KR101932766B1

KR101932766B1 - 덴드로븀 크리소톡숨 추출물 및 항노화제로서 이의 화장품학적 용도

Info

Publication number: KR101932766B1
Application number: KR1020110090611A
Authority: KR
Inventors: 비흐지니 레프랑쿠아이스; 빠뜨리스 앙드레; 비흐지니 페셰
Original assignee: 엘브이엠에이취 러쉐르쉐
Priority date: 2010-09-14
Filing date: 2011-09-07
Publication date: 2018-12-26
Also published as: CN102397184B; US10172785B2; US20120064021A1; CN102397184A; US20150359733A1; DE102011053521A1; ITTO20110816A1; JP2012067098A; FR2964567B1; FR2964567A1; GB2483766B; GB201115497D0; KR20120028238A; JP5900845B2; GB2483766A

Abstract

본 발명은 활성성분으로서 난초과 덴드로븀 크리소톡숨(Dendrobium chrysotoxum)으로부터 적어도 하나의 추출물 및 적어도 하나의 화장품학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함하는 화장품 조성물에 대한 것이다.
본 발명은 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하거나, 또는 이들의 효과를 지연하거나 또는 희석하기 위한, 또는 그렇지 않으면 세포나 조직의 생존성을 증진하기 위한 활성성분으로서 난초과 덴드로븀 크리소톡숨으로부터 추출물의 화장품 조성물에서의 사용에 대한 것이다.
본 발명은 특히는 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성을 저해하는 난초과 추출물에 대한 것이다.

Description

덴드로븀 크리소톡숨 추출물 및 항노화제로서 이의 화장품학적 용도{DENDROBIUM CHRYSOTOXUM EXTRACT AND ITS COSMETIC USE AS AN ANTI-AGING AGENT}

본 발명은 활성성분으로서 난초과 덴드로븀 크리소톡숨(고퇴석곡; Dendrobium chrysotoxum)으로부터 적어도 하나의 추출물 및 적어도 하나의 화장품학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함하는, 특히는 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하고, 이들의 효과를 지연하거나 또는 희석하기 위한, 또는 세포나 조직의 수명을 증진하기 위한 신규한 화장품 조성물에 대한 것이다.

피부 노화는 피부에서의 다수의 내재적인 변화 및 피부의 질과 미를 변형하는 관찰가능한 사인의 점진적인 발현을 그 스스로 나타낸다. 피부 조직은 거의 미세하지 않고 그리고 다양한 피부 손상을 전개한다.

세포질의 준위에서, 노화는 구조적 단백질(콜라겐, 엘라스틴)의 생합성을 늦추는 것과 같이 생물학적인 메카니즘에서 점진적인 퇴화를 초래한다.

프로그램된 세포사의 일종인 어팝토시스는 분획화에 의해 그리고 유전적인 조절 하에서 신체로부터 세포 제거의 활성적인 생물학적 과정이다.

이 제거는 자연적일 수 있으며(조직에서의 과잉의 세포) 또는 다양한 스트레스에 의해 유도되어 질 수 있다.

어팝토시스의 생물학적인 케스케이드(cascade)는 공지되어 있으며, 그리고 카스파제 과의 프로테아제와 같은 다수의 이펙터 역할을 한다.

어팝토시스 저해제(Inhibitors of apoptosis; IAP)는 프로-카스파제의 활성화를 차단하고 그리고 성숙 카스파제의 활성을 저해하는 기능을 가지는 것으로 알려져 있어, 어팝토시스의 현상을 늦추는 결과를 가진다 (Deveraux et al , Genes Dev. 13 (1999), pp . 239-252).

IAP 중에서, 동시적으로 세포의 어팝토시스를 조절하고 그리고 이들의 세포 주기를 제어할 수 있는 이기능성의 단백질인, 서바이빈(survivin)을 언급할 수 있다.

서바이빈은 이 어팝토시스 현상을 유도할 수 있는 스트레스에 대해 케라티노사이트의 저항 및 생존의 제어자이다. 이것은 또한 표피의 재생 및 갱생에 대한 이들의 능력을 조절한다. 따라서 이것은 표피의 세포질 캐피탈을 세이브하고 그리고 유효한 세포 재생을 유지하는 것을 가능하게 한다(Dallaglio , et al ., Experimental Dermatology , 18 (5) 464-72).

서바이빈의 생성은 어팝토시스 동안 유리된 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO (Second Mitochondrial Activator of Caspases or Direct IAP Binding Protein with Low pI)에 의해 타이트하게 조절되어 진다.

29 kDa 전구체의 형태로 합성된 이 단백질, Smac/DIABLO은 미토콘드리아의 위치 신호를 가지는 그의 N-말단 도메인에 의하여 미토콘드리온에 이전 위치되어 진다. 이 전구체는 그런 다음 단리하여 23 kDa 성숙 단백질로 된다 (Zhang et al , Acta Biochim . Biophys . Sin . 2007, 39 (2), 108-116).

UV 조사 또는 ROS와 같은 프리 라디칼은 피부에서 세포 스트레스를 유도하고 이 스트레스는 피부 노화에 포함되어 진다는 것이 공지되어 있다.

UV 조사 또는 반응성 산소종(ROS)과 같은 자극에 반응하여, 성숙 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO는 이것이 IAP의 저해제로서 작용하는 세포 시토졸 안으로 유리되어 진다. 다이머의 형태에 있어서, 이것은 IAP에 결합하고 그리고 따라서 카스파제의 비활성화를 차단한다 (Kurita - Ochiai T. et al , J. Dent . Res . 2010, 89(7), 689-694).

유사하게, 이들 동일한 자극에 대한 반응에 있어서, Smac/DIABLO의 감소된 생산은 동시적으로 세포의 수명을 증가하는 서바이빈의 과발현을 하는 것이 입증되어 졌다 (Aziz MH 　. et al , Photochem . Photobiol . 2005, 81(1), 25-31).

따라서, 보다 효과적으로 피부 노화에 대처하기 위하여, 표피의 세포에서 이 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성을 유의적으로 감소할 수 있는 하나 또는 그 이상의 다른 활성 제제를 화장품에서 이용할 수 있게 하고, 그리고 UV 조사 또는 프리 라디칼에 의해 유도된 스트레스에 대한 세포 반응성을 개선하고 그리고 세포의 생존성을 증진하는 방식으로 IAP가 카스파제를 저해하는 것을 가능하게 하는 것이 특히 흥미로운 것이다.

그러나, 지금까지 화장품에 적용을 위한 이러한 제제는 결코 기술되어 지지 않았다.

따라서 난초과 추출물, 그리고 더욱 특히는 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 추출물이 단백질 smac/DIABLO의 발현에 대해 이러한 저해적인 효과를 나타내는 것이 입증된 것은 매우 놀라운 것이다.

난초과 중에서, 덴드로븀 속에 속하는 몇몇의 종이 전통적인 한약으로 알려져 있다. 그러나, 이것은 사용된 줄기 또는 잎의 추출물이다 (Gutierrez RMP , J. Med. Plant Res ., 2010, 4 (8), 592-638).

특히, 엘리아닌(erianin)은 덴드로븀 크리소톡숨의 줄기의 추출물로부터 분리되어 진( NG et al , Life Science , 2000, 66 (8), 709-23), 항산화 활성이 랫트에서 입증되어 진 화합물이다.

지금까지, 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 추출물에 대한 특정한 활성이 입증되어 진 것은 전혀 없다.

본 발명의 주요 목적은 신규한 화장품 조성물, 특히는 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하거나, 또는 이들의 효과를 지연하거나 또는 희석하기 위한, 또한 세포나 조직의 생존성을 증진하기 위한 신규한 화장품 조성물을 제공하기 위한 것으로, 이 활성은 특히 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성의 저해에 의해 얻어진다.

또한, 본 발명의 목적은 상기 화장품 조성물을 사용하는 화장 케어 방법을 제공하기 위한 것을 그 목적으로 한다.

본 발명의 목적은 또한 피부에서 그리고 특히는 표피에서 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성을 감소하는 새로운 식물 유래의 추출물을 제공하기 위한 것이다.

마지막으로, 본 발명의 목적은 산업적인 스케일, 특히는 화장품 산업에서 사용될 수 있는 전반적인 기술적인 문제점을 간단하고 상대적으로 낮은 비용의 해결책에 의해 해결하기 위한 것이다.

본 발명의 발명자 등은 여기서 적어도 하나의 종 덴드로븀 크리소톡숨의 난초과 추출물로 정상인의 케라티노사이트(NHK)의 처리는 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성에서의 유의적인 감소를 유도한다는 것을 입증하였다.

상기 단백질의 발현 및/또는 활성의 이 저해 효과는 IAP에 의해 이들의 세포 주기의 조절 및 세포의 아팝토시스의 제한의 보다 강력한 활성을 초래한다.

따라서, 본 발명의 제일의 측면에 따르면, 본 발명은 상기 추출물을 포함하는 화장품 조성물 및 본 발명에 따른 조성물의 유효량을 관련 신체 또는 얼굴의 피부 일 부분에 적용하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장품학적 또는 피부학적인 케어 방법에 대한 것이다.

본 발명의 제이의 측면에 따르면, 본 발명은 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하거나, 또는 이들의 효과를 지연하거나 또는 희석하기 위한, 또는 그렇지 않으면 세포나 조직의 생존성을 증진하기 위한, 특히는 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성의 저해하는(본 발명의 추출물) 난초과 추출물, 특히는 덴드로븀 크리소톡숨 종의 추출물, 및 화장품이나 피부학적 조성물에서 활성 제제로서의 이들의 용도에 대한 것이다.

상기와 같이 구성되는 본 발명의 덴드로븀 크리소톡숨 추출물 및 항노화제로서 이의 화장품학적 용도는 상기한 본 발명의 목적을 효과적으로 달성할 수 있게 하여 종래의 문제점을 해결하였다.

도 1은 본 발명의 실시예 1에서 제조된 추출물의 하나(S-1 내지 S-4)로 정상 인간 케라티노사이트(NHK)의 처리 후 그리고 용매 대조군(T-SO) 및 양성 대조군 (T+)과 비교하여, 면역-효소적 방법에 의해 측정된, 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 준위(pg/㎍ 전체 단백질로 표시됨)를 나타낸다. 나타난 백분율은 용매 대조군(T-SO)에 대한 저해 백분율에 상당한다.

본 발명의 제일 측면은 활성 제제로서 적어도 하나의 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 추출물과 적어도 하나의 화장품학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함하는 화장품 조성물에 대한 것이다.

화장품 조성물은 더욱 특히는 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하거나, 또는 이들의 효과를 지연하거나 또는 희석하기 위한, 또는 그렇지 않으면 세포나 조직의 생존성을 증진하기 위한 것이다.

본 발명의 추출물은 유익하기로는 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성을 저해한다.

식물 물질은 바람직하기로는 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃만으로 이루어 진다. 그러나, 본 발명은 또한 본 발명의 추출물과, 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 다른 부분의 추출물, 바람직하기로는 본 발명의 추출물과 같은 조건하에서 제조된 것 또는 이들 추출물의 하나로부터 분리된 화합물과의 조합에 대한 것이다.

본 발명의 추출물은 이 기술 분야의 통상인에게 공지된 다른 추출 공정에 의하여 제조되어 질 수 있다.

유익하기로는, 이 추출물은 극성 용매 또는 극성 용매의 혼합물의 수단에 의해 얻어진다.

극성 용매로서, 용매 또는 용매의 혼합물은 물, C₁-C₄ 알코올, 예를 들어 에탄올, C₂-C₆ 글리콜, 바람직하기로는 글리세롤, 부틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜로부터 선택된 것, 또는 그렇지 않으면 이들의 혼합물로부터 선택되어 진다.

바람직한 실시형태에 따르면, C₁-C₄ 알코올은 에탄올이다.

특히, 식물 물질은 적어도 50% v/v의 에탄올 그리고 100% v/v까지의 에탄올을 포함하는 용매의 수단에 의해, 만일 필요하다면 다른 극성 용매 그리고 특히는 물로 구성되는 균형을 가지고 추출되어 진다.

추출은 환류 하에서 고온에서 또는 그렇지 않으면 대류 온도에서 수행되어 질 수 있다.

본 발명의 바람직한 변형 형태에 따르면, 추출은 상기한 바와 같은 극성 용매 또는 극성 용매의 혼합물 안에 수 시간 동안 대류 온도에서 식물 물질의 침지에 의해 이루어진다.

일 실시형태에 따르면, 추출은 건조 추출이고, 가능하기로는 용액에서 이루어 진다.

추출 단계 그 자체에 앞서, 식물 물질은 건조되거나 및/또는 마쇄되거나 및/또는 탈지되어 진다.

추출물의 탈지는 예를 들어 C₆-C₇ 알칸과 같은 비극성 용매의 수단에 의해, 그렇지 않으면 가능하기로는 에탄올, 메탄올 또는 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이트(Mygliol 812™ Huls AG)와 같은 극성 공-용매의 부가로, 초임계적 상태에서 CO₂에 의하여 유효하게 될 수 있다.

추출은 또한 임의적으로 본 발명의 추출물의 탈색 또는 정제의 적어도 하나의 부가적인 단계를 포함할 수 있다.

추출물의 탈색은 예를 들어 추출물을 탈지하기 위해 사용된 것의 타입의 비극성 용매로 상기 추출물의 처리로 구성될 수 있다.

추출은 추출 용매의 부분적 또는 완전한 제거의 단계로 성취되어 질 수 있다.

먼저 일차로서, 추출은 일반적으로 유기 용매의 유의성 있는 양을 포함하지 않는 수성 농축물이 얻어질 때까지 농축되어 지고; 그리고 두 번째 케이스에서, 건조 잔사가 얻어진다.

유익하기로는, 이 추출 단계로부터의 제품은 분말의 형태로 제공되어 지도록 하기 위해 동결건조되어 지거나 또는 원자화되어 질 수 있다.

본 발명에 따른 화장품 조성물에서 활성 제제로서, 이 추출물은 건조 상태로 뿐아니라 상기 추출을 위해 사용된 것과 같거나 또는 다른 것일 수 있는 상업적으로 허용될 수 있는 용매나 용매의 혼합물에 용액으로 또는 현탁액으로 만들어져 사용된다.

이 화장품 조성물은 원하는 효과, 특히는 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성을 저해하기 위한 효과를 얻기 위한 유효량의 추출물을 포함한다.

따라서, 바람직하기로는 조성물은 조성물의 전체 중량에 대하여 건조 추출물의 0.0001% 내지 1%, 더욱 바람직하기로는 0.001 중량% 내지 0.01 중량%를 포함한다.

본 발명의 추출물의 특성은 본 발명의 추출물이 정제된 기질의 형태이거나 및/또는, 특히는 상기 본 발명의 추출물의 것에 유사하거나 및/또는 보충적인 화장품학적 효과를 갖는 식물 추출물에 다른 화장품학적으로 허용될 수 있는 활성 제제와 조합한, 화장품 조성물에서 얻어질 수 있거나 또는 개선되어 질 수 있다.

따라서, 본 조성물은 하나 또는 그 이상의 다른 식물의 추출물을 포함할 수 있고, 그리고 유익하기로는 적어도 하나의 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 다른 부분의 추출물 또는 다른 난초과 추출물이나 이 추출물로부터 정제된 기질을 포함할 수 있다.

화장품 조성물은 또한 유익하기로는 포르소콜린 또는 이들을 함유하는 추출물과 같은 서바이빈의 발현을 자극하는 것들 중에서 하나 또는 그 이상의 다른 활성 제제, 특히는 콜레우스 포르스콜리(Coleus forskolii)의 추출물 또는 그렇지 않으면 노스톡 콤뮨(Nostoc commune), 뷰테아 프론도사(Butea frondosa), 네오클로리스 올레아번던스(Neochloris oleabundans), 세네데스뮤스 디모르푸스(Scenedesmus dimorphus), 큐르큐마 롱가(Curcuma longa), 크로큐스 사티버스(Crocus sativus), 다니엘리아 올리베리(Daniellia oliveri), 레페키니아 카우레센스(Lepechinia caulescens), 림노필라 콘페르타(Limnophila conferta)로부터 선택된 식물 종으로부터 얻어진 식물 추출물 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

마지막으로, 본 화장품 조성물은 또한 항-노화 활성을 가지는 기질, 피부 상에 탈색소 활성, 색조 또는 클리닝 활성을 가지는 기질, 슬리밍 활성을 가지는 기질, 가습 활성을 가지는 기질, 온화, 부드러움 또는 릴랙싱 활성을 가지는 기질, 안색, 특히는 얼굴의 안색의 광휘를 개선하기 위해 피부 미세순환을 자극하는 활성을 가지는 기질, 오일상 피부의 케어를 위한 피지조절 활성을 가지는 기질, 피부를 세정하거나 정제하기 위한 기질, 항-라디컬 활성을 가지는 기질 및 이들의 혼합물의 군으로부터 선택된 다른 화장품학적으로 허용될 수 있는 활성 제제를 포함할 수 있다.

유익하기로는, 본 발명의 조성물은 안료, 착색제, 폴리머, 계면 활성제, 점도 조절제, 향료, 전해질, pH 조정제, 항산화제, 보존제, 그리고 이들의 혼합물로부터 선택되어 질 수 있는 적어도 하나의 화장품학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함한다.

본 화장품 조성물은, 예를 들어, 세럼, 로션, 크림, 하이드로겔, 바람직하기로는 마스크, 유중수 에멀젼, 무수 조성물로 되어 질 수 있거나 또는 그렇지 않으면 스틱, 패치와 같은 형태로, 또는 립스틱, 마스카라, 또는 파운데이션 타입의 메이크-업 제품의 향태로 제공되어 질 수 있다.

본 발명의 추출물 및 조성물은 특히 원하는 효과인 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하는 또는 이들의 효과를 늦추거나 희석하는 효과, 또는 그렇지 않으면 세포 또는 조직 생존성을 증진하는 효과를 나타낸다.

본 발명의 제 이의 대상은 따라서 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하는 또는 이들의 효과를 늦추거나 희석하는, 또는 그렇지 않으면 세포 또는 조직 생존성을 증진하기 위한 활성 제제로서 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 적어도 하나의 추출물의 화장품 조성물에서의 사용에 대한 것이다.

유익하기로는, 이 추출물 또는 조성물은 상기 또는 이하에 정의되어 지는 바와 같다.

유익하기로는 상기 추출물을 포함하는 조성물은 그 자체로 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하기 위한 또는 이들의 효과를 늦추거나 희석하기 위한, 또는 그렇지 않으면 세포 또는 조직 생존성을 증진하기 위한 것이다.

본 발명의 제 삼의 대상은 화장 케어 방법, 특히는 얼굴이나 신체의 적어도 일 부분의 피부 상에 상기에 정의된 것과 같은 화장품 조성물의 유효량을 적용하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는, 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하는 또는 이들의 효과를 늦추거나 희석하는, 또는 그렇지 않으면 세포 또는 조직 생존성을 증진하기 위한 화장 케어 방법에 대한 것이다.

유익하기로는, 화장품 조성물은 주름이나 미세한 주름의 발현, 또는 피부 안색의 광휘의 상실과 같이 노화를 관찰할 수 있는 사인, 또는 피부 탄력성 및/또는 유연성의 상실, 피부의 두께에서의 감소, 피부 건조 또는 거칠기의 증가와 같은 다른 신호를 나타내는 신체나 얼굴의 피부 영역에 적용되어 진다.

본 발명은 또한 피부 노화의 내재적 및/또는 외재적 신호의 발현을 예방하거나 지연하기 위한 또는 이들의 효과를 늦추거나 희석하기 위한 조성물의 제조를 위해 난초과 덴드로븀 크리소톡숨 꽃의 적어도 하나의 추출물의 유효량의 사용에 대한 것이다. 본 조성물은 주름이나 미세한 주름의 발현, 또는 피부 안색의 광휘의 상실과 같이 노화를 관찰할 수 있는 사인, 또는 피부 탄력성 및/또는 유연성의 상실, 피부의 두께에서의 감소, 피부 건조 또는 거칠기의 증가와 같은 다른 신호를 나타내는 개개의 피부 적어도 하나의 영역에 국부적인 적용을 통해 특히 적용되어 질 수 있다. 본 조성물은 특히 35세 이상, 40세 이상, 45세 이상, 50세 이상, 55세 이상, 또는 더욱이 60세 이상인 개개인의 피부에 적용되도록 의도되어 진다. 본 조성물은 유익하기로는 성숙한 피부 상에 적용되어 질 수 있다. 이것은 특별하게는 얼굴 및/또는 눈의 피부의 노화 신호의 발현을 예방하거나 지연하기 위해 의도되어 질 수 있다.

본 발명의 제 사의 대상은 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 및/또는 활성을 저해하는 난초과 추출물, 특히는 덴드로븀 크리소톡숨 종의 추출물에 대한 것이다

이 추출물은 유익하기로는 상기에 정의된 바와 같은 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 추출물이다.

이 추출물은 더욱 유익하기로는 상기에 기술된 바와 같은 극성 용매 또는 극성 용매의 혼합물의 수단에 의해 얻어진다.

바람직하기로는, 상기 추출물은 건조 추출물이고, 가능하기로는 용액으로 된다.

본 발명의 다른 목적, 특징 및 이점은 몇 가지의 예시적인 실시형태와 추출물의 제조의 예와 추출물의 특성을 입증하는 테스트와 그리고 단지 발명을 상세하게 설명하기 위한 것으로 발명의 범주를 결코 한정하는 것은 아닌 이러한 추출물을 사용하는 화장품 조성물의 예에 대한 레퍼런스로 되는 다음의 발명을 실시하는 상세한 설명의 관점에서 보다 명확하게 될 것이다.

본 실시예에서, 달리 지시되지 않는다면, 모든 백분율은 중량 기준으로 주어진 것이며, 온도는 섭씨온도이고, 압력은 대기압력이다.

실시예

실시예 1: 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 추출물의 제조.

본 발명의 추출물의 제조

네 가지의 추출물뿐 아니라 비교를 위해 제공되는 다른 두 가지의 추출물이 본 발명에 따라 제조되어 졌다.

추출물 S-1, S-2, S-3 및 S-4의 식물 물질은 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃으로 구성되어 졌다. 추출물 R 및 G는 덴드로븀 크리소톡숨 오르키드의 뿌리로부터 얻어진 것이거나 그램마토필럼 종(Grammatophyllum sp .) 오르키드의 잎으로부터 얻어졌다.

건조 상태 및 마쇄 상태로의 식물 물질은 추출물 S-1, R 및 G를 제조하기 위해 30분 동안 환류 하에서 90/10 v/v 에탄올/물로 수성 알코올 추출을 하였다. 추출 용매는 그런 다음 제거되어 건조 추출물을 얻었다.

상기 추출은 추출 용매와 온도 조건을 변경하여 추출물 S-2, S-3 및 S-4를 얻기 위하여 다시 생산되어 졌다. 두 추출 온도는: 16시간 동안 대류 온도(AT)에서 또는 그렇지 않으면 적어도 30분 동안 뜨겁게(용매 환류) 하여 시험되어 졌다.

제조된 추출물 및 건조 상태 및 마쇄 상태에서의 출발 식물 물질에 대한 건조 추출물의 백분율(중량/중량)로 표시된 이들의 조합된 추출 수율은 아래에 요양되어 진다.

추출물 코드 추출의 종류 추출 수율

S-1 에탄올/물 90/10 v/v - 환류 23.1%

S-2 에탄올 100% - 환류 17.0%

S-3 에탄올/물 70/30 v/v - AT 27.9%

S-4 에탄올/물 50/50 v/v - AT 28.4%

R 에탄올/물 90/10 v/v - 환류 14.7%

G 에탄올/물 90/10 v/v - 환류 14.1%

아래 실시예 2의 화장품 활성 시험을 위하여, 건조 추출물이 용매의 mL 당 12.5mg의 추출물의 농도로 DMSO에 용해되어 진, 저장 용액이 각각의 추출물에 대해 제조되어 졌다.

실시예 2 - 정상 인간 케라티노사이트(NHK)에서 단백질 Smac / DIABLO 의 발현의 준위의 면역효소학적인 분석

2.1 - 양성 대조군 및 추출액의 용액의 제조

포르스콜린은 서바이빈 발현의 공지된 활성자이다(cf. 프랑스 특허출원 FR2932086의 실시예 1 참고).

아래의 시험을 위하여, 최소한 98중량%의 포르스콜린을 함유하는 콜레우스 포르스콜리(Coleus forskolii)의 추출물이 양성 대조군으로서 사용되었다. 이러한 추출물은 예를 들어 SIGMA사에 의해 분말의 형태로 시판되어 지고 있다.

추출물 분말은 약 10^-6 M의 포르스콜린 농도를 얻기 위하여 DMSO에 용해되어 진다.

이렇게 제조된 양성 대조군의 용액은 일천 분의 일의 희석을 얻기 위해, 예를 들어 약 10^-9 M에 상당하는 포르스콜린의 농도를 얻기 위해 배양 배지에 부가되어 진다.

평행하여, 배양 배지에 일천 분의 일로 희석된 용매 대조군(DMSO)이 제조되어 진다.

시험된 각 추출물의 저장 용액(S-1 내지 S-4, R 및 G)은 12.5 ㎍/mL의 추출물의 최종 농도를 얻도록 하기 위해 케라티노사이트 배양 배지에 희석되어 진다.

2.2 - NHK 의 처리

배양된 NHK는, 완전 혈청-유리 배양 배지(KSFMc, Gibco) 안에, 웰 당 50,000 세포의 양으로 48-웰 마이크로플레이트 안에 접종되어 진다.

이 제일 배양 일은 D0에 상당한다.

처리 단계는 NHK의 배양 (37℃, 5% CO₂) 24 시간 후에 D1에서 시작되었다.

배양 배지의 제거 후, 이것은 시험되어 지는 추출액뿐 아니라, 양성 대조군 또는 용매 대조군(T-SO)을 포함하는 새로운 KSFMc로 대체되어 졌다. 각각의 처리는 세번씩 시행되어 졌다.

세포 주기의 경로에서 서바이빈의 발현 피크에 상응하는 기간인, 처리의 16시간 후, NHK는 분석을 수행하기 위하여 하프 플레이트 상에서 라이시스되어 졌다(Smac/DIABLO 단백질 어세이 키트(아래 참고)에 기술되어 진 프로토콜에 따라 즉시적으로 제조되어 진 라이시스 버퍼). 다른 하프 플레이트는 PBS로 린스되고 그런 다음 570 nm에서 흡광도 측정에 의해 BCA 방법(BC 어세이 키트, Uptima Interchim)에 따른 색도계 시험에 의해 그 안에 있는 전체 단백질을 분석하기 위해 -20℃에서 저정되었다.

2.3 - 어세이 방법

케라티노사이트에 의해 생산된 Smac/DIABLO의 준위는 Duoset Smac/DIABLO ELISA 키트(R&D 시스템즈)로 평가되어 졌다.

여기서 HRP (horseradish peroxidase)로 되는 발색단(chromophore)에 연결된 스트렙타비딘의 부가는 과산화수소의 존재에서 그의 기질(테트라메틸벤지딘)의 부가에 의한 전자의 효소적인 활성을 평가하는 것을 가능하게 한다.

일단 효소적 반응이 황산으로 차단되어 지면, Smac/DIABLO의 존재는 그의 농도에 비례하여 색도계 반응을 통하여 밝혀진다.

흡광도는 450 nm의 파장에서 측정되어 질 수 있었다.

표준 범위는 키트에 제공되어 진 Smac/DIABLO의 표준 저장 용액의 희석에 기초하여 정하여 졌다.

2.4 - NHK 용리액에서 Smac / DIABLO 단백질 분석의 결과

결과는 도 1에 나타냈다. 이것은 전체 단백질의 ㎍당 Smac/DIABLO 단백질의 pg(pg/㎍ prot.)으로 나타내어 졌다.

이 단백질의 생산의 저해 백분율은 처리를 하지 않은 기저 준위(TSO)에 대하여 계산되었다. 양성 대조군은 포르스콜린(FSK)이다.

결론

시험된 본 발명의 네 추출물의 각각은 양성 대조군의 것보다 클 수 있는 유효성으로 NHK 내의 미토콘드리아 단백질 Smac/DIABLO의 발현을 감소하데 있어서 유의성 있는 활성(S-1: -39%; S-2: -54%; S-3: -39%; S-4: -29%)을 나타냈다.

이에 대비하여, 덴드로븀 크리소톡숨의 뿌리 추출물 및 그램마토필럼 종(Grammatophyllum sp)의 잎 추출물은 Smac/DIABLO 단백질의 발현에 대한 유의성 있는 저해 효과를 가지지 않았다. DMSO 인디케이트를 가지는 단백질에서 농도에 있어서의 차이는 덴드로븀 크리소톡숨 뿌리 추출물에 대해서는 -9% 그리고 그램마토필럼 종(Grammatophyllum sp)의 잎 추출물에 대해서는 -13%보다 많지 않았다.

극성 용매를 사용한 추출 과정에 의해 얻어질 수 있는 본 발명의 추출물은 화장품 조성물에서 항-노화 활성제로서, 특히는 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하거나, 또는 이들의 효과를 지연하거나 또는 희석하기 위한, 또는 그렇지 않으면 세포나 조직의 생존성을 증진하기 위한 활성제로서 제제화되어 진다.

실시예 3 - 안면용 항-노화 크림

이 화장품 조성물에서 활성 제제로서 사용된 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 추출물은 실시예 1의 과정을 재생함에 의해 얻어진다(추출물 S-1).

건조 추출물은 60/40 v/v 글리세롤/물 혼합물에 2% w/w로 용해되어 졌다.

이 추출물 용액은 아래의 화장품 조성물의 제조를 위한 활성 제제로서 사용되어 졌다(최종 조성물에 대한 중량 %로 나타냄):

페이스 A

덴드로븀 크리소톡숨 추출물의 2% 용액 1

펜옥시에탄올 0.5

크산탄 검 0.2

아크릴레이트/C20-30 알킬아크릴레이트 횡중합체 0.2

테트라소디움 EDTA 0.1

물 qs

qs : 페이스 A의 화합물을 용해하기에 충분한 양.

페이스 b

수소화 폴리이소부텐 4

스쿠알린 3

카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드류 3

펜틸렌 글리콜 3

글리세릴 스테아레이트 3

PEG-100 스테아레이트 2.5

밀납 1.5

디카프릴릴 카보네이트 1.5

세틸 알코올 1

스테아릴 알코올 1

디메티콘 1

페이스 c

수산화나트륨 0.04

물 qs 100

qs 100: 최종 조성물 100%에 대해 충분한 양

페이스 A의 부형제는 물에 분산되어 지고, 그런 다음 덴드로븀 크리소톡숨 추출물의 물-글리콜 용액을 포함하는 다른 모든 화합물을 용해하기 전에 80℃로 가열되어 진다.

페이스 B의 화합물은 균질한 상을 형성하기 위해 85℃로 가열되어 진다.

페이스 A는 이스트럴 믹서(Ystral mixer)의 수단에 의해 페이스 B 안에 에멀젼화되어 진다.

마지막으로, 이렇게 얻어진 유중수(oil-in-water)의 에멀젼은 수산화나트륨의 0.04% w/w 용액 (페이스 C)의 수단에 의해 중화되어 지고, 그런 다음 냉각되어 진다.

얻어진 조성물은 얼굴의 모든 또는 일 부분에 적용되어 지도록 의도된 항-노화 크림이다.

Claims

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주름이나 미세한 주름의 발현, 피부 안색의 광휘의 상실, 피부 탄력성 또는 유연성의 상실, 피부의 두께에서의 감소, 및 피부 건조 또는 거칠기의 증가로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 피부 증상에 작용하는 활성제제로, 상기 활성제제는 적어도 50% v/v의 C₁-C₄ 알코올 내지 최대 100% v/v의 C₁-C₄ 알코올과 나머지의 물을 포함하는 용매에 의해 얻어지는 난초과 덴드로븀 크리소톡숨의 꽃의 추출물로 구성되는 것을 특징으로 하는 활성제제.
제 3항에 있어서, 상기 활성제제는 케라티노사이트에서 미토콘드리아의 단백질 Smac/DIABLO의 발현 또는 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 활성제제.
조성물의 전체 중량에 대하여 청구항 3에 따른 활성제제 0.0001중량% 내지 1중량% 및 적어도 하나의 허용될 수 있는 화장품 부형제를 포함함을 특징으로 하는 화장품 조성물.
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제 5항에 있어서, 상기 조성물은 서바이빈의 발현 또는 활성을 자극하는 것 중에서 하나 또는 그 이상의 다른 활성 제제를 포함하고, 상기 활성 제제는 포르소콜린과 콜레우스 포르스콜리(Coleus forskolii), 노스톡 콤뮨(Nostoc commune), 뷰테아 프론도사(Butea frondosa), 네오클로리스 올레아번던스(Neochloris oleabundans), 세네데스뮤스 디모르푸스(Scenedesmus dimorphus), 큐르큐마 롱가(Curcuma longa), 크로큐스 사티버스(Crocus sativus), 다니엘리아 올리베리(Daniellia oliveri), 레페키니아 카우레센스(Lepechinia caulescens), 또는 림노필라 콘페르타(Limnophila conferta)로부터의 식물 추출물로 구성되는 군에서부터 선택되는 것임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 허용될 수 있는 화장품 부형제는 안료, 착색제, 폴리머, 계면 활성제, 유동화제, 향료, 전해질, pH 조정제, 항산화제, 보존제, 그리고 이들의 혼합물의 하나 중에서 선택되어 짐을 특징으로 하는 화장품 조성물.
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얼굴이나 신체의 적어도 일 부분의 피부 상에 청구항 5에 따른 화장품 조성물의 유효량을 적용하는 것을 포함하는, 화장 케어 방법.
제 13항에 있어서, 상기 화장품 조성물은 주름이나 미세한 주름의 발현, 또는 피부 안색의 광휘의 상실, 또는 피부 탄력성 또는 유연성의 상실, 피부의 두께에서의 감소, 또는 피부 건조 또는 거칠기의 증가를 나타내는 신체나 얼굴의 피부 영역에 적용됨을 특징으로 하는 화장 케어 방법.
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