JP3978517B2

JP3978517B2 - Anti-Legionella composition

Info

Publication number: JP3978517B2
Application number: JP21392097A
Authority: JP
Inventors: 実穂中田; 謙二大澤; 英之安田
Original assignee: Lotte Co Ltd
Current assignee: Lotte Co Ltd
Priority date: 1997-07-25
Filing date: 1997-07-25
Publication date: 2007-09-19
Anticipated expiration: 2017-07-25
Also published as: JPH1143442A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗レジオネラ属菌組成物、これを含有するレジオネラ属菌用抗菌剤、およびレジオネラ感染源に対するレジオネラ属菌除菌剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
レジオネラ属菌は水系、土壌など自然界に広く分布するブドウ糖非発酵グラム陰性桿菌であり、肺炎を主徴とする細菌感染症を惹起する。本菌は細胞内増殖菌であり、生体の中ではマクロファージなどの貪食細胞の中で殺菌されずに増殖することが可能である。また、β−ラクタマーゼ産生菌であるため、一部のβラクタム剤に耐性を示す。
【０００３】
感染症の多くは外来性に進入した菌により発症する。感染源としては空調用冷却水、温泉水、老朽化した給水設備による水溜まり等が挙げられている。さらに最近ではいわゆる２４時間風呂でのレジオネラ菌増殖が問題視されている。歴史的には、１９７６年米国フィラデルフィア市内で全米在郷軍人大会が開催された際、原因不明の重傷肺炎が集団発生し、そのうち２９名が死亡したが、その後の調査によってレジオネラ菌（レジオネラ・ニューモフィラ）が原因菌であることが明らかになった。我が国においては１９８１年、レジオネラ肺炎の第一例が報告されて以来、病院での院内感染等多数の報告がなされている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
レジオネラ属菌にはエリスロマイシン等の抗生物質が有効であるといわれているが、これらの抗生物質を日常的に使用することは耐性菌の出現や副作用の点で好ましくない。空調用冷却水等の感染源に対する殺菌剤として、塩素やアルコール類、界面活性剤等が挙げられるが、これらの殺菌剤は安全性の点で問題があり、飲食物等に配合することはできない。
【０００５】
このような状況にあって、レジオネラ属菌の感染を予防するという考え方が広がりつつあり、手軽に使用でき、安全性に問題のない抗菌活性素材の開発が望まれているところ、柑橘類果物の種子抽出物、好ましくはグレープフルーツの種子抽出物が抗レジオネラ属菌活性を有するということが特開平６−２３３９８６号公報に開示されている。しかし、その効果はレジオネラ属菌の増殖を完全に抑えるほど高いものとは認められない。
【０００６】
そこで、発明者らは、日常的に使用しても副作用がなく、飲食物等に含有させても安全性があり、しかも、レジオネラ属菌の増殖を強力に阻止できる抗レジオネラ属菌組成物を求め、古来より副作用がなく安全性が高いとの評価を得て広く利用されている植物に注目して鋭意研究し、それらのうちのある種の植物の抽出物にレジオネラ属菌増殖阻害作用があることを見出し、本発明を完成するに至ったものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
すなわち、本発明に係る抗レジオネラ属菌組成物は、マンゴスチン果皮から低級アルコールを含む抽出溶媒によって抽出した抽出物をレジオネラ属菌に対する抗菌成分としたものである。
【０００８】
マンゴスチン果皮から低級アルコールを含む抽出溶媒によって抽出した抽出物の安全性については全く問題がないものであり、また、本発明抗レジオネラ属菌組成物は、レジオネラ属菌の増殖を阻害することにより、レジオネラ属菌感染を防ぐのに有効にしてかつ安全なものである。
【０００９】
マンゴスチン果皮からの抽出物の抽出には、水、メタノール、エタノール、ブタノール等の低級アルコール、ヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機溶媒の１種または２種以上を適宜混合して使用することができる。また、抽出条件は高温、室温、低温のいずれでもよいが、５０〜８０℃、１〜５時間程度が好ましい。抽出液は、濾過され、抽出溶媒の留去が行われた後、減圧下で濃縮するかあるいは凍結乾燥されて、目的の抽出物となる。
【００１０】
その抽出物は、そのまま抗レジオネラ属菌組成物として使用することができる。
【００１１】
レジオネラ属菌抗菌剤は、マンゴスチン果皮からの抽出物を所要の製剤用担体ないし希釈剤と任意に混合し、たとえば、経口投与剤として、マウスウォッシュ、トローチ剤、吸入剤、噴霧剤等とする。マウスウォッシュやトローチ剤の場合、口腔内に侵入したレジオネラ菌に対して、その感染を予防することが可能である。吸入剤として用いれば、口腔内および気道内におけるレジオネラ菌に対して同様の効果が期待できる。また、噴霧剤として直接感染源や生体に噴霧することにより、その除菌が可能である。レジオネラ属菌抗菌剤における抽出物の添加量は、最終製品の形態によっても異なるが、その効果の発現を考慮すると０．００１％以上の添加が好ましい。
【００１２】
また、レジオネラ属菌除菌剤としては、空調用冷却水の除菌剤、除菌効果を有する入浴剤等を例示することができる。空調用冷却水の除菌剤は、抽出物を無機担体に吸着させ、耐水性ポリマーに分散し成型することによって、安定した除菌力を長期間維持し得る製品を製造することが可能である。レジオネラ菌除菌剤における抽出物の濃度については、実際の使用にあたりその濃度が０．００１％以上になることが好ましい。
【００１３】
本発明による抗レジオネラ属菌組成物は、チューインガム、キャンディ、チョコレート、ビスケット等の菓子、清涼飲料等の飲食物に添加しても安全である。これを添加した飲食物を飲食することにより、口腔内に侵入したレジオネラ菌に対し、その感染を予防することが可能である。その添加量は、最終製品の形態によっても異なるが、その効果の発現を考慮すると０．００１％以上の添加が好ましく、また嗜好性の面から５％以下の添加が好ましい。
【００１４】
【発明の実施の形態】
前記抽出物を使用し、レジオネラ属菌用抗菌剤としてマウスウォッシュ、トローチ剤を、レジオネラ属菌感染予防用飲食物としてチューインガム、キャンディ、錠菓、飲料を、レジオネラ感染源に対する除菌剤として入浴剤を実施例として示す。ただし、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１５】
〔植物抽出物の調製〕
破砕した各種植物それぞれ１００ｇに５倍量の抽出溶媒（水、メタノール、エタノール、ブタノール等の低級アルコール、ヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機溶媒の一種または二種以上を適宜混合）を加え、３時間還流させて抽出した。濾過により得られた抽出液を濃縮または凍結乾燥することにより、目的の抽出物を得た。表１は、ユーカリ葉、マンゴスチン果皮、オオバンガジュツおよびグアバ葉について、抽出溶媒と抽出物の収率の関係を個別に示したものである。
【００１６】
【表１】

【００１７】
表２は、上記ユーカリ葉、マンゴスチン果皮、オオバンガジュツおよびグアバ葉およびその他の植物について、使用した抽出溶媒を個別に示したものである。収率は５〜２５％であった。
【００１８】
【表２】

【００１９】
〔試験１〕レジオネラ属菌に対する抽出物の抗菌活性試験
供試菌株レジオネラ・ニューモフィラ(Legionella pneumophila) ATCC 33152
試料表２に示した抽出物３７種類を用いた。
試験方法供試菌をバッファード・スターチ・イーストエキス（Ｂ−ＳＹＥ）液体培地で好気的条件下、２４時間振盪培養を行い、これを菌液とした。
９６穴マイクロプレートを用い各ウェル中で試料溶液（１００μｌ）の２倍希釈系列を調製した。２倍濃度で調製したＢ−ＳＹＥ液体培地に上記菌液を接種し、その１００μｌを各ウェルに添加した。好気的条件下で３７℃、４８〜７２時間培養後マイクロプレートリーダーを用いて５５０ｎｍにおける各ウェルの濁度を測定し、菌の生育を判定し、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を求めた。試験結果を表３に示した。
【００２０】
【表３】

【００２１】
〔試験２〕抽出物のレジオネラ属菌除菌試験（シェークフラスコ法）
供試菌株レジオネラ・ニューモフィラ(Legionella pneumophila) ATCC 33152
試料ユーカリ葉エタノール抽出物、マンゴスチン果皮エタノール抽出物オオバンガジュツエタノール抽出物、グアバ葉エタノール抽出物
試験方法供試菌をバッファード・スターチ・イーストエキス（Ｂ−ＳＹＥ）液体培地で好気的条件下３７℃、２４時間振盪培養を行い、その後、菌数１〜２×１０5 個／ｍｌとなるように調製し、これを菌液とした。
滅菌したリン酸緩衝液に試料を懸濁し、この緩衝液に、菌液を菌数１〜２×１０4 個／ｍｌとなるように加え、１時間振盪した。振盪前と振盪後の緩衝液（菌液添加済）をＢ−ＳＹＥ寒天培地に塗抹し、好気的条件下３７℃、４８時間培養した。培地上のコロニーを計数し、試験菌の除菌率を以下の式により求めた。
除菌率＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００Ａ；振盪前生菌数Ｂ；振盪後生菌数試験結果を表４に示す。
【００２２】
【表４】

【００２３】
上記の試験結果から、これらの抽出物はレジオネラ属菌を除菌することが可能であるが、特にマンゴスチン果皮からの抽出物がレジオネラ属菌に対して最も活性が高いことが確認された。
【００２４】
【発明の効果】
すなわち、本発明抗レジオネラ属菌組成物によれば、日常的に使用しても副作用がなく、飲食物等に含有させても安全性があるとともに、レジオネラ属菌の増殖を強力に阻害する作用がある。したがって、本発明レジオネラ属菌抗菌剤によれば、その使用により口腔または気道内に侵入したレジオネラ菌に対して、その感染を予防することができ、直接感染源や生体に噴霧することによりその除菌が可能である。本発明レジオネラ属菌感染予防用飲食物によれば、これを飲食することによって、口腔内に侵入したレジオネラ菌に対し、その感染を予防することが可能である。本発明レジオネラ属菌除菌剤によれば、空調用冷却水の除菌や風呂等における除菌が可能であるとともに、安定した除菌力を長期間維持し得る。
【００２５】
【実施例】
以下の処方によりマウスウォッシュ、トローチ剤、チューインガム、キャンディ、錠菓、飲料、入浴剤を製造した。
【００２６】
実施例１マウスウォッシュ
エタノール２０．０％
香料１．０
サッカリン０．０５
銅クロロフィリンナトリウム０．１
マンゴスチン果皮エタノール抽出物０．１
ユーカリ葉エタノール抽出物０．１
水７８．６５
１００．０％
【００２７】
実施例２トローチ剤
ブドウ糖７２．８％
乳糖１９．０
アラビアゴム６．０
香料１．０
モノフルオロリン酸ナトリウム０．７
ユーカリ葉エタノール抽出物０．５
１００．０％
【００２８】
実施例３チューインガム
ガムベース２０．０％
砂糖５５．０
グルコース１５．０
水飴９．３
ペパーミントオイル０．４
オオバンガジュツエタノール抽出物０．３
１００．０％
【００２９】
実施例４キャンディ
砂糖５０．０
水飴３３．７５
クエン酸１．０
ペパーミントオイル０．１５
マンゴスチン果皮エタノール抽出物０．３
水１４．８
１００．０％
【００３０】
実施例５錠菓
砂糖７６．４％
グルコース１９．０
ショ糖脂肪酸エステル０．２
エンメイソウエタノール抽出物０．１
グアバ葉エタノール抽出物０．１
水４．２
１００．０％
【００３１】
実施例６飲料
オレンジ果汁３０．０％
異性化糖１５．２４
クエン酸０．１
ビタミンＣ０．０４
香料０．１
ローズマリーエタノール抽出物０．０２
ユーカリ葉エタノール抽出物０．０２
マンゴスチン果皮エタノール抽出物０．０２
水５４．４６
１００．０％
【００３２】
実施例７入浴剤
コハク酸４０．０％
炭酸水素ナトリウム３８．０
デキストリン１８．０
香料１．０
マンゴスチン果皮エタノール抽出物１．０
ローズマリーエタノール抽出物１．０
カンキョウエタノール抽出物１．０
１００．０％[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an anti-Legionella composition, an antibacterial agent for Legionella containing the composition, and a Legionella sterilizing agent against Legionella infection sources.
[0002]
[Prior art]
Legionella spp. Are non-fermentative gram-negative bacilli that are widely distributed in nature such as water and soil, and cause bacterial infections with pneumonia as the main feature. This bacterium is an intracellular proliferating bacterium, and can grow in a living body without being sterilized in phagocytic cells such as macrophages. Moreover, since it is a β-lactamase-producing bacterium, it exhibits resistance to some β-lactam agents.
[0003]
Many infectious diseases are caused by bacteria that have entered the foreign body. Examples of infection sources include cooling water for air conditioning, hot spring water, and a puddle of aging water supply facilities. More recently, the proliferation of Legionella in a so-called 24-hour bath has been regarded as a problem. Historically, when the National Military Service Convention was held in Philadelphia in the United States in 1976, seriously injured pneumonia broke out and 29 of them died.・ Pneumophila) was found to be the causative bacterium. In Japan, since the first case of Legionella pneumonia was reported in 1981, many reports such as nosocomial infections in hospitals have been made.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
Antibiotics such as erythromycin are said to be effective against Legionella spp., But daily use of these antibiotics is not preferred in terms of the appearance of resistant bacteria and side effects. Examples of germicides against infection sources such as cooling water for air conditioning include chlorine, alcohols, surfactants, etc., but these germicides are problematic in terms of safety and cannot be blended into foods and drinks. .
[0005]
Under such circumstances, the idea of preventing Legionella infection is spreading, and it is desired to develop an antibacterial active material that can be used easily and has no safety problems. JP-A-6-233986 discloses that an extract, preferably a grapefruit seed extract, has anti-legionella activity. However, the effect is not so high as to completely suppress the growth of Legionella spp.
[0006]
Therefore, the inventors have an anti-Legionella composition that has no side effects even when used on a daily basis, is safe even when contained in foods and drinks, and that can strongly inhibit the growth of Legionella. In particular, research has been conducted with a focus on plants that have been widely used with a reputation for having no side effects and high safety since ancient times, and extracts of some of these plants have an inhibitory effect on the growth of Legionella spp. The present invention has been found and the present invention has been completed.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
That is, the anti- Legionella composition according to the present invention uses an extract extracted from mangosteen peel with an extraction solvent containing a lower alcohol as an antibacterial component against Legionella .
[0008]
There is no problem at all about the safety of the extract extracted from mangosteen peel with an extraction solvent containing a lower alcohol , and the anti- Legionella composition of the present invention inhibits the growth of Legionella, It is effective and safe to prevent Legionella infection.
[0009]
For extraction of the extract from mangosteen peel , one or more of organic solvents such as water, lower alcohols such as methanol, ethanol and butanol, and hexane, ether and ethyl acetate can be appropriately mixed and used. . Moreover, although extraction conditions may be any of high temperature, room temperature, and low temperature, 50 to 80 ° C. and about 1 to 5 hours are preferable. The extract is filtered and the extraction solvent is distilled off, and then concentrated under reduced pressure or freeze-dried to obtain the target extract.
[0010]
The extract can be used as an anti- Legionella composition as it is.
[0011]
Legionella antibacterial agents are prepared by arbitrarily mixing an extract from mangosteen pericarp with a required preparation carrier or diluent, for example, mouthwash, troche, inhalant, spray and the like. In the case of a mouthwash or a troche, it is possible to prevent infection of Legionella bacteria that have entered the oral cavity. If used as an inhalant, similar effects can be expected against Legionella in the oral cavity and in the respiratory tract. In addition, it can be sterilized by spraying directly on the source of infection or living body as a spray. The addition amount of the extract in the Legionella antibacterial agent varies depending on the form of the final product, but addition of 0.001% or more is preferable in consideration of expression of the effect.
[0012]
Examples of the Legionella sterilizing agent include a sterilizing agent for cooling water for air conditioning, a bathing agent having a sterilizing effect, and the like. The air-conditioning cooling water disinfectant can produce a product that can maintain a stable disinfecting ability for a long period of time by adsorbing the extract to an inorganic carrier, dispersing it in a water-resistant polymer and molding it. . About the density | concentration of the extract in Legionella bacteria disinfectant, it is preferable that the density | concentration will be 0.001% or more in actual use .
[0013]
The anti-legionella bacterium composition according to the present invention is safe even if added to foods and drinks such as chewing gum, candy, chocolate, biscuits and soft drinks. By eating and drinking foods and beverages to which this is added, it is possible to prevent infection of Legionella bacteria that have entered the oral cavity. The amount of addition varies depending on the form of the final product, but considering the manifestation of the effect, addition of 0.001% or more is preferable, and addition of 5% or less is preferable from the viewpoint of palatability .
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Using the extract, mouthwash as an antibacterial agent for Legionella sp., Troche, chewing gum, candy, tablet confectionery, beverage as a food for preventing Legionella infection, bathing agent as disinfectant against Legionella infection source Is shown as an example. However, the present invention is not limited to these examples.
[0015]
[Preparation of plant extract]
Add 5 times the amount of extraction solvent (water, methanol, ethanol, butanol and other lower alcohols, hexane, ether, ethyl acetate and other organic solvents, as appropriate) to 100 g of each crushed plant. Extracted by refluxing for hours. The extract obtained by filtration was concentrated or freeze-dried to obtain the target extract. Table 1 individually shows the relationship between the extraction solvent and the yield of the extract for eucalyptus leaves, mangosteen peel, columbing cucumber and guava leaves.
[0016]
[Table 1]

[0017]
Table 2 shows the extraction solvents used individually for the above-mentioned eucalyptus leaves, mangosteen peel, columbing cucumber, guava leaves and other plants. The yield was 5-25%.
[0018]
[Table 2]

[0019]
[Test 1] Antibacterial activity test of extract against Legionella spp. Test strain Legionella pneumophila ATCC 33152
Samples 37 types of extracts shown in Table 2 were used.
Test Method The test bacterium was subjected to shaking culture in a buffered starch yeast extract (B-SYE) liquid medium under aerobic conditions for 24 hours to obtain a bacterial solution.
A 2-fold dilution series of sample solution (100 μl) was prepared in each well using a 96-well microplate. The B-SYE liquid medium prepared at a double concentration was inoculated with the above bacterial solution, and 100 μl thereof was added to each well. After culturing at 37 ° C. for 48 to 72 hours under aerobic conditions, the turbidity of each well at 550 nm was measured using a microplate reader, the growth of the bacteria was determined, and the minimum growth inhibitory concentration (MIC) was determined. The test results are shown in Table 3.
[0020]
[Table 3]

[0021]
[Test 2] Legionella sterilization test of extract (shake flask method)
Test strain Legionella pneumophila ATCC 33152
Sample Eucalyptus Leaf Ethanol Extract, Mangosteen Skin Ethanol Extract, Obanga Jutsu Ethanol Extract, Guava Leaf Ethanol Extract Test Method Test Bacteria in Buffered Starch East Extract (B-SYE) Liquid Medium under Aerobic Conditions 37 The culture was carried out at 24 ° C. for 24 hours, and then prepared so that the number of bacteria was 1 to 2 × 10 5 cells / ml, and this was used as a bacterial solution.
The sample was suspended in a sterilized phosphate buffer solution, and the bacterial solution was added to this buffer solution so that the number of bacteria was 1 to 2 × 10 4 cells / ml, followed by shaking for 1 hour. Before shaking and after shaking (bacterial solution added), B-SYE agar medium was smeared and cultured at 37 ° C. for 48 hours under aerobic conditions. Colonies on the medium were counted, and the sterilization rate of the test bacteria was determined by the following formula.
Bactericidal rate = (A−B) / A × 100A; viable cell count B before shaking;
[0022]
[Table 4]

[0023]
From the above test results, it was confirmed that these extracts can sterilize Legionella spp., But in particular, extracts from mangosteen peel are most active against Legionella spp .
[0024]
【The invention's effect】
That is, according to the anti-Legionella bacterium composition of the present invention, there is no side effect even if it is used on a daily basis, and it is safe even if it is contained in food and drink, etc. There is. Therefore, according to the Legionella antibacterial agent of the present invention, it is possible to prevent infection of Legionella bacteria that have invaded the oral cavity or respiratory tract by its use, and its removal by spraying directly on the source of infection or the living body. Fungus is possible. According to the food and drink for preventing Legionella infection according to the present invention, it is possible to prevent infection of Legionella invading the oral cavity by eating and drinking it. According to the Legionella sterilizing agent of the present invention, it is possible to sterilize cooling water for air conditioning, sterilize in a bath, and the like, and maintain a stable sterilizing power for a long time.
[0025]
【Example】
Mouthwashes, lozenges, chewing gum, candy, tablet confectionery, beverages, and bath preparations were produced according to the following formulation.
[0026]
Example 1 Mouthwash ethanol 20.0%
Fragrance 1.0
Saccharin 0.05
Copper chlorophyllin sodium 0.1
Mangosteen peel ethanol extract 0.1
Eucalyptus leaf ethanol extract 0.1
Water 78.65
100.0%
[0027]
Example 2 Lozenges Glucose 72.8%
Lactose 19.0
Gum arabic 6.0
Fragrance 1.0
Sodium monofluorophosphate 0.7
Eucalyptus leaf ethanol extract 0.5
100.0%
[0028]
Example 3 Chewing gum Gum base 20.0%
Sugar 55.0
Glucose 15.0
Minamata 9.3
Peppermint oil 0.4
Columbine ethanol extract 0.3
100.0%
[0029]
Example 4 Candy Sugar 50.0
Minamata 33.75
Citric acid 1.0
Peppermint oil 0.15
Mangosteen peel ethanol extract 0.3
Water 14.8
100.0%
[0030]
Example 5 Tablets Sugar 76.4%
Glucose 19.0
Sucrose fatty acid ester 0.2
Nymphae ethanol extract 0.1
Guava leaf ethanol extract 0.1
Water 4.2
100.0%
[0031]
Example 6 Beverage Orange juice 30.0%
Isomerized sugar 15.24
Citric acid 0.1
Vitamin C 0.04
Fragrance 0.1
Rosemary ethanol extract 0.02
Eucalyptus leaf ethanol extract 0.02
Mangosteen peel ethanol extract 0.02
Water 54.46
100.0%
[0032]
Example 7 Bathing agent Succinic acid 40.0%
Sodium bicarbonate 38.0
Dextrin 18.0
Fragrance 1.0
Mangosteen peel ethanol extract 1.0
Rosemary ethanol extract 1.0
Citrus ethanol extract 1.0
100.0%

Claims

An anti-Legionella composition comprising an extract extracted from mangosteen peel using an extraction solvent containing a lower alcohol as an antibacterial component against Legionella.

An antibacterial agent for Legionella, comprising the anti- Legionella composition according to claim 1.

An anti-Legionella bacterium composition according to claim 1, comprising a Legionella sterilizing agent for Legionella infection sources .