KR102052780B1

KR102052780B1 - 오로라 및 flt3 키나제 조절자

Info

Publication number: KR102052780B1
Application number: KR1020147024086A
Authority: KR
Inventors: 존 찰스 리더
Original assignee: 사름 리미티드
Priority date: 2012-02-06
Filing date: 2013-02-04
Publication date: 2019-12-05
Also published as: IL233988A; ES2560260T3; CA2863759A1; WO2013117522A1; BR112014019254B1; PL2812328T3; BR112014019254A8; GB201202027D0; EP2812328B1; JP2015511228A; CN104169277B; AU2013218167A1; RU2014131784A; MX2014009323A; DK2812328T3; EP2812328A1; SG11201404277WA; US9133180B2; US20150018367A1; CN104169277A

Abstract

본 발명은 오로라 키나제 및 FLT3 키나제의 활성의 조절자로서 유용한 하기 화학식 (1)을 갖는 화합물: 및 이의 염을 제공한다:
[화학식 (1)]

식 중, R¹은 수소 또는 C₁ _-2 알킬이고; R², R³ 및 R⁴는 동일 또는 상이하고, 각각은 수소, C₁ _-2 알킬, 플루오린, 염소, C₁ _-2 알콕시 및 트라이플루오로메틸로부터 선택되며, 단, R², R³ 및 R⁴ 중 둘 이하는 수소가 아니다. 또한 상기 화합물을 함유하는 약제학적 조성물 및 의약에서 및 특히 암의 치료에서의 그의 용도가 제공된다.

Description

오로라 및 FLT3 키나제 조절자{AURORA AND FLT3 KINASES MODULATORS}

본 발명은 키나제의 활성을 저해하거나 또는 조절하는 화합물, 및 특히 오로라(Aurora) 키나제 및 FLT3 키나제, 키나제에 의해 매개되는 질병 상태 또는 질환의 치료 또는 예방에서 화합물의 사용에 관한 것이다. 또한 화합물을 함유하는 약제학적 조성물, 그의 제조방법 및 신규한 화학적 중간체가 제공된다.

단백질 키나제는 세포 내에서 매우 다양한 신호 전달의 제어를 초래하는 구조적으로 관련된 효소의 거대 패밀리를 구성한다(Hardie and Hanks (1995) The Protein Kinase Facts Book . I and II, Academic Press, San Diego, CA). 키나제는 그들이 인산화되는 기질에 의해 패밀리로 범주화될 수 있다(예를 들어, 단백질-티로신, 단백질-세린/트레오닌, 지질 등). 이들 키나제 패밀리의 각각에 대체로 대응되는 서열 모티프가 확인되었다(예를 들어, Hanks and Hunter, FASEB J., (1995) 9. 576-596; Knighton, et al ., Science, (1991) 253, 407-414; Hiles, et al ., Cell, (1992) 70, 419-429; Kunz, et al ., Cell, (1993) 73, 585-596; Garcia-Bustos, et al ., EMBO J., (1994) 13, 2352-2361).

단백질 키나제는 그의 조절 메커니즘을 특징으로 할 수 있다. 이들 메커니즘은, 예를 들어 자기인산화, 다른 키나제에 의한 인산기전이, 단백질-단백질 상호작용, 단백질-지질 상호작용, 및 단백질-폴리뉴클레오타이드 상호작용을 포함한다. 개개의 단백질 키나제는 하나 이상의 메커니즘에 의해 조절될 수 있다.

키나제는 표적 단백질에 포스페이트기를 첨가함으로써 증식, 분화, 세포자멸사(apoptosis), 운동성, 전사, 번역 및 다른 신호처리를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다수의 상이한 세포 처리를 조절한다. 이들 인산화 사건은 표적 단백질 생물학적 기능을 조정하거나 또는 조절할 수 있는 분자 온/오프 스위치로서 작용한다. 표적 단백질의 인산화는 다양한 세포밖 신호(호르몬, 신경전달물질, 성장 및 분화 인자 등), 세포 주기 사건, 환경적 또는 영양상의 스트레스 등에 반응하여 일어난다. 적절한 단백질 키나제는, 예를 들어, 대사 효소, 조절 단백질, 수용체, 세포골격 단백질, 이온 채널 또는 펌프, 또는 전사 인자를(직접적으로 또는 간접적으로) 활성화시키거나 또는 불활성화시키는 신호처리 경로에서 작용한다. 단백질 인산화의 결함 있는 제어에 기인하여 비제어 신호처리는, 예를 들어 염증, 암, 알레르기/천식, 면역계의 질병 및 질환, 중추 신경계의 질병 및 질환, 및 신생혈관형성을 포함하는 다수의 질병에 연루되었다.

오로라 키나제

오로라 키나제 패밀리의 3가지 구성원은 지금까지 포유류에서 발견되었다(Nigg, Nat . Rev . Mol . Cell Biol. (2001) 2, 21-32). 오로라 A 키나제(또한 문헌에서 오로라 2로서 지칭됨)는 세포 주기의 G2 및 M기에 수반된 세린/트레오닌 키나제이며, 유사분열의 중요한 조절제이다. 오로라 키나제 A는 유사분열의 검사점 제어, 염색체 역학 및 세포질분열에서 부분적으로 역할을 하는 것으로 믿어진다(Adams et al., Trends Cell Biol ., (2001)11, 49-54). 키나제는 양극성 방추의 극에서 그리고 유사분열 장치의 중간 몸체에서 간기 세포의 중심체에서 위치된다.

다른 2가지의 기존에 공지된 오로라 키나제는 오로라 B(또한 문헌에서 오로라 1로서 지칭됨) 및 오로라 C(또한 문헌에서 오로라 3으로서 지칭됨)이다. 오로라 키나제는 고도로 상동성인 촉매적 도메인을 가지지만 그의 N-말단 부분에서 상당히 다르다(Katayama et al, Cancer Metastasis Rev . (2003) 22(4), 451-64).

오로라 키나제 A 및 B의 기질은 키네신-유사 운동 단백질, 방추 장치 단백질, 히스톤 H3 단백질, 동원체 단백질 및 종양 억제인자 단백질 p53을 포함하는 것으로서 확인되었다.

오로라 A 키나제는 방추 형성에 수반되는 것으로 믿어지며, 그들이 방추-관련 단백질을 인산화하는 경우 초기 G2기 동안 중심체 상에 국한되게 된다(Prigent et al ., Cell (2003) 114, 531-535). 문헌[Hirota et al, (Cell, (2003) 114, 585-598)]은 오로라 A 단백질 키나제가 고갈된 세포가 유사분열에 유입될 수 없다는 것을 발견하였다. 더 나아가, 다양한 종에서 오로라 A 유전자의 돌연변이 또는 파괴가 중심체 분리 및 성숙 결함, 방추 이탈 및 염색체 분리 결함을 포함하는 유사분열의 이상을 야기한다는 것을 발견하였다(Adams, 2001).

오로라 키나제 A는 대체로 대다수의 정상 조직에서 저수준에서 발현되며, 흉선 및 고환과 같이 고비율의 분화 세포를 지니는 조직은 제외된다. 그러나, 다수의 인간 암에서 상승된 수준의 오로라 키나제가 발견되었다(Giet et al ., J. Cell . Sci. (1999) 112, 3591 및 Katayama (2003)). 더 나아가, 염색체 20q13 영역에 대한 오로라 A 키나제 맵은 다수의 인간 암에서 증폭된 것으로 빈번하게 발견되었다.

따라서, 예를 들어, 유의한 오로라 A 과발현은 인간 유방, 난소 및 췌장암에서 검출되었다(문헌[Zhou et al ., Nat . Genet . (1998) 20, 189-193; Tanaka et al., Cancer Res . (1999) 59, 2041-2044 및 Han et al ., Cancer Res . (2002) 62, 2890-2896] 참조).

게다가, Isola(American Journal of Pathology (1995) 147, 905-911)는 오로라 A 좌위(20q13)의 증폭이 림프절-음성 유방암을 지니는 환자에 대해 불량한 예후와 상관관계가 있다는 것을 보고하였다.

오로라-A의 증폭 및/또는 과발현이 인간 방광암에서 관찰되며, 오로라-A의 증폭은 이수성(aneuploidy) 및 공격적 임상 거동과 관련된다(문헌[Sen et al ., J. Natl. Cancer Inst . (2002) 94, 1320-1329] 참조).

오로라-A의 상승된 발현은 결장직장암(문헌[Bischoff et al ., EMBO J. (1998) 17, 3052-3065 및 Takahashi et al ., Jpn . J. Cancer Res . (2000) 91, 1007-1014] 참조), 난소암(문헌[Gritsko et al ., Clin . Cancer Res . (2003) 9, 1420-1426] 참조) 및 위 종양(문헌[Sakakura et al ., British Journal of Cancer (2001) 84, 824-831] 참조)의 50% 이상에서 검출되었다.

Tanaka 등은(Cancer Research (1999) 59, 2041-2044) 유방의 침윤성 유관 선암종의 94%에서 오로라 A의 과발현의 증거를 발견하였다.

고수준의 오로라 A 키나제는 또한 신장, 자궁, 신경아세포종, 흑색종, 림프종, 췌장 및 전립선 종양 세포주에서 발견되었다(Bischoff et al ., (1998), EMBO J. (1998) 17, 3052-3065; Kimura et al ., J. Biol . Chem . (1999) 274, 7334-7340; Zhou et al ., Nature Genetics, 20: 189-193 (1998); Li et al ., Clin Cancer Res. 9 (3): 991-7 (2003).

Royce 등은(Cancer. (2004) 100(1), 12-19) 오로라 2 유전자(STK15 또는 BTAK로서 알려짐)의 발현이 원발성 유방 종양의 대략 1/4에서 주목되었다는 것을 보고하였다.

Reichardt 등은(Oncol Rep . (2003) 10(5),1275-9) 성상세포종에서 오로라 증폭을 찾는 PCR에 의한 정량적 DNA 분석이 상이한 WHO 등급(1x 등급 II, 1x 등급 III, 3x 등급 IV)의 16개의 종양 중 5개(31%)가 오로라 2 유전자의 DNA 증폭을 보였다는 것을 나타낸 것을 보고하였다. 오로라 2 유전자의 증폭은 종양 형성의 유전적 경로에서 역할을 하는 인간 성상세포종에서 비무작위 유전적 변경일 수 있다는 가설을 세웠다.

Hamada 등에 의한 결과는(Br. J. Haematol . (2003) 121(3), 439-47) 또한 오로라 2가 질병 활성뿐만 아니라 비호지킨 림프종의 종양 형성을 나타내는 효과적인 후보라는 것을 시사한다. 이 유전자의 기능 제한으로부터 초래된 조양 세포 성장의 지연은 비호지킨 림프종에 대한 치료적 접근일 수 있었다.

Gritsko 등에 의한 연구에서(Clin Cancer Res . (2003) 9(4), 1420-6), 키나제 활성 및 오로라 A의 단백질 수준은 원발성 난소 종양을 지니는 92명의 환자에서 시험되었다. 시험관내 키나제 분석은 44가지 경우에(48%) 상승된 오로라 A 키나제 활성을 나타내었다. 증가된 오로라 A 단백질 수준은 52개의(57%) 표본에서 검출되었다. 오로라 A의 고단백질 수준은 상승된 키나제 활성과 상당히 상관관계가 있었다.

Li 등에 의해 얻은 결과(Clin . Cancer Res . 2003 Mar; 9(3):991-7)는 오로라 A 유전자가 췌장 종양 및 암 세포주에서 과발현되었다는 것을 나타내며, 오로라 A의 과발현은 췌장 발암현상에서 어떤 역할을 한다는 것을 시사한다.

유사하게, 오로라 A 유전자 증폭 및 유사분열 키나제의 관련된 증가된 발현은 그것이 인간 방광암에서 이수성 및 공격적 임상 거동과 관련된다는 것을 나타내었다(J. Natl . Cancer Inst . (2002) 94(17), 1320-9).

몇몇 그룹에 의한 연구(문헌[Dutertre and Prigent, Mol . Interv . (2003) 3(3), 127-30 및 Anand et al ., Cancer Cell . (2003) 3(1), 51-62])는 오로라 키나제 활성의 과발현이 일부 기존의 암치료제에 대한 내성과 관련된다는 것을 시사한다. 예를 들어 마우스 배아 섬유아세포에서 오로라 A의 과발현은 탁산 유도체의 세포독성 효과에 대한 이들 세포의 민감성을 감소시킬 수 있다. 따라서, 오로라 키나제 저해제는 기존의 치료에 대해 내성이 발생한 환자에서 특정 사용을 발견할 수 있다.

지금까지 수행된 작업을 기준으로, 오로라 A 키나제의 저해는 눈에 띄는 종양 발생의 효과적인 수단을 증명할 것으로 생각된다.

또한 정상 세포에 비해 종양 세포에서 오로라 B의 발현 증가가 있는 것이 나타났다(Adams et al ., Chromasoma . (2001) 110, 65-74). 일 보고는 오로라 B의 과발현이 세린 10에서 히스톤 H3의 증가된 인산화를 통해 이수성을 유발하며, 오로라 B를 과발현시키는 세포는 더 공격적인 종양을 형성하고, 전이성 종양을 형성하는 더 높은 경향을 가진다는 것을 시사한다(Ota et al ., Cancer Res . (2002) 62, 5168-5177).

오로라 B는 인간 세포에서 방추 검사점 기능과 중기 염색체 배열에 대해 필요로 된다(Adams et al . J. Cell Biol . (2001) 153, 865-880; Kallio et al ., Curr. Biol . (2002) 12, 900-905 및 Murata-Hori and Wang Curr . Biol . (2002) 12, 894-899). 오로라 B 키나제 활성의 억제는 염색체 배열, 방추 체크포인트 기능 및 세포질분열을 손상시키는 것으로 입증되었다(Ditchfield et al ., J. Cell Biol . (2003) 161, 267-280 및 Hauf et al ., J. Cell Biol . (2003), 161, 281-294). 결과적으로, 간단한 지연 세포가 분할 없이 그리고 4N DNA 내용물과 함께 유사분열을 종료한 후, 거기서, 상기 세포는 그의 증식 가능성을 빠르게 상실한다.

Harrington 등(Nat Med . (2004) 10(3), 262-7)은 오로라 키나제의 저해제가 종양 성장을 억제하고 생체내 종양 퇴화를 유발하는 것을 입증하였다. 연구에서, 오로라 키나제 저해제는 암 세포 증식을 차단하였고, 또한 백혈병, 결장직장 및 유방 세포주를 포함하는 암세포주의 범위에서 세포사를 촉발하였다. 추가로, 백혈병 세포에서 세포자멸사를 유발하는 것에 의해 백혈병을 치료하기 위한 가능성이 나타났다. VX-680는 환자로부터의 난치성 원발성 급성 골수성 백혈병(Acute Myelogenous Leukemia: AML)을 강력하게 사멸시켰다(Andrews, Oncogene (2005) 24, 5005-5015).

Manfredi 등은(PNAS (2007) 104, 4106-4111) 오로라 A의 소분자 저해제가 생체내 종양 성장을 억제한다는 것을 입증하였다. 연구에서, 용량 의존적 종양 성장 저해는 비히클 처리된 마우스에 대해 HCT-116 종양 함유 마우스 및 PC-3 종양 함유 마우스에서 입증되었다. HCT-116에 대해 84%까지 및 PC-3 세포 이종 이식에 대해 93%까지 종양 성장 저해가 관찰되었다.

Mortlock 등은(Clin Cancer Res . (2007) 13(12), 3682-3688) 오로라 B의 소분자 저해제가 생체내 종양 성장을 억제한다는 것을 입증하였다. 확립된 SW620, HCT-116, Colo205, A549, Calu-6 또는 HL-60 종양 이종이식을 함유하는 면역결핍 마우스에 소분자 저해제 AZD1152에 의한 피하 미니-펌프 주입을 통해 48시간에 걸쳐 투약되었다. 모든 경우에 종양 성장의 저해는 HL-60 이종이식을 함유하는 11마리의 동물 중 8마리에서 관찰된 완전한 종양 퇴화로 55% 내지 100%의 범위에 있었다.

지금까지 얻은 증거에 기반하여, 오로라 키나제 저해제는 눈에 띄는 종양 발생 및 유방, 방광, 결장직장, 췌장 및 난소암, 비호지킨 림프종, 성상세포종, 비자궁내막양 자궁내막 암종, 급성 골수성 백혈병(Acute Myelogenous Leukemia: AML), 만성 골수성 백혈병(Chronic Myelogenous Leukaemia: CML), B-세포 림프종(맨틀 세포), 및 급성 림프구성 백혈병(Acute Lymphoblastic Leukemia: ALL)과 같은 암 치료에서 특히 유용하여야 할 것으로 고려된다.

FLT3

FMS-유사 티로신 키나제 3(FLT3)은 조혈 및 비조혈 세포의 증식, 분화 및 세포자멸사에 연루된 수용체 티로신 키나제이다(Scheijen and Griffin, Oncogene (2002) 21, 3314-3333 및 Reilly, British Journal of Haematology (2002) 116, 744-757). 천연 리간드(FL) 결합의 결과로서, FLT3 수용체는 이합체화되어 그의 티로신 키나제 도메인, 수용체 자기인산화 및 PI3K(포스파티딜이노시톨 3 키나제)의 p85 서브유닛, PLC-감마(포스포리파제-C 감마), STAT5a(전사 5a의 신호 전달인자 및 활성자), 및 SRC 패밀리 티로신 키나제와 같은 하류의 신호처리 분자의 채택의 활성화를 야기한다(Gilliland and Griffin, Blood (2002) 100(5), 1532-42; Drexler, Leukemia (1996) 10(4), 588-99 및 Ravandi et al., Clin Cancer Res . (2003) 9(2), 535-50).

인산화에 의한 이들 하류의 신호처리 분자의 활성화는 FLT3의 증식적 및 전생존(pro-survival) 효과를 야기한다(Gilliland and Griffin (2002) 및 Levis and Small, Leukemia (2003) 17(9), 1738-52).

수용체의 막근접(juxtamembrane) 영역에서, 또는 활성화 루프 내 D835의 점 돌연변이를 통해 내부의 순차중복(tandem duplication)을 수반하는 FLT3의 체세포 돌연변이는 급성 골수성 백혈병(AML), 미숙 골수성 백혈구 세포의 과생산을 통해 야기된 백혈구 세포의 암을 지니는 환자의 대략 30%에서 입증되었다(Nakao et al., Leukemia (1996) 10(12), 1911-8; Thiede et al ., Blood (2002) 99(12), 4326-35; Yamamoto et al ., Blood (2001) 97(8), 2434-9; Abu-Duhier et al ., Br . J. Haematol. (2000) 111(1), 190-5 및 Abu-Duhier et al ., Br . J. Haematol . (2001) 113(4), 983-8).

AML에서 백혈병 형질전환에 기여하는 FLT3의 돌연변이를 독립적으로 활성화하는 다른 리간드가 최근에 기재되었다. 진단에서 이러한 돌연변이의 존재는 일부 환자에서 하위의 진단과 관련되었다(Jiang et al ., Blood (2004) 104(6), 1855-8 및 Kindler et al ., Blood (2005) 105(1), 335-40).

본 발명자들의 더 선행의 국제특허출원 제WO2008/139161호는다양한 키나제 및 특히 오로라 키나제, FLT3 키나제 및 FLT4 키나제의 저해제로서 치환된 옥사졸 카복사마이드의 분류를 개시한다.

제WO2008/139161호의 132페이지 상의 실시예 M-12는 이하에 제시되는 화학식을 갖는 화합물 2-(1H-인돌-4-일)-5-(4-피페라진-1-일-페닐)-옥사졸-4-카복실산 아마이드의 제조를 기재한다.

이제 상기 나타낸 화합물의 유사체(그러나, 피페라진 고리의 3-위치에서 CH₂ 모이어티는 C(CH₃)₂ 모이어티로 대체됨)는 오로라 A 및 오로라 B 키나제 및 FLT3 키나제로부터 선택된 하나 이상의 키나제에 대해 실질적으로 향상된 효능을 가지고, WO의 실시예 M-12의 화합물에 비해 감소된 유출 용이성을 가진다는 것을 발견하였다. 또한 오로라 키나제에 대한 화합물의 효능은 인돌기 상의 치환체의 존재에 의해 추가로 실질적으로 향상된다는 것을 발견하였다.

따라서, 제1 실시형태(실시형태 1.1)에서, 본 발명은 하기 화학식 (1)을 갖는 화합물 및 이의 염을 제공한다:

[화학식 (1)]

상기 식에서:

R¹은 수소 또는 C₁ _-2 알킬이고;

R², R³ 및 R⁴는 동일 또는 상이하고, 각각은 수소, C₁ _-2 알킬, 플루오린, 염소, C₁ _-2 알콕시 및 트라이플루오로메틸로부터 선택되되, 단, R², R³ 및 R⁴ 중 둘 이하는 수소가 아니다.

본 발명의 특정 및 바람직한 화합물은 이하의 실시형태 1.2 내지 1.33에서 정의되는 바와 같다.

1.2 실시형태 1.1에 있어서, R¹은 수소 및 메틸로부터 선택되는 화합물.

1.3 실시형태 1.2에 있어서, R¹은 수소인 화합물.

1.4 실시형태 1.2에 있어서, R¹은 메틸인 화합물.

1.5 실시형태 1.1 내지 1.4 중 어느 하나에 있어서, R²는 수소, 플루오린, 염소, 메틸, 에틸, 트라이플루오로메틸 및 메톡시로부터 선택되는 화합물.

1.6 실시형태 1.1 내지 1.4 중 어느 하나에 있어서, R²는 수소, 플루오린, 염소, 메틸, 에틸 및 메톡시로부터 선택되는 화합물.

1.6A 실시형태 1.6에 있어서, R²는 수소, 플루오린, 염소, 메틸 및 메톡시로부터 선택되는 화합물.

1.7 실시형태 1.5에 있어서, R²는 수소인 화합물.

1.8 실시형태 1.5에 있어서, R²는 플루오린인 화합물.

1.9 실시형태 1.5에 있어서, R²는 염소인 화합물.

1.10 실시형태 1.5에 있어서, R²는 메틸인 화합물.

1.11 실시형태 1.5에 있어서, R²는 에틸인 화합물.

1.12 실시형태 1.5에 있어서, R²는 메톡시인 화합물.

1.13 실시형태 1.5에 있어서, R²는 트라이플루오로메틸인 화합물.

1.14 실시형태 1.1 내지 1.13에 있어서, R³은 수소 및 플루오린으로부터 선택되는 화합물.

1.15 실시형태 1.14에 있어서, R³은 수소인 화합물.

1.16 실시형태 1.1 내지 1.15 중 어느 하나에 있어서, R⁴는 수소, 플루오린, 메틸 및 에틸로부터 선택된 화합물.

1.17 실시형태 1.16에 있어서, R⁴는 수소인 화합물.

1.18 실시형태 1.16에 있어서, R⁴는 플루오린, 메틸 및 에틸로부터 선택되고, R² 및 R³ 중 하나는 수소인 화합물.

1.19 실시형태 1.18에 있어서, R³은 수소인 화합물.

1.20 실시형태 1.18 또는 실시형태 1.19에 있어서, R⁴는 플루오린인 화합물.

1.21 실시형태 1.18 또는 실시형태 1.19에 있어서, R⁴는 메틸인 화합물.

1.22 실시형태 1.18 또는 실시형태 1.19에 있어서, R⁴는 에틸인 화합물.

1.22A 실시형태 1.1에 있어서, R¹은 수소이며; R²는 수소, 메틸, 에틸, 플루오로, 클로로 및 메톡시로부터 선택되고; R³은 수소이며; R⁴는 수소, 플루오로 및 메틸로부터 선택되는 화합물.

1.23 실시형태 1.22A에 있어서, (i) R¹은 수소이며; R²는 메틸, 에틸, 플루오로, 클로로 및 메톡시로부터 선택되고; R³은 수소이며; R⁴는 수소이거나; 또는 (ii) R¹은 수소이고; R²는 수소이며; R³은 수소이고; R⁴는 메틸이거나; 또는 (iii) R¹은 수소이며; R²는 플루오로이고; R³은 수소이며; R⁴는 메틸인 화합물.

1.24 실시형태 1.1에 있어서, 이하의 표 1에서의 화합물 실시예 1 내지 실시예로부터 선택된 화합물 12 및 이들의 염.

1.25 실시형태 1.24에 있어서, 표 1에서의 화합물 실시예 2, 실시예 3, 실시예 5 및 실시예 7로부터 선택된 화합물 및 이들의 염.

1.26 실시형태 1.25에 있어서, 화합물 실시예 2인 화합물 또는 이의 염.

1.27 실시형태 1.25에 있어서, 화합물 실시예 3인 화합물 또는 이의 염.

1.28 실시형태 1.25에 있어서, 화합물 실시예 5인 화합물 또는 이의 염.

1.29 실시형태 1.25에 있어서, 화합물 실시예 7인 화합물 또는 이의 염.

1.30 실시형태 1.1 내지 1.29 중 어느 하나에 있어서, 유리 염기의 형태인 화합물.

1.31 실시형태 1.1 내지 1.29 중 어느 하나에 있어서, 염의 형태인 화합물.

1.32 실시형태 1.31에 있어서, 상기 염은 산부가 염인 화합물.

1.33 실시형태 1.31 또는 실시형태 1.32에 있어서, 염은 약제학적으로 허용가능한 염인 화합물.

일반적 선호 및 정의

본 명세서의 키나제에 대한 언급은 당해 키나제의 정상 기능 형태뿐만 아니라 또한 이들의 돌연변이 형태를 포함한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은, 키나제의 활성에 적용되는 용어 "조절"은 키나제(들)의 생물학적 활성 수준에서의 변화를 정의하는 것으로 의도된다. 따라서, 조절은 적절한 키나제 활성에서의 증가 또는 감소를 달성하는 생리학적 변화를 포함한다. 후자의 경우에서, 조절은 "저해"로서 기재될 수 있다.

키나제에 관해 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "상향조절"은 키나제의 상승된 발현 또는 과발현을 포함하고, 유전자 증폭(즉, 다수의 유전자 복제물) 및 전사 효과에 의한 증가된 발현, 및 돌연변이에 의한 활성화를 포함하는 키나제의 과활성 및 활성화를 포함하는 것으로 정의된다.

특정 키나제에 의해 "매개되는" 질병 상태 또는 질환에 대한 본 명세서의 언급은 한정적으로 조작되는 것으로 의도되며, 따라서 해당 용어가 적용되는 다양한 질병 상태 또는 질환이 당해 키나제(또는 그의 돌연변이 형태)가 생물학적 역할을 하는 것이다. 키나제에 의한 생물학적 역할은 직접적 또는 간접적일 수 있고, 질병, 상태 또는 질환의 증상(또는 그의 병인 또는 진행)의 표명에 필요하고/하거나 충분할 수 있다.

염

본 발명의 화합물은 염의 형태로 존재할 수 있다.

염(실시형태 1.31 내지 1.33에서 정의된 바와 같음)은 전형적으로 산부가 염이다.

염은 문헌[Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl(Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002]에 기재된 방법과 같은 통상적인 화학적 방법에 의해 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 수중에서 또는 유기 용매 중에서, 또는 2가지의 혼합물 중에서 화합물의 유리 염기를 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있으며; 일반적으로, 비수성 매질, 예컨대 에터, 에틸 아세테이트, 에탄올, 아이소프로판올, 또는 아세토나이트릴이 사용된다.

산부가 염(실시형태 1.32에서 정의된 바와 같음)은 매우 다양한 산, 무기 및 유기 둘 다에 의해 형성될 수 있다. 산부가 염의 예는 아세트산, 2,2-다이클로로아세트산, 아디프산, 알긴산, 아스콜브산(예를 들어, L-아스콜브산), L-아스팔트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 뷰타논산, (+) 캠퍼산(camphoric acid), 캠퍼-설폰산, (+)-(1S)-캠퍼-10-설폰산, 카프르산, 카프론산, 카프릴산, 신남산, 시트르산, 사이클라민산, 도데실설푸르산, 에탄-1,2-다이설폰산, 에탄설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 폼산, 푸마르산, 갈락타릭산, 겐티신산, 글루코헵톤산, D-글루콘산, 글루쿠론산(예를 들어, D-글루쿠론산), 글루탐산(예를 들어, L-글루탐산), α-옥소글루타르산, 글라이콜산, 히푸르산, 하이드로브롬산, 염산, 요오드화수소산, 이세티온산, (+)-L-락트산, (±)-DL-락트산, 락토바이오닉산, 말레산, 말산, (-)-L-말산, 말론산, (±)-DL-만델산, 메탄설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 나프탈렌-1,5-다이설폰산, 1-하이드록시-2-나프톤산, 니코틴산, 질산, 올레산, 오로틴산, 옥살산, 팔미트산, 팜산, 인산, 프로피온산, L-파이로글루탐산, 살리실산, 4-아미노-살리사이클릭살리사이클릭, 세바스산, 스테아르산, 숙신산, 황산, 탄닌산, (+)-L-타르타르산, 티오시안산, p-톨루엔설폰산, 운데실레닉산 및 발레르산뿐만 아니라 아실화된 아미노산 및 양이온 교환 수지로 이루어진 군으로부터 선택된 산에 의해 형성된 염을 포함한다.

본 발명의 화합물의 염 형태는 전형적으로 약제학적으로 허용가능한 염이고, 약제학적으로 허용가능한 염의 예는 문헌[Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm . Sci ., Vol. 66, pp. 1-19]에서 논의된다. 그러나, 약제학적으로 허용가능하지 않은 염이 또한 중간체 형태로서 제조될 수 있고, 그 다음에 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물의 정제 또는 분리에서 유용할 수 있는 이러한 비약제학적으로 허용가능한 염 형태는 또한 본 발명의 부분을 형성한다.

동위원소

실시형태 1.1 내지 1.33 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 본 발명의 화합물은 하나 이상의 동위원소 치환을 함유할 수 있고, 특정 구성요소에 대한 언급은 구성요소의 모든 범주 내에 포함된다. 예를 들어, 수소에 대한 언급은 그의 범주 ¹H, ²H(D) 및 ³H(T) 내에 포함된다. 유사하게, 탄소 및 산소에 대한 언급은 각각 그의 범주 ¹²C, ¹³C 및 ¹⁴C 및 ¹⁶O 및 ¹⁸O 내에 포함된다.

유사한 방식에서, 특정 작용기에 대한 언급은 내용에서 달리 표시되지 않는다면, 그의 범주 동위원소적 변화 내에 포함된다.

예를 들어, 에틸기와 같은 알킬기에 대한 언급은 또한 기에서의 하나 이상의 수소 원자가 중수소 또는 삼중수소 동위원소 형태에서, 예를 들어 모두 5개의 수소 원자가 중수소 동위원소 형태(과중수소에틸기)인 에틸기에서와 같은 변형을 포함한다.

동위원소는 방사성 또는 비방사성일 수 있다. 본 발명의 일 실시형태에서(실시형태 1.34), 실시형태 1.1 내지 1.33 중 어느 하나의 화합물은 방사성 동위원소를 함유하지 않는다. 이러한 화합물은 치료적 사용에 바람직하다. 다른 실시형태(실시형태 1.35)에서, 그러나, 실시형태 1.1 내지 1.33 중 어느 하나의 화합물은 하나 이상의 방사성 동위원소를 함유할 수 있다. 이러한 방사성 동위원소를 함유하는 화합물은 진단적 맥락에서 유용할 수 있다.

용매화물

실시형태 1.1 내지 1.35 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물은 용매화물의 형태일 수 있다.

바람직한 용매화물은 비독성의 약제학적으로 허용가능한 용매(이하에서 용매화 용매로서 지칭됨) 분자의 본 발명의 화합물의 고체 상태 구조(예를 들어, 결정 구조) 내로 함입에 의해 형성된 형성된 용매화물이다. 이러한 용매의 예는 물, 알코올(예컨대 에탄올, 아이소프로판올 및 뷰탄올) 및 다이메틸설폭사이드를 포함한다. 용매화물은 본 발명의 화합물을 용매와 함께, 또는 용매화 용매를 함유하는 용매의 혼합물과 함께 재결정화함으로써 제조될 수 있다. 어떤 주어진 예에서 용매화물이 형성되는지 여부는 잘 공지된 방법 및 표준 방법, 예컨대 열 중량 분석(thermogravimetric analysis: TGE), 시차주사 열량측정법(differential scanning calorimetry: DSC) 및 X선 결정학을 사용하는 분석을 화합물의 결정에 실시함으로써 결정될 수 있다.

용매화물은 화학량론적 또는 비화학량론적 용매화물일 수 있다.

특히 바람직한 용매화물은 수화물이며, 수화물의 예는 반수화물, 1수화물 및 2수화물을 포함한다.

따라서, 추가 실시형태 1.36 및 1.37에서, 본 발명은 하기를 제공한다:

1.36 실시형태 1.1 내지 1.35 중 어느 하나에 있어서, 용매화물의 형태인 화합물.

1.37 실시형태 1.36에 있어서, 용매화물은 수화물인 화합물.

용매화물 및 그의 제조 및 특성규명을 위해 사용한 방법의 더욱 상세한 논의를 위해, 문헌[Bryn et al., Solid-State Chemistry of Drugs, Second Edition, SSCI, Inc of West Lafayette, IN, USA, 1999, ISBN 0-967-06710-3에 의해 발행]을 참조한다.

대안적으로, 수화물로서 존재하는 것보다는, 본 발명의 화합물은 무수물일 수 있다. 따라서, 다른 실시형태(실시형태 1.38)에서, 본 발명은 무수 형태에서 실시형태 1.1 내지 1.35 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물을 제공한다.

결정질 및 비결정질 형태

실시형태 1.1 내지 1.38 중 어느 하나의 화합물은 결정질 또는 비결정질(예를 들어, 비결정질) 상태로 존재할 수 있다.

화합물이 결정질 상태로 존재하는지 여부는 X선 분말 회절법(X-ray powder diffraction: XRPD)과 같은 표준 기법에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

결정 및 그의 결정 구조는 단일 결정 X선 결정학, X선 분말 회절법(XRPD), 시차주사 열량측정법(DSC) 및 적외선 분광법, 예를 들어 퓨리에변환 적외선분광법(Fourier Transform infra-red spectroscopy: FTIR)을 포함하는 다수의 기법을 사용하여 특성규명될 수 있다. 다양한 습도 조건 하에서 결정 거동은 중량측정 증기수착 연구에 의해 또는 XRPD에 의해 분석될 수 있다.

화합물의 결정 구조의 결정은 본 명세서에 기재된 것과 같은 그리고 문헌[Fundamentals of Crystallography, C. Giacovazzo, H. L. Monaco, D. Viterbo, F. Scordari, G. Gilli, G. Zanotti and M. Catti, (International Union of Crystallography/Oxford University Press, 1992 ISBN 0-19-855578-4 (p/b), 0-19-85579-2 (h/b))]에 기재된 바와 같은 통상적인 방법에 따라 수행될 수 있는 X선 결정학에 의해 수행될 수 있다. 이 기법은 단일 결정의 X선 회절의 분석 및 해석을 수반한다.

비결정질 고체에서, 결정질 형태에 정상적으로 존재하는 3차원 구조는 존재하지 않으며, 비결정질 형태에서 서로에 대해 분자의 위치는 본질적으로 무작위이다, 예를 들어 문헌[Hancock et al. J. Pharm . Sci. (1997), 86, 1)] 참조.

따라서, 추가적 실시형태에서, 본 발명은 하기를 제공한다:

1.39 실시형태 1.1 내지 1.38 중 어느 하나에 있어서, 결정질 형태인 화합물.

1.40 실시형태 1.1 내지 1.38 중 어느 하나에 있어서:

(a) 50% 내지 100% 결정질, 및 더 특별하게는 적어도 50% 결정질, 또는 적어도 60% 결정질, 또는 적어도 70% 결정질, 또는 적어도 80% 결정질, 또는 적어도 90% 결정질, 또는 적어도 95% 결정질, 또는 적어도 98% 결정질, 또는 적어도 99% 결정질, 또는 적어도 99.5% 결정질, 또는 적어도 99.9% 결정질, 예를 들어 100% 결정질인 화합물.

1.41 실시형태 1.1 내지 1.38 중 어느 하나에 있어서, 비결정질 형태인 화합물.

프로드러그

실시형태 1.1 내지 1.41 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물은 프로드러그의 형태로 존재할 수 있다. "프로드러그"는, 예를 들어 실시형태 1.1 내지 1.41 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 생물학적으로 활성인 화합물로 생체내 전환되는 임의의 화합물을 의미한다.

예를 들어, 일부 프로드러그는 활성 화합물의 에스터(예를 들어, 생리학적으로 허용가능한 대사적으로 불안정한 에스터)이다. 대사 동안, 에스터기(-C(=O)OR)는 절단되어 활성 약물을 수득한다. 이러한 에스터는, 예를 들어 적절하다면, 모 화합물에 존재하는 임의의 다른 반응기의 보호 전 모 화합물에 존재하는 임의의 하이드록실기의 에스터화에 의해 형성된 다음, 필요하다면 탈보호될 수 있다.

또한, 일부 프로드러그는 효소적으로 활성화되어 활성 화합물 또는 추가적인 화학적 반응 시 활성 화합물(예를 들어, ADEPT, GDEPT, LIDEPT 등에서와 같이)을 수득하는 화합물을 수득한다. 예를 들어, 프로드러그는 당 유도체 또는 다른 글라이코시드 컨쥬게이트일 수 있거나, 또는 아미노산 에스터 유도체일 수 있다.

따라서, 다른 실시형태에서(실시형태 1.42), 본 발명은 실시형태 1.1 내지 1.41 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물의 프로드러그를 제공하되, 화합물은 생리학적 조건 하에서 전환가능한 작용기를 함유하여 하이드록실기 또는 아미노기를 형성할 수 있다.

복합체 및 클라스레이트( clathrate )

또한 실시형태 1.1 내지 1.42의 화합물의 복합체(예를 들어, 사이클로덱스트린과 같은 화합물과의 포접 화합물 또는 클라스레이트, 또는 금속과의 복합체)가 실시형태 1.1 내지 1.42에서의 화학식 (1)에 의해 포함된다.

따라서, 다른 실시형태에서(실시형태 1.43), 본 발명은 복합체 또는 클라스레이트의 형태에서 실시형태 1.1 내지 1.42 중 어느 하나에 따른 화합물을 제공한다.

생물학적 활성

본 발명의 화합물은 다양한 치료적 용도를 가진다.

따라서, 다른 실시형태에서(실시형태 2.1), 본 발명은 의약에서 사용을 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에서 정의되는 바와 같은 화학식 (1)의 화합물을 제공한다.

더 구체적으로는, 본 발명의 화합물은 키나제, 예를 들어 FLT3 키나제 및 오로라 키나제, 예컨대 오로라 키나제 A 및 오로라 키나제 B의 저해제이다.

따라서, 추가 실시형태에서(2.2 내지 2.14), 본 발명은 하기를 제공한다:

2.2 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)에 의해 매개되는 질병상태 또는 질환의 예방 또는 치료에서 사용을 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 어떤 하위 그룹 또는 예.

2.3 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)의 비정상 발현(예를 들어, 과발현)을 특징으로 하는 질병상태 또는 질환의 예방 또는 치료에서 사용을 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 어떤 하위 그룹 또는 예.

2.4 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)에 의해 매개되는 질병 상태 또는 질환의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조를 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 어떤 하위 그룹 또는 예.

2.5 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)의 비정상 발현(예를 들어, 과발현)을 특징으로 하는 질병 상태 또는 질환의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조를 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 어떤 하위 그룹 또는 예.

2.6 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)에 의해 매개되는 질병상태 또는 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법으로서, 상기 방법은 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 어떤 하위 그룹 또는 예를 치료가 필요한 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.

2.7 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)의 비정상 발현(예를 들어, 과발현)을 특징으로 하는 질병 상태 또는 질환의 예방 또는 치료방법으로서, 상기 방법은 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 어떤 하위 그룹 또는 예를 치료가 필요한 필요한 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.

2.8 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)에 의해 매개되는 질병상태 또는 질환의 발생률을 완화시키거나 또는 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 어떤 하위 그룹 또는 예를 치료가 필요한 필요한 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.

2.9 실시형태 2.1 내지 2.8 중 어느 하나에 있어서, 질병 상태 또는 질환은 FLT3 키나제에 의해 매개된 것이거나 또는 FLT3 키나제의 비정상 발현(예를 들어, 과발현)을 특징으로 하는, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.10 실시형태 2.1 내지 2.8 중 어느 하나에 있어서, 질병 상태 또는 질환은 오로라 키나제(예를 들어, 오로라 A 또는 오로라 B 키나제)에 의해 매개된 것이거나 또는 오로라 키나제(예를 들어, 오로라 A 또는 오로라 B 키나제)의 비정상 발현(예를 들어, 과발현)을 특징으로 하는, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.11 FLT3 키나제의 저해방법으로서, 키나제를 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 키나제-저해 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예와 접촉시키는 단계를 포함하는 것인 방법.

2.12 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)의 저해방법으로서, 상기 방법은 키나제를 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 키나제 저해 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.

2.13 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예를 사용하여 FLT3 키나제의 활성을 저해함으로써 세포 과정(예를 들어, 세포 분할)을 조절하는 방법.

2.14 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예를 사용하여 오로라 키나제(예컨대 오로라 키나제 A 또는 오로라 키나제 B)의 활성을 저해함으로써 세포 과정(예를 들어, 세포 분할)을 조절하는 방법.

조절에서 특히 FLT3 및 오로라 키나제의 저해에서 그의 활성의 결과로서, 그들은 암과 같은 증식성 장애를 치료하거나 또는 예방하는데 유용한 것으로 예상된다.

따라서, 추가 실시형태에서(실시형태 2.15 내지 2.28), 본 발명은 추가로 하기를 제공한다:

2.15 암과 같은 증식성 장애의 예방 또는 치료에서 사용을 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예.

2.16 암과 같은 증식성 장애의 예방 또는 치료에서 사용을 위한 의약의 제조를 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에서 정의되는 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예의 용도.

2.17 피험체에서 암과 같은 증식성 질병의 치료를 위한 방법으로서, 상기 방법은 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에서 정의되는 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예를 피험체(예를 들어, 인간과 같은 포유류)에 투여하는 단계를 포함하는 방법.

2.18 비정상 세포 성장을 포함하거나 또는 비정상 세포 성장이 일어나는 질병 또는 질환의 예방 또는 치료에서 사용을 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에서 정의되는 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예.

2.19 비정상 세포 성장을 포함하거나 또는 비정상 세포 성장이 일어나는 질병 또는 질환의 예방 또는 치료에서 사용을 위한 의약의 제조를 위한 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에서 정의되는 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예의 용도.

2.20 포유류에서 비정상 세포 성장을 포함하거나 또는 비정상 세포 성장이 일어나는 질병 또는 질환의 치료를 위한 방법으로서, 상기 방법은 비정상 세포 성장에서 유효량으로 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에서 정의되는 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예를 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 방법.

2.21 포유류에서 비정상 세포 성장을 포함하거나 또는 비정상 세포 성장이 일어나는 질병 또는 질환의 발생률을 완화시키거나 또는 감소시키기 위한 방법으로서, 상기 방법은 비정상 세포 성장에서 유효량으로 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에서 정의되는 바와 같은 화학식 (1)의 화합물 또는 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예를 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 방법.

2.22 실시형태 2.15 내지 2.17 중 어느 하나에 있어서, 증식성 질병은 암종, 예를 들어 방광, 유방, 결장(예를 들어, 결장직장 암종, 예컨대 결장 선암종 및 결장 선종), 신장, 표피, 간, 폐, 예를 들어 선암종, 소세포 폐암 및비소세포 폐 암종, 식도, 쓸개, 난소, 췌장 예를 들어 외분비 췌장 암종, 위, 자궁경부, 갑상선, 전립선, 또는 피부의 암종, 예를 들어 편평세포 암종; 림프계열의 조혈 종양, 예를 들어 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 모발세포 림프종, 또는 버킷 림프종; 골수성 계통의 조혈 종양, 예를 들어 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수이형성증후군, 또는 전골수구성 백혈병; 갑상선 여포암; 중간엽유래의 종양, 예를 들어 섬유 육종 또는 횡문근육종, 중추 또는 말초 신경계의 종양, 예를 들어 성상세포종, 신경아세포종, 신경교종 또는 신경초종; 흑색종; 정상피종; 기형암종; 골육종; 색소성 건피증; 각화극세포종; 갑상선 여포암; 또는 카포시 육종으로부터 선택된 암인, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.23 실시형태 2.22에 있어서, 암은 오로라 A 키나제의 저해에 영향을 받기 쉬운 것이며, 유방, 방광, 결장직장, 췌장 및 난소암, 비호지킨 림프종, 성상세포종, 비자궁내막양 자궁내막 암종, 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), B-세포 림프종(맨틀 세포), 및 급성 림프구성 백혈병(ALL)으로부터 선택된 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.24 실시형태 2.22에 있어서, 암은 오로라 B 키나제의 저해에 영향을 받기 쉬운 것이며, 결장직장, 폐, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 및 급성 호산성 백혈병으로부터 선택된 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.25 실시형태 2.22에 있어서, 암은 FLT3 키나제의 저해에 영향을 받기 쉬운 것이며, 급성 골수성 백혈병(AML)인 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.26 실시형태 2.25에 있어서, AML은 FLT3의 체세포 또는 점 돌연변이를 지니는 환자에서 관련된 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.27 실시형태 2.26에 있어서, AML은 FLT3 수용체의 막근접 영역에서 내부의 순차중복을 수반하는 FLT3의 체세포 돌연변이를 지니는 환자에 관련된 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.28 실시형태 2.26에 있어서, AML은 FLT3의 활성화 루프에서 D835의 점 돌연변이를 지니는 환자와 관련된 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.29 실시형태 2.22에 있어서, 증식성 질병은 조혈 종양인 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

2.30 실시형태 2.29에 있어서, 조혈 종양은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL) 및 다발성 골수종(MM)으로부터 선택된 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.

특정 암이 오로라 키나제 또는 FLT3 키나제에 의한 저해에 민감한지의 여부는 세포 성장 분석, 예를 들어 이하의 실시예에 기재된 바와 같은 분석에 의해 또는 표제가 "진단 방법"인 부문에서 제시되는 방법에 의해 결정될 수 있다.

키나제의 저해제로서 본 발명의 화합물의 활성은 이하의 실시예에서 제시되는 분석을 사용하여 측정될 수 있고, 주어진 화합물에 의해 나타나는 활성 수준은 IC₅₀ 값에 대해 정의될 수 있다. 본 발명의 바람직한 화합물은 0.01μM 미만, 더 바람직하게는 0.005μM 미만의 IC₅₀ 값을 갖는 화합물이다.

본 발명의 화합물의 제조를 위한 방법

다른 양태에서(실시형태 3.1), 본 발명은 실시형태 1.1 내지 1.35 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물을 제조방법을 제공하며, 이 방법은 하기 단계를 포함한다:

(i) 스즈키 커플링 반응 조건 하에 하기 화학식 (10)의 화합물을 하기 화학식 (11A) 또는 (11B)의 화합물 또는 대응되는 보로네이트 다이에스터와 반응시키고, 그 후 보호기 DMB 및 boc를 제거시키는 단계:

(상기 식에서 LG¹은 요오드 또는 브롬(대부분 전형적으로 요오드)이고, DMB는 2,4-다이메톡시벤질 보호기이며, boc은 tert-뷰틸옥시카보닐 보호기임);

(상기 식에서 PG는 보호기, 예컨대, tert-뷰틸다이메틸실릴 기임); 또는

(ii) 아마이드 형성 조건 하에 하기 화학식 (18)의 화합물을 암모니아와 반응시키고, 그 후, boc기를 제거시키는 단계:

(상기 식에서 boc은 tert-뷰틸옥시카보닐이다).

방법 변형 (i)에서, 스즈키 커플링 반응 조건은 전형적으로 팔라듐 촉매, 예컨대 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐 또는 비스(1,1'-비스(다이페닐-포스피노)-페로센) 팔라듐 다이클로라이드(Pd(dppf)₂Cl₂) 및 염기(예를 들어, 탄산염, 예컨대 탄산칼륨)의 존재를 수반한다. 반응은 극성 용매, 예를 들어 아세토나이트릴 또는 다이옥산 및 이들의 혼합물 또는 수성 용매, 예컨대 수성 에탄올, 또는 에터, 예컨대 다이메톡시에탄 중에서 수행될 수 있으며, 반응 혼합물은 전형적으로, 예를 들어 80℃ 이상의 온도, 예를 들어 80℃ 내지 100℃ 범위의 온도로 가열된다.

화합물(11A) 또는 화합물(11B) 중 하나와 화합물(10) 사이의 커플링 반응이 일어난 후, 보호기는 다이클로로메탄과 같은 용매 중에서 트라이플루오로메탄설폰산과 같은 산을 사용하여 보통 실온에서 또는 그 근처에서 편리하게 제거될 수 있다.

화학식 (10)의 화합물(이때 LG¹은 요오드 원자임)은 이하의 반응식 1에 나타낸 일련의 반응에 의해 제조될 수 있다.

반응식 1에서, 요오도벤조일클로라이드는, 예를 들어 실온에서 테트라하이드로퓨란과 같은 극성 비프로톤성 용매 중에서 에틸 2-아이소사이아노아세테이트와 반응되어 요오도페닐옥사졸 에스터(13)를 제공한다. 그 다음에 에스터(13)는 팔라듐 화합물, 예컨대 팔라듐 아세테이트 및 포스핀 리간드, 예컨대 바이페닐-2-일다이사이클로헥실포스핀의 존재에서 보호된 피페라진(14)과 반응되어 치환된 피페라지닐페닐-옥사졸 에스터(15)를 제공한다. 반응은 전형적으로 탄산세슘과 같은 염기의 존재에서, 예를 들어 약 70 내지 90℃의 온도로의 보통 약한 가열에 의해, 톨루엔과 같은 비프로톤성 용매 중에서 수행된다.

에스터(15)는 메탄올 및/또는 THF와 같은 극성 용매 중에서 수산화나트륨과 같은 알칼리 금속 수산화물을 사용하여 가수분해되어 카복실산(16)을 제공하고, 이는 그 다음에 아마이드-형성 조건 하에서, 예를 들어 아마이드 결합의 형성에서 보통 사용되는 유형의 시약의 존재에서 다이메톡시벤질-아민과 반응에 의해 다이메톡시벤질아마이드(17)로 전환된다. 이러한 시약의 실시예는 카보다이이미드계 커플링 시약, 예컨대 1,3-다이사이클로헥실카보-다이이미드(DCC)(Sheehan et al, J. Amer . Chem Soc . 1955, 77, 1067) 및 1-에틸-3-(3'-다이메틸아미노프로필)-카보다이이미드(본 명세서에서 EDC 또는 EDCI로서 지칭됨)(Sheehan et al, J. Org . Chem ., 1961, 26, 2525)를 포함하는데, 이 시약은 전형적으로 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸(HOAt)(L. A. Carpino, J. Amer . Chem . Soc, 1993, 115. 4397) 또는 1-하이드록시벤조트라이아졸(HOBt)(Konig et al, Chem. Ber., 103, 708, 2024-2034)과 조합되어 사용된다. 이러한 시약의 추가적인 예는 우로늄계 커플링제, 예컨대 O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU)이다. 일 바람직한 아마이드 커플링제는 HATU이다.

커플링 반응은 실온에서 비개재 염기, 예를 들어 3차 아민, 예컨대 트라이에틸아민 또는 N,N-다이아이소프로필에틸아민의 존재에서 비수성, 비프로톤성 용매, 예컨대 다이메틸폼아마이드 중에서 전형적으로 수행된다.

감소된 온도에서 THF 중에서 리튬 헥사메틸 다이실라자이드(LiHMDS)를 사용하는 다이메톡시벤질아마이드(17)의 제조 다음에 요오드와 반응으로 2-요오도-옥사졸(10)을 제공한다. 그 다음에 화합물(10)은 상기 기재한 방법에 의해 화학식 (1)의 화합물로 전환될 수 있다.

방법 변형 (ii)에서, 화학식 (18)의 카복실산은 상기 기재된 유형의 아마이드 형성 조건 하에서, 예를 들어 HOBt와 조합으로 EDC를 사용하여 암모니아(또는 아미노기 전구체, 예컨대 다이메톡시벤질아민)와 반응된다.

화학식 (18)의 화합물은 이하의 반응식 2에서 나타낸 반응 순서에 의해 제조될 수 있다.

반응식 2에서, 에스터(15)(상기 반응식 1 참조)는 감소된 온도에서 THF 중에서 리튬 헥사메틸다이실라자이드(LiHMDS)와 반응에 의해 요오드화된 후 요오드와 반응되어 요오도 화합물(19)을 제공한다. 그 다음에 요오도 화합물(19)은 스즈키 커플링 조건(상기 참조) 하에서 화학식 (11)의 보로네이트 에스터와 반응되어 중간체(20)를 제공하고, 이는 수산화나트륨을 사용하여 가수분해되어 화학식 (18)의 카복실산을 제공한다.

일단 형성되면, 화학식 (1)의 다수의 화합물은 표준 작용기 상호전환을 사용하여 화학식 (1)의 다른 화합물로 전환될 수 있다.

이러한 전환을 수행하기 위한 작용기 상호전환 및 시약 및 조건의 예는, 예를 들어, 문헌[Advanced Organic Chemistry, Jerry March, 4^th edition, 19, Wiley Interscience, New York, Fiesers' Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-17, John Wiley, 편집 Mary Fieser (ISBN: 0-471-58283-2), 및 Organic Syntheses, Volumes 1-8, John Wiley, 편집 Jeremiah P. Freeman (ISBN: 0-471-31192-8)]에서 찾을 수 있다.

상기 기재한 다수의 반응에서, 분자 상의 원치 않는 위치에서 반응이 일어나는 것을 방지하기 위해 하나 이상의 기를 보호할 필요가 있을 수 있다. 보호기의 예, 작용기의 보호 및 탈보호 방법은 문헌[Protective Groups in Organic Synthesis (T. Green and P. Wuts; 3rd Edition; John Wiley and Sons, 1999)]에서 찾을 수 있다.

본 발명의 화합물은 당업자에게 잘 공지된 표준 기법에 따라 단리되고, 정제될 수 있다. 화합물을 정제하는데 특히 유용한 일 기법은 크로마토그래피 칼럼으로부터 생긴 정제된 화합물을 검출하기 위한 수단으로서 질량 분석법을 사용하는 분취 액체 크로마토그래피이다.

분취 LC-MS는 본 명세서에 기재된 화합물과 같은 작은 유기 분자의 정제를 위해 사용된 표준 및 효과적인 방법이다. 액체 크로마토그래피(LC) 및 질량 분석법(MS)을 위한 방법은 조질의 물질의 더 양호한 분리 및 MS에 의한 샘플의 개선된 검출을 제공하기 위해 변할 수 있다. 분취 구배 LC 방법의 최적화는 다양한 칼럼, 휘발성 용리액 및 개질제 및 구배를 수반할 것이다. 분취 LC-MS 방법을 최적화한 다음, 그들을 사용하여 화합물을 정제하기 위한 방법은 잘 공지되어 있다. 이러한 방법은 문헌[Rosentreter U, Huber U.; Optimal fraction collecting in preparative LC/MS; J Comb Chem.; 2004; 6(2), 159-64 및 Leister W, Strauss K, Wisnoski D, Zhao Z, Lindsley C, Development of a custom high-throughput preparative liquid chromatography/mass spectrometer platform for the preparative purification and analytical analysis of compound libraries; J Comb Chem .; 2003; 5(3); 322-9]에 기재되어 있다.

중간체 화합물 (10), (10A) 및 (15) 내지 (20)은 또한 본 발명의 부분을 형성한다. 따라서, 추가 실시형태에서(실시형태 3.2), 본 발명은 상기 기재된 바와 같은 화학식 (10), (10A), (15), (16), (17), (18), (19) 및 (20)의 중간체 화합물로부터 선택된 화합물을 제공한다.

약제학적 제형

활성 화합물이 단독으로 투여될 가능성이 있지만, 본 발명의 적어도 하나의 활성 화합물을 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체, 애주번트, 부형제, 희석제, 충전제, 완충제, 안정제, 보존제, 윤활제 또는 당업자에게 잘 공지된 다른 물질 및 선택적으로 다른 치료적 또는 예방적 작용제과 함께 포함하는 약제학적 조성물(예를 들어, 제형)로서 제공되는 것이 바람직하다.

따라서, 다른 양태에서(실시형태 4.1), 본 발명은 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용가능한"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 합리적인 이익/위험 비와 상응되는 피험체(예를 들어, 인간)의 조직과 접촉에서의 사용에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투약 형태를 지칭한다. 각각의 담체, 부형제 등은 또한 제형의 다른 성분과 양립가능한 의미에서 "허용가능한"이어야 한다.

약제학적 조성물은 경구, 비경구, 국소, 비강내, 눈, 귀, 직장, 질내 또는 경피 투여에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 조성물이 비경구 투여를 위해 의도되는 경우, 그들은 정맥내, 근육내, 복강내, 피하 투여를 위해 또는 주사, 주입 또는 다른 전달 수단에 의해 표적 기관 또는 조직에 직접 전달을 위해 제형화될 수 있다.

일 실시형태에서(실시형태 4.2), 약제학적 조성물은 i.v. 투여, 예를 들어 주사 또는 주입에 적합한 형태이다.

다른 실시형태 (실시형태 4.3), 약제학적 조성물은 피하(s.c.) 투여에 적합한 형태이다.

추가 실시형태에서(실시형태 4.4), 약제학적 조성물은 경구 투여에 적합한 형태이다.

경구 투여에 적합한 약제학적 투약 형태는 정제, 캡슐, 당의정, 알약, 로젠지, 시럽, 용액, 분말, 과립, 엘릭시르 및 현탁액, 설하정, 웨이퍼 또는 패치 및 구강 패치를 포함한다.

화학식 (1)의 화합물을 함유하는 약제학적 조성물은 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있으며, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA]을 참조한다.

따라서, 정제 조성물은 비활성 희석제 또는 담체, 예컨대 당 또는 당 알코올, 예를 들어 락토스, 수크로스, 솔비톨 또는 만니톨; 및/또는 비당 유래 희석제, 예컨대 탄산나트륨, 인산칼슘, 탄산칼슘, 또는 셀룰로스 또는 이들의 유도체, 예컨대 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스, 및 전분, 예컨대 옥수수 전분과 함께 활성 화합물의 단위 투약량을 함유할 수 있다. 정제는 이러한 표준 성분을 또한 결합 및 과립화제, 예컨대 폴리비닐피롤리돈, 붕해제(예를 들어, 팽윤성 가교된 중합체, 예컨대 가교된 카복시메틸셀룰로스), 윤활제(예를 들어, 스테아레이트), 보존제(예를 들어, 파라벤), 항산화제(예를 들어, BHT), 완충제(예를 들어 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 및 발포성 작용제, 예컨대 시트르산염/중탄산염 혼합물로서 함유할 수 있다. 이러한 부형제는 잘 공지되어 있으며, 본 명세서에서 상세하게 논의할 필요는 없다.

캡슐 제형은 경질 젤라틴 또는 연질 젤라틴 종류일 수 있으며, 고체, 반고체 또는 액체 형태에서 활성 성분을 함유할 수 있다. 젤라틴 캡슐은 동물 젤라틴 또는 이것의 합성 또는 식물 유래 동등물로부터 형성될 수 있다.

고체 투약 형태(예를 들어, 정제, 캡슐 등)는 코팅 또는 미코팅일 수 있지만, 전형적으로 코팅, 예를 들어 보호적 필름 코팅(예를 들어, 왁스 또는 바니시) 또는 방출 제어 코팅을 가질 수 있다. 코팅(예를 들어, 유드라지트(Eudragit)(상표명) 유형 중합체)은 위장관 내에서의 원하는 위치에서 활성 성분을 방출하도록 설계될 수 있다. 따라서, 코팅은 위장관 내에서의 특정 pH 조건 하에서 분해되도록 선택될 수 있고, 이에 의해 위에서 또는 회장 또는 십이지장에서 화합물을 선택적으로 방출시킬 수 있다.

코팅 대신 또는 추가적으로, 약물은 방출 제어제, 예를 들어 위장관에서 산성 또는 알칼리성을 변화시키는 조건 하에서 화합물을 선택적으로 방출시키는데 적합할 수 있는 방출 지연제를 포함하는 고체 매트릭스에서 존재할 수 있다. 대안적으로, 매트릭스 물질 또는 방출 지연 코팅은 위장관을 통과하는 투약 형태로서 실질적으로 연속적으로 침식된 침식성 중합체(예를 들어, 말레산 무수물 중합체)의 형태를 취할 수 있다. 추가적인 대안으로서, 활성 화합물은 화합물의 방출의 삼투적 제어를 제공하는 전달 시스템에서 제형화될 수 있다. 삼투적 방출 및 다른 지연 방출 및 서방출은 당업자에게 잘 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.

국소적 사용을 위한 조성물은 연고, 크림, 스프레이, 패치, 겔, 액체 점적 및 삽입물(예를 들어, 안내 삽입물)을 포함한다. 이러한 조성물은 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다.

비경구 투여를 위한 조성물은 전형적으로 멸균 수성 또는 유성 용액 또는 미세한 현탁액으로서 제시되거나, 또는 주사용 멸균수에 의해 즉석에서 구성을 위한 미세하게 분할된 멸균 분말로 제공될 수 있다.

비경구 투여를 위한 조성물은 별개의 투약 단위로서 투여를 위해 제형화될 수 있거나 또는 주입에 의한 투여를 위해 제형화될 수 있다.

직장 또는 질내 투여를 위한 제형의 예는, 예를 들어 활성 화합물을 함유하는 성형된 주조가능한 또는 왁스 물질로부터 형성될 수 있는 페서리 및 좌약을 포함한다.

흡입에 의한 투여를 위한 조성물은 흡입가능한 분말 조성물 또는 액체 또는 분말 스프레이의 형태를 취할 수 있고, 분말 흡입기 장치 또는 에어로졸 분배 장치를 사용하여 표준 형태에서 투여될 수 있다. 이러한 장치는 잘 공지되어 있다. 흡입에 의한 투여를 위해, 분말화된 제형은 전형적으로 락토스와 같은 비활성 고체 분말 희석제와 함께 활성 화합물을 포함한다.

본 발명의 화합물은 일반적으로 단위 투약 형태에서 제공될 것이고, 이와 같이, 전형적으로 원하는 생물학적 활성 수준을 제공하기 위해 충분한 화합물을 함유할 것이다. 예를 들어, 경구 투여를 위해 의도된 제형은 활성 성분의 0.1 밀리그램 내지 2 그램, 더 보통으로는 10 밀리그램 내지 1 그램, 예를 들어, 50 밀리그램 내지 500 밀리그램을 함유할 수 있다.

활성 화합물은 원하는 치료적 효과를 달성하기에 충분한 양으로 치료가 필요한 환자(예를 들어, 인간 또는 동물 환자)에게 투여될 것이다.

치료 방법

본 명세서에 정의된 화학식 (1)의 화합물 및 이의 하위 그룹은 오로라 키나제(예를 들어, 오로라 키나제 또는 오로라 B 키나제)에 의해 매개된 질병 상태 또는 질환 범위의 예방 또는 치료에서 유용할 것으로 생각된다. 이러한 질병 상태 및 질환의 예는 상기 제시된다.

특히, 화학식 (1)의 화합물은 증식성 질병(예컨대 암)의 예방 및 치료 및 골수증식성질환에서 유용할 것으로 생각된다.

화합물은 일반적으로 이러한 투여가 필요한 피험체, 예를 들어 인간 또는 동물 환자, 바람직하게는 인간에게 투여된다.

화합물은 전형적으로 치료적으로 또는 예방적으로 유용하면서, 대체로 비독성인 양으로 투여될 것이다. 그러나, 특정 상황에서(예를 들어, 생명을 위협하는 질병의 경우에), 화학식 (1)의 화합물을 투여하는 것의 이점은 어떤 독성 효과 또는 부작용의 단점보다 더 중요할 수 있는데, 이 경우에, 독성 정도와 관련된 양에서의 화합물을 투여하는 것이 바람직한 것으로 고려될 수 있다.

화합물은 유리한 치료적 효과를 유지하기 위해 장기간에 걸쳐 투여될 수 있거나 또는 단지 단기간 동안 투여될 수 있다. 대안적으로, 그들은 박동성 또는 연속적 방식으로 투여될 수 있다.

화합물의 전형적인 1일 용량은 필요한 경우 더 높거나 또는 더 낮은 용량이 투여될 수도 있지만, 체중의 킬로그램 당 100 피코그램 내지 100 밀리그램, 더 전형적으로는 체중의 킬로그램 당 5 나노그램 내지 25 밀리그램, 및 더 보통으로는 체중의 킬로그램 당 10 나노그램 내지 15 밀리그램(예를 들어, 10 나노그램 내지 10 밀리그램)의 범위에 있을 수 있다. 궁극적으로, 투여되는 화합물의 양 및 사용되는 조성물의 유형은 치료되는 질병 또는 생리적 질환의 특성과 어울릴 것이며, 의사의 재량에 따를 것이다.

화학식 (1)의 화합물은 유일한 치료제로서 투여될 수 있거나, 또는 그들은 특정 질병 상태, 예를 들어 종양 질환, 예컨대 본 명세서에서 앞서 정의된 바와 같은 암의 치료를 위한 하나 이상의 다른 화합물과 조합 치료에서 투여될 수 있다. 화학식 (1)의 화합물과 함께 투여될 수 있는 다른 치료제의 예(동시이든 또는 상이한 시간 간격이든)는 토포아이소머라제 저해제, 알킬화제, 항대사물질, DNA 결합제 및 미세소관 저해제(튜불린 표적화제), 예컨대 시스플라틴, 사이클로포스파마이드, 독소루비신, 이리노테칸, 플루다라빈, 5FU, 탁산, 미토마이신 C, 또는 방사선치료를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 대안적으로, 화학식 (1)의 화합물은 단클론성 항체 또는 신호전달 저해제와의 병용 요법으로 투여될 수 있다.

화학식 (1)의 화합물이 1, 2, 3, 4종 이상의(바람직하게는 1 또는 2종, 더 바람직하게는 1종의) 다른 치료제와의 병용 요법으로 투여되는 경우, 화합물은 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적으로 투여될 때, 그들은 가까운 간격으로(예를 들어, 5 내지 10분의 기간에 걸쳐) 또는 긴 간격으로(예를 들어 1, 2, 3, 4 이상의 시간만큼 떨어져서, 또는 필요하다면 훨씬 더 긴 시간만큼 떨어져서) 투여될 수 있고, 정확한 투약 요법은 치료제(들)의 특성에 따를 것이다.

본 발명의 화합물은 또한 비화학치료적 치료, 예컨대 방사선치료, 광역학 치료(photodynamic therapy), 유전자 치료; 수술적 및 제어된 식이요법과 함께 투여될 것이다.

다른 치료제와의 병용 요법에서 사용을 위해, 화학식 (1)의 화합물 및 1, 2, 3, 4종 이상의 다른 치료적 작용제는, 예를 들어 2, 3, 4종 이상의 치료제를 함유하는 투약 형태에서 함께 제형화될 수 있다. 대안에서, 개개의 치료제는 별개로 제형화될 수 있고, 선택적으로 그의 사용을 위한 설명서와 함께 키트의 형태에서 함께 제공될 수 있다.

진단 방법

화학식 (1)의 화합물의 투여 전에, 환자가 FLT3 키나제 또는 오로라 키나제(예를 들어, 오로라 키나제 또는 오로라 B 키나제)에 대해 활성을 갖는 화합물에 의한 치료의 여지가 있는 질병 또는 질환에 걸렸는지 또는 고통받는지의 여부를 결정하기 위해 환자는 선별될 수 있다.

따라서, 추가 실시형태에서(5.1 내지 5.6), 본 발명은 하기를 제공한다:

5.1: 오로라 키나제(예를 들어, 오로라 키나제 또는 오로라 B 키나제)에 대해 활성을 갖는 화합물로 치료될 여지가 있는 질병 또는 질환으로 고통받거나 또는 고통받을 위험에 있는 것으로 선별되고 결정된 환자에서 질병 상태 또는 질환의 치료 또는 예방을 위한 본 명세서의 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예.

5.2 오로라 키나제(예를 들어, 오로라 키나제 또는 오로라 B 키나제)에 대해 활성을 갖는 화합물로 치료될 여지가 있는 질병 또는 질환으로 고통받거나 또는 고통받을 위험에 있는 것으로 선별되고, 결정된 환자에서 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 본 명세서의 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 이것의 어떤 하위 그룹 또는 예의 용도.

5.3 오로라 키나제(예를 들어, 오로라 키나제 또는 오로라 B 키나제)에 의해 매개된 질병 상태 또는 질환의 진단 및 치료를 위한 방법으로서, 상기 방법은 (i) 환자가 키나제에 대해 활성을 갖는 화합물로 치료될 여지가 있는 질병 또는 질환의 걸렸는지 또는 고통받는지 여부를 결정하기 위해 환자는 선별하는 단계; 및 (ii) 환자로부터의 질병 또는 질환의 여지가 있는 것으로 나타나는 경우, 그 후에 본 명세서의 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 어떤 하위 그룹 또는 예를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.

5.4 FLT3 키나제에 대해 활성을 갖는 화합물에 의한 치료의 여지가 있는 질병 또는 질환으로 고통받거나 또는 고통받을 위험에 있는 것으로 선별되고, 결정된 환자에서 질병 상태 또는 질환의 치료 또는 예방에서 사용을 위한 본 명세서의 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 임의의 하위 그룹 또는 예.

5.5 FLT3 키나제에 대해 활성을 갖는 화합물에 의한 치료의 여지가 있는 질병 또는 질환으로 고통받거나 또는 고통받을 위험에 있는 것으로 선별되고, 결정된 환자에서 질병 상태 또는 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 본 명세서의 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 임의의 하위 그룹 또는 예의 용도.

5.6 FLT3 키나제에 의해 매개되는 질병 상태 또는 질환의 진단 및 치료방법으로서, 상기 방법은 (i) 키나제에 대한 활성을 갖는 화합물에 의한 치료의 여지가 있는 질병 또는 질환에 걸렸거나 또는 고통받는지 여부를 결정하기 위해 환자를 선별하는 단계; 및 (ii) 환자로부터의 질병 또는 질환이 이러한 여지가 있다는 것을 나타내는 경우, 그 후에 본 명세서의 실시형태 1.1 내지 1.43 중 어느 하나에 정의된 화합물 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 하위 그룹 또는 예를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.

환자로부터 취한 생물학적 샘플에 환자가 고통받거나 또는 받을 수 있는 암과 같은 질환 또는 질병이 유전적 이상(예를 들어, 돌연변이된 키나제) 또는 비정상 단백질 발현, 예컨대 오로라 키나제 또는 FLT3 키나제의 과발현 또는 상향조절을 특징으로 하는지 여부를 결정하기 위한 진단적 시험을 실시할 수 있다. 환자에 오로라 키나제 또는 FLT3 키나제의 상향조절의 특징적 마커 또는 돌연변이된 오로라 키나제 또는 FLT3 키나제의 존재를 검출하기 위한 진단적 시험을 실시할 수 있다. 오로라 키나제 또는 FLT3 키나제의 상향조절을 지니는 종양은 키나제의 저해제에 특히 민감할 수 있다. 따라서, 종양은 오로라 키나제 또는 FLT3 키나제의 상향조절을 위해 우선적으로 선별될 수 있다. 진단적 시험은 종양 생검 샘플, 혈액 샘플(흐르는(shed) 종양 세포의 단리 및 풍부화), 채변 검사, 가래, 염색체 분석, 흉수, 복막액 또는 소변 상에서 전형적으로 수행된다.

오로라 키나제 또는 FLT3 키나제에서 돌연변이를 수행하는 개체의 확인은 키나제의 저해제에 의한 치료에 특히 적합하다는 것을 의미할 수 있다. 종양은 치료 전 변이체의 존재에 대해 우선적으로 선별될 수 있다. 선별 방법은 전형적으로 직접적 시퀀싱, 올리고뉴클레오타이드 마이크로어레이 분석 또는 돌연변이 특이적 항체를 수반할 것이다.

단백질의 돌연변이 및 상향조절의 확인 및 분석 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 선별 방법은, 표준 방법, 예컨대 역전사효소 폴리머라제 연쇄 반응(RT-PCR) 또는 인시츄 혼성화를 포함할 수 있었다.

RT-PCR에 의한 선별에서, 종양에서 mRNA 수준은 mRNA의 cDNA 복제물을 만든 다음, PCR에 의해 cDNA를 증폭시킴으로써 평가된다. PCR 증폭 방법, 프라이머 선별 및 증폭 조건은 당업자에게 공지되어 있다. 핵산 조작 및 PCR은 예를 들어 문헌[Ausubei et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology (2004) John Wiley & Sons Inc., 또는 Innis, M.A. et al., eds. PCR Protocols: a guide to methods and applications (1990) Academic Press, San Diego]에서 기재된 바와 같은 표준 방법에 의해 수행된다. 핵산 기법을 수반하는 반응 및 조작은 또한 문헌[Sambrook et al ., 3^rd Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press]에 기재되어 있다. 대안적으로, RT-PCR(예를 들어 Roche Molecular Biochemicals)을 위해 상업적으로 입수가능한 키트 또는 본 명세서에 참조로서 포함되는 미국특허 제4,666,828호; 제4,683,202호; 제4,801,531호; 제5,192,659호, 제5,272,057호, 제5,882,864호 및 6,218,529호에 제시된 바와 같은 방법이 사용될 수 있다.

mRNA 발현을 위한 인시츄 혼성화 기법의 예는 형광 인시추 혼성화(fluorescence in-situ hybridisation: FISH)일 것이다(문헌[Angerer, 1987 Meth. Enzymol., 152: 649] 참조).

일반적으로, 인시추 혼성화는 다음의 주요 단계를 포함한다: (1) 분석되는 조직의 고정; (2) 표적 핵산의 접근성을 증가시키고, 비특이적 결합을 감소시키기 위한 샘플의 사전혼성화 처리; (3) 생물학적 구조 또는 조직에서 핵산에 대한 핵산 혼합물의 혼성화; (4) 혼성화에서 결합되지 않는 핵산 단편을 제거하기 위한 혼성화 후 세척, 및 (5) 혼성화된 핵산 단편의 검출. 이러한 적용에서 사용되는 프로브는 전형적으로는, 예를 들어 방사성동위원소 또는 형광 리포터로 표지된다. 바람직한 프로브는 충분하게 긴, 예를 들어, 약 50, 100 또는 200 뉴클레오타이드 내지 약 1000개 이상의 뉴클레오타이드이어서 엄격한 조건 하에서 표적 핵산(들)과 특이적 혼성화를 할 수 있다. FISH를 수행하기 위한 표준 방법은 문헌[Ausubei et al ., eds. Current Protocols in Molecular Biology (2004) John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview, John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-760-2; (2004) pps. 077-088; Series: Methods in Molecular Medicine]에 기재되어 있다.

대안적으로, mRNA로부터 발현된 단백질 생성물은 종양 샘플, 마이크로타이터 플레이트에 의한 고체상 분석, 웨스턴 블롯팅, 2차원 SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동, ELISA, 유세포 분석 및 특이적 단백질의 검출을 위해 당업계에 공지된 다른 방법에 의해 분석될 수 있다. 검출 방법은 부위 특이적 항체의 사용을 포함할 것이다.

도 1은 실시예 17에 기재된 MV4-11 이종이식 마우스 모델에서의 사이타라빈과 비교한 실시예 2 및 7의 화합물의 항종양 효과를 도시한 도면;
도 2는 MV4-11 이종이식 마우스 모델에서의 사이타라빈과 비교한 실시예 2의 화합물의 항종양 효과를 도시한 도면;
도 3은 MV4-11 이종이식 마우스 모델에서의 사이타라빈과 비교한 실시예 7의 화합물의 항종양 효과를 도시한 도면;
도 4는 비히클, 실시예 2 및 7의 화합물 및 사이타라빈의 투여 후, 제29일에 MV4-11 이종이식-보유 누드 마우스의 종양 중량(종말점)을 도시한 도면;
도 5는 비히클, 실시예 2 및 7의 화합물 및 사이타라빈의 투여 후, 실시예 17에 기재된 연구의 전체 연구 기간 동안 MV4-11 이종이식-보유 누드 마우스의 체중 변화를 도시한 도면.

실시예

본 발명은 이제 설명될 것이지만, 다음의 실시예에 기재된 구체적 실시형태에 대한 언급에 의해 제한되지 않을 것이다.

실시예에서, 다음의 약어가 사용된다.

TEA: 트라이에틸아민

PE: 석유 에터

EtOAc: 에틸 아세테이트

STM: 출발물질

DMF: N,N-다이메틸폼아마이드

DMSO: 다이메틸설폭사이드

DCM: 다이클로로메탄

LCMS: 액체 크로마토그래피-질량 분석법

THF: 테트라하이드로퓨란

prep. HPLC: 분취 HPLC

중간체의 제조

A. 중간체 화합물(10A)의 제조

4-{4-[4-(2,4- 다이메톡시 - 벤질카바모일 )-2- 요오도 - 옥사졸 -5-일]- 페닐 }-2,2-다이메틸-피페라진-1- 카복실산 tert - 뷰틸 에스터

중간체 화합물(10A)을 상기 반응식 1에 나타낸 반응 순서에 의해 준비할 수 있다.

단계 1

5-(4- 요오도 - 페닐 )- 옥사졸 -4- 카복실산 에틸 에스터(반응식 1에서의 화합물(13))

100㎖ THF 중의 4-요오도벤조일 클로라이드(14.0g, 0.052㏖)의 용액에 적가 방식으로 TEA(15.6g, 0.156㏖)를 첨가하였고, 혼합물을 10분 동안 교반시킨 후 에틸 2-아이소사이아노아세테이트(6.5g, 0.058㏖)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰고, 용매를 제거하였으며, 잔사를 EtOAc 및 물로 처리하였다. 유기층을 분리시켰고, Na₂SO₄로 건조시켰으며, 용매를 제거하였다. 조질의 생성물을 칼럼에 의해 정제하여 표제 화합물(11.0g, 61.7%)을 오렌지색 고체로서 제공하였다.

¹H NMR: CDCl₃ 400MHz - δ 7.92 (s, 1H), 7.80-7.90 (m, 4H), 4.43 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.42 (t, J=7.2 Hz, 3H).

단계 2

4-[4-(4- 에톡시카보닐 - 옥사졸 -5-일)- 페닐 ]-2,2- 다이메틸 -피페라진-1- 카복실산 tert - 뷰틸 에스터(반응식 1에서의 화합물(15))

건조 톨루엔(300㎖) 중의 5-(4-요오도-페닐)-옥사졸-4-카복실산 에틸 에스터(11.0g, 32m㏖)의 교반 용액에 2,2-다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터(7.53g, 35.2m㏖), Pd(AcO)₂(580㎎, 2.56m㏖), 바이페닐-2-일다이사이클로헥실포스핀(0.9g, 2.56m㏖) 및 Cs₂CO₃(20.7g, 64m㏖)을 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃로 가열하였고, 24시간 동안 교반시켰다. 용액을 실온으로 냉각시켰고, 그 다음에 물과 EtOAc로 나누었다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 용매를 제거하여 조질의 생성물을 제공하였다. 그것을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(미반응 출발물질을 회수하기 위해 PE/ EtOAc = 40/1 ~ 10/1; PE/EtOAc = 8/1 ~ 5/1에 의해 정제하여 표제 화합물(6.0g, 43%)을 황색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR: DMSO 400 MHz - δ 8.06 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.81 (s, 1H), 6.75 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 4.42 (q, 2H), 3.86 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.46 (s, 2H), 1.56 (s, 9H), 1.43 (s, 6H).

단계 3

4-{4-[4-(2,4- 다이메톡시 - 벤질카바모일 )- 옥사졸 -5-일]- 페닐 )-2,2- 다이메틸 -피페라진-1- 카복실산 tert - 뷰틸 에스터(반응식 1에서의 화합물(17))

20㎖ THF 및 20㎖ 메탄올 중의 4-[4-(4-에톡시카보닐-옥사졸-5-일)-페닐]-2,2-다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터(2.4g, 5.6m㏖)의 용액에 2N 수성 수산화나트륨 용액(11.2㎖, 22.4m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰고, 그 다음에 유기 용매를 진공에서 제거하였다. 남아있는 수성 혼합물을 1N 수성 염산의 첨가에 의해 pH 4~5로 조절하였다. 혼합물을 냉동건조시켜 3g의 4-[4-(4-카복시-옥사졸-5-일)-페닐]-2,2-다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터를 회황색 분말로서 수득하였고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.

4-[4-(4-카복시-옥사졸-5-일)-페닐]-2,2-다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터를 30㎖ DMF 중에 용해시켰다. 용액에 2,4-다이메톡시-벤질아민(1.26g, 7.6m㏖), HATU(2.8g, 7.4m㏖) 및 TEA(1g, 10m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(PE:EtOAc = 5:1 내지 DCM:MeOH= 200:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.6g, 3 m㏖, 수율: 2단계에 걸쳐 54%)을 얻었다.

¹ HNMR : (400MHz MeOD) δ 8.10 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 8.00 (s, 1H), 7.20 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 6.48-6.58 (m, 2H), 4.49 (s, 2H), 3.84-3.90 (m, 5H), 3.80 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.56 (s, 2H), 1.51 (s, 9H), 1.45 (s, 6H).

단계 4

4-{4-[4-(2,4- 다이메톡시 - 벤질카바모일 )-2- 요오도 - 옥사졸 -5-일]- 페닐 }-2,2-다이메틸-피페라진-1- 카복실산 tert - 뷰틸 에스터(반응식 1에서의 화합물(10A))

-78℃에서 20㎖ THF 중의 4-{4-[4-(2,4-다이메톡시-벤질카바모일)-옥사졸-5-일]-페닐}-2,2- 다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터(2.6g, 4.7m㏖)의 용액에 THF 중의 LiHMDS(44㎖, 44m㏖)의 1M 용액을 첨가하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반시킨 다음, I₂(9g, 35m㏖)를 일부분 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반시켰다. 혼합물을 15% 수성 Na₂S₂O₃로 퀀칭시켰고, EtOAc로 추출하였으며, 물로 세척하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰다. 용매를 진공으로 제거하여 조질의 생성물을 제공하였고 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(PE/EtOAc = 2/1 내지 PE/EtOAc/DCM = 1/1/2)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.4g, 수율: 75 %)을 얻었다.

¹ H NMR : CDCl3 400MHz - δ 8.16 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.22-7.47 (m, 3H), 6.70 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 6.41 -6.46 (m, 3H), 4.52 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 3.82-3.88 (m, 5H), 3.80 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 3.43 (s, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.41 (s, 6H).

B. 보론산 중간체의 제조

이하에 제시한 방법을 따름으로써, 다음의 보론산/보로네이트 에스터 중간체 B-1 내지 B-12를 제조하였다.

중간체 B-1

1-( tert - 뷰틸다이메틸실릴 )-5- 플루오로 -1H-인돌-4- 일보론산

단계 1

1-(tert-뷰틸다이메틸실릴)-5-플루오로-1H-인돌의 제조

0℃에서, NaH(1.88g, 46.2m㏖)를 40㎖ DMF 중의 5-플루오로-1H-인돌(5.2g, 38.5m㏖) 용액에 첨가하였다. 10분 후, 0℃에서 tert-뷰틸다이메틸실릴 클로라이드(6.96g, 46.2m㏖)를 첨가하였고, 혼합물을 0℃에서 추가 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 실온으로 가온시켰고, 밤새 교반시킨 다음, 물의 첨가에 의해 희석시켰고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 농축시켰으며, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(6.5g, 67.7%)을 제공하였다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ 7.41 (s, 1H), 7.28-7.25 (dd, 1H, J=2.4 및 J=8.8), 7.22 (d, 1H, J=3.2), 6.89 (d, 1H, J=2.8), 6.58-6.57 (dd, 1H, J=O.8 및 J=3.2), 0.93 (t, 9H), 0.60(t, 6H)

단계 2

1-(tert-뷰틸다이메틸실릴)-5-플루오로-1H-인돌-4-일보론산의 제조

-78℃에서 THF 중의 단계 1(4.98g, 20m㏖) 및 TMEDA(2.32g, 20m㏖)의 생성물의 혼합물에 사이클로헥산 중의 s-BuLi(15.4㎖, 20m㏖)의 1.3M 용액을 서서히 첨가하였고, 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 트라이아이소프로필 보레이트(3.76g, 20m㏖)를 -78℃에서 혼합물에 첨가하였고, 다른 1시간 동안 교반시킨 다음, -20℃로 가온시켰다. 물을 첨가하였고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였으며, 유기층을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 증발시켰다. 잔사를 재결정화하여(EtOAc 및 n-헥산) 표제 화합물(1.2g, 20.7%)을 제공하였다.

¹ H NMR DMSO 400 MHz δ 7.48-7.45 (m, 1H), 7.35 (d, 1H, J=3.2), 6.83 (t, 1H), 6.50 (s, 2H), 6.62(dd, 1H, J=O.8 및 J-3.2), 0.84 (s, 9H), 0.56(s, 6H).

중간체 B-2

5- 메틸 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

3- 브로모 -2,4- 다이메틸 - 나이트로벤젠

AcOH(75㎖) 중의 2,6-다이메틸-브로모벤젠(10g, 54m㏖)의 용액에 발연 질산(32.5㎖)을 서서히 첨가하였고, 빙욕에서 냉각시켰다. 얻어진 혼합물을 실온으로 가온시켰고, 1시간 동안 교반시켰으며, 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 교반시키면서 얼음에 부었다. 얻어진 침전물을 흡인 여과에 의해 수집하여 표제 화합물(10g)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

단계 2

[2 -(2- 브로모 -3- 메틸 -6-나이트로- 페닐 )-비닐]- 다이메틸 -아민

DMF/DMA(180㎖) 중의 3-브로모-2,4-다이메틸-나이트로벤젠(12g, 52m㏖) 및 피롤리딘(2.12㎖)의 혼합물을 120℃에서 밀봉관에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 물로 희석시켰고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 농축시켜 조질의 표제 화합물(10g)을 제공하였다.

단계 3

4- 브로모 -5- 메틸인돌

[2-(2-브로모-3-메틸-6-나이트로-페닐)-비닐]-다이메틸-아민(10g)을 AcOH /H₂O(100㎖:25㎖) 중에 용해시켰고, 0℃로 냉각시켰으며, Zn(30g)을 일부분으로 서서히 첨가하면서 처리하였다. 완전한 첨가 후, 반응 혼합물을 110℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 물로 희석시켰으며, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 농축시켰으며, 조질의 생성물을 제공하였다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.4g, 20 %)을 얻었다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ 2.47 (m, 3H), 6.50-6.51 (m, 1H), 6.97-6.99 (m, 1H), 7.12-7.18(m, 2H), 8.12 (s, 1H)

단계 4

5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌의 제조:

4-브로모-5-메틸인돌(0.7g, 3.35m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(1.7g, 6.7m㏖), KOAc(1g, 10m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(73㎎, 3 ㏖%)를 2개의 40㎖ 유리관에서 건조 DMSO(20㎖) 중에 현탁시켰고, 알루미늄/테플론 크림프로 단단하게 밀봉시켰다. 샘플을 250W, 180℃에서 40분 동안 CEM-디스커버 단일 모드 마이크로웨이브 반응기에서 조사하였다. 반응의 완료 후, 용기를 60℃로 냉각시켰고, 합하였으며, 조질의 혼합물을 셀라이트의 얇은 플러그를 통해 여과시켰다. 셀라이트 플러그를 EtOAc(50㎖)로 세척하였으며, 유기 분획을 합하였고, 용매를 감압하에 제거하였다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제한 다음, 분취-HPLC에 의해 5(280㎎, 33%)를 제공하였다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ 1.41 (s, 12H), 2.63 (s, 3H), 6.96-6.97 (m, 1H), 7.01-7.03 (m, 1H), 7.18-7.20(m, 1H), 7.32-7.34 (m, 1H), 8.13 (s, 1H)

중간체 B-3

7- 플루오로 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

4-브로모-7-플루오로-1H-인돌의 제조

-40℃에서, 비닐마그네슘 브로마이드(THF 중에서 300㎖의 1.0M 용액, 300m㏖)를 THF(700㎖) 중의 3-나이트로-4-플루오로-브로모벤젠(22g, 100m㏖)의 용액에 적가하였다. -40℃에서 1시간 후, 혼합물을 수성 NH₄Cl 용액에 의해 퀀칭시켰고, EtOAc에 의해 추출하였다. 유기층을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 농축시켰고, 조질의 생성물을 제공하였으며, 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 4-브로모-7-플루오로-1H-인돌(5g, 23.3%)을 얻었다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ 6.56-6.58 (m, 1H), 6.72-6.79 (m, 1H), 7.06-7.17 (m, 1H), 7.20-7.24 (m, 1H), 8.45 (s, 1H).

단계 2

7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌

4-브로모-7-플루오로-1H-인돌(5g, 23.3m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(9.5g, 37.4m㏖), KOAc(6.85g, 69.9m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(0.51g, 3 ㏖%)를 5개의 40㎖ 유리관에서 건조 DME(60㎖) 중에 현탁하였고, 이를 알루미늄/테플론 크림프로 단단히 밀봉시켰다. 샘플을 250W, 150℃에서 25분 동안 CEM-디스커버 단일 모드 마이크로웨이브 반응기에서 조사하였다. 반응의 완료 후, 용기를 60℃로 냉각시켰고, 합하였으며, 조질의 혼합물을 셀라이트의 얇은 플러그를 통해 여과시켰다. 셀라이트를 EtOAc(50㎖)로 세척하였으며, 유기 분획을 합하였고, 용매를 감압하에 제거하였다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제한 다음, 분취-HPLC에 의해 표제 화합물(2g, 32.9%)을 제공하였다.

¹H NMR CDCl₃ 400MHz δ 1.40 (s, 12H), 6.86-6.96 (m, 1H), 7.02-7.14 (m, 1H), 7.20-7.24(m, 1H), 7.51-7.62 (m, 1H), 8.43 (s, 1H)

중간체 B-4

7- 클로로 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

4-브로모-1-클로로-2-나이트로-벤젠의 제조:

260㎖ HBr(48%) 중의 0℃에서 4-클로로-3-나이트로-페닐아민(17.2g, 0.1㏖)의 용액에 수중에서 NaNO₂(13.8g, 0.2㏖)를 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반시킨 다음, CuBr(24g, 0.17㏖)을 혼합물에 일 부분 첨가하였고, 추가 1시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하였고, 혼합물을 실온으로 가온시킨 다음, EtOAc로 추출하였다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(13g, 55%)을 제공하였다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ 8.03-8.02 (m, 1H), 7.66-7.63 (m, 1H), 7.45-7.42 (m, 1H).

단계 2

4-브로모-7-클로로인돌의 제조:

-40℃에서 400㎖ THF 중의 4-브로모-1-클로로-2-나이트로-벤젠(14g, 0.059㏖)의 용액에 비닐마그네슘 브로마이드(THF 중의 1.0M의 177㎖, 0.177㏖)를 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 -40℃에서 교반시켰다. 수성 NH₄Cl을 첨가하였고, 혼합물을 에터로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 농축시켰고, 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(6g, 44%)을 제공하였다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ 8.5 (s, 1H), 7.31-7.29 (m, 1H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.07-7.05 (m, 1H), 6.65-6.63 (m,1H).

단계 3

7-클로로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌의 제조:

4-브로모-7-클로로인돌(0.6g, 2.6m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(0.728g, 2.86m㏖), KOAc(0.76g, 7.8㏖) 및 pd(dppf)Cl₂(57㎎, 3㏖%)를 DME(15㎖) 중에 현탁시켰고, 250W, 30℃에서 35분 동안 CEM-디스커버 단일 모드 마이크로웨이브 반응기에서 조사하였다. 고체를 여과에 의해 제거하였고, 물을 첨가하였으며, 얻어진 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 농축시켰고, 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.3g, 39%)을 제공하였다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ 8.5 (s, 1H), 7.57-7.55 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.3(s, 1H), 7.21-7.19 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.08-7.07 (m,1H), 1.396-1.385 (m, 12H).

중간체 B-5

7- 메톡시 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

4-브로모-3-메틸-2-나이트로-페놀의 제조:

CHCl₃(20㎖) 중의 3-메틸-2-나이트로-페놀(20g, 0.13㏖)의 용액에 HOAc(15㎖) 중의 Br₂(6.4㎖) 용액을 0℃에서 적가하였고, 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 얼음을 첨가하였고, 혼합물을 CHCl₃로 추출하였다. Na₂SO₄로 건조시킨 후, CHCl₃를 제거하여 4-브로모-3-메틸-2-나이트로-페놀(30g)을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

단계 2

1-브로모-4-메톡시-2-메틸-3-나이트로-벤젠의 제조:

아세톤(200㎖) 중의 4-브로모-3-메틸-2-나이트로-페놀 (30g, 0.13㏖)의 용액에 K₂CO₃(39g, 0.28㏖) 및 요오도메탄(17.6㎖, 0.28㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반시킨 다음, 그것을 농축시켰고, 물로 희석시켰으며, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 여과시켰고, 농축시켜 1-브로모-4-메톡시-2-메틸-3-나이트로-벤젠(31g, 96%)을 제공하여, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

단계 3

4-브로모-7-메톡시인돌의 제조:

DMF(150㎖) 중의 1-브로모-4-메톡시-2-메틸-3-나이트로-벤젠(31g, 0.126㏖)의 용액에 다이메틸폼아마이드 다이메틸아세탈(27㎖) 및 피롤리딘(10.5㎖, 0.127㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 가열하였고, 실온으로 냉각시켰으며, 혼합물을 물로 희석시켰고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 여과시켰고, 농축시켰다. 잔사를 HOAc(50㎖)에 용해시켰으며, HOAc(150㎖)를 비등시키면서 Fe(20.5g, 0.37㏖)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 1시간 동안 환류시켰고, 실온으로 냉각시켰으며, 물을 첨가하였고, 혼합물을 Na₂CO₃로 중화시켰으며, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 여과시켰고, 농축시켰다. 잔사를 분취-TLC(PE/EtOAc =5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(13g, 44%)을 제공하였다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ: 8.41 (brs, 1H), 7.18-7.08 (m, 2H), 6.49-6.43 (m, 2H), 3.86 (s, 3H).

단계 4

7-메톡시-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌의 제조:

1,4-다이옥산(170㎖) 중의 4-브로모-7-메톡시인돌(5g, 22.2m㏖)의 용액에 비스(피나콜라토)다이보론(6.2g, 24.4m㏖), KOAc(6.5g, 66.3m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(1.2g, 1.7m㏖)를 첨가하였고, 혼합물을 15시간 동안 환류로 가열하였다. 냉각시킨 후, 혼합물을 농축시켰고, 잔사를 분취 TLC(PE/EtOAc= 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.6g, 43%)을 제공하였다.

¹ H NMR CDCl₃ 400MHz δ: 8.38 (brs, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.66 (d, 1H), 3.98 (s, 3H), 1.39 (s, 12H).

중간체 B-6

5,7- 다이메틸 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)1H-인돌

단계 1

1-브로모-2,4-다이메틸-5-나이트로-벤젠의 제조:

1-브로모-2,4-다이메틸-벤젠(9g, 48.6m㏖)을 HNO₃(100㎖, 60%)에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 혼합물을 얼음물에 부었고 EtOAc로 추출하였다. 유기상을 그 다음에 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 농축시켰고, 1-브로모-2,4-다이메틸-5-나이트로-벤젠(6.5g)을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 후속단계에서 사용하였다.

4-브로모-5,7-다이메틸인돌의 제조:

-78℃에서 THF(100㎖) 중의 1-브로모-2,4-다이메틸-5-나이트로-벤젠(7.5g, 32.6m㏖)의 용액에 비닐마그네슘 브로마이드(THF 중의 110㎖의 1.0M 용액, 1.1㏖)을 적가하였다. 반응물을 -40℃에서 서서히 가온시켰고, 그 다음에 4시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하였고, 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온시켰으며, EtOAc로 추출하였다. 그 다음에 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 농축시켰고, 4-브로모-5,7-다이메틸인돌(2.3g)을 제공하여, 이것을 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.

5,7-다이메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌의 제조:

4-브로모-5,7-다이메틸인돌(2.3g 조질, 7m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론 (2.54g, 10m㏖), KOAc(2g, 20m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(150㎎, 3 ㏖%)를 5개의 50㎖ 유리관 중의 건조 DME(30㎖) 중에 현탁시켰고, 이를 알루미늄/테플론 크림프로 단단히 밀봉시켰다. 샘플을 250W, 130℃에서 50분 동안 마이크로웨이브 반응기에서 조사하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 합하였고, 물로 희석시켰으며, EtOAc로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 용매를 증발에 의해 제거하였다. 분취 HPLC로 표제 화합물(0.37g, 15%)을 얻었다.

¹ H NMR: (400 MHz, CDCl₃)δ: 7.97 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 1.40(s, 12H)

중간체 B-7

7- 플루오로 -5- 메틸 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

1-브로모-4-플루오로-2-메틸-5-나이트로-벤젠의 제조:

160㎖ H₂SO₄ 중의 1-브로모-4-플루오로-2-메틸-벤젠(20g, 0.11㏖)의 용액에 0℃에서 KNO₃(116g, 0.11㏖)을 일부분 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시켰고, 밤새 교반시켰다. 혼합물을 얼음물에 부었고, EtOAc로 추출하였으며, Na₂SO₄로 건조시켰고, 농축시켜 1-브로모-4-플루오로-2-메틸-5-나이트로-벤젠(20g)을 제공하였고, 이것을 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

단계 2

4-브로모-7-플루오로-5-메틸인돌의 제조:

-78℃에서 THF(250㎖) 중의 1-브로모-4-플루오로-2-메틸-5-나이트로-벤젠(20g, 0.086㏖)의 용액에 비닐마그네슘 브로마이드(300㎖, 0.3㏖)를 적가한 다음, 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하였고, 반응물을 실온으로 서서히 가온시켰다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였고, Na₂SO₄로 건조시켰으며, 농축시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 4-브로모-7-플루오로-5-메틸인돌(3.2g, 16.4%)을 얻었다.

단계 3

7-플루오로-5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌의 제조:

4-브로모-7-플루오로-5-메틸인돌(3.2g, 0.014㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(5.08g, 0.02㏖), Pd(dppf)Cl₂(0.1g) 및 KOAc(4.1g, 0.042㏖)를 10개의 50㎖ 유리관에서 건조 DME(60㎖) 중에 현탁시켰으며, 알루미늄/테플론 크림프로 단단히 밀봉시켰다. 샘플을 250W에서 2시간 동안 135℃에서 마이크로웨이브 반응기에서 조사하였다. 샘플을 냉각시켰으며, 합쳤고, 물로 희석시켰으며, EtOAc로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰으며, 용매를 증발에 의해 제거하였다. 분취 HPLC로 표제 화합물(0.43g, 11%)을 얻었다.

¹ H NMR (MDOH 400 MHz)

δ: 7.22-7.21 (d, 1H), 6.87-6.85 (m, 1H), 6.68-6.65 (d, 1H), 2.56(s, 3H), 1.39 (s, 12H).

중간체 B-8

3- 메틸 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

DMF(10㎖) 중의 3-메틸-4-브로모인돌(0.79g, 3.8m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(1.1g, 4.5m㏖), PdCl₂(dppf)₂(83㎎, 0.11m㏖) 및 KOAc(1.1g, 11.3m㏖)의 혼합물을 N₂ 분위기 하에 10분 동안 퍼지시킨 후, 80℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시켰다. 수성층을 EtOAc로 추출하였고, 염수로 세척하였으며, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.7g, 72%)을 제공하였다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7.93 (brs, 1H), 7.57 (d, 1H, J= 6.8 Hz), 7.42 (d, 1H, J= 8 Hz), 7.17 (t, 1H, J= 7.2 Hz), 7.01 (s, 1H), 2.48 (s, 3H), 1.40 (s, 12H).

중간체 B-9

5-에틸-4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

6-에틸-2-메틸-3-나이트로-페닐아민의 제조

2-에틸-6-메틸-페닐아민(21g, 156m㏖)을 빙욕 상에서 0℃에서 175㎖ 진한 H₂SO₄ 중에서 용해시켰다. 9㎖(171m㏖, 1.1 eq.) 진한 HNO₃를 첨가하였고, 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반시켰다. 반응 혼합물을 1ℓ의 얼음 상에 부었고, 얻어진 용액을 EtOAc로 5회 추출하였다. 합한 유기층을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 용매를 감압하에 제거하여 6-에틸-2-메틸-3-나이트로-페닐아민 및 부산물 6-메틸-2-에틸-3-나이트로-페닐아민의 혼합물의 19g(수율 68%)을 수득하였다. 혼합물을 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

단계 2

2-브로모-1-에틸-3-메틸-4-나이트로-벤젠의 제조

15㎖의 수 중에서 NaNO₂(7.7g, 110m㏖)를 0℃에서 48% 수성 HBr(35㎖) 중의 단계 1(19g, 106m㏖)의 생성물의 교반 용액에 서서히 첨가하였다. 48% 수성 HBr(10㎖) 중의 CuBr(1.4g, 10m㏖)을 적가하였다. 15분 동안 교반시킨 후, 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 혼합물을 물로 희석시켰으며, EtOAc로 5회 추출하였다. 합한 유기상을 농축시켰으며 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(PE/EtOAc = 50:1)에 의해 정제하여 2-브로모-1-에틸-3-메틸-4-나이트로-벤젠 및 2-브로모-3-에틸-1-메틸-4-나이트로-벤젠(23g, 수율 95%)의 혼합물을 수득하였다.

단계 3

1-[2-(2-브로모-3-에틸-6-나이트로-페닐)-비닐]-피롤리딘의 제조

DMF/DMA(150㎖) 중의 단계 2(13g, 53m㏖) 및 피롤리딘(2.3㎖)의 생성물을 밤새 환류에서 가열하였다. 혼합물을 냉각시킨 다음 농축시켜 조질의 표제 화합물을 제공하였고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.

단계 4

4-브로모-5-에틸-1H-인돌의 제조

80㎖의 AcOH 중에서 단계 3으로부터의 조질의 1-[2-(2-브로모-3-에틸-6-나이트로-페닐)-비닐]-피롤리딘 용액을 50㎖의 AcOH 중에서 철(13g)의 환류 현탁액에 일부분 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 냉각시킨 후, 혼합물을 물로 희석시켰으며, Na₂CO₃로 중화시켰고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 농축시켰으며, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 및 분취 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(1.5g, 6-에틸-2-메틸-3-나이트로-페닐아민으로부터 12%)을 수득하였다.

단계 5

5-에틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌의 제조

4-브로모-5-에틸-1H-인돌(1.0g, 4.48m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(2.4g, 9m㏖), KOAc(1.5g, 15m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(210㎎, 6 ㏖%)를 건조 다이옥산(50㎖) 중에 현탁시켰고, 80℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 냉각시켰고, 여과시켰으며, 여과액을 농축시켰고, 분취 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(300㎎, 25%)을 제공하였다.

¹ H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.90 (brs, 1H), 7.31-7.25 (m, 1H), 7.15-7.08 (m, 1H), 6.98 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.90-9.85 (m, 1H) 2.92 (q, 2H, J = 7.6 Hz), 1.34 (s, 12H), 1.16 (t, 3H, J = 7.6 Hz).

중간체 B-10

7-에틸-4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

4-브로모-1-에틸-2-나이트로-벤젠의 제조

-20℃에서 9㎖ 진한 H₂SO₄ 중의 1-브로모-4-에틸벤젠(7g, 37.8m㏖)의 용액에 H₂SO₄(3.74g, 41.9m㏖) 및 HNO₃(2.64g, 41.9m㏖)의 혼합물을 첨가하였다. 혼합물을 -20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하였고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기상을 수성 NaHCO₃ 및 염수로 세척하였고, Na₂SO₄로 건조시켰으며, 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(3g, 34%)을 제공하였다.

¹ H NMR (CDCl₃ 400 MHz)

δ: 8.04-8.035 (d, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.29-7.27 (d, 1H), 2.92-2.87 (m, 2H), 1.31-1.28 (t, 3H).

단계 2

4-브로모-7-에틸-1H-인돌의 제조

-40℃에서 THF 중의 4-브로모-1-에틸-2-나이트로-벤젠(8.7g, 0.037㏖)의 용액에 비닐마그네슘 브로마이드(132㎖, 0.132㏖)를 적가하였고, 혼합물을 -40℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물로 희석시켰으며, EtOAc로 추출하였고, Na₂SO₄로 건조시켰으며 농축시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.35g, 16%)을 얻었다.

단계 3

7-에틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보롤란-2-일)-1H-인돌의 제조

4-브로모-7-에틸-1H-인돌(1.35g, 6.02m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(3.05g, 12m㏖), KOAc(1.8g, 18m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(128㎎)를 건조 DME(100㎖) 중에 현탁시켰고, 135℃에서 밤새 가열하였다. 혼합물을 냉각시켰고, 여과시켰으며, 여과액을 농축시켰으며 분취 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(300㎎, 25%)을 제공하였다.

¹ H NMR (CDCl3 400 MHz) δ: 8.14 (s, 1H), 7.61-7.60 (d, 1H), 7.28-7.25 (d, 1H), 7.08-7.05(m, 2H), 2.92-2.86 (m, 2H), 1.38-1.35(m, 15H).

중간체 B-11

상업적으로 입수가능함.

중간체 B-12

7- 트라이플루오로메틸 -4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-인돌

단계 1

4- 브로모 -7- 트라이플루오로메틸인돌

200㎖ THF 중의 4-브로모-2-나이트로-1-트라이플루오로메틸-벤젠 11.4g, 0.04㏖)의 용액에 -78℃에서 비닐 마그네슘 브로마이드(160㎖, 0.16㏖)를 첨가하였고, 혼합물을 1.5시간 동안 교반시킨 후, NH₄Cl의 포화 용액으로 퀀칭시켰으며, EtOAc로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조질의 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2g, 25%)을 제공하였다. ¹H NMR (CDCl₃ 400 MHz), δ 8.6 (br, 1H), 7.28-7.38 (m, 3H), 6.70 (m, 1H).

단계 2

30㎖의 DMSO 중에서 4-브로모-7-트라이플루오로메틸인돌(2g, 7.6m㏖), 비스(피나콜라토)다이보론(2.5g, 9m㏖), KOAc(1g, 0.01㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(0.2g)의 혼합물을 90℃에서 N₂하에 밤새 가열하였다. 잔사를 물과 EtOAc로 나누었다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 용매를 진공에서 제거하여 조질의 생성물을 제공하였으며, 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1g, 41%)을 제공하였다. ¹H NMR (CDCl₃ 400 MHz), δ 8.6 (br, 1H), 7.71 (d, J= 7.6Hz, 1H), 7.47 (d, J= 7.6Hz, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.17 (m, 1H), 1.42 (s, 12H)

화학식 (1)의 화합물의 제조

실시예 1

2-(5- 플루오로 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐] - 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

단계 1

4㎖ 다이옥산 중의 중간체(10A)(200㎎, 0.3m㏖), 1㎖ 아세토나이트릴 및 1㎖ 물의 혼합물에 중간체 B1(161㎎, 0.55m㏖), K₂CO₃(80㎎, 0.6m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(36.5㎎, 0.05m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 N₂ 하에 16시간 동안 가열하였다. 용매를 진공으로 제거하여 잔사를 분취 TLC(PE:EtOAc = 1:1)에 의해 정제하여 원하는 생성물 13을 얻었다(120㎎, 60%).

단계 2

3㎖ CH₂Cl₂ 중의 13(120㎎, 0.18m㏖)의 용액에 1㎖ 트라이플릭산을 첨가하였고, 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반시켰다. 그 다음에 혼합물을 교반하면서 포화 수성 NaHCO₃에 서서히 첨가하였고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 진공에서 농축시켰다. 잔사를 분취 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(18㎎, 23%)을 회백색으로서 얻었다.

(18㎎, 10으로부터의 수율: 14%, M+1:434) ¹ HNMR(400MHz DMSO-d6) δ 11.55 (s, 1H), 8.19 (m, 2H), 7.51-7.67 (m, 4H), 7.32 (s, 2H), 7.11 (t, 1H), 6.98 (d, J= 8 Hz, 2H), 3.15 (m, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.83 (m, 2H), 1.08 (s, 6H).

실시예 2

2-(5- 메틸 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 옥사졸 -4-카 복실 산 아마이드

단계 1

40㎖ 다이옥산 중의 중간체(10A)(1.9g, 2.8m㏖)의 용액에, 10㎖ 아세토나이트릴 및 10㎖ 물을 보론산 에스터 중간체 B2(1g, 3.9m㏖), K₂CO₃(0.7g, 5.1m㏖) 및 Pd(dppf)Cl₂(0.5g, 0.68m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 6시간 동안 N₂ 하에 가열하였다. 용매를 제거하였고, 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 11(1.32g, 수율: 70%)을 얻었다.

단계 2

20㎖ CH₂Cl₂ 중의 화합물 11(1.32g, 0.2m㏖)의 용액에 5㎖ 트라이플릭산을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 6시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 교반하면서 수성 NaHCO3에 서서히 첨가하였고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 진공에서 농축하였다. 조질의 생성물을 이하에 기재하는 시스템을 사용하여 분취 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(360㎎, 42%)을 회황색 고체로서 제공하였다.

(22㎎, 10으로부터의 수율: 17%, M+1: 430) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.3 (s, H), 8.22 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.46-7.60 (m, 4H), 7.1 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.00-7.04 (m, 3H), 3.15 (m, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.74 (s, 3H), 1.09 (s, 6H).

SRUM-3에 대한 분취-HPLC 분리 방법:

기기: 시마즈(Shimadzu) LC-8A 분취 HPLC

칼럼: 제미니(Gemini) 250*50mm 내경 10u

이동상: A: H2O(0.04% NH3H2O) B: CH3CN

구배: 23분에 25% 내지 50%(B상)

유속: 80㎖/분

파장: 220 및 254㎚

실시예 3

2-(7- 플루오로 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B3을 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(20㎎, 10으로부터의 수율: 15%, M+1: 434) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.90 (s, 1H), 8.19 (m, 2H), 7.70-7.78 (m, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.06 (q, 1H), 6.96 (d, J= 8 Hz, 2H), 3.15 (t, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.83 (t, 2H), 1.07 (s, 6H).

실시예 4

2-(7- 클로로 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B4를 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(24㎎, 10으로부터의 수율: 18%, M+1: 450) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.85 (s, 1H), 8.24 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.82 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.51 (s, 11 7.44 (m, 1H), 7.34 (m, 1H)7.00 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 3.16 (t, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.85 (t, 2H), 1.08 (s, 6H).

실시예 5

2-(7- 메톡시 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B5를 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(19㎎, 10으로부터의 수율: 14%, M+1: 446) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.58 (s, 1H), 8.23 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.42 (t, 1H), 7.28 (t, 1H), 7.00 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 3.17-3.14 (m, 2H), 3.01 (s 2H), 2.87 (t, 2H), 2.65 (s, 3H), 1.09 (s, 6H).

실시예 6

2-(5,7- 다이메틸 -1H-인돌-4-일)-5-[ 4 -(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]-옥사졸-4- 카복실산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B6를 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(33㎎, 10으로부터의 수율: 25%, M+1: 444) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.3 (s, 1H), 8.21 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.44-7.56 (m, 3H), 6.91-7.05 (m, 4H), 3.15 (m, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 1.08 (s, 6H).

실시예 7

2-(5- 메틸 -7- 플루오로 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B7을 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(16㎎, 10으로부터의 수율: 12%, M+1: 448) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 8.21 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.46-7.60 (m, 3H), 6.9-7.1 (m, 3H), 3.15 (m, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.72 (s, 3H), 1.09 (s, 6H).

실시예 8

2-(3- 메틸 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐] -옥사졸-4- 카복실산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B8을 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(9.4㎎, 10으로부터의 수율: 7%, M+1: 430) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.17 (br, 1H), 8.15 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.46-7.60 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.16 (t, 1H), 6.97 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.99 (s, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.08 (s, 6H).

실시예 9

2-(5-에틸-1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일) 페닐] - 옥사졸 -4-카 복실 산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B9를 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(28㎎, 10으로부터의 수율: 21%, M+1: 444) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.3 (br, 1H), 8.19 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.46-7.51 (m, 4H), 6.92-7.12 (m, 4H), 3.15 (m, 2H), 3.08 (q, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.85 (m, 2H), 1.23 (t, 3H), 1.09 (s, 6H).

실시예 10

2-(7-에틸-1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐] - 옥사졸 -4-카 복실 산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B10을 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(32㎎, 10으로부터의 수율: 24%, M+1: 443) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.4 (br, 1H), 8.23 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 6.99-7.79 (m, 8H), 3.15 (m, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.94 (q, 2H), 2.85 (m, 2H), 1.29 (t, 3H), 1.09 (s, 6H).

실시예 11

2-(1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐] - 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

보론산 에스터 중간체 B11을 사용하여 실시예 2의 방법에 의해 제조하였다.

(466㎎, 38% 중간체 10A로부터의 수율, M+1: 416) ¹HNMR: (400MHz DMSO-d6) δ 11.48 (s, 1H), 8.27 (d, 2H), 7.85 (d, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.61 - 7.53 (m, 3H), 7.33 (s, 1H), 7.26 (t, 1H), 7.02 (d, 2H), 3.19 - 3.17 (m, 2H), 3.03 (s, 2H), 2.89 - 2.86 (m, 2H), 1.11 (s, 6H).

실시예 12

2-(7- 트라이플루오로메틸 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)페닐]- 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

상기 반응식 2에 나타낸 반응 순서에 의해 표제 화합물을 제조하였다.

단계 1

에틸 5-(4-(4-( tert - 뷰톡시카보닐 )-3,3- 다이메틸피페라진 -1-일) 페닐 )-2- 요오도옥사졸 -4- 카복실레이트

동일 제조의 단계 4에서 기재한 리튬치환반응/요오드화 방법을 사용하여 중간체 에틸 에스터 화합물(15)로부터 표제 화합물을 제조하였다(상기 중간체 화합물(10A)의 제조에서 단계 2).

단계 2

4-(4-[4- 에톡시카보닐 -2-(7- 트라이플루오로메틸 -1H-인돌-4-일)- 옥사졸 -5-일]-페닐)-2,2- 다이메틸 -피페라진-1- 카복실산 tert - 뷰틸 에스터

에틸 5-(4-(4-(tert-뷰톡시카보닐)-3,3-다이메틸피페라진-1-일)페닐)-2-요오도옥사졸-4-카복실레이트를 상기 실시예 2에 기재한 것과 유사한 스즈키 커플링 조건 하에서 보론산 에스터 중간체 B-12와 반응시켜, 표제 화합물을 제공하였다.

단계 3

4-{4-[4- 카복시 -2-(7- 트라이플루오로메틸 -1H-인돌-4-일)- 옥사졸 -5-일]- 페닐 )-2,2-다이메틸-피페라진-1- 카복실산 tert - 뷰틸 에스터

5㎖의 메탄올, 물 및 THF 중에서 4-{4-[4-에톡시카보닐-2-(7-트라이플루오로메틸-1H-인돌-4-일)-옥사졸-5-일]-페닐}-2,2-다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터(0.2g, 0.3m㏖) 및 NaOH(0.024g, 0.6m㏖)를 50℃에서 밤새 교반시켰다. 유기 용매를 진공에서 제거하였고, 남아있는 용액을 pH 5로 조절하였으며, 얻어진 표제 화합물을 여과에 의해 백색 고체로서 수집하였고, 감압하에 건조시켰다.

단계 4

4-{4-[4- 카바모일 -2-(7- 트라이플루오로메틸 -1H-인돌-4-일] 옥사졸 -5- 일] - 페 닐}-2,2- 다이메틸 -피페라진-1- 카복실산 tert - 뷰틸 에스터

15㎖의 DMF 중의 4-{4-[4-카복시-2-(7-트라이플루오로메틸-1H-인돌-4-일)-옥사졸-5-일]-페닐}-2,2-다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터, EDCI HCl(0.36g, 0.002㏖) 및 HOBt(0.3g, 0.002㏖) 및 다이옥산 중의 15㎖의 NH₃의 혼합물을 2시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 물과 EtOAc로 나누었고, 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 용매를 진공에서 제거하여 조질의 표제 화합물 생성물(0.18g 조질)을 제공하였다.

단계 5

2-(7- 트라이플루오로메틸 -1H-인돌-4-일)-5-[4-(3,3- 다이메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 옥사졸 -4- 카복실산 아마이드

4-{4-[4-카바모일-2-(7-트라이플루오로메틸-1H-인돌-4-일)-옥사졸-5-일]-페닐}-2,2-다이메틸-피페라진-1-카복실산 tert-뷰틸 에스터(0.18g 조질)를 DCM 및 TFA의 혼합물(30㎖ 2:1) 중에 용해시켰고, 용액을 실온에서 2시간 동안 교반시켰고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 물과 EtOAc로 나누었다. 유기상을 Na₂SO₄로 건조시켰고, 용매를 진공에서 제거하였으며, 조질의 생성물을 제공하였고, 이것을 분취-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(60㎎, 에틸 5-(4-(4-(tert-뷰톡시카보닐)-3,3-다이메틸피페라진-1-일)페닐)-2-요오도옥사졸-4-카복실레이트로부터의 41%)을 제공하였다.

M+1: 484) ¹ HNMR : (400MHz DMSO-d6) δ 11.85 (s, 1H), 8.27-8.25 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.97-7.95 (d, 1H, J = 8Hz), 7.85 (s,1H), 7.66-7.56 (m,3H), 7.02-7.00 (d, 2H J = 0.8 Hz), 3.19-3.17 (m, 2H), 3.04 (s, 2H), 2.87-2.86(m, 2H), 1.09 (s,6H).

생물학적 활성

실시예 13

FLT3 키나제 및 오로라 키나제 -저해 활성

FLT3 키나제 및 오로라 A 및 오로라 B 키나제를 저해하기 위한 본 발명의 화합물의 능력을 이하에 기재한 분석을 사용하여 결정하였다.

키나제 분석을 다음의 일반적 절차를 사용하여 미국 펜실베니아주 말번에 소재한 리액션 바이올로지 코포레이션(Reaction Biology Corp.)에서 수행하였다:

1) 갓 제조한 염기 반응 완충제(20mM Hepes pH 7.5, 10mM MgCl₂, 1mM EGTA, 0.02% Brij35, 0.02 ㎎/㎖ BSA, 0.1 mM Na₃VO₄, 2mM DTT, 1% DMSO) 중에서 표시한 기질을 제조한다.

2) 조효소(1.5mM CaCl₂, 16 ㎍/㎖ 카모듈린, 2mM MnCl₂)를 상기 기질 용액에 전달한다.

3) 표시한 키나제를 기질 용액에 전달하고 부드럽게 혼합한다.

4) DMSO 중에서 시험 화합물의 농도를 변화시키면서 키나제 반응 혼합물에 전달한다.

5) ³³P-ATP(특이적 활성 0.01 □Ci/□L 최종)를 반응 혼합물에 전달하여 반응을 개시한다.

6) 120분 동안 실온에서 키나제 반응물을 인큐베이션시킨다.

7) P81 이온 교환 필터 페이퍼(와트만(Whatman) # 3698-915) 상에 반응물을 스팟팅한다.

8) 미결합 포스페이트를 0.75% 인산에서 광범위하게 필터를 세척함으로써 제거한다.

9) ³³P 신호를 타이푼 포스포르이미저(Typhoon phosphorimager)(GE 헬스케어(GE Healthcare))를 사용하여 결정하였다. 비활성 효소를 함유하는 대조군 반응으로부터 유래된 배경의 차감 후, 프리즘 내 비선형 회귀 기능을 사용하여 IC₅₀ 값을 결정하였다(그래프패드 소프트웨어(Graphpad software)).

각각 3가지 키나제의 효소 활성의 50%를 저해하는데 필요한 시험 화합물의 농도(IC₅₀)를 이하의 표에서 제시한다. 비교 목적을 위해, WO2008/139161의 실시예 M-12에 개시한 화합물 2-(1H-인돌-4-일)-5-(4-피페라진-1-일-페닐)-옥사졸-4-카복실산 아마이드에 대한 IC₅₀ 값을 또한 나타낸다.

실시예 14

항증식 활성

본 발명의 화합물의 항 증식 활성을 결장직장암 유래 세포주 HCT-116의 성장을 저해하기 위한 화합물의 능력을 측정함으로써 결정한다. 세포성장의 저해는 알마르 블루(Alamar Blue) 분석을 사용하여 측정한다(Nociari et al ., Journal of Immunological Methods (1998) 213, 157-167). 상기 방법은 레자주린을 그의 형광 생성물 레조루핀으로 환원시키는 살아있는 세포의 능력에 기반한다. 각각의 증식을 위해, 분석 세포를 96웰 플레이트 상에 플레이팅하였고, 16시간 동안 회수한 후 추가 96시간 동안 저해제 화합물을 첨가하였다. 인큐베이션 기간 10%(v/v)의 마지막에, 알라마르 블루(Alamar Blue)를 첨가하였고, 추가 6시간 동안 인큐베이션한 후 여기 535㎚ 및 방출 590㎚에서 형광 생성물을 결정하였다. 모든 세포주를 ECACC(세포 배양물의 유럽 수집기관)로부터 얻는다.

인간 결장직장암 세포주 HCT-116에 대한 본 발명의 화합물의 활성을 이하의 표에 나타낸다. 헤드가 HCT-116 96Hr인 열은 96시간 기간의 노출 후 HCT-116 세포 증식이 50%만큼 감소되는데 필요한 화합물의 농도를 지칭한다. 헤드가 [배수체]인 열은 별개의 배수체 표현형을 만드는데 필요한 화합물의 가장 낮은 농도를 지칭하는데, 이는 오로라 B 저해에 기인하는 것으로 믿어진다.

실시예 15

Caco -2 세포를 사용하는 투과성 연구

세포를 취하고 보유하기 위한 화합물의 능력을 Caco-2 세포를 사용하는 투과성 연구를 수행함으로써 측정할 수 있다. Caco-2 세포는 전형적으로 화합물의 경구 생체이용가능성을 예측하기 위해 사용되지만, 얻어진 측정은 또한 화합물의 세포 침투 능력을 나타낸다.

본 발명의 화합물을 따라서 표준 Caco-2 분석에서 시험하였으며, 세포 내로 및 세포 밖으로 화합물의 유동 속도를 결정하였다. 결과로부터, 세포를 나가는 화합물의 속도 대 세포에 유입되는 화합물의 속도의 비로서 유출비(efflux ratio)를 계산하였다.

결과를 이하의 표에 제시한다. 표에서, 헤드가 "Caco-2 A2B"인 열은 화합물이 세포 내로 유동되는 속도를 나타내며, 열 Caco-2 B2A는 화합물이 세포 밖으로 유동되는 속도를 나타낸다. "유출비"는 Caco-2 B2A:Caco-2 A2B의 비이다.

결과는 시험한 모든 화합물이 WO2008/139161의 실시예 M-12의 화합물보다 더 바람직한 유출비를 가진다는 것을 입증한다. 실시예 2 내지 11의 화합물의 경우에, 유출비는 선행 기술 화합물 M-12의 유출비보다 5배 더 크다.

화합물 M-12 및 실시예 11에 대한 화합물에 대한 데이터의 비교는 피페라진 고리 내 CH₂기를 C(CH₃)₂기로 대체하는 것이 유출비를 개선시킨다는 것을 설명한다.

실시예 16

인간 혈액학적 종양 세포주에 대한 활성

실시예 2 및 7의 화합물을 제조업자의 설명서에 따라 셀타이터-블루(CellTiter-Blue)(등록상표) 분석(#G8081, 프로메가(Promega))을 사용하여 인간 혈액학적 세포주의 범위에 대해 시험하였다. 세포를 대수기 배양물로부터 채취하였고, 계측하였으며, 20,000 내지 90,000 세포/웰의 세포 밀도에서 96웰 편평 바닥 마이크로리터 플레이트에 넣었다. 24시간 후 회복 기간은 세포가 대수 성장을 재개하게 하며, 10㎕의 배양 배지(4개의 대조군 웰/플레이트) 또는 시험 화합물을 지니는 배양 배지를 첨가하였다. 화합물을 10 농도에서 2회 적용하였고, 처리를 4일 동안 계속하였다. 세포의 처리 후, 10㎕/웰 셀타이터-블루(등록상표) 시약을 첨가하였다. 4시간의 인큐베이션 기간 후, 형광(FU)을 엔비젼 엑사이트(EnVision Xcite)멀티라벨 판독기(여기 λ= 531㎚, 방출 λ= 615㎚)를 사용함으로써 측정하였다. 화합물을 각각의 세포주에 대해 2 내지 4가지의 독립적 실험에서 시험하였다. 각각의 세포주에 대한 IC₅₀(마이크로몰) 값을 이하의 표에 제공한다.

기호설명

ALL = 급성 림프구성 백혈병

AML = 급성 골수성 백혈병

CML = 만성 골수성 백혈병

HL = 호지킨 림프종

NHL = 비호지킨 림프종

MM = 다발성 골수종

실시예 17

이종이식 연구

본 발명의 화합물의 생체내 항종양 활성을 MV4-11 암 세포주의 누드 마우스 이종이식 모델에서의 종양 성장에 대한 실시예 2 및 7의 화합물의 효과를 시험함으로써 조사하였다.

재료 및 방법

2.1. 동물 및 시약

MV4-11 세포주(미국에 소재한 ATCC); RPMI 1640 배지(미국에 소재한 인비트로젠(Invitrogen)); FBS(호주에 소재한 인비트로젠); Balb/c 누드 마우스(중국 상하이에 소재한 슬랙 래버러토리 애니멀 코. 리미티드.(Slac Laboratory Animal Co., Ltd.)): 암컷, 18 내지 22g; HP-β-CD(미국에 소재한 시그마(Sigma)).

2.2. 절차

전체 52 마리의 암컷 누드 마우스를 사용하였다. 실험을 시작하기 전 마우스에 3일의 순응 기간을 허용하였다. 연구의 시작 시 마우스에 우측 옆구리에서 50% 매트리젤(Matrigel) 중의 1x10⁷ MV4-11의 200㎕로 피하에(s.c.) 이식하였다. 종양이 100 내지 150㎣의 평균 용적에 도달되었을 때, 52마리 중 32마리의 마우스를 종양 용적을 기준으로 선택하였고, 투약 전 4개의 그룹으로 무작위로 배정하였다. 각 처리군은 8 마리의 종양-보유 동물로 이루어졌다(n=8/그룹).

종양-보유 마우스를 실시예 2의 화합물, 실시예 7의 화합물 또는 비히클로 5일은 BID로 투여하고, 2일은 투여하지 않는 것의 4주기 동안 처리하였다. 마우스의 비교군을 5일은 1일 1회로 투여하고, 2일은 투여하지 않는 것의 4주기 동안 사이타라빈으로 처리하였다.

각 투약 시 마우스의 체중을 쟀고, 종양 크기를 각 주마다 2회 기록하였다. 마우스를 유해한 처리 관련 부작용의 어떤 명시적인 징후에 대해 엄밀히 관찰하였고, 이들 징후는 그들이 관찰되었을 때 기록하였다.

캘리퍼스를 사용하여 2차원으로 1주에 2회 종양 크기를 측정하였고, 용적을 식 V = 0.5 a x b²(여기서, a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경임)을 사용하여 ㎣로 표현하였다.

적절한 양의 시험 화합물을 바이알에 칭량함으로써 1주 1회 시험 제형을 준비하였고, 적절한 용적의 20% HP-β-CD를 첨가하여 2 ㎎/㎖, 예를 들어 2 및 3 ㎎/㎖ 예를 들어 7(유리 염기)의 최종 농도를 달성하였으며, pH를 pH 5로 조절하였고, 5분 동안 바이알을 교반시킨 다음, 욕 초음파 분쇄기 중에 바이알을 넣어서 시험 제형이 깨끗해진 것을 확보하였다.

실험 설계를 이하의 표에 요약한다.

2.3. 실험 종말점 :

4주기 투약 후 마우스를 CO₂ 노출에 의해 안락사시켰다. 종양 용적, 절개한 종양의 무게 및 마우스 체중을 측정하였고, 기록하였다. 식 IR = (W_v- W_T)/W_v x 100%에 의해 종양 저해율(inhibitory rate: IR)을 계산하였다.

그룹 간 종양 크기의 차이를 이표본 양방 스튜던트 t-검정(unpaired two-tailed Student's t-test)을 사용하여 유의도에 대해 분석하였다. P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 고려하였다.

3. 결과 및 토의

3.1. MV4 -11-함유 누드 마우스의 종양 용적

도 1 내지 도 3은 누드 마우스에서 MV4-11 이종이식 종양에 대한 실시예 2 및 7의 화합물의 성장 저해를 나타낸다. 시험 화합물을 받은 마우스와 단지 비히클을 받은 마우스 상의 종양 간의 종양 용적에서 유의한 차이를 관찰하였고, 이것을 화합물의 제1 투여 후 제4일로부터 시작해서(첫 번째 측정) 마지막까지 지속하였다. 또한 종양 용적에서 유의한 차이를 관찰하였다. 시험 화합물(실시예 2 및 7)을 받은 마우스와 사이타라빈 처리군 상의 종양 간의 종양 용적에서 유의한 차이를 관찰하였고, 이것을 화합물의 제1 투여 후 제11일로부터 시작해서(첫 번째 측정) 그 이후에 지속하였다. 도 1은 또한 실시예 2와 실시예 7이 종양 성장을 완전히 저해한 반면, 사이타라빈은 종양 성장을 늦추었지만 완전히 차단하지는 못하였다는 것을 나타낸다.

3.2. MV4 -11-함유 누드 마우스의 종양 중량

MV4-11 이종이식 종양 성장에 대한 실시예 2 및 7의 화합물의 종양 저해 효과를 희생시킨 종양-보유 누드 마우스에 의해 종말점에서 취한 처리군과 비히클군 간의 종양 중량에서 유의한 차이에 의해 추가로 확인하였다(도 4).

3.3. MV4 -11-함유 누드 마우스의 체중 변화(%)

도 5는 전체 연구 기간 동안 체중 변화(%)를 나타낸다. 모든 처리 마우스는 처음 며칠 동안 그의 체중의 약 5%가 감소되었고, 그 다음에 회복되었는데, 시험 화합물은 누드 마우스에서 기존의 투약량 및 투약 경로에서 잘 용인되었다는 것을 나타낸다.

3.4. 종양 저해율( IR ) 계산

실시예 2 - 20 ㎎/㎏ 그룹의 화합물: IR = 98.13%

실시예 7 - 30 ㎎/㎏ 그룹의 화합물: IR = 98.24%

사이타라빈 - 100 ㎎/㎏ 그룹: IR = 66.72%

4. 결론

MV4-11 암 세포주로부터의 누드 마우스 이종이식 모델에서 종양 성장에 대한 실시예 2 및 실시예 7의 화합물의 효과를 본 연구에서 조사하였다. MV4-11-함유 누드 마우스의 체중을 생체내 독성을 반영하는 지수로서 모니터링하였다. 시험 화합물(실시예 2 및 7) 처리군과 비히클군뿐만 아니라 사이타라빈 비교군 간의 종양 용적의 차이는 유의하였다. 본 연구에서, 실시예 2와 실시예 7은 둘 다 종양 성장을 완전히 저해한 반면, 사이타라빈은 종양 성장을 단지 늦추었지만, 완전히 차단하지는 못하였다. 처리군과 비히클군 간의 종양 중량에서 유의한 차이는 항종양 효과를 추가로 확인하였다. 실시예 2 그룹, 실시예 7 그룹 및 사이타라빈 그룹에 대한 IR 값은 각각 98.13%, 98.24% 및 66.72%였다.

체중 변동 프로파일은 시험 화합물을 받은 마우스가 처음 며칠 동안 체중이 감소되었지만, 그 이후에 그의 체중이 회복되었다는 것을 나타내었고, 그에 의해, 시험 화합물이 누드 마우스에서의 기존의 투약량 및 투약 경로에서 잘 용인된다는 것을 나타낸다. 결론적으로, IV, BID로 20 ㎎/㎏의 용량에서 실시예 2의 화합물과 30 ㎎/㎏에서 실시예 7의 화합물은 둘 다 어떤 분명한 독성 없이 MV4-11 이종이식 종양 성장의 효과적인 저해제였다.

약제학적 제형

실시예 18

(i) 정제 제형

화학식 (1)의 화합물을 함유하는 정제 조성물을 50㎎의 화합물을 희석제로서 197㎎의 락토스(BP), 및 윤활제로서 3㎎의 스테아르산마그네슘을 혼합하고, 압축함으로써 제조하여 공지된 방식으로 정제를 형성하였다.

( ii ) 캡슐 제형

캡슐 제형을 10O㎎의 화학식 (1)의 화합물을 100㎎ 락토스와 혼합하고, 얻어진 혼합물을 표준 불투명 경질 젤라틴 캡슐 내로 충전시킴으로써 제조한다.

( iii ) 주사가능한 제형 I

주사에 의한 투여를 위한 비경구 조성물을 10% 프로필렌 글라이콜을 함유하는 수 중에서 화학식 (1)의 화합물(예를 들어, 염 형태에서)을 용해시킴으로써 제조하여 1.5중량%의 활성 화합물의 농도를 제공할 수 있다. 그 다음에 용액을 멸균 여과시켰고, 앰플에 채웠으며 밀봉시킨다.

( iv ) 주사가능한 제형 II

주사를 위한 비경구 조성물을 화학식 (1)의 화합물(예를 들어, 염 형태에서)(2㎎/㎖) 및 만니톨(50㎎/㎖)을 수중에서 용해시키고, 용액을 멸균 여과시켰으며, 밀봉가능한 1㎖ 바이알 또는 앰플 내에 채움으로써 제조한다.

( iv ) 피하 주사 제형

화학식 (1)의 화합물을 약제학적 등급 옥수수 오일과 혼합함으로써 피하 투여를 위한 조성물을 제조하여 5㎎/㎖의 농도를 제공한다. 조성물을 멸균시키고, 적합한 용기 내로 여과시킨다.

동등물

앞서 언급한 실시예는 본 발명을 예시하는 목적을 위해 제시하며, 본 발명의 범주에 대한 어떤 제한을 부과하는 것으로서 해석되어서는 안 된다. 수많은 변형 및 변경이 본 발명을 뒷받침하는 원칙으로부터 벗어나는 일 없이 실시예에서 예시하고 상기 기재한 본 발명의 구체적 실시형태로 구성될 수 있다. 모든 이러한 변형 및 변경은 본 출원에 의해 포함되는 것으로 의도된다.

Claims

하기 화학식 (1)을 갖는 화합물 또는 이의 염:
[화학식 (1)]

상기 식에서:
R¹ 은 수소 또는 C_1-2 알킬이고;
R², R³ 및 R⁴는 동일 또는 상이하고, 각각은 수소, C_1-2 알킬, 플루오린, 염소, C_1-2 알콕시 및 트라이플루오로메틸로부터 선택되되, 단, R², R³ 및 R⁴ 중 둘 이하는 수소가 아니다.
제1항에 있어서, R¹은 수소 및 메틸로부터 선택된 것인 화합물.
제1항에 있어서, R²는 수소, 플루오린, 염소, 메틸, 에틸 및 메톡시로부터 선택된 것인 화합물.
제1항에 있어서, R³은 수소인 것인 화합물.
제1항에 있어서, R⁴는 수소, 플루오린, 메틸 및 에틸로부터 선택된 것인 화합물.
제1항에 있어서, (i) R¹은 수소이며; R²는 메틸, 에틸, 플루오로, 클로로 및 메톡시로부터 선택되고; R³은 수소이며; R⁴는 수소이거나; 또는 (ii) R¹은 수소이며; R²는 수소이고; R³은 수소이며; R⁴는 메틸이거나; 또는 (iii) R¹은 수소이며; R²는 플루오로이고; R³은 수소이며; R⁴는 메틸인 것인 화합물.
제1항에 있어서, R¹은 수소이고, R²는 수소 및 플루오린으로 구성되는 군으로부터 선택되고, R³는 수소이며, R⁴는 메틸인, 화합물.
제7항에 있어서, R²는 플루오린인 화합물.
제1항에 있어서, 이하의 표에서 화합물 실시예 1 내지 실시예 12로부터 선택된 것인 화합물 또는 이의 염.
제9항에 있어서, 실시예 2, 실시예 3, 실시예 5 및 실시예 7로부터 선택된 것인 화합물 또는 이의 염.
제10항에 있어서,

또는 이의 염인 화합물.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 증식성 질병의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 암의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 증식성 질병은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL) 및 다발성 골수종(MM)으로부터 선택되는 조혈 종양인, 약제학적 조성물.
제13항에 있어서, 상기 암은 FLT3 키나제의 저해에 영향을 받기 쉬운 것이며, 급성 골수성 백혈병(AML)인, 약제학적 조성물.
제13항에 있어서, 부가적인 화학요법제를 더 포함하는, 약제학적 조헝물.