KR101945351B1 - 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물 및 이를 함유한 리포좀 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 다가불포화지방산; 및 팔미토일트리펩타이드-1(Palmitoyl Tripeptide-1); 을 포함하여, 각질층 내 세포간 기질의 세라마이드 양을 크게 증가시킴으로써 아토피 등 건조증에 기인한 가려움증을 확실하게 개선할 수 있는 피부 보습용 화장품 조성물 및 이를 포함하는 리포좀 조성물을 제공한다.

Description

피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물 및 이를 함유한 리포좀 조성물{COSMETIC COMPOSITION OF INTERCELLULAR LIPID AND IT'S LIPOSOME COMPOSITION FOR ANTI-ITCHING CAUSED BY SKIN DRYNESSS}

본 발명은 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물 및 이를 함유한 리포좀 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 다가불포화지방산과 팔미토일트리펩타이드-1(Palmitoyl Tripeptide-1)를 포함하여 각질층 내 세포간 기질의 세라마이드 양을 크게 증가시켜 아토피 등 건조증에 기인한 가려움증을 확실하게 개선할 수 있는 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물 및 이를 함유한 리포좀 조성물에 관한 것이다.

피부 건조증은 단순한 피부 거칠어짐부터 소양증, 균열, 진물, 홍반이 나타나는 심한 습진에 이르기까지 피부 및 전신 질환이나 위생, 환경, 습관 등에 따라 다양한 양상으로 변화되면서 나타난다.

건조함으로 인해 약간의 불편함을 느끼는 건조 피부의 경우 정상 피부 타입 중 하나로 뚜렷한 질환 상태는 아니기 때문에 악화 인자를 조절하고 피부 관리를 적절히 하는 정도로도 해결할 수 있다. 그러나 증상이 심해 병적 피부염 상태인 건성습진(피부염)의 경우는 전문적인 의사의 상담과 처방에 따른 치료도 병행해야 한다. 유전, 호르몬 변화, 전신 질환, 노화 같은 내적 인자뿐만 아니라 건조한 환경과 바람과 같은 기후, 잦은 목욕과 세안, 의복, 세제 및 유기 용제 등의 화학 물질 같은 외적 인자가 건조 피부를 발생시키거나 또는 악화시킬 수 있다. 따라서, 이러한 원인을 항상 고려하여 예방하도록 하는 것이 필요하다.

각질층에 수분을 공급하고 유지시키는 가장 간단한 방법은 수분을 직접 피부에 공급해 주는 것이지만, 수분을 유지시킬 능력이 없으면 크게 도움이 되지 않고, 지나친 수화는 오히려 자연 함습 인자를 제거하여 피부를 더욱 건조하게 만들 수 있다. 이에 적절한 세정제를 이용하여 씻고 과도한 목욕을 피하며, 외부의 유해 환경으로부터 피부를 보호하고 적절한 보습제를 사용하는 것 등의 다양한 접근이 필요하다. 최근 피부 장벽에 대한 이해가 높아지면서 보습제가 단순히 수분을 보충하는 기능에만 머물지 않고, 피부 장벽의 항상성 유지 능력을 강화시키는 등의 피부 생리 과정에서 다양한 역할을 매개 할 수 있다고 알려지고 있다.

각질층은 표피의 최외층으로 각질 형성 세포가 가장 성숙되어 각화 과정이 완성되는 층이다. 각질층에서의 각질 형성 세포에는 어떤 세포 성분(organelle)도 없으며 벽돌담 모양으로 짜여 있다. 또한, 각질층은 벽돌(brick)과 회반죽(mortar) 모양으로 단백질이 풍부한 각질 세포(Corneocyte)가 지질이 많은 2중층 세포간 기질(bilayer intercellular matrix)에 묻혀 있는 형태를 보인다. 벽돌은 각질 세포(Corneocyte)로 구성되고, 회반죽은 층판 과립(lamellar granule)에서 유출된 지질과 단백질로 구성되어 있다. 또한, 각질층은 단백질 합성이 없는 죽은 세포층이지만 주요 기능은 방어 장벽으로, 보호 기능 중 하나는 경표피 수분 손실(TransEpidermal Water Loss; TEWL)을 막아주는 것이다. 필라그린(filaggrin)의 분해로 형성되는 아미노산과 그 대사산물들이 천연 보습 인자(Natural Moisturizing Factor; NMF)라는 물질을 형성하며, 각질 세포 내에 존재하는 NMF와 층판 과립에서 유출되어 세포 외에 존재하는 지질은 피부 수화(hydration), 유연성(suppleness), 피부 탄력(flexibility)에 중요한 역할을 한다.

그리고, 각질층에서의 수분 투과 장벽(water permeability barrier)에 기여하는 주요 지질 성분은 세라마이드(Ceramide), 콜레스테롤(Cholestrol) 및 지방산(Fatty acid)이다. 각질층이 피부 수분 손실의 중요한 장벽이라고 밝혀진 1940년대 이래 어떤 지질이 각질층에서 중요한가에 대해 많은 연구가 이루어져 왔다. 처음에는 리놀레산을 포함하는 인지질(phospholipid)에 연구의 초점이 맞추어졌으나 각질층에는 인지질이 없다는 것이 밝혀진 후 세라마이드 연구가 각광을 받았다. 리놀레산이 풍부한 세라마이드 1은 1982년에 발견되었고, 각질층의 장벽 기능에 관여하는 지질 중에서 주요 역할을 한다고 보고 있다. 후에 5가지의 세라미이드가 더 발견되었고, 분자의 극성에 따라 이름이 붙여졌다. 세라마이드 1이 가장 비극성(nonpolar)이고 세라마이드 6이 가장 극성이다.

건조 피부는 각질층의 수분 함량 감소로 각질 세포의 비정상적인 탈락의 결과로 발생하며, 건조증 환자의 피부에서 지방산이 증가하고 세라마이드가 감소한 지질 이중 구조의 불안정성이 증가되며, 각질층 상부에서 교소체(desmosome)가 변화하지 않고 데스모글레인 I(desmoglein Ⅰ) 농도가 증가해 있다. 이러한 현상은 수분이 부족할 때 교소체 분해 효소가 손상되어 정상적으로 각질 탈락이 되지 않아, 육안으로 보이는 각질 형성 세포 덩어리 때문에 피부가 거칠고 건조해 보이는 것이다.

아토피 피부염은 건조 피부가 특징적인 질환으로, 여러 연구에서 아토피 피부염 환자의 피부에서 세라마이드 부족을 제시하고 있다. 이를 해결하기 위하여 기존의 아토피 개선 화장품은 화장품에 세포간 지질의 주성분인 세라마이드를 함유하여 인위적으로 세포간 지질에 세라마이드 함량을 증진시키고자 하였다. 그러나, 이러한 방법은 세포간 지질의 세라마이드 양을 증가시키는데 한계가 있어서, 그 효율성이 높지 않은 문제를 가진다.

국내 등록특허공보 10-1788544호

종래의 아토피 등 건조증에 기인한 가려움증을 개선하기 위한 피부 장벽 시스템이나 면역 조절제 등에 의한 접근 방법은 기술적인 한계가 존재한다.

본 발명의 목적은, 이러한 문제를 해소하기 위해, 각질층 내 세포간 기질의 세라마이드 양을 크게 증가시켜 아토피 등 건조증에 기인한 가려움증을 확실하게 개선할 수 있도록 한 화장품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 측면은, 조성물 총중량에 대해, 세라마이드 III(Ceramide III) 0.50내지 0.72중량% 및 콜레스테롤(Cholesterol) 0.16 내지 0.24중량%, 다가불포화지방산 0.16 내지 0.24중량%을 포함하는, 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시 예에서, 상기 다가불포화지방산이, 리놀레산(Lenoleic acid), EPA(Eicosapentaenoic acid: 에이코사펜타에노산) 또는 DHA(Docosahexaenoic acid: 도코사헥사에노산) 중 적어도 하나일 수 있다.

본 발명의 일 실시 예에서, 상기 다가불포화지방산은 DHA일 수 있다.

본 발명의 일 실시 예에서, 0.0005 내지 2.0중량%의 팔미토일트리펩타이드-1(Palmitoyl Tripeptide-1)을 더 포함할 수 있으며, 여기에서 트리펩타이드는 글리신(G), 히스티딘(H) 및 리신(K)인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 일 실시 예에서, 글리신의 세린으로의 변환이 원활히 이뤄지도록 N⁵, N¹⁰-메틸렌 테트라하이드로폴레이트(N⁵, N¹⁰-Methylene tetrahydrofolate)를 더 포함하여 구성될 수 있으며, 글리신 : N⁵, N¹⁰-메틸렌 테트라하이드로폴레이트의 몰수비가 1 : 1 ~ 1.5가 되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 일 실시 예에 따르면, 화장품 조성물이 다가불포화지방산과 팔미토일트리펩타이드-1(Palmitoyl Tripeptide-1)를 포함하여 각질층 내 세포간 기질의 세라마이드 양을 증가시킴으로써 아토피 등 건조증에 기인한 가려움증을 확실하게 개선할 수 있는 효과가 있다.

또한, 본 발명의 일 실시 예에 따른 화장품 조성물을 이용하면, 피부 수분 함유량, 경표피 수분 손실량, 아토피 임상 지수(SCORAD, Scoring Atopic Dermatitis) 및 가려움증 개선도 평가(Visual Analog Scale, VAS Assessment)에서 개선된 결과를 얻을 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시 예에 따른 화장품 조성물을 사용하여 피부 수분 함유량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시 예에 따른 화장품 조성물을 사용하여 경표피 수분 손실량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시 예에 따른 화장품 조성물을 사용하여 아토피 임상 지수를 평가하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시 예에 따른 화장품 조성물을 사용하여 가려움증 개선도를 평가하여 나타낸 그래프이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 예를 다음과 같이 설명한다. 그러나, 본 발명의 실시 예는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 예로 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 실시 예는 당해 기술 분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 덧붙여, 명세서 전체에서 어떤 구성 요소를 '포함'한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다.

피부는 내부의 진피, 외부의 표피 및 표피의 최외각에 위치하는 각질층을 포함한다. 상기 각질층은 각질 세포와 세포간 기질로 구성되고, 상기 세포간 기질은 지질과 단백질로 구성되고, 상기 지질은 세라마이드, 콜레스테롤 및 지방산(Fatty acid) 등으로 이루어진다.

그리하여, 본 발명에 따른 화장품 조성물은 피부(각질)가 건조해지지 않도록 또는 건조해진 피부가 습윤해지도록 각질층의 세포간 지질 구성 성분과 기본적으로 유사하게 세라마이드, 콜레스테롤 및 지방산을 포함하여 구성된다.

이때, 아토피와 같은 피부 건조증 환자는 각질층의 세포간 기질의 지질에서 세라마이드 양이 감소하고 지방산은 증가하는 현상이 발생한다. 세라마이드의 양이 적어지면 피부 건조증이 더 심해지므로, 이러한 증상을 완화시키거나 치료하기 위해서는 각질층의 세포간 기질의 지질에서 세라마이드의 양을 증가시키는 것이 필요하다.

한편, 피부 각질층의 세포간 지질에는 지방산(Fatty acid)이 포함되는데, 발명자는 건조한 피부의 경우 이러한 지방산 중 특정한 다가불포화지방산은 결핍이 발생하게 된다는 점을 발견하였다. 다가불포화지방산은, 둘 이상의 이중 결합이 사슬 내에 존재하는 지방산을 말한다.

본 실시 예의 화장품 조성물에 포함되는 특정한 다가불포화지방산은 이와 같이 건조한 피부에서 발생하는 불포화지방산의 결핍 문제를 해소할 수 있으며 이러한 결핍을 해결함으로써 세라마이드의 체내 합성을 촉진할 수 있다.

그리하여 본 발명의 화장품 조성물은, 팔미트산(Palmitic acid) 및 스테아르산(Stearic acid)과 같은 포화지방산을 포함하지 않고, 다가불포화지방산을 포함한다.

본 발명에 따른 화장품 조성물로 화장품을 제조하여 피부에 바르면, 다가불포화지방산이 각질층에서의 세포간 지질의 세라마이드의 양을 증가시키게 되고, 이에 따라 피부 수분 함유량은 증가하고 경표피 수분 손실량은 감소됨으로써 피부 건조증을 완화시키거나 치료할 수 있게 된다.

본 실시 예에서, 이러한 특정한 다가불포화지방산은, 리놀레산(Lenoleic acid), EPA(Eicosapentaenoic acid: 에이코사펜타에노산) 또는 DHA(Docosahexaenoic acid: 도코사헥사에노산) 중 적어도 하나일 수 있으며, 바람직하게는 불포화지방산의 결핍을 해소하는데 가장 효과적인 DHA를 사용할 수 있다.

나아가, 본 발명에 따른 화장품 조성물은 팔미토일트리펩타이드-1를 더 포함하여 구성될 수 있다.

바람직하게, 본 발명에 따른 피부 보습용 화장품 조성물은, 조성물 총중량의 세라마이드 III(Ceramide III) 0.50내지 0.72중량% 및 콜레스테롤(Cholesterol) 0.16 내지 0.24중량%, 다가불포화지방산 0.16 내지 0.24중량%를 포함할 수 있다.

상기 팔미토일트리펩타이드-1은 팔미토일(palmitoyl) 부분과 트리펩타이드(tripeptide) 부분으로 이루어지고, 여기에서 트리펩타이드는 글리신(G: Glycine), 히스티딘(H: Histidine) 및 리신(K: Lysine)인 것을 특징으로 한다.

상기 팔미토일 부분은 세린(serine)과 결합하여 스핑가닌을 거쳐 스핑고신(sphingosine)이 생성되는데 사용될 수 있고, 세라마이드 합성을 위해서는 스핑고신 외에도 지방산이 필요한데, 지방산인 팔미트산화되어 세라마이드 합성에 관여할 수 있다.

상기 트리펩타이드 중 글리신은 체내에서 세린과 상호변환 관계에 있으므로 세린으로 변환되어 세라마이드 합성에 소요될 수 있다.

본 발명에 따르는 화장품 조성물은, 글리신의 세린으로의 변환이 충분하고 원활하게 이뤄지도록 N⁵, N¹⁰-메틸렌 테트라하이드로폴레이트(N⁵, N¹⁰-Methylene tetrahydrofolate)를 더 포함하여 구성될 수 있으며, 글리신과 동일하거나 더 많은 당량(즉, 글리신 : N⁵, N¹⁰-메틸렌 테트라하이드로폴레이트의 몰수비가 1 : 1 ~ 1.5)의 N⁵, N¹⁰-메틸렌 테트라하이드로폴레이트가 더 포함되는 것이 바람직하다.

그리하여 본 발명에 따른 화장품 조성물이 상기 팔미토일트리펩타이드-1를 더 포함하는 경우 세라마이드의 체내 합성이 활성화되어 건조한 피부 상태를 개선할 수 있다.

상기 트리펩타이드 중에 글리신, 히스티딘 및 리신을 포함하는 팔미토일트리펩타이드-1은 생체 유사 단백질로서 상대적으로 다른 펩타이드보다 분자량이 작아 표피층 침투가 용이하고 진피층에서의 피부 흡수 또한 뛰어나다. 이로 인해 진피층에서의 섬유아세포에 효과적으로 작용하여 콜라겐 합성과 글리코스아미노글린의 합성을 매우 효과적으로 증진시켜 진피의 재생 및 건강도 향상시킬 수 있다.

각질층의 세포간 기질의 지질에서 세라마이드가 생성되는 과정을 추가로 설명하면, 먼저 아미노산인 세린(Serine)과 지방산인 팔미테이트(Palmitate)를 전구체로 하여 세린 팔미토일전환효소(Serine palmitoyltransferase)의 작용에 의해 스핑고지질 모핵인 3-케토팔미토일 트리펩타이드-1(3-KetoPalmitoyl Tripeptide-1)을 생성한다. 그리고, 상기 3-케토팔미토일 트리펩타이드-1은 환원되어 디히드로스핑고신(Dihydrosphingosine)이 되고, 지방산이 축합된 디하이드로세라마이드(Dihydroceramide)를 생성한다. 이어서 상기 디하이드로세라마이드는 이중 결합이 포함된 스핑고신(Sphingosine)의 골격 구조를 가지는 세라마이드로 전환된다.

이러한 세라마이드 생성 메커니즘에 대하여, 본 실시 예에서는, 팔미토일트리펩타이드-1의 팔미토일이 세린과 합성되는 기본 재료임과 동시에 세라마이드를 생성할 때 필요한 지방산으로 사용되고, 글리신은 세린과 상호 변환되는 관계이므로 세린으로 전환하여 세라마이드의 합성을 더욱 활성화하는 작용을 하게 되므로 최종 전환되는 세라마이드의 양을 증가시키게 된다. 또한, 상기 트리펩타이드에서 상기 히스티딘과 상기 리신은 피부에 바르면 진피층으로 흡수되면서 콜라겐 합성을 활성화하게 된다.

따라서, 본 실시 예의 화장품 조성물은 팔미토일트리펩타이드-1을 포함하여, 각질층의 세포간 기질의 지질에서 세라마이드의 양을 크게 증가시킬 수 있고, 진피의 콜라겐 합성을 활성화 할 수 있으므로, 아토피 임상 지수 및 가려움증이 크게 개선되어 피부 건조증을 완화시키거나 치료하는 효과를 기대할 수 있다.

본 발명에 따른 화장품 조성물은, 글리세린(Glycerine), 하이드로제네이티드 레시틴(Hydrogenated Lecithine), 1,2 헥산디올(1,2 Hexanediol), 초순수(Deionized Water), 시어버터(Shea Butter) 등을 더 포함할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 피부 보습용 화장품 조성물은, 조성물 총중량에 대해, 글리세린(Glycerine) 29.1 내지 42.0중량%, 하이드로제네이티드레시틴(Hydrogenated Lecithine) 12.5 내지 18.0중량%, 1,2 헥산디올(Hexanediol) 1.66 내지 2.40중량%, 초순수(Deionized Water) 32.33 내지 46.56중량%, 시어버터(Shea Butter) 6.66 내지 9.60중량%, 세라마이드 III(Ceramide III) 0.50내지 0.72중량% 및 콜레스테롤(Cholesterol) 0.16 내지 0.24중량%, 다가불포화지방산 0.16 내지 0.24중량% 및 팔미토일트리펩타이드-1 0.0005 내지 2.0중량%를 포함할 수 있다.

선택적으로, 본 발명에 따른 피부 보습용 화장품 조성물은, 장기 보존성 향상을 위해, 조성물 총중량에 대해 0.05 내지 2중량%의 글리세릴 카프릴레이트(Glyceryl Caprylate), 파라아니식산(p-Anisic acid), 아르기닌 중 어느 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화장품 조성물에서, 세라마이드, 콜레스테롤, 다가불포화지방산 및 팔미토일트리펩타이드-1은 보다 효과적으로 피부에 침투될 수 있도록 2 내지 15회에 걸친 마이크로플루다이징 과정을 통해 리포좀(Liposome)의 형태로 되어 가공되어 포함될 수 있다.

상기 글리세린은 리포좀의 안전한 분산과 피부 보습력을 향상시키는 역할을 할 수 있다. 상기 글리세린은 29.1 내지 42.0중량%의 범위 내에서 화장품 조성물의 제형 안정성을 확보하고 피부 보습력 향상 효과를 일정 수준으로 유지할 수 있다. 상기 초순수는 각종 성분을 균일하게 분산시키는 역할을 할 수 있으며, 상기 초순수가 32.33 내지 46.56중량%의 범위 내에서 리포좀을 안정적으로 제조할 수 있다. 상기 콜레스테롤은 세포간 지질의 주성분으로 피부 보습에 기본적으로 필요한 콜레스테롤 성분을 피부에 보충한다.

[실시 예]

실시 예는 피부자극요인(Tape Stripping)에 의한 각질층 내 세라마이드의 함량을 분석하기 위한 것으로서, 아래 표 1에서와 같이, 세라마이드, 지방산 및 콜레스테롤 등을 포함하고 각각 상이한 지방산을 더 포함하는 세포간 지질 샘플 1 내지 10을 마련하되, 샘플 1 내지 10은 각각의 지방산을 대상으로 리포좀을 형성하였고, 이때 마이크로플루이다이저(Microfluidzer)를 7번 통과하여 100 내지 300nm 입자 크기의 안정한 리포좀을 얻었다. 표 4의 성분 별 수치의 단위는 중량%이다.

이때, 샘플 1과 2는 비교예이고, 샘플 3 내지 10은 본원 발명에 따른 실시 예이다. 샘플 1과 6은 지방산으로 팔미트산(Palmitic acid)을 포함하고, 샘플 2과 7은 지방산으로 스테아르산(Stearic acid)을 포함하고, 샘플 3과 8은 지방산으로 리놀레산(Lenoleic acid)을 포함하고, 샘플 4와 9는 지방산으로 EPA(Eicosapentaenoic acid: 에이코사펜타에노산)를 포함하고, 샘플 5 및 10은 지방산으로 DHA(Docosahexaenoic acid: 도코사헥사에노산)를 포함한다. 또한, 샘플 1 내지 5는 팔미토일트리펩타이드-1을 포함하지 않으며, 샘플 6 내지 10은 팔미토일트리펩타이드-1을 포함한다.

INCI name	#1	#2	#3	#4	#5	#6	#7	#8	#9	#10
Glycerine	35.0	35.0	35.0	35.0	35.0	35.0	35.0	35.0	35.0	35.0
Hydrogenated Lecithine	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0
1,2 Hexanediol	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
Deionized Water	39.0	39.0	39.0	39.0	39.0	38.8	38.8	38.8	38.8	38.8
Shea Butter	8.0	8.0	8.0	8.0	8.0	8.0	8.0	8.0	8.0	8.0
Ceramide III	0.6	0.6	0.6	0.6	0.6	0.6	0.6	0.6	0.6	0.6
Cholesterol	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
Palmitic acid	0.2	-	-	-	-	0.2	-	-	-	-
Stearic acid	-	0.2	-	-	-	-	0.2	-	-	-
Lenoleic acid	-	-	0.2	-	-	-	-	0.2	-	-
Eicosapentaenoic Acid	-	-	-	0.2	-	-	-	-	0.2	-
Docosahexaenoic acid	-	-	-	-	0.2	-	-	-	-	0.2
Palmitoyl Tripeptide-1	-	-	-	-	-	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2

본 시험은 피부 건조증에 기인한 가려움 증상이 있는 시험 대상자 10명을 대상으로 하며, 시험 대상자의 전완부를 주 측정 부위로 한다. 전완부는 전주와 주름선의 약 2 내지 3cm 상측 또는 하측 부위를 가리킨다. 더 구체적으로 설명하면, 시험 대상자는 팔목의 5cm 떨어진 위치에 5x8cm 크기의 직사각형을 표시하고, 해당 부위에 1일 2회씩 샘플 1 내지 10의 세포간 지질 리포좀을 3주일 동안 사용하게 하였다. 그리고, 3주일이 지난 후 세포간 지질 리포좀 샘플을 사용한 전완부에 셀로판테이프(스카치? 다용도 테이프, 3M)를 사용하여 반복적으로 10회씩 스트리핑(Stripping)을 한 후 각질층에서 세라마이드 함량을 측정하였다.

이때, 셀로판테이프 한 장씩을 각각 이등분하여 1/2장의 제1 각질 시료 테이프는 단백질 정량에 사용하였다. 제1 각질 시료 테이프를 20mL 유리 바이알에 넣고 0.1%(w/v) 소듐 도데실 셀페이트, 2%(w/v) 프로필렌 글리콜 PBS 버퍼 용액 5mL를 넣어 실온에서 60분간 교반 추출한 후 1mL를 취하여 12,000rpm, 4℃의 조건에서 5분간 원심 분리하여 상등액을 검액으로 하였다. 정량용 표준품은 BCA(bicinchoninic acid) 단백질 분석 키트의 BSA를 사용하여 25 내지 500㎍/mL의 검량선용 표준액을 제조하였다. 시료 및 표준액은 각 25μL씩을 취하여 BCA 단백질 분석법을 이용하여 단백질량을 분석하였다.

그리고, 나머지 1/2장의 제2 각질 시료 테이프를 이용하여 각질 시료 중 세라마이드 분석에 사용하였다. 제2 각질 시료 테이프를 20mL 유리 바이알에 넣고 메탄올과 클로로포름(CHCl₃)을 2:1로 혼합한 혼합액 48mL와 20ng/mL의 내부 표준액(Ceramide C12) 200μL(최종 농도 12ng/mL)를 넣어 실온에서 30분간 교반 추출한 후 상등액 3mL를 취하여 농축기(speedvac)를 이용하여 40℃에서 30분간 감압 건조하였다.

다음으로, 건조된 시료는 메탄올 100μL를 넣어 재용해 후 5분간 흔들어준 다음 12,000rpm, 4℃의 조건에서 5분간 원심 분리하여 상등액을 검액으로 하여 HPLC로 분석하여 세라마이드 함량 결과를 얻었으며 각질중 단백질양으로 보정하였다. 상기 HPLC은 Shimadzu model LC-IOAT pump, SIL-IOAL auto sampler system과 Nova-pak C18 역상 컬럼(4㎛, 100mmХ8mm)으로 충진된 Radial-pak cartridge으로 구성할 수 있다.

다음으로, 메탄올:증류수:txiethylamine이 92:8:0.1(v/v/v)의 비율로 조성된 이동상을 사용하여 1mL/min 속도 조건에서 단당세라마이드를 분리하였다. 측정된 세라마이드 농도는 사용 피부 조직의 단백질 정량과 함께 ng/mg으로 표 5에 제시하였다.

단백질(ng/mg)	#1	#2	#3	#4	#5	#6	#7	#8	#9	#10
Ceramide C16	30.0	10.0	10.0	3.0	5.0	45.0	15.0	10.0	7.0	10.0
Ceramide C18	5.0	30.0	15.0	10.0	15.0	10.0	40.0	20.0	10.0	25.0
Ceramide C18:2	5.0	3.0	20.0	15.0	12.0	12.0	10.0	40.0	10.0	15.0
Ceramide C20:5	-	-	5.0	25.0	10.0	3.0	5.0	12.0	45.0	20.0
Ceramide C22:6	-	-	-	5.0	35.0	2.0	3.0	3.0	5.0	80.0
Ceramide III	5.0	3.0	3.0	15.0	20.0	10.0	8.0	10.0	15.0	55.0
총 세라마이드(Total Ceramide)	45.0	46.0	53.0	73.0	97.0	82.0	81.0	95.0	92.0	205.0

표 5를 참조하면, 비교 예로서 포화지방산인 팔미트산(Palmitic acid)과 스테아르산(Stearic acid)을 각각 포함하는 샘플 1 및 2의 경우, 총 세라마이드의 양이 50.0ng/mg 미만으로 현저히 낮게 나타났다. 그리고, 포화지방산 대신해 다가불포화지방산인 리놀레산(Lenoleic acid), EPA(Eicosapentaenoic acid: 에이코사펜타에노산) 및 DHA(Docosahexaenoic acid: 도코사헥사에노산)를 각각 포함하는 샘플 3 내지 5의 경우 총 세라마이드의 양이 53.0 내지 97.0ng/mg으로 샘플 1 및 2에 비해 증가하였다. 특히 다가불포화지방산으로 DHA를 포함하는 샘플 5의 경우 총 세라마이드의 양이 97.0ng/mg으로 샘플 1 및 2는 물론 샘플 3 및 4에 비해서도 크게 증가하였다.

샘플 6 내지 10은 앞서 샘플 1 내지 5에서의 지방산의 함량을 0.2중량%에서 0.1중량%로 줄이고, 줄어든 0.1중량%만큼 팔미토일트리펩타이드-1(Palmitoyl Tripeptide-1)이 포함되도록 한 세포간 지질 리포좀이다. 이러한 샘플 6 내지 10의 경우, 앞서 설명한 샘플 1 내지 5에 비해 총 세라마이드의 양이 82.0 내지 205.0ng/mg으로 각각 증가하였다. 특히 다가불포화지방산으로 DHA를 포함하고 팔미토일트리펩타이드-1도 포함하는 샘플 10의 경우 총 세라마이드의 양이 205.0ng/mg으로 샘플 1 내지 9를 통틀어 가장 높게 나타났으며, 이는 수치 상 바로 아래 위치하는 샘플 9에 비해서도 총 세라마이드의 양이 2배 이상 크게 증가한 것이다.

따라서, 화장품 조성물을 제조하되, 각질층의 세라마이드의 양을 크게 증가시키기 위해서는, 포함지방산 대신에 다가불포화지방산이 포함되도록 하고, 팔미토일트리펩타이드-1을 더 포함하면 된다는 것을 알 수 있다. 또한, 상기 다가불포화지방산 중에서 DHA를 사용하는 경우 이러한 세라마이드 증가 효과가 더 우수하고, 특히 DHA와 팔미토일트리펩타이드-1를 둘 다 포함하는 경우 이러한 세라마이드 증가 효과가 가장 우수하다는 것을 알 수 있다.

이하, 상기 세라미이드 함량 분석에 사용된 샘플 10의 화장품 제형에 대해 식품 의약품 안전처의 가이드 라인을 기준으로 20명을 대상으로 한 임상 시험을 실시하였다. 상기 화장품 제형은 DHA와 팔미토일트리펩타이드-1을 포함하는 리포좀 제형 2%을 포함한다.

또한, 기기적 평가 및 연구자 육안 평가의 정확성을 높이기 위하여, 시험 대상자는 측정 부위를 세정한 후 실내 온도 20 내지 24℃, 습도 40 내지 60%의 항온 항습 조건의 평가실에서 30분 간 안정을 취하여 측정 공간의 환경에 적응하도록 하고, 안정하는 동안 수분 섭취는 제한한다.

아래 실험 예 1 및 2의 경우, 기기적 평가의 대상 부위는 피부 건조증에 기인한 가려움 증상이 있는 부위로서, 앞서 설명한 전완부를 주 측정 부위로 하되, 시험 대상자의 전완부에 가려움증 증상이 없는 경우는 슬와 주름선의 약 2 내지 3cm 상하측 부위 또는 가려움증이 있는 기타 신체 부위를 측정 부위로 한다. 이때, 객관적인 측정을 위하여 측정은 연구자 1인이 하되, 제품 사용 전, 제품 사용 2주 후 및 제품 사용 4주 후에 동일한 부위를 측정하도록 한다.

[실험 예 1]

도 1은 피부 수분 함유량을 측정하여 나타낸 것이다. 피부 수분 함유량은 수분 측정기(Corneometer)를 사용하여 제품 사용 전, 제품 사용 2주 후 및 제품 사용 4주 후에 동일한 부위를 측정하며, 각각 3회씩 측정한 평균 값을 피부 수분 함유량의 평가 자료로 사용하였다. 이때, 피부 수분 함유량의 단위는 A.U (Arbitrary Unit)이다. 여기서, 측정 값이 높을수록 피부 수분 함유량이 많다는 것을 의미한다.

도 1을 참조하면, 제품 사용 전의 피부 수분 함유량은 19.549 A.U였다. 하지만, 제품 사용 2주 후 및 4주 후 피부 수분 함유량이 각각 28.383 A.U 및 32.793 A.U으로 측정되어 둘 다 제품 사용 전에 비해 피부 수분 함유량이 통계적으로 유의하게 증가한 것을 알 수 있다(p<0.05). 즉, 본 실험 예의 DHA와 팔미토일트리펩타이드-1을 포함하는 리포좀 제형을 포함하는 화장품 조성물을 이용하면, 피부 수분 함유량이 증가한다는 것을 확인할 수 있다.

[실험 예 2]

도 2는 경표피 수분 손실량(Transepidermal water loss, TEWL)을 측정하여 나타낸 것이다. 경표피 수분 손실량은 베이포미터(Vapometer)를 사용하여 제품 사용 전, 제품 사용 2주 후 및 제품 사용 4주 후에 동일한 부위를 측정하며, 각각 1회 측정한 값을 평가 자료로 사용하였다. 이때, 경표피 수분 손실량의 단위는 g/m²h이다. 여기서, 측정 값은 경표피 수분 손실량의 정도를 나타내므로 측정 값이 낮을수록 경표피 수분 손실이 개선된다는 것을 의미한다.

도 2를 참조하면, 제품 사용 전의 경표피 수분 손실량은 14.170g/m²h였다. 하지만, 제품 사용 2주 후 및 4주 후 경표피 수분 손실량이 각각 11.704g/m²h 및 11.770g/m²h으로 측정되어 둘 다 제품 사용 전에 비해 경표시 수분 손실량이 통계적으로 유의하게 감소한 것을 알 수 있다(p<0.05). 즉, 본 실험 예의 DHA와 팔미토일트리펩타이드-1을 포함하는 리포좀 제형을 포함하는 화장품 조성물을 이용하면, 경표피 수분 손실량이 개선된다는 것을 확인할 수 있다.

[실험 예 3]

도 3은 연구자 육안 평가 결과를 나타낸 것이다. 연구자 육안 평가는 아토피 임상지수인 SCORAD Index(SCORing atopic dermatitis index) 평가를 실시하고 그 결과를 피부 변화 평가 자료로 사용하였다. 여기서, SCORAD Index는 수치가 작을수록 피부가 개선된다는 것을 의미한다. 이때, 연구자 육안 평가의 대상 부위는 얼굴, 목, 사지 굴측부 습진(잡히는 안쪽 부위) 부위를 주 평가 부위로 하고, 제품 사용 전, 제품 사용 2주 후 및 제품 사용 4주 후에 평가를 진행한다.

도 3을 참조하면, 제품 사용 전의 SCORAD Index는 31.197이었다. 하지만, 제품 사용 2주 후 및 4주 후 SCORAD Index가 각각 16.736 및 12.235로 평가되어 둘 다 제품 사용 전에 비해 SCORAD Index가 통계적으로 유의하게 감소한 것을 알 수 있다(p<0.05). 즉, 본 실험 예의 DHA와 팔미토일트리펩타이드-1을 포함하는 리포좀 제형을 포함하는 화장품 조성물을 이용하면, 피부가 개선된다는 것을 확인할 수 있다.

[실험 예 4]

도 4는 시각 척도(Visual Analog Scale: VAS) 평가 결과를 나타낸 것이다. Visual Analog Scale(VAS) 평가는 시험 대상자가 느끼는 가려움증의 정도를 직접 평가한 것으로서, 시험 대상자는 제품 사용 전, 제품 사용 2주 후 및 제품 사용 4주 후에 각각 건조증에 기인한 피부 가려움증 정도를 0 내지 10 사이의 값으로 표시하고 그 결과를 점수화하여 피부 가려움증 개선 평가 지수로 사용하였다. 여기서, VAS 값이 작을수록 가려움증의 정도가 심하지 않다는 것을 의미한다.

도 4를 참조하면, 제품 사용 전의 VAS 값은 6.643이었다. 하지만, 제품 사용 2주 후 및 4주 후 VAS 값이 각각 3.317 및 1.665로 평가되어 둘 다 제품 사용 전에 비해 VAS 값이 통계적으로 유의하게 감소한 것을 알 수 있다(p<0.05). 즉, 본 실험 예의 DHA와 팔미토일트리펩타이드-1을 포함하는 리포좀 제형을 포함하는 화장품 조성물을 이용하면, 피부 가려움증이 완화되는 것을 확인할 수 있다.

본 발명은 상술한 실시 예 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것이 아니며 첨부된 청구 범위에 의해 한정하고자 한다. 즉, 본 발명의 화장품 조성물의 제형이 특별히 한정되는 것은 아니며, 본 발명은 청구 범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 당 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 형태의 치환, 변형 및 변경이 가능할 것이며, 이 또한 본 발명의 범위에 속한다고 할 것이다.

Claims (5)

1. 조성물 총중량에 대해, 세라마이드 III(Ceramide III) 0.50 내지 0.72중량%, 콜레스테롤(Cholesterol) 0.16 내지 0.24중량%, 다가불포화지방산 0.16 내지 0.24중량%, 팔미토일트리펩타이드-1 0.0005 내지 2.0중량% 및 N⁵, N¹⁰-메틸렌 테트라하이드로폴레이트(Methylene Tetrahydrofolate)를 포함하고, 상기 팔미토일트리펩타이드-1에서 트리펩타이드가 글리신(G: Glycine), 히스티딘(H: Histidine) 및 리신(K: Lysine)인, 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 다가불포화지방산이, 리놀레산(Lenoleic acid), EPA(Eicosapentaenoic acid: 에이코사펜타에노산) 또는 DHA(Docosahexaenoic acid: 도코사헥사에노산) 중 적어도 하나인 것을 특징으로 하는, 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 다가불포화지방산이 DHA인 것을 특징으로 하는, 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물.
4. 제1항에 있어서, 글리신:N⁵, N¹⁰-메틸렌 테트라하이드로폴레이트(Methylene Tetrahydrofolate)의 몰수비가 1:1~1.5인 것을 특징으로 하는, 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 세포간 지질 화장품 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 조성물이 마이크로플루다이징되어 리포좀 형태로 포함되는 것을 특징으로 하는, 피부 건조증에 기인한 가려움증 개선을 위한 신규 세포간 지질 화장품 조성물을 함유한 리포좀 조성물.

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