KR101859679B1 - 내산성, 내당성 및 내알코올성 유산균 - Google Patents
내산성, 내당성 및 내알코올성 유산균 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 내산성, 내당성 및 내알코올성이 증진된 유산균에 관한 것이다. 구체적으로, 뉴코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주는 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수하므로, 상기 균주 또는 이의 배양액은 발효식품을 제조하는데에 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 내산성, 내당성 및 내알코올성 효과가 있는 유산균에 관한 것이다.
그람 양성균인 유산균은 포도당 또는 유당과 같은 탄수화물을 분해하여 유산(젖산)을 생성하는 박테리아로서 단백질을 분해하지만 부패시키는 능력은 없다. 지금까지 밝혀진 유산균은 300~400여 종 정도이며, 그 가운데 20여 종이 발효유 및 발효산업에 주로 이용되고 있다. 유산균은 자연계에 널리 분포되어 있으며, 인류의 생활과 직·간접적으로 밀접한 관계를 맺고 있는 유익한 균주이다.
유산균의 효능은 다양하다. 장내로 유입된 후 장내 상피세포에 착생해 유해 미생물의 장 정착을 방지하고 항균 물질을 분비함으로써, 유해 미생물의 생육을 억제하고 설사와 변비를 개선한다. 또한, 면역활성 증진, 항암작용, 혈청 콜레스테롤 저하 등의 활성을 갖는다. 게다가, 유산균은 직접 또는 간접적으로 식품에 첨가되어 이들의 대사 산물인 유산에 의해 식품의 저장성을 향상시키며 식품의 향미와 조직을 개선한다고 알려져 있다.
최근 채소나 과일과 같은 식물 또는 김치와 같은 과채류를 발효시킨 식품으로부터 분리된 식물유래 유산균들의 기능이 밝혀지면서 새로운 기능성 소재로 떠오르고 있다. 이러한 식물 유래 유산균들에는 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토바실러스 속이 포함된다. 식물 유래 유산균은 동물 유래 유산균들에 비해 영양 요구성이 덜 까다로워 배양이 용이하므로 발효액, 발효 음료 등과 같은 발효제품의 개발에 유용하게 이용될 수 있다. 대한민국 공개특허 제10-2015-0041519호에는 유산균인 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri)를 이용한 과즙 발효액의 제조방법이 공개되어 있다.
이에, 본 발명자들은 30종의 유산균 중에서 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수한 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주를 분리 및 동정함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은, 내산성, 내당성 및 내알코올성이 증진된 유산균을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 균주 또는 이의 배양액을 이용하여 제조된 발효식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 수탁번호 KACC 92153P로 기탁된 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 수탁번호 KACC 92154P로 기탁된 락토바실러스 브레비스 N41-12 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 수탁번호 KACC 92155P로 기탁된 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주를 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 이용하여 제조된 발효식품을 제공한다.
본 발명에 따른 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주는 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수함으로써, 상기 균주 또는 이의 배양액은 발효식품을 제조하기 위해 사용될 수 있다.
도 1은 MRS 고체배지에서 내당성을 가지는 유산균을 선별하기 위해 유산균의 생육 정도를 확인한 도이다.
도 2는 MRS 고체배지에서 1차적으로 내산성을 가지는 유산균을 선별하기 위해 유산균의 생육 정도를 확인한 도이다.
도 3은 MRS 고체배지에서 2차적으로 내산성을 가지는 유산균을 선별하기 위해 유산균의 생육 정도를 확인한 도이다.
도 4는 MRS 고체배지에서 내알코올성을 가지는 유산균을 선별하기 위해 유산균의 생육 정도를 확인한 도이다.
도 5는 내산성, 내당성 및 내알코올성이 증진된 유산균을 선별하는 전체적인 방법을 모식도로서 나타낸 도이다.
도 2는 MRS 고체배지에서 1차적으로 내산성을 가지는 유산균을 선별하기 위해 유산균의 생육 정도를 확인한 도이다.
도 3은 MRS 고체배지에서 2차적으로 내산성을 가지는 유산균을 선별하기 위해 유산균의 생육 정도를 확인한 도이다.
도 4는 MRS 고체배지에서 내알코올성을 가지는 유산균을 선별하기 위해 유산균의 생육 정도를 확인한 도이다.
도 5는 내산성, 내당성 및 내알코올성이 증진된 유산균을 선별하는 전체적인 방법을 모식도로서 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 수탁번호 KACC 92153P로 기탁된 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2 균주를 제공한다.
상기 균주는 pH가 4 내지 7, 구체적으로는 4 내지 5인 조건에서 성장하는 내산성 균주일 수 있다. 또한, 상기 균주는 당 농도가 10 내지 50%(w/w), 구체적으로는 30 내지 50%(w/w), 더욱 구체적으로는 40 내지 50%(w/w)인 조건에서 성장하는 내당성 균주일 수 있다. 또한, 상기 균주는 알코올 농도가 2 내지 8%(v/v), 구체적으로는 4 내지 8%(v/v)인 조건에서 성장하는 내알코올성 균주일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 먼저 30종의 유산균을 분리 및 동정하여 내당성을 가지는 12종의 유산균을 선별하였다(표 1 내지 3 및 도 1 참조).
상기 12종의 유산균을 이용해 내당성, 내산성 및 내알코올성 검정을 하여 내당성, 내산성 및 내알코올성이 우수한 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주를 선별하였다(표 4 내지 8 및 도 2 내지 4 참조).
또한, 본 발명은 수탁번호 KACC 92154P로 기탁된 락토바실러스 브레비스 N41-12 균주를 제공한다.
상기 균주는 pH가 4 내지 7, 구체적으로는 4 내지 5인 조건에서 성장하는 내산성 균주일 수 있다. 또한, 상기 균주는 당 농도가 10 내지 50%(w/w), 구체적으로는 30 내지 50%(w/w), 더욱 구체적으로는 40 내지 50%(w/w)인 조건에서 성장하는 내당성 균주일 수 있다. 또한, 상기 균주는 알코올 농도가 2 내지 8%(v/v), 구체적으로는 4 내지 8%(v/v)인 조건에서 성장하는 내알코올성 균주일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 먼저 30종의 유산균을 분리 및 동정하여 내당성을 가지는 12종의 유산균을 선별하였다(표 1 내지 3 및 도 1 참조).
상기 12종의 유산균을 이용해 내당성, 내산성 및 내알코올성 검정을 하여 내당성, 내산성 및 내알코올성이 우수한 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주를 선별하였다(표 4 내지 8 및 도 2 내지 4 참조).
또한, 본 발명은 수탁번호 KACC 92155P로 기탁된 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주를 제공한다.
상기 균주는 pH가 4 내지 7, 구체적으로는 4 내지 5인 조건에서 성장하는 내산성 균주일 수 있다. 또한, 상기 균주는 당 농도가 10 내지 50%(w/w), 구체적으로는 30 내지 50%(w/w), 더욱 구체적으로는 40 내지 50%(w/w)인 조건에서 성장하는 내당성 균주일 수 있다. 또한, 상기 균주는 알코올 농도가 2 내지 8%(v/v), 구체적으로는 4 내지 8%(v/v)인 조건에서 성장하는 내알코올성 균주일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 먼저 30종의 유산균을 분리 및 동정하여 내당성을 가지는 12종의 유산균을 선별하였다(표 1 내지 3 및 도 1 참조).
상기 12종의 유산균을 이용해 내당성, 내산성 및 내알코올성 검정을 하여 내당성, 내산성 및 내알코올성이 우수한 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주를 선별하였다(표 4 내지 8 및 도 2 내지 4 참조).
또한, 본 발명은 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 또는 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주 또는 이의 배양액을 이용하여 제조된 발효식품을 제공한다.
상기 균주는 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 본 발명의 균주를 이용한 발효식품은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 내당성, 내산성 및 내알코올성 검정을 하여 상기 균주가 내당성, 내산성 및 내알코올성이 우수함을 확인하였다(표 1 내지 8 및 도 1 내지 4 참조).
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
유산균의 분리 및 동정
10 g의 누룩(충북 진천군, 전북 완주군)을 90 ㎖의 0.85% NaCl 용액으로 현탁한 후, 100 ㎕의 상기 현탁액을 MRS 고체배지에 도말하여 37℃에서 48시간 동안 배양하였다. 배양된 미생물의 형태적 차이를 이용하여 1차 선별하고, 16S rRNA 유전자 염기서열 분석을 통해 선별된 분리균을 동정하였다. PCR을 통한 16S rRNA 유전자 염기서열 분석을 위해 프라이머는 16S rRNA의 유니버설 PCR 프라이머인 서열번호 1의 염기서열을 갖는 27F 프라이머(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') 및 서열번호 2의 염기서열을 갖는 1492R 프라이머(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3')를 사용하였다. PCR은 5분 동안 초기변성 후, 94℃에서 45초간 변성하고 55℃에서 60초간 어닐링하고 72℃에서 60초간 신장시키는 1 사이클로 하여 35회 수행하였다. PCR 산물의 염기서열은 ㈜제노셀에 의뢰하여 분석하였다.
그 결과, 하기 표 1과 같은 30종의 유산균을 분리 및 동정하였다(표 1).
| 구분 (NO.) |
분리 (Isolates) |
종(Species) |
| M1 | FMS02-84 | Leuconostoc mesenteroidessubsp . mesenteroides (류코노스톡 메센테로이데스 아종메센테로이데스) |
| M2 | K6-7 | Leuconostoc mesenteriodes(류코노스톡 메센테로이데스) |
| M3 | N2-2 | Pediococcus pentosaceus(페디오코커스 펜토사세우스) |
| M4 | N4-5 | Weissella cibaria(바이셀라 시바리아) |
| M5 | N7-3 | Leuconostoc citreum(류코노스톡 시트리움) |
| M6 | N8-2 | Leuconostoc mesenteroides(류코노스톡 메센테로이데스) |
| M7 | N8-3 | Pediococcus acidilactici(페디오코커스 악시딜락티시) |
| M8 | N13-4 | Lactobacillus brevis(락토바실러스 브레비스) |
| M9 | N13-5 | Lactobacillus plantarum(락토바실러스 플란타륨) |
| M10 | N15-4 | Pediococcus acidilactici(페디오코커스 악시딜락티시) |
| M11 | N17-5 | Pediococcus pentosaceus(페디오코커스 펜토사세우스) |
| M12 | N19-5 | Lactobacillus curvatus(락토바실러스 커바터스) |
| M13 | N19-9 | Lactobacillus plantarum(락토바실러스 플란타륨) |
| M14 | N20-6 | Lactobacillus sakei(락토바실러스 사케이) |
| M15 | N20-7 | Enterococcus durans(엔테로코커스 두란스) |
| M16 | N21-3 | Lactobacillus plantarum(락토바실러스 플란타륨) |
| M17 | N21-4 | Lactobacillus brevis(락토바실러스 브레비스) |
| M18 | N21-5 | Pediococcus pentosaceus(페디오코커스 펜토사세우스) |
| M19 | N22-6 | Lactobacillus curvatus(락토바실러스 커바터스) |
| M20 | N25-7 | Lactobacillus brevis(락토바실러스 브레비스) |
| M21 | N27-4 | Lactobacillus brevis(락토바실러스 브레비스) |
| M22 | N34-5 | Enterococcus faecium(엔테로코커스 페시움) |
| M23 | N35-3 | Pediococcus acidilactici(페디오코커스 악시딜락티시) |
| M24 | N36-3 | Lactobacillus coryniformis(락토바실러스 코리니포미스) |
| M25 | N41-12 | Lactobacillus brevis(락토바실러스 브레비스) |
| M@6 | N42-7 | Pediococcus pentosaceus(페디오코커스 펜토사세우스) |
| M27 | N43-11 | Lactobacillus coryniformis(락토바실러스 코리니포미스) |
| M28 | E2-4 | Lactobacillus rhamnosus(락토바실러스 람노서스) |
| M30 | E3-10 | Lactobacillus diolivorans(락토바실러스 디올리보란스) |
| M31 | E9-8 | Lactobacillus diolivorans(락토바실러스 디올리보란스) |
유산균의
내당성
검정
<2-1>
내당성을
가지는 유산균의 선별
<실시예 1>에서 분리 및 동정한 30종의 유산균 중에서 내당성을 가지는 유산균을 고체배지에서 선별하였다. 균주 선별을 위해 당으로는 설탕을 사용하였다.
구체적으로, 96웰 플레이트를 이용하여 당이 5, 10, 20, 30, 40, 50 또는 60%(w/w)의 농도로 첨가된 MRS 한천(BD) 배지를 만들었다. 한편, 30종의 유산균은 48시간 동안 MRS 액체배지에서 배양하여 준비하였다. 상기 배양액을 MRS 고체배지에 200 ㎕씩 분주하고, 37℃에서 48시간 동안 배양하면서 육안으로 균주의 생육 정도를 관찰하였다.
| 구분 (NO.) |
종(Species) |
당농도(%)(w/w) | |||||
| 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | ||
| FMS02-84 | 류코노스톡 메센테로이데스 아종메센테로이데스 |
||||||
| K6-7 | 류코노스톡 메센테로이데스 | ||||||
| N2-2 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N4-5 | 바이셀라 시바리아 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N7-3 | 류코노스톡 시트리움 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N8-2 | 류코노스톡 메센테로이데스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N8-3 | 페디오코커스 악시딜락티시 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N13-4 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N13-5 | 락토바실러스 플란타륨 | ||||||
| N15-4 | 페디오코커스 악시딜락티시 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N17-5 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N19-5 | 락토바실러스 커바터스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N19-9 | 락토바실러스 플란타륨 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N20-6 | 락토바실러스 사케이 | ||||||
| N20-7 | 엔테로코커스 두란스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N21-3 | 락토바실러스 플란타륨 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N21-4 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N21-5 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N22-6 | 락토바실러스 커바터스 | ||||||
| N25-7 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N27-4 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N34-5 | 엔테로코커스 페시움 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N35-3 | 페디오코커스 악시딜락티시 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N36-3 | 락토바실러스 코리니포미스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| N41-12 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| N42-7 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | ||
| N43-11 | 락토바실러스 코리니포미스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| E2-4 | 락토바실러스 람노서스 | +++++ | ++++ | +++ | |||
| E3-10 | 락토바실러스 디올리보란스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | + | |
| E9-8 | 락토바실러스 디올리보란스 | +++++ | ++++ | +++ | ++ | ||
그 결과, 표 2 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 페디오코커스 펜토사세우스 N2-2. 바이셀라 시바리아 N4-5, 류코노스톡 시트리움 N7-3, 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 페디오코커스 악시딜락티시 N8-3, 락토바실러스 브레비스 N13-4, 페디오코커스 악시딜락티시 N15-4, 페디오코커스 펜토사세우스 N17-5, 락토바실러스 브레비스 N41-12, 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7, 락토바실러스 디올리보란스 E3-10 및 락토바실러스 디올리보란스 E9-8 균주가 내당성을 가짐을 알 수 있었다(표 2 및 도 1).
<2-2>
내당성을
가지는 유산균의 생육 조건 확인
상기 실시예 <2-1>에서 선별된 내당성이 있는 12종의 유산균을 대상으로 액체배지에서의 생육 조건을 확인하였다. 균주의 생육 조건 확인을 위해 당으로 설탕을 사용하였다.
구체적으로, 상기 선별된 12종의 유산균을 48시간 동안 MRS 액체배지에서 배양하고 이중, 200 ㎕의 배양액을 5, 10, 20, 30, 40, 50 또는 60%(w/w) 농도의 당이 첨가된 MRS 액체배지 5 ㎖에 접종하였다. 이를 37℃에서 24시간 동안 배양한 후, 유산균 수를 측정하였다.
| 구분 (No.) |
유산균 수(logCFU/㎖) | ||||||
| 5%(w/w) 당농도 |
10%(w/w) 당농도 |
20%(w/w) 당농도 |
30%(w/w) 당농도 |
40%(w/w) 당농도 |
50%(w/w) 당농도 |
60%(w/w) 당농도 |
|
| N2-2 | 8.15±0.15 | 8.48±0.16 | 8.22±0.04 | 8.50±0.01 | 8.40±0.00 | 8.18±0.01 | 5.71±0.01 |
| N4-5 | 8.13±0.16 | 8.40±0.08 | 8.53±0.01 | 8.49±0.00 | 8.56±0.00 | 8.21±0.01 | 6.92±0.08 |
| N7-3 | 8.24±0.09 | 8.39±0.07 | 8.71±0.15 | 8.44±0.00 | 7.41±0.01 | 7.10±0.02 | 6.08±0.67 |
| N8-2 | 7.88±0.37 | 7.90±0.05 | 7.85±0.01 | 8.40±0.00 | 8.27±0.01 | 7.97±0.01 | 5.79±0.18 |
| N8-3 | 8.10±0.17 | 8.50±0.18 | 8.38±0.07 | 8.42±0.04 | 8.48±0.01 | 8.16±0.02 | 7.21±0.06 |
| N13-4 | 7.95±0.09 | 8.06±0.21 | 8.01±0.05 | 8.29±0.00 | 7.98±0.02 | 8.76±0.01 | 5.67±0.32 |
| N15-4 | 8.29±0.37 | 8.29±0.13 | 8.38±0.00 | 8.12±0.00 | 8.08±0.04 | 7.80±0.02 | 6.79±0.05 |
| N17-5 | 7.90±0.17 | 9.42±0.41 | 8.03±0.16 | 7.68±0.13 | 7.74±0.04 | 6.66±0.05 | 6.21±0.28 |
| N41-12 | 8.42±0.12 | 8.32±0.13 | 7.58±0.33 | 8.21±0.00 | 8.39±0.01 | 8.12±0.03 | 7.02±0.02 |
| N42-7 | 7.62±0.24 | 8.03±0.65 | 7.62±0.26 | 7.92±0.00 | 7.74±0.04 | 7.33±0.14 | 5.55±0.06 |
| E3-10 | 8.48±0.30 | 7.83±0.97 | 8.23±0.19 | 8.18±0.20 | 8.22±0.02 | 7.61±0.14 | 5.25±0.09 |
| E9-8 | 8.16±0.12 | 8.13±0.37 | 8.26±0.21 | 8.38±0.29 | 8.26±0.01 | 7.73±0.18 | 5.64±0.14 |
그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 40%(w/w) 농도의 당이 포함된 배지에서는 유산균이 정상적으로 성장하였으나, 50%(w/w) 농도 이상의 당이 포함된 배지에서는 유산균의 성장이 다소 저해되었다(표 3).
<2-3>
내당성이
우수한 유산균 균주의 선별
상기 실시예 <2-1>에서 선별된 12종의 유산균 중에서, 중복되는 3종의 유산균을 제외한 9종의 유산균을 착즙기(HD-DBF09, 휴럼)를 이용해 제조한 오디 착즙액에서 배양하여 유산균의 생육을 비교하였다.
| 구분(NO.) | 종(Species) |
| N2-2 | 페디오코커스 펜토사세우스 |
| N4-5 | 바이셀라 시바리아 |
| N7-3 | 류코노스톡 시트리움 |
| N8-2 | 류코노스톡 메센테로이데스 |
| N8-3 | 페디오코커스 악시딜락티시 |
| N13-4 | 락토바실러스 브레비스 |
| N17-5 | 페디오코커스 펜토사세우스 |
| N41-12 | 락토바실러스 브레비스 |
| E3-10 | 락토바실러스 디올리보란스 |
구체적으로, 상기 표 4에 기재된 바와 같은 9종의 유산균을 48시간 동안 MRS 액체 배지에서 배양한 후, 200 ㎕의 배양액을 당의 농도를 30%(w/w) 또는 50%(w/w)로 조절한 오디 착즙액 10 ㎖에 접종하였다. 이를 37℃에서 배양하면서 2일 및 6일째에 유산균의 수를 측정하였다.
| 구분 (NO.) |
종(Species) |
유산균 수(logCFU/㎖) | |||
| 2일 | 6일 | ||||
| 30% 당농도 | 50% 당농도 | 30% 당농도 | 50% 당농도 | ||
| N4-5 | 바이셀라 시바리아 | 7.65±0.13 | 5.26±0.01 | 7.26±0.00 | ND |
| N8-3 | 페디오코커스 악시딜락티시 | 7.73±0.05 | 5.73±0.25 | 8.86±0.05 | ND |
| N17-5 | 페디오코커스 펜토사세우스 | 7.02±0.09 | 5.05±0.08 | 5.36±0.51 | ND |
| N41-12 | 락토바실러스 브레비스 | 7.66±0.01 | 5.39±0.07 | 0.00±0.00 | ND |
그 결과, 표 5에 나타낸 바와 같이, 바이셀라 시바리아 N4-5 , 페디오코커스 악시딜락티시 N8-3, 페디오코커스 펜토사세우스 N17-5 및 락토바실러스 브레비스 N41-12 균주가 당도가 높은 조건에서도 생육이 우수하였다(표 5).
내산성을
갖는 유산균의 선별
실시예 <2-1>에서 선별된 12종의 유산균을 대상으로 내산성을 가지는 유산균을 고체배지에서 선별하였다.
구체적으로, 96웰 플레이트를 이용하여 NaOH 용액을 희석해 pH를 4, 5, 6, 7로 조정하여 MRS 한천(BD) 배지를 제조하였다. 한편, 실시예 <2-1>에서 선별된 12종의 유산균은 48시간 동안 MRS 액체배지에서 배양한 후, 배양액을 상기 플레이트에 200 ㎕씩 분주하였다. 각각의 균주는 7번 반복해서 배지에 스팟팅하였다. 이를 37℃에서 2일 동안 배양하면서 육안으로 균주의 생육 정도를 관찰하여 6종의 유산균을 선별하였다.
| 구분(NO.) |
종(Species) |
pH | |||
| 7 | 6 | 5 | 4 | ||
| N2-2 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | +++++ | +++ | + |
| N4-5 | 바이셀라 시바리아 | +++++ | +++++ | +++ | + |
| N7-3 | 류코노스톡 시트리움 | +++++ | +++++ | ++ | ++ |
| N8-2 | 류코노스톡 메센테로이데스 | +++++ | +++++ | ++ | ++ |
| N8-3 | 페디오코커스 악시딜락티시 | +++++ | +++++ | ++ | + |
| N13-4 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | +++++ | ++ | ++ |
| N15-4 | 페디오코커스 악시딜락티시 | +++++ | +++++ | ++ | + |
| N17-5 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | +++++ | ++ | + |
| N41-12 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | +++++ | ++++ | +++ |
| N42-7 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | +++++ | +++ | + |
| E3-10 | 락토바실러스 디올리보란스 | +++++ | +++++ | +++ | + |
| E9-8 | 락토바실러스 디올리보란스 | +++++ | +++++ | +++ | + |
그 결과, 표 6, 도 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 내산성을 가지는 균주로서 류코노스톡 시트리움 N7-3, 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N13-4, 락토바실러스 브레비스 N41-12, 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7, 락토바실러스 디올리보란스 E9-8 균주를 1차 선별하였다.
선별된 6종의 균주를 pH 4 및 pH 7 배지에서 재배양하여 육안으로 균주의 생육 정도를 관찰해 3종의 유산균을 2차 선별하였다. 각각의 균주는 7번 반복해서 배지에 스팟팅하였다.
그 결과, 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주가 최종 선정되었다(표 6, 도 2 및 도 3). 상기 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2 균주는 수탁번호 KACC 92153P, 락토바실러스 브레비스 N41-12 균주는 수탁번호 KACC 92154P, 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주는 KACC 92155P로서 한국농업미생물자원센터(KACC)에 기탁하였다.
내알코올성을
가지는 유산균의 선별
상기 실시예 <2-1>에서 선별된 12종의 유산균을 대상으로 내알코올성을 가지는 유산균을 선별하였다.
먼저, 에틸 알코올(Fisher)을 2%(v/v), 4%(v/v) 또는 8%(v/v) 농도로 첨가하여, MRS 한천(BD) 배지를 만들었다. 한편, 상기 실시예 <2-1>에서 선별된 12종의 유산균을 48시간 동안 MRS 액체배지에서 배양한 후, 이를 상기 고체배지에 200 ㎕씩 분주하였다. 접종한 균주를 37℃에서 2일 동안 배양하면서, 육안으로 균주의 생육 정도를 관찰하였다. 각각의 균주는 7번 반복해서 배지에 스팟팅하였다.
| 구분(NO.) |
종(Species) |
알코올(%) | |||
| 0 | 2 | 4 | 8 | ||
| N2-2 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | ++++/+++ | +++/+++ | ++/+ |
| N4-5 | 바이셀라 시바리아 | +++++ | ++++/+++ | +++/++ | +/+ |
| N7-3 | 류코노스톡 시트리움 | +++++ | ++++/+++ | +++/+++ | ++/+ |
| N8-2 | 류코노스톡 메센테로이데스 | +++++ | ++++/+++ | +++/+++ | ++/+ |
| N8-3 | 페디오코커스 악시딜락티시 | +++++ | +++/+++ | ++/+++ | ++/+ |
| N13-4 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | +++/++++ | +++/+++ | ++/++ |
| N15-4 | 페디오코커스 악시딜락티시 | +++++ | +++/+++ | ++/+++ | ++/+ |
| N17-5 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | ++++/+++ | +++/+++ | ++/+ |
| N41-12 | 락토바실러스 브레비스 | +++++ | +++/+++ | ++/+++ | +/+ |
| N42-7 | 페디오코커스 펜토사세우스 | +++++ | ++++/++++ | +++/+++ | ++/+ |
| E3-10 | 락토바실러스 디올리보란스 | +++++ | ++++/++++ | +++/+++ | ++/++ |
| E9-8 | 락토바실러스 디올리보란스 | +++++ | ++++/++++ | +++/+++ | ++/++ |
/를 기준으로 왼쪽은 1차 선별 결과이고, 오른쪽은 2차 선별 결과를 의미함.
그 결과, 표 7 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 내알코올성을 가지는 유산균은 페디오코커스 펜토사세우스 N2-2, 류코노스톡 시트리움 N7-3, 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주임을 확인하였다(표 7 및 도 4).
내알코올성이
우수한
유산균 균주의 선별
상기 <실시예 4>에서 선별된 내알코올성을 가지는 유산균을 알코올이 포함된 오디 착즙액에서 배양하여 유산균의 생육을 비교하였다.
구체적으로, <실시예 4>에서 선별된 내알코올성을 가지는 유산균을 48시간 동안 MRS 액체배지에서 배양한 후, 200 ㎕의 배양액을 0%(v/v) 또는 4%(v/v)의 알코올을 포함하는 오디 착즙액 10 ㎖에 접종하였다. 이를 37℃에서 배양하면서 2일 및 6일째에 유산균 수를 측정하였다.
| 구분 (NO.) |
종(Species) |
유산균 수(logCFU/㎖) | |||
| 2일 | 6일 | ||||
| 0% 알코올농도 |
4% 알코올농도 |
0% 알코올농도 |
4% 알코올농도 |
||
| N8-2 | 류코노스톡 메센테로이데스 | 8.05±0.10 | 9.57±0.03 | TNTC | 8.85±0.17 |
| N41-12 | 락토바실러스 브레비스 | 7.96±0.02 | 8.06±0.05 | ND | 8.01±0.41 |
| N42-7 | 페디오코커스 펜토사세우스 | 8.21±0.11 | 9.40±0.08 | TNTC | 8.23±0.14 |
TNTC(too numerous to count): 샐 수 없을 만큼 많은 유산균 수
ND(not ditect): 측정되지 않는 유산균 수
그 결과, 표 8에 나타낸 바와 같이, 알코올 함량에 따라 유산균의 성장에 차이가 있었으며, 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주가 우수한 내알코올성을 나타내었다(표 8).
상기로부터, 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2, 락토바실러스 브레비스 N41-12 및 페디오코커스 펜토사세우스 N42-7 균주가 내당성, 내산성 및 내알코올성이 우수함을 확인하였다.
<110> Rural Development Administration
<120> THE ACID, SUGAR AND ALCOHOL RESISTANCE LACTIC ACID BACTERIA
<130> 2016P-10-041
<160> 2
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 27F primer
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1492R primer
<400> 2
ggttaccttg ttacgactt 19
Claims (10)
- 수탁번호 KACC 92153P로 기탁된 류코노스톡 메센테로이데스 N8-2 균주.
- 삭제
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 균주는 내산성인 균주.
- 제 4항에 있어서, 상기 균주는 pH가 4 내지 7인 조건에서 성장하는 균주.
- 제 1항에 있어서, 상기 균주는 내당성인 균주.
- 제 6항에 있어서, 상기 균주는 당 농도가 10 내지 50%(w/w)인 조건에서 성장하는 균주.
- 제 1항에 있어서, 상기 균주는 내알코올성인 균주.
- 제 8항에 있어서, 상기 균주는 알코올 농도가 2 내지 8%(v/v)인 조건에서 성장하는 균주.
- 제 1항의 균주 또는 이의 배양액을 이용하여 제조된 발효식품.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020160154098A KR101859679B1 (ko) | 2016-11-18 | 2016-11-18 | 내산성, 내당성 및 내알코올성 유산균 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020160154098A KR101859679B1 (ko) | 2016-11-18 | 2016-11-18 | 내산성, 내당성 및 내알코올성 유산균 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR101859679B1 true KR101859679B1 (ko) | 2018-05-25 |
Family
ID=62299685
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020160154098A KR101859679B1 (ko) | 2016-11-18 | 2016-11-18 | 내산성, 내당성 및 내알코올성 유산균 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101859679B1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210065781A (ko) | 2019-11-27 | 2021-06-04 | 주식회사 내츄럴코어 | 블루베리 발효추출물 및 그 제조방법 |
-
2016
- 2016-11-18 KR KR1020160154098A patent/KR101859679B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 백성열. 2016.06.25.공개, 발효식품용 종균 활용을 위한 효모와 세균의 선발 및 자원 풀 구축, 국립농업과학원. |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210065781A (ko) | 2019-11-27 | 2021-06-04 | 주식회사 내츄럴코어 | 블루베리 발효추출물 및 그 제조방법 |
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