KR101843432B1 - 소 미토콘드리아 dna의 단일염기다형성 마커를 포함하는 소 개체 및 품종 식별용 조성물, 및 이를 이용하는 소의 식별 방법 - Google Patents

Abstract

서열번호 1로 표시되는 소 미토콘드리아 DNA의 총 57개의 단일염기다형성(single nucleotide Polymorphism, SNP)를 이용하여 소의 개체 및 품종 식별용 조성물 및 이를 이용하는 소의 식별 방법에 관한 것이다. 상기한 본 발명에 의하면, 보다 신속, 정확하고 경제적으로 소의 품종 및 개체 및 식별을 할 수 있는 이점이 있다.

Description

소 미토콘드리아 DNA의 단일염기다형성 마커를 포함하는 소 개체 및 품종 식별용 조성물, 및 이를 이용하는 소의 식별 방법{Composition comprising SNP genetic marker of cow mitochondria DNA for discriminating cow breed and cow discrimination method using the same}

본 발명은 소 미토콘드리아 DNA의 단일염기다형성 마커를 포함하는 소 개체 및 품종 식별용 조성물, 및 이를 이용하는 소의 식별 방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게 본 발명은 소 미토콘드리아 DNA의 총 57개의 SNP를 이용하여 소의 개체 및 품종식별을 위한 단일염기다형성(single nucleotide Polymorphism, SNP) 유전자 마커 개발에 관한 것으로 SNP 좌위를 이용하여, 보다 신속, 정확하고 경제적으로 소의 개체 및 품종 식별을 할 수 있는 소 개체 및 품종 식별용 조성물 및 이를 이용하는 소의 식별 방법에 관한 것이다.

최근에는 축산물의 품질을 제고하기 위하여, 한우 유전자(DNA) 검사를 확대하고 있으며, 한우 젖소고기 감별검사(MC1R법), 한우·비한우 감별검사(MS법) 및 쇠고기 이력제 DNA 동일성 검사 등이 시행되고 있다.

한우 젖소고기 감별검사(MC1R법, Melanocortin 1 receptor)는 소의 모색관련 유전자를 이용하여 PCR-RFLP법 또는 SNP-PCR법으로 판별하는 시험법으로 한우형(TT)과 젖소형(CT, CC)을 판별하는 방법이다. 그러나, 수입종 중 일부는 한우와 유사한 모색 유전자형이 존재하므로 한우와 수입쇠고기의 판별이 불가능한 단점이 있다.

한우와 비한우 유전자 감별검사(MS법)는 DNA 추출 등의 과정을 거쳐 그간 개발된 한우 판별 DNA 마커를 이용하여 한우와 비한우를 판별하는 검사법으로 초위성체 마커 45종에 대한 개별 시료의 유전자형을 알아내고, Reference genotype DB를 기준으로 개체별 유전자형 값을 분석하여 한우와 비한우를 식별한다.

쇠고기 이력제 DNA 동일성 검사(MS법)은 소의 개체마다 유전자(DNA) 구조가 다르다는 점을 이용하여 개체식별번호가 부여된 소 또는 개체 식별 쇠고기로부터 채취한 시료에 대해 유전자 검사를 실시하여 동일개체 여부 및 어미소와 송아지의 친자감별을 확인하는 검사법이다.

본 발명의 배경기술로는 대한민국 특허 제10-2007-0100513호에 초위성체 좌위를 이용한 한우 및 수입우를 판별하는 방법에 관하여 기재되어 있다.

본 발명의 목적은 소의 미토콘드리아 DNA에서 얻은 총 57개의 SNP 마커를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 소의 미토콘드리아 DNA에서 얻은 저지의 특이적인 SNP 마커 1종, 한우의 특이적인 SNP 마커 8종, 앵거스의 특이적인 SNP 마커 35종 및 홀스타인 특이적인 SNP 마커 3종 중 1 이상의 SNP 마커를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 소 미토콘드리아 DNA에서 얻은 상기 SNP 마커를 포함하는 조성물을 이용한 소의 개체 및 품종 식별 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 측면에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자(Sequence ID: gb|AY526085.1)의 8번째 염기는 G 또는 A이고, 39번째 염기는 C 또는 T이고, 106번째 염기는 T 또는 C이고, 166번째 염기는 A 또는 G이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 173번째 염기는 A 또는 G이고, 174번째 염기는 C 또는 T이고, 206번째 염기는 T 또는 C이고, 231번째 염기는 A 또는 C이고, 232번째 염기는 T 또는 C이고, 233번째 염기는 T 또는 C이고, 248번째 염기는 C 또는 T이고, 249번째 염기는 T 또는 C이고, 296번째 염기는 T 또는 C이고, 300번째 염기는 G 또는 A이고, 352번째 염기는 C 또는 G이고, 15807번째 염기는 G 또는 A이고, 15818번째 염기는 G 또는 A이고, 15948번째 염기는 A 또는 G이고, 15951번째 염기는 T 또는 C이고, 15953번째 염기는 C 또는 G이고, 15959번째 염기는 G 또는 A이고, 15994번째 염기는 A 또는 G이고, 16022번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16049번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16058번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16082번째 염기는 G 또는 A이고, 16084번째 염기는 C 또는 T이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16102번째 염기는 G 또는 A이고, 16109번째 염기는 T 또는 C이고, 16113번째 염기는 T 또는 C이고, 16116번째 염기는 T 또는 C이고, 16117번째 염기는 G 또는 A이고, 16119번째 염기는 T 또는 C이고, 16121번째 염기는 G 또는 A이고, 16122번째 염기는 T 또는 C이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16137번째 염기는 T 또는 C이고, 16138번째 염기는 T 또는 C이고, 16143번째 염기는 A 또는 G이고, 16147번째 염기는 T 또는 C이고, 16185번째 염기는 G 또는 A이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16229번째 염기는 A 또는 G이고, 16231번째 염기는 C 또는 T이고, 16247번째 염기는 C 또는 T이고, 16248번째 염기는 C 또는 T이고, 16250번째 염기는 A 또는 G이고, 16253번째 염기는 A 또는 G이고, 16255번째 염기는 T 또는 C이고, 16272번째 염기는 T 또는 G이고, 16302번째 염기는 G 또는 A인, 상기 8, 39, 106, 166, 169, 173, 174, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300, 352, 15807, 15818, 15948, 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16042, 16049, 16057, 16058, 16074, 16082, 16084, 16093, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16122, 16130, 16137, 16138, 16143, 16147, 16185, 16196, 16209, 16229, 16231, 16247, 16248, 16250, 16253, 16255, 16272 및 16302번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 8번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16250번째 염기는 A 또는 G이고, 16253번째 염기는 A 또는 G이고, 상기 8, 16042, 16074, 16093, 16250 및 16253번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 169번째 염기는 A 또는 G이고, 174번째 염기는 C 또는 T이고, 15807번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16122번째 염기는 T 또는 C이고, 16185번째 염기는 G 또는 A이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16255번째 염기는 T 또는 C이고, 16272번째 염기는 T 또는 G이고, 16302번째 염기는 G 또는 A인, 상기 169, 174, 15807, 16042, 16057, 16093, 16122, 16185, 16209, 16255, 16272 및 16302번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 8번째 염기는 G 또는 A이고, 39번째 염기는 C 또는 T이고, 106번째 염기는 T 또는 C이고, 166번째 염기는 A 또는 G이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 173번째 염기는 A 또는 G이고, 206번째 염기는 T 또는 C이고, 231번째 염기는 A 또는 C이고, 232번째 염기는 T 또는 C이고, 233번째 염기는 T 또는 C이고, 248번째 염기는 C 또는 T이고, 249번째 염기는 T 또는 C이고, 296번째 염기는 T 또는 C이고, 300번째 염기는 G 또는 A이고, 15951번째 염기는 T 또는 C이고, 15953번째 염기는 C 또는 G이고, 15959번째 염기는 G 또는 A이고, 15994번째 염기는 A 또는 G이고, 16022번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16049번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16058번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16082번째 염기는 G 또는 A이고, 16084번째 염기는 C 또는 T이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16102번째 염기는 G 또는 A이고, 16109번째 염기는 T 또는 C이고, 16113번째 염기는 T 또는 C이고, 16116번째 염기는 T 또는 C이고, 16117번째 염기는 G 또는 A이고, 16119번째 염기는 T 또는 C이고, 16121번째 염기는 G 또는 A이고, 16122번째 염기는 T 또는 C이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16137번째 염기는 T 또는 C이고, 16138번째 염기는 T 또는 C이고, 16143번째 염기는 A 또는 G이고, 16147번째 염기는 T 또는 C이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16229번째 염기는 A 또는 G이고, 16247번째 염기는 C 또는 T이고, 16248번째 염기는 C 또는 T이고, 16250번째 염기는 A 또는 G인, 상기 8, 39, 106, 166, 169, 173, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300, 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16042, 16049, 16057, 16058, 16074, 16082, 16084, 16093, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16122, 16130, 16137, 16138, 16143, 16147, 16196, 16229, 16247, 16248 및 16250번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 106번째 염기는 T 또는 C이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 352번째 염기는 C 또는 G이고, 15948번째 염기는 A 또는 G이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16231번째 염기는 C 또는 T이고, 16250번째 염기는 A 또는 G인, 상기 106, 169, 352, 15948, 16042, 16074, 16093, 16130, 16196, 16231 및 16250번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 16253번째 염기는 A 또는 G인, 상기 16253번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 174번째 염기는 C 또는 T이고, 15807번째 염기는 G 또는 A이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16185번째 염기는 G 또는 A이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16255번째 염기는 T 또는 C이고, 16272번째 염기는 T 또는 G이고, 16302번째 염기는 G 또는 A인, 상기 174, 15807, 16057, 16185, 16209, 16255, 16272 및 16302번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 39번째 염기는 C 또는 T이고, 166번째 염기는 A 또는 G이고, 173번째 염기는 A 또는 G이고, 206번째 염기는 T 또는 C이고, 231번째 염기는 A 또는 C이고, 232번째 염기는 T 또는 C이고, 233번째 염기는 T 또는 C이고, 248번째 염기는 C 또는 T이고, 249번째 염기는 T 또는 C이고, 296번째 염기는 T 또는 C이고, 300번째 염기는 G 또는 A이고, 15951번째 염기는 T 또는 C이고, 15953번째 염기는 C 또는 G이고, 15959번째 염기는 G 또는 A이고, 15994번째 염기는 A 또는 G이고, 16022번째 염기는 G 또는 A이고, 16049번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16058번째 염기는 C 또는 T이고, 16082번째 염기는 G 또는 A이고, 16084번째 염기는 C 또는 T이고, 16102번째 염기는 G 또는 A이고, 16109번째 염기는 T 또는 C이고, 16113번째 염기는 T 또는 C이고, 16116번째 염기는 T 또는 C이고, 16117번째 염기는 G 또는 A이고, 16119번째 염기는 T 또는 C이고, 16121번째 염기는 G 또는 A이고, 16137번째 염기는 T 또는 C이고, 16138번째 염기는 T 또는 C이고, 16143번째 염기는 A 또는 G이고, 16147번째 염기는 T 또는 C이고, 16229번째 염기는 A 또는 G이고, 16247번째 염기는 C 또는 T이고, 16248번째 염기는 C 또는 T인, 상기 39, 166, 173, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300, 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16049, 16057, 16058, 16082, 16084, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16137, 16138, 16143, 16147, 16229, 16247, 및 16248번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 352번째 염기는 C 또는 G이고, 15948번째 염기는 A 또는 G이고, 16231번째 염기는 C 또는 T인, 상기 352, 15948 및 16231번째 염기 중 1이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 조성물은 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 1 이상을 식별할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 조성물은 친자 감별이 가능할 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기 SNP 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 키트가 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 대상 시료에서 핵산을 분리하는 단계; 상기 분리된 핵산을 주형으로 하고, 상기 SNP 마커를 증폭시키기 위한 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하는 단계; 및 상기 증폭된 산물을 정제하여 염기서열을 분석하는 단계를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별 방법이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 방법은 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 1 이상을 식별할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 방법은 친자 감별이 가능할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 소의 미토콘드리아 DNA에서 얻은 총 57개의 SNP 마커를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물을 제공할 수 있어 보다 신속,정확하고 경제적으로 소의 개체 및 품종 식별을 할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 소의 미토콘드리아 DNA에서 얻은 저지의 특이적인 SNP 마커 1종, 한우의 특이적인 SNP 마커 8종, 앵거스의 특이적인 SNP 마커 35종 및 홀스타인 특이적인 SNP 마커 3종 중 1 이상의 SNP 마커를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 SNP 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 키트를 제공할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 소 미토콘드리아 DNA에서 얻은 상기 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함하는 조성물을 이용하여 보다 신속, 정확하고 경제적인 개체 및 품종 식별 방법을 제공하는 것이다.

도 1a 내지 도 1g는 본 발명의 일 실시예에 의한 서열번호 1의 염기서열 및 SNP 마커 위치를 나타낸다.

본 발명을 더 쉽게 이해하기 위해 편의상 특정 용어를 본원에 정의한다. 본원에서 달리 정의하지 않는 한, 본 발명에 사용된 과학 용어 및 기술 용어들은 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥상 특별히 지정하지 않는 한, 단수 형태의 용어는 그것의 복수 형태도 포함하는 것이며, 복수 형태의 용어는 그것의 단수 형태도 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명에서 사용되는 대표적인 용어에 대한 정의는 이하와 같다.

본 발명에서 사용되는 용어 “Nucleotide polymorphism)”는 단일 염기 다형성을 의미하는 것으로, SNP는 세포핵 속의 염색체가 갖고 있는 30억 개의 염기 서열 중 개인의 편차를 나타내는 한개 또는 수십 개의 염기변이를 말하며, 이로 인해 표현형, 약제에 대한 반응성 및 질병에 대한 내성 등의 차이가 발생한다.

본 발명에서 사용되는 용어 “는 미토콘드리아 DNA 염기서열 가운데 위치한 영역을 의미하며, 미토콘드리아의 전사와 복제는 D-loop에서 일어난다. 이 영역은 유전적 다형성이 높게 존재하여 생물학적 특성 및 법의학적 이용 뿐 아니라 인류학적 연구에도 활용되고 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 “프라이머”는 짧은 자유 3' 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 염기 서열로 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 폴리머레이즈 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오시드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. PCR 증폭을 실시하여 원하는 생성물의 생성 여부를 통해 소의 개체 및 품종 식별을 할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자(Sequence ID: gb|AY526085.1)의 8번째 염기는 G 또는 A이고, 39번째 염기는 C 또는 T이고, 106번째 염기는 T 또는 C이고, 166번째 염기는 A 또는 G이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 173번째 염기는 A 또는 G이고, 174번째 염기는 C 또는 T이고, 206번째 염기는 T 또는 C이고, 231번째 염기는 A 또는 C이고, 232번째 염기는 T 또는 C이고, 233번째 염기는 T 또는 C이고, 248번째 염기는 C 또는 T이고, 249번째 염기는 T 또는 C이고, 296번째 염기는 T 또는 C이고, 300번째 염기는 G 또는 A이고, 352번째 염기는 C 또는 G이고, 15807번째 염기는 G 또는 A이고, 15818번째 염기는 G 또는 A이고, 15948번째 염기는 A 또는 G이고, 15951번째 염기는 T 또는 C이고, 15953번째 염기는 C 또는 G이고, 15959번째 염기는 G 또는 A이고, 15994번째 염기는 A 또는 G이고, 16022번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16049번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16058번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16082번째 염기는 G 또는 A이고, 16084번째 염기는 C 또는 T이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16102번째 염기는 G 또는 A이고, 16109번째 염기는 T 또는 C이고, 16113번째 염기는 T 또는 C이고, 16116번째 염기는 T 또는 C이고, 16117번째 염기는 G 또는 A이고, 16119번째 염기는 T 또는 C이고, 16121번째 염기는 G 또는 A이고, 16122번째 염기는 T 또는 C이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16137번째 염기는 T 또는 C이고, 16138번째 염기는 T 또는 C이고, 16143번째 염기는 A 또는 G이고, 16147번째 염기는 T 또는 C이고, 16185번째 염기는 G 또는 A이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16229번째 염기는 A 또는 G이고, 16231번째 염기는 C 또는 T이고, 16247번째 염기는 C 또는 T이고, 16248번째 염기는 C 또는 T이고, 16250번째 염기는 A 또는 G이고, 16253번째 염기는 A 또는 G이고, 16255번째 염기는 T 또는 C이고, 16272번째 염기는 T 또는 G이고, 16302번째 염기는 G 또는 A인, 상기 8, 39, 106, 166, 169, 173, 174, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300, 352, 15807, 15818, 15948, 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16042, 16049, 16057, 16058, 16074, 16082, 16084, 16093, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16122, 16130, 16137, 16138, 16143, 16147, 16185, 16196, 16209, 16229, 16231, 16247, 16248, 16250, 16253, 16255, 16272 및 16302번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물이 제공된다.

상기 미토콘드리아는 세포 소기관 중의 하나로 에너지원인 ATP를 생산 및 기능이 상실된 세포에 대해 아팝토시스(apoptosis)의 역할을 하며, 당과 지방산의 산화 및 이에 수반하는 산화적 인산화에 중심적인 역할을 한다. 미토콘드리아는 고유의 DNA가 존재하고, 모계유전을 하기 때문에 개체 및 품종 식별 뿐 아니라 친자감별도 가능하다.

본 발명은 개체 및 품종을 식별하기 위해 미토콘드리아 DNA(mt DNA)의 D-loop 영역 내 특이적인 염기 변이를 확인하고, 이를 이용하여 소의 개체 및 품종의 식별 및 친자 감별에 이용할 수 있는 SNP 마커를 포함하는 조성물 및 이를 이용한 소의 개체 및 품종 식별방법을 완성하였다.

본 발명의 발명자들은 한우와 해외품종 소에서의 각각 품종별로 특이적인 SNP 발견하기 위해, 저지, 한우, 앵거스, 샤롤레, 홀스타인 각각 8두를 이용하여 소 mtDNA D-loop 부분의 총 57종의 SNP를 선정하였다(도 1a 내지 도 1g).

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 8번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16250번째 염기는 A 또는 G이고, 16253번째 염기는 A 또는 G이고, 상기 8, 16042, 16074, 16093, 16250 및 16253번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드인 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

상기 검색된 총 57종의 SNP 중 저지 8두는 8, 16042, 16074, 16093, 16250 및 16253번째 염기를 포함하는 총 6개의 위치에서 변이가 발견되었다. 그 중 16253번째에서 2두가 다른 품종에는 없는 저지 특이적인 1종의 SNP를 나타내었다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 저지의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 169번째 염기는 A 또는 G이고, 174번째 염기는 C 또는 T이고, 15807번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16122번째 염기는 T 또는 C이고, 16185번째 염기는 G 또는 A이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16255번째 염기는 T 또는 C이고, 16272번째 염기는 T 또는 G이고, 16302번째 염기는 G 또는 A인, 상기 169, 174, 16042, 16057, 16093, 16122, 16185, 16209, 16255, 16272 및 16302번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

상기 검색된 총 57종의 SNP 중 한우 8두는 169, 174, 15807, 16042, 16057, 16093, 16122, 16185, 16209, 16255, 16272, 16302번째 염기 총 12개의 위치에서 변이가 발견되었다. 다른 품종에는 없는 한우의 특이적인 총 8종의 SNP는 174, 15807, 16209, 16272 및 16302에서 1두씩 그리고 16057, 16185, 16255에서 각각 2두씩 발견되었다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 한우의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 8번째 염기는 G 또는 A이고, 39번째 염기는 C 또는 T이고, 106번째 염기는 T 또는 C이고, 166번째 염기는 A 또는 G이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 173번째 염기는 A 또는 G이고, 206번째 염기는 T 또는 C이고, 231번째 염기는 A 또는 C이고, 232번째 염기는 T 또는 C이고, 233번째 염기는 T 또는 C이고, 248번째 염기는 C 또는 T이고, 249번째 염기는 T 또는 C이고, 296번째 염기는 T 또는 C이고, 300번째 염기는 G 또는 A이고, 15951번째 염기는 T 또는 C이고, 15953번째 염기는 C 또는 G이고, 15959번째 염기는 G 또는 A이고, 15994번째 염기는 A 또는 G이고, 16022번째 염기는 G 또는 A이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16049번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16058번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16082번째 염기는 G 또는 A이고, 16084번째 염기는 C 또는 T이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16102번째 염기는 G 또는 A이고, 16109번째 염기는 T 또는 C이고, 16113번째 염기는 T 또는 C이고, 16116번째 염기는 T 또는 C이고, 16117번째 염기는 G 또는 A이고, 16119번째 염기는 T 또는 C이고, 16121번째 염기는 G 또는 A이고, 16122번째 염기는 T 또는 C이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16137번째 염기는 T 또는 C이고, 16138번째 염기는 T 또는 C이고, 16143번째 염기는 A 또는 G이고, 16147번째 염기는 T 또는 C이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16229번째 염기는 A 또는 G이고, 16247번째 염기는 C 또는 T이고, 16248번째 염기는 C 또는 T이고, 16250번째 염기는 A 또는 G인, 상기 8, 39, 106, 166, 169, 173, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300, 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16042, 16049, 16057, 16058, 16074, 16082, 16084, 16093, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16122, 16130, 16137, 16138, 16143, 16147, 16196, 16229, 16247, 16248 및 16250번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상의 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

상기 검색된 총 57종의 SNP 중 앵거스 8두는 position 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16042, 16049, 16057, 16058, 16074, 16082, 16084, 16093, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16122, 16130, 16137, 16138, 16143, 16147, 16196, 16229, 16247, 16248, 16250, 8, 39, 106, 166, 169, 173, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300 총 45개의 position에서 변이가 발견되었다. 그중 position 15953, 16022, 16057, 16058, 16082, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16137, 16138, 16143, 16229, 16247, 16248, 39, 231에서 1두씩, 그리고 15951, 15959, 15994, 16049, 16084, 16102, 16121, 16147, 233에서 2두, 166, 173, 206, 232, 248, 249, 296, 300에서 3두씩 다른 품종에는 없는 앵거스의 특이적인 35종의 SNP가 발견되었다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 앵거스의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 106번째 염기는 T 또는 C이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 352번째 염기는 C 또는 G이고, 15948번째 염기는 A 또는 G이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16231번째 염기는 C 또는 T이고, 16250번째 염기는 A 또는 G인, 상기 106, 169, 352, 15948, 16042, 16074, 16093, 16130, 16196, 16231 및 16250번째 염기 중 1 이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상의 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다.

상기 검색된 총 57종의 SNP 중 샤롤레 8두는 특별히 발견된 SNP가 없었다. 홀스타인 8두는 position 15948, 16042, 16074, 16093, 16130, 16196, 16231, 16250, 106, 169, 352 총 11개의 position에서 변이가 발견되었다. 다른 품종에는 없는 홀스타인의 특이적인 3종의 SNP는 position 15948, 16231, 352에서 각 1두씩 발견되었다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 홀스타인의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 16253번째 염기는 A 또는 G인, 상기 16253번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상의 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다. 이는 상기 저지 품종의 특이적인 1종의 SNP 마커를 특징으로 한다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 저지의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 174번째 염기는 C 또는 T이고, 15807번째 염기는 G 또는 A이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16185번째 염기는 G 또는 A이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16255번째 염기는 T 또는 C이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16272번째 염기는 T 또는 G이고, 16302번째 염기는 G 또는 A인, 상기 174, 15807, 16057, 16185, 16209, 16255, 16272 및 16302번째 염기 중 1이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상의 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다. 이는 한우품종의 특이적인 8종의 SNP 마커를 특징으로 한다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 한우의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 39번째 염기는 C 또는 T이고, 166번째 염기는 A 또는 G이고, 173번째 염기는 A 또는 G이고, 206번째 염기는 T 또는 C이고, 231번째 염기는 A 또는 C이고, 232번째 염기는 T 또는 C이고, 233번째 염기는 T 또는 C이고, 248번째 염기는 C 또는 T이고, 249번째 염기는 T 또는 C이고, 296번째 염기는 T 또는 C이고, 300번째 염기는 G 또는 A이고, 15951번째 염기는 T 또는 C이고, 15953번째 염기는 C 또는 G이고, 15959번째 염기는 G 또는 A이고, 15994번째 염기는 A 또는 G이고, 16022번째 염기는 G 또는 A이고, 16049번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G, C 또는 T이고, 16058번째 염기는 C 또는 T이고, 16082번째 염기는 G 또는 A이고, 16084번째 염기는 C 또는 T이고, 16102번째 염기는 G 또는 A이고, 16109번째 염기는 T 또는 C이고, 16113번째 염기는 T 또는 C이고, 16116번째 염기는 T 또는 C이고, 16117번째 염기는 G 또는 A이고, 16119번째 염기는 T 또는 C이고, 16121번째 염기는 G 또는 A이고, 16137번째 염기는 T 또는 C이고, 16138번째 염기는 T 또는 C이고, 16143번째 염기는 A 또는 G이고, 16147번째 염기는 T 또는 C이고, 16229번째 염기는 A 또는 G이고, 16247번째 염기는 C 또는 T이고, 16248번째 염기는 C 또는 T인, 상기 39, 166, 173, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300, 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16049, 16057, 16058, 16082, 16084, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16137, 16138, 16143, 16147, 16229, 16247, 및 16248번째 염기 중 1이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상의 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다. 이는 앵거스 품종의 특이적인 35종의 SNP 마커를 특징으로 한다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 앵거스의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 352번째 염기는 C 또는 G이고, 15948번째 염기는 A 또는 G이고, 16231번째 염기는 C 또는 T인, 상기 352, 15948 및 16231번째 염기 중 1이상을 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상의 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 포함할 수 있다. 이는 홀스타인 품종의 특이적인 3종의 SNP 마커를 특징으로 한다. 따라서 상기 SNP 마커를 이용하여 홀스타인의 개체 및 품종 식별이 가능하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 조성물은 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 1 이상을 식별할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 조성물은 친자 감별이 가능할 수 있다.

본 발명에 의하면, 상기 한우와 비한우 유전자 감별검사(MS법)의 한우와 비한우의 식별 뿐 아니라, 비한우의 종류도 확인 가능하다. 또한, 본 발명에 의하면 쇠고기 이력제 DNA 동일성검사(MS법)를 통해 확인 가능한 친자 감별까지 동시에 확인할 수 있어, 신속, 정확하고 경제적이다.

본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기 SNP 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별용 키트가 제공된다.

본 발명에서 사용하는 조성물 및 키트는 상기 성분 이외에도 필요에 따라 한 가지 이상의 보조성분을 추가로 포함할 수 있다.

상기 SNP 마커를 검출할 수 있는 제제는 상기 SNP 마커의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 “프라이머”는 올리고뉴클레오티드를 의미하는 것으로, 핵산쇄(주형)에 상보적인 프라이머 연장 산물의 합성이 유도되는 조건, 즉, 뉴클레오티드와 DNA 중합효소와 같은 중합제의 존재, 그리고 적합한 온도와 pH의 조건에서 합성의 개시점으로 작용할 수 있다. 바람직하게는, 프라이머는 디옥시리보뉴클레오티드이며 단일쇄이다. 본 발명에서 이용되는 프라이머는 자연(naturally occurring) dNMP (즉, dAMP, dGMP, dCMP 및 dTMP), 변형 뉴클레오타이드 또는 비-자연 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

본 명세서에서, 용어 "프로브"는 특정 뉴클레오타이드 서열에 혼성화될 수 있는 디옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드를 포함하는 자연 또는 변형되는 모노머 또는 결합을 갖는 선형의 올리고머를 의미한다. 바람직하게는, 프로브는 혼성화에서의 최대 효율을 위하여 단일가닥이다. 프로브는 바람직하게는 디옥시리보뉴클레오티드이다.

본 발명에서 중합효소 연쇄반응(PCR) 프라이머의 제작하기 위해, 프라이머는 적절한 버퍼 중의 적절한 조건(예를 들면, 4개의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 DNA, RNA 폴리머라제 또는 역전사 효소와 같은 중합제) 및 적당한 온도 하에서 주형-지시 DNA 합성의 시작점으로서 작용할 수 있는 단일가닥 올리고뉴클레오티드가 될 수 있다.

상기 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있으나, 10 내지 200 염기 이하의 폴리뉴클레오티드일 수 있고, 이에 한정 되는 것은 아니나 통상 15 내지 30 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 짧은 프라이머 분자는 일반적으로 주형과 안정한 혼성체를 형성하기 위해서는 더 낮은 온도를 필요로 하며, 상기 프라이머 서열은 상기 SNP 마커와 완전하게 상보적일 필요는 없으나, 상기 SNP 마커와 혼성화 할 정도로 충분히 상보적이어야 한다. 상기 적절한 프라이머 세트는 본 발명의 서열을 참조하여 당업자는 용이하게 설계할 수 있을 것이다. 또한, 본 발명에 따른 키트는 중합 반응에 필요한 시약, 예컨대 dNTP, 각종의 중합효소 및 발색제 등을 추가로 포함할 수 있다. 이에 한정되는 것은 아니나, 본 발명의 프라이머 세트는 서열번호 2 및 3의 염기서열을 갖는 프라이머 세트일 수 있다.

본 발명의 키트가 만일 PCR 증폭 과정에 적용되는 경우, 본 발명의 키트는 선택적으로, PCR 증폭에 필요한 시약, 예컨대, 완충액, DNA 중합효소(예컨대, Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis 또는 Pyrococcus furiosus(Pfu)로부터 수득한 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있으며, 본 발명의 키트가 면역 분석에 적용되는 경우, 본 발명의 키트는 선택적으로, 이차항체 및 표지의 기질을 포함할 수 있다. 나아가, 본 발명에 따른 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 대상 시료에서 핵산을 분리하는 단계; 상기 분리된 핵산을 주형으로 하고, 상기 SNP 마커를 증폭시키기 위한 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하는 단계; 및 상기 증폭된 산물을 정제하여 염기서열을 분석하는 단계를 포함하는 소의 개체 및 품종 식별 방법이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 방법은 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 1 이상을 식별할 수 있고, 친자 감별도 가능할 수 있다. 상술한 본 발명의 품종 내지 개체별 SNP 마커의 유무를 확인하여 소의 품종 식별 및 친자 감별이 가능하다.

본 발명에 있어서, 상기 대상 시료로부터 핵산을 분리하는 단계는 당업계에 알려진 방법을 통하여 이루어질 수 있다. 예를 들면, 조직 또는 세포로부터 DNA를 직접적으로 정제하거나 PCR과 같은 증폭 방법을 사용하여 특정한 영역을 특이적으로 증폭하고 이를 분리함으로써 이루어질 수 있다. 본 발명에 있어서, 핵산은 DNA 뿐만 아니라 mRNA로부터 합성되는 cDNA 및 RNA 분자도 포함하는 의미이다. 피검체로부터 DNA를 추출하는 단계는 예를 들면, PCR 증폭법, 리가제 연쇄 반응(LCR)(Wu 및 Wallace, Genomics 4, 560(1989), Landegren 등, Science 241, 1077(1988)), 전사증폭(transcription amplification)(Kwoh 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 1173(1989)) 및 자가유지 서열 복제 (Guatelli 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1874(1990)) 및 핵산에 근거한 서열 증폭 (NASBA) 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 염기서열을 분석하는 단계는 특정 서열을 규명하는 데 이용되는 당업계에 공지된 다양한 방법을 응용하여 실시될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 응용될 수 있는 기술은, 형광 인 시투 혼성화 (FISH), 직접적 DNA 서열결정, PFGE 분석, 서던 블롯 분석, 단일-가닥 컨퍼메이션 분석 (SSCA, Orita et al., PNAS, USA 86:2776(1989)), RNase 보호 분석 (Finkelstein et al., Genomics, 7:167(1990)), 닷트 블롯 분석, 변성 구배젤 전기영동 (DGGE, Wartell et al., Nucl.Acids Res., 18:2699(1990)), 뉴클레오타이드 미스매치를 인식하는 단백질 (예: E. coli의 mutS 단백질)을 이용하는 방법 (Modrich, Ann. Rev. Genet., 25:229-253(1991)), 및 대립유전자-특이적 PCR을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 서열변화가 단일-가닥 분자내 염기 결합의 차이를 초래하여, 이동성이 다른 밴드를 출현하게 하는 데, SSCA는 이 밴드를 검출한다. DGGE 분석은 변성 구배 젤을 이용하여, 야생형 서열과 다른 이동성을 나타내는 서열을 검출한다. 다른 기술들은 일반적으로 본 발명의 SNP를 포함하는 서열에 상보적인 프로브 또는 프라이머를 이용한다. 혼성화 시그널(hybridization signal)을 이용하는 분석에서, 본 발명의 SNP를 포함하는 서열에 상보적인 프로브가 이용된다. 이러한 기술에서, 프로브와 타깃 서열의 혼성화 시그널을 검출하여 직접적으로 SNP 변이체 여부를 결정할 수 있다.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.

실시예

소 품종별 SNP 확인을 위한 PCR 증폭 및 염기서열결정

1. 공시 재료 및 게놈 DNA 추출

본 연구에 이용된 공시재료는 저지(Jersey) 8두, 한우(Hanwoo) 8두, 앵거스(Angus) 8두, 샤롤레(Charolais) 8두와 홀스타인(Holstein) 8두 총 5품종 40두의 혈액 DNA을 이용하였다.

2. 중합효소연쇄반응 ( PCR ) 프라이머 제작 및 유전자 증폭

mtDNA 염기서열 분석을 위해서 NCBI(National Center for Biotechnology Information) GenBank에 등록된 유전자 정보 (NC_006853.1의 D-loop 15,792-363 부위, 서열번호 1)를 이용하였고, Primer3 프로그램(http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/)을 통해 제작하였다. 제작된 Primer는 순방향 Primer F(5'-ACC CCC AAA GCT GAA GTT CTA T-3'; 서열번호 2)와 역방향 Primer R(5'-CTT GAT GCC AGC TCC TCT TAG T-3'; 서열번호 3)로 염기서열이 중첩되도록 하여 염기서열을 확인하였다. mtDNA 증폭 PCR은 gDNA 2㎕ (20ng/㎕), 10X buffer 2㎕, 2.5mM dNTP 1.6㎕, primer (10 pmol/㎕) 0.8㎕ (F-0.4㎕, R-0.4㎕), Hot start Taq DNA 중합효소(2U/㎕) 0.2㎕의 조성에 증류수를 채워 총 반응액은 20㎕가 되도록 하였다. 상기 혼합물은 Verti 96 well Thermal Cycler(Applied Biosystem, CA, USA)을 이용하여 95℃에서 11분간의 첫 반응을 시작으로 94℃에서 40초간 변성, 60℃에서 40초간 결합, 72℃에서 1분간 신장하여 35 cycle 실시한 후, 마지막으로 60℃에서 60분간 최종 신장반응을 실시하였다.

3. 증폭산물 정제 및 염기 서열 결정을 이용한 검증

증폭 산물은 MultiScreen HTS^TM PCR (MILLIPORE, Seoul, Korea)을 이용하였다. 96 well PCR clean up filter plate에서 정제하여 시퀀싱(Sequencing) 반응을 실시하였고 PCR 생성물은 이소프로판올(isopropanol) 및 에탄올(ethanol)을 이용하여 정제하였으며, 건조된 96 well Plate pellet에 10 ul 의 Hi-Di 포름아마이드(formamide)를 넣었다. 95 ℃에서 2분간 변성 과정을 거쳐 36 cm의 캐필러리(capillary)를 장착한 염기서열 분석기 ABI 3730 XL (Applied Biosystems, Foster city, CA, USA)을 이용하여 염기서열 분석을 수행하였다.

결과

표 1은 소 품종별 개체수를 나타낸다.

표 2는 소 품종별 mtDNA D-loop 부분의 변이의 위치 및 수를 나타낸다.

위치	보고된 염기서열	관측된 염기서열	품종별 변이 수(개체수)
			저지(8)	한우(8)	앵거스 (8)	샤롤레 (8)	홀스타인 (8)
8	G	A	1		3
39	C	T			1
106	T	C			2		1
166	A	G			3
169	A	G		5	1		3
173	A	G			3
174	C	T		1
206	T	C			3
231	A	C			1
232	T	C			3
233	T	C			2
248	C	T			3
249	T	C			3
296	T	C			3
300	G	A			3
352	C	G					1
15807	G	A		1
15818	A	G
15948	A	G					1
15951	T	C			2
15953	C	G			1
15959	G	A			2
15994	A	G			2
16022	G	A			1
16042	C	T	8	5	3		6
16049	C	T			2
16057	G	C		2
		A			1
16058	C	T			1
16074	T	C	4		1		1
16082	G	A			1
16084	C	T			2
16093	A	G	8	5	3		8
16102	G	A			2
16109	T	C			1
16113	T	C			1
16116	T	C			1
16117	G	A			1
16119	T	C			1
16121	G	A			2
16122	T	C		1	1
16130	T	C			2		1
16137	T	C			1
16138	T	C			1
16143	A	G			1
16147	T	C			2
16185	G	A		2
16196	G	A			1		1
16209	C	T		1
16229	A	G			1
16231	C	T					1
16247	C	T			1
16248	C	T			1
16250	A	G	4		1		1
16253	A	G	2
16255	T	C		2
16272	T	G		1
16302	G	A		1

본 발명은 상기 한우와 비한우 유전자 감별검사(MS법)의 한우와 비한우의 식별 뿐 아니라, 비한우의 종류도 확인 가능하며, 이와 더불어 쇠고기 이력제 DNA 동일성검사(MS법)를 통해 확인 가능한 친자 감별까지 동시에 확인할 수 있는 신속, 정확하고 경제적인 방법이다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항 들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION <120> Composition comprising SNP genetic marker of cow mitochondria DNA for discriminating cow breed and cow discrimination method using the same <130> NPF30092 <160> 3 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 16339 <212> DNA <213> Bos taurus <400> 1 actaatggct aatcagccca tgctcacaca taactgtgct gtcatacatt tggtattttt 60 ttattttggg ggatgcttgg actcagctat ggccgtcaaa ggccctgacc cggagcatct 120 attgtagctg gacttaactg catcttgagc accagcataa tgataagcat ggacattaca 180 gtcaatggtc acaggacata aattatatta tatatccccc cttcataaaa atttccccct 240 taaatatcta ccaccacttt taacagactt ttccctagat acttatttaa atttttcacg 300 ctttcaatac tcaatttagc actccaaaca aagtcaatat ataaacgcag gccccccccc 360 cccgttgatg tagcttaacc caaagcaagg cactgaaaat gcctagatga gtctcccaac 420 tccataaaca cataggtttg gtcccagcct tcctgttaac tcttaataaa cttacacatg 480 caagcatcta caccccagtg agaatgccct ctaggttatt aaaactaaga ggagctggca 540 tcaagcacac accctgtagc tcacgacgcc ttgcttaacc acaccccacg ggaaacagca 600 gtgacaaaaa 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tattggccgt agcattcctt acgttagtgg aacgaaaagt 3180 tctaggctat atacaactcc gaaaaggtcc aaatgtcgta ggtccatatg gcctacttca 3240 acccatcgcc gatgcaatca aacttttcat taaagaacca ctacgacccg ctacatcttc 3300 agcctcaata tttatcctag cacctatcat agctttaggc ctagccttaa ccatgtgaat 3360 tcccctacca ataccctatc ctcttatcaa cataaaccta ggagtcctat ttatactagc 3420 catatcaagc ctagccgtat actccattct ctgatcaggc tgagcttcca actcaaaata 3480 cgcactaatc ggagccctac gagcagtagc acaaacaatc tcatacgaag taacgctagc 3540 aattatcctg ttatcagtgg tcctaataag tgggtccttt accctctcca cattaattac 3600 tacacaagaa caaatatggt taatcctccc agcatggcct ctagcaataa tatgatttat 3660 ctcaacacta gcagaaacaa accgagctcc atttgattta actgaaggag aatcagagct 3720 agtctcgggc ttcaacgtag aatatgcagc aggaccattt gccctcttct tcatagcaga 3780 gtacgcaaat attatcataa taaatatctt tacagcaatt ttattcctag gaacatccca 3840 caatccacac ataccagaac tctacacaat caattttacc attaaatccc tactgctcac 3900 aatatccttc ctatgaatcc gagcatccta ccctcgattt cgctatgacc aactaataca 3960 cttactatga aaaaattttc 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cttacaggag ctttgtctgc cctcttaata acatccggcc 9060 taaccatgtg atttcacttt aactcaatga ccctgctaat aattggccta acaacaaata 9120 tactaacaat ataccaatga tgacgagatg ttatccgaga aagcaccttc caagggcacc 9180 ataccccagc tgtccaaaaa ggcctccgtt atggaataat tctttttatt atctccgaag 9240 tactattctt taccggattt ttctgagctt tctaccactc aagcctcgcc cccacccctg 9300 aactaggcgg ctgctgaccc ccaacaggca ttcacccact aaacccccta gaagtcccac 9360 tgctcaacac ctctgtccta ttggcttccg gagtttctat tacctgagcc catcatagtt 9420 taatagaagg ggaccgaaag catatattac aagccctatt tatcaccatc acattaggag 9480 tctacttcac actactacaa gcctcagaat actatgaagc accttttact atctccgacg 9540 gagtttacgg ctcaactttt tttgtagcca caggcttcca cggcctccac gtcatcattg 9600 ggtccacctt cttaattgtc tgcttcttcc gccaattaaa atttcatttt acttctaacc 9660 accacttcgg ctttgaagcc gctgcctgat actgacattt cgtagacgta gtctgacttt 9720 tcctctatgt ttctatctat tgatgaggct cctattcttt tagtattaac tagtacagct 9780 gacttccaat cagctagttt cggtctagtc cgaaaaagaa taataaattt aatactagcc 9840 ctcctgacca attttacact 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ctatttttct ccgactccct atccactcca ctactaattt taaccatatg 10740 gctcctccct ctaatactaa tagctagcca acatcatcta tcaaaagaaa acctaacccg 10800 aaaaaaacta tttattacta tgctgatctc actacaacta ttcctaatta taacctttac 10860 cgccatggaa ctaatcttat tttatattct atttgaagca acactagtcc caacactcat 10920 tattattacc cgatgaggaa accaaacaga acgcctaaac gccggactct atttcctatt 10980 ctatacacta gctggctccc tacccctatt agtcgcacta atttatatcc aaaacacagt 11040 aggatcccta aatttcctaa tattacagta ctgagtacaa cctgttcata actcttgatc 11100 taatgtcttc atatgactag catgtataat agctttcata gtaaaaatac cactatatgg 11160 cctccacctt tgactaccta aagctcacgt agaagccccc atcgcaggct ccatagtcct 11220 tgcagcagtt ctgctaaaac taggggggta cggtatgcta cgaatcacac taattctaaa 11280 ccctatgacc gactttatag catacccatt cattatactc tccctatgag gcataattat 11340 aaccagctca atctgcctcc gtcaaacgga cctaaaatca ctcatcgcat actcctctgt 11400 aagccacata gcactcgtta tcgtagccat ccttatccag acaccttgaa gctacatagg 11460 agcaaccgcc cttatgattg cccacggcct cacatcctcc atacttttct gtctagcaaa 11520 ctcaaactac gaacgaatcc acagccgaac cataattcta gctcgaggcc tacaaacgct 11580 ccttccacta atagccacct gatgactact agcaagtcta accaacttag ctctaccccc 11640 aacaatcaac ttaattggag aactatttgt agtaatgtca accttttcat gatctaacat 11700 tacaattatt ctaataggag taaatatagt aatcaccgcc ctatattctc tatacatgct 11760 aattataacc caacgaggaa aatataccta ccacattaat aatatctcgc cttcctttac 11820 acgggaaaat gcactcatat cattacacat cctaccccta ctactcctaa ccctaaaccc 11880 aaaaattatt ctaggacctc tatactgtaa atatagttta acaaaaacat tagattgtga 11940 atctaacaat agaaactcat taccttctta tttaccgaaa aagtatgcaa gaactgctaa 12000 ttctatgctc ccatatctaa tagtatggct ttttcgaact tttaaaggat agtagtttat 12060 ccgttggtct taggaaccaa aaaattggtg caactccaaa taaaagtaat aaacatattc 12120 tcctcactct cactagttac tttactctta ctaactacac ccattataat aataagcttt 12180 aacacctaca aaccttccaa ctacccactc tacgtaaaaa cagctatctc atacgccttc 12240 attaccagca taattcccac aataatattt atccactcag gccaagaact aattatttca 12300 aactgacact gactaaccat ccaaactctt aaattatccc tcagctttaa 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ctagaaacat gaaatattgg agtaatcctt ctgctcacag 14880 taatagccac agcatttata ggatacgtcc taccatgagg acaaatatca ttctgaggag 14940 caacagtcat caccaacctc ttatcagcaa tcccatacat cggcacaaat ttagtcgaat 15000 gaatctgagg cggattctca gtagacaaag caacccttac ccgattcttc gctttccatt 15060 ttatccttcc atttatcatc atagcaattg ccatagtcca cctactattc ctccacgaaa 15120 caggctccaa caacccaaca ggaatttcct cagacgtaga caaaatccca ttccacccct 15180 actataccat taaggacatc ttaggggccc tcttactaat tctagctcta atactactag 15240 tactattcgc acccgacctc ctcggagacc cagataacta caccccagcc aatccactca 15300 acacaccccc tcacatcaaa cccgagtgat acttcttatt tgcatacgca atcttacgat 15360 caatccccaa caaactagga ggagtactag ccctagcctt ctctatccta attcttgctc 15420 taatccccct actacacacc tccaaacaac gaagcataat attccgacca ctcagccaat 15480 gcctattctg agccctagta gcagacctat tgacactcac atgaattgga ggacaaccag 15540 tcgaacaccc atatatcacc atcggacaac tagcatctgt cctatacttt ctcctcatcc 15600 tagtgctaat accaacggcc ggcacaatcg aaaacaaatt actaaaatga agacaggtct 15660 ttgtagtaca 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<400> 3 cttgatgcca gctcctctta gt 22

Claims (15)

1. 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자(Sequence ID: gb|AY526085.1)의 15807번째 염기는 G 또는 A이고, 15948번째 염기는 A 또는 G이고, 16209번째 염기는 C 또는 T이고, 16253번째 염기는 A 또는 G이고, 16272번째 염기는 T 또는 G인, 상기 15807, 15948, 16209, 16253, 및 16272번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 1 이상을 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 39번째 염기는 C 또는 T이고, 166번째 염기는 A 또는 G이고, 173번째 염기는 A 또는 G이고, 206번째 염기는 T 또는 C이고, 231번째 염기는 A 또는 C이고, 232번째 염기는 T 또는 C이고, 233번째 염기는 T 또는 C이고, 248번째 염기는 C 또는 T이고, 249번째 염기는 T 또는 C이고, 296번째 염기는 T 또는 C이고, 300번째 염기는 G 또는 A이고, 15951번째 염기는 T 또는 C이고, 15953번째 염기는 C 또는 G이고, 15959번째 염기는 G 또는 A이고, 15994번째 염기는 A 또는 G이고, 16022번째 염기는 G 또는 A이고, 16049번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G 또는 A이고, 16058번째 염기는 C 또는 T이고, 16082번째 염기는 G 또는 A이고, 16084번째 염기는 C 또는 T이고, 16102번째 염기는 G 또는 A이고, 16109번째 염기는 T 또는 C이고, 16113번째 염기는 T 또는 C이고, 16116번째 염기는 T 또는 C이고, 16117번째 염기는 G 또는 A이고, 16119번째 염기는 T 또는 C이고, 16121번째 염기는 G 또는 A이고, 16137번째 염기는 T 또는 C이고, 16138번째 염기는 T 또는 C이고, 16143번째 염기는 A 또는 G이고, 16147번째 염기는 T 또는 C이고, 16229번째 염기는 A 또는 G이고, 16247번째 염기는 C 또는 T이고, 16248번째 염기는 C 또는 T인, 상기 39, 166, 173, 206, 231, 232, 233, 248, 249, 296, 300, 15951, 15953, 15959, 15994, 16022, 16049, 16057, 16058, 16082, 16084, 16102, 16109, 16113, 16116, 16117, 16119, 16121, 16137, 16138, 16143, 16147, 16229, 16247, 및 16248번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 더 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 앵거스를 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
3. 제2항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 8번째 염기는 G 또는 A이고, 106번째 염기는 T 또는 C이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16122번째 염기는 T 또는 C이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16250번째 염기는 A 또는 G인, 상기 8, 106, 169, 16042, 16074, 16093, 16122, 16130, 16196, 및 16250번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 더 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 앵거스를 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 174번째 염기는 C 또는 T이고, 16057번째 염기는 G 또는 C이고, 16185번째 염기는 G 또는 A이고, 16255번째 염기는 T 또는 C이고, 16272번째 염기는 T 또는 G이고, 16302번째 염기는 G 또는 A인, 상기 174, 16057, 16185, 16255, 16272, 및 16302번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드의 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 더 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 한우를 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
5. 제4항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 169번째 염기는 A 또는 G이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16122번째 염기는 T 또는 C인, 상기 169, 16042, 16093, 및 16122번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드의 SNP(single nucleotide polymorphism)를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 더 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 한우를 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
6. 제1항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 352번째 염기는 C 또는 G이고, 16231번째 염기는 C 또는 T인, 상기 352, 및 16231번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 더 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 홀스타인을 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
7. 제6항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 106번째 염기는 T 또는 C이고, 169번째 염기는 A 또는 G이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 T 또는 C이고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16130번째 염기는 T 또는 C이고, 16196번째 염기는 G 또는 A이고, 16250번째 염기는 A 또는 G인, 상기 106, 169, 16042, 16074, 16093, 16130, 16196, 및 16250번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 더 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 홀스타인을 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
8. 제1항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 16253번째 염기는 A 또는 G인, 상기 16253번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 저지를 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
9. 제8항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 8번째 염기는 A 또는 G이고, 16042번째 염기는 C 또는 T이고, 16074번째 염기는 C 또는 T치고, 16093번째 염기는 A 또는 G이고, 16250번째 염기는 A 또는 G인, 상기 8, 16042, 16074, 16093, 및 16250번째 염기를 포함하고, 서열번호 1로 표시되는 소의 미토콘드리아 유전자의 5 내지 200 염기의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 중 1종 이상인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 더 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 저지를 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 조성물.
   
10. 삭제
11. 삭제
12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 1 이상을 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별용 키트.
    
13. 대상 시료에서 핵산을 분리하는 단계;
    상기 분리된 핵산을 주형으로 하고, 제1항 기재의 상기 SNP 마커를 증폭시키기 위한 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하는 단계; 및
    상기 증폭된 산물을 정제하여 염기서열을 분석하는 단계를 포함하는 저지, 한우, 앵거스, 샤룰레, 및 홀스타인 중 1 이상을 식별할 수 있는 소의 개체 및 품종 식별 방법.
14. 삭제
15. 삭제

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