JP6442092B2

JP6442092B2 - Defensin production promoter, cathelicidin production promoter, antibacterial agent

Info

Publication number: JP6442092B2
Application number: JP2018014724A
Authority: JP
Inventors: 秀須藤
Original assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-01-14
Filing date: 2018-01-31
Publication date: 2018-12-19
Anticipated expiration: 2035-12-17
Also published as: JP2018087212A; JP6407848B2; JP2016135761A

Description

本発明は、ディフェンシン産生促進剤、カテリシジン産生促進剤、抗菌剤に関する。 The present invention relates to a defensin production promoter, a cathelicidin production promoter, and an antibacterial agent.

生来もっている生体防御機構として生体内の抗菌物質（抗菌ペプチド）の存在が以前より知られている。
抗菌ペプチド(anti-microbial peptide)は、生体内で自然免疫メカニズムを担当する天然抗菌物質であって、細菌、真菌、原虫、ウィルスを含む各種微生物に対して抗菌力を有しており、局所的な感染抑制と全身免疫反応を誘導する特性を有するペプチド物質である。通常、抗菌ペプチドは、両親媒性の構造を有しており、抗菌作用メカニズムとして抗菌ペプチドのカチオン部位が微生物細胞膜が有しているアニオン性リン脂質に結合して微生物の細胞膜を破壊する原理によって抗菌活性を示す。
抗生物質や合成抗菌剤など種々の薬剤による従来の抗菌剤では、抵抗性微生物が出現し、耐性菌に対する対策は新たな抗菌剤を開発するしかない。
しかし、抗菌ペプチドの産生を促進する方法であれば、上記のような問題はなく、自己生体防御機構を増強できる。 The existence of an antibacterial substance (antibacterial peptide) in the living body has been known as a living body defense mechanism.
Anti-microbial peptides are natural antibacterial substances that are responsible for innate immune mechanisms in the body, and have antibacterial activity against various microorganisms including bacteria, fungi, protozoa, and viruses. It is a peptide substance that has the property to induce proper infection suppression and systemic immune response. In general, antibacterial peptides have an amphipathic structure, and as a mechanism of antibacterial action, the cation site of the antibacterial peptide binds to an anionic phospholipid of the microbial cell membrane and destroys the microbial cell membrane. Shows antibacterial activity.
In conventional antibacterial agents such as antibiotics and synthetic antibacterial agents, resistant microorganisms appear, and the only countermeasure against resistant bacteria is to develop new antibacterial agents.
However, any method that promotes the production of antibacterial peptides does not have the above-mentioned problems and can enhance the self-biological defense mechanism.

デフェンシン(defensin)は、抗菌ペプチドのうち最も多く研究されたものの一つであり、β−デフェンシンは、皮膚、肺、内蔵、腎臓、生殖器などの粘膜上皮で発現するペプチド物質である。抗菌性のみならず、全身免疫反応と炎症反応の調節にも重要な機能を果たすことが知られており、免疫応答、炎症の治癒を促進する。（非特許文献１）
また、デフェンシンは皮膚の物理的な損傷、又は感染などが生じた場合、その分泌が促進されて抗菌作用と共に全身免疫反応を誘導する効果を有しており、特に、皮膚では、ケラチノサイトの分化と増殖を誘導して傷を治癒する機能も果たしている（非特許文献２）
アトピー皮膚炎患者にも有効であるという報告がある。（非特許文献３）
デフェンシン産生促進剤として、有機酸、酵母由来の多糖類、酵母由来の不溶性画分、酵母由来のマンナン含有成分、ヨーグルト、甘酒の抽出物、焼酎もろみ、糠味噌濃縮物等が知られている。（特許文献１〜５）
Defensin is one of the most studied among antibacterial peptides, and β-defensin is a peptide substance expressed in mucosal epithelium such as skin, lung, viscera, kidney and genital organs. It is known not only to have antibacterial properties, but also plays an important role in the regulation of systemic immune responses and inflammatory responses, and promotes immune responses and healing of inflammation. (Non-Patent Document 1)
In addition, defensin has the effect of inducing a systemic immune response as well as antibacterial action by promoting its secretion when physical damage or infection of the skin occurs, especially in the skin, Also plays a function of inducing proliferation and healing wounds (Non-Patent Document 2)
There are reports that it is also effective for patients with atopic dermatitis. (Non Patent Literature 3)
Known defensin production promoters include organic acids, yeast-derived polysaccharides, yeast-derived insoluble fractions, yeast-derived mannan-containing components, yogurt, amazake extract, shochu mash, and miso miso concentrate. (Patent Documents 1 to 5)

カテリシジン(cathelicidin)は、広範囲な抗菌作用を示し、様々な免疫調節作用の機能を果たす。カテリシジンの分解生成物の一つであるＬＬ−３７は、広範囲な抗菌活性と共に生体内の炎症調節の機能を有する。即ち、ＬＬ−３７は、バクテリア、真菌、及びウィルスなどに対する直接的な抗菌活性と共に、好中球（ｅｓｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）、単核細胞、Ｔ細胞に対する走化性を示し、内皮細胞の増殖を誘導する。特に、皮膚に存在するＬＬ−３７は、外来抗原が浸透した時に迅速に防御することにより抗原抑制の機能を果たす（非特許文献４）。
実際に、皮膚炎、創傷治癒、血管新生のレベルの低下をもたらす原因とする疾患の予防又は治療（アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、脳卒中、動脈閉塞性疾患または潰瘍）の用途が知られている。（特許文献６〜８）
アトピー皮膚炎患者にも有効であるという報告がある。（非特許文献３） Cathelicidin exhibits a wide range of antibacterial effects and serves various immunomodulatory functions. LL-37, one of the degradation products of cathelicidin, has a function of regulating inflammation in vivo with a wide range of antibacterial activities. That is, LL-37 exhibits chemotactic properties for eosinophils, mononuclear cells, and T cells, as well as direct antibacterial activity against bacteria, fungi, and viruses, and induces endothelial cell proliferation. In particular, LL-37 present in the skin fulfills the function of antigen suppression by rapidly defending when a foreign antigen penetrates (Non-Patent Document 4).
In fact, the use of prevention or treatment of diseases that cause reduced levels of dermatitis, wound healing, angiogenesis (atherosclerosis, coronary heart disease, stroke, arterial occlusive disease or ulcer) Are known. (Patent Documents 6 to 8)
There are reports that it is also effective for patients with atopic dermatitis. (Non Patent Literature 3)

エンメイソウ（延命草）はシソ科ヤマハッカ属ヒキオコシ（Isodon japonicus）の全草を乾燥した日本の民間薬で消化不良、食欲不振、腹痛等に用いられてきた。さらに、抗アレルギー剤、抗ヒスタミン剤、抗補体活性剤等、抗肥満化粧料、血小板凝集抑制作用、血管新生抑制剤、タイトジャンクション形成促進剤等の用途が知られている。（特許文献９〜１４） Enmeiso (extended herb) is a Japanese folk medicine that is dried from the whole grass of the family Lamiaceae (Isodon japonicus) and has been used for indigestion, loss of appetite, abdominal pain, and so on. Furthermore, uses such as antiallergic agents, antihistamines, anticomplement activators, anti-obesity cosmetics, platelet aggregation inhibitory action, angiogenesis inhibitors, tight junction formation accelerators, and the like are known. (Patent Documents 9 to 14)

キク科のアルニカ属（Arnica）の植物は、創傷治癒、抗菌作用、鎮痛作用、消炎作用等があり、リウマチや関節炎、口腔粘膜炎症、打撲、捻挫といった症状の改善に用いられている。Arnica montana、Arnica chamissonis、Arnica unalascensis等が現在薬用に利用され、部位としては主に花や根が用いられている。
さらに美白、抗アレルギー剤、ヒアルロン酸分解阻害剤、頭部用外用剤、プロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進剤、活性酸素消去剤等の用途も知られている。（特許文献１５〜２０） Arnica plants belonging to the family Asteraceae have wound healing, antibacterial action, analgesic action, anti-inflammatory action, etc., and are used to improve symptoms such as rheumatism, arthritis, oral mucosal inflammation, bruises and sprains. Arnica montana, Arnica chamissonis, Arnica unalascensis, etc. are currently used for medicinal purposes, and flowers and roots are mainly used as parts.
Furthermore, uses such as whitening, antiallergic agents, hyaluronic acid degradation inhibitors, head external preparations, profilagrin mRNA expression promoters, active oxygen scavengers, and the like are also known. (Patent Documents 15 to 20)

クチナシ(Gardenia jasminoides）はアカネ科クチナシ属の常緑低木である。果実は山梔子或いは梔子と称され生薬として、消炎、止血、解熱、鎮静薬として利用されている。
また、セラミド産生促進剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、髪質改善剤、トリプシン阻害剤等の用途も知られている。（特許文献２１〜２４） Gardenia (Gardenia jasminoides) is an evergreen shrub belonging to the genus Acanthaceae. The fruit is called Yamakiko or Yuzu and is used as a herbal medicine as anti-inflammatory, hemostatic, antipyretic and sedative.
Applications of ceramide production promoters, matrix metalloprotease inhibitors, hair quality improvers, trypsin inhibitors and the like are also known. (Patent Documents 21 to 24)

カミツレ(Matricaria chamomilla）はカモミール、カモマイルとも呼ばれ、ローマンカモミールと区別する場合はジャーマンカモミールと称する。
ヨーロッパ等で健胃・発汗・消炎作用があるとして、婦人病などに用いられていた。
さらに美白化粧料、コラーゲンゲル収縮促進剤、デオドラント剤、コラーゲンゲル収縮促進剤、皮膚ダニ駆除剤等の用途が知られている。（特許文献２５〜２９） Chamomile (Matricaria chamomilla) is also called chamomile or chamomile, and it is called German chamomile when distinguished from roman chamomile.
It has been used for gynecological diseases because it has a healthy stomach, sweating, and anti-inflammatory action in Europe.
Furthermore, uses such as whitening cosmetics, collagen gel contraction promoters, deodorants, collagen gel contraction promoters, skin mite control agents are known. (Patent Documents 25 to 29)

杏仁はアンズ(Prunus armeniaca）の種子で、漢方薬として痛風、喘息、咳に用いられる。また、杏仁粉を入れた杏仁豆腐（アンニンドウフ）は中国や日本で広く食されている。
さらに美白用化粧料組成物、脳機能改善剤、プロテアーゼ阻害剤、抗う蝕剤、毛髪化粧料等の用途が知られている。（特許文献３０〜３４） Anjin is a seed of apricot (Prunus armeniaca) and is used as a Chinese medicine for gout, asthma and cough. In addition, apricot tofu with anpricot powder is widely eaten in China and Japan.
Furthermore, uses such as a whitening cosmetic composition, a brain function improving agent, a protease inhibitor, an anticaries agent, and a hair cosmetic are known. (Patent Documents 30 to 34)

国際公開第２００５／０２７８９３号International Publication No. 2005/027893 特開２００３−１９７号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2003-197 特開２００３−２６２号公報JP 2003-262 A 特開２００６−２４１０２３号公報JP 2006-241023 A 特開２００５−２７０１１７号公報JP-A-2005-270117 米国特許出願公開第２００６／２９２５５１号明細書US Patent Application Publication No. 2006/292551 特表２００６−５１８３７５号公報JP-T-2006-518375 欧州特許出願公開第１３５８８８８号明細書European Patent Application No. 1358888 特開平０７−１９６５２２号公報JP 07-196522 A 特開平０９−０８７１８９号公報JP 09-087189 A 特開平１０−２０３９９０号公報Japanese Patent Laid-Open No. 10-203990 特開２００７−１９７３８８号公報JP 2007-197388 A 特開２０１２−０２５７７７号公報JP 2012-025777 A 特開２０１３−０５６８４１号公報JP 2013-056841 A 特開平０８−０１２５６１号公報Japanese Patent Laid-Open No. 08-012561 特開平０９−０８７１８９号公報JP 09-087189 A 特開平１０−１３０１６２号公報JP-A-10-130162 特開平１１−２２８３５５号公報JP-A-11-228355 特開２００６−０１６３３７号公報JP 2006-016337 A 特開２００６−１１７６１２号公報JP 2006-117612 A 特開２０００−１６９３５９号公報JP 2000-169359 A 特開２０００−３１９１５５号公報JP 2000-319155 A 特開２００１−２７０８１１号公報JP 2001-270811 A 特開２００６−１８２７３２号公報JP 2006-182732 A 特開平０７−０２５７４２号公報Japanese Patent Application Laid-Open No. 07-025742 特開平１０−０７２３３６号公報Japanese Patent Laid-Open No. 10-072336 特開２００２−２５５７７６号公報JP 2002-255776 A 特開２００３−１７６２０８号公報JP 2003-176208 A 特開２００５−０６０３２０号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2005-060320 特開平０７−１２６１４９号公報JP 07-126149 A 特開平０７−１６５５８９号公報Japanese Patent Laid-Open No. 07-165589 特開平１０−３３８６４２号公報JP 10-338642 A 特開２００１−０９７８７５号公報JP 2001-097875 A 特開２００２−１７３４１６号公報JP 2002-173416 A

Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９９；２８６：５２５−５２８Science 1999; 286: 525-528. ＮｉｙｏｎｓａｂａＦ，ＵｓｈｉｏＨ，ＮａｋａｎｏＮら、「Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｈｕｍａｎ β−ｄｅｆｅｎｓｉｎｓｓｔｉｍｕｌａｔｅｅｐｉｄｅｒｍａｌｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓａｎｄｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ」、ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａｔｏｌ、２００７年、第１２７巻、５９４頁Niyonsaba F, Ushio H, Nakano N, et al., "Antimicrobial peptides human β-defensins stimulate epidermal keratinocyte migration, proliferation and production of proinflammatory cytokines and chemokines", J Invest Dermatol, 2007 year, the first 127, pp. 594, pp. ＯｎｇＰＹら、「ＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＰｅｐｔｉｄｅｓａｎｄＳｋｉｎＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓｉｎＡｔｏｐｉｃＤｅｒｍａｔｉｔｉｓ」、ＴｈｅＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ、２００２年、第３４７巻、１１５１−１１６０頁Ong PY et al., “Endogenous Antimicrobial Peptides and Skin Infections in Atopic Dermatis”, The England Journal of Medicine, 2002, pp. 3471-1151. ＢｒａｆｆＭＨ，ＢａｒｄａｎＡ，ＮｉｚｅｔＶら、「Ｃｕｔａｎｅｏｕｓｄｅｆｅｎｓｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｂｙａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓ」、ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａｔｏｌ、２００５年、第１２５巻、９頁Braff MH, Bardan A, Nizet V et al., “Cutaneous defense mechanisms by antimicrobial peptides,” J Invest Dermatol, 2005, 125, 9

本発明の目的はディフェンシン、カテリシジンの産生を促進し、皮膚、口腔や消化器でのバクテリア、真菌、及びウィルスなどに対する抗菌性のみならず、免疫増強、皮膚炎、アトピー皮膚炎、創傷治癒、炎症、血管新生のレベルの低下をもたらす原因とする疾患の予防又は治療に対して有効な製剤を得ることにある。 The purpose of the present invention is to promote the production of defensin and cathelicidin, not only antibacterial activity against bacteria, fungi and viruses in the skin, oral cavity and digestive tract, but also immune enhancement, dermatitis, atopic dermatitis, wound healing, inflammation Another object of the present invention is to obtain a preparation effective for the prevention or treatment of diseases that cause a decrease in the level of angiogenesis.

本発明者らが鋭意検討した結果、エンメイソウの抽出物、アルニカ属の植物の抽出物、クチナシの果実の抽出物、カミツレの抽出物、杏仁の抽出物が上記目的を達することがわかった。
エンメイソウ、アルニカ属の植物、クチナシの果実、カミツレ、杏仁は、必要に応じて乾燥した後、抽出効率を考えると、細切、粉砕等の処理を行った後に抽出する。
乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。
前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を用いる。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜１５質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部添加することが好ましい。 As a result of intensive studies by the present inventors, it has been found that an extract of enamel, a plant extract of the genus Arnica, an extract of gardenia fruit, an extract of chamomile, and an extract of apricot kernel achieve the above object.
Enmeiso, Arnica plants, gardenia fruits, chamomiles, and apricots are dried as necessary, and then extracted after processing such as shredding and pulverization in consideration of extraction efficiency.
Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer.
As the solvent used for the extraction, water, a hydrophilic organic solvent, or a mixture thereof is used.
Examples of water that can be used as the extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, as well as water that has been subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering, and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes purified water, hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.
Examples of the hydrophilic organic solvent include lower alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene glycol, propylene glycol, Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycerin, and a mixed solvent of these hydrophilic organic solvents and water can be used.
In addition, when using the mixed solvent of the said water and a hydrophilic organic solvent, in the case of a lower alcohol, it is 1-20 mass parts with respect to 10 mass parts of water, and in the case of a lower aliphatic ketone, it is 10 mass parts of water. On the other hand, it is preferable to add 1 to 15 parts by mass. In the case of a polyhydric alcohol, it is preferable to add 1 to 20 parts by mass with respect to 10 parts by mass of water.

抽出に使用する有機溶媒の量は、原料となる植物に対して望ましくは５〜１００倍量程度、さらに望ましくは１０〜５０倍量程度が良い。さらに抽出効率を上げるため、抽出溶媒中で撹拌やホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
尚、抽出操作は１回のみの操作に限定されるものではない。抽出後の残渣に再度新鮮な溶媒を添加し、抽出操作を施すこともできるし、抽出溶媒を複数回抽出原料に接触させることも可能である。
本発明者らが検討した結果、本発明の効果を発揮する物質は、水にも、８０％のエタノール抽出されるので、ある程度精製する場合は、水で抽出したのち、不溶物を取り除き、等量〜５倍量のエタノールを加えてさらに抽出するとよいこともわかった。
必要ならば、その効果に影響のない範囲で更に脱臭、脱色等の精製処理を加えても良く、エバポレーターのような減圧濃縮装置や加熱による溶媒除去などにより、濃縮することができる。
また、この抽出物を合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０やセファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐ等）やデキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）、限外濾過等を用いてさらに精製することも可能である。 The amount of the organic solvent used for extraction is preferably about 5 to 100 times, more preferably about 10 to 50 times the amount of the plant as a raw material. Furthermore, in order to raise extraction efficiency, you may stir or homogenize in an extraction solvent. The extraction temperature is suitably about 5 ° C. to the boiling point of the extraction solvent. The extraction time varies depending on the type of extraction solvent and the extraction temperature, but it is appropriate to set it to about 1 hour to 14 days.
The extraction operation is not limited to a single operation. A fresh solvent can be added again to the residue after extraction to perform an extraction operation, or the extraction solvent can be brought into contact with the extraction raw material a plurality of times.
As a result of investigations by the present inventors, a substance that exerts the effect of the present invention is also extracted into water by 80% ethanol. Therefore, when purifying to some extent, after extracting with water, insoluble matters are removed, etc. It has also been found that further extraction may be performed by adding an amount to 5 times the amount of ethanol.
If necessary, purification treatment such as deodorization and decolorization may be further added within a range that does not affect the effect, and concentration can be performed by a vacuum concentrator such as an evaporator or solvent removal by heating.
Further, this extract can be further purified using a synthetic adsorbent (Diaion HP20, Sephabies SP825, Amberlite XAD4, MCIgelCHP20P, etc.), dextran resin (Sephadex LH-20, etc.), ultrafiltration and the like. is there.

本発明の製剤は、経口、注射、外用のいずれでも薬効を発現する。
これらの抽出物の製剤への配合量は固形分として、０．０００００１〜１０．０重量％、好ましくは０．００００１〜３．０重量％、さらに好ましくは０．００００５〜１．０重量％である。 The preparation of the present invention exhibits a medicinal effect for any of oral, injection and external use.
The amount of these extracts in the preparation is 0.000001 to 10.0% by weight, preferably 0.00001 to 3.0% by weight, more preferably 0.00005 to 1.0% by weight, as a solid content. is there.

また、本発明の製剤には、上記成分の他に医薬品や化粧品の各種製剤において使用されている界面活性剤、油性成分、保湿剤、高分子化合物、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、ビタミン類、色素、香料、水等を配合することができる。 In addition to the above ingredients, the preparations of the present invention include surfactants, oily ingredients, moisturizers, polymer compounds, ultraviolet absorbers, anti-inflammatory agents, bactericides, and other agents used in various pharmaceutical and cosmetic preparations. Antioxidants, sequestering agents, preservatives, vitamins, pigments, fragrances, water and the like can be blended.

上記界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、非イオン性、天然、合成のいずれの界面活性剤も使用できるが、皮膚に対する刺激性を考慮すると非イオン性のものを使用することが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシド等が挙げられる。 As the surfactant, any of anionic, cationic, nonionic, natural, and synthetic surfactants can be used, but it is preferable to use a nonionic surfactant in consideration of irritation to the skin. Examples of the nonionic surfactant include glycerin fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbite fatty acid ester, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol. , Polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ether, polyethylene glycol fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, alkylglycoside and the like.

油性成分としては、油脂類、ロウ類、炭化水素類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、精油類、シリコーン油類などを挙げることができる。油脂類としては、例えば大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド等の合成トリグリセリド等が；ロウ類としては、例えばカルナバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等が；炭化水素類としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ブリスタン等が；高級脂肪酸類としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等が；高級アルコール類としては、例えばラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール等が；エステル類としては、例えばオクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル等が；精油類としては、例えばハッカ油、ジャスミン油、ショウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等が；シリコーン油類としては、例えばジメチルポリシロキサン等が挙げられる。これら上述の油性成分は一種又は二種以上を組み合わせて使用することができる。本発明においては、このうち特にミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド、ラノリン、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレン酸、イソステアリン酸、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、オクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、ミリスチレン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ハッカ油、トウヒ油、ケイ皮油、ローズ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ゲラニオール、ピネン、リモネン、ジメチルポリシロキサンを使用することが好ましい。 Examples of the oil component include fats and oils, waxes, hydrocarbons, higher fatty acids, higher alcohols, esters, essential oils, silicone oils, and the like. Examples of the fats and oils include soybean oil, nutka oil, jojoba oil, avocado oil, almond oil, olive oil, cacao oil, sesame oil, persic oil, castor oil, coconut oil, mink oil, beef fat, pork fat and the like, and these Hardened oil obtained by hydrogenation of natural fats and oils and synthetic triglycerides such as myristic acid glyceride and 2-ethylhexanoic acid triglyceride; waxes include, for example, carnauba wax, whale wax, beeswax, lanolin and the like; hydrocarbons For example, liquid paraffin, petrolatum, paraffin microcrystalline wax, ceresin, squalane, bristan etc .; higher fatty acids include, for example, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, linoleic acid, Linolenic acid, lanolinic acid, isostearic acid, etc .; Examples of the class alcohols include lauryl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol, 2-hexyldecanol, etc .; examples of the esters include cetyl octanoate, triglyceride octanoate, myristyl lactate, cetyl lactate, Examples of essential oils include mint oil, jasmine, isopropyl myristate, myristyl myristate, octyldodecyl myristate, isopropyl palmitate, isopropyl adipate, butyl stearate, decyl oleate, cholesterol isostearate, POE sorbite fatty acid ester, etc. Oil, pepper brain oil, cypress oil, spruce oil, ryu oil, turpentine oil, cinnamon oil, bergamot oil, mandarin oil, ginger oil, pine , Lavender oil, bay oil, clove oil, hiba oil, rose oil, eucalyptus oil, lemon oil, thyme oil, peppermint oil, rose oil, sage oil, menthol, cineole, eugenol, citral, citronellal, borneol, linalool, geraniol, Camphor, thymol, spirantol, pinene, limonene, terpene compounds, etc .; examples of silicone oils include dimethylpolysiloxane. These oily components described above can be used alone or in combination of two or more. In the present invention, among these, myristic acid glyceride, 2-ethylhexanoic acid triglyceride, lanolin, liquid paraffin, petrolatum, paraffin microcrystalline wax, squalane, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, linoleic acid, linolenic acid, isostearic acid , Cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, cholesterol, cetyl octanoate, triglyceride octanoate, isopropyl myristate, octyldodecyl myristate, cholesterol isostearate, POE sorbite fatty acid ester, peppermint oil, spruce oil, cinnamon oil, rose Oil, menthol, cineol, eugenol, citral, citronellal, geraniol, pinene, limonene, dimethylpolysiloxane It is preferable to use.

本発明の製剤には、さらに下記のような成分を配合することができるが、その成分もこれらに限定されるものではない。
色素類；黄色４号、青色１号、黄色２０２号等の厚生省令に定められたタール色素別表Ｉ及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等。
その他；殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。 The following components can be further added to the preparation of the present invention, but the components are not limited thereto.
Colors: Yellow color No. 4, Blue No. 1 and Yellow No. 202 are recognized as food additives such as tar color dyes I and II, chlorophyll, riboflavin, crocin, safflower, anthraquinone, etc. Natural pigments.
Vitamins; vitamin A, vitamin C, vitamin D, vitamin E, etc.
Others: bactericides, preservatives, other ingredients necessary for formulation.

本発明の製剤は、前記必須成分に必要に応じて前記任意成分を加え、常法に従って製造することができる。 The preparation of the present invention can be produced according to a conventional method by adding the optional components to the essential components as necessary.

次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。 EXAMPLES Next, an Example is given and this invention is demonstrated in detail.

実施例１
エンメイソウ（全草、乾燥物、細断品）を５０ｇに５０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。 Example 1
After adding 2 liters of 50% (V / V) aqueous ethanol solution to 50g of 50% (V / V) ethanol solution, it is extracted for 24 hours, filtered (No5C) and evaporated. Was lyophilized.

実施例２
アルニカ属の植物（Arnica montana）（花、乾燥物、細断品）を５０ｇに５０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。 Example 2
Arnica montana (flower, dried product, shredded product) is added to 50 g of 2-liter 50% (V / V) ethanol aqueous solution, extracted for 24 hours with occasional stirring, and filtered (No5C). After evaporation, this was freeze-dried.

実施例３
クチナシの果実（乾燥物、細断品）を５０ｇに３０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液１リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。 Example 3
Add 1 liter of 30% (V / V) ethanol aqueous solution to 50 g of gardenia fruit (dried product, shredded product), extract for 24 hours with occasional stirring, filter (No5C), evaporate this Lyophilized.

実施例４
カミツレ（花、乾燥物、細断品）を５０ｇに５０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。 Example 4
Add 50 liters of chamomile (flower, dried product, shredded product) to 50 g of 50% (V / V) ethanol aqueous solution, extract with stirring occasionally for 24 hours, filter (No5C) and evaporate Lyophilized.

実施例５
杏仁（乾燥物、細断品）を５０ｇに３０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液１リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。 Example 5
Add 1 liter of 30% (V / V) ethanol aqueous solution to 50 g of apricot kernel (dried product, shredded product), extract for 24 hours with occasional stirring, filter (No5C), evaporate, and freeze-dry this did.

確認試験
２継代目のヒト包皮由来表皮細胞（クラボウ）を５０−７０％コンフルエントとなるようＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地（フェノールレッド不含）で培養後、前日にカルシウム濃度を１．８ｍＭに変更したＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地に、実施例を添加し、３７℃、５％ＣＯ2インキュベータ中で２日間培養した。 Confirmation test HuMedia- cultivated human foreskin-derived epidermis cells (Kurabo) in the 2nd passage in HuMedia-KG2 medium (without phenol red) so as to be 50-70% confluent, and the calcium concentration was changed to 1.8 mM the day before. Examples were added to KG2 medium and cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 2 days.

＜ＲＮＡの抽出＞
細胞からのＴｏｔａｌＲＮＡの抽出は、トリプシン／ＥＤＴＡで剥離後、illustra RNA Mini RNA Isolation Kit（GE Healthcare社）を用い、GE Healthcare社の添付マニュアルに従い調製した。ＲＮＡ濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ１０００（ＴｈｅｒｍｏＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を用い算出した。 <Extraction of RNA>
Total RNA was extracted from the cells after exfoliation with trypsin / EDTA and then using illustra RNA Mini RNA Isolation Kit (GE Healthcare) according to the attached manual of GE Healthcare. The RNA concentration was calculated using NanoDrop1000 (Thermo SCIENTIFIC).

＜ＲＴ反応およびリアルタイムＰＣＲ＞
２．５μｇのＴｏｔａｌＲＮＡを使い、ＭＭＬＶＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅＲＮａｓｅＨ−（東洋紡社）を用い、東洋紡社推奨プロトコール（ＴＯＹＯＢＯＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳＦＯＲＬＩＦＥＳＣＩＥＮＣＥ２００８／２００９のページ１−４２）に従いＲＴ反応を行なった。
リアルタイムＰＣＲはＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７５００リアルタイムＰＣＲＳｙｓｔｅｍを用い、以下のように実施した。ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ法を用い（ＴＨＵＮＤＥＲＢＩＲＤＳＹＢＲｑＰＣＲＭｉｘ，東洋紡社）、７５００リアルタイムＰＣＲＳｙｓｔｅｍの操作マニュアル（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＣＴ（△△ＣＴ）法（ｎ＝３）により遺伝子発現比較を実施した。内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。
なお、対象遺伝子はディフェンシン１、カテリシジンである。 <RT reaction and real-time PCR>
Using 2.5 μg of total RNA, RT reaction was performed according to Toyobo recommended protocol (TOYOBO BIOCHEMICALS FOR LIFE SCIENCE 2008/2009, page 1-42) using MMLV Reverse Transcriptase RNase H- (Toyobo).
Real-time PCR was performed as follows using Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System. Using the SYBR Green method (THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix, Toyobo Co., Ltd.) and the 7500 Real-Time PCR System operation manual (Applied Biosystems), gene expression comparison was performed by the Comparative CT (ΔΔCT) method (n = 3). GAPDH was used as an internal standard.
The target genes are defensin 1 and cathelicidin.

確認試験の結果を図１に示す。
実施例１〜５はディフェンシン１、カテリシジンの遺伝子の発現を促進することがわかった。 The result of the confirmation test is shown in FIG.
Examples 1 to 5 were found to promote defensin 1 and cathelicidin gene expression.

また、実施例を配合した外用剤を作成し、実際に使用してみた結果、皮膚炎、アトピー皮膚炎、創傷治癒に改善がみられた。 Moreover, the external preparation which mix | blended the Example was created, and as a result of actually using it, the improvement was seen in dermatitis, atopic dermatitis, and wound healing.

実施例１〜５の確認試験結果でディフェンシン１及びカテリシジンの遺伝子発現量変化を示す図である。縦軸は実施例を添加していない場合の遺伝子発現量を１としてときの遺伝子発現量である。作用濃度は実施例１は0.1％、実施例２は0.025％、実施例３は0.1％、実施例４は0.05％、実施例５は0.2％で実験した。It is a figure which shows the gene expression level change of defensin 1 and cathelicidin by the confirmation test result of Examples 1-5. The vertical axis represents the gene expression level when the gene expression level when no example is added is 1. The working concentration was 0.1% in Example 1, 0.025% in Example 2, 0.1% in Example 3, 0.05% in Example 4, and 0.2% in Example 5.

Claims

A defensin production promoter containing, as an active ingredient, one or more extracts selected from the extract of gardenia fruit. (Except for antibacterial applications)

A cathelicidin production promoter containing, as an active ingredient, one or more extracts selected from the extract of gardenia fruit. (Except for antibacterial applications)