KR101937331B1 - 단풍취를 이용한 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 식초 및 그 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 단풍취를 이용한 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초 및 그 제조방법에 관한 것으로, 상세하게는 (a) 단풍취를 세척하여 준비하는 단계; (b) 상기 단계 (a)에서 준비된 세척한 단풍취에 용매를 첨가하여 추출물을 제조하는 단계; (c) 상기 단계 (b)에서 제조된 단풍취 추출물에 초산균을 접종하여 초산 발효물을 제조하는 단계; 및 (d) 상기 단계 (c)에서 제조된 초산 발효물을 여과하고 숙성시켜 식초를 제조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초를 제공한다.
Description
본 발명은 단풍취를 이용한 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 식초 및 그 제조방법에 관한 것이다.
식초는 전통적으로 동서양을 막론하고 오랜 역사를 지닌 발효 식품으로 간장, 된장과 함께 우리 식생활과 밀접한 관련을 맺고 있는 중요한 조미료의 하나이다. 식초는 미생물을 이용하여 당류나 전분질을 함유하고 있는 여러 원료를 알코올 발효한 후 초산 발효하여 제조하는 원리이며, 신맛을 내는 초산성분을 비롯하여 25여 종의 유기산과 20여 종의 아미노산, 20여 종의 에테르 및 각종 영양물질이 함유된 복합 산미 조미료이자 건강식품이라 할 수 있다.
식초는 식품 보존 효과뿐만 아니라 식품 방향제 또는 치료제로 널리 사용되고 있다. 일반적으로 식초는 음식물 자체의 맛을 좋게 할 뿐 아니라 짠맛을 덜어주고 지방을 중화시켜 주는 작용을 한다. 또한, 식초는 피를 맑게 하며 피로 회복에 효과가 크고 각종 성인병을 치료하는데 좋은 원료로 널리 알려져 있다. 또한, 식초에 함유되어 있는 유기산과 아미노산 등은 질병에 대한 저항력을 높여 주고 위에서 흡수되어 산성체질을 개선하는 효과가 있다.
식초는 초산 이외의 각종 휘발성 및 비휘발성 유기산류, 당류, 아미노산류, 에스테르류를 함유하고 있어 식욕을 자극하는 방향과 맛을 가지며 생체 조직 내에서 쉽게 분해되어 다른 열량원보다 빠르게 칼로리를 발생하는 스테미너 식품으로 알려져 있다. 천연식초는 동맥경화, 고혈압 등의 성인병 예방효과, 식중독균의 살균효과, 콜레스테롤 저하효과, 체지방 감소 및 피로회복 효과 등에 관한 연구가 보고되면서 기능성 식품으로 인정되고 있고 다양한 용도로의 개발이 진행되고 있다. 또한, 천연식초는 우리 몸에 파로틴의 분비를 촉진하여 세포의 노화를 막고 뼈를 강하게 하고, 체내의 칼슘 흡착력을 높여 골의 질량을 늘리는 기능도 알려져 있다.
한편, 비만은 체내에 지방이 필요 이상으로 과도하게 쌓인 경우를 말하며, 국민 건강통계에 따르면 비만 유병률은 1998년 26.0%에서 2011년 31.4%로, 증가 추이를 보인다. 특히 비만은 다양한 성인병의 합병증과 관련이 있는 것으로 밝혀지고 있다. 예를 들어, 비만환자는 정상 체중인 사람에 비하여 간경변증 질환의 경우 2배, 뇌혈관질환의 경우 1.6배 및 관상동맥질환의 경우 1.8배 정도 사망률이 높은 것으로 보고되어 있다.
현재, 비만에 대한 치료방법으로 식이요법, 운동요법 및 약물요법 등이 시도되고 있으며, 이 중 약물요법으로 사용되는 비만치료제는 식욕의 조절, 지방의 소화흡수 방해, 에너지 소비의 증가 또는 지질대사의 조절 등을 타겟으로 개발되었으나, 다양한 부작용이 존재한다. 제니칼(로슈)은 췌장 및 소화계에서 분리되는 리파아제 억제를 유도하여 지방흡수를 억제하지만, 겨우 2~3%의 낮은 체중감량 효과를 보이며, 잦은 설사, 지방변 등의 부작용을 동반한다. 또한, 리덕틸(애보트)은 세로토닌과 노르아드레날린의 재흡수 억제를 통해 식욕을 억제시킴으로써, 5~10%의 체중감량효과가 있으나, 뇌졸증과 심근경색 등 심혈관계 질환의 부작용이 있어, 2010년 유럽 의약품 안전청(EMA)과 미국 식품의약품안전청(FDA)이 처방과 사용중지 및 자발적 회수 권고조치를 내려 시장에서 퇴출되었으며, 국내에서는 2010년 10월경 식품의약품안전청에 의해 판매가 중단되었다. 이외에도 항비만 약제로 개발된 제품 중에서 심각한 부작용으로 인해 판매가 금지된 것들이 상당수에 이른다. 예로 아미노필린은 탁월한 체지방 분해효과에도 불구하고 정신신경계, 순환기계, 소화기계에 걸쳐 폭넓은 부작용이 보고된 바 있고, 펜프루라민, 덱스펜플루라민, 토피라메이 또는 에피드린 등도 비만치료에 부적합한 약물로 판정되어 판매가 금지되었다. 이와 같이 합성의약품의 부작용과 만성질환의 극복에 서양의학이 한계를 보임에 따라 항비만 효과를 가진 천연물 식의약품에 대한 가치가 새롭게 부각되고 있다.
또한, 염증(inflammation)은 물리적인 상처나 미생물에 감염되었을 때 일어나는 정상적인 생체의 방어기전(defense mechanism)의 일종이며 이 염증작용을 통하여 발병요인(pathogen)을 중화시키거나 제거하고, 손상된 조직을 복구시켜 정상적인 구조와 기능을 하게 한다. 염증을 동반하는 대부분의 질환은 조직의 손상, 통증 및 가려움증과 같은 삶의 질을 떨어뜨리는 결과를 초래하고, 만성적인 염증상태는 관절염, 천식, 뇌와 척수의 다발성 경화증, 염증성 장 질환 및 동맥 경화증을 일으킨다. 대식세포는 선천면역을 담당하는 주요 세포로, 사이토카인 및 박테리아 지질다당류 내독소(lipopolysaccharide, LPS) 같은 수많은 인자에 의해 활성화되고, 활성화된 대식세포는 산화질소(nitric oxide, NO) 및 프로스타글란딘E2(prostaglandin E2, PGE2) 같은 염증 인자는 물론 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-6(interleukin-6), IL-1(interleukin-1) 같은 전염증성 사이토카인을 생산한다. NO는 자유 라디칼(free radical)의 일종으로 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)에 의해 합성되며, eNOS(endothelial NOS), nNOS(neuronal NOS) 및 iNOS(inducible NOS)의 3개의 동형 단백질(isoform)이 존재한다. IL-1, TNF-α, 인터페론-감마(interferon-gamma) 같은 전염증성 사이토카인들은 iNOS 발현을 유발하고 NO 생산을 일으킬 수 있다. 뇌암, 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암 및 흑색종 같은 많은 악성암들이 iNOS 발현과 연관되어 있고, 과도한 NO의 생산은 상피세포암, 돌연변이 및 DNA 구조 손상을 일으킬 수 있다. 일반적으로 COX 단백질은 COX-1과 COX-2 두가지 동형 단백질(isoforms)로 존재하고, 염증 반응동안 COX-2에 의해 PGE2가 생성된다. 또한, COX-2의 발현은 세포 손상, 고통, 부종 및 열, 신생혈관 형성 및 전이 같은 종양생성과 깊은 관련이 있다. NF-κB는 염증 반응에서 중요한 역할을 하는 전사인자이며, LPS와 반응하여 대식세포는 TLR4(Toll-like receptor 4)에 의한 Myd88(myeloid differentiation factor 88)을 활성화한다. 활성화된 Myd88은 TAK1(transforming growth factor--activated protein kinase 1)을 활성화하고, TAK1은 IκB(inhibitor of NF-κB)의 분해(degradation)를 통해서 NF-κB를 활성화 시킨다. 이를 통해 NF-κB는 최종적으로 염증 매개 인자들을 분비하여 염증을 일으킨다.
더욱이, 사람의 피부색을 결정하는 데는 여러 요인들이 관여하는데, 그 중에서도 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드, 빌리루빈 등의 인체 내외의 색소 관련 요인들이 중요하다. 특히, 가장 중요한 요인은 인체 내의 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 색소이다. 피부의 색소침착은 자외선이나 염증 등의 자극에 의해 야기되며 또 유전적 요인이나 호르몬, 식품 등과 화학물질 등의 인자에 의해서도 발생된다고 알려져 있다. 특히 기미, 주근깨, 색소침착 등과 같은 피부색소 이상침착 증상에 프로스타글란딘(prostaglandins), 히스타민(histamine), 알파-MSH(alpha-MSH), NO(Nitric oxide) 같은 염증 관련 인자가 관여되어 멜라노사이트(melanocyte) 내에서 멜라닌 생성을 활성화시키는 것은 잘 알려져 있다. 또한, 조직의 손상과 재생과정에서도 면역학적 매개체에 의해 과색소 침착이 수반된다는 보고도 있다.
멜라닌 색소 합성을 구체적으로 살펴보면 멜라닌 세포(melanocytes)가 여러 요인에 의해 자극을 받으면 티로시나아제(tyrosinase)가 멜라노좀(melanosome)에서 멜라닌을 생성한다. 즉, 멜라닌 세포 내 티로신은 티로시나아제의 작용으로 도파(dopa)로 변하고, 이어 도파옥시다제(dopaoxidase)의 작용으로 도파퀴논(dopaquinone)으로 변한 후, 티로시나아제 관련 단백질-1(tyrosinase-related protein-1, 이하 TRP-1이라고 명기)과 티로시나아제 관련 단백질-2(tyrosinase-related protein-2, 이하 TRP-2이라고 명기)의 작용에 의하여 멜라닌을 생성한다. 이러한 일련의 반응에서 티로시나아제는 멜라닌 색소 형성 과정의 속도-제한 반응을 활성화시키므로, 멜라닌 형성은 티로시나아제의 활성 및 발현에 의하여 1차적으로 제어된다. 또한, DOPA 크롬 상호변이효소로 알려진 TRP-2는 DOPA 크롬의 5,6-디하이드록시인돌-2-카르복실산(DHICA)로의 반응을 활성화시키고, TRP-1는 DHICA를 카르복실 인돌-퀴논으로 산화시킨다. 결과적으로 TRP-1 및 TRP-2는 불용성 색소인 멜라닌 형성의 최종단계인 중합반응에 관여한다. 이들 티로시나아제(tyrosinase), TRP-1(tyrosinase-related protein-1), TRP-2(tyrosinase-related protein-2)는 염증 매개물질에 의해 활성이 증가되어 멜라닌의 합성이 증가된다는 보고가 있다.
현재 개발된 미백제로는 코지산, 알부틴, 글루타치온, 비타민 C 등이 있지만 소비자들이 만족할 만한 미백효과를 갖지 못하고 있으며, 피부 안전성 때문에 그 사용량이 제한적이다. 따라서 멜라닌 합성단계별로 다양한 시도가 이루어져 왔다.
한편, 단풍취(Mapleleaf ainsliaea)는 국화과에 속하는 다년생초로, 잎이 줄기에 4~7장 모여나고 단풍나무잎처럼 7~11갈래로 갈라졌는데 그 생김새가 단풍나무와 비슷한 취나물이라고 해서 단풍취라고 부른다. 이러한 단풍취의 어린잎은 나물로 먹을 수 있고, 뿌리를 제외한 풀 전체는 약용으로 쓰이며, 비타민, 무기질, 칼륨이 풍부할 뿐 아니라 숙취해소, 동맥경화, 고혈압, 류마티스 관절염, 장염에 효능이 있다고 알려져 있으나, 항비만, 항염증 및 피부 미백 효과에 대한 연구는 미비한 실정이며, 상기 단풍취를 이용하여 식초를 제조하는 기술은 개발되지 않았다.
한편, 한국공개특허 제10-2010-0133720호에는 고추 식초의 제조방법이 개시되어 있으나, 본 발명의 단풍취를 이용한 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 식초 및 그 제조방법에 대해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자는 단풍취를 이용한 식초 및 그 제조방법을 제공하고, 식초 제조로 인해 동맥경화, 고혈압 등의 성인병 예방과, 식중독균의 살균, 콜레스테롤 저하, 체지방 감소 및 피로회복을 향상시킬 뿐 아니라 항비만, 항염증 및 피부 미백 개선 효과가 증진되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은
(a) 단풍취를 세척하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)에서 세척한 단풍취에 용매를 첨가하여 추출물을 제조하는 단계;
(c) 상기 단계 (b)에서 제조된 단풍취 추출물에 초산균을 접종하여 초산 발효물을 제조하는 단계; 및
(d) 상기 단계 (c)에서 제조된 초산 발효물을 여과하고 숙성시켜 식초를 제조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 단풍취를 이용한 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 식초 및 그 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 제조방법에 의해 제조된 식초는 통상적으로 처리되는 알콜 발효를 거치지 않고 초산 발효과정만을 통해 단풍취의 유효성분을 효과적으로 이용할 수 있을 뿐 아니라 생산 공정 시간을 단축하여 가격 경쟁력도 확보할 수 있다.
또한, 식초 고유의 기능인 동맥경화, 고혈압 등의 성인병 예방과, 식중독균의 살균, 콜레스테롤 저하, 체지방 감소 및 피로회복뿐 아니라 단풍취를 초산 발효함으로써 우수한 항비만, 항염증 및 피부 미백 효과를 나타낸다.
도 1은 본 발명의 제조방법에 따른 단풍취 추출물 또는 초산 발효물의 지방생성 억제효과(a), 멜라닌 생합성 저해 효과(b) 및 NO 생성 억제 효과(c)를 확인한 결과이다. MDI(IBMX(3-isobutyl-1-methylxanthine), 덱사메타손(dexamethasone), 인슐린(insulin)의 혼합물)는 분화 유도 물질로, 지방전구세포인 3T3-L1의 분화를 유도하기 위해 사용하였다. α-MSH는 멜라닌 생합성을 촉진하기 위해 처리하였고, LPS는 NO의 생성을 촉진하기 위해 처리하였다. 알부틴(arbutin)은 멜라닌 생합성 저해효과를 확인하기 위한 양성대조군이고, 물 추출물은 단풍취 물 추출물이고, 물 초산 발효는 단풍취 물 추출물을 초산 발효한 식초이고, 에탄올 추출물은 단풍취 에탄올 추출물이며, 에탄올 초산 발효는 단풍취 에탄올 추출물을 초산 발효한 식초이다.
본 발명은
(a) 단풍취를 세척하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)에서 세척한 단풍취에 용매를 첨가하여 추출물을 제조하는 단계;
(c) 상기 단계 (b)에서 제조된 단풍취 추출물에 초산균을 접종하여 초산 발효물을 제조하는 단계; 및
(d) 상기 단계 (c)에서 제조된 초산 발효물을 여과하고 숙성시켜 식초를 제조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초의 제조방법을 제공한다.
상기 단계 (b)에서 첨가한 용매는 C1 내지 C4의 저급 알코올, 물 또는 이들의 혼합물이며, 바람직하게는 에탄올이지만 이에 한정하지 않는다.
상기 단계 (c)에서 접종된 초산균은 바람직하게는 아세토박터 속(Acetobacter sp.)이지만 이에 제한되지 않는다.
상기 단풍취 식초의 제조방법으로 제조된 단풍취 식초는 지방생성, 멜라닌 합성 및 NO 생성 저해능이 단풍취 추출물에 비해 더욱 증진되며, 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능을 나타내지만 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "멜라닌 색소 과다 침착(hyperpigmentation)"은 피부 또는 손발톱의 특정 부위에서 멜라닌의 과도한 증가에 의해 다른 부위에 비해 검게 또는 어둡게 되는 것을 의미한다. 상기 멜라닌 색소 과다 침착 질환은 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른흑피증(cyanic melasma), 약물 사용 후의 과다 색소 침착, 찰상, 화상 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소 침착 또는 임신성 갈색반(gravidic chloasma) 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명의 제조예 및 실시예를 들어 상세히 설명한다. 단, 하기 제조예 및 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예 및 실시예에 한정되는 것은 아니다.
제조예
1.
단풍취
추출물 및 식초의 제조
1) 단풍취 물 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 단풍취 10g에 증류수를 100㎖ 넣고, 180rpm으로 12시간 동안 가열교반하여 추출한 후, 12,000rpm에서 15분 동안 원심 분리한 뒤 여과하여 시료로 사용하였다.
2) 단풍취 물 초산 발효 식초의 제조
상기 단풍취 물 추출물에 10%의 설탕을 첨가한 후, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 균주를 접종하여 30℃에서 96시간 동안 발효한 알코올 발효액에 초산 균주인 아세토박터 속(Acetobacter sp.)을 접종하여 30℃에서 180rpm으로 72시간 배양하였다. 배양된 초산발효액은 12,000rpm에서 15분 동안 원심 분리한 뒤 여과하여 시료로 사용하였다.
3) 단풍취 에탄올 추출물의 제조
건조하여 분쇄한 단풍취 10g에 60%(v/v) 에탄올을 100㎖ 넣고, 상온에서 180rpm으로 2시간 동안 교반하여 추출한 후, 12,000rpm에서 15분 동안 원심 분리한 뒤 여과하여 시료로 사용하였다.
4) 단풍취 에탄올 초산 발효 식초의 제조
상기 단풍취 에탄올 추출물을 증류수로 희석하여 에탄올 함량을 6%(v/v)로 조정한 뒤 초산 균주인 아세토박터 속(Acetobacter sp.)을 접종하여 30℃에서 180rpm으로 72시간 배양하여 초산발효하였다. 배양된 초산발효액은 12,000rpm에서 15분 동안 원심 분리한 뒤 여과하여 시료로 사용하였다.
실시예
1.
단풍취
추출물 및 식초의 지방생성 억제효과 확인
제조예 1의 단풍취 물 추출물, 물 초산 발효 식초, 에탄올 추출물, 에탄올 초산 발효 식초의 지방생성 억제효과를 지방전구세포인 3T3-L1을 이용하여 확인하였다. 3T3-L1의 지방생성 정도는 Lipid(Oil Red-O) staining kit(sigma, USA)를 이용한 염색을 통하여 측정하였다. 제조예 1의 농도별(25 및 50㎍/㎖) 단풍취 추출물 또는 식초와 분화유도물질(MDI)을 함께 처리하여 분화시키고, 그 후 10% 포르말린이 포함된 인산완충액(phosphatate buffer saline, PBS)을 처리하여 실온에서 고정한 후, 이를 제거하고, 60% 이소프로판올(isopropanol)로 씻어준 뒤 건조하였다. 그 후, Oil Red-O를 넣고, 45분 동안 염색한 후 증류수로 4번 세척하고, 증류수를 완벽히 제거하였다. 그 후, 세포에 100% 이소프로판올을 넣고 180rpm에서 10분 동안 지방에 염색된 Oil Red-O를 추출하고, 그 값을 520㎚ 흡광도를 이용하여 측정하였다.
그 결과, 도 1(a)에 나타난 바와 같이 단풍취 에탄올 추출물 50㎍/㎖ 처리구와 단풍취 에탄올 초산 발효 식초 25 및 50㎍/㎖ 처리구에서 지방생성 억제효과를 확인하였으며, 단풍취 에탄올 추출물에 비해 에탄올 추출물의 초산 발효 식초의 지방생성 억제효과가 더욱 증진되는 것을 확인하였다.
실시예
2.
단풍취
추출물 및 식초의 멜라닌(
melanin
) 생합성 저해효과 확인
제조예 1의 단풍취 물 추출물, 물 초산 발효 식초, 에탄올 추출물, 에탄올 초산 발효 식초의 멜라닌 생합성 저해효과는 B16-F10 마우스 멜라노마 세포를 이용하여 확인하였다. B16-F10 마우스 멜라노마 세포를 12-웰 플레이트에 1×105 cells/㎖이 되도록 접종하여 24시간 동안 배양한 후, 각 웰에 α-MSH(melanocyte-stimulating hormone)를 처리하여 멜라닌 생합성을 유도한 뒤 알부틴(arbutin), 제조예 1의 농도별(25 및 50㎍/㎖) 단풍취 추출물 또는 제조예 1의 농도별(25 및 50㎍/㎖) 단풍취 식초를 각각 48시간 동안 처리하였다. 48시간 후 배지를 제거하고 인산완충액(phosphatate buffer saline, PBS)으로 2회 세척한 후 부착된 세포를 원심분리하여 펠렛(pellet)을 얻었다. 침전된 멜라노마 세포에 1N 수산화나트륨(NaOH)에 DMSO가 10%가 되도록 만든 용액 200㎕를 가하고, 60℃에서 1시간 동안 용해하였으며, 405㎚에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 1(b)에 나타난 바와 같이 단풍취 물 추출물 25 및 50㎍/㎖와 에탄올 추출물 25㎍/㎖를 제외한 모든 처리구에서 멜라닌 생합성 억제효과를 확인하였으며, 물 또는 에탄올 추출물에 비해 초산 발효 식초의 멜라닌 생합성 억제효과가 우수하였고, 특히, 에탄올 초산 발효 식초의 멜라닌 생합성 억제효과가 가장 우수하였다.
실시예
3.
단풍취
추출물 및 식초의
NO
(
nitric
oxide
) 생성 억제효과 확인
제조예 1의 단풍취 물 추출물, 물 초산 발효 식초, 에탄올 추출물, 에탄올 초산 발효 식초의 항염효과를 검증하기 위해 마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 96-웰 플레이트에 1×106 cells/㎖가 되도록 접종하고, 37℃ 온도와 5% CO2가 유지되는 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 각 웰에 제조예 1의 농도별(25 및 50㎍/㎖) 단풍취 추출물 또는 식초를 1시간 동안 처리하고, 그 후 1㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액의 상징액을 얻고, 상징액과 그리스(griess) 시약을 반응시킨 후, 분광광도계를 이용하여 540㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. NO 생성율은 LPS 처리군 대비 백분율로 나타내었다.
그 결과, 도 1(c)에 나타난 바와 같이 단풍취 물 추출물을 제외한 모든 처리구에서 NO 생성 억제효과를 확인할 수 있었으며, 물 추출물 및 물 초산 발효 식초에 비해 에탄올 추출물 및 에탄올 초산 발효 식초의 NO 생성 억제효과가 우수하였으며, 특히 에탄올 초산 발효 식초 50㎍/㎖ 처리시 NO 생성 억제효과가 가장 우수하다는 것을 확인하였다.
Claims (8)
- (a) 단풍취를 세척하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)에서 세척한 단풍취 10g에 100㎖의 60%(v/v) 에탄올을 첨가하여 추출물을 제조하는 단계;
(c) 상기 단계 (b)에서 제조된 단풍취 추출물에 증류수를 첨가하여 에탄올 함량을 6%(v/v)로 조정한 후 아세토박터 속(Acetobacter sp.) 초산균을 접종하여 30℃에서 72시간 동안 배양하여 초산 발효물을 제조하는 단계; 및
(d) 상기 단계 (c)에서 제조된 초산 발효물을 여과하고 숙성시켜 식초를 제조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초의 제조방법. - 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 단풍취 식초는 지방생성 저해능, 멜라닌 합성 저해능 및 NO 생성 저해능을 증진시키는 것을 특징으로 하는 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초의 제조방법.
- 제1항 또는 제4항의 제조방법으로 제조된 항비만, 항염증 및 피부 미백 효능이 증진된 단풍취 식초.
- 제5항의 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
- 제5항의 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
- 제5항의 단풍취 식초를 유효성분으로 함유하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) |