KR101934350B1 - 흰반점 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 조성물 - Google Patents
흰반점 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101934350B1 KR101934350B1 KR1020170022579A KR20170022579A KR101934350B1 KR 101934350 B1 KR101934350 B1 KR 101934350B1 KR 1020170022579 A KR1020170022579 A KR 1020170022579A KR 20170022579 A KR20170022579 A KR 20170022579A KR 101934350 B1 KR101934350 B1 KR 101934350B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- preventing
- white spot
- treating
- mixture
- shrimp
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 102
- 241000696962 White spot syndrome virus Species 0.000 title claims description 71
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 title abstract description 19
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims abstract description 112
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 43
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 30
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 235000001453 Glycyrrhiza echinata Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 235000017382 Glycyrrhiza lepidota Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 229940010454 licorice Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 235000018597 common camellia Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 240000001548 Camellia japonica Species 0.000 claims abstract description 9
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 claims abstract 3
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 17
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 16
- 241000202807 Glycyrrhiza Species 0.000 claims description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 241000512259 Ascophyllum nodosum Species 0.000 claims description 3
- 244000298479 Cichorium intybus Species 0.000 claims description 3
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 claims 5
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 claims 5
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims 4
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 claims 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims 1
- 229940066901 crestor Drugs 0.000 claims 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 1
- LALFOYNTGMUKGG-BGRFNVSISA-L rosuvastatin calcium Chemical compound [Ca+2].CC(C)C1=NC(N(C)S(C)(=O)=O)=NC(C=2C=CC(F)=CC=2)=C1\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O.CC(C)C1=NC(N(C)S(C)(=O)=O)=NC(C=2C=CC(F)=CC=2)=C1\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O LALFOYNTGMUKGG-BGRFNVSISA-L 0.000 claims 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 abstract description 65
- 241001137251 Corvidae Species 0.000 abstract description 5
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 abstract description 2
- WHRZCXAVMTUTDD-UHFFFAOYSA-N 1h-furo[2,3-d]pyrimidin-2-one Chemical compound N1C(=O)N=C2OC=CC2=C1 WHRZCXAVMTUTDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 240000004670 Glycyrrhiza echinata Species 0.000 abstract 1
- 244000073231 Larrea tridentata Species 0.000 abstract 1
- 235000006173 Larrea tridentata Nutrition 0.000 abstract 1
- 241000219745 Lupinus Species 0.000 abstract 1
- 229960002126 creosote Drugs 0.000 abstract 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 description 19
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 16
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 9
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 6
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 6
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000209507 Camellia Species 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000058338 Macrobrachium nipponense Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 2
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- 241000238553 Litopenaeus vannamei Species 0.000 description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- 240000003296 Petasites japonicus Species 0.000 description 2
- 241000663306 Trachysalambria curvirostris Species 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000157282 Aesculus Species 0.000 description 1
- 241001646648 Aesculus turbinata Species 0.000 description 1
- 241000213006 Angelica dahurica Species 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000254171 Curculionidae Species 0.000 description 1
- 244000163122 Curcuma domestica Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 240000008620 Fagopyrum esculentum Species 0.000 description 1
- 235000009419 Fagopyrum esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008917 Glycyrrhiza uralensis Species 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000534017 Saururus chinensis Species 0.000 description 1
- 244000045719 Syzygium Species 0.000 description 1
- 241000270708 Testudinidae Species 0.000 description 1
- 241000411751 Trachypenaeus curvirostris Species 0.000 description 1
- 241001058063 Whispovirus Species 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 235000003373 curcuma longa Nutrition 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 210000002816 gill Anatomy 0.000 description 1
- 210000000514 hepatopancreas Anatomy 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010181 horse chestnut Nutrition 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 241000238565 lobster Species 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/11—Pteridophyta or Filicophyta (ferns)
- A61K36/12—Filicopsida or Pteridopsida
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
- A01N65/04—Pteridophyta [fern allies]; Filicophyta [ferns]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/61—Myrtaceae (Myrtle family), e.g. teatree or eucalyptus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/59—Mixtures
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Birds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
본 발명은 새우에서 흰반점 바이러스에 의한 감염을 예방하고 치료하기 위한 신규한 항바이러스성 물질을 제공하는 것이다. 본 발명에 따르면 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 추출물의 혼합물이 새우의 흰점 바이러스에 대한 우수한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 확인되었다. 또한, 본 발명의 식물추출물의 혼합물은 새우의 섭식을 높이기 위해 고분자 물질로 표면을 코팅하여 새우에 공급된다.
Description
본 발명은 흰반점 바이러스 (WSSV, White spot syndrome virus) 감염에 따른 질환을 예방 또는 치료하기 위한 항바이러스 조성물에 관한 것이다.
새우 흰반점 바이러스 (White spot syndrome virus, WSSV) 전세계에 폭넓게 분포되어 있는 바이러스로서, 바이론 말단 부위에 꼬리와 유사한 부착물을 갖고, 로드 (rod) 형태의 캡시드 (capsid) 및 엔벨롭 (envelop)이 존재하는 난형의 바실러스와 유사한 형태를 갖고 있다. 이러한 구조적인 특징으로 인해, 베큘로바이러스 또는 바실러스 유사형 바이러스 (bacillus-like formed virus)로 불렸으나, 최근 유전학적으로 새로운 바이러스 그룹인 휘스포바이러스 (whispovirus)로 명명되고 있다 (van Hulten M.C., et al.,J. Gen. Virol., 81(Pt2), pp307-16, 2000). 흰반점 바이러스는 길이 약 275 nm, 직경 약 120 nm 이고, 약 290 kb의 크기를 갖는 2중 나선 DNA (double-stranded DNA)로 구성된다. WSSV는 주로 새우, 가재, 및 게 등의 갑각류에 감염되며, 특히, 새우에 감염되면 새우의 갑피 (carapace), 외지 (appendage) 및 큐티클에 흰반점이 나타나고, 새우의 간 췌장 (hepatopancreas)이 붉은색을 띠게 된다. 흰반점은 칼슘염의 축적이며 갑각의 내측표면에서 가장 선명하게 형성된다. 감염된 새우는 무기력해지며 섭식을 중단하고 수표면을 느리게 움직이다가 사망한다. 감염 후 3 ~ 10일 내에 80 ~ 100% 폐사되며, 20일 이내에 전량 폐사되는 등, 새우류에 있어 매우 치명적인 감염성 질환이다. 현재 WSSV는 전세계적으로 발생하고 있으며, 양식새우에 많은 피해를 주고 있음에도 불구하고 아직 뚜렷한 대책이 없는 실정이다.
새우류에 대한 질병 종류가 100여 가지로 알려져 있으나, 그 중 WSSV에 의한 피해가 가장 심각한 것으로 보고되고 있다. 이에 많은 나라에서 흰반점 바이러스에 대한 연구를 수행하고 있으며, 바이러스의 검사 방법과 생물학적 특성을 밝히는 연구들이 활발히 진행되고 있다. 그러나, 새우의 면역체계는 척추동물과 상이하여, 백신 개발에 많은 어려움이 있다. 척추동물에 감염되는 병원체의 대부분은 숙주에서 항체가 생성되면 쇠퇴하다가 다시 창궐하는 양상을 보이나, WSSV에 대한 저항성을 갖는 새우가 나타났다는 보고는 아직 없다. 국내에서는 글루칸 (Glucan) 제제를 사료에 첨가하여 면역능력을 향상시키거나, 염소소독제로 새우의 입식 전에 입식공간을 소독하여 바이러스를 소멸시키기도 하지만 뚜렷한 효과를 보지 못하고 있다. 또한, 한국특허등록 제 10-0824106호는 제비쑥 추출물 및 삼백초 추출물이 흰반점 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 것을 개시한 바 있다. 이 밖에도 감초, 천궁, 땅콩, 메밀, 청각, 및 김 추출물 등이 흰반점바이러스에 대한 억제 활성을 갖는 것으로 보고된 바 있다. 그러나, 흰반점 바이러스의 예방이나 치료에 대한 획기적인 방법은 현재까지 개발되지 못하고 있는 실정이다.
Artificial infection of native Korean freshwater shrimp with white spot syndrome virus (WSSV).
Experimental infection of white spot baculovirus in some cultured and wild decapods in Taiwan.
본 발명의 목적은 흰반점 바이러스 (WSSV, White spot syndrome virus)에 대한 억제 활성이 있는 신규 항바이러스 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 흰반점 바이러스에 대한 억제 활성이 있는 신규 항바이러스 조성물로서 식물추출물의 혼합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 갑각류에서 흰반점 바이러스에 의한 감염을 예방 또는 치료하기 위한 방법을 제공하는 것이다.
상기 본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 식물추출물의 혼합물을 포함하는, 새우 및 가재 등 갑각류에서 흰반점 바이러스에 의한 감염증을 예방 또는 치료하기 위한 식물추출물의 혼합물인 항바이러스 조성물을 제공한다.
상기 식물추출물의 혼합물은 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 중 어느 하나에 대한 추출물을 혼합한 것 또는 상기 중, 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백을 일괄하여 추출한 추출물로서의 혼합물일 수 있다. 즉, 상기 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 각각에 대한 추출물을 혼합할 수 있고, 상기 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백을 일괄하여 추출한 혼합물일 수 있으며, 각각의 추출물을 혼합한 경우에는 각각의 추출물의 각 성분이 제조되는 과정에서 보다 순수한 추출물일 수 있다. 한편, 일괄하여 추출하는 경우에는 각 성분의 일괄 추출 시에 여러 성분이 함께 추출되는 과정에서 미세한 효과의 차이가 있을 수 있다.
상기 식물추출물의 혼합물은 관중추출물 : 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 추출물 : 칠엽수 추출물 : 감초 추출물 : 울금 추출물 :백지 추출물 : 동백 추출물 = 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0의 중량비를 갖는 것이 바람직하다. 또한, 상기 식물추출물의 혼합물은 관중추출물 : 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 추출물 : 칠엽수 추출물 : 감초 추출물: 울금 추출물 = 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0의 중량비를 갖고 일괄하여 추출하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 천연물로부터 성분을 추출할 때, 정제수, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 메틸알콜, 프로판올, 이소프로필알콜 및 부틸알코올 중 어느 하나 또는 이들의 2이상의 혼합물이 추출용매로 사용되어 상기 식물추출물의 혼합물이 제조될 수 있다. 이 때, 상기 식물추출물의 혼합물은 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 중 어느 하나를 각각 추출한 후에 혼합할 수 있으며, 동시에 추출용매를 사용하여 추출할 수 있다.
또한, 본 발명은 식물추출물의 혼합물을 이용하여 새우 및 가재 등 갑각류에서 흰반점 바이러스에 의한 감염증을 예방 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다. 본 발명에서, 새우 등에 대한 흰반점 바이러스에 의한 감염을 예방 및 치료하기 위한 목적으로 공급되는 식물추출물의 혼합물은 사료 1톤당 100 내지 1,000 g로 포함될 수 있다.
본 발명의 일 예에서, 본 발명자들은 꽃새우와 한국의 토종 민물새우인 징거미 새우를 대상으로, 이들 새우에 WSSV를 감염시킨 다음, 식물추출물 혼합물의 바이러스 억제 활성을 확인한다. 구체적으로, 본 발명에서 새우를 감염시키는데 사용한 바이러스는, WSSV에 감염된 흰다리 새우로부터 분리한 것을 이용한다. 상기 흰다리 새우로부터 분리한 바이러스를 꽃새우 또는 징거미 새우에 주사기로 접종하여 감염시킨다. 새우를 감염시키기 위한 WSSV 접종량은 5.8 X 103 copy/㎖ 이고, 새우 1 g당 바이러스 100 ㎕를 접종하며, 이는 새우의 누적 폐사율이 약 80%에 이르는 수준의 바이러스 양이다. 식물추출물 혼합물의 바이러스 억제 활성을 확인하기 위해, WSSV 접종 전부터 본 발명의 식물추출물의 혼합물을 일반 새우사료와 함께 공급한다.
본 발명의 다른 일 예에서, 식물추출물의 혼합물은 시판 중인 새우사료와 함께 코팅하여 이용할 수 있다. 본 발명에서, 징거미 새우에 대한 항바이러스 활성은 추출물을 코팅하여 사용한 반면, 꽃새우에 대한 항바이러스 활성은 상기 추출물의 혼합물을 코팅하지 않은 상태로 사용하였다. 식물추출물 혼합물을 코팅처리 한 것은 추출물 특유의 향을 차단함으로써, 새우 등의 섭식을 현저히 개선할 수 있다.
코팅의 방법으로는 폴리비닐알코올 (Sigma, P8136)에 항바이러스 추출물을 7:1 ~ 11:1의 비율로 혼합한 후 일반사료 (대하플러스 4호, 우성사료)에 코팅한 후 건조기에 1일 내지 2일 동안 건조시킨다. 완전히 건조된 상태에서 에틸 셀룰로오스 (Duksan, 5148)를 알코올과 아세톤의 혼합용액에 완전히 용해시킨 후 항바이러스 추출물이 코팅된 일반사료 총 중량의 5 ~ 15%를 분사해 코팅시킬 수 있다. 2단계의 코팅처리를 하면 상기 식물추출물 혼합물 특유의 향을 완전히 차폐할 뿐만 아니라 사료의 안정성을 향상시키는데 도움을 줄 수 있다.
본 발명의 일 예에서, 본 발명의 항바이러스 활성을 갖는 식물추출물의 혼합물은 바이러스 억제 활성이 요구되는 제품으로서, 사료첨가제 조성물, 화장료 조성물, 또는 소독제조성물 등의 제조에 사용될 수 있다. 소독제 조성물로 사용되는 경우, 약리학적, 수의학적 또는 농학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함께 포함할 수 있음은 물론이다.
본 발명에서 꽃새우 (Trachypenaeus curvirostris)와 징거미새우 (Macrobrachium nipponense)를 사용하고, 실험실에서 7종의 식물추출물 혼합물에 대해 효용성 평가를 실시하였으며, 그 결과 공격접종군 대비 60% 이상의 상대생존율을 확인하였다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 식물추출물 혼합물은 새우사료와 함께 이용함으로써 새우에 대한 흰반점 바이러스 감염을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다. 또한, 본 발명의 식물추출물 혼합물은 폴리비닐알코올로 1차 코팅한 후 에틸 셀룰로오스로 2차 코팅하여 제조될 수 있으며, 이는 식물추출물 특유의 냄새를 차폐하여 새우의 섭식을 개선할 수 있다.
도 1은 본 발명에서 사용한 꽃새우 (Trachysalambria curvirostris)의 사진이다.
도 2는 본 발명에서 사용한 징거미새우 (Macrobrachium nipponense)의 사진이다.
도 3은 본 발명의 식물추출물 혼합물의 코팅 전후를 비교한 사진이다.
도 4는 본 발명의 식물추출물 혼합물을 이용한 항바이러스 활성 실험에서, 흰반점 바이러스에 감염된 꽃새우의 상대적 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 식물추출물 혼합물을 이용한 항바이러스 활성 실험에서, 흰반점 바이러스에 감염된 징거미 새우의 상대적 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 6은 PCR을 이용한 WSSV 감염여부를 확인한 것으로서, 레인 1 및 2 는 WSSV를 징거미 새우에 접종한 군이고, 레인 3 및 4는 WSSV 접종 전 개체군이다.
도 7은 WSSV 공격접종 후 징거미 새우의 WSSV 감염여부를 PCR로 확인한 것으로서, 초기 (2 ~ 5일째), 중기 (6 ~ 10일 째), 및 후기 (11 ~ 14일 째)의 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에서 사용한 징거미새우 (Macrobrachium nipponense)의 사진이다.
도 3은 본 발명의 식물추출물 혼합물의 코팅 전후를 비교한 사진이다.
도 4는 본 발명의 식물추출물 혼합물을 이용한 항바이러스 활성 실험에서, 흰반점 바이러스에 감염된 꽃새우의 상대적 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 식물추출물 혼합물을 이용한 항바이러스 활성 실험에서, 흰반점 바이러스에 감염된 징거미 새우의 상대적 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 6은 PCR을 이용한 WSSV 감염여부를 확인한 것으로서, 레인 1 및 2 는 WSSV를 징거미 새우에 접종한 군이고, 레인 3 및 4는 WSSV 접종 전 개체군이다.
도 7은 WSSV 공격접종 후 징거미 새우의 WSSV 감염여부를 PCR로 확인한 것으로서, 초기 (2 ~ 5일째), 중기 (6 ~ 10일 째), 및 후기 (11 ~ 14일 째)의 결과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 구체적인 실시예에 기초하여 보다 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 이에 제한되는 것으로 해석되는 것은 아니다.
실험 재료 및 실험 방법
공격접종용 흰반점 바이러스의 분리
WSSV 감염된 흰다리새우 (Litopenaues vannamei)에서 분리한 것을 사용하였고, 부경대학교 미생물학과로부터 입수하였고, Stock된 WSSV의 바이러스 역가 (titer)는 1.16 X 106 copy/㎖이다. TNE buffer(50mM Tris-HCl, 400mM NaCl, 5mM EDTA, 1mM proteinase inhibitor PMSF, PH 8.5)에 20배 희석하여 1 ㎖ (26 게이지) 주사기를 사용하여 새우 체중 1 g당 100 ㎕를 접종하였다. 새우에 접종된 WSSV의 최종농도는 새우 1 g당 5.8 X 103 copy/100 ㎕이며, 해당 바이러스는 징거미 새우에 공격접종 하였을 시 약 80% 폐사를 일으키는 양이다.
항바이러스성 식물추출물 혼합물 시료
아래 표 1의 식물추출물을 중앙백신연구소에서 분리 입수하였다. 상기 식물추출물은 각각 80 ~ 100% 에탄올을 사용하여 추출한 후 농축하였다. 이후 각 추출물을 물에 현탁한 후 각각 시료에 따라 EtOAC (에틸 아세테이트) 혹은 n-BuOH (부탄올)로 분획하여 식물추출액 원액을 제조하고 7종의 식물 추출물이 각각 1:1, 또는 1.0 ~ 1.5 : 1.0 ~ 3.0 상대 비율이 되도록 혼합하였다. 표 1은 실험에 사용한 식물종 및 추출조건을 나타내고, 표 2는 식물추출물의 상대적 중량비를 나타낸 것으로서, 다양한 중량비를 갖도록 제조하는 것이 가능하다.
| 추출물 | 학명 | 추출조건 |
| 관중 | Dryoperis crassirhizoma Nakai | 에틸아세테이트 |
| 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 | Cleistocalyx opercalatus | |
| 칠엽수 | Aesculus turbinata (horse chestnut) | |
| 감초 | Glycyrrhiza uralensis | |
| 울금 | Curcuma longa | |
| 백지 | Angelica dahurica | |
| 동백 | Camellia japonical | n-부탄올 |
| 식물추출물의 중량비 | 제조예 1 | 제조예 2 | 제조예 3 | 제조예 4 | 제조예 5 |
| 관중 | 1.0 | 1.0 | 1.5 | 1.5 | 3.0 |
| 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 | 1.0 | 1.5 | 1 | 2.0 | 1.0 |
| 칠엽수 | 1.0 | 1.0 | 1.5 | 1.5 | 3.0 |
| 감초 | 1.0 | 1.5 | 1 | 2.0 | 1.0 |
| 울금 | 1.0 | 1.0 | 1.5 | 1.5 | 3.0 |
| 백지 | 1.0 | 1.5 | 1 | 2.0 | 1.0 |
| 동백 | 1.0 | 1.0 | 1.5 | 1.5 | 3.0 |
항바이러스성 식물추출물 혼합물의 사용농도 설정
식물추출물 혼합물의 효용성을 평가하기 위해 폴리비닐알코올에 최대로 함유할 수 있는 농도를 설정하였다. 상기 폴리비닐알코올 대 식물추출물 혼합물은 최대 7:1 내지 11:1의 비율로 포함시킬 수 있었다.
꽃새우 및 징거미새우 입수
본 발명에서 실험에 사용된 새우는 WSSV 인공감염이 확인된 개체이다 (Experimental infection of white spot baculovirus in some cultured and wild decapods in Taiwan). 체중 약 2 ~ 3 g의 꽃새우 (Trachysalambria curvirostris)며, 약 500여 마리를 전라남도 해남에서 샘플링을 한 후, 21℃(±1℃)를 유지하면서 해수 순환시스템이 갖추어진 경상남도 통영 ㈜클로랜드로 옮겼다. 시험에 사용된 수조는 가로, 세로, 높이가 각각 60cm이며, 수조에 해수를 3분의 2가량 채운 후 온도 유지장치 (아마존, AH200)를 사용하여 수온을 21℃(±1℃) 유지하고, 시판 중인 새우사료 (대하플러스 4호, 우성사료)를 하루에 새우 평균 체중의 1%를 공급하면서 1주일 동안 변화된 환경에 안정화시켰다. 수조의 물은 상태를 모니터링하면서 1일 1회씩 물 총량의 1/3 ~ 1/4을 교체해 주었다. 도 1은 본 발명에서 사용한 꽃새우의 사진이다.
징거미 새우 (Macrobrachium nipponense)는 한국 토착형 민물새우로서 WSSV에 대한 인공감염이 확인된 개체이다 (Artificial infection of native Korean freshwater shrimp with white spot syndrome virus). 중량 약 2 ~ 4 g의 징거미 새우 약 500여 마리를 전라북도 무주에서 샘플링 하였으며, 상온 21℃ (±1℃)를 유지하면서 무주 시험장으로 옮겼다. 시험에 사용된 수조는 가로, 세로, 높이가 각각 60cm이며, 수조에 담수를 3분의 2 가량 채운 후 온도 유지장치 (아마존, AH200)를 사용하여 수온을 21℃ (±1℃)로 유지하고, 시판 중인 새우사료 (대하플러스 4호, 우성사료)를 하루에 새우 평균 체중의 1%를 공급하면서 1주일 동안 변화된 환경에 안정화시켰다. WSSV 공격접종 전 새우가 최적의 건강상태를 유지하도록 하기 위해 수온을 21℃(±1℃)로 유지하였다. 이는 WSSV의 복제가 20 ~ 25 ℃ 내외에서 이루어지는 것을 고려한 것이다. 물의 상태를 모니터링하면서 1일 1회씩 물 총량의 1/3 ~ 1/4을 교체해 주었다. WSSV 공격접종 1주일 전부터 식물추출물 혼합물이 포함된 새우사료를 새우 평균 체중의 1% 양으로 공급하였다. 도 2는 본 발명에서 사용한 징거미 새우의 사진이다.
새우에 대한 WSSV 공격접종
WSSV 공격접종은, 1 ㎖ 주사기 (바늘직경 26G)를 사용하여 꽃새우와 징거미 새우를 각각 감염시키는 것으로 수행하였다. 주입한 WSSV의 바이러스 역가는 1.16 X 106 copy/㎖ 였으며, TNE 완충액 (50 mM Tris-HCl, 400 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1 mM 단백질분해효소 저해제 PMSF, pH 8.5)에 20배 희석하고 1 ml 주사기를 사용하여 새우 중량 1 g당 100 ㎕를 접종하였다. 새우에 접종된 WSSV의 최종농도는 새우 1 g당 5.8 X 103 copy/㎖였으며, 이는 징거미 새우에 공격접종 했을 때 약 80% 폐사를 일으키는 양이다.
실험예
실험예 1: WSSV 공격접종
각 수조 당 50마리 이상의 꽃새우 또는 징거미 새우를 각각 투입하고, 7일간 일반 사료 (대하플러스 4호, 우성사료)를 공급하여 환경에 적응시켰다. 7일 후, 각 수조에서 생존 중인 새우의 마리 수를 확인하고, 생존한 새우의 체중을 측정하였다. 공격접종용 WSSV는 1.16 X 106 copy/㎖로 stock 되었으며, 이를 TNE 완충액으로 20배 희석한 WSSV를 새우 1 g 당 100 ㎕를 사용하였으며, 새우의 배다리 상단과 가슴다리 하단 부위에 1 ㎖ 주사기 (바늘 직경 26G)로 주입하였다. 주사기 바늘은 1/3 이상이 들어가지 않도록 하였다. 시험군과 공격접종 대조군 (양성대조군) 모두 같은 방법으로 WSSV를 투여했다. 음성대조군에는 TNE 완충액만을 새우 1g당 100 ㎕ 투여했다. 모든 시험군, 양성대조군, 음성대조군은 접종 후 14일간 관찰하였다. 꽃새우와 징거미 새우를 키우는 공간에는 물을 정화시킬 수 있는 필터, 포기 스톤 (aeration stone)을 넣고 물을 순환시켜 내부의 이물질을 제거하였다. 2 ~ 3일 한번씩 물 총량의 1/3 ~ 1/4을 교체하였다.
실험예 2:
식물추출물 혼합물을 포함한 새우용 사료 제
조
식물추출물 혼합물 특유의 성분이 섭식정도에 미치는 영향을 차폐시키기 위한 방안이 필요하였다. 상기 식물추출물 혼합물의 섭식력을 높이기 위해 폴리비닐알코올 (Sigma, P8136) 대 식물추출물 혼합물 비율을 7:1 내지 11:1로 혼합하여 일반사료 (대하플러스 4호, 우성사료)에 코팅한 후, 상기 식물추출물 혼합물이 물에 바로 용해되지 않도록 하기 위해 에틸 셀룰로오스 (Duksan, 5148)로 2차 코팅하여 식물추출물 혼합물이 물에 천천히 용해되어 시험용 새우가 상기 식물추출물 혼합물로 인한 영향을 최소화하여 잘 섭식시키도록 하였다. 폴리비닐알코올 용액은 1,000 ㎖의 정제수 또는 주사용수에 폴리비닐알코올 100 g을 녹여 제조하였다. 에틸 셀룰로오스 용액은 250 ㎖ 아세톤과 250 ㎖의 100% 알코올에 49.5 g의 에틸 셀룰로오스를 녹여 제조하였다. 폴리비닐알코올 용액과 식물추출물 혼합물은 7:1 내지 11:1의 비율로 섞어 사료 총 중량의 10%를 넣어 코팅하여 24 ~ 25℃가 유지되는 건조기를 사용하여 하루 동안 완전히 건조 시킨 후 에틸 셀룰로오스 용액을 1차 코팅된 사료 총 중량의 10%를 넣어 2차 코팅이 될 수 있도록 하였다.
상기 수득한 코팅된 본 발명의 새우사료는 식물추출물 혼합물이 갖는 특유의 향을 거의 차단할 수 있었다. 다음, 상기 코팅된 새우사료를 새우가 잘 섭취하는 지 여부를 확인하였다. 이를 위해, 하루 동안 사료를 공급하지 않은 징거미 새우를 대상으로, 새우의 활동력이 왕성한 저녁시간 (오후 6 ~ 7시)에 상기 코팅된 새우사료를 새우 총 중량의 1%를 투입하였다. 그 결과, 공급한 새우사료를 1일째 약 1/3, 2일째 약 1/2 섭취하였다. 7일간 계속하여 관찰한 결과, 상기 코팅된 새우사료를 하루 평균 약 1/2 이상 매일 섭취한 것이 확인되었다. 이는 일반사료와 비교해도 매우 우수한 섭취량이었다.
실험예 3: 징거미 새우의 WSSV 감염 확인
새우에서 WSSV의 감염확인은 징거미 새우의 폐사를 통해 확인하였다. 새우의 폐사 원인이 WSSV로 인한 것인지 여부를 확인하기 위해, PCR (Polymerase chain reaction)을 수행하였다.
PCR 수행을 위해 먼저 DNA를 추출하였다. 새우의 아가미, 몸체, 배다리로부터 추출액을 수득하고, 이를 버퍼 없이 직접 균질화 한 후 1.5 ml 튜브에 넣었다. 500 ㎕ 추출 버퍼 (400 mM NaCl, 20 mM Trizma base, 5 mM EDTA, 1% SDS, PH 8.0)를 사용하여 2차 균질화 하였다. 다음, 500 ㎕의 PCI (phenol: chroloform: isoamylalcohol)를 상기 균질화된 추출액에 가하고 잘 섞어주었다. 15,800 x g (약 12,000 rpm)으로 5분간 원심분리 한 후, 상층액을 1.5 ㎖ 튜브에 옮기고, 3 M NaOAC (0.1 vol)와 100% 에탄올 (2 vol)을 첨가하였다. 다시 잘 섞은 후, -80 ℃에서 10분간 보관하였다. 다음, 18,506 X g로 30분간 원심분리한 후, 상층액을 제거한 후 실온에서 1 ~ 2분간 건조하였다. 수득한 DNA 펠릿을 20 ~ 50 ㎕의 용출 완충액에 재현탁했다. WSSV-F 프라이머 (서열번호 1: 5'-CTTTCACTTTCGGTCGTGTC-3')과 WSSV-R 프라이머 (서열번호 2: 5'-TACTCGGTCTCAGTGCCAGA-3'), 및 타겟팅 된 WSSV vp28 유전자 (604 bp)을 사용하였다. 상기 프라이머 각 1 pmol, DNA 추출물 1 ㎕ 및 증류수 7 ㎕를 사용하고, 변성 (95.0 ℃), 어닐링 (57.0 ℃), 및 길이연장 (elongation) (72.0 ℃) 조건으로 35 사이클을 반복하여 PCR을 수행하였다.
WSSV 공격접종 전 징거미 새우를 샘플링하고, PCR로 WSSV 감염여부를 확인하였다. WSSV에 대한 PCR 생성물의 크기는 604 bp였으며, 이를 통해 접종 전 징거미 새우는 WSSV에 감염되지 않았음을 확인하였다. 도 6에서, 레인 1 및 2는 WSSV를 징거미 새우에 접종한 군이고, 레인 3 및 4는 WSSV 접종 전 새우에 대한 것이다. 또한, WSSV 공격접종 후, 식물추출물 혼합물 초기투입 (2 ~ 5일째), 중기투입 (6 ~ 10일째), 및 후기투입된 징거미 새우를 (11 ~ 14일째) 각각 샘플링하여, WSSV로 인한 감염여부를 확인하였다. 식물추출물 혼합물을 투입하여도 새우에 복제되어 있는 WSSV는 더 이상 증폭되지 않고 14일간 유지되는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 식물추출물 혼합물이 WSSV 증식을 억제시키는 것으로 예상할 수 있다. 도 7은 그 결과를 나타낸다.
실험예 4: WSSV 공격접종 전후 폐사율 및 생존율
(1) 7종의 식물추출물 혼합물에 대한 꽃새우의 상대 생존율
WSSV 접종 전까지 생존 한 새우는 환경에 잘 적응한 개체로 판단하여 5.8 X 103 copy/㎖의 WSSV를 시험 새우 체중 1 g당 100 ㎕ 접종하고 14일간 관찰하였다. 그 결과 양성 대조군 (WSSV 접종, 일반사료 공급)에서의 누적 폐사율이 62.50%로 가장 높았으며, 본 발명의 식물추출물 혼합물의 누적 폐사율이 9.52% 내지 27.78% 이었다. 공격접종 1일차에 폐사한 시험군은 시험 결과에서 제외했다. 표 1 및 표2의 식물추출물 혼합물을 각각 포함하는 새우 사료를, WSSV 접종 전에 7일간 투입한 다음 WSSV를 접종하였으며, 접종 후에도 상기 식물추출물 혼합물을 포함하는 새우사료를 계속하여 공급하였다.
또한, WSSV 접종 후 14일간 꽃새우의 누적폐사량을 통해 상대생존율을 계산하여 식물추출물 혼합물의 항바이러스 효능을 4회 반복 평가하였다. 표 2의 제조예에 따른 비율을 갖는 각 혼합물에 대해 5회 실험한 평균 값을 도 4에 나타냈다. 그 결과 누적 폐사율 대비 상대 생존율이 평균 약 76%를 넘어 상기 식물추출물 혼합물에 대한 영향으로 폐사율이 현저히 감소한 것이 확인되었다. 상대 생존율이란 [1-(식물추출물 혼합물 그룹의 누적 폐사량 %/양성 대조군의 누적 폐사량 %)]X100 이다.
(2) 7종의 식물추출물 혼합물에 대한 징거미새우의 상대 생존율
본 실험예의 상기 (1)과 마찬가지로, WSSV 공격접종 전 생존한 새우의 초기 투입 수 대비 새우의 누적 폐사율을 제외하고, WSSV 공격접종 전까지 생존 한 새우는 환경에 적응한 개체로 판단하여 5.8 X 103 copy/㎖의 WSSV를 시험 새우 체중 1 g당 100 ㎕를 접종하고 14일간 관찰하였다. 그 결과 양성 대조군 (WSSV 접종, 일반사료 공급)에서의 누적 폐사율이 80.00%로 가장 높았으며, 식물추출물 혼합물의 누적 폐사율은 22.86% 내지 24.12%로 확인되었다. 시험 결과에서 공격접종 1일차에 폐사한 시험군은 시험 결과에서 제외했다. 표 1의 식물추출물 혼합물을 각각 포함하는 새우 사료를, WSSV 접종 전에 7일간 투입한 다음 WSSV를 접종하였으며, 공격 접종 후에도 상기 식물추출물 혼합물을 포함하는 새우사료를 계속하여 공급하였다. 이때 투입된 사료는 폴리비닐알코올 용액과 상기 식물추출물 혼합물을 7:1 ~ 11:1의 비율로 섞어 사료 총 중량의 약 10%를 넣어 코팅하여 24 ~ 25℃가 유지되는 건조기를 사용하여 하루 동안 완전히 건조 시킨 후 에틸 셀룰로오스 용액을 1차 코팅된 사료 총 중량의 약 10%를 넣어 2차 코팅이 된 사료를 사용하였다. 또한, WSSV 접종 후 14일간 징거미 새우의 누적폐사율을 통해 상대생존율을 계산하여 식물추출물 혼합물의 항바이러스 효능을 4회 반복 평가하였다. 표 2의 제조예에 따른 비율을 갖는 각 혼합물에 대해 4회 실험한 평균 값을 도 4에 나타냈다. 그 결과 본 발명의 식물추출물 혼합물의 상대 생존율이 약 71%를 넘었으며, 상기 식물추출물 혼합물에 대한 영향으로 폐사율이 현저히 감소한 것이 확인되었다. 상대 생존율이란 [1-(식물추출물 혼합물 그룹의 누적 폐사량 %/양성 대조군의 누적 폐사량 %)]X100 이다.
(3) 식물추출물 혼합물 코팅농도에 대한 징거미새우의 상대 생존율
식물추출물 혼합물의 농도를 달리하면서 농도별 상대 생존율을 확인하였다.
본 실험예의 상기 (1)과 마찬가지로, WSSV 공격접종 전 생존한 새우의 초기 투입 수 대비 새우의 누적 폐사율을 제외하고, WSSV 공격접종 전까지 생존 한 새우는 환경에 적응한 개체로 판단하여 5.8 X 103 copy/㎖의 WSSV를 시험 새우 체중 1 g당 100 ㎕를 접종하고 14일간 관찰하였다. 그 결과 양성 대조군 1 (WSSV 접종, 일반사료 공급)에서의 누적 폐사율이 68.00%로 가장 높았으며, 식물추출물 혼합물은 30 ~ 300 ㎎/㎖ 농도에서 가장 낮은 누적 폐사율을 보였으며 이 범위를 벗어난 경우 양성대조군 수준 이상으로 폐사율이 증가하였다.
본 발명은, 갑각류에 감염시 심각한 손해를 초래할 수 있는 흰점 바이러스에 활성이 있는 항바이러스 물질을 제공한다. 따라서, 본 발명은 새우를 포함한 갑각류 양식장에 널리 활용될 수 있을 것이다.
<110> Choong Ang Vaccine Lab.
<120> A composition having antiviral activity for white spot syndrome
virus
<130> CVA17P-0008-KR
<160> 2
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> WSSV-F primer
<400> 1
ctttcacttt cggtcgtgtc 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> WSSV-R primer
<400> 2
tactcggtct cagtgccaga 20
Claims (17)
- 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 추출물의 혼합물을 포함하는, 흰반점 바이러스 (White spot syndrome virus)에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하기 위한 조성물.
- 제 1항에 있어서,
상기 식물추출물의 혼합물은 관중추출물 : 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 추출물 : 칠엽수 추출물 : 감초 추출물 : 울금 추출물 :백지 추출물 : 동백 추출물 = 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0의 중량비를 갖는 것을 특징으로 하는, 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하기 위한 조성물. - 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 추출물의 혼합물이 상기 조성물을 기준으로 30 ~ 300 ㎎/㎖ 포함된 것을 특징으로 하는, 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하기 위한 조성물. - 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 추출물의 혼합물이 고분자 물질로 코팅된 것을 특징으로 하는, 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하기 위한 조성물. - 제 4항에 있어서,
상기 코팅이 친수성 고분자에 의한 1차 코팅 및 비친수성 고분자에 의한 2차 코팅으로 구성된 것을 특징으로 하는, 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하기 위한 조성물. - 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 갑각류가 새우인 것을 특징으로 하는, 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하기 위한 조성물. - 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물을 이용하여 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료 또는 예방 빛 치료하는 방법.
- 제 7항에 있어서,
상기 식물추출물의 혼합물은 관중추출물 : 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 추출물 : 칠엽수 추출물 : 감초 추출물 : 울금 추출물 :백지 추출물 : 동백 추출물 = 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0의 중량비를 갖는 것을 특징으로 하는, 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료 또는 예방 빛 치료하는 방법. - 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 추출물의 혼합물과 고분자물질의 혼합용액을 제조하고.
상기 혼합용액을 사료와 혼합한 후 건조하여, 상기 혼합물과 사료가 고분자 물질로 코팅된 사료 조성물을 수득하며,
상기 사료 조성물을, 흰반점 바이러스에 의한 감염을 예방, 치료 또는 예방 및 치료가 필요한 갑각류에 피딩 (feeding) 하는 것을 포함하여,
흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료 또는 예방 및 치료하는 방법. - 제 9항에 있어서,
상기 식물추출물의 혼합물은 관중추출물 : 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스 추출물 : 칠엽수 추출물 : 감초 추출물 : 울금 추출물 :백지 추출물 : 동백 추출물 = 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0 : 1.0 ~ 3.0의 중량비를 갖는 것을 특징으로 하는, 흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료 또는 예방 및 치료하는 방법. - 제 9항에 있어서,
상기 코팅이 친수성 고분자에 의한 1차 코팅 및 비친수성 고분자에 의한 2차 코팅으로 구성된 것을 특징으로 하는,
흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료 또는 예방 및 치료하는 방법. - 제 7항 또는 제 8항에 있어서,
상기 추출물의 혼합물이 상기 조성물을 기준으로 30 ~ 300 ㎎/㎖ 포함된 것을 특징으로 하는,
흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료 또는 예방 및 치료하는 방법. - 제 9항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 추출물의 혼합물이 상기 조성물을 기준으로 30 ~ 300 ㎎/㎖ 포함된 것을 특징으로 하는,
흰반점 바이러스에 의한 갑각류의 감염을 예방, 치료 또는 예방 및 치료하는 방법. - 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 추출물의 혼합물을 포함하는, 흰반점 바이러스에 의해 유발된 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 추출물의 혼합물을 포함하는, 흰반점 바이러스에 의해 유발된 질환의 예방 또는 개선용 사료첨가제 조성물.
- 삭제
- 관중, 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스, 칠엽수, 감초, 울금, 백지 및 동백 추출물의 혼합물, 및 약리학적, 수의학적 또는 농학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는, 흰반점 바이러스에 대한 억제 활성을 갖는 소독제 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170022579A KR101934350B1 (ko) | 2017-02-20 | 2017-02-20 | 흰반점 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170022579A KR101934350B1 (ko) | 2017-02-20 | 2017-02-20 | 흰반점 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20180096201A KR20180096201A (ko) | 2018-08-29 |
| KR101934350B1 true KR101934350B1 (ko) | 2019-01-02 |
Family
ID=63434657
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020170022579A KR101934350B1 (ko) | 2017-02-20 | 2017-02-20 | 흰반점 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101934350B1 (ko) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107260948A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-10-20 | 宁国市仙之居家庭农场 | 一种白米虾养殖用的中药饲料添加剂及制备方法 |
| KR101989349B1 (ko) * | 2018-03-12 | 2019-06-14 | 강릉원주대학교 산학협력단 | 동백나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 바이러스 감염 예방 및 치료용 약학적 조성물 |
| KR102142887B1 (ko) * | 2018-09-11 | 2020-08-10 | 동의대학교 산학협력단 | 새우용 사료첨가제 조성물 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100573759B1 (ko) | 2004-11-03 | 2006-04-24 | 주식회사 베터앤베터 | 흰반점증후군바이러스에 대한 면역증강효과를 갖는 동물사료 첨가제 |
| KR101021830B1 (ko) | 2010-08-17 | 2011-03-17 | 주식회사 중앙백신연구소 | 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스로부터 얻은 조류, 돼지 인플루엔자 및 신종플루에 대한 항바이러스제 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100561666B1 (ko) | 2003-04-10 | 2006-03-15 | 에스케이 텔레콤주식회사 | 번호용량 확장 호 접속 시스템 및 방법 |
| JP2005348668A (ja) | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Shimano Inc | トレブルフック |
| US7536408B2 (en) | 2004-07-26 | 2009-05-19 | Google Inc. | Phrase-based indexing in an information retrieval system |
| KR20140128540A (ko) | 2013-04-26 | 2014-11-06 | 주식회사 유비유이노베이션 | RFID Active 태그를 활용한 실시간 자산관리 및 보안관리 시스템, 및 방법 |
-
2017
- 2017-02-20 KR KR1020170022579A patent/KR101934350B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100573759B1 (ko) | 2004-11-03 | 2006-04-24 | 주식회사 베터앤베터 | 흰반점증후군바이러스에 대한 면역증강효과를 갖는 동물사료 첨가제 |
| KR101021830B1 (ko) | 2010-08-17 | 2011-03-17 | 주식회사 중앙백신연구소 | 크레이스토카릭스 오페르쿠라투스로부터 얻은 조류, 돼지 인플루엔자 및 신종플루에 대한 항바이러스제 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 동의대학교, "새우류의 흰반점증후군바이러스(WSSV)에 대한 저항성물질 개발", 2005, 해양수산부 보고서 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20180096201A (ko) | 2018-08-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210046131A1 (en) | Wide-spectrum salmonella phage and application thereof | |
| Duarte et al. | New insights on phage efficacy to control Aeromonas salmonicida in aquaculture systems: An in vitro preliminary study | |
| CN112029732A (zh) | 一种耐高温宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及其组合物 | |
| KR101335825B1 (ko) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 | |
| KR101934350B1 (ko) | 흰반점 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는 조성물 | |
| CN113201505B (zh) | 一株具备跨种裂解能力的溶藻弧菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用 | |
| US20140105866A1 (en) | Bacteriophages useful for the prophylaxis and therapy of vibrio anguillarum | |
| CN111110718B (zh) | 一种对虾肝肠胞虫专杀药物及其制备方法与应用 | |
| CN109602779B (zh) | 一种中药组合物及其在制备防治石斑鱼虹彩病毒病药物中的应用 | |
| CN104887843A (zh) | 用于防治鱼类烂鳃性疾病的中药药物组合物及其制备方法 | |
| Citarasu et al. | Effect of wood apple Aegle marmelos, Correa (Dicotyledons, Sapindales, Rutaceae) extract as an antibacterial agent on pathogens infecting prawn (Penaeus indicus) larviculture | |
| CN111676197A (zh) | 一株哈维氏弧菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用 | |
| CN111363723A (zh) | 新型霍乱弧菌噬菌体及其应用 | |
| KR102371062B1 (ko) | 새우 양식용 사료 첨가제 조성물 및 그 제조방법 | |
| WO1998042204A1 (fr) | Agent prophylactique et therapeutique contre les maladies infectieuses chez les poissons et les crustaces | |
| CN115247154B (zh) | 一株鸭源魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13、其噬菌体组合物及其应用 | |
| Jha et al. | Efficacy of Doob grass, Cynodon dactylon against white spot syndrome virus in Penaeus monodon | |
| US20070218036A1 (en) | Method For The Prevention Of Infection With Nodavirus And Method For The Treatment Thereof | |
| CN115181731B (zh) | 一株坎贝氏弧菌噬菌体、制备方法及其应用 | |
| CN115247155B (zh) | 一株美人鱼发光杆菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用 | |
| CN115216453B (zh) | 爱德华氏菌特异性噬菌体和其组合物及其应用 | |
| CN114848616B (zh) | 枯茗醛在制备白斑综合症病毒抑制剂方面的应用 | |
| JP4294326B2 (ja) | 魚介類の感染予防及び／又は治療剤 | |
| Maeda | Interactions of microorganisms and their use as biocontrol agents in aquaculture | |
| Novriadi et al. | Preliminary study: The use of herbal extracts against iridovirus in tiger grouper Epinephelus Fuscoguttatus culture |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |