KR102126721B1 - 신규한 엔테로박터 애로진스 박테리오파지 Ent-AEP-1 및 이의 엔테로박터 애로진스 균과 엔테로박터 클로아카 균 증식 억제 용도 - Google Patents
신규한 엔테로박터 애로진스 박테리오파지 Ent-AEP-1 및 이의 엔테로박터 애로진스 균과 엔테로박터 클로아카 균 증식 억제 용도 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 엔테로박터 애로진스 균 및 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 능력을 갖고 서열번호 1로 표시되는 유전체를 갖는 것을 특징으로 하는 자연으로부터 분리한 시포비리대 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP), 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용한 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환을 예방 및 치료하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 엔테로박터 애로진스 균에 감염하여 엔테로박터 애로진스 균을 사멸시킬 수 있는 자연으로부터 분리한 박테리오파지 및 이를 유효성분으로 포함한 조성물을 이용한 엔테로박터 애로진스와 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지 및 처치하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 엔테로박터 애로진스 균을 사멸시킬 수 있는 능력을 갖고 서열번호 1로 표시되는 유전체를 갖는 것을 특징으로 하는, 자연으로부터 분리한 시포비리대 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP), 및 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용한 엔테로박터 애로진스와 엔테로박터 클로아카 균의 감염 방지 및 감염 후 처치 방법에 관한 것이다.
엔테로박터 애로진스(Enterobacter aerogenes) 균은 그람음성 막대균으로 크기가 약 1-3 μm이며 운동성과 관련된 편모를 가지고 있는 세균이다. 엔테로박터 애로진스 균은 사람과 동물의 장관에 상재균으로 존재하나 기회 감염으로 질환을 유발하는 병원균으로 알려져 있다. 엔테로박터 애로진스 균 감염은 원내에서 흔히 사용되는 항생제들을 이용한 처치로 치료가 가능하였으나, 최근 베타-락타메이즈(Beta-lactamase)를 갖는 항생제 내성 균주들이 보고되면서 위험성이 부각되고 있다.
엔테로박터 애로진스 균은 지역사회 감염균으로 호흡기감염, 요로감염, 균혈증, 피부감염 등 다양한 감염증을 일으킨다. 특히 면역력이 저하된 환자 혹은 중환자실 장기 입원 환자들의 경우에는 특히 이 균에 취약하여 이환율과 사망률이 높은 것으로 알려져 있다. 질병관리본부의 2014년 항생제 내성률 조사에서 엔테로박터 애로진스 균의 주요 분리원은 호흡기(26.9%)와 소변(26.3%)인 것으로 보고된 바 있다.
엔테로박터 클로아카(Enterobacter cloacae) 균은 장내세균과(the family Enterobacteriaceae)에 속하는 그람음성 막대균으로 물, 토양, 분변 등 인간이 생존하는 자연환경에 광범위하게 분포하고 있다. 엔테로박터 클로아카 균은 병원감염(Nosocomial infection)의 주요 원인균 중 하나이며, 엔테로박터 클로아카 균에 의한 감염증은 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli) 등에 의한 감염증 보다 빈도는 낮지만 임상적으로 더 위중한 증세를 보이는 것으로 알려져 있다. 국내에서 엔테로박터 클로아카 균에 의한 균혈증, 패혈증 및 내시경으로 인한 집단 감염 사례가 보고된 바 있으며, 해외의 경우 화상센터, 투석센터, 중환자실, 신생아 및 소아병동에서 패혈증 집단 발생의 주요 원인균으로 보고된 바 있다. 최근 광범위 세팔로스포린(extended-spectrum cephalosporins) 내성 균주가 출현 및 만연하고 있어 임상적으로 위험성이 증가되고 있다.
엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염 방지나 처치 목적으로 다양한 항생제들이 사용되어 왔으며, 항생제 오남용에 따른 내성균의 출현이 더욱 증가하고 있는 추세이다. 따라서 기존 항생제와는 다른 특성을 갖는 약물의 개발이 시급한 실정이다.
최근 세균성 감염질환의 대처 방안으로 박테리오파지(Bacteriophage)의 활용이 크게 주목을 받고 있다. 특히 자연친화적 방식의 선호로 인하여 박테리오파지에 대한 관심은 어느 때보다 높다고 할 수 있다. 박테리오파지는 세균에 감염하는 아주 작은 미생물로서 보통 파지(Phage)라고 줄여서 부르기도 한다. 박테리오파지는 세균에 감염(Infection)한 후에 세균의 세포 내부에서 증식을 하고, 증식 후 자손 박테리오파지들이 세균 밖으로 나올 때 숙주인 세균의 세포벽을 파괴하는 방식으로 세균을 사멸시키는 능력을 갖고 있다. 박테리오파지의 세균 감염 방식은 매우 특이성이 높아서 특정 세균에 감염할 수 있는 박테리오파지의 종류는 일부로 한정된다. 즉, 특정 박테리오파지는 특정 범주의 세균에만 감염할 수 있고 이로 인하여 특정 박테리오파지는 특정 세균만을 사멸시키며 다른 세균에는 영향을 주지 않는다. 이러한 박테리오파지의 세균 특이성은 목적으로 하는 세균에 대해서만 항균효과를 제공하고 환경이나 동물 내의 상재균들에는 영향을 초래하지 않는다. 통상적으로 세균 처치에 널리 활용되던 기존의 항생제들은 여러 종류의 세균들에 대하여 동시에 영향을 끼쳤다. 이로 인하여 환경오염이나 동물의 정상 세균총 교란 등의 문제를 초래하였다. 이와는 달리 박테리오파지는 특정 세균에 대해서만 작동하므로 박테리오파지 사용에 의해서 체내 정상균총 교란 등이 발생하지 않는다. 따라서 박테리오파지 사용이 항생제 사용에 비교하여 매우 안전하다고 할 수 있고, 그만큼 사용에 의한 부작용 초래 가능성이 상대적으로 크게 낮다.
박테리오파지는 1915년 영국의 세균학자 Twort가 포도상구균(Micrococcus) 집락이 어떤 것에 의해 투명하게 녹는 현상에 대한 연구를 수행하면서 발견되었다. 또한, 1917년에는 프랑스의 세균학자 d'Herelle이 이질환자 변의 여과액 중에 적리균(Shigella dysenteriae)을 녹이는 작용을 가진 것이 있다는 것을 발견하고 이에 대한 연구를 통해 독립적으로 박테리오파지를 발견하였으며, 세균을 잡아먹는다는 뜻에서 박테리오파지라고 명명하였다. 이후 이질균, 장티푸스균, 콜레라균 등 여러 병원성 박테리아에 대한 박테리오파지가 계속적으로 발견되었다.
세균을 사멸시킬 수 있는 특별한 능력으로 인하여 박테리오파지는 발견 이후부터 세균 감염에 대응하는 효과적 방안으로 기대를 모았으며 관련하여 많은 연구들이 있었다. 그러나 Fleming에 의해 페니실린이 발견된 이후, 항생제의 보급이 일반화되면서 박테리오파지에 대한 연구는 일부 동유럽 국가들 및 구소련에 한정되어서만 명맥이 유지되었다. 그런데 2000년 이후에 항생제 내성균의 증가로 인하여 기존 항생제의 한계성이 나타나고, 기존 항생제의 대체 물질로의 개발 가능성이 부각되면서 다시 박테리오파지가 항-세균제로 주목을 받고 있다. 특히 최근 항생제 사용에 대한 정부 차원의 규제가 전 세계적으로 강화됨에 따라 박테리오파지에 대한 관심이 더욱 높아지고 있으며 산업적 활용 사례도 점차 증가하고 있다.
앞에서 설명했듯이 박테리오파지는 세균에 대한 특이성이 매우 높다. 이러한 박테리오파지의 세균에 대한 높은 특이성으로 인하여 박테리오파지는 동일 종(Species)에 속하는 세균들이라 할지라도 그 일부 주(Strain)에 대해서만 항균효과를 발휘하는 경우가 많다. 또한 대상 세균 주에 따라 발휘되는 박테리오파지의 항균력 세기 자체도 다를 수 있다. 이러한 이유로 특정 종류의 세균에 대하여 효과적 제어법을 확보하려면 다양한 종류의 유용 박테리오파지들의 확보가 필요하다. 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 대응하여 효과적인 박테리오파지 활용법을 개발하기 위해서도 당연히 엔테로박터 애로진스 균 및 엔테로박터 클로아카 균에 대하여 항균효과를 제공할 수 있는 여러 종류의 다양한 박테리오파지들의 확보가 필요하고, 더 나아가 확보한 다양한 유용 박테리오파지들 중에서 항균력의 세기나 항균범위 측면에서 비교우위에 있는 박테리오파지의 선발 활용도 필요하다.
이에, 본 발명자들은 엔테로박터 애로진스 균과 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 자연으로부터 분리된 박테리오파지를 이용하여 엔테로박터 애로진스 균 및 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지 및 처치하는 데에 활용될 수 있는 조성물을 개발하고, 또 이 조성물을 이용하여 엔테로박터 애로진스 균과 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지 또는 처치하는 방법을 개발하고자 노력한 끝에, 이에 적합한 박테리오파지를 자연으로부터 분리하고, 이 분리된 박테리오파지를 타 박테리오파지와 구별하여 특정 지을 수 있도록 유전체(Genome)의 유전자 서열 정보를 확보한 후에 상기 박테리오파지를 유효성분으로 한 조성물을 개발한 다음 이 조성물이 엔테로박터 애로진스 균과 엔테로박터 클로아카 균의 감염 방지 및 처치에 효과적으로 활용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 능력을 갖고 서열번호 1로 표시되는 유전체를 갖는 것을 특징으로 하는 자연으로부터 분리한 시포비리대(Siphoviridae) 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP)을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP)을 유효성분으로 포함하는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지하는 데에 활용 가능한 조성물 및 이 조성물을 이용한 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염 방지 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP)을 유효성분으로 포함하는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환을 처치하는 데에 활용 가능한 조성물 및 이 조성물을 이용한 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환을 처치하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP)을 유효성분으로 포함하는 조성물들을 이용한 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균 감염 방지 또는 처치 목적의 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP)을 유효성분으로 포함하는 소독제를 제공하는 것이다. 이 소독제는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균 감염 방지 목적으로 활용될 수 있으며 특히 병원감염 방지에 효과적이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP)을 유효성분으로 포함하는 항생제를 제공하는 것이다. 이 항생제는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균 감염 방지 및 처치에 효과적이다.
본 발명은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 능력을 갖고 서열번호 1로 표시되는 유전체를 갖는 것을 특징으로 하는 자연으로부터 분리한 시포비리대 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP), 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용한 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염 방지 및 처치 방법을 제공한다.
박테리오파지 Ent-AEP-1은 본 발명자들에 의해 분리된 후에 2018년 06월 29일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁되었다 (수탁번호 KCTC 13569BP).
또한, 본 발명은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지 또는 처치하는 데에 활용될 수 있는 박테리오파지 Ent-AEP-1을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물의 활용예로는 소독제나 항생제를 제시할 수 있으나, 이에 국한되지 않음은 자명하다.
본 발명의 조성물에 포함되는 박테리오파지 Ent-AEP-1은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 효과적으로 사멸시키므로 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 호흡기감염, 요로감염, 균혈증, 피부감염 등의 질환의 예방(감염 방지)이나 치료(감염 처치)에 효과를 나타낸다. 따라서 본 발명의 조성물은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환에 대한 예방 및 치료 목적으로 활용될 수 있다. 본 명세서에서의 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환은 호흡기감염, 요로감염, 균혈증, 피부감염 등을 포함한다.
본 명세서에서의 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균은 기존 항생제에 대하여 민감하든지 또는 기존 항생제에 대하여 내성을 가질 수 있다. 즉, 기존 항생제에 대한 내성 획득 여부는 상관이 없다.
본 명세서에서 사용된 "방지" 또는 "예방"이라는 용어는 (ⅰ) 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균이 체내로 유입되는 것을 억제하거나 체내에 유입된 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 증식을 억제하는 방식으로 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지하는 것; 또는 (ⅱ) 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균 감염에 의한 질병으로의 발전을 억제하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 "처치" 또는 "치료"라는 용어는 (ⅰ) 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발된 질환의 억제; 또는 (ⅱ) 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발된 질환의 병적상태를 경감시키는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서의 "분리", "분리한" 또는 "분리된"은 자연 상태로부터 여러 실험 기법을 활용하여 박테리오파지를 분리하는 것과 타 박테리오파지와 구별하여 본 발명의 박테리오파지를 특정 지을 수 있는 특징을 확보하는 일을 지칭하며, 이에 더하여 생물공학기술로 본 발명의 박테리오파지를 산업적으로 활용할 수 있게끔 증식시키는 것도 포함한다.
본 발명의 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 질환 부위에의 도포 또는 분무하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 밖에 경구 투여 또는 비경구 투여를 통해 투여할 수도 있으며, 비경구 투여의 경우 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 대상이 되는 동물 및 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사나 수의사는 소망하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
본 발명의 조성물에는 박테리오파지 Ent-AEP-1이 유효성분으로 포함된다. 이때 포함되는 박테리오파지 Ent-AEP-1은 1× 101 pfu/㎖ ~ 1× 1030 pfu/㎖, 또는 1× 101 pfu/g ~ 1× 1030 pfu/g으로 포함되며, 바람직하게는 1× 104 pfu/㎖ ~ 1× 1015 pfu/㎖, 또는 1× 104 pfu/g ~ 1× 1015 pfu/g으로 포함된다.
본 발명의 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 됨으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수도 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수도 있다.
본 발명의 조성물은 활용 방식에 따라, 이에 국한되지 않지만 소독제나 항생제로 구현될 수 있다. 본 명세서에 있어서, ‘항생제’라는 용어는 방부제, 살균제 및 항균제를 총칭한다.
이러한 활용 목적에서의 효율성을 높이기 위하여 다른 세균종에 대하여 항균활성을 제공할 수 있는 박테리오파지들이 본 발명의 조성물에 추가될 수 있다. 또한 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 대하여 항균활성을 갖는 다른 종류의 박테리오파지들도 추가될 수 있다. 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 대하여 항균활성을 갖는 박테리오파지라 하더라도 항균력의 세기나 항균범위 측면에서 서로 간에 차이가 있으므로 이들의 적절한 조합은 그 효과를 극대화 할 수 있다.
본 발명의 박테리오파지 Ent-AEP-1을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용한 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염 방지 또는 처치 방법은 기존의 항생제 등에 기반을 둔 방식에 비하여 엔테로박터 애로진스 균 및 엔테로박터 클로아카 균에 대한 특이성이 매우 높다는 장점을 제공할 수 있다. 이는 다른 유용한 상재균에는 영향을 주지 않으면서도 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염 방지 또는 처치 목적으로 사용할 수 있음을 의미하며, 이의 사용에 따른 부작용이 매우 적다는 것을 의미한다. 통상적으로 항생제 등을 사용하면 일반 상재균들도 피해를 함께 입게 되어 결과적으로 사용에 따른 다양한 부작용이 나타난다. 한편, 박테리오파지는 항균활성을 발휘할 수 있는 세균 종이 같다 하더라도 항균효과 발휘에 있어 항균력의 세기나 항균범위[엔테로박터 애로진스 균종 또는 엔테로박터 클로아카 균종에 속하는 여러 세균 주(Strain)의 측면에서 개별 세균 주에 대하여 박테리오파지의 항균활성이 발휘되는 범위. 통상적으로 박테리오파지는 같은 세균 종(Species)에 속하는 일부 세균 주(Strain)에 대하여 항균활성을 발휘할 수 있음. 즉, 같은 세균 종에 속한다 하더라도 개별 세균 주에 따라 박테리오파지에 대한 감수성에서 차이가 있을 수 있음] 측면에서 차이가 있으므로 본 발명은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 대한 항균력을 갖는 타 박테리오파지에 비교하여 차별적 항균효과를 제공할 수 있다. 이는 산업현장 활용 시에 그 효과에 있어 큰 차이를 제공한다.
도 1은 박테리오파지 Ent-AEP-1의 전자현미경 사진이다.
도 2는 박테리오파지 Ent-AEP-1의 엔테로박터 애로진스 균 및 엔테로박터 클로아카 균에 대한 사멸능을 보여주는 실험 결과이다. 위쪽은 박테리오파지 Ent-AEP-1이 포함되지 않은 완충액(Buffer)만을 점적한 것이고, 아래쪽은 박테리오파지 Ent-AEP-1이 포함된 액을 점적한 것이다. 아래쪽에서 관찰되는 투명한 부분은 시험대상 세균이 박테리오파지 Ent-AEP-1의 작용에 의하여 용균되어 결과적으로 형성된 용균반이다.
도 2는 박테리오파지 Ent-AEP-1의 엔테로박터 애로진스 균 및 엔테로박터 클로아카 균에 대한 사멸능을 보여주는 실험 결과이다. 위쪽은 박테리오파지 Ent-AEP-1이 포함되지 않은 완충액(Buffer)만을 점적한 것이고, 아래쪽은 박테리오파지 Ent-AEP-1이 포함된 액을 점적한 것이다. 아래쪽에서 관찰되는 투명한 부분은 시험대상 세균이 박테리오파지 Ent-AEP-1의 작용에 의하여 용균되어 결과적으로 형성된 용균반이다.
이하, 실시예에 의거하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 이들 실시예는 본 발명의 예시일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1: 엔테로박터
애로진스
균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지의 분리
엔테로박터 애로진스 균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지의 분리에는 자연 환경으로부터 확보된 시료들을 이용하였다. 한편, 박테리오파지 분리에 사용된 엔테로박터 애로진스 균은 항생제내성균주은행으로부터 분양받아 사용하였다(분양번호 CCARM16001).
박테리오파지 분리 과정을 상세히 설명하면, 엔테로박터 애로진스 균을 1/1,000 비율로 접종한 TSB(Tryptic Soy Broth) 배지(카제인 다이제스트, 17 g/L; 소이빈 다이제스트, 3 g/L; 덱스트로스, 2.5 g/L; NaCl, 5 g/L; 디포타슘 포스페이트, 2.5 g/L)에 수집된 시료를 함께 첨가한 다음 37℃에서 3-4시간동안 진탕배양 하였다. 배양 후, 8,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수된 상등액에 엔테로박터 애로진스 균을 1/1,000 비율로 접종한 다음 37℃에서 3-4시간 동안 또 다시 진탕배양 하였다. 박테리오파지가 시료에 포함되어 있었을 경우에는 박테리오파지의 수(Titer)가 충분히 증가될 수 있도록 이러한 과정을 총 5회 반복 실시하였다. 5회 반복 실시 후에 배양액을 8,000 rpm에서 20분간 원심분리 하였다. 원심분리 후, 회수된 상등액에 대하여 0.45 μm의 필터를 이용하여 여과를 실시해 주었다. 이렇게 하여 얻어진 여과액을 사용한 통상의 점적 실험(Spot assay)을 통하여 엔테로박터 애로진스 균을 사멸시킬 수 있는 박테리오파지가 있는지를 조사하였다.
상기 점적 실험은 다음과 같이 실시되었다. TSB 배지에 엔테로박터 애로진스 균을 1/1,000 비율로 접종한 다음 37℃에서 한밤동안 진탕배양 하였다. 이렇게 하여 준비된 엔테로박터 애로진스 균의 배양액 3 ㎖(OD600이 1.5)을 TSA(Tryptic Soy Agar) 평판배지(카제인 다이제스트, 15 g/L; 소이빈 다이제스트, 5 g/L; NaCl, 5 g/L; 아가, 15 g/L)에 도말(Spreading)하였다. 도말한 평판배지를 클린벤치(Clean bench)에서 약 30분 정도 방치하여 도말액이 건조되게 하였다. 건조 후 앞에서 준비한 여과액 10 μl를 엔테로박터 애로진스 균이 도말된 평판배지 위에 점적하였다. 이를 30분 정도 방치하여 건조시켰다. 건조 후 점적한 평판배지를 37℃에서 하루 정치 배양한 다음 여과액이 떨어진 위치에 투명환(Clear zone)이 생성되는가를 조사하였다. 투명환이 생성되는 여과액의 경우가 엔테로박터 애로진스 균을 사멸 시킬 수 있는 박테리오파지가 포함되어 있다고 판단할 수 있다. 이러한 조사를 통하여 엔테로박터 애로진스 균에 대한 사멸능을 가진 박테리오파지를 포함한 여과액을 확보할 수 있었다.
엔테로박터 애로진스 균에 대한 사멸능을 가진 박테리오파지의 존재가 확인된 여과액을 이용하여 순수 박테리오파지의 분리를 실시하였다. 순수 박테리오파지의 분리에는 통상의 용균반 분석(Plaque assay)을 이용하였다. 이를 자세히 설명하면, 용균반 분석에서 형성된 용균반 하나를 멸균된 팁을 이용하여 회수한 다음에 이를 엔테로박터 애로진스 균의 배양액에 첨가해 주어 4-5시간 동안 37℃에서 함께 배양하였다. 배양 후 8,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 얻었다. 얻어진 상등액에 50분의 1의 부피로 엔테로박터 애로진스 균의 배양액을 첨가해 준 다음에 다시 37℃에서 4-5시간 동안 배양해 주었다. 박테리오파지의 수를 증가시키기 위하여 이러한 과정을 최소 5회 이상 실시한 다음에 최종적으로 8,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 얻었다. 얻어진 상등액을 사용하여 다시 용균반 분석을 실시하였다. 통상 순수 박테리오파지의 분리가 상기 과정의 1회만으로는 달성되지 않기 때문에 이때 형성된 용균반을 이용하여 앞 단계를 전체적으로 다시 반복하였다. 이와 같은 과정을 최소 5회 이상 반복 실시하여 순수한 박테리오파지를 포함한 용액을 확보하였다. 통상적으로 순수 박테리오파지의 분리는 형성된 용균반의 크기 및 모양이 모두 유사하게 될 때까지 반복 수행하였다. 그리고 최종적으로는 전자현미경 분석을 통하여 박테리오파지의 순수 분리 여부를 확인하였다. 전자현미경 분석에서 순수 분리가 확인될 때까지 앞에 설명한 과정을 반복하였다. 전자현미경 분석은 통상의 방법에 따라 실시하였다. 이를 간단히 설명하면 다음과 같다. 순수한 박테리오파지를 포함한 용액을 구리 격자(Copper grid)에 묻히고 2% 우라닐 아세테이트(Uranyl acetate)로 역염색법(Negative staining)과 건조를 수행한 후에 투과전자현미경을 통하여 그 형태를 관찰하였다. 순수 분리한 박테리오파지의 전자현미경 사진이 도 1에 제시되어 있다. 형태적 특징으로 판단할 때, 신규 확보된 박테리오파지는 시포비리대(Siphoviridae) 박테리오파지에 속함을 확인할 수 있었다.
이런 방식으로 확인된 순수 박테리오파지를 포함한 용액은 다음의 정제 과정을 거쳤다. 순수 박테리오파지를 포함한 용액에 용액 전체 부피의 50분의 1의 부피로 엔테로박터 애로진스 균의 배양액을 첨가해 준 다음에 다시 4-5시간 동안 배양하였다. 배양 후 8,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 얻었다. 충분한 수의 박테리오파지가 포함된 액을 얻기 위해 이러한 과정을 총 5회 반복하였다. 최종 원심분리로 얻어진 상등액을 0.45 μm의 필터를 이용하여 여과한 다음에 통상의 폴리에틸렌 글리콜(Polyethylene Glycol; PEG) 침전 과정을 실시하였다. 구체적으로, 여과액 100 ㎖에 10% PEG 8000/0.5 M NaCl이 되게 PEG와 NaCl을 첨가한 다음에 4℃에서 2-3시간 동안 정치한 후, 8,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 박테리오파지 침전물을 얻었다. 이렇게 얻어진 박테리오파지 침전물을 완충액(Buffer; 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgSO4, 0.1% Gelatin, pH 8.0) 5 ㎖로 부유시켰다. 이를 박테리오파지 부유액 또는 박테리오파지 액이라 지칭한다.
상기 과정을 통하여 정제된 순수 박테리오파지를 확보할 수 있었고, 이 박테리오파지를 박테리오파지 Ent-AEP-1로 명명한 뒤, 2018년 6월 29일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁하였다(수탁번호 KCTC 13569BP).
실시예 2: 박테리오파지 Ent-AEP-1의 유전체 분리 및 유전체 서열 분석
박테리오파지 Ent-AEP-1의 유전체를 다음과 같이 분리하였다. 유전체 분리에는 실시예 1에서와 같은 방법으로 얻어진 박테리오파지 부유액을 이용하였다. 먼저 부유액에 포함되어 있을 수 있는 엔테로박터 애로진스 균의 DNA와 RNA를 제거하기 위해, 박테리오파지 부유액 10 ㎖에 DNase I과 RNase A를 각각 200 U씩 첨가한 다음에 37℃에서 30분간 방치하였다. 30분 방치 후에 DNase I과 RNase A의 활성을 제거하기 위해, 0.5 M 에틸렌디아민테트라아세트산(Ethylene diamine tetraacetic acid; EDTA) 500 μl를 첨가한 다음에 다시 10분간 정치시켰다. 그리고 이를 추가로 10분간 65℃에 정치시킨 다음에 박테리오파지 외벽을 와해시키기 위해 proteinase K(20 ㎎/㎖) 100 μl를 첨가한 후에 37℃에서 20분간 반응시켰다. 그 후 10% 도데실 황산 나트륨염(Sodium dodecyl sulfate; SDS) 500 μl를 첨가한 다음에 다시 65℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 1시간 반응 후, 이 반응액에 25:24:1의 구성비를 갖는 페놀(Phenol) : 클로로포름(Chloroform) : 이소아밀알코올(Isoamyl alcohol)의 혼합액 10 ㎖을 첨가해 준 후 잘 섞어 주었다. 그리고는 이것을 13,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 층이 분리되게 한 다음에 분리된 층들 중에서 위층을 취하여 여기에 1.5 부피비의 아이소프로필 알코올(Isopropyl alcohol)을 첨가한 다음에 13,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 유전체를 침전시켰다. 침전물을 회수한 후 침전물에 70% 에탄올(Ethanol)을 첨가한 다음에 다시 13,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 침전물의 세척을 실시하였다. 세척된 침전물을 회수하고 진공 건조 시킨 다음에 이를 100 μl의 물에 녹였다. 상기 과정을 반복하여 박테리오파지 Ent-AEP-1의 유전체를 다량 확보하였다.
이렇게 얻어진 유전체는 서울대학교 농생명과학공동기기원(National Instrumentation Center for Environmental Management)에서 Pac-bio 기기를 이용하여 차세대염기서열 분석(Next generation sequencing analysis)을 수행하여 박테리오파지 Ent-AEP-1의 유전체 서열 정보를 확보하였다. 최종적으로 분석된 박테리오파지 Ent-AEP-1 유전체는 51,529 bp의 크기를 가지며, 전체 유전체 서열은 서열번호 1로 제시되어 있다.
확보된 박테리오파지 Ent-AEP-1의 유전체 서열 정보를 기반으로 Web상의 BLAST를 이용하여 기존에 알려진 박테리오파지 유전체 서열과의 상동성(Similarity)을 조사해 보았다. BLAST 조사 결과, 박테리오파지 Ent-AEP-1의 유전체 서열은 클랩시엘라 박테리오파지 KOX-1의 서열(Genbank Accession No. KY780482.1)과 비교적 높은 상동성을 가지고 있는 것으로 확인되었다(query coverage: 88%, identity: 97%).
그러나 박테리오파지 Ent-AEP-1은 선형의 유전체를 가짐에 반하여 클랩시엘라 박테리오파지 KOX-1은 환형의 유전체를 가지고 있으며, 박테리오파지 Ent-AEP-1 유전체 상의 개방형해독틀(Open Reading Frame, ORF)의 개수는 80개임에 반하여 클랩시엘라 박테리오파지 KOX-1은 81개의 개방형해독틀을 가지고 있고, 유전체 내의 개방형해독틀의 배치도 상이하였기 때문에 두 박테리오파지는 분명한 유전적 차이를 갖고 있다고 판단할 수 있었다.
이러한 사실에 근거하여 박테리오파지 Ent-AEP-1은 기존 보고된 박테리오파지들과는 다른 신규한 박테리오파지라 결론지을 수 있었다. 이러한 사실과 함께 통상적으로 박테리오파지의 종류가 다르면 제공할 수 있는 항균력의 세기 및 항균범위가 다르다는 사실로부터 박테리오파지 Ent-AEP-1은 기존에 보고된 다른 박테리오파지들과는 다른 항균효과를 제공해 줄 수 있다고 판단할 수 있었다.
실시예
3: 박테리오파지
Ent
-
AEP
-1의 엔테로박터
애로진스
, 엔테로박터
클로아카
균에 대한
사멸능
조사
분리된 박테리오파지 Ent-AEP-1의 엔테로박터 애로진스 균에 대한 사멸능을 조사하였다. 사멸능 조사는 실시예 1에서 제시한 점적 실험을 통하여 투명환 생성 여부를 조사하는 방식으로 수행하였다. 사멸능 조사에 사용되어진 엔테로박터 애로진스 균주들은 한국의 항생제내성균주은행으로부터 분양을 받거나 본 발명자들에 의해 분리되어 엔테로박터 애로진스 균으로 동정된 것들로 총 4주였다. 박테리오파지 Ent-AEP-1은 실험에 대상이 된 엔테로박터 애로진스 4주 모두에 대하여 사멸능을 갖고 있었다. 또한, 박테리오파지 Ent-AEP-1의 엔테로박터 클로아카에 대한 사멸능을 점적 실험을 통하여 조사한 결과, 박테리오파지 Ent-AEP-1은 엔테로박터 클로아카 5주 중 1주에 대해서 사멸능을 갖는 것으로 확인되었다. 대표적 실험 결과가 도 2에 제시되어 있다. 한편, 박테리오파지 Ent-AEP-1의 항균력 조사를 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus), 보데텔라 브론치셉티카(Bordetella bronchiseptica), 엔테로코쿠스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 엔테로코쿠스 패슘(Enterococcus faecium), 스트렙토코쿠스 미티스(Streptococcus mitis), 스트렙토코쿠스 우베리스(Streptococcus uberis) 및 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa)에 대해서도 실시하였는데, 결과로 박테리오파지 Ent-AEP-1은 이들 균종들에 대해서는 사멸능을 갖고 있지 않았다.
이상의 결과로 박테리오파지 Ent-AEP-1은 엔테로박터 애로진스 균에 대하여 우수한 사멸능을 가지며, 다수의 엔테로박터 애로진스 균주들에 대하여 항균 효과를 발휘할 수 있음을 확인할 수 있었다. 또한 박테리오파지 Ent-AEP-1은 엔테로박터 클로아카에 대해서도 항균 효과를 발휘할 수 있음을 확인할 수 있었다. 이는 박테리오파지 Ent-AEP-1이 엔테로박터 애로진스 또는 엔테로박터 클로아카에 의해 유발되는 질환에 대한 예방 또는 치료 목적의 조성물의 유효성분으로 활용 가능함을 보여준다.
실시예
4: 박테리오파지
Ent
-
AEP
-1의 엔테로박터
애로진스
또는 엔테로박터
클로아카
균 감염 예방에 대한
실험예
본 발명에 있어 "감염 방지" 또는 "예방"이라는 것은 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균이 체내로 유입되는 것을 억제하거나 체내에 유입된 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 증식을 억제하는 방식으로 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지하는 것 또는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염에 의한 질병으로의 발전을 억제하는 것을 의미한다고 앞에서 설명한 바 있다. 따라서 본 발명에서 목적으로 하는 "예방" 효과를 제공하기 위해서는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 증식을 억제하거나 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시켜 그 수를 감소시킬 수 있는 능력이 있어야 한다. 본 실시예는 본 발명의 박테리오파지 Ent-AEP-1이 그러한 목적에 부합하는 능력이 있나를 조사하기 위하여 실시하였다.
9 ㎖의 TSB 배지를 담은 하나의 튜브에 1× 108 pfu/㎖ 수준의 박테리오파지 Ent-AEP-1 액 100 μl를 넣어주고, 다른 하나의 9 ㎖의 TSB 배지를 담은 튜브에는 동량의 TSB 배지만을 추가로 첨가하였다. 그 다음에 각 튜브에 600 nm에서 흡광도가 약 0.3 정도가 되도록 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 배양액을 넣어 주었다. 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균을 첨가한 후 튜브들을 37℃의 배양기에 옮겨 진탕배양하면서 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 성장 상태를 관찰하였다. 표 1과 표 2에 제시된 바와 같이, 박테리오파지 Ent-AEP-1 액을 첨가해 준 튜브에서는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 성장 억제가 관찰된 반면에 박테리오파지 액을 첨가하지 않은 튜브에서는 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 성장 억제가 관찰되지 않았다.
| 구분 | OD600 흡광도 값 | ||||
| 0분 | 30분 | 1시간 | 1.5시간 | 2시간 | |
| 박테리오파지 액 미첨가 | 0.3 | 0.52 | 1.28 | 2.12 | 4.41 |
| 박테리오파지 액 첨가 | 0.3 | 0.52 | 1.13 | 0.25 | 0.15 |
| 구분 | OD600 흡광도 값 | ||||
| 0분 | 30분 | 1시간 | 1.5시간 | 2시간 | |
| 박테리오파지 액 미첨가 | 0.3 | 0.41 | 1.03 | 2 | 3.6 |
| 박테리오파지 액 첨가 | 0.3 | 0.33 | 0.32 | 0.27 | 0.1 |
이 결과로부터 본 발명의 박테리오파지 Ent-AEP-1이 엔테로박터 애로진스 균과 엔테로박터 클로아카 균의 성장을 저해할 뿐만 아니라 엔테로박터 애로진스 균과 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시키는 능력까지 갖고 있음을 확인할 수 있었고, 이로부터 박테리오파지 Ent-AEP-1이 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균의 감염을 방지하는 목적의 조성물의 유효성분으로 활용될 수 있다고 결론지을 수 있었다.
실시예
5: 박테리오파지
Ent
-
AEP
-1을 이용한 엔테로박터
애로진스
균 또는 엔테로박터
클로아카
균의 감염
예방예
엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의한 감염 질환 유발 예방에 대한 박테리오파지 Ent-AEP-1의 효과는 다음과 같이 조사하였다. 생후 8주령의 생쥐 40마리를 한 그룹 당 10마리씩 총 4개 그룹으로 나눈 후에 각 그룹의 생쥐들은 5마리씩 실험용 생쥐 케이지에 분리 사육하면서 14일간 실험을 실시하였다. 대조군인 그룹 1과 그룹 2에 속하는 동물들에게는 시험 개시 첫째 날부터 종료일까지 매일 통상의 사료를 자유급이 하였고, 실험군인 나머지 2개 그룹 (그룹 3과 그룹 4)에 속하는 동물들에게는 실험 개시 첫째 날부터 종료일까지 매일 106 pfu/g의 함량으로 박테리오파지 Ent-AEP-1이 포함된 동일 조성의 사료를 자유급이 하였다. 박테리오파지가 포함된 사료는 농도(Titer)를 알고 있는 박테리오파지 부유액(Suspension)을 사료에 분무하여 건조시키는 방식으로 준비하였다. 박테리오파지의 투여를 사료와 같이 급이시키는 대신에 직접 경구투여로 투여할 수 있지만 위액에 의한 박테리오파지 손상을 감소시키기 위해 사료와 함께 급이하는 방식을 적용하였다. 실제 현장에서 활용할 때는 장용캡슐에 박테리오파지를 싸서 활용하거나 중화제와 같이 복용하는 방법을 적용할 수 있다. 그리고 시험 개시 8일째, 9일째, 및 10일째 되는 날에 그룹 1과 그룹 3에 속하는 모든 시험동물들에 대하여 엔테로박터 애로진스 균의 부유액 (103 cfu/ml)을 케이지당 20 ml씩 하루 2 차례 분무해 주었고, 그룹 2와 그룹 4에 속하는 모든 시험동물들에 대하여 엔테로박터 클로아카 균의 부유액 (103 cfu/ml)을 케이지당 20 ml씩 하루 2 차례 분무해 주었다. 엔테로박터 애로진스 균의 부유액은 다음과 같이 준비하였다. 엔테로박터 애로진스 균을 TSB 배지를 이용하여 37℃에서 18시간 배양한 후에 균체만을 회수하였다. 회수한 균체를 1× 103 cfu/ml이 되게끔 생리식염수(pH 7.2)에 부유시켰다. 엔테로박터 클로아카 균의 부유액은 다음과 같이 준비하였다. 엔테로박터 클로아카 균을 TSB 배지를 이용하여 37℃에서 18시간 배양한 후에 균체만을 회수하였다. 회수한 균체를 1× 103 cfu/ml이 되게끔 생리식염수(pH 7.2)에 부유시켰다. 시험 개시 8일째부터 시험 종료일 (시험 개시 14일째)까지 사망개체 수 및 활동성 저하 개체 수를 관찰하였다. 그 결과는 다음과 같았다.
| 그룹 | 활동성 저하 개체 수/사망개체 수 | ||||||
| D8 | D9 | D10 | D11 | D12 | D13 | D14 | |
| 그룹 1 | 0/0 | 1/0 | 3/0 | 5/0 | 6/1 | 6/1 | 5/1 |
| 그룹 2 | 0/0 | 0/0 | 2/0 | 4/0 | 6/0 | 7/1 | 6/1 |
| 그룹 3 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 |
| 그룹 4 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 |
이 결과로부터 본 발명의 박테리오파지 Ent-AEP-1이 엔테로박터 애로진스 균또는 엔테로박터 클로아카 균을 원인으로 하는 감염 질환의 예방에도 매우 효과적이라는 것을 확인할 수 있었다.
실시예
6: 박테리오파지
Ent
-
AEP
-1을 이용한 엔테로박터
애로진스
균 또는 엔테로박터
클로아카
균의 감염 질환
치료예
엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발된 감염 질환에 대한 박테리오파지 Ent-AEP-1의 치료효과는 다음과 같이 조사하였다. 생후 8주령의 생쥐 40마리를 한 그룹 당 10마리씩 총 4개 그룹으로 나눈 후에 각 그룹의 생쥐들은 5마리씩 실험용 생쥐 케이지에 분리 사육하면서 14일간 실험을 실시하였다. 7일간 순화과정을 거쳤는데, 이때에는 통상의 사료를 모든 시험동물들에 대하여 자유급이 하였다. 시험 개시 8일째에 그룹 1과 그룹 3에 속하는 모든 시험동물들에 대하여 경구투여로 엔테로박터 애로진스 균의 부유액을 투여 (109 cfu/mouse)하였고, 그룹 2와 그룹 4에 속하는 모든 시험동물들에 대하여 경구투여로 엔테로박터 클로아카 균의 부유액을 투여 (109 cfu/mouse)하였다. 엔테로박터 애로진스 균의 부유액은 다음과 같이 준비하였다. 엔테로박터 애로진스 균을 TSB 배지를 이용하여 37℃에서 18시간 배양한 후에 균체만을 회수하였다. 회수한 균체를 1× 1010 cfu/ml이 되게끔 생리식염수(pH 7.2)에 부유시켰다. 엔테로박터 클로아카 균의 부유액은 다음과 같이 준비하였다. 엔테로박터 클로아카 균을 TSB 배지를 이용하여 37℃에서 18시간 배양한 후에 균체만을 회수하였다. 회수한 균체를 1× 1010 cfu/ml이 되게끔 생리식염수(pH 7.2)에 부유시켰다. 균 투여 후 2시간 경과 시점부터 시험 종료 시까지 대조군인 그룹 1과 그룹 2에 속하는 동물들에게는 통상의 사료를 자유급이 하였고, 실험군인 나머지 2개 그룹 (그룹 3과 그룹 4)에 속하는 동물들에게는 106 pfu/g의 함량으로 박테리오파지 Ent-AEP-1이 포함된 동일 조성의 사료를 균 투여 후 2시간 경과 시점부터 시험 종료 시까지 자유급이 하였다. 박테리오파지가 포함된 사료는 농도(Titer)를 알고 있는 박테리오파지 부유액(Suspension)을 사료에 분무하여 건조시키는 방식으로 준비하였다. 박테리오파지의 투여를 사료와 같이 급이시키는 대신에 직접 경구투여로 투여할 수 있지만 위액에 의한 박테리오파지 손상을 감소시키기 위해 사료와 함께 급이하는 방식을 적용하였다. 실제 현장에서 활용할 때는 장용캡슐에 박테리오파지를 싸서 활용하거나 중화제와 같이 복용하는 방법을 적용할 수 있다. 균 투여일 (D8)부터 시험 종료일 (D14)까지 각 그룹에서의 사망개체 수를 관찰하였다. 그 결과는 다음과 같았다.
| 그룹 | 사망개체 수 | ||||||
| D8 | D9 | D10 | D11 | D12 | D13 | D14 | |
| 그룹 1 | 0 | 0 | 1 | 2 | 2 | 1 | 0 |
| 그룹 2 | 0 | 1 | 0 | 2 | 1 | 1 | 1 |
| 그룹 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 그룹 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
이 결과로부터 본 발명의 박테리오파지 Ent-AEP-1이 엔테로박터 애로진스 균또는 엔테로박터 클로아카 균을 원인으로 하는 감염 질환의 치료에도 매우 효과적이라는 것을 확인할 수 있었다.
이상의 결과로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
[수탁번호]
기탁기관명: KCTC
수탁번호: KCTC 13569BP
수탁일자: 20180629
SEQUENCE LISTING
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for preventing proliferation of Enterobacter aerogenes and
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<211> 51529
<212> DNA
<213> Bacteriophage Ent-AEP-1
<400> 1
cgagtggcat caacacaaag cgccggacgg ttccgatcgt ttatggcgga atggattggg 60
aggaggttta tgatttttgt caggatcacg taacgaagcc ctttatctgg acggcaccag 120
atggaagaat gggtgtattc gtcgtaacgg cagactctgt taccctcgcg ccgcagggcg 180
gtgggttatg cgaagtaaca gcagagtttg cggaacggtt ctcttcagcc ggatagcaca 240
aagcgccctt tacgggtgct tttttttggc ctatgatctg gagtcgacaa gaggaggaaa 300
tttatatgac aactaacgtt tcaaaagagt ttgcgaactg cttgcaaaag ctgttcccag 360
gcgagatctt aacgctgatt gacattgacg ccacaaagtt cggtgggcag gtctaccgat 420
tccacaacga gaatatcgcc tactcaaccg aagaactttt ggcggcggtt aacggcggca 480
cgctgacacc gaaggagatc acgtttcgcg gcgagcaata cggcccgcgc ccgttcggga 540
tcggtgggat tgcaatgtca agtgacggca cggtagaaaa gccaacgctg acggttagca 600
atattgatgc gcaagcgagt gctcttattc gctcctacaa cggcctcatg caagcgaaag 660
ttacggtgtg ggttttggtc aaggatttgc tgaaagaaga tggcaacgtg gctgatggag 720
attttcggcg gttcgtttac tatatcgaaa gacctaaaca ggttgacccg cagaaggcca 780
cgtttgagct aacatccgtc ttcgatatgg atggcttgat gattccggcc cgacagactc 840
aaaccgtttg ttattgggcg caacgcggct ggtacaaaac cgggaaggga tgcggttaca 900
acggacaaaa cggatacttt gacaaatacg ggaataaggt tgatgatccc agccaggatg 960
tttgcggtgg tcttgtttcg tcgtgcagat tacgattcgg aaatgaggct ttggattttg 1020
gcggttgcgc tactgcaacc ttgaaaagcg gacggtaata tgttaactcc aaaaatcaaa 1080
atgcagatca tgcagcatgc gaaggaagtt tacccgcatg agtgcgcagg gctggtaacg 1140
cagaaatcac gcgtgcagaa atatcaccga ctcgataacg tttcgccaga tcctgagaac 1200
gaatcaatgc cggacgaaac acagtacgcg ctggcgtcac tggaaggcga gccgatcgcc 1260
ttcgttcact cccacactgg cgacggggca accaccgttc cgagcgccac agatttatgc 1320
ttctgtgatg aatctggctt gtcgtgggtt atcgtgtcga ttccagaagg tgatatgcgg 1380
attatcgaac cgaagcgcag gccgctgatt ggtcgcccct gggctttggg cgcgtatgat 1440
tgctacggcc tggtgatgga ttttcacaag cgccacggcg tcacactaaa agatcggcga 1500
gtaccgttcg aatggtggaa gccggaatac aaagaggatc tttaccgcga ctactggcgc 1560
gaagatggat tcatcgaaaa cactggcgat cccgaagtag gcgatatgat tatcttccag 1620
cttcaggcgg acaagtggaa ccacgctggg atttacgttg gaaacaataa tatccttcac 1680
cacgccttcg gcaagctatc ccgccgcgat atctattccg ggtggtatga gcagcacaag 1740
gttttaattt gcagacataa ggatcttaaa catggcatca catacaaaga cgattaaact 1800
ttccggctcc ctgggacgtc ggttcggtgt attccataac ctcgcagtcg attcagtcgg 1860
cgaatgcatt cgggcgctat cctaccaggt ggaagggttt aaagccttca tgcagagcaa 1920
ggttggttct aacatgcgct ttggtatcgt cgcggacgga aaaccaatca gcacgaatga 1980
ctttgcaacg ttcgccgtag cgaaggaaat ccgaatcatc cccatcccga aggccagaaa 2040
gaacggcgga ttgttgcaga tcgttatcgg cgctgcgatt atggttgcag ccttcttcac 2100
tggcggtgca tcgctggcgg caatgggggc gttttcatcg gcggcgttta tggctggcgg 2160
cgcaatggtc ttgggtggcg ttatgcagat gattgcaccg cagatgggcg gcaatatgcg 2220
agcgagcgag tcgccggaaa ataaaccgtc gtatgctttc ggagggccga ttaacactac 2280
ggcggcgggt tatccaatcc agttgccata tggttacaga ttggctggcg gtgcgctgtt 2340
cggttcggga tcttacgccg aagacaacaa ctaattaagc gattcgcttt ttagcctggg 2400
gcatagcctc cgggcttttt gtcgtgtaca attgcaaaac tattaacagg aggctaaacg 2460
atgactaata tcaaggcccg caagggcggt tccagccagc cgcgaacccc ggtagaaatg 2520
cctgataacc tgatctcgaa agacaagatc aagttattgc tggccgtttc tgacggtgaa 2580
gtagtggatg acttcagcct gaagcagttg catttcggcg gcgttccggt tcagaacgaa 2640
gacgggagct ataactatga gggcgtcatt gcagaatttc gccccggcac gcaaacgcag 2700
agctacatcc agggcttcag tgaatcaagc gctgaattcc aggttgcacg cgatgtgacc 2760
tttaacacgc cgtacacgct gacggtatct aacaagaatc tttctgctat ccgcttccgc 2820
ctgttatggc cccgcgtgct gacgcaaaaa gataacggcg atatggtcgg ttcggtcgtt 2880
gagtacaaga tcgaaatggc ggttgacggt gcgagttatc aaacctactt gaccgacaaa 2940
atcgacggga aaaacacgac tggcggttac gatcgcagca tccgcgtaaa ccttccgcaa 3000
gacttcacgt cgcaggtgct tattcgcgta agccgaatta cgccggacgc tgacggggtg 3060
aaggtggtcg acgccttcca ggttcagtcc tacgctgagg tgatcgatgc aaaattccgc 3120
tatccgctga cggcaatgct ttacgtcgag tttgatagcg atctgttcca gaaccagatc 3180
ccgacaatct cgctcaagaa gaagtggaag attgtccagg ttccgagtaa ctacgaccct 3240
gttaacagga cgtatgccgg aacgtgggac ggaactttca aatgggcgtg gagcaacaac 3300
ccggcatggg ttctttacga cctgatcatg aatcagcgtt atgggttaga ccagcgcgag 3360
ttaggaatcc cggtcgacaa gtggtcgctc tatgaggtgt cgcaatactg tgatgagctt 3420
gtaccggaca atcgcggcgg tatggaaccg cgttacctga tggatatggt tgtgcagtcg 3480
caggttgaag ccttccagtt ggtgagggat gtttgttccg ccttccgtgg aatgacgttc 3540
tacaacgggg aaagcctttc gattatcgtc gacaagccac gcgatccggt ttacctgttc 3600
actgctgata acgtcgttga cggcgttttc gttcggacgt ttccaagcga aaagacgatg 3660
tacacgtcgt gcaacgtcat gttcgacgac gaagaaaacc agtacgaaca ggatattgaa 3720
ccagtattca acccggacgc agccatgcgg ttcggccaca acccgaccag cattacagcg 3780
atcggttgca ccagacggac agaagcaaac cgccgtgggc gctggattct gcaaacgaac 3840
ctaagcgcaa ccaccgtttc gttttctact ggcctggaag gcatgatccc gtcatgcggc 3900
gatgtgattt atgttgcaga tccgcactgg caatcagcct tcaacctggt gttgtcaggt 3960
cgcattatgg aagtaactgg aacgcaggtt ttcctggctt tccgctgcga cgcgaaggcg 4020
ggcgatacgc tgattctgaa cactgacgac ggtaagccat tgcgccgaac cattgccagc 4080
gtatcagcag acggaaaaac tctgacgcta aacgtgggat ataacttcga cgttgcgccg 4140
gacagcgtat tccttatcga aagtgaccaa ctggcggctg aacagtacgt tgttaccagg 4200
attgagaagg ggagcgatga cgaagaattt actttcgcca tcacagccac ccaatacaac 4260
ccgaacaagt acgacgcgat cgacaacggc gtaatcactg acgaccgccc aacgtcggtt 4320
gttgacccgg attcaatggg agcgccggaa aacgtgtcga ttagttcatt ctcacgcatt 4380
gtgcagggga tgagcgtaga gacgatggta atcggctggt ctgccgtgca gtacgcaaaa 4440
ctttacgagg tgcaatggcg taaggatggc ggcaactgga acaacgtgcc gcgcacagcg 4500
acaacgcagg ttgacattga agggatttat gctggcgaat accaggcgcg cgtaaggtgc 4560
attagcggcg gaaatatcgc gtctccgtgg tctgctttgg ctagtgcatc gctgaccggg 4620
aaaattggag cgccgaaagg gccaattaac cttttcgcgt cggataatga aatctttggg 4680
attcgcgtta agtgggccat gcctgaaggt gcagaagata cggcatacat tgagctttac 4740
cagtcgcaaa gcggaaccga tcaggatgca agcctgctca ctctgattcc ttatccggcg 4800
gctgaatact ggcactcaat tttgcccgct ggctatgtga actggtacaa ggcgcgaagt 4860
gtagacagga tcggcaacgt ttcaccttgg actggttacg ctcgcggtat gtcatcgact 4920
gacgttagca ttatcacaga tcagatcctg gatgaaattc tggatagcga cgccatgaag 4980
gaattgcagg agagcgcaca ggacagcgcg tctaaactca acgactacgc gaacagcatc 5040
attcagaacg cgttagccaa cgatgcagac gtcagagtta tgcgcaagga aaatggcaag 5100
cggaaggcgg aaatctcgca tactaccgtg ctgatcgcta acgagactga agcgagggcg 5160
gctgagatca cgcagcttaa aacgcagatt gatgaggata tcacgtcgca gattacgatc 5220
ctgaacgaag cgctggcaga tgaaagcgaa acgcgagcaa cccaaattaa ccagttgcaa 5280
acacaatttg gggaggatat ggaagcaggg tttacgcagg ttaacgaggc gatcgcaaac 5340
gaaagtgaag cgcgcgcaac gtccgaggca gcgttagatg ccaaaatcgg cgagaactcc 5400
gcagcgctgg cgcaaaagct ggattcgtgg gctaatgttg atggcgtagg ttccatgtac 5460
acaatgaagt tagggctaac gtacaacgga caggaataca attcagggat ggcgttgcag 5520
cttactgcgc agggaaacaa cgttgtttca caagtgctgt ttattgccga tagatttgct 5580
attatccgca atgctgcatc cggcgcttac acgcttccgt ttgttgtgca gaatgaccag 5640
gtgttcatga ataacacgct gattcaggat ggctcgatta ccaacgccaa gatcggacag 5700
tatatccagt ccaacaactt catttcgggc cagcaggggt ggagcatcaa caaatccggc 5760
gcgtctgaat tcaataacgt tgtcgttcgt ggcgcgctgt ttgctgcgtc tggtaacttc 5820
ggatttgatg gcggaaacgg tgtggtaatc aacggtaacg gcgtcaccgt caaccttgac 5880
ggcggcgggc gaattgtttt agggaggttc taatatggca agcggtttac ttatcgatct 5940
caatgatggt aatccggcga tgcaaatcac ggcgggcatg cgttgcccgt ctttttgcaa 6000
cctggttgct aacgcgtggg atgagaaagt ggttaacgtg gatggatatg tgccaggggc 6060
gcagattatc gtcatccctc gcgatccagt atccatccag aacagaggga cgaaccttgt 6120
tccaactatc gggatgcaaa gcggatactc gcagagcggt tcccagctta cgttttctac 6180
gtggtggtca gataattggg ggcgtgaccg actctatgat ttgacaatct gccagatcct 6240
gccgacggcc agcggccagg ggttatacat tgccgattcc accgacttta ccgcaatccc 6300
cgactcaacg cgggccgggt tttgcgtgtg ggccggaacg atcacgttta cagggcaatg 6360
gcgaactccc gataccggat acgaccgcaa taagtatatg gtgtttgctc gctggagcgc 6420
cgacggcgtg acggtcgaat atgacggaaa taacatctac gccaggaatg aaacgaacgg 6480
cgacgagggc gacgctacgg ttacaatgag ggtggcgatt ttcgccagcg gagttgcgcc 6540
acaggcggga accggattga actttttcaa cgcggcgggc caatgcacat tctccacggt 6600
tcgccgtccg tttatcttca ggaaccgatt ctataacccg tcgtgggatt atcaggatat 6660
cggcgcggga atgattttgc tgggcaggta tggattcaga agccgggtaa gtggtgatcg 6720
gtgcagggca aaatttgccg ggttaatgat gagcggtaac agcgtaagat gtgccagcgg 6780
catcacaaaa tctaactgga cgtcaagata tagcgtcgtc caggatcgat tagtcggcat 6840
gagcgttccc attattgaaa acatgtatta aaagaaaagg ggccaatcgg cccctttgtt 6900
acatcccaag tttctcctca atagctgaaa gacgcgcttc gaatcccttc gcgataaaca 6960
tgttaagttc atcaagtcgg aacgaatagc gatcgccagc cgggatggtt ttgtagatcg 7020
ggttctctgt gccgtcctct ttcgccgggc cgtagtggtc aacaacggtt gtttcttccc 7080
acttgtcgta acagatgaaa gcgtaatcga aaggctttaa tccgtgactt tccataatct 7140
ccattgcgcg ctgaaccgtt aacccgcagt gctcgcggac gtcgttcata tccgcttgct 7200
ccttccacgt ccaaaaaccg atctccttcg caatttcctt cgccgcttcc gtttcaggat 7260
ccgccatcat tcgaacgtca tttttcaacc gcgcatcgga agtgttgatt gttccgttta 7320
cggcgtaaat gttcattgcc cggccagatc cccagcctaa attgtatctg ttatccgcag 7380
atggcgtaag cgtaccgttg tggtcaacca tccagcgagg agttcggcca atcgatcctg 7440
tttcgcacgt ttcaaataca acttgcgttg gagttgatgt tttaccccac ccagcagcgg 7500
ctttaatgga aactgaaccc ctcattgaat caaatttctc gccatcataa ccggacgcgc 7560
cgatatagaa agtagatcct ggctgtgccg caccaatgta tcttgtggta tcggaaaggc 7620
taccgtcgca ccacatagca cgaattgctg gcgatgatgt ggcggaacca cgcggggcga 7680
tcatgttaat ttcaggagct tcgcctccta caattttcaa ccctcgcccg tcctggttag 7740
tcggagcatt aaacgccgga acgactgcgt tcaacgtctc aaagctacgc acaagcccaa 7800
gatcagggtg catagcgccg tctggaacca gccaaagatc gccattatcc gacagcctga 7860
acgccggaac cctatcgcta atcgtcttac ctttaggggt tacaagcaag cgaatccagc 7920
cgccgtgatt ggttccagat gtatcgccag cgccaaggaa atgcaaggcc gcgttactgt 7980
gctccgtgta gtcagatcct aaccacgggc gagaaccata accacctaaa agctgattgt 8040
tcttagttac gctattggac gcccctcgcg catagttatg gaatacagca gaaccgccag 8100
ccgtattctc aatcccgaaa gagcattccg ttgcgttgtc gccgataaag ttaacgccaa 8160
ctccggttgt cgcggtcgtc tccttcagtg gcaatttctg cgacgcggta acatcaacac 8220
cgccgcgaag gttggatgca ccattgacgc ggagcgtgct taacatcgta actgcattgc 8280
ggaaagtggc attcaacccg gtaacggtaa agtttgccgc atcaaaaaca acctgcttcg 8340
cgctgttcat atcgccattc gggcggaagt acatgccttg accgtcttta gggatggagt 8400
aaacgatcgc gttgttgtta ttggcccgaa ctacggcacc gttcagggtt agcgtagcgt 8460
ttccgccagg gacggagatc gcttgcggtt gactgaacgt gttagctacg ttggtgcggg 8520
caaccgtatt atcattagat gccaggtaat cagcgggtga attgtataca atccccgttg 8580
gctccgtggt aatccatgaa taaccagtgc gatcgatgat cggcccggta atcaacccat 8640
tattagattg cacgttcaaa cggtttaacc acataactgg aaagtaaccg ttaggcgcga 8700
gcaaataaac atcaaaagat ccgtcagtgt ttttcacaac ccccaacttc aaacgtgacg 8760
tgctatttga tgcaggaatg agtgcgcatt gagtaaagtt tgcgtcaata ttattactgg 8820
ttagcgtatc aggaagaccc cggccagaaa tagaaaagat atcgatcggg agattcgccg 8880
aaccgaagtt agcgccgcca ccaataataa attgcgcaaa acagtttgac tgtccagcgt 8940
tcttaacgtt ggcaatcttc atccacgccc gcgagcgacc tggcgaggtt ggcagcttat 9000
ccggagcttg aacgccagcc acaagatcga cagtctggtt ataaagatct tgagtctgat 9060
cccttgctga cccggcttgt tgtcgtgctg ttagcgccgc ttgctccgat gccttagagt 9120
tagtttctga agttttcgcc gccccttctg acgcagcagc cgccgctgcg tttgtcgccg 9180
atgcttctgc gtccgcctta acctgatcgg ccaattcctg caaagcattg agatcgaaat 9240
ctttaaagaa ttctaacgct tcagcaataa cagtttcttg cgattgatag tagcgcagcg 9300
tttcagcaac atcttgcgcc aggccgtcaa cggtcagcga gtcgcttaaa aggatcgcgt 9360
aatcgctgga cgggacaacc gcgccgtttg tggtgatggc gttaatttgc gtatcactga 9420
caaccttgtt aatcaccgcc atctgaatcg gcgacgataa aaacatgatt gttgagcctg 9480
ggcgaatgag cgataaggct gattgccact tcgtgccagt cccggtgata acgccgtttg 9540
cgtccatcgc ggctttgcct tgtctgtata gtgccatttt tagacctctt ttggttggtt 9600
gagtaacgca gataatagca tcaatgaagc aataaaaaaa ggagccttgc ggcccctttg 9660
gttgtcaaat cagaacggga tatcatcatc gaaatccatg ccctgattac caccaccgct 9720
ttgcggcttc ggttgttgtt gttgcggctt cggttgctga ggctggcccc acccaccctg 9780
ctgattaccg ccgccctgcg ttggttcgcg ctggctgaat tccagttgcg gcataatcat 9840
ttcattgtgg ctgtaagttg cgccgttgtg ctcgcggttt acgatctgaa gtgtccggca 9900
ggttacgcta ataaccttgt cgacctgcaa cgcttcatcg taccacgcaa tcatgctttc 9960
cttcgcgaag aagacagcgc gatagttggt gtatacagtt tcgtcctggc cgtcgcgatt 10020
gcggatcttc attcgctccg acaggtcgac cgcatacatc ttccacggcc cgttattgtt 10080
gctgccctct ttgacgtaag gcgcttttcg gattacccct gttacaacat gcattgtttt 10140
tcctatgggg cggtttcccg cccggttaag ttagttgaaa gatgagatat cttgtgcttc 10200
aggttcaggc tttgattcta cctgttccgg ctcacgtttc gcaacctctt gcggcttgcc 10260
ggggttaaat ccgttcgctg gcgtcacttt tagttgtgcc tggcgcttcg tgatatcgtc 10320
ttccgtcacc ttccattccg caggcgtcaa cgtctgttta gccagcttgt aaatctcgcg 10380
gagagattcg aggtcttcgc acgcatcaat gcgttttttg aagtcttgcg gcttcatctt 10440
cgcgatctct gcgtcatcgt cggcctgctt gatgcccagc gcggcggcta acgcataacg 10500
gcgagcgtat gaggttgtag agccatacgc ttgctcaacg gttttgctga tcggcatatt 10560
gaactgaaac gccatccact ctccagattc gtgcagaaac atcgtttcaa ggtgcataac 10620
cttgtcggtg ctggtatcca tcattgattg aatgaccata attttgttct tttccagcga 10680
tggcccgatg gcgtcaagga tatcgccgag attggcgtag gtgttaccca ggtggctatt 10740
cttcccgctt ttcttcgcgg cgacgaaacc agacttcgct ttgattaacg caacggcgat 10800
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caaacgtcat gcttgacgca ttcggcgtac tggtgaatca cgctttgata ctgcttccgc 11040
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atctcgccga ggcttgagcc gctaacgtat ctggcgcacc aggagttagg atcgtggtaa 11880
tcatcgttgg ataattccgc gttggtgtat gccttaaaaa ttgcttcagc cattggtatc 11940
actccgtttg tggtttcgtt gcgttaagta tacgcatcac gattccaggt gcaaggcaaa 12000
aagtgctatt cgccaactgg tcaaaaagtg agcgaaattt acgtaagatt tagtaagatg 12060
catcttacgt tattttcttt atatatttca tgcggttaac ccaaatcggt aagatggtaa 12120
gatgcctata ggtaaatatt cacaggaaaa ttgggccgaa atcgcaaagc aaaatacata 12180
tacccggaga aaatcttacc tacacagata gatagagaga gagtaataat aataatatag 12240
ttagatatca tatacttata tatatcctat ggtgcgatat tggtcaaaaa gtgagcgaaa 12300
tttacgtaag atgcatctta cctaatctta cttaaagtgg tcgaccagtt ggtaagttgc 12360
tgaatttttg gcataaaaaa aggtaagact gaaattatca atcttaccta aaatttgttc 12420
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tttatatcgg taggccacga tctcaacgtt ggacgggatg atgcatgccc acacgtcaca 12660
cttaaacgag cttgcgatat tgaagtgcat cgcctccacc caagagcgag ccaggtaaat 12720
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cggcccgtct tcatgtacca gttgcatcgg gatagcatga aatagctctt gcctgccgtt 12900
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gtgatctgca atcttgccgt agtcgtaccc gttatcgcga gtaacctgct tgttgcgctt 13080
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aatattttgt agcgcctcgc gccacatccc cggcatgtat ggcaaaacct ctttttcgtc 13380
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gcagcggcgc gtaatcggct tgccgttgct gtcgaatctg agatccgggc ggcaaaatga 13560
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ggctgaaatc atgccgcgct taatccactg ctgaacaacc tggatgctaa cgcccaactc 13680
ctttgctgtt ttggcgatgc cgccgtatgc ctcgatcacc aattccatcc tggtagtcag 13740
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gtagaaatgc gggatcggtt agaccgcctg aagttcgacg ccacggcgga ggaaatcaac 40860
gaggcggaag acgatatcaa cgaggcggcg atcgcgttct ttgctgccgt cattgcggcg 40920
ctggcctcca ttggtctgac tatctaccgc ttcaactcta agcagtggct ggttattgcg 40980
ctggcggctg gcggtcgcga taatgaagcg gtcatgatgc tgaaggaatt cggcgctggt 41040
ggttatgagc agtggtatca gcaggcgctg aggaaatggc aggataccgc aaaggcatca 41100
atccagaagt taacagccga tatcgtcgct gactggacaa cgaaagttcg aaccgccaac 41160
aacatcggca agactcgcga gcagatcgat gaaatcatcg agggccgata cgccatttat 41220
ggcagttggt cgcgcaaccg ggcgagcggc attatcggaa gttttaacag tatgttgatg 41280
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cgcgaacgcg aaagccacat caaactagaa ggtaagcgac gccgcgtaaa cggtgacggc 41400
atttttcccg gcgaggagta cggttgccgt tgctgggcgg ttcccgattt taataacgta 41460
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cgctggcgtc ataccagggc aagccaatta ctttgggtca caagatggtc aacgccaaaa 41700
acgcgaaagg gctggtggtc ggatcctgtt ccggcgctgg caaagaggac gggatcgggg 41760
ttctggttcc ggtgatgatt tacgacgggg agtcgatcga gcaggcgaaa cagcgcgtag 41820
cggctgaatt gtccgttggg tacacctcga tcgatatcga caaaaaaggc tggggcaaca 41880
acgcgactgg cgaatactac ttcgatgaag acctaccgga aaacttcgaa gaactgaaaa 41940
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atgtggcgct tgtttttcgc gggcgtgcag gaattgcgaa attaaatctt gatagtgagc 42060
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acgaagacgc gaagcagaaa gttgtcgcga tcgtctccgc cgctggcatc aagtgcgacg 42360
gcctggacgt taaagcgatg aaagttgctt acatcaaaga agcggatggc cgcgacttgt 42420
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tggcaagcaa tcgctctaaa gtcttcgcca aaaaagaaga tggtgagcag gaagacaaga 42540
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aataccgtgc ggccttcggg ccgctacaaa atccaaatca aggagattta atcatggcaa 42660
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cgctgtacaa catcgacggc acttgtgccg ctgcgaatga cattttaact ggcgttctgg 42780
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cgttgaagcg atggcgtccg agaaaactgg taaagtgttc cgcctgggta acgcgtggtt 43620
tatctccatc gacgaaatca aagcaggtca ggcgctgggt tccagcctga gcgaccgcaa 43680
agcgtctctt gcacgcgaag gccatgaaac cctggttaac gatctggtgt tcaaaggttc 43740
cgcgccgcat aacatcgtta gcgtgttcga ccagccgaac attaaccgtc tgacctccgc 43800
aagctggact acgccggaaa tcgcattcag cgagttgcag gatctgatcg agacgatcga 43860
agatgtaacg ctgggccgtc accatgttac caacatcgtg atcccaccgt ccaagcgccg 43920
cctgctgacg cagaaaatgc cggacgttac ggaaagttac ctcgcgtggt tcaaagagaa 43980
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gtcaggatag caagggatta gagcaggggt aaggcagatc gtgaatgata tgttcacgga 51360
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Claims (4)
- 엔테로박터 애로진스 균 및 엔테로박터 클로아카 균을 사멸시킬 수 있는 능력을 갖고 서열번호 1로 표시되는 유전체를 갖는 것을 특징으로 하는, 자연으로부터 분리된 시포비리대 박테리오파지 Ent-AEP-1 (수탁번호 KCTC 13569BP).
- 제1항의 박테리오파지 Ent-AEP-1 (수탁번호 KCTC 13569BP)을 유효성분으로 포함하는, 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환 예방용 및 치료용 조성물.
- 제1항의 박테리오파지 Ent-AEP-1(수탁번호 KCTC 13569BP)을 유효성분으로 포함하는 조성물을 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균이 존재할 수 있는 주변 환경에 분사하거나 감염 우려 또는 감염된 사람을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환을 예방 및 치료하는 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 조성물이 소독제나 항생제와 같은 약학적 조성물 형태로 사람을 제외한 동물에 투여되는 것을 특징으로 하는, 엔테로박터 애로진스 균 또는 엔테로박터 클로아카 균에 의해 유발되는 질환을 예방 및 치료하는 방법.
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2021010595A1 (ko) | 2021-01-21 |
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