JP2021138746A - Occludin production promoter - Google Patents
Occludin production promoter Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021138746A JP2021138746A JP2021096296A JP2021096296A JP2021138746A JP 2021138746 A JP2021138746 A JP 2021138746A JP 2021096296 A JP2021096296 A JP 2021096296A JP 2021096296 A JP2021096296 A JP 2021096296A JP 2021138746 A JP2021138746 A JP 2021138746A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oil
- skin
- water
- function
- occludin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Abstract
Description
本発明は、クローディン、オクルディンの産生を促進し、タイトジャンクション機能強化する製剤に関する。 The present invention relates to a preparation that promotes the production of claudin and occludin and enhances the tight junction function.
皮膚は体の最も外側に存在しており、細菌などの外界からの刺激に対するバリアとしての役割を有している。皮膚においては、表皮細胞が基底細胞から有棘細胞、顆粒細胞、さらには角層細胞へと約４週間かけて角化し、これらの細胞中で細胞間脂質やＮＭＦ（天然保湿因子）、さらにはコーニファイドエンベローブを形成することによってバリア機能を成し遂げている。
しかし、研究が進み、皮膚のバリア機能は角層のみが担っていると考えられていたのが、表皮顆粒層に存在するタイトジャンクションの構成タンパク質を遺伝子レベルで欠損させると皮膚のバリア機能が崩壊することから、近年、タイトジャンクションも皮膚のバリア機能に重要な役割を担うと考えられてきている（非特許文献１参照）。
The skin is located on the outermost side of the body and acts as a barrier against external stimuli such as bacteria. In the skin, epidermal cells keratinize from basal cells to spiny cells, granule cells, and even stratum corneum cells over a period of about 4 weeks, and in these cells intercellular lipids, NMFs (natural moisturizing factors), and even The barrier function is achieved by forming a cornified envelope.
However, as research progressed, it was thought that only the stratum corneum was responsible for the barrier function of the skin, but the barrier function of the skin collapsed when the constituent proteins of tight junctions present in the stratum granulosum of the epidermis were deleted at the genetic level. Therefore, in recent years, it has been considered that tight junctions also play an important role in the barrier function of the skin (see Non-Patent Document 1).
タイトジャンクションは、細胞間結合のひとつで、密着結合あるいはタイト結合とも呼ばれ、隣り合う上皮細胞をつなぎ、細胞と細胞の隙間をシールすることで物質の透過を制御する結合装置である。したがって、クローディンやオクルディンなどのタイトジャンクション構成タンパク質が何らかの原因で減少した場合、タイトジャンクションの構造的な破壊が起こり、物質の透過バリアとして機能が低下し、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状が引き起こされる。
クローディンやオクルディンの産生を促進することにより、タイトジャンクション機能強化し、皮膚のバリア機能及び水分保持機能を高め、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状を予防する。
さらにアレルゲン侵入抑制、消化管粘膜機能維持等の用途もあり、いくつかの物質がこれらの用途を目的として知られている。（特許文献１〜６参照）
Tight junction is one of cell-cell connections, also called tight junction or tight junction, and is a binding device that controls the permeation of substances by connecting adjacent epithelial cells and sealing the gap between cells. Therefore, if tight junction constituent proteins such as claudin and occludin are reduced for some reason, the structural destruction of tight junctions will occur and the function as a permeation barrier for substances will be reduced, resulting in dry skin, rough skin, atopic dermatitis and the like. Causes skin symptoms such as various infectious diseases.
By promoting the production of claudin and occludin, the tight junction function is strengthened, the barrier function and water retention function of the skin are enhanced, and skin symptoms such as dry skin, rough skin, atopic dermatitis and various infectious diseases are prevented.
Furthermore, there are also uses such as suppression of allergen invasion and maintenance of gastrointestinal mucosal function, and some substances are known for these uses. (See
牛蒡はゴボウ（Arctium lappa）の根をいい、食用として利用されているが、生薬・漢方薬にも用いられ、利尿、発汗、血液浄化、皮膚疾患（ニキビ、湿疹、乾癬）の薬の材料としても使われている。
また、発毛・育毛剤、痩身用皮膚化粧料、カテプシンＤ産生促進剤等の用途が知られ、（特許文献７〜９参照）化粧料の原料として抽出物が市販されている。
Burdock is the root of burdock (Arctium lappa) and is used for food, but it is also used for crude drugs and Chinese herbs, and it is also used as a material for diuresis, sweating, blood purification, and skin diseases (acne, eczema, psoriasis). It is used.
Further, applications such as hair growth / growth agents, skin cosmetics for slimming, and cathepsin D production promoters are known (see Patent Documents 7 to 9), and extracts are commercially available as raw materials for cosmetics.
芍薬はシャクヤク（学名 Paeonia lactiflora）の根の乾燥又は蒸乾したもので、「神皇本草経」にも記載された生薬で、消炎・鎮痛・抗菌・止血・抗けいれん作用がある。
また、浴剤組成物、美白化粧料、インターロイキン４産生抑制剤等の用途が知られ、（特許文献１０〜１２参照）化粧料の原料として抽出物が市販されている。
Peony is a dried or steam-dried root of peony (scientific name: Paeonia lactiflora), which is a crude drug described in "Shinko Honsokyo" and has anti-inflammatory, analgesic, antibacterial, hemostatic, and anticonvulsant effects.
Further, applications such as bath composition, whitening cosmetics, and interleukin 4 production inhibitor are known (see Patent Documents 10 to 12), and extracts are commercially available as raw materials for cosmetics.
本発明の目的はクローディン、オクルディンの産生を促進し、タイトジャンクション機能強化し、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状に有効な皮膚外用剤を得ることにある。 An object of the present invention is to promote the production of claudin and occludin, enhance the tight junction function, and obtain an external skin preparation effective for skin symptoms such as dry skin, rough skin, atopic dermatitis and various infectious diseases.
本発明者らが鋭意検討した結果、 牛蒡の抽出物、芍薬の抽出物が上記目的を達することがわかった。
牛蒡、芍薬は、必要に応じて乾燥した後、抽出効率を考えると、細切、粉砕等の処理を行った後に抽出する。
乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。
前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を用いる。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜１５質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部添加することが好ましい。
As a result of diligent studies by the present inventors, it was found that the burdock extract and the peony extract achieve the above object.
Burdock and peony are extracted after being dried as needed and then subjected to treatments such as shredding and crushing in consideration of extraction efficiency.
Drying may be carried out in the sun, or may be carried out using a commonly used dryer.
As the solvent used for the extraction, water, a hydrophilic organic solvent, or a mixture thereof is used.
Examples of water that can be used as the extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, as well as those subjected to various treatments. Treatments applied to water include, for example, purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, osmotic pressure adjustment, buffering and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes purified water, hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline and the like.
Examples of the hydrophilic organic solvent include lower alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene glycol and propylene glycol. Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycerin, and a mixed solvent of these hydrophilic organic solvents and water can be used.
When a mixed solvent of the water and the hydrophilic organic solvent is used, 1 to 20 parts by mass with respect to 10 parts by mass of water in the case of lower alcohol, and 10 parts by mass of water in the case of lower aliphatic ketone. On the other hand, it is preferable to add 1 to 15 parts by mass. In the case of polyhydric alcohol, it is preferable to add 1 to 20 parts by mass with respect to 10 parts by mass of water.
抽出に使用する有機溶媒の量は、原料となる植物に対して望ましくは５〜１００倍量程度、さらに望ましくは１０〜５０倍量程度が良い。さらに抽出効率を上げるため、抽出溶媒中で撹拌やホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
尚、抽出操作は１回のみの操作に限定されるものではない。抽出後の残渣に再度新鮮な溶媒を添加し、抽出操作を施すこともできるし、抽出溶媒を複数回抽出原料に接触させることも可能である。
本発明者らが検討した結果、本発明の効果を発揮する物質は、水にも、８０％のエタノール抽出されるので、ある程度精製する場合は、水で抽出したのち、不溶物を取り除き、等量〜５倍量のエタノールを加えてさらに抽出するとよいこともわかった。
必要ならば、その効果に影響のない範囲で更に脱臭、脱色等の精製処理を加えても良く、エバポレーターのような減圧濃縮装置や加熱による溶媒除去などにより、濃縮することができる。
また、この抽出物を合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０やセファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐ等）やデキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）、限外濾過等を用いてさらに精製することも可能である。
The amount of the organic solvent used for extraction is preferably about 5 to 100 times, more preferably about 10 to 50 times the amount of the plant as a raw material. In order to further increase the extraction efficiency, stirring or homogenization may be performed in the extraction solvent. It is appropriate that the extraction temperature is from about 5 ° C. to a temperature equal to or lower than the boiling point of the extraction solvent. The extraction time varies depending on the type of extraction solvent and the extraction temperature, but it is appropriate to set it to about 1 hour to 14 days.
The extraction operation is not limited to a one-time operation. A fresh solvent can be added again to the residue after extraction to perform an extraction operation, or the extraction solvent can be brought into contact with the extraction raw material multiple times.
As a result of the examination by the present inventors, 80% of the substance exhibiting the effect of the present invention is extracted with ethanol in water. Therefore, when purifying to some extent, after extracting with water, the insoluble matter should be removed, etc. It was also found that further extraction should be performed by adding an amount to 5 times the amount of ethanol.
If necessary, further purification treatment such as deodorization and decolorization may be added within a range that does not affect the effect, and the concentration can be achieved by a vacuum concentrator such as an evaporator or solvent removal by heating.
It is also possible to further purify this extract using a synthetic adsorbent (Diaion HP20, Sephadex SP825, Amberlite XAD4, MCIgelCHP20P, etc.), dextran resin (Sephadex LH-20, etc.), ultrafiltration, etc. be.
本発明の製剤は、経口、注射、外用のいずれでも薬効を発現するが、皮膚外用剤として用いるのが好ましい。皮膚外用剤には、皮膚化粧料、外用医薬部外品、医療用皮膚外用剤が含まれる。
これらの抽出物の製剤への配合量は固形分として、０．０００００１〜１０．０重量％、好ましくは０．００００１〜３．０重量％、さらに好ましくは０．００００５〜１．０重量％である。
Although the pharmaceutical product of the present invention exhibits medicinal effects by oral, injectable, or external use, it is preferably used as a skin external preparation. External preparations for skin include skin cosmetics, quasi-drugs for external use, and external preparations for medical use.
The amount of these extracts to be added to the formulation is 0.000001 to 10.0% by weight, preferably 0.00001 to 3.0% by weight, and more preferably 0.00005 to 1.0% by weight as a solid content. be.
また、本発明の製剤には、上記成分の他に医薬品や化粧品の各種製剤において使用されている界面活性剤、油性成分、保湿剤、高分子化合物、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、ビタミン類、色素、香料、水等を配合することができる。 In addition to the above ingredients, the formulations of the present invention include surfactants, oily ingredients, moisturizers, polymer compounds, ultraviolet absorbers, anti-inflammatory agents, and bactericides used in various pharmaceutical and cosmetic formulations. Antioxidants, metal ion blockers, preservatives, vitamins, pigments, fragrances, water and the like can be blended.
上記界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、非イオン性、天然、合成のいずれの界面活性剤も使用できるが、皮膚に対する刺激性を考慮すると非イオン性のものを使用することが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシド等が挙げられる。 As the above-mentioned surfactant, any of anionic, cationic, nonionic, natural and synthetic surfactants can be used, but it is preferable to use nonionic surfactants in consideration of skin irritation. Examples of the nonionic surfactant include glycerin fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbit fatty acid ester, polyoxyethylene alkyl ether, and polyoxyethylene polyoxypropylene glycol. , Polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ether, polyethylene glycol fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, alkyl glycoside and the like.
油性成分としては、油脂類、ロウ類、炭化水素類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、精油類、シリコーン油類などを挙げることができる。油脂類としては、例えば大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド等の合成トリグリセリド等が；ロウ類としては、例えばカルナバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等が；炭化水素類としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ブリスタン等が；高級脂肪酸類としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等が；高級アルコール類としては、例えばラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール等が；エステル類としては、例えばオクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル等が；精油類としては、例えばハッカ油、ジャスミン油、ショウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等が；シリコーン油類としては、例えばジメチルポリシロキサン等が挙げられる。これら上述の油性成分は一種又は二種以上を組み合わせて使用することができる。本発明においては、このうち特にミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド、ラノリン、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレン酸、イソステアリン酸、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、オクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、ミリスチレン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ハッカ油、トウヒ油、ケイ皮油、ローズ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ゲラニオール、ピネン、リモネン、ジメチルポリシロキサンを使用することが好ましい。 Examples of the oily component include fats and oils, waxes, hydrocarbons, higher fatty acids, higher alcohols, esters, essential oils, silicone oils and the like. Examples of fats and oils include soybean oil, nuka oil, jojoba oil, avocado oil, almond oil, olive oil, cacao oil, sesame oil, persic oil, castor oil, palm oil, minced oil, beef fat, pork fat and other natural fats and oils. Hardened oil obtained by hydrogenating natural fats and oils from Japan and synthetic triglycerides such as myristic acid glyceride and 2-ethylhexanoic acid triglyceride; Examples of waxes include carnauba wax, whale wax, honeydew, lanolin and the like; hydrocarbons Examples include liquid paraffin, vaseline, paraffin microcrystalin wax, selecin, squalane, bristan, etc .; higher fatty acids include, for example, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, linoleic acid, etc. Linolenic acid, lanolinic acid, isostearic acid and the like; higher alcohols include, for example, lauryl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol, 2-hexyldecanol and the like; esters include, for example, cetyl octanate. , Octanoic triglyceride, myristyl lactate, cetyl lactate, isopropyl myristate, myristyl myristate, octyldodecyl myristate, isopropyl palmitate, isopropyl adipate, butyl stearate, decyl oleate, cholesterol isostearate, POE sorbit fatty acid ester, etc. The essential oils include, for example, peppermint oil, jasmine oil, show brain oil, hinoki oil, peppermint oil, ryu oil, terepine oil, coconut skin oil, bergamot oil, orange oil, shove oil, pine oil, lavender oil, and bay oil. , Clove oil, hiba oil, rose oil, eucalyptus oil, lemon oil, thyme oil, peppermint oil, rose oil, sage oil, menthol, cineole, eugenol, citral, citroneral, borneol, linalol, geraniol, camphor, timol, spirantol, Pinen, limonene, terpene-based compounds and the like; Examples of silicone oils include dimethylpolysiloxane and the like. These above-mentioned oily components can be used alone or in combination of two or more. In the present invention, among these, myristic acid glyceride, 2-ethylhexanoic acid triglyceride, lanolin, liquid paraffin, vaseline, paraffin microcrystalin wax, squalane, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, linoleic acid, linolenic acid, isostearic acid. , Cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, cholesterol, cetyl octanoate, triglyceride octanate, isopropyl myristyrene, octyldodecyl myristate, cholesterol isostearate, POE sorbit fatty acid ester, peppermint oil, peppermint oil, coconut oil, rose It is preferable to use oil, menthol, cineol, eugenol, citral, citroneral, geraniol, pinen, limonene and dimethylpolysiloxane.
本発明の製剤には、さらに下記のような成分を配合することができるが、その成分もこれらに限定されるものではない。
色素類；黄色４号、青色１号、黄色２０２号等の厚生省令に定められたタール色素別表Ｉ及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等。
その他；殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。
The following components can be further added to the formulation of the present invention, but the components are not limited thereto.
Pigments: Tar dyes specified in the Ordinance of the Ministry of Health and Welfare such as Yellow No. 4, Blue No. 1, Yellow No. 202, etc. Approved as food additives such as pigments in Appendix I and II, chlorophyll, riboflavin, crocin, safflower, anthraquinone, etc. Natural pigments, etc.
Vitamins; vitamin A, vitamin C, vitamin D, vitamin E, etc.
Others; bactericides, preservatives, other ingredients necessary for formulation, etc.
本発明の製剤は、前記必須成分に必要に応じて前記任意成分を加え、常法に従って製造することができる。 The pharmaceutical product of the present invention can be produced according to a conventional method by adding the optional ingredient to the essential ingredient as necessary.
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。 Next, the present invention will be described in detail with reference to examples.
実施例１
牛蒡(滝野川ごぼう)（乾燥物、細断品）を３０ｇに５０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。
Example 1
Add 2 liters of 50% (V / V) ethanol aqueous solution to 30 g of burdock root (Takinogawa gobo) (dried product, shredded product), extract for 24 hours with occasional stirring, filter (No5C), and evaporate. This was lyophilized.
実施例２
芍薬(Paeonia lactiflora)（栃本天海堂、乾燥、細断品）を５０ｇに３０％（Ｖ/Ｖ）エタノール水溶液２リッターを加え、ときどき撹拌しながら、２４時間抽出後、濾過（Ｎｏ５Ｃ）し、エバポレートしたのち、これを凍結乾燥した。
Example 2
Add 2 liters of 30% (V / V) ethanol aqueous solution to 50 g of peony (Paeonia lactiflora) (Tochimoto Tenkaido, dried, shredded), extract for 24 hours with occasional stirring, filter (No5C), and evaporate. After that, it was freeze-dried.
確認試験
２継代目のヒト包皮由来表皮細胞（クラボウ）を５０−７０％コンフルエントとなるようＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地（フェノールレッド不含）で培養後、前日にカルシウム濃度を１．８ｍＭに変更したＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地に、実施例を添加し、３７℃、５％ＣＯ2インキュベータ中で２日間培養した。
Confirmation test After culturing the second-generation human foreskin-derived epidermal cells (Kurabou) in HuMedia-KG2 medium (without phenol red) so as to be 50-70% confluent, the calcium concentration was changed to 1.8 mM the day before. Examples were added to KG2 medium and cultured at 37 ° C. in a 5% CO2 incubator for 2 days.
＜ＲＮＡの抽出＞
細胞からの Ｔｏｔａｌ ＲＮＡの抽出は、トリプシン／ＥＤＴＡで剥離後、illustra RNA Mini RNA Isolation Kit（GE Healthcare社）を用い、GE Healthcare社の添付マニュアルに従い調製した。ＲＮＡ濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ１０００（Ｔｈｅｒｍｏ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を用い算出した。
<RNA extraction>
Extraction of Total RNA from cells was prepared using trypsin / EDTA and then using the illustra RNA Mini RNA Isolation Kit (GE Healthcare) according to the attached manual of GE Healthcare. The RNA concentration was calculated using NanoDrop1000 (Thermo SCIENTIFIC).
＜ＲＴ反応およびリアルタイムＰＣＲ＞
２．５μｇのＴｏｔａｌ ＲＮＡを使い、ＭＭＬＶ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ＲＮａｓｅＨ−（東洋紡社）を用い、東洋紡社推奨プロトコール（ＴＯＹＯＢＯ ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ ＦＯＲ ＬＩＦＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ２００８／２００９のページ１−４２）に従いＲＴ反応を行なった。
リアルタイムＰＣＲはＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７５００ リアルタイムＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍを用い、以下のように実施した。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ法を用い（ＴＨＵＮＤＥＲＢＩＲＤ ＳＹＢＲ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ，東洋紡社）、７５００ リアルタイムＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍの操作マニュアル（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ＣＴ（△△ＣＴ）法（ｎ＝３）により遺伝子発現比較を実施した。内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。
<RT reaction and real-time PCR>
An RT reaction was performed using 2.5 μg of Total RNA and MMLV Reverse Transcriptase RNase H- (Toyobo) according to the Toyobo recommended protocol (TOYOBO BIOCHEMICALS FOR LIFE SCIEENCE 2008/2009, page 1-42).
Real-time PCR was performed using Applied Biosystems 7500 real-time PCR System as follows. Gene expression by Comparative CT (△△ CT) method (n = 3) using the SYBR Green method (THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix, Toyobo Co., Ltd.) and using the operation manual (Applied Biosystems) of the 7500 real-time PCR system. GAPDH was used as the internal standard.
確認試験の結果を図１に示す。
結果を見ると、実施例１（牛蒡）は作用濃度０．１％でクローディン１とオクルディンのいずれの遺伝子発現量を約２．５倍に増加させ、実施例２（芍薬）は作用濃度０．０２５％でクローディン１とオクルディンのいずれの遺伝子発現量を約２倍強に増加させた。
The result of the confirmation test is shown in FIG.
Looking at the results, in Example 1 (cow 蒡), the gene expression level of both
また、実施例を配合した外用剤を作成し、実際に使用してみた結果、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎に改善がみられた。 In addition, as a result of preparing an external preparation containing the examples and actually using it, improvement was observed in dry skin, rough skin, and atopic dermatitis.
Claims (1)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015160441 | 2015-08-17 | ||
| JP2015160441 | 2015-08-17 | ||
| JP2016155131A JP2017039708A (en) | 2015-08-17 | 2016-08-08 | Claudin production promoting agent, occludin production promoting agent, and tight junction function enhancing agent |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016155131A Division JP2017039708A (en) | 2015-08-17 | 2016-08-08 | Claudin production promoting agent, occludin production promoting agent, and tight junction function enhancing agent |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2021138746A true JP2021138746A (en) | 2021-09-16 |
Family
ID=58206262
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016155131A Pending JP2017039708A (en) | 2015-08-17 | 2016-08-08 | Claudin production promoting agent, occludin production promoting agent, and tight junction function enhancing agent |
| JP2021096296A Pending JP2021138746A (en) | 2015-08-17 | 2021-06-09 | Occludin production promoter |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016155131A Pending JP2017039708A (en) | 2015-08-17 | 2016-08-08 | Claudin production promoting agent, occludin production promoting agent, and tight junction function enhancing agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JP2017039708A (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001187725A (en) * | 2000-01-06 | 2001-07-10 | Pola Chem Ind Inc | Stress preventive agent and skin care preparation containing the same |
| JP2001322940A (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-20 | Kao Corp | Cathepsin d production facilitative agent |
| JP2005170840A (en) * | 2003-12-10 | 2005-06-30 | Nippon Menaade Keshohin Kk | Skin care preparation for external use |
| JP2010013373A (en) * | 2008-07-02 | 2010-01-21 | Pola Chem Ind Inc | Cosmetic suitable for strengthening horny layer cell |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5860577B2 (en) * | 2008-04-17 | 2016-02-16 | 丸善製薬株式会社 | Claudin production promoter and occludin production promoter |
| JP2014149364A (en) * | 2013-01-31 | 2014-08-21 | Canon Inc | Imaging unit and imaging device |
| JP2016023167A (en) * | 2014-07-23 | 2016-02-08 | 興和株式会社 | Skin barrier function enhancer |
-
2016
- 2016-08-08 JP JP2016155131A patent/JP2017039708A/en active Pending
-
2021
- 2021-06-09 JP JP2021096296A patent/JP2021138746A/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001187725A (en) * | 2000-01-06 | 2001-07-10 | Pola Chem Ind Inc | Stress preventive agent and skin care preparation containing the same |
| JP2001322940A (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-20 | Kao Corp | Cathepsin d production facilitative agent |
| JP2005170840A (en) * | 2003-12-10 | 2005-06-30 | Nippon Menaade Keshohin Kk | Skin care preparation for external use |
| JP2010013373A (en) * | 2008-07-02 | 2010-01-21 | Pola Chem Ind Inc | Cosmetic suitable for strengthening horny layer cell |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| WORLD CHINESE MEDICINE, FEBRUARY 2015, VOL.10, NO. 2, PP. 174-181, JPN6022023754, ISSN: 0004799201 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2017039708A (en) | 2017-02-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2021176881A (en) | Filaggrin production promoter | |
| JP5219038B2 (en) | Skin keratinization promoter | |
| JP2021169532A (en) | Transglutaminase production promoter | |
| JP6970952B2 (en) | Kallikrein-related peptidase production promoter, LEKTI production promoter, SLPI production promoter, keratinization normalizer, corneodesmosome degradation normalizer | |
| JP2018035145A (en) | Filaggrin production promoter, involucrin production promoter, loricrin production promoter, histidase production promoter, and sprr1b production promoter | |
| JP6442092B2 (en) | Defensin production promoter, cathelicidin production promoter, antibacterial agent | |
| JP2021138746A (en) | Occludin production promoter | |
| JP2019055917A (en) | Endothelin-1 inhibitor | |
| JP6437291B2 (en) | Maillard reaction inhibitor | |
| JP2016135769A (en) | Claudin production-promoting agent, occludin production-promoting agent, and tight junction function-enhancing agent | |
| JP6362138B2 (en) | Skin external preparation, skin keratinization promoter, tight junction enhancer, skin barrier function enhancer, transglutaminase gene expression promoter, loricrin gene expression promoter, filaggrin gene expression promoter, involucrin gene expression promoter, keratin gene expression promoter Agent, claudin gene expression promoter, occludin gene expression promoter. | |
| JP6242849B2 (en) | Kallikrein-related peptidase production promoter, LEKTI production promoter, SLPI production promoter, keratinization normalizing agent, corneodesmosome degradation normalizing agent | |
| JP7021762B2 (en) | Kallikrein-related peptidase production promoter, LEKTI production promoter, SLPI production promoter, keratinization normalizer, corneodesmosome degradation normalizer | |
| JP6242939B2 (en) | Ctip2 gene expression enhancer | |
| JP2018002703A (en) | Psoriasin production promoter | |
| JP6885575B2 (en) | Defensin production promoter, antibacterial agent | |
| JP2014040398A (en) | Filaggrin production accelerator, involucrin production accelerator, loricrin production accelerator, corneo-desmosin production accelerator, and others | |
| JP2017039699A (en) | Caspase-14 expression promoting agent | |
| JP2018035144A (en) | Filaggrin production promoter | |
| JP6356944B2 (en) | Claudin production promoter, occludin production promoter, tight junction function enhancer | |
| JP2017132758A (en) | Claudin production-promoting agent, occludin production-promoting agent, and tight junction function-enhancing agent | |
| JP2017132761A (en) | Psoriasin production promoter | |
| JP2017160187A (en) | Caspase-14 expression accelerator | |
| JP2017002029A (en) | Ctip2 GENE-EXPRESSION ENHANCER | |
| JP7037162B2 (en) | VEGF gene expression promoter and FGF7 gene expression promoter |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210614 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220614 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220808 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221007 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230124 |