KR101911071B1 - 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법 - Google Patents

호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법 Download PDF

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박태은
정민균
신상근
주윤하
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농업회사법인 주식회사 앨리스팜
이에프탑 주식회사
신상근
주윤하
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Abstract

본 발명은 채취된 호두 모수의 살균소독 및 생장점의 절간배양, 증식배양, 발근전처리배양, 발근배양, 1차 및 2차 순화와 필드이식으로 이루어지는 조직배양 전반에 걸쳐 발근 뿌리수와 발근율, 뿌리길이 등 단기간에 최적의 생장효율 및 대량증식이 가능한 생장조건을 제공하는 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법에 관한 것이다.

Description

호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법 {Tissue culture method for mass proliferation of walnuts}
본 발명은 식물의 조직배양에 관한 것으로, 자세하게는 채취된 호두 모수의 살균소독 및 생장점의 절간배양, 증식배양, 발근전처리배양, 발근배양, 1차 및 2차 순화와 필드이식으로 이루어지는 조직배양 전반에 걸쳐 발근 뿌리수와 발근율, 뿌리길이 등 단기간에 최적의 생장효율 및 대량증식이 가능한 생장조건을 제공하는 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법에 관한 것이다.
식물 조직배양은 많은 세포로 이루어진 식물의 기관, 조직 또는 세포 등을 식물체에서 적출, 분리해서 영양분이 들어있는 기내에서 배양하여 callus나 단세포집단을 유기시키거나 식물체나 기관을 callus, 세포 등에서 식물체로 재분화시키는 것을 칭한다.
이때 배양하는 재료 중에는 식물체조직, 뿌리, 잎, 화기 같은 기관, 식물체의 어린배, 성숙배를 배양, 약내의 미숙 또는 성숙화분에서 반수체의 callus나 식물체를 유기, 암술, 배주, 태좌, 소포자, 2n성의 단세포를 배양 그리고 원형질체만을 분리시켜 배양하기 때문에 배양의 재료나 방법, 배양목적이 다양하고 이에 따라 여러가지로 불리고 있다.
즉 기관배양, callus 배양, 단세포배양, 생장점배양, mericlone 배양, 암술배양, 자방배양, 배주배양, 태좌배양, 배유배양, 배배양, 약배양, 화분배양, 소포자 배양, 원형질배양 등 10여 종류가 되고 이밖에 기관의 종류에 따라 잎배양, 경정배양, 화편배양, 엽병배양, 액아 및 유아배양 등으로 불리고 있으나 이 중에는 진정한 의미로 조직배양이 아닌 것도 많지만 이들을 전부 합쳐서 넓은 의미로 조직배양이라고 한다.
이러한 조직배양 기술의 필요성으로는 첫째 무병묘 생산으로 수량과 품질향상을 기대할 수 있으며, 둘째 우량묘의 대량 급속 생산으로 신품종, 무병묘의 대량 급속 생산 및 보급으로 영양번식의 효율성을 극대화할 수 있다는 것이다.
셋째로 육종(새로운 품종 개발)으로 신품종육성 및 보급, 육종시기의 단축을 들 수 있으며 이로 인한 수입 대체효과 및 수출증대에 이바지할 수 있다.
이와 같이 무병묘 생산과 육종을 통한 부가가치 창출로 조직배양 기술의 활성화와 배양 방법에 사용되는 배양배지에 대한 연구가 더욱 요구되고 있는 가운데 다양한 식물을 대상으로 조직배양 연구가 이루어지고 있으나 호두에 관한 연구는 미미한 실정이다.
등록특허공보 제10-0392515호 (2003.07.10)
본 발명은 상술한 요구를 반영하여 창출된 것으로, 본 발명의 목적은 채취된 호두 모수의 살균소독 및 생장점의 절간배양, 증식배양, 발근전처리배양, 발근배양, 1차 및 2차 순화와 필드이식으로 이루어지는 조직배양 전반에 걸쳐 발근 뿌리수와 발근율, 뿌리길이 등 단기간에 최적의 생장효율 및 대량증식이 가능한 생장조건을 제공하는 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 위해 본 발명은 조직배양 대상의 모수를 채취하여 살균, 소독하는 단계로부터 필드 이식 단계에 걸쳐 이루어지는 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법에 있어서, 살균, 소독된 모수의 생장점을 절간하여, NH4NO3, CaCl2*2H2O, Ca(NO3)*4H2O, KH2PO4, K2SO4, MgSO4*7H2O의 다량원소와, Na2MoO4, KI, H3BO3, MnSO4*H2O, ZnSO4*7H2O, CuSO4*5H2O, CoCL2*6H2O, C2H5NO3, C3H7NO2S, C6H5NO3, C21H25CIN2O3, C8H11NO3, Ca(C9H16NO5)2, C10H15N2O3S, C6H12O6, C18H16N2O6FeNa의 미량원소와, C12H13NO2, C12H9O2Na가 투입된 초대배양 배지를 통해 초대 배양하는 단계; 초대 배양체를 상기 초대배양 배지와 동일한 성분의 증식배지를 통해 증식 배양하는 단계; 증식 배양체를 NH4NO3, CaCl2*2H2O, KNO3, KH2PO4, MgSO4*7H2O의 다량원소와, Na2MoO4*2H2O, KI, H3BO3, MnSO4*4H2O, ZnSO4*7H2O, CuSO4*5H2O, CoCL2*6H2O의 미량원소와, FeSo4*7H2O, Na2*EDTA*2H2O의 철분원소와, C6H5NO3, C21H25CIN2O3, C8H11NO3, C2H5NO3, C10H15N2O3S의 비타민원소와, C12H13NO2가 투입된 발근전처리배지를 통해 발근전처리 배양하는 단계; 발근전처리체를 상기 증식배지와 동일한 성분의 발근배지 및 질석과 펄라이트와 피트모스와 활성탄을 포함하는 상토를 통해 발근 배양하는 단계; 미생물처리 코코피트 60 ~ 70%와, 피트모스 10 ~ 20 부피%와, 펄라이트 5 ~ 9 부피% 외 잔여 비율의 질석과 활성탄을 포함한 상토에 이식하여, 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 2000 ~ 3000 lux의 광 조건하에서 재배하는 1차 순화단계; 1차 순화한 식물을 마사토에 이식하여 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 4000 ~ 7000 lux의 광 조건하에서 재배하는 2차 순화단계; 로 이루어지는 것을 특징으로 한다.
이때 상기 초대배양 배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 13.16 ~ 15.16g과, CaCl2*2H2O 1.07 ~ 1.87g과, Ca(NO3)*4H2O 17.11 ~ 19.11g과, KH2PO4 2.18 ~ 2.98g과, K2SO4 14.60 ~ 16.60g과, MgSO4*7H2O 7.00 ~ 7.80g의 다량원소가 투입되고, Na2MoO4*2H2O 0.20 ~ 0.30g과, KI 0.80 ~ 0.86g과, H3BO3 6.0 ~ 6.4g과, MnSO4*4H2O 15.9 ~ 17.9g과, ZnSO4*7H2O 9.6 ~ 11.6g과, CuSO4*5H2O 0.02 ~ 0.03g과, CoCL2*6H2O 0.02 ~ 0.03g과, C2H5NO3 0.08 ~ 0.12g과, C3H7NO2S 0.08 ~ 0.12g과, C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과, C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과, C8H11NO3 0.08 ~ 0.12g과, Ca(C9H16NO5)2 0.08 ~ 0.12g과, C10H15N2O3S 0.0008 ~ 0.0012g과, C6H12O6 48 ~ 52g과, C18H16N2O6FeNa 3.57 ~ 3.77g의 미량원소와, C12H13NO2 0.008 ~ 0.012g과, C12H9O2Na 0.08 ~ 0.12g이 투입되는 것이 바람직하다.
또한, 상기 증식배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 13.16 ~ 15.16g과, CaCl2*2H2O 1.07 ~ 1.87g과, Ca(NO3)*4H2O 18.60 ~ 20.60g과, KH2PO4 2.18 ~ 2.98g과, K2SO4 14.60 ~ 16.60g과, MgSO4*7H2O 7.00 ~ 7.80g의 다량원소가 투입되고, Na2MoO4*2H2O 0.20 ~ 0.30g과, KI 0.80 ~ 0.86g과, H3BO3 6.0 ~ 6.4g과, MnSO4*4H2O 15.9 ~ 17.9g과, ZnSO4*7H2O 9.6 ~ 11.6g과, CuSO4*5H2O 0.02 ~ 0.03g과, CoCL2*6H2O 0.02 ~ 0.03g과, C2H5NO3 0.08 ~ 0.12g과, C3H7NO2S 0.08 ~ 0.12g과, C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과, C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과, C8H11NO3 0.08 ~ 0.12g과, Ca(C9H16NO5)2 0.08 ~ 0.12g과, C10H15N2O3S 0.0008 ~ 0.0012g과, C6H12O6 48 ~ 52g과, C18H16N2O6FeNa 10.9 ~ 11.9g의 미량원소와, C12H13NO2 0.008 ~ 0.012g과, C12H9O2Na 0.08 ~ 0.12g이 투입되는 것이 바람직하다.
또한, 상기 발근전처리 배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 30 ~ 36g과, CaCl2*2H2O 7.8 ~ 9.8g과, KNO3 35 ~ 41g과, KH2PO4, 3.0 ~ 3.8g과, MgSO4*7H2O 7.0 ~ 7.8g의 다량원소가 투입되고, Na2MoO4*2H2O 0.03 ~ 0.07g과, KI 0.133 ~ 0.199g과, H3BO3 1.20 ~ 1.28g과, MnSO4*4H2O 4.36 ~ 4.56g과, ZnSO4*7H2O 1.62 ~ 1.82g과, CuSO4*5H2O 0.004 ~ 0.006g과, CoCL2*6H2O 0.004 ~ 0.006g의 미량원소와, FeSo4*7H2O 5.46 ~ 5.66g과, Na2*EDTA*2H2O 7.36 ~ 7.56g의 철분원소와, C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과, C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과, C8H11NO3, 0.018 ~ 0.022g과, C2H5NO3 0.38 ~ 0.42g과, C10H15N2O3S 18 ~ 22g의 비타민원소와, C12H13NO2 0.18 ~ 0.22g이 투입되는 것이 바람직하다.
또한, 상기 발근배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 13.16 ~ 15.16g과, CaCl2*2H2O 1.37 ~ 1.57g과, Ca(NO3)*4H2O 19.50 ~ 19.70g과, KH2PO4 2.48 ~ 2.68g과, K2SO4 14.60 ~ 16.60g과, MgSO4*7H2O 7.00 ~ 7.80g의 다량원소가 투입되고, Na2MoO4*2H2O 0.20 ~ 0.30g과, KI 0.80 ~ 0.86g과, H3BO3 6.0 ~ 6.4g과, MnSO4*4H2O 15.9 ~ 17.9g과, ZnSO4*7H2O 9.6 ~ 11.6g과, CuSO4*5H2O 0.02 ~ 0.03g과, CoCL2*6H2O 0.02 ~ 0.03g과, C2H5NO3 0.08 ~ 0.12g과, C3H7NO2S 0.08 ~ 0.12g과, C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과, C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과, C8H11NO3 0.08 ~ 0.12g과, Ca(C9H16NO5)2 0.08 ~ 0.12g과, C10H15N2O3S 0.0008 ~ 0.0012g과, C6H12O6 48 ~ 52g과, C18H16N2O6FeNa 10.9 ~ 12.9g의 미량원소와, C12H13NO2 0.008 ~ 0.012g과, C12H9O2Na 0.08 ~ 0.12g이 투입되는 것이 바람직하다.
또한, 상기 발근배지는 질석 100 부피%에 대하여 펄라이트 11 ~ 14 부피%와, 피트모스 11 ~ 14 부피%와, 활성탄 0.4 ~ 0.6 부피%의 비율로 구성되는 상토를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명을 통해 호두의 무병묘 및 우량묘의 생산으로 수량과 품질향상을 기대할 수 있으며, 영양번식의 효율성을 극대화하여 신품종의 대량 급속 생산 및 보급이 가능해진다. 또한, 신품종육성 및 보급, 육종시기의 단축으로 수입 대체효과 및 수출증대에 이바지할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 조직배양 순서를 나타낸 순서도,
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 식물의 절간 위치를 나타낸 사진,
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 생장점 절간 모습을 나타낸 사진,
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 조직배양 모습을 나타낸 사진,
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 증식배양 모습을 나타낸 사진,
도 6은 본 발명의 실시예에 따른 발근 전처리배양 모습을 나타낸 사진,
도 7은 본 발명의 실시예에 따른 발근배지의 모습을 나타낸 사진,
도 8은 본 발명의 실시예에 따른 발근배양 모습을 나타낸 사진,
도 9는 대조군의 발근 모습을 나타낸 사진,
도 10은 본 발명의 실시예에 따른 신거풍 호두의 발근율을 나타낸 그래프,
도 11은 본 발명의 실시예에 따른 발근모습을 나타낸 사진,
도 12는 본 발명의 실시예에 따른 1차 순화 모습을 나타낸 사진,
도 13은 본 발명의 실시예에 따른 2차 분화 모습을 나타낸 사진,
도 14는 본 발명의 실시예에 따른 필드이식 모습을 나타낸 사진이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법을 구체적으로 설명한다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 조직배양 순서를 나타낸 순서도로서, 본 발명은 기본적으로 조직배양 대상의 모수를 채취하여 살균, 소독하는 단계(S 100)로부터 필드 이식 단계(S 170)에 걸쳐 이루어지는 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법에 있어서, 살균, 소독된 모수의 생장점을 절간하여, 초대배양 배지를 통해 초대 배양하는 단계(S 110)와, 초대 배양체를 상기 초대배양 배지와 동일한 성분의 증식배지를 통해 증식 배양하는 단계(S 120)와, 증식 배양체를 발근전처리배지를 통해 발근전처리 배양하는 단계(S 130)와, 발근전처리체를 상기 증식배지와 동일한 성분의 발근배지 및 질석과 펄라이트와 피트모스와 활성탄을 포함하는 상토를 통해 발근 배양하는 단계와, 미생물처리 코코피트 60 ~ 70%와, 피트모스 10 ~ 20 부피%와, 펄라이트 5 ~ 9 부피% 외 잔여 비율의 질석과 활성탄을 포함한 상토에 이식하여, 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 2000 ~ 3000 lux의 광 조건하에서 재배하는 1차 순화단계(S 150)와, 1차 순화한 식물을 마사토에 이식하여 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 4000 ~ 7000 lux의 광 조건하에서 재배하는 2차 순화단계(S 160)로 진행된 후 최종 필드 이식된다..
본 발명의 실시예를 위해 사용된 품종은 신거풍 호두로서, 흑호두, 향령, 관핵1호, 진연8518, 진연1호, 진연4호 등의 품종에 대해서도 동일한 실험결과를 얻을 수 있었다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 식물의 절간 위치를 나타낸 사진, 도 3은 본 발명의 실시예에 따른 생장점 절간 모습을 나타낸 사진, 도 4는 본 발명의 실시예에 따른 조직배양 모습을 나타낸 사진으로, 초대 배양하는 단계(S 110)에서는 살균, 소독된 모수의 생장점을 절간하여, NH4NO3, CaCl2*2H2O, Ca(NO3)*4H2O, KH2PO4, K2SO4, MgSO4*7H2O의 다량원소와, Na2MoO4, KI, H3BO3, MnSO4*H2O, ZnSO4*7H2O, CuSO4*5H2O, CoCL2*6H2O, C2H5NO3, C3H7NO2S, C6H5NO3, C21H25CIN2O3, C8H11NO3, Ca(C9H16NO5)2, C10H15N2O3S, C6H12O6, C18H16N2O6FeNa의 미량원소와, C12H13NO2, C12H9O2Na가 투입된 초대배양 배지를 통해 초대 배양하게 되며, 초대배양배지의 구체적인 조성은 다음의 [표 1] 과 같다.
다량원소투입
COMPONENT CHEMICAL FOMULA STOCK CONSENT
(g/ℓ)
- Ammoninium nitrate
- Calcium chloride-2H2O
- Calcium nitrate-4H2O		 NH4NO3
CaCl2*2H2O
Ca(NO3)*4H2O		 14.16
1.47
18.11
- Potassium phosphate KH2PO4 2.58
- Potassium sulfate K2SO4 15.60
- Magnesium sulfate-7H2O MgSO4*7H2O 7.40
미량원소투입
- Sodium
- Potassium iodide
- Boric Acid
- Manganese sulfate-*H2O
Zinc sulfate-7H2O
Cupric sulfate-5H2O
Cobalt chloride-6H2O, 		Na2MoO4
KI
H3BO3
MnSO4*H2O
ZnSO4*7H2O
CuSO4*5H2O
CoCL2*6H2O, 		0.25
0.83
6.20
16.90
10.60
0.025
0.025
- Glycine
Cysteine		 C2H5NO3
C3H7NO2S		 0.10
0.10
Nicotinic acid
Tiamine HCL
Pyridoxine
Calcium Pantenonate
Biotin		 C6H5NO3
C21H25CIN2O3
C8H11NO3
Ca(C9H16NO5)2
C10H15N2O3S		 0.10
0.10
0.10
0.10
0.001
Myo-Inositol C6H12O6 50.00
Fe EDTA(Fe) C18H16N2O6FeNa 3.67
Indol-3-butyric acid C12H13NO2, 0.01
6-Benzyladenine C12H9O2Na 0.10
본 발명에서는 이러한 일련의 배양 배지를 통한 배양시 배지를 경사지도록 하여 발생한 물이 한쪽으로 모일 수 있도록 조치하게 되며, 이를 통해 수화현상으로 인해 조직의 손상을 방지할 수 있다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 증식배양 모습을 나타낸 사진으로, 증식 배양하는 단계(S 120)에서는 초대 배양체를 상기 초대배양 배지와 동일한 성분의 증식배지를 통해 증식 배양하게 되며, 증식배지의 구체적인 조성은 다음의 [표 2] 와 같다.
다량원소투입
COMPONENT CHEMICAL FOMULA STOCK CONSENT
(g/ℓ)
- Ammoninium nitrate
- Calcium chloride-2H2O
- Calcium nitrate-4H2O		 NH4NO3
CaCl2*2H2O
Ca(NO3)*4H2O		 14.16
1.47
19.60
- Potassium phosphate KH2PO4 2.58
- Potassium sulfate K2SO4 15.60
- Magnesium sulfate-7H2O MgSO4*7H2O 7.40
미량원소투입
- Sodium
- Potassium iodide
- Boric Acid
- Manganese sulfate-*H2O
Zinc sulfate-7H2O
Cupric sulfate-5H2O
Cobalt chloride-6H2O, 		Na2MoO4
KI
H3BO3
MnSO4*H2O
ZnSO4*7H2O
CuSO4*5H2O
CoCL2*6H2O, 		0.25
0.83
6.20
16.90
10.60
0.025
0.025
- Glycine
Cysteine		 C2H5NO3
C3H7NO2S		 0.10
0.10
Nicotinic acid
Tiamine HCL
Pyridoxine
Calcium Pantenonate
Biotin		 C6H5NO3
C21H25CIN2O3
C8H11NO3
Ca(C9H16NO5)2
C10H15N2O3S		 0.10
0.10
0.10
0.10
0.001
Myo-Inositol C6H12O6 50.00
Fe EDDHA(Fe) C18H16N2O6FeNa 11.9
Indol-3-butyric acid C12H13NO2, 0.01
6-Benzyladenine C12H9O2Na 0.10
이러한 증식 배양은 4 ~ 5주 정도 이루어지며, 기간을 넘을 경우 배지의 경화가 발생, 기간이 짧을 경우 뿌리가 원활히 형성되지 않는다.
도 6은 본 발명의 실시예에 따른 발근 전처리배양 모습을 나타낸 사진으로, 발근전처리 배양하는 단계(S 130)에서는 증식 배양체를 NH4NO3, CaCl2*2H2O, KNO3, KH2PO4, MgSO4*7H2O의 다량원소와, Na2MoO4*2H2O, KI, H3BO3, MnSO4*4H2O, ZnSO4*7H2O, CuSO4*5H2O, CoCL2*6H2O의 미량원소와, FeSo4*7H2O, Na2*EDTA*2H2O의 철분원소와, C6H5NO3, C21H25CIN2O3, C8H11NO3, C2H5NO3, C10H15N2O3S의 비타민원소와, C12H13NO2가 투입된 발근전처리배지를 통해 발근전처리 배양하게 되며, 발근전처리 배지의 구체적인 조성은 다음의 [표 3] 과 같다.
다량원소투입
COMPONENT CHEMICAL FOMULA STOCK CONSENT
(g/ℓ)
- Ammoninium nitrate
- Calcium chloride-2H2O
Potassium nitrate
- Potassium phosphate
- Magnesium sulfate-7H2O		 NH4NO3
CaCl2*2H2O
KNO3
KH2PO4
MgSO4*7H2O		 33.00
8.80
38.00
3.40
7.40
미량원소투입
- Sodium
- Potassium iodide
- Boric Acid
- Manganese sulfate-4H2O
Zinc sulfate-7H2O
Cupric sulfate-5H2O
Cobalt chloride-6H2O		 Na2MoO4*2H2O
KI
H3BO3
MnSO4*4H2O
ZnSO4*7H2O
CuSO4*5H2O
CoCL2*6H2O		 0.05
0.166
1.24
4.46
1.72
0.005
0.005
철분원소
- Ironsulfate heptahydrate
Disodium acid salt(착염)		 FeSo4*7H2O, Na2*EDTA*2H2O 5.56
7.46
비타민 원소
Nicotinic acid
Tiamine HCL
Pyridoxine HCI
Glycine
Inositol		 C6H5NO3
C21H25CIN2O3
C8H11NO3
C2H5NO3
C10H15N2O3S		 0.10
0.10
0.02
0.40
20.00
IBA(S.Sol 200mg/L) C12H13NO2 0.20
이러한 발근전처리 배양하는 단계(S 130)는 23 ~ 24℃의 온도조건에서 1주일간 암처리하게 된다. 또한, 발근 SHOOT 길이는 3 ~ 5㎝로 마디 하부의 2 ~ 3 잎 정도 잘라주는 것이 좋다.
도 7은 본 발명의 실시예에 따른 발근배지의 모습을 나타낸 사진, 도 8은 본 발명의 실시예에 따른 발근배양 모습을 나타낸 사진으로, 발근 배양하는 단계(S 140)에서는 발근전처리체를 상기 증식배지와 동일한 성분의 발근배지를 통해 발근 배양하게 되며, 발근배지의 구체적인 조성은 다음의 [표 4] 와 같다.
다량원소투입
COMPONENT CHEMICAL FOMULA STOCK CONSENT
(g/ℓ)
- Ammoninium nitrate
- Calcium chloride-2H2O
- Calcium nitrate-4H2O		 NH4NO3
CaCl2*2H2O
Ca(NO3)*4H2O		 14.16
1.47
19.60
- Potassium phosphate KH2PO4 2.58
- Potassium sulfate K2SO4 15.60
- Magnesium sulfate-7H2O MgSO4*7H2O 7.40
미량원소투입
- Sodium
- Potassium iodide
- Boric Acid
- Manganese sulfate-*H2O
Zinc sulfate-7H2O
Cupric sulfate-5H2O
Cobalt chloride-6H2O, 		Na2MoO4
KI
H3BO3
MnSO4*H2O
ZnSO4*7H2O
CuSO4*5H2O
CoCL2*6H2O, 		0.25
0.83
6.20
16.90
10.60
0.025
0.025
- Glycine
Cysteine		 C2H5NO3
C3H7NO2S		 0.10
0.10
Nicotinic acid
Tiamine HCL
Pyridoxine
Calcium Pantenonate
Biotin		 C6H5NO3
C21H25CIN2O3
C8H11NO3
Ca(C9H16NO5)2
C10H15N2O3S		 0.10
0.10
0.10
0.10
0.001
Myo-Inositol C6H12O6 50.00
Fe EDTA(Fe) C18H16N2O6FeNa 11.9
Indol-3-butyric acid C12H13NO2, 0.01
6-Benzyladenine C12H9O2Na 0.1
이때 상기 발근배지는 질석 100 부피%에 대하여 펄라이트 11 ~ 14 부피%와, 피트모스 11 ~ 14 부피%와, 활성탄 0.4 ~ 0.6 부피%의 비율로 구성되는 상토를 포함하게 된다.
도 9는 대조군의 발근 모습을 나타낸 사진, 도 10은 본 발명의 실시예에 따른 신거풍 호두의 발근율을 나타낸 그래프, 도 11은 본 발명의 실시예에 따른 발근모습을 나타낸 사진이다. 도 10의 그래프에서 5.0 매우양호, 4.0 양호, 3.0 보통, 2.0 나쁨, 1.0 매우 나쁨의 5점 척도를 통해 발근 뿌리수와, 전체 뿌리수, 뿌리길이 및 지상부상태를 나타내고 있다.
구체적으로 다음의 [표 5] 에서 정리된 것과 같이 실험군인 6번이 대조군인 1 ~ 5번 샘플에 대하여 양호한 성장상태를 보여주고 있다.
구 분 1 2 3 4 5 6
발근 뿌리수/개 2.3 1.9 2.5 1.8 1.6 2.3
전체 뿌리수/개 1.4 1.2 1.2 1.3 0.9 2.1
뿌리길이 ㎝ 3.0 2.5 2.5 3.5 2.5 3.5
지상부상태 4.0 4.0 5.0 2.0 1.0 5.0
발근율 % 60.5 65.8 48.8 71.9 47.9 91.3
여기서 대조군인 1번은 질석 100%, 2번은 질석과 피트모스를 9:1의 비율로, 3번은 질석과 펄라이트와 피트모스를 8:1:1의 비율로, 4번은 질석과 피트모스와 활성탄을 9:1:0.3의 비율로, 5번은 질설과 펄라이트를 6:7의 비율로 각각 혼합한 상토조건을 갖고 있으며, 본 발명에 따른 실험군인 6번에서는 질석과 펄라이트와 피트모스와 활성탄을 각각 80:10:10:0.4의 비율로 혼합한 상토를 사용하였다.
도 12는 본 발명의 실시예에 따른 1차 순화 모습을 나타낸 사진으로, 미생물처리 코코피트 60 ~ 70%와 피트모스 10 ~ 20%,와 펄라이트 5 ~ 9% 외 잔여 비율의 질석과 활성탄을 포함한 상토에 이식하여, 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 2000 ~ 3000 lux의 광 조건하에서 재배하는 1차 순화를 실시한다.
본 발명의 실시예에서 1차 순화의 상토 조건은 미생물처리 코코피트 65%, 피트모스 16%, 펄라이트 7%에 잔여 비율의 질석, 활성탄, 미량원소로 구성되었다.
도 13은 본 발명의 실시예에 따른 2차 분화 모습을 나타낸 사진으로, 1차 순화한 식물을 마사토에 이식하여 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 4000 ~ 7000 lux의 광 조건하에서 재배하는 2차 순화단계를 실시한다.
도 14는 본 발명의 실시예에 따른 필드이식 모습을 나타낸 사진으로 2차 순화를 마친 후 노천에 개방된 필드에 이식하여 재배하게 된다.
본 발명의 권리는 위에서 설명된 실시 예에 한정되지 않고 청구범위에 기재된 바에 의해 정의되며, 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 청구범위에 기재된 권리범위 내에서 다양한 변형과 개작을 할 수 있다는 것은 자명하다.

Claims (6)

  1. 조직배양 대상의 모수를 채취하여 살균, 소독하는 단계로부터 필드 이식 단계에 걸쳐 이루어지는 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법에 있어서,
    살균, 소독된 모수의 생장점을 절간하여, 초대배양 배지를 통해 초대 배양하는 단계(S 110);
    초대 배양체를 상기 초대배양 배지와 동일한 성분의 증식배지를 통해 증식 배양하는 단계(S 120);
    증식 배양체를 발근전처리배지를 통해 발근전처리 배양하는 단계(S 130);
    발근전처리체를 상기 증식배지와 동일한 성분의 발근배지 및 질석과 펄라이트와 피트모스와 활성탄을 포함하는 상토를 통해 발근 배양하는 단계(S 140);
    미생물처리 코코피트 60 ~ 70%와, 피트모스 10 ~ 20 부피%와, 펄라이트 5 ~ 9 부피% 외 잔여 비율의 질석과 활성탄을 포함한 상토에 이식하여, 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 2000 ~ 3000 lux의 광 조건하에서 재배하는 1차 순화단계(S 150);
    1차 순화한 식물을 마사토에 이식하여 20 ~ 24℃의 온도와, 75 ~ 85%의 습도와, 4000 ~ 7000 lux의 광 조건하에서 재배하는 2차 순화단계(S 160); 로 이루어지되,
    상기 초대배양 배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 13.16 ~ 15.16g과 CaCl2*2H2O 1.07 ~ 1.87g과 Ca(NO3)*4H2O 17.11 ~ 19.11g과 KH2PO4 2.18 ~ 2.98g과 K2SO4 14.60 ~ 16.60g과 MgSO4*7H2O 7.00 ~ 7.80g의 다량원소와, Na2MoO4*2H2O 0.20 ~ 0.30g과 KI 0.80 ~ 0.86g과 H3BO3 6.0 ~ 6.4g과 MnSO4*4H2O 15.9 ~ 17.9g과 ZnSO4*7H2O 9.6 ~ 11.6g과 CuSO4*5H2O 0.02 ~ 0.03g과 CoCL2*6H2O 0.02 ~ 0.03g과 C2H5NO3 0.08 ~ 0.12g과 C3H7NO2S 0.08 ~ 0.12g과 C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과 C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과 C8H11NO3 0.08 ~ 0.12g과 Ca(C9H16NO5)2 0.08 ~ 0.12g과 C10H15N2O3S 0.0008 ~ 0.0012g과 C6H12O6 48 ~ 52g과 C18H16N2O6FeNa 3.57 ~ 3.77g의 미량원소와 C12H13NO2 0.008 ~ 0.012g과 C12H9O2Na 0.08 ~ 0.12g이 투입되고,
    상기 증식배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 13.16 ~ 15.16g과 CaCl2*2H2O 1.07 ~ 1.87g과 Ca(NO3)*4H2O 18.60 ~ 20.60g과 KH2PO4 2.18 ~ 2.98g과, K2SO4 14.60 ~ 16.60g과 MgSO4*7H2O 7.00 ~ 7.80g의 다량원소와, Na2MoO4*2H2O 0.20 ~ 0.30g과 KI 0.80 ~ 0.86g과 H3BO3 6.0 ~ 6.4g과 MnSO4*4H2O 15.9 ~ 17.9g과 ZnSO4*7H2O 9.6 ~ 11.6g과 CuSO4*5H2O 0.02 ~ 0.03g과 CoCL2*6H2O 0.02 ~ 0.03g과 C2H5NO3 0.08 ~ 0.12g과 C3H7NO2S 0.08 ~ 0.12g과 C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과 C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과 C8H11NO3 0.08 ~ 0.12g과 Ca(C9H16NO5)2 0.08 ~ 0.12g과 C10H15N2O3S 0.0008 ~ 0.0012g과 C6H12O6 48 ~ 52g과 C18H16N2O6FeNa 10.9 ~ 11.9g의 미량원소와, C12H13NO2 0.008 ~ 0.012g과 C12H9O2Na 0.08 ~ 0.12g이 투입되며,
    상기 발근전처리 배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 30 ~ 36g과 CaCl2*2H2O 7.8 ~ 9.8g과 KNO3 35 ~ 41g과 KH2PO4, 3.0 ~ 3.8g과 MgSO4*7H2O 7.0 ~ 7.8g의 다량원소와, Na2MoO4*2H2O 0.03 ~ 0.07g과 KI 0.133 ~ 0.199g과 H3BO3 1.20 ~ 1.28g과 MnSO4*4H2O 4.36 ~ 4.56g과 ZnSO4*7H2O 1.62 ~ 1.82g과 CuSO4*5H2O 0.004 ~ 0.006g과 CoCL2*6H2O 0.004 ~ 0.006g의 미량원소와, FeSo4*7H2O 5.46 ~ 5.66g과 Na2*EDTA*2H2O 7.36 ~ 7.56g의 철분원소와, C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과 C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과 C8H11NO3, 0.018 ~ 0.022g과 C2H5NO3 0.38 ~ 0.42g과 C10H15N2O3S 18 ~ 22g의 비타민원소와 C12H13NO2 0.18 ~ 0.22g이 투입되고,
    상기 발근배지에는 물 1리터에 대하여 NH4NO3 13.16 ~ 15.16g과 CaCl2*2H2O 1.37 ~ 1.57g과 Ca(NO3)*4H2O 19.50 ~ 19.70g과 KH2PO4 2.48 ~ 2.68g과 K2SO4 14.60 ~ 16.60g과 MgSO4*7H2O 7.00 ~ 7.80g의 다량원소와, Na2MoO4*2H2O 0.20 ~ 0.30g과 KI 0.80 ~ 0.86g과 H3BO3 6.0 ~ 6.4g과 MnSO4*4H2O 15.9 ~ 17.9g과 ZnSO4*7H2O 9.6 ~ 11.6g과 CuSO4*5H2O 0.02 ~ 0.03g과 CoCL2*6H2O 0.02 ~ 0.03g과 C2H5NO3 0.08 ~ 0.12g과 C3H7NO2S 0.08 ~ 0.12g과 C6H5NO3 0.08 ~ 0.12g과 C21H25CIN2O3 0.08 ~ 0.12g과 C8H11NO3 0.08 ~ 0.12g과 Ca(C9H16NO5)2 0.08 ~ 0.12g과 C10H15N2O3S 0.0008 ~ 0.0012g과 C6H12O6 48 ~ 52g과 C18H16N2O6FeNa 10.9 ~ 12.9g의 미량원소와, C12H13NO2 0.008 ~ 0.012g과 C12H9O2Na 0.08 ~ 0.12g이 투입되며,
    상기 발근배지는 질석 100 부피%에 대하여 펄라이트 11 ~ 14 부피%와, 피트모스 11 ~ 14 부피%와, 활성탄 0.4 ~ 0.6 부피%의 비율로 구성되는 상토를 포함하는 것을 특징으로 하는 호두의 대량 증식을 위한 조직배양 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN110810251A (zh) * 2019-12-24 2020-02-21 南京林业大学 一种薄壳山核桃的微体嫁接方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102217538A (zh) * 2011-05-17 2011-10-19 山西省农业科学院果树研究所 一种核桃组织培养茎段试管内处理试管外生根的方法

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