KR102576424B1 - The composition comprising extract of Rhamnus davurica for improving acne - Google Patents

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Abstract

본 발명은 갈매나무 추출물을 포함하는 여드름 개선 및 예방 효능이 있는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균에 대한 항균효과를 갖는 갈매나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition containing sea buckthorn extract with an acne improving and preventing effect, and specifically, to a composition containing sea buckthorn extract, which has an antibacterial effect against the Propionibacterium acnes bacterium, as an active ingredient. It relates to a composition for preventing and improving acne.

Description

갈매나무 추출물을 포함하는 여드름 예방 및 개선용 조성물{The composition comprising extract of Rhamnus davurica for improving acne} Composition for preventing and improving acne comprising extract of sea buckthorn tree {The composition comprising extract of Rhamnus davurica for improving acne}

본 발명은 갈매나무 추출물을 포함하는 여드름 예방 및 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균효과를 갖는 갈매나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing and improving acne containing sea buckthorn extract, and more specifically, to preventing acne containing sea buckthorn extract as an active ingredient, which has an antibacterial effect against Propionibacterium acnes. and compositions for improvement.

여드름(Acne vulgaris)은 청소년기부터 중년에 이르기까지 발생하는 가장 흔한 피부질환 중 하나이며, 모낭 상피의 이상 과각화, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)로부터 유도된 염증, 피지 과분비 등의 다양한 요인이 그 원인으로 작용한다. 피지는 모낭이라 불리는 모발을 포함한 관과 연결된 피지선에서 분비된다. 피지선은 얼굴, 등, 가슴 부위에 많이 존재하므로 이들 부위에서 여드름이 흔히 발생하게 된다. 정상적인 피부에서 피지는 모낭의 개구를 통해 피부 표면으로 배출되지만, 모낭의 이상각화나 피지 과분비로 인해 모낭의 폐색이 일어나 피지 배출이 잘 되지 않으면 여드름의 기본 병변인 면포(comedone)를 형성하기도 한다. Acne (Acne vulgaris) is one of the most common skin diseases that occurs from adolescence to middle age, and is caused by various factors such as abnormal hyperkeratinization of the hair follicle epithelium, inflammation induced by Propionibacterium acnes, and sebum hypersecretion. It acts as the cause. Sebum is secreted from sebaceous glands that are connected to hair-containing ducts called hair follicles. Sebaceous glands are abundant in the face, back, and chest areas, so acne commonly occurs in these areas. In normal skin, sebum is discharged to the skin surface through the opening of the hair follicle, but if abnormal keratinization of the hair follicle or sebum hypersecretion causes blockage of the hair follicle and does not allow sebum to be discharged properly, comedones, the basic lesion of acne, may form.

여드름의 증상은 과다 분비된 피지가 피지선 주변의 모공에 쌓이면서 면포를 형성하게 되는 면포성 여드름부터, 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)가 번식되어 염증 반응이 생기면서 붉은 여드름인 구진이 생기는 구진성 여드름, 구진의 염증 반응이 더 심해지면서 내부에 고름 주머니인 농포가 생기는 화농성 여드름, 농포가 피부 안에서 터져 여드름 환부 주변에 더 많은 염증을 유발시켜 손가락만한 덩어리인 결절이 생기는 결절성 여드름까지 다양한 피부 병변으로 나타난다. 여드름은 흔하게 발생하는 피부 질환이기 때문에 면포성 여드름처럼 증상이 가벼울 때는 일시적인 생리 현상으로 간주하기도 하지만, 주위조직의 손상과 염증세포 침윤을 보이는 화농성, 결절성 여드름 같은 경우 흉터나 색소 침착 등을 남기기 쉽다.Symptoms of acne range from comedonal acne, where excessive secretion of sebum accumulates in pores around the sebaceous glands, forming comedones, to papules, which are red acne when the acne bacteria Propionibacterium acnes proliferates and an inflammatory response occurs. Papular acne, where the inflammatory reaction of the papules becomes more severe, causes pustules, which are pockets of pus, to form inside, and nodular acne, where the pustules burst inside the skin and cause more inflammation around the acne affected area, forming finger-sized nodules. It appears as a variety of skin lesions. Acne is a common skin disease, so when the symptoms are mild, such as comedonal acne, it is considered a temporary physiological phenomenon. However, in cases such as purulent or nodular acne, which shows damage to surrounding tissues and infiltration of inflammatory cells, it is likely to leave scars or pigmentation.

여드름을 치료하기 위해 경구 항생제와 레티노이드의 복용 등의 방법들이 보편적으로 이용되고 있다. 특히, 세균 감염에 의해 생성되는 염증성 여드름의 경우 항생제 처리를 통해 증상을 완화시킬 수 있으나 여러 부작용이 보고되고 있으며, 대다수의 이러한 항생제에 대한 세균 내성이 급속하게 나타나고 있다. 최근 테트라사이클린(tetracycline), 에리트로마이신(erythromycin) 등은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 증식 억제와 염증 반응을 감소에 이용되는 항생제이지만 항생제 내성 발생으로 인하여 지속적인 사용이 어렵고 다량 사용시 간독성이 심한 것으로 알려져 있다. 또한, 국소 치료요법으로 주로 사용되는 과산화 벤조일(Benzoyl peroxide)은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대해 강한 항균작용이 있고, 항염 및 면포 용해작용이 있다. 하지만 피부에 심각한 자극을 주어 홍진, 발진, 건조 등 여러 부작용의 위험성이 있다. 따라서 이러한 문제점을 극복하기 위해 비교적 피부에 자극이 적고 부작용이 적은 천연물질을 이용한 효능물질 개발에 관한 연구가 활발하게 이루어지고 있다. Methods such as taking oral antibiotics and retinoids are commonly used to treat acne. In particular, in the case of inflammatory acne caused by bacterial infection, symptoms can be alleviated through antibiotic treatment, but various side effects have been reported, and bacterial resistance to the majority of these antibiotics is rapidly emerging. Recently, tetracycline, erythromycin, etc. are antibiotics used to inhibit the growth of Propionibacterium acnes and reduce the inflammatory response, but continuous use is difficult due to the development of antibiotic resistance and severe hepatotoxicity when used in large doses. It is known that In addition, benzoyl peroxide, which is mainly used as a topical treatment, has a strong antibacterial effect against Propionibacterium acnes and has anti-inflammatory and comedonolytic effects. However, there is a risk of serious irritation to the skin and various side effects such as redness, rash, and dryness. Therefore, in order to overcome these problems, research is being actively conducted on the development of effective substances using natural substances that are relatively less irritating to the skin and have fewer side effects.

상기 문제점을 해결하기 위한 본 발명의 목적은 항균 효과가 있는 갈매나무 추출물을 유효성분으로 포함하여 여드름 예방 및 개선에 효과가 있는 조성물을 제공하는 것이다.The purpose of the present invention to solve the above problems is to provide a composition that is effective in preventing and improving acne, including buckthorn extract, which has an antibacterial effect, as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 양상은,Aspects of the present invention for achieving the above object are:

갈매나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 및 개선용 조성물이고,It is a composition for preventing and improving acne containing sea buckthorn extract as an active ingredient,

상기 갈매나무 추출물은 상기 갈매나무의 줄기, 잎, 꽃, 열매 및 종자로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물인 여드름 예방 및 개선용 조성물을 제공하는 것이다.The sea buckthorn extract provides a composition for preventing and improving acne, which is one or more extracts selected from the group consisting of the stems, leaves, flowers, fruits and seeds of the sea buckthorn tree.

본 발명에 따르면, 갈매나무 추출물을 포함하는 여드름 예방 및 개선용 조성물은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균활성을 가짐으로써, 여드름을 예방 및 개선에 효과적이다.According to the present invention, a composition for preventing and improving acne containing sea buckthorn extract has antibacterial activity against Propionibacterium acnes and is effective in preventing and improving acne.

또한, 상기 여드름 예방 및 개선용 조성물은 천연물질로 이루어져서 합성 물질에 의한 부작용이나 위험도가 없으며, 인체에 무해하고, 안전하다.In addition, the composition for preventing and improving acne is made of natural substances, so there are no side effects or risks caused by synthetic substances, and it is harmless and safe to the human body.

도 1은 갈매나무 잎 추출물의 처리 유/무에 따른 항균활성 시험 결과를 나타낸 사진이다.
도 2는 갈매나무 잎 추출물의 농도에 따른 균 생육 저해도를 나타낸 그래프이다.
도 3은 피부각질세포에 대한 갈매나무 잎 추출물의 세포 독성 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
Figure 1 is a photograph showing the results of an antibacterial activity test according to treatment of sea buckthorn leaf extract with or without treatment.
Figure 2 is a graph showing the degree of inhibition of bacterial growth according to the concentration of sea buckthorn leaf extract.
Figure 3 is a graph showing the results of a cytotoxicity test of sea buckthorn leaf extract on skin keratinocytes.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 다만, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 구체적으로 기재한 것뿐이며, 본 발명의 범위는 청구범위를 기초로 해석된다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail. However, this is only specifically described to facilitate understanding of the present invention, and the scope of the present invention is interpreted based on the claims.

본 발명은 갈매나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 및 개선용 조성물이고, 상기 갈매나무 추출물은 상기 갈매나무의 줄기, 잎, 꽃, 열매 및 종자로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물인 여드름 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다.The present invention is a composition for preventing and improving acne containing sea buckthorn extract as an active ingredient, and the sea buckthorn extract is one or more extracts selected from the group consisting of the stems, leaves, flowers, fruits and seeds of the sea buckthorn tree. and compositions for improvement.

상기 갈매나무(Rhamnus davurica)는 갈매나무과에 속하는 낙엽 관목으로, 한반도 백두대간 산지에 자생한다. 갈매나무의 과실은 서리자(鼠李子), 껍질을 서리피(鼠李皮), 뿌리를 서리근(鼠李根)이라고 하며 이뇨제, 완하제로 약용한다. 또한 나무껍질과 열매에 황색 색소가 있어 염료로도 사용되며, 골 질환 예방 및 치료에 사용된다.The buckthorn tree (Rhamnus davurica) is a deciduous shrub belonging to the Buckthorn family and grows naturally in the Baekdudaegan mountain range of the Korean Peninsula. The fruit of the buckthorn tree is called Seorija (鼠李子), the bark is called Seoripi (鼠李皮), and the roots are called Seorigeun (鼠李根), and it is used medicinally as a diuretic and laxative. Additionally, the bark and fruit contain a yellow pigment, so they are used as a dye and are used to prevent and treat bone diseases.

본 발명에 있어서, 상기 갈매나무 추출물은 사용되는 부위에 따라 갈매나무 줄기 추출물, 갈매나무 잎 추출물, 갈매나무 꽃 추출물, 갈매나무 열매 추출물 및 갈매나무 종자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다.In the present invention, the sea buckthorn extract may be one or more selected from the group consisting of sea buckthorn stem extract, sea buckthorn leaf extract, sea buckthorn flower extract, sea buckthorn fruit extract, and sea buckthorn seed extract, depending on the part used.

본 발명에 있어서 상기 “갈매나무 줄기 추출물”은 갈매나무 줄기를 추출 대상으로 하여 얻어지는 모든 형태의 추출물로서, 예를 들어 식물 줄기에 직/간접적으로 열을 가해 얻는 진액 형태의 추출물, 살아있는 식물 줄기의 윗부분을 잘라 흘러나오는 진액 형태의 추출물, 식물을 유기용매, 또는 물로 추출하여 얻는 추출물, 식물 줄기를 연소시킬 때 기체를 냉각하여 얻는 추출물 등을 모두 포함할 수 있다.In the present invention, the “buckthorn stem extract” refers to all types of extracts obtained by extracting sea buckthorn stems, for example, extracts in the form of essence obtained by directly or indirectly heating the plant stem, and extracts of living plant stems. It can include extracts in the form of a sap that flows out by cutting the upper part, extracts obtained by extracting plants with organic solvents or water, and extracts obtained by cooling the gas when burning plant stems.

상기 “갈매나무 열매 추출물”은 유기 용매 또는 물을 사용하여 얻어지는 추출물과 갈매나무 열매를 압착하여 얻어지는 진액 형태의 추출물, 용매 추출물을 감압하여 얻어지는 오일 추출물을 포함할 수 있다.The “buckthorn fruit extract” may include an extract obtained using an organic solvent or water, an extract in the form of a liquid obtained by pressing sea buckthorn fruit, and an oil extract obtained by depressurizing a solvent extract.

상기 “갈매나무 종자 추출물”은, 유기 용매 또는 물을 사용하여 얻어진 추출물과, 갈매나무 종자를 압착하여 얻어지는 진액 추출물, 또는 용매 추출물을 감압하여 얻어진 오일 추출물을 포함할 수 있다.The “buckthorn seed extract” may include an extract obtained using an organic solvent or water, a sap extract obtained by pressing sea buckthorn seeds, or an oil extract obtained by depressurizing a solvent extract.

상기 “갈매나무 잎 추출물”은 유기 용매 또는 물을 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.The “buckthorn leaf extract” refers to an extract obtained using an organic solvent or water.

상기 “갈매나무 꽃 추출물”은 유기 용매 또는 물을 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.The “buckthorn flower extract” refers to an extract obtained using an organic solvent or water.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 갈매나무 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 추출할 수 있으며, 유기용매를 이용하여 추출하는 것이 바람직하다.In one embodiment of the present invention, the sea buckthorn extract can be extracted using water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof, and it is preferable to extract it using an organic solvent.

상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 헥산 및 크로로포름으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다.The organic solvent may be one or more selected from the group consisting of alcohols having 1 to 4 carbon atoms, ethyl acetate, hexane, and chloroform.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 바람직한 추출물로는 갈매나무 잎의 에탄올 추출물이 사용될 수 있다.In one embodiment of the present invention, an ethanol extract of sea buckthorn leaves may be used as a preferred extract.

본 발명에 있어서, 상기 갈매나무 추출물은 냉침 추출법, 온침 추출법 또는 열 추출법 등의 방법이 사용될 수 있으며, 통상의 추출기기, 초음파 분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.In the present invention, the sea buckthorn extract can be extracted using a cold needle extraction method, a warm needle extraction method, or a heat extraction method, and a conventional extraction device, an ultrasonic grinding extractor, or a fractionator can be used.

또한, 상기 갈매나무 열매 추출물 및 갈매나무 종자 추출물을 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매로 추출된 추출물을 감압 농축한 오일 추출물일 수 있다.In addition, the extract may be an oil extract obtained by concentrating the extract of the buckthorn fruit extract and the buckthorn seed extract with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof under reduced pressure.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 제조된 추출물은 여과하거나 농축 또는 건조하여 용매를 제거할 수 있으며, 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압 여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일예로 회전 증발기를 이용하여 감압 농축할 수 있고, 상기 건조는 일예로 동결 건조법으로 수행할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the prepared extract may be filtered, concentrated, or dried to remove the solvent. Specifically, the filtration may be performed using filter paper or a reduced pressure filter, and the concentration may be performed using a reduced pressure concentrator, such as It can be concentrated under reduced pressure using a rotary evaporator, and the drying can be performed by, for example, a freeze-drying method.

본 발명에 있어서, 상기 여드름 예방 및 개선용 조성물은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대하여 항균 활성을 가질 수 있다.In the present invention, the composition for preventing and improving acne may have antibacterial activity against Propionibacterium acnes.

여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 혐기성의 그람 양성균으로 포자를 형성하지 않으며, 막대(rod) 형태를 가지고 있어 여드름 간균이라고도 불린다. 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 제한적으로 호기성 증식도 가능하며, 피부와 모낭의 대표적인 상재균 중 하나이다. 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 각질세포(keratinocytes), 피지세포(sebocytes) 및 대식세포(macrophage)의 pro-inflammatory cytokine의 생성을 촉진하여 염증성 여드름을 발생시킨다. 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)와 침윤성 단핵구(monocyte) 및 림프구 사이의 상호작용 또한 염증성 여드름의 발생에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져있다. 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 낮은 분자량의 펩타이드를 생산하는데 이것은 다형핵백혈구(polymorphonuclear leukocyte; PMNK)를 화학적으로 유인하여 염증을 유발시키고, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)가 생성하는 다양한 염증성 연결인자들에 의해 면역세포를 자극하여 IL-8, IL-1b, TNF-a 등의 염증성 싸이토카인(cytokine)을 생성하여 피부 내 염증반응을 심화시킨다. 모낭의 이상각화나 피지 과분비로 인해 모낭의 폐색이 일어나게 되면, 모낭 내로 산소 유입이 감소하게 되고 이는 혐기성인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생육에 더욱 유리한 조건을 형성하여 여드름 병소에서 증식이 촉진된다. 또한 피지선에서 피지 분비가 증가하게 되면 호지성(lipophilic)인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생육이 유리해지고, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)가 생성하는 리파아제 효소는 피지를 분해하여 지방산을 형성한다. 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)로 인해 생성된 지방산은 모낭을 자극하여 모낭벽을 파괴하고 그 부위에 면역 세포들이 몰려들어 염증을 일으키게 된다. Propionibacterium acnes, the causative agent of acne, is an anaerobic Gram-positive bacterium that does not form spores and has a rod shape, so it is also called acne bacillus. Propionibacterium acnes is capable of limited aerobic growth and is one of the representative bacterial flora of the skin and hair follicles. Propionibacterium acnes causes inflammatory acne by promoting the production of pro-inflammatory cytokines in keratinocytes, sebocytes, and macrophages. Interactions between Propionibacterium acnes and infiltrating monocytes and lymphocytes are also known to play an important role in the development of inflammatory acne. Propionibacterium acnes produces low molecular weight peptides, which chemically attract polymorphonuclear leukocytes (PMNK) and cause inflammation. Various inflammatory linking factors stimulate immune cells to produce inflammatory cytokines such as IL-8, IL-1b, and TNF-a, deepening the inflammatory response in the skin. When hair follicle occlusion occurs due to abnormal keratinization or sebum hypersecretion, oxygen inflow into the hair follicle is reduced, which creates more favorable conditions for the growth of anaerobic Propionibacterium acnes, which proliferates in acne lesions. It is promoted. In addition, when sebum secretion increases from the sebaceous glands, the growth of lipophilic Propionibacterium acnes becomes favorable, and the lipase enzyme produced by Propionibacterium acnes breaks down sebum. This forms fatty acids. Fatty acids produced by Propionibacterium acnes stimulate hair follicles, destroying the hair follicle walls and causing immune cells to flock to the area and cause inflammation.

상기 여드름 예방 및 개선용 조성물은 갈매나무 추출물을 유효성분으로 포함하여 상기 프로피오니박테리움 아크네스의 생육을 억제함으로 여드름의 예방 및 개선에 우수한 효과를 나타낸다.The composition for preventing and improving acne contains sea buckthorn extract as an active ingredient and exhibits excellent effects in preventing and improving acne by inhibiting the growth of Propionibacterium acnes.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 갈매나무 추출물은 상기 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 5.0중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.02 내지 0.2 중량%로 포함될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the sea buckthorn extract may be included in an amount of 0.001 to 5.0% by weight, preferably 0.02 to 0.2% by weight, based on the total weight of the composition.

상기 함량이 0.001 중량% 미만이면 유효한 효과를 나타낼 수 없으며, 5.0 중량%를 초과하면 변색, 변취 등 제형 안정성에 문제가 있다.If the content is less than 0.001% by weight, an effective effect cannot be shown, and if it exceeds 5.0% by weight, there are problems with formulation stability such as discoloration and off-odor.

본 발명에 있어서, 상기 여드름의 개선 및 예방용 조성물은 갈매나무 추출물 외에 사용방법 및 사용 목적에 따라 다양한 성분들을 더 포함할 수 있다.In the present invention, the composition for improving and preventing acne may further include various ingredients depending on the method and purpose of use in addition to the sea buckthorn extract.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 갈매나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 및 개선을 위한 조성물은 스킨, 로션, 크림 및 파우더로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 제형으로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 제한하는 것은 아니다.According to one embodiment of the present invention, the composition for preventing and improving acne containing the sea buckthorn extract as an active ingredient may be prepared and used in one or more formulations selected from the group consisting of skin, lotion, cream, and powder. It is not limited to this.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실험예 및 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실험예는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실험예와 실시예에 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 발명의 실험예 및 실시예는 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in detail through experimental examples and examples to specifically explain the present invention. However, the experimental examples according to the present invention may be modified into various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the experimental examples and examples described in detail below. Experimental examples and examples of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.

제조예 1 : 갈매나무 추출물 제조Preparation Example 1: Preparation of sea buckthorn extract

건조된 갈매나무 잎을 분쇄하여 2배량의 에탄올에 침지시킨 상태로 초음파 장치에 30분간 노출시켰다. 24시간 침지 후 여과지에 거른 다음 회전감압농축기로 용매를 제거하여 추출물을 제조하였다.Dried sea buckthorn leaves were pulverized, immersed in twice the amount of ethanol, and exposed to an ultrasonic device for 30 minutes. After immersion for 24 hours, the extract was prepared by filtering through filter paper and removing the solvent using a rotary vacuum concentrator.

실험예 1 : 균주 및 배양조건Experimental Example 1: Strains and culture conditions

균주는 KCTC 생물자원센터에서 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes, KCTC 3314) 균을 분양받아 사용하였다. The strain used was Propionibacterium acnes (KCTC 3314) purchased from the KCTC Biological Resources Center.

상기 분양받은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)균을 Reinforced Clostridial broth 배지에 접종한 후 이를 37 ℃, 혐기조건에서 72시간 정치배양하여 실험에 사용하였다.The distributed Propionibacterium acnes bacteria were inoculated into Reinforced Clostridial broth medium and then cultured for 72 hours at 37°C under anaerobic conditions and used in experiments.

실험예 2 : 항균활성 확인- 평판배지 확산법Experimental Example 2: Confirmation of antibacterial activity - plate medium diffusion method

갈매나무 잎 추출물의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균활성을 측정하기 위해 평판배지 확산시험(Agar diffusion method)을 진행하였다. Reinforced Clostridial Agar 한 plate 당 약 1 x 10^6의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)를 균일하게 도포하였다. 3.0 mg의 갈매나무 잎 추출물이 loading된 8 x 0.7 mm disc와 loading되지 않은 disc를 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)가 도포되어있는 배지 위에 핀셋을 이용하여 올려놓고 이를 37 ℃, 혐기조건에서 72시간 정치배양시켰다.Agar diffusion method was performed to measure the antibacterial activity of sea buckthorn leaf extract against Propionibacterium acnes. Approximately 1 x 10^6 Propionibacterium acnes was uniformly applied per plate of Reinforced Clostridial Agar. An 8 It was incubated for 72 hours.

항균활성의 판정은 추출물 미처리 대조군 대비 실험군의 clear zone의 지름을 측정하였다.Antibacterial activity was determined by measuring the diameter of the clear zone in the experimental group compared to the extract-untreated control group.

도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 갈매나무 잎 추출물을 처리한 실험군에서는 평균 12.75 mm의 clear zone이 나타났다.As shown in Figure 1, the experimental group treated with the sea buckthorn leaf extract of the present invention showed an average clear zone of 12.75 mm.

실험예 3 : 항균활성 확인- 최소억제농도(MIC) testExperimental Example 3: Confirmation of antibacterial activity - minimum inhibitory concentration (MIC) test

96 well-plate에 최종 혼합액이 200 uL가 되도록 약 5x10^5 CFU/mL 농도의 세균 배양액에 각 농도에 따른 추출물을 처리하였다. 추출물의 경우 감압 농축된 갈매나무 잎 추출물을 DMSO에 50 mg/mL의 농도로 녹인 것을 사용하여, 멸균된 액체배지로 2.0, 1.0, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625 mg/mL 농도가 되도록 희석해서 사용하도록 했다.Extracts according to each concentration were treated with bacterial culture medium at a concentration of approximately 5x10^5 CFU/mL so that the final mixture was 200 uL in a 96 well-plate. In the case of the extract, a reduced-pressure concentrated sea buckthorn leaf extract dissolved in DMSO at a concentration of 50 mg/mL is used and diluted with sterilized liquid medium to a concentration of 2.0, 1.0, 0.5, 0.25, 0.125, and 0.0625 mg/mL. I was told to do it.

세균 배양액, 추출물을 포함하는 상기 혼합액을 처리한 96-well plate를 37 ℃, 혐기조건에서 72 시간 배양하였다.A 96-well plate treated with the above mixed solution containing bacterial culture and extract was cultured at 37°C for 72 hours under anaerobic conditions.

항균활성의 판정은 추출물 미처리 대조군 대비 실험군의 흡광도를 샘플 처리 직후와 72시간 배양 후 microplate reader를 이용하여 600 nm에서 흡광도를 측정하여 그 변화 값을 계산, 비교하여 진행하였다.Determination of antibacterial activity was carried out by measuring the absorbance of the experimental group compared to the extract untreated control group at 600 nm using a microplate reader immediately after sample treatment and after 72 hours of incubation, and calculating and comparing the change value.

상기 도 2는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 갈매나무 잎 추출물의 농도별 생육 억제도를 나타낸 것으로, 갈매나무 추출물의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 MIC 값이 0.25mg/mL 임을 확인하였다.Figure 2 shows the degree of growth inhibition by concentration of sea buckthorn leaf extract against Propionibacterium acnes, and the MIC value of sea buckthorn leaf extract against Propionibacterium acnes is 0.25. It was confirmed that it was mg/mL.

실험예 4 : 피부각질세포에 대한 세포독성Experimental Example 4: Cytotoxicity to skin keratinocytes

피부각질세포에 대한 갈매나무 잎 추출물의 독성을 측정하기 위해 MTT 실험을 진행하였다.An MTT experiment was conducted to measure the toxicity of sea buckthorn leaf extract to skin keratinocytes.

HaCaT cell을 96 well plate에 약 1x10^4 cells/well로 처리한 다음 DMEM, 10% FBS, 1% penicillin-streptomycin 배지에서 37℃, 5% CO2조건으로 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후 이전 배양에 사용된 배지를 제거하고 배지에 100, 50, 25, 12.5 ug/mL로 희석한 갈매나무 추출물을 처리하여 37℃, 5% CO2에서 24시간 반응시켰다. HaCaT cells were treated at about 1x10^4 cells/well in a 96 well plate and then cultured in DMEM, 10% FBS, 1% penicillin-streptomycin medium at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. After 24 hours, the medium used in the previous culture was removed, and the medium was treated with buckthorn extract diluted to 100, 50, 25, and 12.5 ug/mL and reacted at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours.

처리 후 각 웰 당 5 mg/mL MTT 용액을 20 uL 씩 첨가하여 37℃, 5% CO2에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 후 상등액을 모두 제거하고 DMSO 150 uL 씩 첨가하여 상온에서 10분간 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.After treatment, 20 uL of 5 mg/mL MTT solution was added to each well and reacted at 37°C and 5% CO 2 for 3 hours. After reaction, all supernatants were removed, 150 uL of DMSO was added at a time, reacted at room temperature for 10 minutes, and absorbance was measured at 540 nm using a microplate reader.

그 결과, 도 4와 같이 갈매나무 잎 추출물은 200 ug/mL 이하에서 피부각질세포에 대하여 세포독성을 나타내지 않았다.As a result, as shown in Figure 4, buckthorn leaf extract did not show cytotoxicity to skin keratinocytes at less than 200 ug/mL.

상기 실험 결과에 따르면, 본 발명에 따른 갈매나무 추출물이 여드름의 원인인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생육을 저해하고, 항균활성을 갖는 것으로 여드름을 예방 및 개선하는 천연 소재임을 확인 하였다.According to the above experimental results, it was confirmed that the sea buckthorn extract according to the present invention is a natural material that inhibits the growth of Propionibacterium acnes, the cause of acne, and has antibacterial activity, preventing and improving acne. .

이하, 상기 실험예의 결과를 근거로 하여 갈매나무 추출물을 이용한 여러 제형예를 조성하여 제시한다. 그러나 이들 제형예는 본 발명을 설명하기 위한 것으로 본 발명의 제형이 이들 제형예에만 국한되지 않는 다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명한 것이다.Below, based on the results of the above experimental examples, several formulation examples using sea buckthorn extract are prepared and presented. However, these formulation examples are for illustrating the present invention, and it is obvious to those skilled in the art that the formulation of the present invention is not limited to these formulation examples.

제형예 1 내지 3 : 갈매나무 추출물을 함유하는 화장료 조성물 제조Formulation Examples 1 to 3: Preparation of a cosmetic composition containing sea buckthorn extract

제형예 1 : 로션(emulsion)Formulation Example 1: Lotion (emulsion)

성분명Ingredient name 실시예(중량%)Example (% by weight) 스테아린산stearic acid 0.50.5 에탄올ethanol 10.010.0 바셀린vaseline 1.01.0 스쿠알란squalane 2.52.5 유동파라핀liquid paraffin 6.06.0 모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄Polyoxyethylene sorbitan monooleate 1.51.5 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 8.08.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.050.05 향료Spices 0.20.2 방부제antiseptic 적량Appropriate amount 산화방지제antioxidant 적량Appropriate amount 갈매나무 잎 추출물Sea buckthorn leaf extract 0.0250.025 정제수Purified water To 100To 100

제형예 2 : 유연화장수(skin toner)Formulation Example 2: Soft lotion (skin toner)

성분명Ingredient name 중량%weight% 글리세린glycerin 5.05.0 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.03.0 에탄올ethanol 5.05.0 폴리옥시에틸렌노닐페닐에테르Polyoxyethylene nonylphenyl ether 0.50.5 향료Spices 적량Appropriate amount 방부제antiseptic 적량Appropriate amount 갈매나무 잎 추출물Sea buckthorn leaf extract 0.020.02 정제수Purified water To 100To 100

제형예 3 : 크림(cream)Formulation Example 3: Cream

성분명Ingredient name 실시예(중량%)Example (% by weight) 글리세린glycerin 5.05.0 스테아린산stearic acid 8.08.0 스쿠알란squalane 5.05.0 자기유화형 모노스테아린산 글리세린Self-emulsifying glycerin monostearate 2.52.5 모노스테아린산 폴리옥시에틸렌 소르비탄Polyoxyethylene sorbitan monostearate 1.51.5 프로필렌 글리콜propylene glycol 4.04.0 스테아릴글리시레티네이트Stearyl glycyrrhetinate 0.20.2 바셀린vaseline 2.02.0 산화방지제antioxidant 적량Appropriate amount 향료Spices 정량dose 방부제antiseptic 적량Appropriate amount 갈매나무 잎 추출물Sea buckthorn leaf extract 0.020.02 정제수Purified water To 100To 100

Claims (7)

갈매나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 및 개선용 조성물이고,
상기 갈매나무 추출물은 상기 갈매나무의 줄기, 잎 및 열매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물인 여드름 예방 및 개선용 조성물.
It is a composition for preventing and improving acne containing sea buckthorn extract as an active ingredient,
A composition for preventing and improving acne, wherein the sea buckthorn extract is one or more extracts selected from the group consisting of the stems, leaves and fruits of the sea buckthorn tree.
제1항에 있어서,
상기 갈매나무 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매로 추출된 추출물인 여드름 예방 및 개선용 조성물.
According to paragraph 1,
The sea buckthorn extract is a composition for preventing and improving acne, which is an extract extracted with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof.
제2항에 있어서,
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 핵산 및 클로로포름으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 여드름 예방 및 개선용 조성물.
According to paragraph 2,
The organic solvent is a composition for preventing and improving acne, wherein the organic solvent is at least one selected from the group consisting of alcohol having 1 to 4 carbon atoms, ethyl acetate, nucleic acid, and chloroform.
제1항에 있어서,
상기 갈매나무 열매 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매로 추출된 추출물을 감압 농축한 오일 추출물인 여드름 예방 및 개선용 조성물.
According to paragraph 1,
A composition for preventing and improving acne, wherein the sea buckthorn fruit extract is an oil extract obtained by concentrating the extract under reduced pressure with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof.
제1항에 있어서,
상기 여드름 예방 및 개선용 조성물은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대하여 항균 활성을 갖는 여드름 예방 및 개선용 조성물.
According to paragraph 1,
The composition for preventing and improving acne has antibacterial activity against Propionibacterium acnes.
제1항에 있어서,
상기 갈매나무 추출물은 상기 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 5.0중량%로 포함되는 여드름 예방 및 개선용 조성물.
According to paragraph 1,
A composition for preventing and improving acne, wherein the sea buckthorn extract is contained in an amount of 0.001 to 5.0% by weight based on the total weight of the composition.
제1항에 있어서,
상기 여드름 예방 및 개선용 조성물은 스킨, 로션, 크림, 파우더로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 제형을 갖는 여드름 예방 및 개선용 조성물.
According to paragraph 1,
The composition for preventing and improving acne has one or more formulations selected from the group consisting of skin, lotion, cream, and powder.
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