KR101840646B1 - Cosmetic composition comprising extract of Lotus corniculatus for improving acne - Google Patents

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Abstract

본 발명은 벌노랑이 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 벌노랑이 추출물은 기존의 여드름 치료를 위한 성분 및 치료 방법에 비해 부작용이 없고 안정할 뿐만 아니라 여드름 균(Propionibacterium acnes)에 대한 우수한 살균 작용이 우수하여 여드름 개선을 위한 화장료 조성물로서 이용될 수 있다.
The present invention relates to a cosmetic composition for improving acne, comprising a bee yellow extract as an active ingredient.
According to the present invention, the bee yellow extract of the present invention has no side effects and is not only stable but also has excellent sterilizing action against Propionibacterium acnes as compared with the conventional ingredients and treatment methods for treating acne, Can be used as a cosmetic composition.

Description

벌노랑이 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising extract of Lotus corniculatus for improving acne}[0001] The present invention relates to a cosmetic composition for extracting Lotus corniculatus for improving acne,

본 발명은 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 벌노랑이 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for improving acne, and more specifically, to a cosmetic composition for improving acne containing an extract of bee yellow as an active ingredient.

여드름이라 함은 모낭 및 피지선에 발생하는 염증성 피부 질환을 말하는 것으로서, 이러한 여드름의 발생원인은 크게 피지 분비의 증가, 모낭의 협착, 여드름 균(Propionibacterium acnes)의 증식 등이 있다. 사춘기 이후 증가 되는 성호르몬, 특히 남성호르몬은 피지의 분비를 과도하게 증가시키게 되는데, 피지의 지질 조성은 피부 표피와 달라 산화가 잘되고 세균의 에너지원으로 사용되기가 용이하므로, 피지의 증가는 여드름균의 증식으로 이어져 여드름을 유발시킬 수 있다. 또한 증가된 여드름 균은 항원으로 인식되어 염증 반응이 일어나게 된다. 이는 구진(papule)의 원인이 되고 악화되면 모낭벽이 파괴되며 조직이 손상되는 낭포, 농포등의 병변으로 발전된다.Acne refers to inflammatory skin diseases that occur in hair follicles and sebaceous glands. The causes of such acne are largely caused by increased sebum secretion, follicular stenosis, and proliferation of acne bacteria (Propionibacterium acnes). Since sex hormones, especially male hormones, which are increased after puberty, excessively increase secretion of sebum, sebaceous lipid composition differs from skin epidermis and is easily oxidized and used as an energy source of bacteria. Therefore, Which can lead to acne. In addition, increased acne bacteria are recognized as antigens and inflammation reaction occurs. This causes papules and worsens, leading to destruction of the hair follicle wall and development of lesions such as cysts and pustules, where tissue is damaged.

여드름의 증상을 완화 시키기 위해서는 여드름균의 에너지원이 되는 피지의 분비를 감소시키거나, 분비된 피지를 자주 제거해주어야 한다. 그리고 여드름균은 혐기성 조건에서 활발히 증식하므로 모낭이 협착되지 않도록 피부 각질을 잘 제거해 주거나 또는 여드름균의 증식 자체를 억제 시킨다면 여드름 증상이 완화될 수 있다.In order to alleviate symptoms of acne, it is necessary to reduce sebaceous secretion, which is an energy source of acne, or to remove secreted sebum frequently. In addition, acne bacteria actively grow in anaerobic conditions, so if acne skin is removed well to prevent stenosis of the hair follicle, or the growth of acne bacteria is suppressed, acne symptoms may be alleviated.

여드름균의 억제를 위해 테트라사이클린, 미노사이클린, 에리스로마이신 등의 항생제나 벤조일페록사이드 같은 외용약, 염증 치료를 위한 항염증제, 피지 조절을 위한 호르몬 제제들이 사용될 수 있지만 이는 의약품 분야에 속하는 방법이다. In order to inhibit acne bacteria, antibiotics such as tetracycline, minocycline, and erythromycin, external medicine such as benzoyl peroxide, anti-inflammatory drugs for treating inflammation, and hormone preparations for controlling sebum may be used.

화장품분야에서는 레소시놀, 황, 살리실산, 벤조일퍼옥시드 등의 성분을 화장품에 첨가하여 피부 각질제거 및 여드름균을 살균하는 방법이 주로 사용되어 왔다. 그러나 이러한 성분으로 인해 피부가 자극받아 붉게 달아오르거나 쉽게 건조해지는 등의 부작용이 생기기 쉽고, 이러한 부작용 때문에 화장품 내 첨가되는 농도에도 그 한계가 있으므로, 여드름균 살균효과도 크지 않은 실정이다. 따라서 자연친화적이고 안전성이 높은 생약추출물을 사용하여 여드름 개선효과를 얻으려는 시도가 계속되고 있으며 지금까지는 만족할 만한 연구 성과가 없는 실정이다.In the field of cosmetics, methods such as resorcinol, sulfur, salicylic acid, and benzoyl peroxide were added to cosmetics to remove skin exfoliation and sterilization of acne bacteria. However, these ingredients are liable to cause adverse effects such as skin irritation and redness or dryness, and the effect of sterilization of acne bacteria is not so small because the concentration of cosmetic ingredients is limited by such side effects. Therefore, attempts to obtain acne improvement effect using natural and safe herbal medicine extracts have been continuing and so far there has been no satisfactory research result.

이에 대해, 최근에는 식물을 비롯한 천연자원으로부터 상기 부작용들을 줄이고 지속적으로 사용할 수 있으며 인체에 무해하면서도 강력한 항여드름 균 효과를 갖는 유효성분들을 탐색하는 연구가 활발하게 진행되고 있다. 국내에서는 상황버섯, 녹차 및 황금, 버드나무, 삼백초, 감초 및 어성초 추출물을 여드름 치료에 관련된 기능성 화장품 및 비누의 원료로 사용하고 있고, 천연물 유래의 화학물질을 이용한 항여드름균 효능의 화장품 원료개발도 진행되고 있다. 그러나 그 효과가 기존의 여드름 치료 물질에 비해 매우 약하거나, 여드름 치료에 관련된 유효물질의 대량 생산이 어려운 문제점이 있다.In recent years, studies have been actively conducted to search for effective ingredients that can reduce the above-mentioned adverse effects from natural resources such as plants and continuously use them, and have harmless effects on the human body but have strong anti-acne bacteria effect. In Korea, it is used as a raw material for functional cosmetics and soaps related to acne treatment and extracts of mushroom, green tea and golden, willow, Saururus chinensis, Licorice and Horsetail. It is progressing. However, the effect is very weak compared to conventional acne remedies, and it is difficult to mass-produce effective substances related to acne treatment.

특히 천연물은 다양한 성분이 복합적으로 구성되어 있어서 유효활성물질의 분리, 정제방법이 목적하는 활성물질의 물리화학적 성질에 따라 다르고, 또 여러 가지 서로 다른 원리에 근거한 분리, 정제 방법 중에서도 적절한 방법을 효과적으로 조합하여 사용하여야 하므로 천연물로부터 항여드름균 활성을 지니는 물질을 추출 분리하는 데에는 많은 어려움이 있다.Particularly, natural products are composed of various components in a complex manner. Therefore, the method for separating and purifying an active active substance differs depending on the physicochemical properties of the desired active substance, and effective methods for separation and purification based on various different principles Therefore, there are many difficulties in extracting and isolating a substance having anti-acne activity from natural products.

벌노랑이의 학명은 Lotus corniculatus var. japonicus이다. 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 여러해살이풀이며, 노랑돌콩이라고도 한다. 산과 들의 양지에서 자란다. 높이 약 30cm이다. 밑동에서 가지가 많이 갈라져 비스듬히 자라거나 퍼지고 털이 없다. 한의학에선 그 뿌리를 백맥근(百脈根)이라 부른다. 청열해독, 지해평펀, 풍열해수, 편도선염, 기운을 내리는데, 갈증을 멈추는데, 열을 내리는데, 기침, 천식, 가래가 없는 풍열에 의한 해수, 젖이 잘 나오게 하는데, 안무, 위중비만동통, 습진, 창절, 치질, 하기, 지갈, 열과 허로를 제거하고 보하는 효능, 감기, 인후염, 대장염, 혈변, 이질을 다스리는 효과가 있다. 한국보다는 중국의 고서적에 많이 인용되어 있으며 <당본초(唐本草)>에는 기를 내리고 갈증을 멈추고 열을 내리며 허롤를 제거하고 부족을 보하는 효능이 있다는 기록이 있다.The scientific name of bee yellow is Lotus corniculatus var. It is japonicus . It is a perennial plant of a dicotyledonous plant rosemary bean, and it is also called a yellow stover. It grows in the shade of the mountains. It is about 30cm in height. In the base, there are many branches that grow diagonally or spread and have no hair. In Oriental medicine, its roots are called Baekmaegun. It stops the thirst, stops the thirst, stops the thirst, causes the cough, asthma, sputum, seawater and milk to come out well, choreography, obesity pain, eczema It has the effect of regulating the efficacy of removing and creating fever, pitting, hemorrhoids, hyaluronic acid, fever and hunger, cold, sore throat, colitis, blood stain and dysentery. There are many quotations in Chinese history rather than in Korea, and there is a record in <Tanghonggosa> that it is effective to stop the thirst, to quench thirst, to remove fever, to remove the thirst and to tribe.

그러나, 상기 벌노랑이는 상기 기재한 효과만이 알려져 있으며, 종래 특허에서도 벌노랑이를 함유하는 에탄올과 정제수 혼합 추출물 및 열수 추출물이 여드름균에 대해 강한 활성을 나타낸다는 사실이나 여드름 예방 및 치료에 효과가 좋다는 사실은 여태까지 보고된 바 없었다, 이에 본 발명자들은 벌노랑이의 여드름 예방 또는 치료에 대한 연구를 진행하였으며, 그 결과 벌노랑이의 여드름 균(Propionibacterium acnes)에 대한 살균 작용을 확인하였다. However, only the above-described effect of the above-mentioned bee yellow is known, and in the conventional patent, the fact that ethanol and purified water mixed extract and hot water extract containing bee yellow are exhibited strong activity against acne bacterium, Therefore, the inventors of the present invention conducted a study on the prevention or treatment of acne in bee yellow, and as a result, confirmed the sterilizing action against Acne bacterium (Propionibacterium acnes).

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점을 극복하기 위하여 예의 노력한 결과, 안전하고 효과적인 여드름용 화장료 조성물을 개발하기 위하여 여러 천연물을 조사하였으며, 그 중 본원발명의 벌노랑이 추출물이 여드름 균(Propionibacterium acnes)에 대한 우수한 살균 작용이 우수한 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.  The present inventors have made intensive efforts to overcome the problems of the prior art. As a result, in order to develop a safe and effective cosmetic composition for acne, the present inventors investigated various natural products. Among them, the extracts of Propionibacterium acnes ), And thus completed the present invention.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 지속적으로 사용이 가능하면서도 안정성이 우수할 뿐만 아니라 여드름균인 Propionibacterium acnes의 살균 효과가 우수하여 여드름 개선에 우수한 벌노랑이 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.Accordingly, it is a main object of the present invention to provide a cosmetic composition for improving acne, which comprises a bee yellow extract having an excellent sterilizing effect of Propionibacterium acnes, .

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 벌노랑이 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.According to one aspect of the present invention, there is provided a cosmetic composition for improving acne, comprising a bee yellow extract as an active ingredient.

종래에 화장품 분야에서 여드름 개선을 위해 사용된 성분들은 피부각질제거 및 여드름균을 살균하도록 화장품에 첨가되어 사용되어 왔으나, 이러한 성분들은 피부에 자극을 주기 때문에 피부가 붉게 달아오르거나 건조해지는 등의 부작용이 발생하여 피부에 지속적으로 사용하는 데에는 한계가 있었다. 이에, 본 발명자들이 지속적으로 조사한 천연식물들 중, 벌노랑이 추출물이 여드름균에 대한 살균효과가 우수한 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.Conventionally, the ingredients used for improving acne in the cosmetics field have been used in cosmetics to remove skin exfoliation and acne bacteria, but since these ingredients stimulate the skin, side effects such as reddening of the skin and drying And there is a limit to the continuous use thereof on the skin. The inventors of the present invention confirmed that the extract of Bee Yellow Orchid, which is one of the natural plants continuously investigated by the present inventors, has excellent germicidal effect against acne bacteria and completed the present invention.

벌노랑이(Lotus corniculatus)는 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 여러해살이풀이며, 노랑돌콩이라고도 한다. 한의학에서는 그 뿌리를 백맥근(百脈根)이라 부른다. 청열해독, 지해평펀, 풍열해수, 편도선염, 기운을 내리는데, 갈증을 멈추는데, 열을 내리는데, 기침, 천식, 가래가 없는 풍열에 의한 해수, 및 젖이 잘 나오게 하는데 효과가 있다고 알려져 있다. 그러나, 본원발명과 같이 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)의 생장을 억제하여 여드름을 개선하는데 효과가 있다는 것은 어디에도 알려진 바 없다. Lotus corniculatus is a perennial herb with rosemary roots of dicotyledonous plants and is also known as yellow stones. In Oriental medicine, its roots are called Baekmaegun. It is said to be effective in stopping thirst, releasing fever, causing coughing, asthma, seawater from fluids without sputum, and milk to come out well. However, as in the present invention, it is not known that it is effective to inhibit the growth of acne bacterium Propionibacterium acnes and to improve acne.

본 발명에 있어서, 상기 벌노랑이 추출물은 종래에 천연식물을 추출하기 위해 알려진 어떠한 추출 용매로도 추출될 수 있으며, 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매로 추출하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 에탄올로 추출하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the bee yellow extract can be extracted with any extraction solvent conventionally known for extracting natural plants, and can be extracted with water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, ether, ethyl acetate, chloroform, And water, and more preferably, ethanol is extracted.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.00001 내지 80 중량% 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.0001 내지 50 중량% 포함하는 것을 특징으로 한다. 상기 범위인 0.0001 중량% 이하의 경우에는 뚜렷한 여드름 개선 효과가 나타나기 어려울 수 있으며, 50.0 중량%를 초과할 경우에는 함유량 증가에 따른 여드름 개선 효과가 나타나기 어려울 수 있으며 안전성 문제 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.In the present invention, the extract may contain 0.00001 to 80% by weight, preferably 0.0001 to 50% by weight, based on the total weight of the composition. If the amount is less than 0.0001% by weight, it may be difficult to improve the acne improvement effect. If the amount is more than 50.0% by weight, it may be difficult to improve the acne due to the increase of the content. Can be.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)의 활성을 억제함으로써 여드름 개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the extract is characterized by exhibiting an acne improvement effect by inhibiting the activity of Propionibacterium acnes.

본 발명의 실험예에 따르면, 여드름균인 Propionibacterium acnes에 대한 항균력을 paper disk test를 통해 확인할 결과, 본 발명의 벌노랑이 추출물의 경우, 일반적인 여드름 치료를 위한 성분 중 하나인 Salicylic acid(양성 대조군)보다 우수한 항균력을 나타내는 것을 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때, 본원발명의 벌노랑이 추출물은 여드름 균 중 하나인 Propionibacterium acnes를 억제함으로써 여드름을 개선할 수 있으며, 여드름 개선용 화장료 조성물로서도 적합하다는 것을 알 수 있다. According to the experimental example of the present invention, the antimicrobial activity against Propionibacterium acnes, an acne bacterium, was examined by a paper disk test. As a result, in case of the extract of bee yellow of the present invention, Salicylic acid (positive control) It was confirmed that it exhibited better antibacterial activity. From these results, it can be understood that the extract of the present invention is effective for improving acne by inhibiting Propionibacterium acnes, which is one of the acne bacteria, and is also suitable as a cosmetic composition for improving acne.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 유연 화장수, 수렴 화장수, 로션, 크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업 베이스, 파운데이션, 샴푸, 린스 및 바디 세정제로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the composition may be in the form of a soft lotion, a convergent lotion, a lotion, a cream, a massage cream, an essence, an eye cream, an eye essence, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a powder, a body lotion, , A body essence, a makeup base, a foundation, a shampoo, a rinse and a body cleansing agent.

본 발명의 조성물은 담체 이외에 다른 보조제를 포함할 수 있는데, 예를 들면 보존제, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료 등을 포함할 수 있다.The composition of the present invention may contain other adjuvants in addition to the carrier, for example, preservatives, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and perfumes.

이상 설명한 바와 같이, 본원발명의 벌노랑이 추출물을 함유하는 조성물은 여드름 균(Propionibacterium acnes)을 억제함으로써 여드름 개선 효과를 나타내므로, 여드름 개선을 위한 화장료 조성물로의 상용화에 적합하다.INDUSTRIAL APPLICABILITY As described above, the composition of the present invention containing the bee yellow extract is suitable for commercialization as a cosmetic composition for improving acne because it exhibits an effect of improving acne by inhibiting acne bacterium (Propionibacterium acnes).

도 1은 본원발명 실시예 2의 항균활성 시험에 따른 양성 대조군에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 2는 본원발명 실시예 2의 항균활성 시험에 따른 벌노랑이 추출물에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 3은 본원발명 실시예 2의 세포독성평가 시험에 따른 벌노랑이 추출물에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
1 is a graph showing the results of a positive control group according to the antibacterial activity test of Example 2 of the present invention.
Fig. 2 is a graph showing the results of the bee yellower extract according to the antibacterial activity test of Example 2 of the present invention. Fig.
Fig. 3 is a diagram showing the results of the bee yellow extract according to the cytotoxicity evaluation test of Example 2 of the present invention. Fig.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These embodiments are only for illustrating the present invention, and thus the scope of the present invention is not construed as being limited by these embodiments.

실시예 1: 재료의 채집 및 준비Example 1: Collection and preparation of materials

1. 재료의 채집 및 준비1. Collection and preparation of materials

시험에 사용한 벌노랑이는 2013년 5월 중국산으로 한의원에 공급되는 등급으로 잔류 농약검사등을 모두 통과한 등급의 약재를 (주)동양허브에서 공급을 받아 분쇄하여 사용하였다.The bee used in the test was used in May 2013, which was supplied to Oriental Medical Clinic from China. It was supplied by Tongyang Hub Co., Ltd.

2. 벌노랑이의 70%에탄올 추출물 제조2. Preparation of 70% ethanol extract of bee yellow

벌노랑이의 70% 에탄올 추출물의 제조는 벌노랑이의 건조분쇄물 100g에 1000mL의 에탄올을 가하여 72시간 동안 상온에서 추출한 후, 185mm(wattman) 필터로 필터링 한 후 감압 회전 증발기를 사용하여 50~60℃농축한 다음 고형분을 추출물을 얻었다. 얻어진 추출물을 6.8g이다.For the preparation of 70% ethanol extract of bee yellow, 1,000 mL of ethanol was added to 100 g of dried beeswax yellow powder, and the mixture was extracted at room temperature for 72 hours, filtered with a 185 mm (wattman) filter, After concentration, the solid was extracted. The obtained extract is 6.8 g.

실험예 2: 세포 독성 실험Experimental Example 2: Cytotoxicity test

인간 섬유아세포주인 Hs68 fibroblast에서 세포증식 촉진 효능 유무를 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)시약을 이용한 측정법으로 수행하였다.The presence or absence of cell proliferation promoting activity in the human fibroblast Hs68 fibroblast was assayed using MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) reagent.

인간 섬유아세포주인 Hs68 fibroblast를 2x104 cells/well 농도로 96 well plate에 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배지를 제거하고 0.1 ㎍/㎖, 0.5 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖ 의 농도로 희석된 벌노랑이 추출물을 배지에 처리하고, 5% CO2, 37 ℃하에서 24시간 배양하였다. 이후 세포독성 효과를 확인하기 위하여 DPBS에 녹인 MTT(3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide)을 well당 20 ㎕씩 첨가하여 반응시켰다. MTT는 담황색의 기질로서 살아있는 세포의 미토콘드리아 내의 호흡연쇄효소에 의해 암청색으로 변한다. 4시간 후 반응액을 버리고 DMSO를 넣어 변화된 색을 microplate reader로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 아무 시료도 넣지 않은 대조군의 평균 흡광도 값에 대한 백분율로 나타내었다.Human fibroblast Hs68 fibroblast was dispensed into 96-well plates at a concentration of 2 × 10 4 cells / well and cultured in an incubator at 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours. The medium was removed and the concentration was adjusted to 0.1 μg / ml, 0.5 μg / ml, 1 μg / ml, 5 μg / ml, 10 μg / ml, 50 μg / ml and 100 μg / ml, 500 μg / ml and 1000 μg / The extract was treated with the medium and cultured at 37 ° C in 5% CO 2 for 24 hours. To confirm the cytotoxic effect, 20 μl of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) 2,5-diphenyltetrazolium bromide) dissolved in DPBS was added and reacted. MTT changes to dark blue by the respiratory chain enzyme in the mitochondria of living cells as a light yellow substrate. After 4 hours, the reaction solution was discarded and DMSO was added. The absorbance at 570 nm was measured with a microplate reader. Cell viability was expressed as a percentage of the average absorbance value of the control group without any sample.

도 3에서 나타나는 바와 같이, 벌노랑이 추출물에 의한 세포의 감소는 보이지 않는다. 그러므로, 본 실험을 통해 벌노랑이 추출물은 세포독성이 없음을 확인하였다.  As shown in Fig. 3, there is no decrease in cells due to the bee yellow extract. Therefore, it was confirmed through this experiment that the bee yellow extract was not cytotoxic.

실시예Example 3:  3: 프로피오니박테리움Propionibacterium 아크네스에 대한 항균활성의 시험 Test of antimicrobial activity against acnes

상기의 방법에 의해 얻어진 벌노랑이의 고형분에 대하여, 평판배지 확산법(Agar diffusion method)을 이용하여 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균활성을 측정하였다.The antimicrobial activity against propionibacterium acnes was measured using the agar diffusion method for the solid content of the bee yellow obtained by the above method.

I. 실험 재료I. Experimental Materials

Propionibacterium acnes, paper disc(10mm), Brain Heart Infusionagar, 핀셋, 멸균한 증류수, 에탄올Propionibacterium acnes, paper disc (10 mm), Brain Heart Infusionagar, tweezers, sterile distilled water, ethanol

본 시험에 사용된 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes 3314)균주는 한국생명공학연구원 생물자원센터에서 분양받아 사용하였다.The Propionibacterium acnes 3314 strain used in this study was purchased from the BRC, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology.

II. 실험방법II. Experimental Method

1) agar plate 준비; Brain Heart Infusion agar를 멸균하여 plate당 25㎖씩 분주한다.1) prepare an agar plate; Sterilize the Brain Heart Infusion agar and dispense 25 ml per plate.

2) 균주 도말; 각각의 균주의 균수를 105으로 맞춰 100㎕ 도말한다.2) strain smearing; The number of bacteria in each strain is adjusted to 10 5 , and 100 μl is plated.

3) disc(10mm)에 원료 loading; 10% Ethanol에 녹인 벌노랑이 추출물을 1%, 0.5%, 0.1% 농도로 맞춘 후 50㎕씩 disc(paper disk, Advantec Filter Paper, Toyo Roshi Kaisha Ltd, Japan)에 loading 한다.3) loading of raw material into disc (10mm); After mixing the extract with 1%, 0.5%, and 0.1% of the bee yellow which is dissolved in 10% ethanol, add 50 μl of the extract to a disc (paper paper, Advantec Filter Paper, Toyo Roshi Kaisha Ltd, Japan).

4) disc(10mm)에 양성 대조군 loading; 양성 대조군으로 Salicylic acid를 사용하였으며 10% Ethanol에 녹인 Salicylic acid를 0%, 1.0% 농도로 맞춘 후 50㎕씩 disc(paper disk, Advantec Filter Paper, Toyo Roshi Kaisha Ltd, Japan)에 loading 한다.4) positive control loading on disc (10mm); Salicylic acid was used as a positive control. Salicylic acid dissolved in 10% ethanol was adjusted to 0% and 1.0%, and 50 μl of the solution was loaded on a disc (Advantec Filter Paper, Toyo Roshi Kaisha Ltd., Japan).

5) disc 심기; 멸균된 핀셋으로 loading된 disc를 집어서 균이 도말된 plate에 심는다.5) planting disc; Pick up the discs loaded with sterilized tweezers and plant them on the smear plate.

6) 배양; 산소를 차단하는 anaerobic jar에 plate를 넣은 상태로 37℃에 배양한다.6) culture; Incubate the plates in an anaerobic jar to block oxygen and incubate at 37 ° C.

7) 종이 디스크(paper disk) 주변에 형성된 원형 발육 저지환의 크기(mm 단위)를 측정하였으며, 모든 시험은 독립적으로 3회 반복하여 평균값을 구했다.7) The size (in mm) of the circular growth zone formed around the paper disk was measured, and all the tests were independently repeated three times to obtain the average value.

그 결과를 하기 표 1과 도 1 및 2에 나타내었다. The results are shown in Table 1 and FIGS. 1 and 2.

양성대조군 (Salicylic Acid)The positive control (Salicylic Acid) 벌노랑이Bee yellow 농도(%)density(%) 넓이(mm)Width (mm) 농도(%)density(%) 넓이(mm)Width (mm) 00 00 00 00 00 00 0.10.1 4.54.5 4.04.0 4.64.6 1.01.0 7.57.5 0.50.5 7.77.7 7.27.2 7.67.6 1.01.0 10.110.1 10.210.2 10.310.3

그 결과, 상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이 벌노랑이 추출물은 농도 의존적으로 Clean Zone의 넓이가 증가하는 것을 볼 수 있다. 벌노랑이의 경우, 0.1%의 경우 약4.4mm의 평균값을 가지고 0.5%의 경우 약7.5mm의 평균값을 보이고 1.0%의 경우 약10.2mm의 평균값을 가지는 것을 관찰 할 수 있었다. As a result, as shown in Table 1, it can be seen that the area of the clean zone of the bee yellow extract increases in a concentration-dependent manner. In the case of bee yellow, the mean value of about 4.4mm for 0.1%, the mean value of about 7.5mm for 0.5%, and the average value of about 10.2mm for 1.0%.

또한, 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 양성대조군으로 Salicylic Acid를 사용하여 항균 활성을 평가한 결과인 도 1에서는 Salicylic Acid 1.0%를 사용하였을 경우 약 7.5mm 정도의 Clean Zone이 형성되는 것을 확인할 수 있었으며, 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 벌노랑이 추출물을 사용하여 항균 활성을 평가한 결과인 도 2에서는 농도 의존적으로 clean zone의 넓이가 증가 되는 것을 확인할 수 있었으며, 1.0%의 농도로 처리하였을 경우, 약 10.1mm 정도로 양성대조군보다 더 넓은 Clean Zone이 형성되는 것을 확인할 수 있었다.In addition, in FIG. 1, which is an evaluation result of antimicrobial activity using Salicylic Acid as a positive control against Propionibacterium acnes, it was confirmed that a clean zone of about 7.5 mm was formed when 1.0% of salicylic acid was used 2, which is a result of evaluating the antimicrobial activity of the extract of the bee yellow on Propionibacterium acnes, showed that the width of the clean zone was increased in a concentration dependent manner. When the concentration of 1.0% It was confirmed that a clean zone was formed at about 10.1 mm, which is wider than the positive control group.

이상의 결과로부터, 상기 벌노랑이 추출물은 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes)에 대한 항균활성 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있었다.From the above results, it was confirmed that the bee yellow extract had an excellent antimicrobial activity against Propionibacterium acnes.

시험예 4: 피부 자극 실험Test Example 4: Skin irritation experiment

대부분의 한방 추출물의 경우 일반 화학제품들에 비해 피부자극이 적은 것은 사실이나 피부유해물질들이 제대로 제거되지 않을 겨우 피부 트러블을 유발할 수 있는 문제가 있는 바, 본 발명의 화장료 조성물의 피부 작극 정도를 측정하기 위해 31명의 피험자들을 대상으로 패치 테스트(patch test)를 실시하였다. Most of herbal extracts have less skin irritation than general chemical products. However, since there is a problem in that skin harmful substances can not be properly removed, skin troubles can be caused. Therefore, the degree of skin irritation of the cosmetic composition of the present invention is measured A patch test was conducted on 31 subjects.

I. 시험개요I. Test Overview

평균연력 26.2세의 여상 23명과 남성 8명을 대상으로 팔 전박에 Patch를 24시간 첩포하고, patch를 제고 후 30분, 24시간 및 48시간 후의 피부 반응을 통해 피부 자극 반응을 확인하였다. Twenty - three lesions of average age 26.2 years old and 8 males were exposed to patches for 24 hours, and skin irritation was observed 30 minutes, 24 hours, and 48 hours after patches were applied.

(Angry back반응으로 추정되는 연구대상자 1명의 결과는 제외하여 32명 중 31명의 시험결과를 분석하였다.)(31 out of 32 cases were excluded, except for the results of one study subject estimated to be Angry back reaction.)

II. 시험방법II. Test Methods

1) 도포방법: Closed patch test1) Application method: Closed patch test

2) 도포량: 20㎕/chamber (IQchamber®)2) Application amount: 20 / / chamber (IQ chamber)

3) 도포횟수및기간: 24시간첩포, 첩포제거후30분및24, 48시간후각각결과판독3) Number and duration of application: 24 hours after the removal of the patches and patches, and 30 minutes and 24 hours after the removal of the patches.

4) 반응검사: 첩포 제거 후 30분 및 24, 48시간 후에 ICDRG guideline에 제시된 terminology에 의거하여 검사4) Reaction test: 30 minutes, 24 hours and 48 hours after the removal of the patches, according to the terminology suggested in the ICDRG guideline

5) 판정기준: 관찰은 첩포 제거 후 30분 및 24, 48 시간이 경과 하였을 때 이루어지며 피부 반응은 ICDRG guideline을 참고하여 반영한 다음의 기준에 따라 평가하였다(표 2). 5) Acceptance criteria: Observations were made at 30 minutes, 24 hours, and 48 hours after removal of the patch, and skin reactions were assessed according to the following criteria, which were based on ICDRG guideline (Table 2).

6) 결과계산방법:6) Result calculation method:

30분, 24시간 및 48시간 평균 반응도를 아래의 식 1을 이용하여 계산하였으며, 각 물질에 대한 평균 반응도는 표 3의 기준에 따라 그 결과를 판정하였다. 또한, 그 결과를 표 4에 나타내었다.30, 24, and 48 hours were calculated using Equation 1 below, and the results were determined according to the criteria given in Table 3 for the average degree of reactivity for each substance. The results are also shown in Table 4.

Symbol (grade)Symbol (grade) Clinical observationClinical observation -(0)
±(0.5)
+(1)
++(2)
+++(3)
-(0)
± (0.5)
+ (1)
++ (2)
+++ (3)
None
Doubtful reaction; faint erythema only
Weak(non-vesicular) reaction; erythema, slight infiltration
Extreme (bullous or ulcerative)
Intense erythema with edema & vesicles
None
Doubtful reaction; faint erythema only
Weak (non-vesicular) reaction; erythema, slight infiltration
Extreme (bullous or ulcerative)
Intense erythema with edema & vesicles

[식 1][Formula 1]

Figure 112016051638666-pat00001
Figure 112016051638666-pat00001

Rnage of Mean ScoreRnage of Mean Score CriteriaCriteria 0.00 ≤ R < 1.010.00? R <1.01 저자극Low stimulus 1.01 ≤ R < 2.001.01? R <2.00 경자극Light stimulus 2.01 ≤ R < 3.502.01? R <3.50 중자극Moderate irritation 3.51 ≤ R3.51? R 강자극River stimulation


시험 물질

Test substance

30 mins

30 mins

24 hrs

24 hrs

48 hrs

48 hrs
Mean
Score
(n=31)
Mean
Score
(n = 31)
판정
(Grade)
Judgment
(Grade)
-- ±± ++ ++++ ++++++ -- ±± ++ ++++ ++++++ -- ±± ++ ++++ ++++++ 벌노랑이(1.0%)Bee Yellow (1.0%) 1One 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 0.180.18 저자극Low stimulus

시험예 5 : 여드름 개선 효과 패널 테스트Test Example 5: Acne improvement effect panel test

상기 실시예 1의 벌노랑이 추출물의 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 항염 효과를 측정하기 위하여, 실시예 1에서 얻은 벌노랑이 추출물을 활용하여 하기 표 5의 조성비에 따라 외용제를 영양크림의 제형으로 하여 제형예 1과 비교 제형 예 1을 제조하였다. 하기 배합성분의 함량비의 단위는 중량%이다.In order to determine the anti-inflammatory effect of the bee yellow extract of Example 1 on Propionibacterium acnes, the extract of Example 1 was used and the external preparation was formulated into a nutritional cream according to the composition ratio shown in Table 5 below. To prepare Formulation Example 1 and Comparative Formulation Example 1, respectively. The unit of the content ratio of the following ingredients is% by weight.

배합성분Compounding ingredient 제형 예 1Formulation Example 1 비교 제형 예 1Comparative Formulation Example 1 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100 실시예 1Example 1 1.01.0 -- 시토스테롤Sitosterol 1.71.7 1.71.7 폴리글리세릴 2-올레이트Polyglyceryl 2-oleate 1.51.5 1.51.5 세테아레스-4Setares-4 1.21.2 1.21.2 콜레스테롤cholesterol 1.51.5 1.51.5 디세틸포스페이트Dicetyl phosphate 0.40.4 0.40.4 농글리세린Concentrated glycerin 5.05.0 5.05.0 썬플라워 오일Sunflower oil 10.010.0 10.010.0 카르복시비닐폴리머Carboxyvinyl polymer 0.20.2 0.20.2 산탄검Xanthan gum 0.30.3 0.30.3 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 0.20.2 향료Spices 적량Suitable amount 적량Suitable amount 방부제antiseptic 적량Suitable amount 적량Suitable amount

상기 표 5의 제형예 1 및 비교제형예 1의 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 항염효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 여드름을 가지고 있는 30 ~ 40대 성인 남녀 40명을 각각 제형예 1 및 비교제형예 1의 2개 군에 대해 20명씩 2조로 나누어 영양크림을 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하게 하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 (1주, 2주, 4주 경과한 시점 경과 후)에 여드름 개선 효과를 육안으로 평가 하였다. 상기 육안 평가에서, 여드름 좌창 정도가 실험에 들어가기 전에 비해 70% 이상 개선된 경우에 여드름 개선 효과가 매우 우수(◎), 여드름 좌창 정도가 40% 이상 내지 70% 미만으로 개선된 경우에 여드름 개선 효과가 우수(●), 여드름 좌창 정도가 10% 이상에서 40% 미만으로 개선된 경우에 여드름 개선 효과가 보통(△), 여드름 좌창 정도가 10% 미만으로 개선되거나 전혀 개선되지 않은 경우 또는 오히려 악화된 경우에 여드름 개선 효과가 나쁨(×)으로 평가하였다. 그 결과는 표 6에 나타내었다.In order to confirm the anti-inflammatory effect of Propionibacterium acnes of Formulation Example 1 and Comparative Formulation Example 1 in Table 5, evaluation was made as follows. 40 men and women in their 30s and 40s with acne were divided into two groups of 20 persons for each of Formulation Example 1 and Comparative Formulation Example 1 to apply the nutritional cream twice daily for 4 weeks to the face. The effect of improving acne was visually evaluated before application and after application (after one week, two weeks, and four weeks had elapsed). In the visual evaluation, when the degree of acne acne was improved by 70% or more compared with that before the experiment, the acne improvement effect was excellent (⊚), and when the degree of acne acne was improved from 40% or more to less than 70% (△), the degree of acne acne was less than 10%, or it was not improved at all, or even worse And the acne improvement effect was evaluated as poor (x). The results are shown in Table 6.

여드름개선 정도Acne improvement 제형 예1Formulation Example 1 비교 제형 예 1Comparative Formulation Example 1 1주1 week 2주2 weeks 4주4 weeks 1주1 week 2주2 weeks 4주4 weeks 33 55 77 00 1One 00 77 55 66 1One 1One 1One 77 88 55 66 55 55 ×× 33 22 22 1313 1313 1414

그 결과, 상기 표 6에서와 같이 벌노랑이를 함유하고 있는 제형 예1의 화장료 조성물은 벌노랑이를 전혀 함유하지 않은 비교 제형 예 1의 화장료 조성물에 비해 여드름 개선 효과가 우수하였음을 실험을 통하여 알 수 있었다.As a result, as shown in Table 6, the cosmetic composition of Formulation Example 1 containing bee yellow was more excellent in improving acne than the cosmetic composition of Comparative Formulation Example 1 which did not contain any bee yellow. there was.

Claims (5)

벌노랑이 추출물을 유효성분으로 함유하고, 상기 벌노랑이 추출물은 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물.
A cosmetic composition for improving acne characterized by containing an extract of Bee Yellow as an active ingredient and the extract of Bee Yellow which inhibits the activity of Propionibacterium acnes.
제 1항에 있어서, 상기 벌노랑이 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매로 추출하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물.
[Claim 2] The cosmetic composition for improving acne according to claim 1, wherein the bee yellow extract is extracted with water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, ether, ethyl acetate, chloroform or a mixed solvent of these organic solvents and water.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.0001 내지 50 중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물.
The cosmetic composition for improving acne according to claim 1, wherein the extract comprises 0.0001 to 50% by weight based on the total weight of the composition.
삭제delete 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 유연 화장수, 수렴 화장수, 로션, 크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업 베이스, 파운데이션, 샴푸, 린스 및 바디 세정제로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 여드름 개선용 화장료 조성물.The composition according to claim 1, wherein the composition is selected from the group consisting of a soft lotion, a convergent lotion, a lotion, a cream, a massage cream, an essence, an eye cream, an eye essence, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a powder, a body lotion, Wherein the composition has one formulation selected from the group consisting of an oil, a body essence, a makeup base, a foundation, a shampoo, a rinse, and a body cleanser.
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