂは、細胞表面のＮＩＰＡＬ２およびＮＩＰＡＬ４のマグネシウム化合物の取り込みに与える影響について調べた結果を示す。ＮＩＰＡＬ２ｓｉＲＮＡおよびＮＩＰＡＬ４ｓｉＲＮＡの導入によりマグネシウム化合物の取り込みが抑制され、細胞外ヒアルロン酸の産生が抑制されることを示す。横軸のＮｅｇは、ネガティブコントロール、５ｍＭ　ＭｇＣｌ_２に曝した際のネガティブコントール、Ｎ２は、ＮＩＰＡＬ２ｓｉＲＮＡ導入サンプル、Ｎ４は、ＮＩＰＡＬ４　ｓｉＲＮＡの導入サンプルの結果を示す。図６は、各マグネシウム化合物を添加したときのＨＡＳ２およびＨＡＳ３ｍＲＮＡ増加量を測定した結果を示す。塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ_２）、乳酸マグネシウム（Ｍｇ－ｌａｃ）、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４）のいずれもＨＡＳ２、ＨＡＳ３のｍＲＮＡ量の増加が観察された。

　本発明の一つの態様において、本発明は、マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸産生促進剤に関する。

　遺伝性の魚鱗癬患者でマグネシウムチャネルとして機能するＮＩＰＡＬ４の遺伝子変異が同定され、皮膚障害とマグネシウム輸送の異常との関連が指摘されている。しかし、皮膚バリアの維持におけるマグネシウム化合物の役割や作用機序は未解明であった。本発明者らは、ヒトケラチノサイト由来のＨａＣａＴ細胞を用いて、皮膚の分化や保湿に関わる因子の遺伝子発現に対するマグネシウムの効果を検討したところ、ヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ）の発現量が変化したので、その作用機序を検討した。

　本発明者らは、マグネシウム化合物を用いることにより、ヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ）の発現量およびヒアルロン酸の産生が促進されることをはじめて見出した。ＨＡＳとＮＩＰＡＬ２およびＮＩＰＡＬ４の関係を検討したところ、ＮＩＰＡＬ２／４ｓｉＲＮＡの導入によりＨＡＳ２／３ｍＲＮＡ量が低下し、高マグネシウム培地への暴露によるＨＡＳ２／３ｍＲＮＡ量の増加が抑制された。したがって、ＮＩＰＡＬ２とＮＩＰＡＬ４はマグネシウム流入チャネルとして機能することが示唆された。マグネシウムイオンが、細胞表面のＮＩＰＡＬ２／４を介して、取り込まれることにより、細胞内のＨＡＳ２／３の発現およびヒアルロン酸の産生が促進されると考えられる（図１）。

　マグネシウムによるＨＡＳ２／３の発現調節機構を解明するため、細胞シグナル伝達因子のリン酸化に対する効果を検討した。さらにレポーター活性等を調べた結果、ＭｇによるＨＡ産生には図２のメカニズムが関与していることを見出した。
　よって、マグネシウム化合物を用いることにより、ヒアルロン酸の産生を促進することができる。

　本明細書において、ヒアルロン酸産生促進剤とは、細胞のヒアルロン酸の産生および／またはヒアルロン酸の産生能を促進する効果を有することを意味する。
　ヒアルロン酸の産生および／またはヒアルロン酸の産生能を促進する効果は、細胞をヒアルロン酸産生促進剤を含む培養液で培養した後の細胞外のヒアルロン酸産生量を測定することによって評価する。

　本発明のヒアルロン酸産生促進剤に用いられるマグネシウム化合物としては、ハロゲン化物及び複ハロゲン化物、酸化物及び酸化物の関連化合物、硫化物、窒化物、炭化物、酸素酸塩、有機マグネシウム化合物等のマグネシウム含有化合物が挙げられる。特に好ましくは、塩化マグネシウム、乳酸マグネシウムまたは硫酸マグネシウムである。

　本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、たとえば、表皮細胞、皮膚繊維芽細胞および／またはケラチノサイトにおけるヒアルロン酸の産生を促進するために用いられるが、これらに限定されない。本発明では、特に、表皮細胞および／またはケラチノサイトにおいて効果を有する。

　本発明の一つの態様は、マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸の産生を促進する皮膚外用剤に関する。
　本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、マグネシウム化合物を用いることで、ヒアルロン酸の産生を促進し、ヒト皮膚の老化防止（皮膚のハリや弾力保持）、関節炎等の予防・治療、熱傷の初期の治療等に有効に適用され得る。よって、ヒアルロン酸の産生を促進する皮膚外用剤（医薬品、医薬部外品、化粧料を含む）および／またはヒアルロン酸の異常分解またはヒアルロン酸産生能の低下による疾病を治療するための治療剤が提供される。
　また、本発明の一つの態様は、マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸の異常分解またはヒアルロン酸産生能の低下による疾病を治療するための治療剤に関する。疾病には、例えば、肝炎、歯肉炎、リウマチ、変形関節炎、悪性腫瘍、肝硬変、移植拒否、強皮症、肝硬変、動脈硬化、線維症、乾皮症、乾燥肌、荒れ肌、腎炎、ケロイド、過修復、敗血症等が含まれるが、これらに限定はされない。さらに、本発明の一つの態様は、対象におけるヒアルロン酸の異常分解またはヒアルロン酸産生能の低下による疾病を治療するための方法であって、マグネシウム化合物を有効成分として含有する組成物を対象に投与することを含む方法に関する。対象はヒトを含む哺乳動物、または非ヒト哺乳動物でありうるが、好ましくはヒトである。

　本発明のマグネシウム化合物を皮膚外用剤または治療剤に配合する場合、マグネシウム化合物は、外用剤全量中、たとえば、１～２０ｍＭ、０．０００００１～１．０質量％の量で含むことができる。

　本発明を皮膚外用剤または治療剤（組成物）に適用する場合、上記成分に加えて、さらに必要により、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば酸化防止剤、油分、紫外線防御剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。

　さらに、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属イオン封鎖剤、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン等の防腐剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。

　皮膚外用剤は、外皮に適用される化粧料、医薬部外品等、特に好適には化粧料に広く適用することが可能であり、その剤型も、皮膚に適用できるものであればいずれでもよく、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水－油二層系、水－油－粉末三層系、軟膏、化粧水、ゲル、エアゾール等、任意の剤型が適用される。

　使用形態も任意であり、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェーシャル化粧料やファンデーション、口紅、アイシャドウ等のメーキャップ化粧料、芳香化粧料、浴用剤等に用いることができる。

　また、メーキャップ化粧品であれば、ファンデーション等、トイレタリー製品としてはボディーソープ、石けん等の形態に広く適用可能である。さらに、医薬部外品であれば、各種の軟膏剤等の形態に広く適用が可能である。そして、これらの剤型および形態に、本発明のヒアルロン酸産生促進剤の採り得る形態が限定されるものではない。

　本発明のヒアルロン酸産生促進剤を飲食品や飼料等に配合する場合、マグネシウム化合物の配合量は、それらの種類、目的、形態、利用方法などに応じて、適宜決めることができ、例えば、飲食品全量中に錠剤やカプセル剤等の場合は１～９０質量％、その他の飲食品では０．００１～５０質量％の量で含むことができる。成人一日当たりマグネシウム化合物の摂取量が約１～３７０ｍｇ程度になるように調製することが好ましい。特に、保健用飲食品等として利用する場合には、本発明の有効成分を所定の効果が十分発揮されるような量で含有させることが好ましい。

　飲食品や飼料の形態としては、例えば、顆粒状、粒状、ペースト状、ゲル状、固形状、または、液体状に任意に成形することができる。これらには、飲食品等に含有することが認められている公知の各種物質、例えば、結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜含有させることができる。

　本発明のヒアルロン酸産生促進剤を医薬製剤として用いる場合、該製剤は経口的にあるいは非経口的（静脈投与、腹腔内投与、等）に適宜に使用される。剤型も任意で、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の経口用固形製剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤、または、注射剤などの非経口用液体製剤など、いずれの形態にも公知の方法により適宜調製することができる。これらの医薬製剤には、通常用いられる結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤やｐＨ調製剤などの賦形剤を適宜使用してもよい。

　本発明のヒアルロン酸産生促進剤を、皮膚外用剤、飲食品、飼料、医薬製剤等として用いる場合、タンパク質非酵素的糖化作用が関与する種々の症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等に役立つ。具体的適用例としては、例えば、ヒト皮膚の老化防止（皮膚のハリや弾力保持）、関節炎等の予防・治療、熱傷の初期の治療等に好適に用いられる。また上記症状や疾病、病態等の治療、予防、改善等の生理機能をコンセプトとして、その旨を表示した皮膚外用剤、機能性飲食品、疾病者用食品、特定保健用食品等に応用することができる。

　本発明の一つの態様は、マグネシウム化合物を有効成分として含有するヒアルロン酸産生促進剤を適用することを含む、美容方法または非治療的方法に関する。

　本明細書に開示のヒアルロン酸産生促進剤、皮膚外用剤または治療剤は、ヒト皮膚の老化防止（皮膚のハリや弾力保持）、関節炎等の予防・治療、熱傷の初期の治療等のための美容又は非治療的方法において用いることができる。本発明にかかる美容又は非治療的方法においては、上記皮膚外用剤組成物を所望の効果を得たい部位、例えば顔、首、手、腕、脚等に適用する。適用は、手や塗布具等によってする塗布など、任意の様式で行うことができる。適用の回数、頻度、量等は、所望の効果等に応じて適宜設定される。なお、本発明にかかる美容又は非治療的方法は、いわゆる医療行為を含まない。

　さらに、本発明の一つの態様は、ヒアルロン酸の産生を促進するためのマグネシウム化合物の使用に関する。本明細書に開示のデータは、マグネシウム化合物が優れたヒアルロン酸産生能を有することを実証している。よって、マグネシウム化合物を用いて、ヒアルロン酸産生促進剤、ヒアルロン酸の産生を促進する皮膚外用剤、ヒアルロン酸産生能の低下による疾病を治療する治療剤を調製することができる。すなわち、本発明の一つの態様は、これら皮膚外用剤および治療剤の製造におけるマグネシウム化合物の使用にも関する。

　さらに、本発明の一つの態様は、ヒアルロン酸の産生を促進する化合物のスクリーニング方法あって、
　細胞と該化合物を接触させる工程、
　細胞内マグネシウム濃度を測定する工程、
　該化合物の有無による細胞内マグネシウム濃度の増加の有無を決定する工程
を含む方法に関する。
　ヒアルロン酸の産生能は、細胞内マグネシウム化合物濃度を測定することにより測定することができる。具体的には、マグネシウムイオン濃度が増加すると、ヒアルロン酸濃度が増大することから、ヒアルロン酸の産生を促進する化合物のスクリーニングにおいて、候補化合物の有無による細胞内マグネシウム濃度の増加の有無を決定することにより、候補化合物の選択を行うことができる。
　マグネシウム濃度は、細胞を候補化合物を含む培養液で培養した後の細胞内のマグネシウム濃度を測定することによって評価する。

　スクリーニングの対象となる化合物は、例えば、化合物ライブラリーや、微生物・動植物等の抽出物のライブラリーに含まれるものが使用されうる。細胞内マグネシウム濃度の測定は、例えば、マグネシウム蛍光プローブなどを用いた蛍光測定法により行うことができる。マグネシウム蛍光プローブとしては、例えば、富士フイルム和光純薬（株）から購入可能なＫＭＧ－２０－ＡＭや、Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入可能なＭａｇ－Ｆｕｒａ－２、Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ　Ｇｒｅｅｎ（商標）などが用いられうるが、これらに限定はされない。

　さらに、本発明の一つの態様は、ヒアルロン酸の産生量の変化を測定する工程をさらに含む、上記スクリーニング方法に関する。上記スクリーニング方法において、ヒアルロン酸の産生量の変化を測定することにより、候補化合物の選択を行うことができる。

　ヒアルロン酸の産生量の変化は、例えば、細胞外のヒアルロン酸（ＨＡ）量をＥＬＩＳＡなどの公知の手法を用いて測定することで決定されうる。あるいは、ヒアルロン酸の産生量の変化は、ヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ）の発現量（ＨＡＳ２／３ｍＲＮＡ量またはＨＡＳ２／３タンパク質量）の変化に基づき測定してもよい。

　本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。

　以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。

　以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

実施例１：マグネシウム化合物によるＨＡＳ２およびＨＡＳ３の発現量の同定
　蛍光測定法で細胞内マグネシウム濃度（［Ｍｇ２＋］）を測定したところ、ＨａＣａＴ細胞を高マグネシウム培地に暴露すると細胞内マグネシウム濃度が高くなり、さらにＨＡＳ２、ＨＡＳ３ｍＲＮＡ量増加が観察された。低マグネシウム濃度では細胞内マグネシウム濃度が低くなりＨＡＳ２およびＨＡＳ３ｍＲＮＡ量の低下が観察された。

　結果を図３および４に示す。図３の結果からわかるように高マグネシウム濃度はＨＡＳ２およびＨＡＳ３の発現を促進した。図４は、同様に高マグネシウム濃度は、ＨＡＳ２およびＨＡＳ３の相対タンパク質量の増加も示している。

実施例２：マグネシウム濃度によるヒアルロン酸量の測定
　細胞外（培地中）に産生されたヒアルロン酸をヒアルロン酸測定キット（ＰＧリサーチ社）を用いてＥＬＩＳＡ（競合法）で測定した。図５Ａは、ＨａＣａＴ細胞を高マグネシウム培地に暴露すると細胞外ヒアルロン酸量が増加し、低マグネシウム培地に暴露すると細胞外ヒアルロン酸量が低下されることを示す。
　ＨＡＳの発現とＮＩＰＡＬ２および４の関係を検討したところ、ＮＩＰＡＬ２ｓｉＲＮＡおよびＮＩＰＡＬ４ｓｉＲＮＡの導入は、ＨＡＳ２／３ｍＲＮＡ量を低下させ、高マグネシウム培地への暴露によるＨＡＳ２／３ｍＲＮＡ量の増加が抑制された。図５Ｂは、ＮＩＰＡＬ２　ｓｉＲＮＡおよびＮＩＰＡＬ４ｓｉＲＮＡの導入により、マグネシウム化合物の取り込みが抑制され、細胞外ヒアルロン酸の産生が抑制されることを示す。ＮＩＰＡＬ２とＮＩＰＡＬ４はマグネシウム流入チャネルとして機能することが示唆された。

実施例３：ＨＡＳ２／３　ｍＲＮＡ量に対するマグネシウム化合物の影響
　ＨａＣａＴ細胞を４日間培養後、５ｍＭ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ_２）、乳酸マグネシウム（Ｍｇ－ｌａｃ）、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４）を添加した培地で６時間培養した。ＲＮＡを抽出後、リアルタイムＰＣＲ法で、ＨＡＳ２／３ｍＲＮＡ量を測定した。その結果を図６に示す。塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ_２）、乳酸マグネシウム（Ｍｇ－ｌａｃ）、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４）のいずれでもＨＡＳ２、ＨＡＳ３のｍＲＮＡ量の増加が観察された。

　図３～６の結果から明らかなように、マグネシウムイオンの取り込みによってＨＡＳ２／３の発現およびヒアルロン酸産生を促進する効果が確認された。

Claims

　マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸産生促進剤。
　マグネシウム化合物が、塩化マグネシウム、乳酸マグネシウムまたは硫酸マグネシウムである、請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤。
　表皮細胞および／またはケラチノサイトにおけるヒアルロン酸の産生を促進するために用いられる、請求項１または２に記載のヒアルロン酸産生促進剤。
　マグネシウム化合物を有効成分として含有するヒアルロン酸産生促進剤を適用することを含む、美容方法または非治療的方法。
　ヒアルロン酸の産生を促進するためのマグネシウム化合物の使用。
　マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸の産生を促進する皮膚外用剤。
　マグネシウム化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ヒアルロン酸の異常分解またはヒアルロン酸産生能の低下による疾病を治療するための治療剤。
　ヒアルロン酸の産生を促進する化合物のスクリーニング方法であって、
　細胞と該化合物を接触させる工程、
　細胞内マグネシウム濃度を測定する工程、
　該化合物の有無による細胞内マグネシウム濃度の増加の有無を決定する工程
を含む方法。
　ヒアルロン酸の産生量の変化を測定する工程をさらに含む、請求項８に記載の方法。