KR20130135165A

KR20130135165A - 효소처리 에델바이스 추출물을 포함하는 피부 및 모발 개선 촉진제

Info

Publication number: KR20130135165A
Application number: KR1020130062487A
Authority: KR
Inventors: 김수나; 박원석; 이영란
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2012-05-31
Filing date: 2013-05-31
Publication date: 2013-12-10
Also published as: WO2013180526A1; KR20130135164A; KR102022538B1

Abstract

본 발명은 효소 처리한 에델바이스의 추출물을 포함하는 촉진제에 관한 것으로, 구체적으로 세포벽 분해 효소로 처리한 에델바이스의 추출물을 포함하는 촉진제에 관한 것이다.

Description

효소처리 에델바이스 추출물을 포함하는 피부 및 모발 개선 촉진제 {Agent for improving skin and hair containing extract of Leontopodium alpinum treated enzyme}

탈모는 성장 주기에 따라 휴지기성 탈모와 성장기성 탈모로 구분할 수 있으며, 휴지기성 탈모로는 안드로겐에 의한 남성형 탈모, 여성의 산후 탈모 또는 내분비 질환에 의한 탈모를 들 수 있고, 성장기성 탈모로는 원형 탈모, 반흔성 탈모 또는 두부 백선에 의한 탈모 등을 들 수 있다. 또한 국소 감염, 내분비 장애, 유전 인자 및 자가 면역 등에 의해서도 탈모가 발생하는 것으로 알려져 있다.

현재 대표적인 탈모 방지제로는 미국 FDA에서 승인한 프로페시아와 미녹시딜이 있다. 이러한 약물은 임상적으로 분명한 효과를 보이나 성기능 장애 및 피부 자극 등 부작용 또한 나타낼 뿐만 아니라 여성은 사용이 불가능하거나 극히 제한적인 함량으로만 사용이 가능하다. 따라서 상기와 같은 단점을 가지지 않도록 새로운 기전을 통하면서도 성별 제한 없이 안전하게 사용할 수 있는 천연물 제제에 대한 관심이 높아지고 있다.

Fathke et al., "Wnt signaling induces epithelial differentiation during cutaneous wound healing", BMC Cell Biology 2006, 7:4

본 발명의 목적은 에델바이스 추출물에 포함되어 있는 유효물질의 함량을 증가시켜, 더욱 개선된 피부 재생 및 모발 성장 효과를 가지는 촉진제를 제공하는 데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세포벽 분해효소로 처리한 에델바이스의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생 촉진제를 제공한다.

본 발명에 따른 효소 처리 에델바이스의 추출물을 포함하는 촉진제는 식물 세포 내 유효 성분의 추출 효율을 증가시킬 수 있어서, 클로로겐산의 함량이 급격히 증가하였고, 고함량의 클로로겐산을 가짐에 따라 항산화능이 증가하였으며, 윈트/베타-카테닌(Wnt/beta-catenin) 신호 전달을 더욱 촉진하여 개선된 피부 재생 효과, 구체적으로 뛰어난 피부 상처 치유 및 흉터 감소 효과, 모발 성장 촉진 효과를 나타낼 수 있다.

도 1은 에델바이스 추출물과 효소처리 에델바이스 추출물에 포함된 지표 성분인 클로로겐산(chlorogenic acid)의 함량을 비교한 그래프이다.
도 2는 에델바이스 지표 성분인 클로로겐산의 항산화 효능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 효소처리 에델바이스 추출물이 줄기세포의 윈트/베타-카테닌(Wnt/beta-catenin) 신호 전달을 촉진함을 보여주는 그래프이다.
도 4는 효소처리 에델바이스 추출물의 모낭 모유두 세포 증식 촉진 효과를 보여주는 그래프이다.

본 발명은 일 관점에서, 효소 처리 에델바이스의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생 촉진제에 관한 것이다.

본 명세서에서 "효소"는 에델바이스를 구성하는 물질을 물리적 또는 화학적으로 변형시켜 이를 추출하였을 때, 고함량의 추출물을 얻을 수 있는 물질을 총칭한다.

본 발명의 일 관점에 있어서, 상기 효소는 식물의 유효성분을 고함량, 고수들률로 얻을 수 있도록 하는 효소이면 제한이 없으며, 구체적으로, 세포벽 분해효소를 포함한다.

본 명세서에서 "세포벽 분해효소 (cell wall degradation enzyme)"는 식물 세포벽의 분해에 관여하는 효소를 의미할 수 있다. 세포벽은 일반적으로, 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스, 펙틴물질, 리그닌, 단백질, 마그네슘, 칼슘 등으로 구성되어 있다. 셀룰로오스 분해효소로는 엑소-β,4 글루카나아제(섬유소분해효소 C1), 엔도-β,4 글루카나아제(섬유소분해효소 Cx); 헤미셀룰로오스 분해효소로서는 크실라나아제, 1,3-크실라나아제, α-L-아르비노푸라노시다아제 등이 있으며; 펙틴질분해효소에는 펙틴 및 펙틴산의 주사슬의 α-1,4결합을 절단하는 효소군(엔도-폴리메틸갈락투로나아제(endo-PMG), 엔도-폴리갈락투로나아제(endo-PG), 엔도-펙틴트랜스일리미나아제(endo-PTE), 엔도-폴리갈락투론산 트랜스-일리미나아제(endo-PATE), 엑소-폴리메틸갈락투로나아제(exo-PMG), 엑소-폴리갈락투로나아제(exo-PG), 엑소-펙틴트랜스일리미나아제(exo-PTE), 엑소-폴리갈락투론산 트랜스-일리미나아제(exo-PATE))과 펙틴의 메틸기를 유리하는 펙틴메틸에스테르가수분해효소가 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

식물의 세포는 동물의 세포와 달리 단단한 세포벽으로 싸여있다. 세포벽은 생성 초기에는 펙틴과 셀룰로오스로 구성되나, 그 후 목화하여 셀룰로스 외에 많은 리그닌 및 헤미셀룰로오스를 함유하게 된다. 셀룰라아제는 셀룰로오스를 분해하는 효소로서 이를 처리하게 되면 단단한 세포벽이 일부 분해되면서 식물 내 유효 성분의 추출 효율이 높아지게 된다. 따라서 에델바이스 추출 전 셀룰라아제를 세포벽 분해효소와 반응시키면 효소를 처리하지 않은 경우에 비해 식물 세포 내 유효 성분 추출 효율이 높아져 원료의 효능 또한 증가할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 에델바이스는 추출물의 형태로 포함되거나, 생약 자체의 분쇄물, 또는 생약의 건조 분쇄물로서 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 아울러 본 명세서에서 사용되는 에델바이스는 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있으며, 초본의 지상부의 일부 또는 전부를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 지상부의 전부를 사용할 수 있다.

본 명세서에서, 상기 "에델바이스"는 레온토포이움 속 (Leontopoium sp.) 식물일 수 있다. 상기 레온토포이움 속 (Leontopoium sp.) 식물은 레온토포이움 알피늄(Leontopoium alpinum), 레온토포이움 안데르소니 (Leontopodium andersonii), 레온토포이움 아르테미시포리움 (Leontopodium artemisiifolium), 레온토포이움 아우란티아쿰 (Leontopodium aurantiacum), 레온토포이움 브라키아크티스 (Leontopodium brachyactis), 레온토포이움 카로세파룸 (Leontopodium calocephalum), 레온토포이움 캄페스테 (Leontopodium campestre), 레온토포이움 추이 (Leontopodium chuii), 레온토포이움 콩로바튬 (Leontopodium conglobatum), 레온토포이움 코레아눔 (Leontopodium coreanum), 레온토포이움 데데켄시 (Leontopodium dedekensii), 레온토포이움 데라바야눔 (Leontopodium delavayanum), 레온토포이움 디스코로 (Leontopodium discolor), 레온토포이움 파긴겐스 (Leontopodium fangingense), 레온토포이움 파우리에이 (Leontopodium fauriei), 레온토포이움 포레스티아눔 (Leontopodium forrestianum), 레온토포이움 프란체티 (Leontopodium franchetii), 레온토포이움 지랄디 (Leontopodium giraldii), 레온토포이움 하스셔이데스 (Leontopodium haastioides), 레온토포이움 하라이사넨스 (Leontopodium hallaisanense), 레온토포이움 하프로필로이데스 (Leontopodium haplophylloides), 레온토포이움 하라키넨스 (Leontopodium hayachinense), 레온토포이움 히마라야눔 (Leontopodium himalayanum), 레온토포이움 자코티아눔 (Leontopodium jacotianum) 및 레온토포이움 자포니쿰 (Leontopodium japonicum)으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 식물을 포함할 수 있다.

에델바이스(Leontopoium alpinum)는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 여러해살이풀로 주로 건조한 곳에서 서식하는 고산식물이다. 잎은 뿌리에서 비교적 많이 나오고 줄기에 약간 있으며 선형이다. 줄기 끝에 포가 모여 달려서 사방으로 퍼지고 중앙에 약간의 두상화가 달린다.

본 명세서에서 "에델바이스 추출물"은 에델바이스에 세포벽 분해효소를 처리한 후, 이를 추출하여 얻어질 수 있다.

상기 에델바이스 추출물은 에델바이스-C₁~C₆ 알코올 추출물을 포함할 수 있고, 구체적으로 상기 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다.

본 명세서에서 상기 에델바이스 추출물은 물, C_1-C₆ 알콜, 및 이들이 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 용매의 조추출물일 수 있다. 상기 C_1-C₆ 알콜은 구체적으로 메탄올일 수 있다. 에델바이스를 용매로 추출 시, 에델바이스의 약 5 내지 15배 정도에 해당하는 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하며, 구체적으로 약 10 배의 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출은 가열 추출, 냉침 추출, 환류냉각 추출, 또는 초음파 추출 등이 이용될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없다. 상기 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 약 40 내지 100℃, 더욱 바람직하게는 약 80℃의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 바람직하게는 약 2 내지 4시간, 더욱 바람직하게는 약 3 시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 3회 연속추출하여 합한 추출액을 이용할 수 있다.

본 명세서에서 에델바이스 추출물은 상기와 같이 에델바이스의 조추출물을 포함할 수 있고, 상기 조추출물을 극성이 낮은 유기 용매로 더욱 추출하여 얻어진 유기 용매의 가용성 분획물로서 포함할 수도 있다. 상기 유기 용매로는 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸 아세테이트, n-부탄올 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 방법으로 추출한 추출물 또는 그 추출물의 가용성 분획물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 동결 건조하여 동결건조물의 형태로서 사용할 수 있다.

구체적으로, 상기 효소 처리한 에델바이스의 추출물은 에델바이스 추출물은 에델바이스를 세척하고 건조하는 단계; 에델바이스에 효소를 처리하는 단계; 에델바이스를 용매 추출하는 단계; 및 추출한 에델바이스를 여과하는 단계를 거쳐 수득할 수 있다. 상기에서 용매는 물, 유기 용매 및 물과 유기 용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함한다. 상기에서 물은 증류수 또는 정제수를 포함하고, 유기 용매는 C₁~C₅의 저급 알코올을 예로 들 수 있는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 "추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 또한 천연물의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.

본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피를 포함하는 광범위한 개념이다.

본 명세서에서 "피부 재생을 촉진"한다는 것은 새로운 피부세포의 형성을 촉진하고 노화된 피부의 각질탈락을 촉진시킴을 의미할 수 있고, 정상적인 피부세포 또는 상처가 있는 피부세포 모두의 재생을 포함한다.

본 발명은 다른 관점에서, 효소 처리 에델바이스의 추출물을 유효성분으로 포함하는 모발 성장 촉진제에 관한 것이다.

본 명세서에서 "모발"은 체모(體毛)와 두발(頭髮)을 총칭하는 것으로 헤어(hair)로도 기재될 수 있다. 상기 모발은 사람 및 동물의 것을 모두 포함한다.

본 명세서에서 "양모 촉진"은 새로운 모발의 생성을 촉진하는 것뿐만 아니라 기존 모발이 굵고 건강하게 자라도록 하는 것을 의미한다.

본 발명의 일 관점인 촉진제에 있어서, 상기 효소는 셀룰라아제 (cellulase), 크실라나아제 (xylanase) 및 아라비노푸라노시다아제 (arabinofuranosidase)로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

본 발명의 일 관점인 촉진제에 있어서, 상기 추출물은 세포벽 분해효소를 에델바이스 총중량에 대하여 0.01 내지 1중량%로 첨가하여 얻어질 수 있다.

상기 세포벽 분해효소는 에델바이스 총중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 함유될 수 있다. 세포벽 분해효소가 0.001중량%미만으로 함유되면, 에델바이스 추출물에 포함되는 유효성분인 클로로겐산의 함량증가가 미미하며, 10중량%를 초과하여 함유되면, 세포벽 분해 효소의 함량으로 다른 구성 성분의 함량을 제한하게 된다. 상기와 같은 관점에 있어서, 에델바이스 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.0011 내지 9중량%, 0.0012 내지 8중량%, 0.0013 내지 7중량%, 0.0014 내지 6중량%, 0.0015 내지 5중량%, 0.0016 내지 4중량%, 0.0017 내지 3중량%, 0.0018 내지 2중량% 또는 0.0019 내지 1중량%으로 함유될 수 있다.

본 발명의 일 관점인 촉진제에 있어서, 상기 촉진제는 에델바이스 추출물을 촉진제 총 중량에 대하여 0.01 내지 10중량%로 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다. 구체적으로 에델바이스 추출물이 0.01 중량% 미만인 경우 충분한 피부 재생 및 모발 성장 촉진 효과를 얻을 수 없고, 10 중량%를 초과하는 경우 안전성 및 제형 안정성이 낮아질 수 있다. 상기와 같은 관점에 있어서, 에델바이스 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.01 내지 9중량%, 0.1 내지 5중량%, 0.5 내지 3중량% 또는 0.7 내지 2중량%로 함유될 수 있다.

본 발명의 일 관점인 피부 재생 촉진제에 있어서, 상기 촉진제는 피부 상처를 치유할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 피부 재생 촉진제에 있어서, 상기 촉진제는 탈모를 방지하거나 또는 양모를 촉진할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 피부 재생 촉진제에 있어서, 상기 촉진제는 윈트 신호 (Wnt signal)를 활성화할 수 있다.

윈트/베타-카테닌(Wnt/beta-catenin) 신호 전달은 생명체의 발생과 관련 있는 신호 전달 체계이며, 피부 생성 및 모낭의 발생에 작용하는 것으로 알려져 있다. 나아가 피부에 상처가 생기면 피부 조직 회복 과정에서 윈트 신호 전달이 필수적으로 발현되어 상피 세포의 분화를 촉진하는 것으로 알려져 있다. 따라서 윈트 신호 전달이 촉진되면 상피 세포의 분화가 촉진되어 피부 재생이 촉진될 수 있고, 나아가 피부 상처의 치유가 촉진될 수 있다. 본 명세서의 효소 처리 에델바이스 추출물은 줄기세포의 윈트/베타-카테닌(Wnt/beta-catenin) 신호 전달을 촉진한다. 따라서 이를 포함하는 제제는 피부 재생을 촉진할 수 있으며, 구체적으로 피부 상처의 치유를 촉진할 수 있다.

모발은 성장기-퇴행기-휴지기의 주기를 거치면서 성장과 탈락을 반복한다. 그 중 성장기에 모낭 줄기세포들이 분화하면서 새로운 모발이 형성된다. 한편, 윈트 단백질을 마우스에 처리하면 모발 성장이 촉진되고, 윈트 유전자를 녹-다운(Knock-down) 시킨 마우스에서는 모발 성장이 저해된다고 알려진 바 있다. 이는 모낭 줄기세포에 존재하는 윈트/베타-카테닌 신호 전달을 촉진하는 물질이 모발 성장을 촉진할 수 있음을 의미한다. 이러한 메커니즘을 통해 모발 성장을 촉진하는 물질은 남성 호르몬 및/또는 혈액 순환 조절을 통해 모발 성장 촉진에 관여하는 것이 아니므로, 남성 호르몬을 억제하거나 혈액 순환을 촉진하는 방법으로는 해결되지 않았던 심한 탈모 및 여성형 탈모를 개선할 수 있을 것이다. 또한 모유두 세포의 줄기 세포가 활성화되면 모유두 세포의 활성이 촉진되어 모발 성장이 촉진될 수 있다. 에델바이스 추출물은 줄기세포의 윈트/베타-카테닌(Wnt/beta-catenin) 신호 전달을 촉진하며, 모유두 세포의 줄기 세포를 활성화시킨다. 또한 에델바이스 추출물은 모낭 모유두 세포의 증식을 촉진한다. 따라서 에델바이스 추출물을 포함하는 제제는 모발 성장을 촉진하며, 나아가 탈모를 방지하고 양모를 촉진할 수 있다. 또한 에델바이스 추출물을 포함하는 모발 성장 촉진제는 기존의 모발 성장 촉진제로 알려진 미녹시딜보다 우수한 모발 성장 촉진, 탈모 방지 및 양모 촉진 효과를 가질 수 있으며, 성기능 장애 또는 피부 자극과 같은 부작용을 거의 나타내지 않으며, 성별을 불문하고 사용될 수 있다.

본 발명의 일 관점인 촉진제에 있어서, 상기 에델바이스 추출물은 클로로겐산 (chlorogenic acid)을 6ppm이상 포함할 수 있다. 상기와 같은 범위의 클로로겐을 포함하는 경우, 효소 처리하지 않는 에델바이스 추출물보다 우수한 피부 재생, 모발 성장 촉진 효능을 가질 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 본 명세서의 세포벽 분해 효소를 처리한 에델바이스로부터 얻어지는 추출물은 유효성분인 클로로겐산을 전체 추출물 중량에 대하여, 6.5ppm이상, 7ppm이상, 7.5ppm이상, 8ppm이상, 8.5ppm이상, 9ppm이상, 9.5ppm이상, 10ppm이상, 10.5ppm이상, 11ppm이상 또는 11.5ppm이상 포함할 수 있으며, 100,000ppm이하 또는 10,000ppm이하로 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 촉진제에 있어서, 상기 에델바이스는 레온토포이움 속 (Leontopoium sp.) 식물을 포함한다. 본 발명의 일 관점인 촉진제에 있어서, 상기 에델바이스는 레온토포이움 알피늄(Leontopoium alpinum)일 수 있다.

본 발명은 다른 관점에서, 효소 처리 에델바이스의 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 상기 화장료 조성물은 피부 재생 효과를 가지며, 구체적으로 상처를 치유하고 흉터를 감소시킬 수 있다. 또한 상기 화장료 조성물은 모발 성장을 촉진하며, 나아가 탈모를 방지하고 양모를 촉진할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 마이크로 니들, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.

본 발명은 다른 관점에서, 효소 처리 에델바이스의 추출물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 피부 재생 효과를 가지며, 구체적으로 상처를 치유하고 흉터를 감소시킬 수 있다. 또한 상기 약학 조성물은 모발 성장을 촉진하며, 나아가 탈모를 방지하고 양모를 촉진할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 및 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 세립제, 액제, 유탁제 또는 펠렛제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 폴리에틸렌 글리콜), 또는 결합제(예: 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리비닐피롤리딘)를 함유할 수 있다. 경우에 따라 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제는 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 다른 관점에서, 효소 처리 에델바이스의 추출물을 포함하는 건강식품 조성물에 관한 것이다. 상기 식품 조성물은 피부 재생 효과를 가지며, 구체적으로 상처를 치유하고 흉터를 감소시킬 수 있다. 또한 상기 식품 조성물은 모발 성장을 촉진하며, 나아가 탈모를 방지하고 양모를 촉진할 수 있다.

상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 시험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

[비교예] 에델바이스 추출물의 제조

에델바이스(Leontopoium alpinum)를 초정제수로 세척하여 250 메쉬(mesh) 필터에 걸러 50℃에서 24시간 동안 건조한다. 건조한 에델바이스 1kg에 20L의 증류수를 첨가하고 4℃의 온도 조건 하에서 48시간 동안 추출한다. 그 후 250 메쉬 필터에 걸러 침전 시킨 후 다시 한번 0.5μm 필터에 거른다. 활성 탄소로 탈색, 탈취 과정을 거쳐 0.5μm 필터에 걸러 에델바이스 추출물을 수득한다.

[실시예] 효소 처리한 에델바이스의 추출물 제조

에델바이스(Leontopoium alpinum)를 초정제수로 세척하여 250 메쉬(mesh) 필터에 걸러 50℃에서 24시간 동안 건조한다. 건조한 에델바이스 1kg에 2L의 증류수를 첨가하고 여기에 셀룰라아제 100g을 첨가하여 pH를 4.8로 조정한다. 효소반응 온도인 40℃에서 72시간 반응시킨다. 이후 18L의 증류수를 첨가하고 4℃의 온도 조건 하에서 48시간 동안 추출한다. 그 후 250 메쉬 필터에 걸러 침전 시킨 후 다시 한번 3μm 필터에 거른다. 활성 탄소로 탈색, 탈취 과정을 거쳐 0.5μm 필터에 걸러 에델바이스 추출물을 수득한다.

[시험예 1] 에델바이스 추출물 내 지표 물질 함량 분석

에델바이스 추출물에 존재하는 화합물에는 클로로겐산, 루테올린, 아피게닌, 레온토포딕산 등이 알려져 있다. 본 지표 물질들은 고성능 액상 크로마토그래피 (HPLC, High performance liquid chromatography) 분석 방법으로 정성 및 정량 분석이 가능하다. 클로로겐산은 커피에 다량 포함되어있는 폴리페놀 화합물의 일종으로, 항산화 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 에델바이스 추출물 내 지표 물질의 함량을 분석해보았을 때 클로겐산의 함량이 가장 높게 나타났기 때문에, 본 발명에서는 효소처리 추출 방법의 추출 효율을 분석하기 위해 클로로겐산의 함량 변화를 이용하였다.

자세한 분석 방법은 다음과 같다. 에델바이스 추출물과 효소처리 에델바이스 추출물은 원액을 분석하고, 표준품으로 사용하는 클로로겐산은 50% 메탄올에 5μg/ml 농도로 녹여 사용하였다. 분석에 사용한 HPLC 기기는 Water사 Alliance 2695E model HPLC 이며, 검출기는 Water사의 PDA detector 2998 model이며, 칼럼은 Mightysil-RP18 (4.6 x 250, 5 um)이다. 표준품(standard)은 2,5,10 μg/mL로 조제하여 3 point calibration curve를 그려, 에델바이스 추출물 내 클로로겐산을 정량하였다.

추출물 10μl를 주입하고 분석 용매는 A(20 mM KH₂PO₄(pH 2.5)) / B(ACN)를 다음과 같은 gradient로 흘려주었다. 유량은 1 mL/min이다.

time(min)	A	B
0	96	4
1	96	4
60	55	45
65	40	60
70	40	60
75	96	4
82	96	4

클로로겐산의 retention time은 17분이며 검출 파장은 326nm이다.

도 1에서와 같이, 셀룰라아제 효소 처리 후 에델바이스 추출물 내 클로로겐산의 양이 처리하기 전에 비해 급격히 증가한 것을 볼 수 있었다. 즉, 셀룰라아제 효소를 처리함으로써 에델바이스 세포벽이 분해되면서 식물 내부의 지표 성분의 추출 효율이 증가한 것을 알 수 있었다. 따라서 본 추출법으로 얻은 효소처리 에델바이스 추출물은 효소처리를 하지 않은 추출물에 비해 유효 성분을 다량 함유하고 있을 것임을 알 수 있었다.

[시험예 2] 에델바이스 지표 성분의 항산화 효과 평가

에델바이스 지표 성분인 클로로겐산의 항산화 효과를 평가하기 위하여 DPPH 항산화 평가법을 사용하였다. 체내에서 일어나는 산화 반응은 주로 자유 라디칼에 의해 일어나고, 이러한 작용은 세포의 노화 및 암 발생을 초래하는 것으로 알려져있다. 따라서 체내의 자유 라디칼 생성 억제는 결국 체내 항산화, 항노화와 연관될 수 있으며, 이러한 항산화 효과는 체내의 자유 라디칼을 대상으로 실험하기 어렵기 때문에 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼을 보편적으로 사용하고 있다. DPPH 라디칼은 짙은 보라색을 띠고 있는데 항산화 효능 물질과 만나 반응하면 옅은 노란색으로 바뀌며 517nm 파장에서 흡광도를 측정하여 항산화능을 평가한다. 항산화능이 높은 물질일수록 색이 옅은 노란색을 띠면서 흡광도가 낮아진다.

본 실험에서는 96웰 플레이트에 0.1mM DPPH용액을 넣은 후 양성대조군인 비타민 C와 클로로겐산을 각각 반응시켜 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때, 용매로는 물을 사용하였고, 비타민 C는 25, 50, 100μg/ml의 양으로 처리하였으며, 클로로겐산은 1.25, 2.5, 5, 10ppm의 양으로 처리하였다. 반응은 37℃ 배양기에서 30분간 진행하였다. 결과는 도 2에 나타내었다.

도 2에서 볼 수 있는 바와 같이 클로로겐산을 처리한 경우 농도 의존적으로 항산화 효과를 보이는 것을 확인하였다. 이를 통하여, 클로로겐의 함량이 증가한 효소처리 에델바이스 추출물의 경우 처리 전에 비해 항산화 효과가 증가할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 3] 줄기세포의 윈트/베타 카테닌 신호 전달 촉진 효과 평가

줄기세포에 Wnt 신호가 주어지면 세포 내 베타-카테닌(beta-catenin)을 억제하고 있는 단백질 복합체(GSK3, APC, Axin)가 저해되면서 베타-카테닌이 세포 핵 내로 이동하고 발생 및 모발 성장에 관여하는 다양한 유전자가 발현된다.

베타-카테닌은 전사 조절인자로서 염색체의 특정 염기 서열에 부착하는데, 이러한 베타-카테닌 부착 염기 서열 뒤에 가우시아 루시퍼라제(Gaussia luciferase) 유전자 염기 서열을 인위로 조합한 플라스미드 벡터를 제작하여 HEK293(인간 배아 신장 세포주)에 트랜스펙션(transfection)한다. 이렇게 제작한 형질전환 세포주는 G418 항생제에 저항성이 있어, G418이 포함된 배지에 배양할 경우 형질전환 세포주만 선택적으로 배양이 가능하다. 이와 같이 수득한 윈트/베타 카테닌 신호 전달 체계를 보유한 형질전환 HEK293 세포주에 실시예의 에델바이스 추출물을 처리한 후 가우시아 루시퍼라제 분석 키트(Gaussia luciferase assay kit, BioLabs)로 가우시아 루시퍼라제의 발현 증가 여부를 확인하였다.

구체적으로, 형질전환 HEK293 세포를 10% 소혈청 세럼(Fetal bovine serum) (FBS)과 G418 500μg/ml이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM; Gibco BRL, Gaithersburg, MD, USA)로 5% CO₂, 37℃의 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다. 96-웰 플레이트에서 24시간 동안 배양한 세포에 각각 비교예의 2 ppm 및 5 ppm의 에델바이스 추출물과 실시예의 2ppm 및 5ppm의 효소처리 에델바이스 추출물을 처리한 후 다시 48시간 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 가우시아 루시퍼라제 분석 키트를 이용하여 배양한 세포의 루시퍼라제 발현 정도를 측정하여 에델바이스 추출물이 윈트/베타 카테닌 신호 전달에 미치는 효과를 평가하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 3에서 볼 수 있듯이, 에델바이스 추출물 및 효소처리 에델바이스 추출물은 줄기세포의 윈트/베타 카테닌 신호 전달을 촉진하며, 효소처리 에델바이스 추출물이 일반 에델바이스 추출물보다 효과가 좋은 것을 볼 수 있다. 본 결과를 통해 셀룰라아제 효소를 처리함으로써 에델바이스 추출물의 피부 재생 및 모발 성장 촉진 효과를 증가시킬 수 있음 알 수 있었다.

[시험예 4] 모낭 모유두 세포 증식 효과 평가

모발을 구성하는 케라틴 단백질은 모근부 케라틴형성세포 (keratinocyte)에서 생성되며, 이 케라틴형성세포는 모유두 세포로부터 분화된다. 따라서 에델바이스 추출물이 모유두 세포의 활성을 촉진한다면 그로부터 분화되는 케라틴형성세포의 활성을 촉진시킬 수 있고, 나아가 모발 생성을 촉진할 수 있을 것이다.

에델바이스 추출물의 모유두 세포 활성 촉진 효과를 평가하기 위하여 본 발명에서는 iDPc(Human immortalized dermal papilla cell) 세포주를 사용하였다. 본 세포주는 사람 모유두 세포(Human dermal papilla cell)를 Simian virus 40 large T(SV40T)와 c-myc를 포함하는 벡터로 형질 도입(transduction)하여 제조한 불멸화된 모유두 세포이다. 상기 세포주는 10% 소혈청세럼(FBS)이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM; Gibco BRL, Gaithersburg, MD, USA)로 5% CO₂, 37℃가 유지되는 인큐베이터에서 24시간 동안 배양한 후 각각 비교예의 2ppm 및 5ppm의 에델바이스 추출물과 실시예의 2ppm 및 5ppm의 효소처리 에델바이스 추출물을 처리하였다. 음성 대조군으로는 DMSO를 사용하였다. 시험 물질 처리 24시간 경과 후에 WST-1 키트(Roche)을 사용하여 세포 증식능(%)을 측정하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4에서 볼 수 있듯이, 효소처리 에델바이스 추출물은 효소처리 전에 비해 모유두 세포의 증식을 증가시켰다. 이를 통해 효소처리 에델바이스 추출물은 모유두 세포의 증식을 촉진시키고, 나아가 케라틴형성세포의 활성 및 모발 생성을 촉진할 수 있음을 알 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예 1] 연고의 제조

아래 표 2에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 연고를 제조한다.

성분	함량(중량%)
정제수	잔량
글리세린	8.0
부틸렌그리콜	4.0
유동파라핀	15.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
실시예의 효소 처리 에델바이스의 추출물	5.0
카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알렌	1.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
스테아릴 알코올	1.0
방부제	적량
향	적량
색소	적량
밀랍	4.1

[제형예 2] 헤어 로션의 제조

아래 표 3에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 헤어 로션을 제조한다.

성분	함량(중량%)
정제수	잔량
글리세린	3.0
부틸렌그리콜	3.0
유동파라핀	7.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
실시예의 효소 처리 에델바이스의 추출물	2.0
카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알렌	5.0
세테아릴 그루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
폴리솔베이트	1.2
방부제	적량
향	적량
색소	적량
트리에탄올 아민	0.1

[제형예 3] 크림의 제조

아래 표 4에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 크림을 제조한다.

성분	함량(중량%)
정제수	잔량
글리세린	8.0
부틸렌그리콜	4.0
유동파라핀	45.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
실시예의 효소 처리 에델바이스의 추출물	1.5
카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드	3.0
밀랍	4.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄	0.9
바세린	3.0
방부제	적량
향	적량
색소	적량
트리에탄올 아민	0.1

[제형예 4] 정제

실시예의 효소 처리 에델바이스의 추출물 10 mg, 대두 추출물 50 mg, 포도당 100 mg, 홍삼 추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 에탄올을 첨가하여 과립을 형성한 후 건조하고 정제로 타정한다.

[제형예 5] 건강 음료

실시예의 효소 처리 에델바이스의 추출물...................... 100 ㎎

구연산................................ 1000 ㎎

올리고당................................ 100 g

타우린.................................... 1 g

정제수............ ...................... 적량

통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.

Claims

효소 처리 에델바이스의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생 촉진제.
효소 처리 에델바이스의 추출물을 유효성분으로 포함하는 모발 성장 촉진제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 효소는 세포벽 분해효소인, 촉진제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 효소는 셀룰라아제 (cellulase), 크실라나아제 (xylanase) 및 아라비노푸라노시다아제 (arabinofuranosidase)로 이루어진 군에서 선택되는, 촉진제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 추출물은 효소를 에델바이스 총중량에 대하여 0.001 내지 1중량%로 첨가하여 얻어지는, 촉진제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 촉진제는 에델바이스 추출물을 촉진제 총 중량에 대하여 0.01 내지 10중량%로 포함하는, 촉진제.
제1항에 있어서, 상기 촉진제는 피부 상처를 치유하는, 피부 재생 촉진제.
제2항에 있어서, 상기 촉진제는 탈모를 방지하거나 또는 양모를 촉진하는, 모발 성장 촉진제.
제1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 촉진제는 항산화능을 가지는, 촉진제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 에델바이스 추출물은 클로로겐산 (chlorogenic acid)을 전체 추출물 중량에 대하여, 6ppm이상 포함하는, 촉진제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 에델바이스는 레온토포이움 속 (Leontopoium sp.)인, 촉진제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 에델바이스는 레온토포이움 알피늄(Leontopoium alpinum)인, 촉진제.