KR101824230B1 - 절단된 선종성 결장 폴립증 (ａｐｃ) 단백질을 타겟화하는 치료제 - Google Patents

절단된 선종성 결장 폴립증 (ａｐｃ) 단백질을 타겟화하는 치료제 Download PDF

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Abstract

기술된 발명은 선택적으로 타겟화하고 절단된 APC 단백질의 측정 가능한 생물학적 활성을 억제하는 소분자 항암 화합물, 무한증식 인간 결장 상피 세포(HCEC) 모델, 및 소분자 항암 화합물들 중 적어도 하나 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제 조성물을 제공한다.

Description

절단된 선종성 결장 폴립증 (ＡＰＣ) 단백질을 타겟화하는 치료제{THERAPEUTICS TARGETING TRUNCATED ADENOMATOUS POLYPOSIS COLI (APC) PROTEINS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국가출원번호 제61/875,933호(2013년 9월 10일에 출원), 및 미국가출원번호 제61/930,754호(2014년 1월 23일에 출원)를 우선권으로 주장한다. 이러한 출원들 각각의 내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
발명의 분야
기술된 발명은 직장결장암, APC 종양 억제 유전자, 유전자의 돌연변이에 의해 형성된 절단된 APC 유전자 산물, 및 결장암 세포주 및 절단된 APC 유전자 산물을 갖는 다른 인간 암 세포주를 타겟화하는 치료제에 관한 것이다.
직장결장암(colorectal cancer, CRC)은 미국에서 가장 일반적으로 진단되는 암 중 3위 및 암 관련 사망율의 주된 원인 중 3위로서, 2011년에는 141,000명의 결장암 및 직장암의 경우가 진단되는 것으로 추정되었다. 이에 따라, 19명의 미국인 중 1명이 그들의 생애에서 5.4%의 전체 위험성으로 CRC로 진단될 것이다. 다행히, 초기, 비침습성 선종(noninvasive adenomas)의 외과적 절개는 본질적으로 치유력이 있다. 그러나, 발달된 형태의 CRC에 걸린 환자에 대해서는 효과적인 치료 옵션이 적으며, 예후는 종종 나쁘다. 장기적인 잠복 시기에도 불구하고, CRC가 외과적으로 절개될 수 있는 단계에서 너무 적은 병소가 확인된다[문헌[Phelps et al. Cell Cycle, 2009; 8:16, 2549-2556] 참조].
인간 APC 종양 억제 유전자에서의 돌연변이는 가족성 선종성 폴립증(FAP), 여러 폴립증이 큰창자의 상피에서 형성되는 유전된 암-경향의 증상과 연관되어 있다[문헌[Kinzler et al., Science, 1991; 253:661-665; Kinzler and Vogelstein, Cell, 1996; 87:159-170; Half et al., Orphanet Journal of Rare Diseases, 2009; 4:22] 참조]. CRC의 발달은 최종적으로 공격적인 암종으로 진화하는 결장 상피로부터 선종성 폴립의 이상 증식에 의해 개시된다[문헌[Kinzler and Vogelstein, Cell, 1996; 87: 159-170] 참조]. 특발성 직장결장암의 약 85%는 APC 절단 돌연변이를 번식시키는 것으로 보고되었다[문헌[Kinzler and Vogelstein, Cell, 1996; 87:159-170] 참조]. 폴립의 성장은 대부분의 경우에 선종성 결장폴립증 (APC) 유전자의 두 개의 대립 유전자 모두의 변형과 관련이 있다. 제1 돌연변이 히트(mutational hit)는 대략적으로 C-말단 절반이 결여된 절단된 APC 분자를 발생시키는, 외래 전사해독 프레임(open reading frame)의 중간에서 발생한다. 이러한 절단 돌연변이는 소위 돌연변이 클러스터 영역(mutation cluster region; MCR)에 위치된다[문헌[Schneikert et al., Human Molecular Genetics, 2006; 16: 199-209] 침조]. 제2 돌연변이 히트는 제2 대립 유전자의 결실 또는 거의 MCR 후에 일어나지 않는 절단된 산물의 합성을 야기시키는 돌연변이 중 어느 하나를 포함한다[문헌[Schneikert et al., Human Molecular Genetics, 2006; 16: 199-209] 참조]. 이에 따라, 결장암 세포는 적어도 절단된 APC 분자를 발현시키는데, 이의 길이는 MCR의 위치, 및 때때로, 추가적인지만 보다 짧은 분절에 의해 정의된다.
CRC 치료는 주로 질환의 기본 유전학적 기초에 대한 최소 특이성으로 작용하는 화학치료제에 의존한다. 이러한 화학치료제는 흔히 화학적 타겟에 대한 공유된 의존성으로 인해 암 세포를 파괴하는 동안 정상 세포의 기능을 파괴한다. 더 나아가, CRC로 진단된 환자의 치료를 개선하기 위해 보다 정밀한 치료제가 요구되고 있다.
선종성 결장폴립증 (APC) 유전자
APC는 전통적인 종양 억제제로서 작용하지 않는 것으로서, 이는 Wnt 신호전달에 영향을 미치고, 이에 의해 유전자 전사를 조절한다. Wnt는 배 발달 동안 줄기 세포 유지, 증식, 및 분화의 조절에 연루된 분비된 시스테인-풍부 당단백질의 패밀리이다. 정형 Wnt 신호전달은 GSK-3 키나아제 활성의 수용체-매개 비활성화에 의해 세포질 β-카테닌의 안정성을 증가시키고, 핵으로의 β-카테닌 이동을 촉진시킨다. 정형 Wnt 신호전달 경로는 또한, 세포내 β-카테닌의 안정화 및 β-카테닌/TCF/LEF 전사 복합체의 활성화를 통해 줄기 세포로서 기능하여, 세포 주기 조절 유전자, 예를 들어, Myc, 시클린 D1, EPhrinB (EPhB) 및 Msx1의 활성화된 발현을 야기시키고, 이는 세포 증식을 증진시킨다[문헌[Cayuso and Marti, Journal of Neurobiology, 2005; 64:376-387] 참조].
APC는 Wnt 신호전달의 음성 조절제(negative regulator)이다. 이러한 음성 조절이 없는 경우, Wnt 경로는 더욱 활성을 나타내고 암에서 중요하게 된다[문헌[Polakis, Current Opinion in Genetics & Development, 2007; 17: 45-51] 참조]. 인간 및 마우스 둘 모두에서 Wnt 신호전달의 수준 및 질환의 중증도를 관련시키기 위해 APC 대립 유전자 둘 모두에서의 돌연변이와 종양 세포를 비교하는 연구는 유전자 투약 효과가 향상된 Wnt 신호전달의 규정된 윈도우를 발생시켜 장에서 폴립 형성을 야기시키는 모델을 확립시키는데 도움이 될 수 있다. Wnt 신호전달의 보다 약한 향상과 관련된 '가벼운" APC 돌연변이의 조합은 장 외부 조직에서 종양을 발생시킨다. 이러한 모델에 따르면, APC에서 생식계열 돌연변이의 본질은 제2 대립 유전자에서 일어나는 체세포 돌연변이의 타입을 결정한다[문헌[Minde et al. Molecular Cancer, 2011; 10:101] 참조].
APC 단백질
APC 유전자 산물은 다수의 도메인으로 이루어진 312 kDa 단백질로서, 이는 베타-카테닌, 액신, C-말단 결합 단백질(CtBP), APC-자극 구아닌 뉴클레오티드 교환 인자(Asef), Ras GTPase-활성화-유사 단백질(IQGAP1), 단부 결합-1(end binding-1; EB1) 및 미소관(microtubule)을 포함하는 다양한 단백질에 결합한다. 돌연변이체 마우스 및 배양된 세포를 사용한 연구에서는, APC가 정형 Wnt 신호전달을 억제하는 것으로 입증되었는데, 이는 상피 세포 및 림프계 세포를 포함하는 다양한 세포 타입의 종양 형성, 발달 및 항상성을 위해 필수적인 것이다. 다른 연구에서는, APC 단백질이 여러 다른 기본적인 세포 과정에서 기능한다는 것이 제시되었다. 이러한 세포 과정은 세포 부착 및 이동, 액틴 및 미소관 네트워크의 조직화, 방추사 형성 및 염색체 분리를 포함한다. APC에서 돌연변이에 의해 야기되는 이러한 과정의 조절이상(deregulation)은 결장암의 개시 및 확장과 연관된다[문헌[Aoki and Taketo, Journal of Cell Science, 2007; 120:3327-3335] 참조].
APC 단백질은 발암과 관련된 다수의 단백질과 물리적으로 상호작용한다는 점에서, 신호전달 허브 또는 스캐폴드(scaffold)로서 기능한다. APC의 손실은 세포 부착, 세포 이동, 세포 골격, 및 염색체 분리에 영향을 미친다[참조[Aoki and Taketo, Journal of Cell Science, 2007; 120:3327-3335] 참조].
대부분의 연구자들은, APC 돌연변이가 결장암에서 기능 변화의 손실을 야기시킨다고 여기고 있다. 미스센스 돌연변이는 APC에서 점 돌연변이(point mutation)를 형성시며, 절단 돌연변이는 규정된 조절 도메인을 포함하는, 대부분의 APC 단백질의 손실을 야기시킨다. 상당한 수의 APC 미스센스 돌연변이는 다양한 조직에서 비롯된 종양에서 보고되었고, 침습성 요로상피세포 암종에서 더 나쁜 질환 결과와 연관되어 있으며[문헌[Kastritis et al., International Journal of Cancer, 2009; 124:103-108], 이는 장외 종양의 발달에서 점 돌연변이된 APC 단백질의 기능적 관련을 시사하는 것이다. 이러한 돌연변이가 APC의 기능을 방해하는 분자 근거는 해결되지 않은 채로 있다.
기능 변화를 야기시키는 APC 돌연변이는 적어도 세 가지 방식으로 염색체 불안정성에 영향을 미칠 수 있다: 동원체-미소관 상호작용을 감소시킴으로써, 유사분열 검사점 기능의 손실에 의함, 및 배수체세포를 발생시킴으로써. 예를 들어, 연구에서는 미소관에 결합된 APC가 생체내 및 시험관 내에서 미소관 안정성을 증가시킨다는 것을 나타내었는데, 이는 미소관 안정성에서 APC의 역할을 시사하는 것이다[문헌[Zumbrunn et al., Current Biology, 2001; 11:44-49] 참조]. 절단된 APC는 마우스 배아 줄기 세포에서 염색체 불안정성을 야기시키고[문헌[Fodde et al., Nature Cell Biology, 2001; 3:433-438] 참조], 미소관 양성 말단 부착을 방해하고, 유사분열 이상의 급격한 증가를 야기시킨다[문헌[Green and Kaplan, Journal of Cell Biology, 2003; 163:949-961] 참조]. 연구에서는, APC 돌연변이를 갖는 암 세포가 종양에서 염색체 불안정성의 광범위한 발생의 이유가 되는 잘못된 동원체-미소관 부착을 교정하는 능력을 감소시킨다는 것을 나타내었다[문헌[Bakhoum et al., Current Biology, 2009; 19:1937-1942] 참조]. 또한, 방추 검사점 기능의 폐기는 APC 기능 손실과 함께 보고되었다. siRNA와 APC의 녹다운( Knockdown)은, APC 손실이 동원체와 검사점 단백질 Bub1 및 BubR1 간의 회합(association)을 감소시킴으로써 유사분열 방추 검사점 기능의 손실을 야기시킨다는 것을 지시하였다. 이에 따라, APC의 손실은 아폽토시스를 감소시키고 다배수를 유도한다[문헌[Kaplan et al., Nature Cell Biology, 2001; 3:429-432; Dikovskaya et al., Journal of Cell Biology, 2007; 176:183-195; Rusan and Peifer, Journal of Cell Biology, 2008; 181:719-726] 참조]. 다배수는 다극 유사분열을 야기시킬 수 있기 때문에 이수성을 위한 주요 소스이다[문헌[Shi and King, Nature, 2005; 437:1038-1042] 참조].
APC에 기인한 기능의 상실이 일부 교정될 수 있지만, 결장암 환자들 중 상당 부분이 절단되고 기능의 획득을 갖는 적어도 하나의 APC 유전자 산물을 갖는 것을 나타내는 보고서가 존재한다. 이에 따라, 절단된 APC 단백질은 열성인 것과는 상반되게, 결정암 개시 및 진행에서 활성 역할을 할 수 있다. 예를 들어, 전장 APC가 아닌, 절단된 APC는 Asef를 활성화시키고 세포 이동을 증진시킬 수 있다.
APC에서의 결함이 결장암 케이스 중 높은 비율로 일어나지만, 현재, 이러한 결함으로부터 형성된 취약성을 타겟화하는 치료제가 존재하지 않는다. 기술된 발명은 결장암을 치료하기 위한 무한증식 인간 결장 상피 세포(HCEC)에서 절단된 APC를 선택적으로 타겟화하는 소분자 억제제 화합물을 제공한다.
일 양태에 따르면, 기술된 발명은 절단된 선종성 결장폴립증(APC) 단백질을 함유한 인간 암 세포의 성장을 선택적으로 억제하는 일련의 소분자 화합물을 제공한다.
일 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 화학식 (I)의 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 화학식 (I-a)의 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 화학식 (I-b)의 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 화학식 (I-c)의 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 화학식 (I-d)의 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 청구항 제3항에 기술된 43개의 구조로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 청구항 제5항에 기술된 구조식의 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 청구항 제7항에 기술된 5개의 구조로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 청구항 제9항에 기술된 구조식의 화합물이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물의 IC50은 0.01 nM 내지 5 μM이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물은 치료량의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제 조성물의 형태이다. 다른 구체예에 따르면, 소분자 항암 화합물의 치료량은 종양 성장을 억제하거나, 종양 증식을 억제하거나, 세포사를 유발시키거나, 이들의 조합을 이루는데 효과적이다.
다른 양태에 따르면, 기술된 발명은 피검체에 치료량의 적어도 하나의 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 소분자 항암 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 치료량이 종양 성장을 억제하거나, 종양 증식을 억제하거나, 세포사를 유발시키거나, 이들의 조합을 이루어는데 효과적인 약제 조성물을 투여하는 것을 포함하여, 결장 상피 세포가 적어도 하나의 절단된 APC 단백질을 발현시키는 피검체에서 직장결장암을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 양태에 따르면, 기술된 발명은 세포가 하기 중 적어도 하나를 포함하는, 전장의 야생형 APC 유전자를 포함하는 무한증식 인간 결장 상피 세포(HCEC)를 제공한다: 커스텐 랫트 육종 바이러스성 종양 유전자 동족체를 함유한 이소성으로 발현된 벡터(Krasv12), 종양 단백질 p53에 대한 작은 헤어핀 RNA(shp53), 및 APC에 대한 작은 헤어핀 RNA(shAPC). 일 구체예에 따르면, APC 유전자는 코돈 1450에서 체세포 돌연변이를 함유한다. 다른 구체예에 따르면, APC 유전자는 코돈 1309에서 체세포 돌연변이를 함유한다. 다른 구체예에 따르면, 세포는 LacZ 단백질을 발현시킨다. 다른 구체예에 따르면, 세포는 커스텐 랫트 육종 바이러스성 종양 유전자 동족체(Krasv12) 및 APC에 대한 작은 헤어핀 RNA(shAPC)을 발현시킨다. 다른 구체예에 따르면, 세포는 레트로바이러스 사이클린-의존성 키나아제 4(Cdk4) 및 촉매 성분의 인간 텔로머라아제(hTERT)로 형질 도입된다.
도 1은 결장 소낭선(colonic crypt)의 다이아그램이다. 결장 소낭선은 유사분열을 일으키는 줄기 세포, 원주형 흡수 세포, 뮤신-형성 배상 세포, 및 장내분비 세포를 포함하는 세포의 상피층으로 이루어진다. 세포는 분화하고 소낭선의 내강내 표면으로 이동하며, 여기서, 이러한 것은 프로그램화된 세포사에 의해 장의 내강(lumen)으로 밀려나간다. APC가 장 상피 세포 내에서 전사 프로필을 조절함으로써 직접적으로 또는 간접적으로 이러한 모든 과정에 참여할 것으로 사료된다[문헌[Goss et al., Journal of Clinical Oncology, 2000; 18:1967-1979] 참조]. APC는 베타-카테닌/TCF를 통한 Wnt 신호전달에 영향을 미친다. 전장 APC는 망막아세포종(Rb) 경로를 통해 세포를 G1/S에서 정지시키고 M 시기 동안 유사분열 방추 및 중심체로 국소화시킴으로써 세포 주기 제어에 영향을 미친다. APC는 미소관을 안정화시키고 세포 분열 제어 단백질 42(cdc42)를 활성화시킴으로써 세포 이동에 영향을 미친다. 마지막으로, 전장 APC는 세포 분화 및 아폽토시스에 영향을 미친다.
도 2는 정상 결장 상피에서 결장암으로의 진행에 관여되는 가능한 유전자를 예시한 것이다. APC 돌연변이는 직장결장암에서 흔한 그리고 조기의 사건인 것으로 여겨지는데, 왜냐하면, APC 돌연변이가 결장직장 종양의 80% 이상에서 검출되며 APC 돌연변이의 90% 이상이 절단된 유전자 산물을 야기시키는 조기 정지 코돈(premature stop codon)을 발생시키기 때문이다.
도 3은 전장 및 절단된 APC의 구조를 도시한 것이다. 절단된 APC는 베타-카테닌 및 미소관을 위한 결합 도메인이 결여되어 있지만, Asef에 대한 결합 도메인을 보유하고, 이에 따라, 증식의 활성화, 염색체 불안정성의 유도, 및 세포 이동의 자극을 초래한다[문헌[Fodde et al., Nat Rev Cancer, 1:55-67] 참조]. 돌연변이 A1309 및 A1450은 가장 크게 제시되어 있다.
도 4는 무한증식 인간 결장 상피 세포(HCEC)가 정상 이배체이고 분화할 수 있음을 예시한 것이다. (A) 작은 자가-조직화 다세포 구조물은 극성화된 빌린 및 일반적인 핵 염색의 증거를 나타낸다. (B) 작은 자가-조직화 다세포 구조물(11일)은 폐쇄 소대-1(ZO-1) 및 일반적인 핵 염색의 증거를 나타낸 것이다. (C) 작은 자가-조직화 다세포 구조물(11일)은 뮤신[MUC]2, 폐쇄 소대-1(ZO-1) 및 일반적인 핵 염색의 증거를 나타낸 것이다. (D)는 hTERT CDK4 무한증식 인간 결장 상피 세포가 일차 마우스 장 세포와 유사하게 분화함을 나타낸 것이다. hTERT CDK 세포는 100% LGR-5 양성이다. LGR-5는 결장 줄기 세포의 허용된 바이오마커이다[문헌[Roig et al. Gastro, 2010; 138:1012-1021] 참조].
도 5는 APC 절단이 발암성 성질을 부여함을 도시한 것이다. 사용된 동질유전자 인간 결장 상피 세포(HCEC)는 시클린-의존성 키나아제 4(CDK4)로 고정화된 HCEC 및 인간 텔로머라아제 역전사효소(hTERT)(1CT); 유전학적 변형 CDK4를 갖는 HCEC, hTERT, 커스텐 랫트 육종 바이러스성 종양 유전자 동족체(Krasv12), ACP에 대한 작은 헤어핀 RNA(shAPC), (1CTRA); 유전학적 변경 CDK4를 갖는 HCEC, hTERT, Krasv12, 종양 단백질 p53에 대한 작은 헤어핀 RNA(shp53), shAPC (1CTRPA); LacZ를 발현시키는 1CTRPA(1CTRPA LacZ); 코돈 1450에서 체세포 돌연변이를 갖는 1CTRPA(1CTRPA 1450); 및 코돈 1309에서 체세포 돌연변이를 갖는 1CTRPA(1CTRPA 1309)이다. APC 기능의 90% 손실이 발암성 성질을 증가시키지 않지만, 절단된 APC를 함유한 동종 세포주 유도체는 변형의 홀마크(hallmark)를 나타낸다. 이는, 절단된 APC가 암 진행의 증가를 나타내는 기능의 상승을 제공함을 지시하고 CRC를 갖는 환자의 큰 분율이 절단된 APC 단백질을 보유하는 이유를 설명할 수 있다.
도 6은 고처리량 스크리닝을 통한 TASIN-1 (절단된 APC 선택적 억제제)의 확인의 단계를 도시한 흐름 차트이다.
도 7은 TASIN-1이 APC 절단을 갖는 직장결장암(CRC) 라인에 대해 선택적으로 독성을 나타낸다는 것을 도시한 것이다. (b) 웨스턴 블롯 또는 제한 소화 검정에 의한 APC 절단의 이소성 발현, WT APC의 녹다운, 및 종양형성 Krasv12의 발현의 검증. 1차 스크린에서 사용되는 세포주는 적색 박스에서 강조되었다. (e) HCT116 및 DLD1 세포에서 TASIN-1의 용량 반응 곡선. 표 (e)는 두 세포주 모두에 대한 IC50 값을 나열한 것이다. DLD1은 절단된 APC를 발현시키며, HCT116은 야생형 APC를 발현시킨다. 이에 따라, TASIN-1은 콜로니를 생존시키고 형성시키는 것으로서 절단된 APC를 발현시키는 DLD1 세포를 억제하지만, HCT116 세포에 거의 또는 전형 영향을 미치지 않는다. (f) 7일 동안 TASIN-1의 존재 또는 부재 하에 연질 아가에서 성장된 HCT116 및 DLD1 세포의 예시적인 사진 및 정량화. 데이타는 평균±s.d.(n=3)를 나타낸다. 스튜던트 t-시험, ***P<0.001.
도 8은 APC 절단의 이소성 발현이 발암성 성질을 부여함을 예시한 것이다. APC 절단의 이소성 발현은 1CTRPA와 비교하여 1CTRPA A1309 세포에서 성장 속도를 증가시켰다. 1CTRPA와 비교하여 1CTRPA A1309 세포에서 연질 아가 콜로니 형성 효율(b) 또는 Matrigel® 통한 침습(c)의 배수 변화. 데이타는 평균±s.d.(n=3)를 나타낸다. 스튜던트 t-시험, *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001.
도 9는 절단된 APC의 녹다운이 TASIN-1에 대한 DLD1 세포를 둔감하게 하여 APC가 TASIN-1의 타겟이라는 증거를 제공함을 예시한 것이다.
도 10은 APC 절단이 TASIN-1의 세포독성 효과를 위해 요구되는 것을 도시한 것이다. (a) APC에 대한 비-사일런싱(non-silencing)(Nsi) shRNA 또는 shRNAs를 발현시키는 DLD1 세포의 용량 반응 곡선. 표 (a)는 각 세포주에 대한 IC50 값을 나열한 것이다. (b) HCT116 및 HCT116 p53-/- 세포의 용량 반응 곡선, 절단된 APC A1309를 발현시키는 레티바이러스 벡터로 감염된 종양 단백질 53에 대한 눌 돌연변이체(이는 공지된 종양 억제제임)는 베타-갈락토시드 트랜스아세틸라제(LacA) 또는 APC 절단 돌연변이체 A1309 중 어느 하나를 발현시키기 위해 사용되었다. LacA는 세포주에서 음성 대조군으로서 이소성으로 발현되었다. 데이타는 평균±s.d.(n=3)를 나타낸다. 녹다운 및 이소성 발현은 웨스턴 블롯에 의해 나타내었다. (c) 왼쪽 바 그래프는 72시간 동안 DMSO, 2.5M 또는 5uM의 TASIN-1로 처리된 각 세포주에 대한 생존 분율을 나타낸 것이다. 오른쪽 표 (c)는 생물학적 삼배체로부터의 각 세포주에 대한 평균 IC50 값을 나열한 것이다. 통계학적 유의성은 WT APC를 갖는 세포주 및 절단된 APC를 갖는 세포주의 IC50 값의 평균 간에 결정되었다. 스튜던트 t-시험, ****P<0.0001. 각 세포주에서 APC의 상태는 공개된 데이타를 기반으로 한 것이다[(Chandra, S.H., Wacker, I. Appelt, U.K., Behrens, J. & Schneikert, J. A common role for various human truncated adenomatous polyposis coli isoforms in the control of beta-catenin activity and cell proliferation. PloS one 7, e34479 (2012)) 및 the Cancer Genome Project Database (www.sanger.ac.uk/genetics/CGP)].
도 11은 TASIN-1이 절단된 APC를 갖는 세포에 대해 선택적으로 독성을 나타냄을 도시한 것이다. TASIN-1은 정상 세포주(a) 및 WT APC를 갖는 다른 암 타입 세포(b)의 생존능력에 영향을 미치지 않고 절단된 APC를 갖는 DU4457 세포를 사멸시킨다. 데이타는 평균±s.d.를 나타낸다(n=3). 스튜던트 t-시험, ***P<0.001.
도 12는 TASIN-1에 대한 다양한 APC 상태를 갖는 직장결장암 세포주의 반응을 예시한 것이다. 절단된 APC HT-29, DLD1, SW620, SW480, HCT15, Lovo 및 Caco-2를 발현시키는 인간 결장 상피 세포주, 및 야생형 APC, HCT116, HCT116 p53-/-, HCEC, C26Ci, HBEC 및 BJ를 발현시키는 세포는 TASIN-1로 처리되었으며, 생존하는 세포 분획이 평가되었다. HCT116, HCT116 p53-/-, HCEC 및 C26Ci가 결정 세포주인 것을 주지하며, HBEC 및 BJ 세포주는 각각 기관지 상피 세포주 및 포피 섬유아세포이다. 2 μM 및 5 μM TASIN-1 조건 모두에서, 절단된 APC를 발현시키는 모든 세포주는 TASIN-1에 대한 민감성을 나타내며, 야생형 APC를 발현시키는 세포주는 TASIN-1에 대한 민감성을 나타내지 않는다. 이는, 야생형 수준의 APC를 함유하는 정상 세포가 TASIN-1에 의해 영향을 미치지 않을 것임을 시사한다.
도 13은 저용량의 TASIN-1로의 지속 처리가 DLD1 세포에서 부착-비의존성 성장을 억제함을 도시한 것이다.
도 14는 TASIN-1이 DLD1 세포에서 아폽토시스를 유발시킨다는 것을 도시한 것이다. DMSO, 2.5 μM TASIN-1 또는 BARD와 함께 HCT116 또는 DLD1 세포의 72시간 인큐베이션 후에, 분열된 PARP의 수준을 웨스턴 블롯에 의해 분석하였다. DMSO는 음성 대조군으로 제공된 것으로서, 세포주에서 분열된 PARP의 양에 영향을 미치지 않는 것이다. 그러나, BARD는 양성 대조군으로 제공된 것으로서, HCT116 및 DLD1 세포주에서 분열된 PARP의 증가를 촉진시키는 것이다. TASIN-1로 처리된 DLD1 세포는 분열된 PARP의 증가를 나타내었으며, 동일한 조건 하에서, HCT116 세포는 그러하지 않았다. HCT116은 야생형 APC를 발현시키며, DLD1은 절단된 APC를 발현시킨다. 추가적으로, 카스파제 활성은 2.5 μM TASIN-1로 처리된 DLD1 세포에서 증가되었다.
도 15는 TASIN-1이 DLD1에서 c-Jun N-말단 키나아제 (JNK)-의존성 아폽토시스를 유발시키지만 HCT116 세포에서는 그러하지 않음을 예시한 것이다. TASIN-1로의 인큐베이션은 PARP의 분열(a), 미토콘드리아로부터의 시토크롬 c 방출(b) 및 DLD1 세포에서의 카스파제 3 활성화(c)를 유발한다. 독소루비신(DOX)은 아폽토시스를 위한 양성 대조군으로서 사용되었다. β-액틴은 로딩 대조군으로서 사용되었다. (c)에서의 값은 DMSO 처리된 세포로 일반화된 카스파제 3/7 활성의 유발 배수를 나타낸 것이다. RLU: 상대적 루시페라제 단위. (d) TASIN-1 처리는 DLD1 세포에서 JNK의 포스포릴화를 유발시킨다. (e)-(g) SP600125와 함께 TASIN-1의 동시처리는 TASIN-1의 사멸 효과를 역전시키고(e), JNK의 포스포릴화를 억제하고 TASIN-1 처리에 의해 유발된 PARP의 분열을 폐지하고(f), 카스파제 3/7 활성을 감소시킨다(g). 데이타는 평균± s.d.(n=3)를 나타낸다. 스튜던트 t-시험, **P<0.01, ***P<0.001.
도 16은 TASIN-1이 DLD1 세포에서 시토크롬 C 방출을 유발시킴을 도시한 것이다. Cyto: 세포질; mito: 미토콘드리아. 전압-의존성 음이온 채널(VDAC)은 미토콘드리아 외부막 상에 발견되었다.
도 17은 마우스 S9 및 간세포 검정에서 TASIN-1의 대사 안정성을 도시한 것이다.
도 18은 TASIN-1이 복막 공간으로부터 흡수된 후에 큰창자에서 보유된다는 것을 도시한 것이다. LIC: 큰창자 내용물
도 19는 리드 화합물의 효능 및 선택성이 생체 내에서 특징되는 방법을 예시한 것이다.
도 20은 TASIN-1이 DLD1 이종이식에서 종양 성장을 억제함을 도시한 것이다. 투약 스케쥴은 18일에 걸쳐 40mg/kg로 하루에 2회 복막 투여되었다. (a) TASIN-1 처리된 DLD1 이종이식의 종양 크기(하기)는 대조군 마우스의 것(상기) 보다 더욱 작다. 스케일 바, 10mm. TASIN-1은 DLD1의 종양 성장 속도를 유의미하게 감소시킨다(b).
도 21은 TASIN-1이 듀크(Dukes) 타입 C, 직장결장 선암종(DLD-1) 이종이식에서 종양 성장(a) 및 종양 부피(b)를 감소시키는 것을 나타낸 것이다. TASIN-1은 APC 절단을 갖는 이종 이식에서 종양 성장을 선택적으로 억제하고(c-d), 유전학적 CRC 마우스 모델에서 종양 형성을 감소시킴(e-g)을 도시한 것이다. TASIN-1은 HT29의 종양 성장 속도를 유의미하게 감소시키지만(c) HCT116 이종이식에서는 그러하지 않다(d). (c)-(d), 데이타는 8개의 종양의 평균±s.d.를 나타낸다. TASIN-1 처리는 양성 (폴립) 종양의 수를 유의미하게 감소시키고(e), CPC;Apc 마우스에서 폴립 크기를 감소시킨다(f). (e)에서, 각 점은 하나의 마우스를 나타낸다. 평균은 중질의 검정색 라인에 의해 지시된다. (g) TASIN-1은 마우스의 성장을 억제하지 못하였다. (f) 및 (g)에서, 데이타는 8 내지 10마리의 마우스의 평균±s.d.를 나타낸다. 스튜던트 t-시험 (c)-(e), (g) 및 다중 t 시험 ((f), FDR=1%)을 사용하였다. *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001.
도 22는 TASIN-1이 HT29 이종이식에서 종양 성장을 억제하였음을 도시한 것이다. 투약 스케쥴은 18일에 걸쳐 40mg/kg로 복강내로 하루에 2회 투여되었다.
도 23은 TASIN-1이 HCT116 이종이식에서 종양 성장을 억제하지 못함을 도시한 것이다. 투약 스케쥴은 18일에 걸쳐 40mg/kg로 복강내로 하루에 2회 투여되었다. HCT116은 야생형 APC를 갖는다. 이에 따라, TASIN-1은 생체 내에서 절단된 APC에 대한 선택성을 유지한다.
도 24는 TASIN-1이 유전학적으로 조작된 CRC 마우스 모델에서 종양 형성을 감소시키는 것을 도시한 것이다. (a) TASIN-1은 주로 i.p. 주사 후 큰창자 조직에 보유된다. (b) 대조군 및 TASIN-1 처리된 군으로부터의 결장의 예시적인 사진. (c) TASIN-1은 생체 내에서 염증 유전자 세트의 발현을 억제한다. RNA는 대조군 및 TASIN-1 처리군의 종양 용해물로부터 추출되었으며, cDNA는 합성되고, qPCR 분석으로 수행되었다. 데이타는 5마리의 마우스의 평균±s.d.를 나타낸다. 스튜던트 t-시험, *P<0.05, **P<0.01.
도 25는 TASIN-1이 주지 가능한 독성이 없는 아폽토시스의 유발을 통한 이종이식 마우스 모델에서 종양을 억제함을 도시한 것이다. (a) 대조군 또는 TASIN-1 처리 마우스에서 처리 전 및 후 체중. (b) TASIN-1 또는 용매 처리된 DLD1 이종이식에서 분열된 카스파제 3에 대한 예시적인 H&E 염색 이미지 및 면역조직화학. 스케일 바(왼쪽), 50 μM; (오른쪽), 200 μM. TASIN-1 처리된 종양은 아폽토성 종양 세포의 영역을 나타내고(박스에 의해 마킹됨, 하부 왼쪽), 분열된 카스파제 3에 대한 양성 염색이다(하부 오른쪽). (c) 분열된 PARP는 웨스턴 블롯에 의해 대조군 또는 TASIN-1 처리 종양 시편의 추출물에서 검출되었다.
도 26은 TASIN-1의 유사체를 동정하기 위한 구조-활성 관계(SAR) 분석을 도시한 것이다. 상이한 화학타입을 갖는 유사체가 시험되었다. 101개의 유사체가 시험되었으며, 이러한 유사체들 중 40개는 TASIN-1에 비해 DLD1 세포에서 보다 큰 효능을 나타낸다.
도 27은 소분자 항암 화합물 PDSA-010, PDSA-011, PDSA-013 및 PDSA-014이 DLD1 및 A1CTRPA A1309 세포를 강력하고 선택적으로 사멸시킨다는 것을 도시한 것이다.
도 28은 하루에 2회 10 mg/kg의 복강내 주사에 의해 투여된 소분자 항암 화합물 PDSA-014가 DLD1 이종이식에서 종양 성장을 억제함을 도시한 것이다.
도 29는 하루에 2회 10 mg/kg의 복강내 주사에 의해 투여된 소분자 항암 화합물 PDSA-014가 HCT116 이종이식에서 종양 성장을 억제하지 못함을 도시한 것이다.
도 30은 2.5 μM TASIN-1이 느리고 가역적인 세포사를 유발시키는 것을 도시한 것이다.
도 31은 TASIN-1이 대조 세포에 비해 분열 지수를 4배 증가시킨다는 것을 도시한 것이다.
도 32는 TASIN-1이 양성 대조군 PITSTOP2와 유사한 염색체 회합을 방해하는 것을 도시한 것이다.
도 33은 TASIN-1이 DLD1 세포에서 유사분열 동안 유사분열 방추, 염색체 정렬 및 K-섬유 조직화를 방해하는 것을 도시한 것이다. (a) 중기판의 폭. (b) 중기판의 방추 폭/전체 세포 폭의 비율. Pitstop2는 방추 분열을 위한 양성 대조군이다. 각 점은 세포를 나타낸 것이다. 평균은 중질의 검정색 라인에 의해 지시된다. (c) α-튜불린(적색), HURP(녹색), 및 DNA(DAPI, 청색)에 대해 염색된 중기 동시발생 세포에 대한 예시적인 이미지. 그래프는 비정상 HURP 국소화를 갖는 TASIN-1 처리된 세포의 백분율을 나타낸 것이다. 데이타는 3개의 생물학적 삼배체(triplicate)로부터 기록된 50개의 세포의 평균±s.e.m.를 나타낸 것이다. 스튜던트 t-시험, **P<0.001. (d) TASIN-1 처리는 적색 화살표에 의해 지시된 바와 같은 래깅 마이크로솜 및 후기 브릿지를 유발시킨다. 모든 스케일 바: 10 μM.
도 34는 TASIN-1이 DLD1 세포에서 Wnt 경로 활성에 영향을 미치지 않음을 도시한 것이다. 활성 β-카테닌에 대한 면역염색 (a) 및 24시간 동안 TASIN-1로 처리된 DLD1 세포에서 전체 β-카테닌에 대한 웨스턴 블롯 (b). (c) TASIN-1은 STF 리포터를 사용하여 Wnt 경로 활성에 영향을 미치지 않는다. IWR은 양성 대조군으로부터 사용되었다[Chen, C. et al. Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer. Nature chemical biology 5, 100-107 (2009)]. 데이타는 평균±s.d.를 나타내며, n=3이다. 스튜던트 t-시험, **P<0.01, ***P<0.001. 모든 스케일 바: 10 μM.
도 35는 TASIN-1이 노코다졸 동기화로부터 방출 후에 DLD-1 세포에서 G1 시기로의 진입을 지연시키는 것을 도시한 것이다.
도 36(a-z) 및 (aa)는 예시적인 화합물의 NMR 스펙트럼을 도시한 것이다.
기술된 발명은 첨부된 도 및 도면과 함께 기술되는, 하기 예시적인 구체예의 설명으로부터 보다 잘 이해될 수 있다. 본원에 제공된 기술된 발명의 기술된 구체예가 단지 대표적이고 예시적인 것이고 한정적이지 않다는 것이 당업자에게 명백하게 될 것이다.
정의:
본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 다양한 용어는 본원에 기술된 정의를 가질 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "선종성 결장폴립증 유전자" 또는 "APC 유전자" 또는 "APC"는 APC 단백질에 대해 코딩하는 포유동물 DNA 서열을 지칭한다. 인간 APC 유전자의 예는 염색체 5, 유전자은행: M74088.1 상의 5q21-q22에 위치되어 있다. 인간 APC 유전자에 대한 동의어는 BTPS2, DP2, DP2.5, DP3, PPP1R46 및 "단백질 포스파타제 1, 조절 서브유닛 46"을 포함한다. 마우스 APC 유전자의 예는 염색체 18 B1, MGI:88039에 위치되어 있다. 마우스 APC 유전자에 대한 동의어는 CC2, Min, mAPC, AI0147805, AU020952 및 AW124434를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "항암 화합물"은 절단된 APC를 선택적으로 타겟화하고 절단된 APC의 생물학적 활성을 억제하는 소분자 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "선종성 결장폴립증 단백질" 또는 "APC 단백질" 또는 "APC"는 2843개의 아미노산의 포유동물 단백질 서열을 지칭한다. 인간 APC 서열의 예는 유전자은행: AAA03586이다. 마우스 APC 서열의 예는 유전자은행: AAB59632이다.
용어 "APC 절단" 또는 "APC 절단 돌연변이체" 또는 "APC 절단 돌연변이"는 APC 유전자 내에서 일어나는 돌연변이로부터 형성된 절단된 단백질 산물을 지칭한다. APC 절단은 예를 들어, 1309개의 아미노산 산물 또는 1450개의 아미노산 산물일 수 있지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "투여하는"은 생체내 투여, 뿐만 아니라, 생체외 조직으로의 직접적인 투여를 포함한다. 일반적으로, 조성물은 경구, 협측, 비경구, 국소로, 흡입 또는 주입(inhalation)에 의해(즉, 입을 통해 또는 코를 통해), 또는 직장 중 어느 하나로, 요망되는 경우 통상적인 비독성의 약제학적으로 허용되는 담체, 어주번트, 및 비히클을 함유한 투약 단위 제형으로 전신으로 투여될 수 있거나, 예를 들어, 주사, 주입(implantation), 이식(grafting), 국소 적용과 같은 (그러나, 이로 제한되지 않음) 수단에 의해, 또는 비경구로 국소로 투여될 수 있다.
용어 "유사체" 및 "유도체"는 하나 이상의 단계에서 유사한 구조의 다른 화합물로부터 형성된 화합물을 의미하는 것으로 교호적으로 사용된다. 화합물의 "유도체" 또는 "유사체"는 적어도 기준 화합물의 요망되는 기능의 정도를 보유한다. 이에 따라, "유도체"에 대한 대체 용어는 "작용성 유도체"일 수 있다. 유도체는 화학적 개질, 예를 들어, 알킬화, 아실화, 카바밀화, 요오드화 또는 화합물을 유도체화하는 임의의 개질을 포함할 수 있다. 이러한 유도체화된 분자는 예를 들어, 자유 아미노기가 유도체화되어 아민 하이드로클로라이드, p-톨루엔 설포닐기, 카보벤족시기, t-부틸옥시카보닐기, 클로로아세틸기, 또는 포말기를 형성하는 분자를 포함한다. 자유 카복실기는 유도체화되어 염, 에스테르, 아미드, 또는 하이드라지드를 형성할 수 있다. 자유 하이드록실기는 유도체화되어 O-아실 또는 O-알킬 유도체를 형성할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "상태(condition)"는 다양한 건강 상태를 지칭하고, 임의의 기본 메카니즘 또는 손상에 의해 야기되는 질병 또는 질환을 포함하는 것을 의미한다. APC와 관련된 질환은 결장암을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "질환" 또는 "질병"은 건강의 손상 또는 비정상 기능화의 상태를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "약물"은 질환의 예방, 진단, 경감, 치료, 또는 치유에서 사용되는 치료제 또는 임의의 물질을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "효소 활성"은 제공된 조건 하에서 제공된 시간에 소비된 기질(또는 형성된 생성물)의 양을 지칭한다. 효소 활성은 또한, "전환수(turnover number)"로서 지칭될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "억제하는"은 물질 또는 화합물의 화학적 또는 생물학적 활성을 감소시키거나 조절하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "손상"은 물리적 또는 화학적일 수 있는, 외부 제제 또는 힘에 의해 야기되는 신체의 구조 또는 기능에 손해를 입히거나 손상시키는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "증후군"은 일부 질환 또는 병태를 지시하는 증상의 패턴을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료제"는 치료 효과를 제공하는 약물, 분자, 핵산, 단백질, 대사산물, 조성물 또는 다른 물질을 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "활성물"은 의도된 치료 효과의 원인이 되는 기술된 발명의 조성물의 구성성분, 성분 또는 구성요소를 지칭한다. 용어 "치료제" 및 "활성제"는 본원에서 교호적으로 사용된다. 활성제는 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "개질하다"는 하나 이상의 특정 사항에서 특정 수치 또는 비율로 변형, 변화, 조정, 완화, 변경, 영향, 또는 조절하는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "개질제"는 병태, 상태, 질병, 질환, 증상 또는 증후군의 형태, 증상, 징후, 질, 특징 또는 성질을 감소시키거나 소정 정도 또는 범위로 경감시키거나 완화시키는 물질, 조성물, 추출물, 식물 구성성분, 식물 추출물, 식물 구성요소, 치료 성분, 활성 성분, 치료제, 약물, 대사산물, 활성제, 단백질, 비-치료 성분, 비-활성 구성요소, 비-치료제, 또는 비-활성제를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "조절하다"는 특정 수치 또는 비율로 조절, 변경, 구성, 또는 조정하는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "비경구"는 예를 들어 피하로(즉, 피부 아래에 주사), 근육내로(즉, 근육에 주사); 정맥내로(즉, 정맥에 주사), 척추강내로(즉, 척수 주변 또는 뇌의 지주막 아래의 공간에 주사), 흉골내 주사를 포함하는 주사(즉, 주사에 의한 투여) 또는 주입 기술에 의해 신체에 도입하는 것을 지칭한다. 비경구적으로 투여된 조성물은 니들, 예를 들어, 외과용 니들을 사용하여 전달된다. 본원에서 사용되는 용어 "외과용 니들"은 선택된 해부학적 구조에 유체(즉, 흐를 수 잇는) 조성물의 전달을 위해 구성된 임의의 니들을 지칭한다. 주사 가능한 제조물, 예를 들어, 멸균 주사 가능한 수성 또는 오일성 현탁액은 예시적인 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 기술에 따라 제형화될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "감소하다" 또는 "감소하는"은 질병을 발달시킬 위험이 있는 개체에서 질병의 발병을 제한하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "피검체" 또는 "개체" 또는 "환자"는 인간을 포함한, 포유동물 기원의 동물 종의 멤버를 지칭하기 위해 교호적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 용어 "증상"은 특정 질환 또는 질병을 일으키고 이를 동반하고 이의 징조(indication)로서 제공되는 현상을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료 성분"은 집단의 백분율에서 특정 질환 소견의 진행을 제거하거나, 감소시키거나, 예방하는 치료학적 유효 투여량(즉, 투여 용량 및 횟수)을 지칭한다. 통상적으로 사용되는 치료 성분의 예는 ED50으로서, 이는 집단의 50%에서 특정 질환 소견에 대해 치료학적으로 효과적인 특정 투여량의 용량을 기술하는 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "치료 효과"는 치료 결과를 지칭하는 것으로서, 이의 결과는 요망되거나 유익한 것으로 판단된다. 치료 효과는 질환 소견의 직접 또는 간접적인 정지, 감소, 또는 제거를 포함할 수 있다. 치료 효과는 또한, 질환 소견의 진행의 직접 또는 간접적인 정지, 감소 또는 제거를 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "국소"는 적용 포인트에 또는 바로 아래에 조성물의 투여를 지칭한다. 구 "국소적으로 적용하는"은 상피 표면을 포함하는 하나 이상의 표면(들) 상에 적용을 기술한다. 경피 투여와는 상반되게, 국소 투여가 일반적으로 전신 효과 보다는 국소 효과를 제공하지만, 본원에서 사용되는 용어 "국소 투여" 및 "경피 투여"는 달리 기술하거나 나타내지 않는 한, 교호적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 용어 "돌연변이"는 유전자에 대해 코딩하는 DNA의 뉴클레오티드 서열의 변화를 통해 또는 염색체의 물리적 배열의 변화를 통해, 염색체에서 이러한 변화를 일으키는 과정, 또는 부모 타입에서 발견되지 않는 새로운 특징 또는 특성의 형성을 야기시키는 유기체의 유전자 또는 염색체 내의 DNA 서열의 변화를 지칭한다. 돌연변이의 세가지 메카니즘은 치환(다른 염기 쌍에 대한 하나의 염기쌍의 교체), 부가(서열에 하나 이상의 염기의 삽입), 및 결실(하나 이상의 염기쌍의 상실)을 포함한다.
용어 "돌연변이체" 및 "변이체"는 기준 뉴클레오티드 서열에 대한 실질적인 일치성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 지칭하기 위해 본원에서 교호적으로 사용된다. 서열들의 차이는 자연적으로 또는 디자인에 의해 서열 또는 구조의 변화의 결과에 의한 것일 수 있다. 천연 변화는 자연에서 특정 핵산 서열의 정상적인 복제 또는 중복(duplication)의 과정 동안 일어날 수 있다. 디자인된 변화는 특정 목적을 위해 서열에 상세하게 디자인되고 도입될 수 있다. 이러한 특정 변화는 다양한 기술을 이용하여 시험관 내에서 이루어질 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "약제 조성물"은 약제학적 제품, 약물, 대사물, 또는 활성 성분을 포함하는 제조물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하는"은 병태의 진행을 제거하고, 실질적으로 억제하거나, 늦추거나, 역전시키고, 병태의 임상적 증상을 실질적으로 완화시키거나, 병태의 임상적 증상의 출현을 실질적으로 예방하는 것을 포함한다. 치료는 추가로 하기 기술된 것들 중 하나 이상을 달성하는 것을 지칭한다: (a) 질병의 중증도를 감소시킴; (b) 치료될 질병(들)에 특유한 증상들의 발달을 제한함; (c) 치료될 질병(들)에 특유한 증상들의 악화를 제한함; (d) 종래에 질병(들)에 걸린 환자에서 질병(들)의 재발을 제한함; 및 (e) 종래에 질병(들)에 대한 증상이 없었던 환자에서 증상의 재발을 제한함. 본원에서 사용되는 용어 "병태(condition)"는 다양한 건강 상태를 지칭하는 것으로서, 절단된 APC 단백질이 발현되는 임의의 기저 메카니즘 또는 질병에 의해 야기되는 질병 또는 질환을 포함하는 것을 의미한다. 이를 필요로 하는 피검체는 APC 돌연변이와 관련된 질병을 갖거나 가질 위험이 있는 환자이다.
화합물
일 양태에 따르면, 기술된 발명은 하기 화학식 (I)의 소분자 항암 화합물을 제공한다:
[화학식 I]
Figure 112016034146661-pct00001
상기 식에서,
Y1 및 Y2는 각각 독립적으로 CH 또는 N이며;
L은 SO2, CO, CH2, 또는 CHMe이며;
X2는 CH2, CHR2, NR3, O, S로 이루어진 군으로부터 선택되며;
X1은 CH2, CHR4, NR5, O, S로 이루어진 군으로부터 선택되며;
n은 0, 1, 2이며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, C1-4 알킬, C1-4 알케닐, C1-4 알키닐, CH2아릴, CH2헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 C1-6 알킬; C1-6 사이클로알킬, C1-6 알케닐, C1-6 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, CH2아릴, CH2헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R3은 다른 고리 원자들 중 하나에 메틸렌 또는 에틸렌 브릿지를 형성할 수 있으며, 이에 따라 바이시클릭 구조를 제공하며;
L에 연결된 고리는 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 융합된 사이클로알킬아릴, 융합된 헤테로시클릴아릴, 융합된 아릴헤테로시클릴, 융합된 사이클로알킬헤테로아릴, 융합된 헤테로시클릴헤테로아릴, 융합된 헤테로아릴헤테로시클릴일 수 있으며;
광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체 중심이 존재하는 경우에는 언제든지 포함된다.
화학식 (I)의 예시적인 소분자 항암 화합물은 표 A에서 확인된다(SAR). 광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체중심이 존재하는 경우에 포함된다.
일 구체예에 따르면, 기술된 발명은 하기 화학식 (I-a)의 소분자 항암 화합물을 제공한다:
[화학식 I-a]
Figure 112016034146661-pct00002
상기 식에서,
Y1 및 Y2는 각각 독립적으로 CH 또는 N이며;
L은 SO2, CO, CH2, 또는 CHMe이며;
X1은 CH2, CHR4, NR5, O, S로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 C1-6 알킬; C1-6 사이클로알킬, C1-6 알케닐, C1-6 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, CH2아릴, CH2헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
L에 연결된 고리는 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로시클릴아릴일 수 있으며;
광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체 중심이 존재하는 경우에는 언제든지 포함된다.
다른 구체예에 따르면, 기술된 발명은 하기 화학식 (I-b)의 소분자 항암 화합물을 제공한다:
[화학식 I-b]
Figure 112016034146661-pct00003
상기 식에서,
L은 SO2, CO, CH2, 또는 CHMe이며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며;
R4는 C1-6 알킬; C1-6 알키닐, 아릴, CH2아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
L에 연결된 고리는 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로시클릴아릴일 수 있으며;
광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체 중심이 존재하는 경우에는 언제든지 포함된다.
다른 구체예에 따르면, 기술된 발명의 소분자 항암 화합물은 하기 화학식 (I-c)로 표현된다:
[화학식 I-c]
Figure 112016034146661-pct00004
상기 식에서,
L은 SO2, CH2, 또는 CHMe이며;
L에 연결된 고리는 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로시클릴아릴일 수 있으며;
광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체 중심이 존재하는 경우에는 언제든지 포함된다.
다른 구체예에 따르면, 기술된 발명의 소분자 항암 화합물은 하기 화학식 (I-d)에 의해 표현된다:
[화학식 I-d]
Figure 112016034146661-pct00005
상기 식에서,
L은 SO2, CH2, 또는 CHMe이며;
R4은 C1-6 알킬; C1-6 알키닐, 아릴, CH2아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
L에 연결된 고리는 아릴, 헤테로아릴, 융합된 헤테로시클릴아릴일 수 있으며;
광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체 중심이 존재하는 경우에는 언제든지 포함된다.
다른 구체예에 따르면, 기술된 발명의 소분자 항암 화합물은 화학식 (I-e)에 의해 표현된다:
[화학식 I-e]
Figure 112016034146661-pct00006
상기 식에서,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며;
R4는 H, Me, 프로파길, 이소프로필, 사이클로프로필, CH2아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R6 내지 R10은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, Me, Et, CF3, 사이클로프로필, 이소프로필, 3차-부틸, 아릴, OMe, OCF3, OCHF2, O아릴, CN, N3, CO아릴, CO2H, CO2R, CHO, CONH2, CONR2, CONHR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이러한 문단의 문맥에서, R은 독립적으로 H, C1-4 알킬, C1-4 사이클로알킬, 아릴, CH2아릴, CH2헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체 중심이 존재하는 경우에는 언제든지 포함된다.
화학식 (I-e)에 의해 표현된 소분자 항암 화합물의 일 구체예에 따르면, R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며; R4는 H, Me, 프로파길, 이소프로필, 사이클로프로필, CH2아릴로부터 선택되며; R6 및 R10은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, Me, Et, CF3, 사이클로프로필, 이소프로필, 아릴, OMe, OCF3, OCHF2, O아릴로부터 선택된다.
화학식 (I-e)에 의해 표현된 소분자 항암 화합물의 다른 구체예에 따르면, R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며; R4는 H, Me, 프로파길, 이소프로필, 사이클로프로필, CH2아릴로부터 선택되며; R6은 아릴이며, R7 내지 R10은 각각 독립적으로 H, F, Cl, CF3, Me, 사이클로프로필, 이소프로필, OMe, OCF3, OCHF2로부터 선택된다.
화학식 (I-e)에 의해 표현되는 소분자 항암 화합물의 다른 구체예에 따르면, R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며; R4는 H, Me, 프로파길, 이소프로필, 사이클로프로필, CH2아릴로부터 선택되며; R7은 아릴이며, R6, R8, R9 및 R10은 각각 독립적으로 H, F, Cl, CF3, Me, 사이클로프로필, 이소프로필, OMe, OCF3, OCHF2로부터 선택된다.
화학식 (I-e)에 의해 표현되는 소분자 항암 화합물의 다른 구체예에 따르면, R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며; R4는 H, Me, 프로파길, 이소프로필, 사이클로프로필, CH2아릴로부터 선택되며; R8은 아릴이며, R6, R7, R9 및 R10은 각각 독립적으로 H, F, Cl, CF3, Me, 사이클로프로필, 이소프로필, OMe, OCF3, OCHF2로부터 선택된다.
화학식 (I-e)에 의해 표현되는 소분자 항암 화합물의 다른 구체예에 따르면, R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며; R4는 H, Me, 프로파길, 이소프로필, 사이클로프로필, CH2아릴로부터 선택되며; R7은 CO아릴이며, R6, R8, R9 및 R10은 각각 독립적으로 H, F, Cl, CF3, Me, 사이클로프로필, 이소프로필, OMe, OCF3, OCHF2로부터 선택된다.
다른 구체예에 따르면, 기술된 발명의 소분자 항암 화합물은 하기 화학식 (I-f)에 의해 표현된다:
[화학식 I-f]
Figure 112016034146661-pct00007
상기 식에서,
Y1 및 Y2는 각각 독립적으로 CH 또는 N이며;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며;
R4는 C1-6 알킬, C1-6 사이클로알킬, C1-6 알케닐, C1-6 알키닐, CH2아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R11 및 R12는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, Me, CF3, 사이클로프로필, 아릴, 헤테로아릴로부터 선택되며;
광학적 활성 이성질체를 포함하는 모든 가능한 입체이성질체는 입체 중심이 존재하는 경우에는 언제든지 포함된다.
화학식 (I-f)에 의해 표현되는 소분자 항암 화합물의 일 구체예에 따르면, Y1은 CH이며; Y2는 N이며; R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 Me이며; R4는 H, Me, 프로파길, 이소프로필, 사이클로프로필, CH2아릴로부터 선택되며; R11은 H, Me, CF3, 사이클로프로필, 아릴이며; R12는 H, F, Cl, CF3, 아릴로부터 선택된다.
화학적 치환체 및 입체화학
본원에서 사용되는 용어 "지방족"은 포화된 파라핀(알칸), 불포화된 올레핀(알켄 또는 알카디엔), 및 삼중 결합을 함유한 아세틸렌(알킨)을 포함하지만 이로 제한되지 않는 구성성분 탄소 원자의 직쇄 또는 분지쇄 배열을 나타낸다. 착물 구조에서, 사슬은 분지되거나 가교될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "저급"은 1 내지 6개의 탄소를 갖는 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬"은 1 내지 25개의 탄소 원자, 또는 기술된 탄소 원자의 수(예를 들어, C1-6 알킬) 또는 이러한 범위 내의 임의의 수의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소를 지칭한다. 이러한 알킬 기가 치환체, 예를 들어, (비제한적으로) 할로겐, 퍼플루오로알킬, 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬, 저급 알콕시, 저급 사이클로알콕시, 저급 알킬설파닐, 옥소, 하이드록실로 임의적으로 치환될 수 있다는 것이 본 출원의 문맥 내에 암시적으로 함의된다. 본원에서 사용되는 "알킬"의 예는 메틸, 트리플루오로메틸, 에틸, 프로필, n-부틸, t-부틸, n-펜틸, 이소부틸, 및 이소프로필, 메톡시메틸, 메톡시에틸, 이소프로폭시부틸, 프로피닐옥시에틸, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐"은 하나 이상의 이중 결합을 갖는 일가, 선형(비분지된) 또는 분지된 탄화수소 사슬을 나타내는 것으로서, 여기서, 이중 결합은 다른 불포화된 기(예를 들어, 다중불포화된 알케닐)에 비콘주게이션되거나 콘주게이션될 수 있고 비치환되거나 치환될 수 있으며, 다중 치환도가 허용될 수 있다. 이는 치환체, 예를 들어, (비제한적으로) 할로겐, 퍼플루오로알킬, 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬, 저급 알콕시, 저급 사이클로알콕시, 저급 알킬설파닐, 옥소, 하이드록실로 임의적으로 치환될 수 있다. 예를 들어, 그리고, 비제한적으로, 알케닐은 비닐, 알릴, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐, 부타디에닐, 펜타디에닐, 헥사디에닐, 2-에틸헥세닐, 2-프로필-2-부테닐, 4-(2-메틸-3-부텐)-펜테닐, 6-메톡시헥세닐, 2-트리플루오로메틸-3-부테닐, 등일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐"은 치환체, 예를 들어, (비제한적으로) 할로겐, 퍼플루오로알킬, 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬, 저급 알콕시, 저급 사이클로알콕시, 저급 알킬설파닐, 옥소, 하이드록실로 임의적으로 치환된, 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 탄화수소 라디칼을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아릴"은 벤젠 고리, 또는 하나 이상의 임의적으로 치환된 벤젠 고리에 융합된 임의적으로 치환된 벤젠 고리계를 지칭하며, 다중 치환도가 가능하다. 치환체는 시아노, 할로겐, 퍼플루오로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 사이클로알킬, 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬설파닐, 옥소, 하이드록시, 알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 또는 사이클로알킬로 임의적으로 치환된 아미노, 알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 또는 사이클로알킬로 임의적으로 치환된 아미노카보닐(-NRC(O)R), 카복시, 아실, 아실옥시, 알콕시카보닐, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴옥시, 아로일옥시, 헤테로아로일옥시, 헤테로사이클로일옥시, 알킬 또는 사이클로알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴로 임의적으로 치환된 카바모일, 알킬 또는 사이클로알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴로 임의적으로 치환된 아미노설포닐을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 아릴의 예는 페닐, 2-나프틸, 1-나프틸, 1-안트라세닐, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
용어 "알킬" 또는 "아릴" 또는 이의 접두 어근(prefix root) 중 어느 하나가 치환체의 명명으로 나타나는 경우에, 이러한 것은 알킬 및 아릴에 대해 상기 제공된 한정을 포함하는 것으로서 해되는 것으로 이해될 것이다. 명시된 수의 탄소 원자(예를 들어, C1- 10)는 독립적으로, 알킬, 알케닐 또는 알키닐 또는 환형 알킬 모이어티에서 또는 용어 "알킬"이 이의 접두 어근으로서 나타나는 보다 큰 치환체의 알킬 부분에 대해 타소 원자의 수를 지칭할 것이다.
본원에서 사용되는 "사이클로알킬"(본원에서 "지방족 환형"과 교호적으로 사용됨)은 치환체, 예를 들어, 비제한적으로, 할로겐, 퍼플루오로알킬, 사이클로알킬, 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬설파닐, 옥소, 하이드록실로 임의적으로 치환된, 하나 이상의 불포화도를 임의적으로 지니는, 총 3 내지 10개의 탄소 고리 원자(헤테로원자가 아님)를 갖는 비-방향족 일가, 모노시클릭 또는 폴리시클릭 고리 구조물을 지칭한다. "사이클로알킬"은 일 예로서, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헤헥세닐, 아다만타닐, 노르보르닐, 노보르네닐, 사이클로헵틸, 또는 사이클로옥틸, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로사이클" 및 "헤테로시클릭"은 하나 이상의 불포화도를 임의적으로 지니고 -S-, -SO-, -SO2-, -O-, 또는 -N-으로부터 하나 이상의 선택된 헤테로원자 치환을 함유하고 니트로, 시아노, 할로겐, 퍼플루오로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 사이클로알킬, 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬설파닐, 저급 알킬설페닐, 저급 알킬설포닐, 옥소, 하이드록시, 메르캅토, 알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 또는 사이클로알킬에 의해 임의적으로 치환된 아미노, 알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 또는 사이클로알킬에 의해 임의적으로 치환된 아미노카보닐(-NRC(O)R), 카복시, 아실, 아실옥시, 알콕시카보닐, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴옥시, 아로일옥시, 헤테로아로일옥시, 헤테로사이클로일옥시, 알킬 또는 사이클로알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴에 의해 임의적으로 치환된 카바모일, 알킬 또는 사이클로알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴에 의해 임의적으로 치환된 아미노설포닐, 알킬 또는 아릴에 의해 임의적으로 치환된 실릴옥시, 알콕시 또는 알킬 또는 아릴에 의해 임의적으로 치환된 실릴을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 치환체로 임의적으로 치환된 3원 내지 12원의 헤테로시클릭 고리를 지칭하기 위해 교호적으로 사용되며, 이는 다중 치환도가 가능하다. 이러한 고리는 임의적으로, 다른 "헤테로시클릭" 고리(들) 중 하나 이상에 융합될 수 있다. "헤테로시클릭"의 예는 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 3-피롤린, 피롤리딘, 피리딘, 피리미딘, 푸린, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 카바졸, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,3-디옥산, 피페리딘, 피롤리딘, 모르폴린, 피페라진, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
헤테로사이클의 예는 피리딜, 티아졸릴, 테트라하이드로티오페닐, 황 산화된 테트라하이드로티오페닐, 피리미디닐, 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 테트라졸릴, 벤조푸라닐, 티아나프탈레닐, 인돌릴, 인돌레닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 피페리디닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 2-피롤리도닐, 피롤리닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 옥타하이드로이소퀴놀리닐, 아조시닐, 트리아지닐, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 2H,6H-1,5,2-디티아지닐, 티에닐, 티안트레닐, 피라닐, 이소벤조푸라닐, 크로메닐, 잔테닐, 페녹사티이닐, 2H-피롤릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 피라지닐, 피리다지닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 1H-인다졸릴, 푸리닐, 4H-퀴놀리지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프테리디닐, 4aH-카바졸릴, 카바졸릴, 베타-카볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 피리미디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 푸라자닐, 페녹사지닐, 이소크로마닐, 크로마닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피페라지닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 퀴누클리디닐, 모르폴리닐, 옥사졸리디닐, 벤조트리아졸릴, 벤즈이속사졸릴, 옥시돌릴, 벤즈옥사졸리닐, 및 이사티노일을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로아릴"은 5원 내지 7원 방향족 고리, 또는 하나 이상의 질소, 산소 또는 황 헤테로원자를 함유한 폴리시클릭 헤테로시클릭 방향족 고리를 지칭하며, 여기서, N-옥사이드 및 황 모노옥사이드 및 황 디옥사이드는 니트로, 시아노, 할로겐, 퍼플루오로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 사이클로알킬, 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬설파닐, 저급 알킬설페닐, 저급 알킬설포닐, 옥소, 하이드록시, 메르캅토, 알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 또는 사이클로알킬에 의해 임의적으로 치환된 아미노, 알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 또는 사이클로알킬에 의해 임의적으로 치환된 아미노카보닐(-NRC(O)R), 카복시, 아실, 아실옥시, 알콕시카보닐, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴옥시, 아로일옥시, 헤테로아로일옥시, 헤테로사이클로일옥시, 알킬 또는 사이클로알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴에 의해 임의적으로 치환된 카바모일, 알킬 또는 사이클로알킬 또는 아릴 또는 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴에 의해 임의적으로 치환된 아미노설포닐, 알킬 또는 아릴에 의해 임의적으로 치환된 실릴옥시, 알콕시 또는 알킬 또는 아릴에 의해 임의적으로 치환된 실릴을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 치환체로 임의적으로 치환되고 다중 치환도가 가능한, 허용 가능한 헤테로방향족 치환이다. 폴리시클릭 방향족 고리 시스템에 대하여, 고리들 중 하나 이상은 하나 이상의 헤테로원자를 함유할 수 있다. 본원에서 사용되는 "헤테로아릴"의 예는 푸란, 티오펜, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 테트라졸, 티아졸, 옥사졸, 이속사졸, 옥사디아졸, 티아디아졸, 이소티아졸, 피리딘, 피리다진, 피라진, 피리미딘, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴나졸린, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌, 및 인다졸, 등이다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 사이클로알킬아릴"은 아릴기에 융합된 사이클로알킬기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 아릴기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 사이클로알킬아릴"의 예는 5-인다닐, 5,6,7,8-테트라하이드로-2-나프틸,
Figure 112016034146661-pct00008
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 아릴사이클로알킬"은 사이클로알킬기에 융합된 아릴기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 사이클로알킬기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 아릴사이클로알킬"의 예는 1-인다닐, 2-인다닐, 1-(1,2,3,4-테트라하이드로나프틸),
Figure 112016034146661-pct00009
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 헤테로시클릴아릴"은 아릴기에 융합된 헤테로시클릴기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 아릴기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 헤테로시클릴아릴"의 예는 3,4-메틸렌디옥시-1-페닐,
Figure 112016034146661-pct00010
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 아릴헤테로시클릴"은 헤테로시클릴기에 융합된 아릴기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 헤테로시클릴기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 아릴헤테로시클릴"의 예는 2-(1,3-벤조디옥솔릴),
Figure 112016034146661-pct00011
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 사이클로알킬헤테로아릴"은 헤테로아릴기에 융합된 사이클로알킬기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 헤테로아릴기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 사이클로알킬헤테로아릴"의 예는 5-아자-6-인다닐,
Figure 112016034146661-pct00012
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 헤테로아릴사이클로알킬"은 사이클로알킬기에 융합된 헤테로아릴기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 사이클로알킬기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 헤테로아릴사이클로알킬"의 예는 5-아자-1-인다닐,
Figure 112016034146661-pct00013
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 헤테로시클릴헤테로아릴"은 헤테로아릴기에 융합된 헤테로시클릴기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 헤테로아릴기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 헤테로시클릴헤테로아릴"의 예는 1,2,3,4-테트라하이드로-베타-카보닐린-8-일,
Figure 112016034146661-pct00014
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "융합된 헤테로아릴헤테로시클릴"은 헤테로시클릴기에 융합된 헤테로아릴기를 지칭하는 것으로서, 두 개가 공통의 두 개의 원자를 가지며, 여기서, 헤테로시클릴기는 치환점이다. 본원에서 사용되는 "융합된 헤테로아릴헤테로시클릴"의 예는 -5-아자-2,3-디하이드로벤조푸란-2-일,
Figure 112016034146661-pct00015
, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "직접 결합"은 구조 변수 사양의 일부인 경우에, "직접 결합"으로서 획득된 변수의 측방에(전방 및 후방에) 치환체의 직접 연결을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "O-연결 모이어티"는 산소 원자를 통해 결합된 모이어티를 의미한다. 이에 따라, R기가 O-연결 모이어티일 때, R은 산소를 통해 결합되며, 이에 따라, 에테르, 에스테르(예를 들어, --O--C(O)-임의적으로 치환된 알킬), 카보네이트 또는 카바메이트(예를 들어, --O--C(O)--NH2 또는 --O--C(O)--NH-임의적으로 치환된 알킬)일 수 있다. 유사하게, 용어 "S-연결 모이어티"는 황 원자를 통해 결합된 모이어티를 의미한다. 이에 따라, R기가 S-연결 모이어티일 때에, R은 황을 통해 결합되며, 이에 따라, 이는 티오에테르(예를 들어, --S-임의적으로 치환된 알킬), 티오에스테르(--S--C(O)-임의적으로 치환된 알킬) 또는 디설파이드(예를 들어, --S--S-임의적으로 치환된 알킬)일 수 있다. 용어 "N-연결 모이어티"는 질소 원자를 통해 결합된 모이어티를 의미한다. 이에 따라, R기가 N-연결 모이어티일 때, R기는 질소를 통해 결합되며, 이에 따라, 이러한 것들 중 하나 이상은 N-연결 아미노산, 예를 들어, --NH--CH2--COOH, 카바메이트, 예를 들어, --NH--C(O)--O-임의적으로 치환된 알킬, 아민, 예를 들어, --NH-임의적으로 치환된 알킬, 아미드, 예를 들어, --NH--C(O)-임의적으로 치환된 알킬 또는 --N3일 수 있다. 용어 "C-연결 모이어티"는 탄소 원자를 통해 결합된 모이어티를 의미한다. 하나 이상의 R기가 탄소를 통해 결합될 때, 이에 따라, 이러한 것들 중 하나 이상은 -임의적으로 치환된 알킬, 예를 들어, --CH2--CH2--O--CH3, --C(O)-임의적으로 치환된 알킬 하이드록시알킬, 메르캅토알킬, 아미노알킬 또는 =CH-임의적으로 치환된 알킬일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "알콕시는 Ra가 알킬인 기 RaO-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐옥시"는 Ra가 알케닐인 기 RaO-를 지칭하며, 여기서, Ra는 알케닐이다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐옥시"는 기 Ra가 알키닐인 RaO-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬설파닐"은 Ra가 알킬인 기 RaS-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐설파닐"은 Ra가 알케닐인 기 RaS-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐설파닐"은 Ra가 알키닐인 기 RaS-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬설페닐"은 Ra가 알킬인 기 RaS(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐설페닐"은 Ra가 알케닐인 기 RaS(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐설페닐"은 Ra가 알키닐인 기 RaS(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬설포닐"은 Ra가 알킬인 기 RaSO2-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐설포닐"은 Ra가 알케닐인 기 RaSO2-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐설포닐"은 Ra가 알키닐인 기 RaSO2-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아실"은 Ra가 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴인 기 RaC(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아로일"은 Ra가 아릴인 기 RaC(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로아로일"은 Ra가 헤테로아릴인 기 RaC(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로시클로일"은 Ra가 헤테로시클릴인 기 RaC(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알콕시카보닐"은 Ra가 아킬인 기 RaOC(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아실옥시"는 Ra가 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴인 기 RaC(O)O-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아로일옥시"는 Ra가 아릴인 기 RaC(O)O-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로아로일옥시"는 Ra가 헤테로아릴인 기 RaC(O)O-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로사이클로일옥시"는 Ra가 헤테로시클리인 기 RaC(O)O-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "치환된"은 명명된 치환체 또는 치환체들로의 치환을 지칭하는 것이며, 달리 기술하지 않는 한, 다중 치환도가 가능하다.
본원에서 사용되는 용어 "함유하다" 또는 "함유하는"은 예를 들어, -CH2-O-CH2, -CH2-SO2-CH2, -CH2-NH-CH3 등을 포함하는 O. S, SO, SO2, N 또는 N-알킬 중 임의의 하나 이상을 갖는 상기 규정된 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 사이클로알킬을 따르는 임의 위치에서 인-라인 치환(in-line substitution)을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "옥소"는 치환체 =O를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 요오드, 브롬, 염소 및 불소를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "메르캅토"는 치환체 -SH를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "카복시"는 치환체 -COOH를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "시아노"는 치환체 -CN을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아미노설포닐"은 치환체 -SO2NH2를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "카바모일"은 치환체 -C(O)NH2를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "설파닐"은 치환체 -S-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "설페닐"은 치환체 -S(O)-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "설포닐"은 치환체 -S(O)2-를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "에톡시"는 치환체 -O-CH2CH3를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "메톡시"는 치환체 -O-CH3를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "임의적으로"는 후속하여 기술되는 사건(들)이 일어날 수 있거나 일어나지 않을 수 있고, 일어나는 사건(들) 및 일어나지 않는 사건 둘 모두를 포함함을 의미한다.
구조식 (I) 및 구조식 (Ia-f)의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 함유할 수 있고, 이에 따라, 라세미체 및 라세믹 혼합물, 단일 거울상이성질체, 부분입체이성질체 혼합물 및 개개 부분입체이성질체로서 일어날 수 있다. 본 발명은 이러한 모든 이성질체 형태의 구조식 (I) 및 구조식 (Ia-f)의 화합물을 포괄하는 것을 의미한다.
구조식 (I) 및 구조식 (Ia-f)의 화합물은 예를 들어, 적합한 용매, 예를 들어, 메탄올 또는 에틸 아세테이트 또는 이들의 혼합물로부터의 분별 결정화에 의해, 또는 광학적 활성 정지상을 이용한 키랄 크로마토그래피를 통해 이의 개개 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 절대 입체화학은 필요한 경우, 공지된 절대 배열의 비대칭 중심을 함유한 시약으로 유도체화되는 결정질 산물 또는 결정질 중간체의 X-선 결정학에 의해 결정될 수 있다.
대안적으로, 일반 구조식 (I) 및 구조식 (Ia-f)의 화합물의 임의의 입체이성질체는 공지된 절대 배열의 광학적으로 순수한 출발 물질 또는 시약을 사용하여 입체특이적 합성에 의해 얻어질 수 있다.
요망되는 경우에, 화합물들의 라세믹 혼합물은, 개개 거울상이성질체들이 단리될 수 있도록 분리될 수 있다. 분리는 당해 분야에 널리 공지된 방법, 예를 들어, 부분입체이성질체 혼합물을 형성시키기 위한 거울상이성질체로 순수한 화합물에 화합물들의 라세믹 혼합물의 커플링, 이후 표준 방법, 예를 들어, 분별 결정화 또는 크로마토그래피에 의한 개개 부분입체이성질체의 분리에 의해 수행될 수 있다. 커플링 반응은 종종 거울상이성질체적으로 순수한 산 또는 염기를 사용한 염의 형성이다. 이후에, 부분입체이성질체 유도체는 첨가된 키랄 잔부의 분열에 의해 순수한 거울상이성질체로 전환될 수 있다. 화합물들의 라세믹 혼합물은 또한, 키랄 정지상을 사용하는 크로마토그래피 방법에 의해 직접적으로 분리될 수 있으며, 이러한 방법은 당해 분야에서 널리 공지된 것이다.
본원에 기술된 화합물들 중 일부는 올레핀성 이중 결합을 함유하고, 달리 명시하지 않는 한, E 및 Z 기하 이성질체 둘 모두를 포함하는 의미를 갖는다.
본원에 기술된 화합물들 중 일부는 토토머로서 존재할 수 있으며, 이는 하나 이상의 이중 결합 이동에 의해 수반되는 수소의 상이한 부착점을 갖는다. 예를 들어, 케톤 및 이의 에놀은 케토-에놀 토토머를 형성한다. 개개 토토머, 뿐만 아니라 이의 혼합물은 본 발명의 화합물에 포함된다.
일반 화학식 (I) 및 화학식 (Ia-f)의 화합물에서, 원자는 이의 천연 동위원소 존재율을 나타낼 수 있거나, 원자들 중 하나 이상은 인공적으로 동일한 원자수를 갖는 특정 동위원소로 풍부할 수 있지만, 원자량 또는 질량수는 천연에서 주로 발견되는 원자량 또는 질량수와 상이하다. 본 발명은 일반 화학식 (I) 및 화학식 (Ia-g)의 화합물의 모든 적합한 동위원소 변형체를 포함한다는 의미를 갖는다. 예를 들어, 상이한 동위원소 형태의 수소(H)는 프로튬(1H) 및 중수소(2H)를 포함한다. 프로튬은 천연에서 발견된 우세한 수소 동위원소이다. 중수소에 대한 풍부함은 생체내 반감기를 증가시키거나 투여량 요건을 감소시키는 것과 같은 특정 치료 장점을 제공할 수 있거나, 생물학적 샘플의 특징분석을 위한 표준물로서 유용한 화합물을 제공할 수 있다. 일반 화학식 (I) 및 화학식 (Ia-F) 내에서의 동위원소로-풍부한 화합물은 과도한 실험 없이, 당업자에게 널리 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 적절한 동위원소로 풍부한 시약 및/또는 중간체를 사용하여 본원의 반응식 및 실시예에 기술된 것과 유사한 공정에 의해 제조될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 구조식 (I) 및 구조식 (Ia-f)의 화합물에 대한 언급이 또한 약제학적으로 허용되는 염, 및 또한 이러한 것이 자유 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 대한 전구체로서 또는 다른 합성 조작에서 사용될 때 약제학적으로 허용되지 않는 염을 포함한다는 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다.
조성물
다른 양태에 따르면, 기술된 발명은 소분자 항암 화합물들 중 적어도 하나 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제 조성물을 제공한다.
본원에서 사용되는 용어 "활성물"은 약리학적 또는 생물학적 활성 또는 영향을 갖는 것을 지칭한다. 용어 "활성 성분"("AI," "약제학적 활성 성분," 또는 "벌크 활성물")은 약제학적으로 활성을 나타내는 약물 중의 물질이다.
용어 "제형" 및 "조성물"은 본원에서 모든 활성물 밀 불활성 성분을 포함하는 포함하는 기술된 발명의 생성물을 지칭하기 위해 교호적으로 사용된다. 본원에서 사용되는 용어 "약제학적 제형" 또는 "약제 조성물"은 타겟 병태 또는 질환을 예방하거나, 강도를 감소시키거나, 치유하거나, 그밖에 치료하기 위해 사용되는 제형 또는 조성물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "결합제"는 분말들을 함께 결합시키거나 "접착시키고" 과립을 형성시킴으로써 이러한 것들을 응집하게 만들고, 이에 따라 제형에서 "접착제"로서의 역할을 하는 물질을 지칭한다. 결합제는 희석제 또는 벌크화제에서 이미 입수 가능한 응집 강도를 부가한다. 예시적인 결합제는 당, 예를 들어, 수크로오스; 밀, 옥수수 쌀(corn rice) 및 감자로부터 유래한 전분; 천연 검, 예를 들어, 아카시아, 젤라틴 및 트래거캔스; 해초의 유도체, 예를 들어, 알긴산, 소듐 알기네이트 및 암모늄 칼슘 알기네이트; 셀룰로오스 물질, 예를 들어, 메틸셀룰로오스 및 소듐 카복시메틸셀룰로오스 및 하이드록시프로필메틸셀룰로오스; 폴리비닐피롤리돈; 및 무기물, 예를 들어, 마그네슘 알루미늄 실리케이트를 포함한다. 조성물에서 결합제의 양은 조성물의 약 2 내지 약 20 중량%, 더욱 바람직하게 약 3 내지 약 10 중량%, 더욱더 바람직하게 약 3 내지 약 6 중량%의 범위일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "생체이용률"은 활성 약물 성분 또는 치료 모이어티가 표준물 또는 대조군과 비교하여 투여된 투약 형태로부터 전신 순환으로 흡수되는 비율 및 크기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "캡슐"은 활성 성분을 포함하는 조성물을 유지하거나 함유하기 위한 메틸셀룰로오스, 폴리비닐 알코올, 또는 변성 젤라틴 또는 전분으로 제조된 특수 용기 또는 엔클로저(enclosure)를 지칭한다. 경질 쉘 캡슐은 통상적으로 비교적 높은 겔 강도 골격 및 돼지 피부 젤라틴의 블렌드로 제조된다. 캡슐 자체는 소량의 염료, 불투명화제, 가소제 및 보존제를 함유할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "착색제"는 조성물 또는 투약 형태에 착색을 제공하는 부형제를 지칭한다. 이러한 부형제는 식품 등급 염료 및 클레이 또는 알루미늄 옥사이드와 같은 예시적 흡착제 상에 흡착된 식품 등급 염료를 포함할 수 있다. 착색제의 양은 조성물의 약 0.1 내지 약 5 중량%, 바람직하게 약 0.1 내지 약 1%로 다양할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "희석제"는 대개 조성물 또는 투약 형태의 대부분을 구성하는 물질을 지칭한다. 예시적인 희석제는 당, 예를 들어, 락토오스, 수크로오스, 만니톨 및 소르비톨; 밀, 옥수수, 쌀 및 감자로부터 유래된 전분; 및 셀룰로오스, 예를 들어, 미정질 셀룰로오스를 포함한다. 조성물에서 희석제의 양은 전체 조성물의 약 10 내지 약 90 중량%, 바람직하게 약 25 내지 약 75 중량%, 더욱 바람직하게 약 30 내지 약 60 중량%, 더욱더 바람직하게 약 12 내지 약 60 중량%의 범위일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "붕해제"는 약제를 부수고(붕해하고) 방출시키는데 도움을 주기 위해 조성물에 첨가되는 물질을 지칭한다. 예시적인 붕해제는 전분; "냉수용해성" 개질된 전분, 예를 들어, 소듐 카복시메틸 전분; 천연 및 합성 검, 예를 들어, 로쿠스트 콩, 카라야, 구아, 트래거캔스 및 아가; 셀룰로오스 유도체, 예를 들어, 메틸셀룰로오스 및 소듐 카복시메틸셀룰로오스; 미정젤 셀룰로오스 및 가교된 미정질 셀룰로오스, 예를 들어, 소듐 크로스카르멜로오스; 알기네이트, 예를 들어, 알긴산 및 소듐 알기네이트; 클레이, 예를 들어, 벤토나이트; 및 포화제(effervescent mixture)를 포함한다. 조성물에서 붕해제의 양은 조성물의 약 2 내지 약 15 중량%, 더욱 바람직하게 약 4 내지 약 10 중량%의 범위일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "활주제"는 케이킹(caking)을 방지하고 과립화의 흐름 특성을 개선시켜 흐름이 매끄럽고 균일하게 하는 물질을 지칭한다. 예시적인 활주제는 실리콘 디옥사이드 및 탈크를 포함한다. 조성물에서 활주제의 양은 전체 조성물의 약 0.1 중량% 내지 약 5 중량%, 바람직하게 약 0.5 내지 약 2 중량%의 범위일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "윤활제"는 마찰 또는 마모를 감소시킴으로써 가압 후에 정제, 과립 등이 모울드 또는 다이로부터 방출되게 하기 위해 투약 형태에 첨가되는 물질을 지칭한다. 예시적인 윤활제는 금속성 스테아레이트, 예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 칼륨 스테아레이트; 스테아르산; 고융점 왁스; 및 수용성 윤활제, 예를 들어, 소듐 클로라이드, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 올레에이트, 폴리에틸렌 글리콜 및 d'l-루신을 포함한다. 윤활제는 이러한 것이 과립의 표면 상에 그리고 이들 사이에 그리고 정제 프레스의 부품에 존재하여야 하기 때문에, 대개 압축 전에 가장 마지막 단계에 첨가된다. 조성물에서 윤활제의 양은 조성물의 약 0.2 내지 약 5 중량%, 바람직하게 약 0.5 내지 약 2 중량%, 더욱 바람직하게 약 0.3 내지 약 1.5 중량%의 범위일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "경구 젤"은 친수성 반-고체 매트릭스에 분산되거나 가용화된 활성 성분을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "정제"는 적합한 희석제와 함께 활성 성분을 함유한 가압되거나 모울딩된 고체 투약 형태를 지칭한다. 정제는 혼합물의 압축, 또는 습식 과립화, 건식 과립화에 의해 얻어진 과립화, 또는 압밀(compaction)에 의해 제조될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "치료량"은 요망되는 생물학적 효과를 실현시키기 위해 필수적이거나 충분한 소분자 항암 화합물의 양을 지칭한다. 본원에 제공된 교시와 조합하여, 다양한 활성 화합물들 및 영향 인자, 예를 들어 효능, 상대 생체이용률, 환자 체중, 부작용의 강도 및 바람직한 투여 모드를 선택함으로써, 특정 피검체를 치료하기에 효과적이면서 실질적인 독성을 야기시키지 않는 효과적인 예방학적 또는 치료학적 치료 요법이 계획될 수 있다. 임의 특정 적용을 위한 유효량은 치료될 질환 또는 병태, 특정의 기술된 화합물, 피검체의 크기, 질환 또는 병태의 중증도와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 당업자는 과도한 실험을 필요로 하지 않으면서 특정의 기술된 화합물 및/또는 다른 치료제의 치료학적 유효량을 경험적으로 결정할 수 있다. 일반적으로, 일부 의학적 판단에 따라, 가장 높은 안전한 용량인 최대 용량이 사용되는 것이 바람직하다. 용어 "용량" 및 "투약량"은 본원에서 교호적으로 사용된다.
본원에 기술된 임의의 화합물에 대하여, 치료학적 유효량은 예비 시험관내 연구 및/또는 동물 모델로부터 초기에 결정될 수 있다. 치료학적 유효 용량은 또한, 일반 구조 (I) 및 구조 (Ia-f)의 화합물에 대한 인간 데이타로부터 결정될 수 있다. 적용된 용량은 투여된 화합물의 상대적 생체이용률 및 효능을 기반으로 하여 조정될 수 있다. 상술된 방법 및 다른 방법을 기반으로 하여 최대 효능을 달성하기 위해 용량을 조정하는 것은 당업자의 능력 내에 있다.
억제제의 제형은 약제학적으로 허용되는 용액에 투여될 수 있는데, 이는 관례대로 약제학적으로 허용되는 농도의 염, 완충제, 보존제, 혼화성 담체, 어주번트, 및 임의적으로 다른 치료제를 함유할 수 있다.
다른 구체예에 따르면, 기술된 발명의 조성물은 하나 이상의 추가의 혼화성 활성 성분을 추가로 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 "혼화성"은 이러한 조성물의 구성성분들이 일반적인 사용 조건 하에서 조성물의 효능을 실질적으로 감소시키는 상호작용이 존재하지 않는 방식으로 서로 조합될 수 있는 것을 의미한다. 본원에서 사용되는 구 "추가 활성 성분"은 약리학적, 또는 임의의 다른 유익한 활성을 나타내는, 기술된 조성물의 항암 화합물 이외의 제제를 지칭한다. 이러한 추가 치료제의 비제한적인 예는 5-플루오로우라실, 루코보린, 옥살리플라틴, 카페시타빈, 루코보린, 이리노테칸, 카페시타빈, 옥살리플라틴, 베바시쿠맙, 세툭시맙, 파니투무맙, 또는 이들의 조합물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
약제학적으로 허용되는 담체
본원에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 인간 또는 다른 척추동물에 투여하기 위해 예시되는 하나 이상의 혼화성 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "담체"는 적용을 촉진시키기 위해 활성 성분과 조합되는 천연 또는 합성의 유기 또는 무기 성분을 지칭한다. 일부 구체예에 따르면, 담체는 불활성이거나, 이는 약리학적 잇점을 지닐 수 있다.
약제 조성물의 성분들은 또한, 요망되는 약제학적 효능을 실질적으로 손상시키는 상호작용이 존재하지 않는 방식으로 혼합될 수 있다.
담체는 액체 또는 고체일 수 있고, 제공된 조성물의 활성물 및 다른성분들과 조합할 때, 요망되는 벌크, 농도, 등을 제공하기 위해 의도되는 투여의 계획된 방식에 따라 선택된다.
투여
치료법에서 사용하기 위하여, 치료량의 소분자 항암 화합물은 임의의 모드에 의해 피검체에 투여될 수 있다. 약제 조성물을 투여하는 것은 당업자에게 공지된 임의의 수단에 의해 달성될 수 있다. 투여 경로는 비경구, 경구, 협측, 국소, 흡입 또는 통기(insufflation)에 의해(즉, 입을 통해 또는 코를 통해), 또는 직장을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "비경구"는 예를 들어, 피하로(즉, 피부 아래에 주사), 근육내로(즉, 근육에 주사); 정맥내로(즉, 정맥에 주사), 척추강내로(즉, 척수 주변 공간에 주사), 흉골내 주사, 또는 주입 기술을 포함하는 주사에 의한 신체에 주입(즉, 주사에 의한 투여)을 지칭한다. 본 발명의 비경구적으로 투여된 조성물은 니들, 예를 들어, 수술용 니들을 이용하여 전달된다. 본원에서 사용되는 용어 "수술용 니들"은 선택된 해부학적 구조에 본 발명의 유체(즉, 흐를 수 있는) 조성물의 전달을 위해 구성된 임의의 니들을 지칭한다. 주사 가능한 제조물, 예를 들어, 멸균 주사 가능한 수성 또는 오일성 현탁액은 예시적인 분산제 또는 습윤제 또는 현탁화제를 사용하여 당업자에 따라 제형화될 수 있다.
본 발명의 조성물은 멸균 주사 가능한 수용액 또는 오일성 현탁액의 형태로 존재할 수 있다. 용액은 일반적으로, 둘 이상의 물질들의 균질한 혼합물로서 여겨지며, 이는 종종 액체이지만, 반드시 그러한 것은 아니다. 용액에서, 용질(또는 용해된 물질)의 분자는 용매 중에 균일하게 분포된다. 현탁액은 미분된 종들이 다른 종들과 조합되는 분산물로서, 전자는 미분되고 혼합되어 빠르게 침전되지 않는다. 본원에서 사용되는 용어 "분산물"은 2-상 시스템을 지칭하는 것으로서, 여기서 하나의 상은 제2, 또는 연속 상에 입자 또는 점적으로서 분포된다. 이러한 시스템에서, 분산된 상은 종종 불연속 또는 내부 상으로서 지칭되며, 연속 상은 외부 상 또는 분산 매질로 불리워진다. 예를 들어, 조악한 분산물에서, 입자 크기는 0.5 mm이다. 콜로이드성 분산물에서, 분산된 입자의 크기는 대략 1 nm 내지 0.5 mm의 범위이다. 분자 분산물은 분산된 상이 개개 분자로 이루어진 분산물이며, 분자가 콜로이드성 크기 미만인 경웅, 결과물은 참용액(true solution)이다.
기술된 발명의 조성물은 또한, 에멀젼 형태로 존재할 수 있다. 에멀젼은 두 개의 비혼화성 액체 담체들을 조합함으로써 제조된 2-상 시스템으로서, 이들 중 하나는 다른 것들 전반에 걸쳐 균일하게 제공되고 가장 큰 콜로이드성 입자와 동일하거나 보다 큰 직경을 갖는 구상체(globule)로 이루어진다. 구상체 크기는 중요하고, 시스템이 최대 안정성을 달성하도록 해야 한다. 대개, 2 상의 분리는 에멀젼화제인 제3 물질이 도입되지 않는 한 일어나지 않을 것이다. 이에 따라, 기본 에멀젼은 적어도 세 가지 성분, 즉 두 개의 비혼화성 액체 담체, 및 에멀젼화제, 뿐만 아니라 활성 성분을 함유한다. 대부분의 에멀젼은 수성상을 비수성상에 (또는 그 반대로) 도입한다. 그러나, 기본적으로, 비-수성 비혼화성 시스템 글리세린 및 올리브유의 비수성, 예를 들어, 음이온성 및 양이온성 계면활성제인 에멀젼을 제조하는 것이 가능하다. 이에 따라, 본 발명의 조성물은 수중유 에멀젼의 형태로 존재할 수 있다. 오일상은 식물성 오일, 예를 들어, 올리브유 또는 땅콩 기름, 또는 미네랄 오일, 예를 들어, 액체 파라핀, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 예시적인 에멀젼화제는 천연 발생 검, 예를 들어, 아카시아 검 또는 트래거캔스 검, 천연 발생 포스파티드, 예를 들어, 대두, 레시틴, 및 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예를 들어, 소르비탄 모노올레에이트, 및 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트일 수 있다.
일부 구체예에 따르면, 조성물은 식괴 주사(bolus injection) 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있다. 주사를 위한 제형은 보존제가 첨가된, 단위 투약 형태, 예를 들어, 앰플 또는 다중-용량 용기로 존재할 수 있다. 조성물은 오일성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있고, 제형화제, 예를 들어, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 비경구 투여를 위한 약제학적 제형은 수용성 형태의 활성 화합물의 수용액을 포함한다. 추가적으로, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 오일성 주사 현탁액으로서 제조될 수 있다. 예시적인 친지성 용매 또는 비히클은 지방 오일, 예를 들어, 참기름, 또는 합성 지방산 에스테르, 예를 들어, 에틸 올레에이트 또는 트리글리세라이드 또는 리포솜을 포함한다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예를 들어, 소듐 카복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨, 또는 덱스트란을 함유할 수 있다. 임의적으로, 현탁액은 또한, 예시적인 안정화제 또는 고도로 농축된 용액의 제조를 가능하게 하기 위해 화합물의 용해도를 증가시키는 제제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 화합물은 사용 전에 예시적인 비히클, 예를 들어, 멸균 발열원-부재 수로 구성화하기 위한 분말 형태로 존재한다.
약제 조성물은 또한, 예시적 고체 또는 겔 상 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 이러한 담체 또는 부형제의 예는 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당, 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 및 폴리머, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
예시적인 액체 또는 고체 약제 제조물 형태는 예를 들어, 마이크로캡슐화되고, 적절한 경우에, 하나 이상의 부형제와 함께, 껍질을 형성하거나, 미세 금 입자 상에 코팅되거나, 조직에 이식하기 위한 리포솜, 펠렛에 함유되거나, 조직에 문질러지는 물체 상에 건조된다. 이러한 약제 조성물은 또한, 과립, 비드, 분말, 정제, 코팅된 정제, (마이크로)캡슐, 좌제, 시럽, 에멀젼, 현탁액, 크림, 점적, 또는 활성 화합물의 지속 방출을 갖는 제조물의 형태로 존재할 수 있으며, 제조물에서 부형제 및 첨가제 및/또는 보조제, 예를 들어, 붕해제, 결합제, 코팅제, 팽윤제, 윤활제, 또는 가용화제는 통상적으로 상술된 바와 같이 사용된다. 약제 조성물은 다양한 약물 전달 시스템에서 사용하기 위해 예시적이다. 약물 전달을 위한 방법의 간단한 리뷰를 위하여 문헌[Langer 1990 Science 249, 1527-1533]을 참조하며, 이러한 문헌은 본원에 참고로 포함된다.
구조에 따라, 기술된 발명의 적어도 하나의 소분자 항암 화합물, 및 임의적으로 적어도 하나의 추가 활성제는 그 자체로(순수한 상태로), 또는 억제제의 구조에 따라, 약제학적으로 허용되는 염의 형태로 투여될 수 있다. 기술된 발명의 억제제는 유기산 또는 무기산, 또는 유기 염기 또는 무기 염기를 갖는 약제학적으로 허용되는 염을 형성할 수 있다. 약제에서 사용될 때, 염은 약제학적으로 허용 가능해야 하지만, 비-약제학적으로 허용되는 염은 통상적으로, 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 염은 하기 산들로부터 제조된 것을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 아세트산, 살리실산, p-톨루엔 설폰산, 타르타르산, 시트르산, 메탄 설폰산, 포름산, 말론산, 숙신산, 나프탈렌-2-설폰산, 및 벤젠 설폰산. 또한, 이러한 염은 카복실산 기의 알칼리 금속 또는 알칼리토 염, 예를 들어, 소듐, 칼륨, 또는 칼슘 염으로서 제조될 수 있다.
"약제학적으로 허용되는 염"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 등 없이 인간 및 하급 동물의 조직과 접촉 하여 사용하기 위해 예시적이고 적절한 이득/위험 비에 적합한 염을 의미한다. 약제학적으로 허용되는 염은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, P. H. Stahl, 등은 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" (Wiley VCH, Zurich, Switzerland: 2002)]에서 상세한 약제학적으로 허용되는 염을 기술하고 있다.
염은 기술된 발명 내에 기술된 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 인시튜로 제조될 수 있거나, 예시적인 유기산과 자유 염기 작용기를 반응시킴으로써 별도로 제조될 수 있다. 예시적인 산부가염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 비설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트(이세티오네이트), 락테이트, 말레에이트, 메탄설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 포스페이트, 글루타메이트, 비카보네이트, p-톨루엔설포네이트, 및 운데카노에이트. 또한, 염기성 질소-함유 기는 이러한 제제, 예를 들어, 저급 할라이드, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 디알킬 설페이트, 예를 들어, 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 설페이트; 장쇄 할라이드, 예를 들어, 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 아릴알킬 할라이드, 예를 들어, 벤질 및 펜에틸 브로마이드, 등으로 4차화될 수 있다. 이에 따라, 수용성 또는 수분산성 또는 유용성 또는 유분산성의 생성물이 얻어진다. 약제학적으로 허용되는 산부가염을 형성시키기 위해 사용될 수 있는 산의 예는 이러한 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산, 이러한 유기산, 예를 들어, 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산을 포함한다. 염기부가염은 카복실산-함유 모이어티를 예시적인 염기, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 금속 양이온의 하이드록사이드, 카보네이트, 또는 비카보네이트와 또는 암모니아 또는 유기 1차, 2차 또는 3차 아민과 반응시킴으로써 본 발명 내에 기술된 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 인시튜로 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속을 기반으로 한 양이온, 예를 들어, 리튬, 소듐, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄 염, 등, 및 비독성 4차 암모니아 및 암모니아, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디에틸아민, 에틸아민, 등을 포함하는 아민 양이온을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 염기부가염의 형성을 위해 유용한 다른 예시적인 유기 아민은 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 등을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 염은 또한, 충분한 염기성 화합물, 예를 들어, 아민을 예시적인 산과 반응시켜 생리학적으로 허용되는 음이온을 제공함으로써 당해 분야에 널리 공지된 표준 절차를 이용하여 얻어질 수 있다. 카복실산의 알칼리 금속(예를 들어, 소듐, 칼륨 또는 리튬) 또는 알칼리 토금속(예를 들어, 칼슘 또는 마그네슘) 염이 또한 제조될 수 있다.
제형은 통상적으로 단위 투약 형태로 존재할 수 있고, 제학 분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 모든 방법은 조성물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물("활성 화합물")을 하나 이상의 보조제를 구성하는 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성제를 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 모두와 균일하고 긴밀하게 회합시키고, 필요한 경우에 생성물을 요망되는 제형으로 형상화시킴으로써 제조된다.
약제학적 제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 에스테르, 염, 용매화물 또는 전구약물은 요망되는 작용을 손상시키지 않는 다른 활성 물질과, 또는 요망되는 작용을 보충하는 물질과 혼합될 수 있다. 비경구, 피내(intradermal), 피하, 척추 강내, 또는 국소 적용을 위해 사용되는 용액 또는 현탁액은 예를 들어, 하기 성분을 포함할 수 있지만, 이로 제한되지 않는다: 멸균 희석제, 예를 들어, 주사용 물, 염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항박테리아제, 예를 들어, 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산 또는 소듐 비설파이트; 킬레이트제, 예를 들어, 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예를 들어, 아세테이트, 시트레이트, 또는 포스페이트, 및 긴장성(tonicity) 조절제, 예를 들어, 소듐 클로라이드 또는 덱스트로즈. 비경구 제조물은 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 1회용 시린지 또는 다중 용량 바이알에 둘러싸여질 수 있다. 정맥내로 투여되는 경우에, 특정 담체는 생리학적 염수 또는 포스페이트 완충 염수(PBS)이다.
비경구 주사를 위한 약제 조성물은 약제학적으로 허용되는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 및 멸균 주사 가능한 용액 또는 분산액으로 재구성하기 위한 멸균 분말을 포함한다. 예시적인 수성 및 비수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예는 물, 에탄올, 폴리올(프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 등), 이들의 예시적인 혼합물, 식물성 오일(예를 들어, 올리브유), 및 주사 가능한 유기 에스테르, 예를 들어, 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산물의 경우에 요망되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이러한 조성물은 또한, 보존제, 습윤제, 에멀젼화제, 및 분산화제를 포함하는 어주번트를 함유할 수 있다. 미생물의 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 등에 의해 보장될 수 있다. 또한, 등장제, 예를 들어, 당, 소듐 클로라이드, 등을 포함하는 것이 요망될 수 있다. 주사 가능한 약제학적 형태의 지속적인 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 이루어질 수 있다.
현탁액은 활성 화합물 이외에, 현탁화제, 예를 들어, 에톡실화된 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미정질 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가, 트래거캔스, 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
기술된 발명의 조성물(들)을 포함하는 치료제(들)는 입자로 제공될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "입자"는 전체적으로 또는 일부 본원에 기술된 바와 같은 조성물 또는 다른 치료제(들)를 함유할 수 있는 나노 또는 마이크로입자(또는 일부 경우에, 보다 큰 입자)를 지칭한다. 입자는 코팅에 의해 둘러싸여진 코어에 치료제(들)를 함유할 수 있다. 치료제(들)는 또한, 입자 전반에 걸쳐 분산될 수 있다. 치료제(들)는 또한, 입자에 흡착될 수 있다. 입자는 0차 방출, 1차 방출, 2차 방출, 지연 방출, 지속 방출, 속방출, 등, 및 이들의 임의의 조합을 포함하는 임의의 차수의 방출 동력학을 가질 수 있다. 입자는 치료제(들) 이외에, 침식성, 비침식성, 생분해성 또는 비생분해성 물질 또는 이들의 조합을 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 제약 및 의약의 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 물질을 포함할 수 있다. 입자는 용액 또는 반-고체 상태로 조성물을 함유하는 마이크로캡슐일 수 있다. 입자는 실제로 임의 형상을 가질 수 있다.
비-생분해성 및 생분해성 폴리머 물질 둘 모두는 치료제(들)를 전달하기 위해 입자이 제작에서 사용될 수 있다. 이러한 폴리머는 천연 또는 합성 폴리머일 수 있다. 폴리머는 방출이 요망되는 기간을 기초로 하여 선택된다. 예를 들어, 생접착제 폴리머는 문헌 [Sawhney et al in Macromolecules (1993) 26, 581-587]에 기술된 바와 같은 생체침식성 하이드로겔을 포함하며, 이러한 문헌의 교시는 본원에 참고로 포함된다. 이러한 것은 폴리히알루론산, 카제인, 젤라틴, 글루틴, 폴리언하이드라이드, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 및 폴리(옥타데실 아크릴레이트)를 포함한다.
치료제(들)는 제어 방출 시스템에 함유될 수 있다. 약물의 효과를 지속시키기 위하여, 종종 피하, 척추 강내 또는 근육내 주사로부터 약물의 흡수를 늦추는 것이 요망된다. 이는 낮은 수용해도를 갖는 결정질 또는 비정질 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이에 따라, 약물의 흡수율은 또한, 결정 크기 및 결정질 형태에 따를 수 있는 이의 용해율에 따른다. 용어 "제어된 방출"은 제형으로부터의 약물 방출의 방식 및 프로파일이 제어되는 임의의 약물-함유 제형을 지칭하기 위해 의도된다. 이는 속방출 제형 뿐만 아니라 비-속방출 제형을 지칭하는데, 비-속방출 제형은 지속 방출(sustained release) 및 지연 방출 제형을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 용어 "지속 방출"(또는 "연장 방출"로서 지칭됨)은 본원에서 이의 통상적인 의미로 연장된 기간에 걸쳐 약물의 점진적인 방출을 제공하고 연장된 기간에 걸쳐 약물의 실질적으로 일정한 혈액 수준을 야기시킬 수 있는 약물 제형을 지칭하기 위하여 사용된다. 대안적으로, 비경구적으로 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 오일 비히클에 약물을 용해시키거나 현탁시킴으로써 달성된다. 용어 "지연 방출"은 본원에서 이의 통상적인 의미에서 제형의 투여와 이로부터의 약물의 방출 간에 시간 지연이 존재하는 약물 제형을 지칭하기 위해 사용된다. "지연 방출"은 연장된 기간에 걸쳐 약물의 점진적인 방출을 수반할 수 있거나 수반하지 않을 수 있고, 이에 따라, "지속 방출"할 수 있거나 그러하지 않을 수 있다.
일부 구체예에 따르면, 장기 지속 방출 임플란트의 사용은 만성 병태의 치료를 위해 요망될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "장기" 방출은 임플란트가 적어도 7일, 바람직하게 약 30일 내지 약 60일 동안 치료학적 수준의 활성 성분을 전달하도록 구성되고 배열되는 것을 의미한다. 장기 지속 방출 임플란트는 당업자에게 널리 공지된 것으로서, 상술된 방출 시스템들 중 일부를 포함한다.
주사 가능한 데폿 형태는 폴리락티드-폴리글리콜라이드와 같은 생분해성 폴리머 중의 기술된 억제제의 마이크로캡슐화된 매트릭스를 형성시킴으로써 형성된다. 폴리머에 대한 억제제의 비율 및 사용되는 특정 폴리머의 특성에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 이러한 지속성 제형은 적절한 폴리머 또는 소수성 물질(예를 들어, 허용 가능한 오일 중의 에멀젼으로서)로 또는 이온 교환 수지로서, 또는 난용성 유도체로서, 예를 들어 난용성 염으로서 제형화될 수 있다. 다른 생분해성 폴리머의 예는 폴리(오르쏘에스테르) 및 폴리(언하이드라이드)를 포함한다. 데폿 주사 가능한 제형은 또한, 신체 조직과 양립 가능한 리포솜 또는 마이크로에멀젼에 기술된 발명의 억제제를 가둠으로써 제조된다.
주사 가능한 제형은 예를 들어, 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 멸균수 또는 다른 멸균 주사 가능한 매질에 용해되거나 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물 형태의 살균제(sterilizing agent)를 도입함으로써 멸균될 수 있다. 주사 가능한 제조물, 예를 들어, 멸균 주사 가능한 수성 또는 오일성 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 공지된 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사 가능한 제조물은 또한, 비독성, 비경구 허용 가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사 가능한 용액, 현탁액 또는 에멀젼, 예를 들어, 1,3-부탄디올 중의 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액, U.S.P. 및 등장 소듐 클로라이드 용액이 있다. 또한, 멸균, 고정 오일이 통상적으로, 용매 또는 현탁화 매질로서 사용된다. 이러한 목적을 위하여, 합성 모노- 또는 디글리세라이드를 포함한 임의의 블랜드 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 지방산, 예를 들어, 올레산이 주사 가능한 물질의 제조에서 사용된다.
비경구(피하, 피내, 근육내, 정맥내, 척추 강내 및 관절내) 투여를 위한 제형은 항산화제, 완충제, 세균 발육 저지제 및 의도된 수용자의 혈액에 제형 등장성을 제공하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 주사 용액; 및 현탁화제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 포함한다. 제형은 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를 들어, 시일링된 앰플 및 바이알에 존재할 수 있고, 사용 직전에 단지 멸균 액체 담체, 예를 들어, 염수, 주사용 물의 첨가를 필요로 하는 냉동건조된(동결건조된) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 전술된 부류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
예시적인 완충제는 아세트산 및 염(1 내지 2% w/v); 시트르산 및 염(1 내지 3% w/v); 붕산 및 염(0.5 내지 2.5% w/v); 및 인산 및 염(0.8 내지 2% w/v)을 포함한다. 예시적인 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드(0.003 내지 0.03% w/v); 클로로부탄올(0.3 내지 0.9% w/v); 파라벤(0.01 내지 0.25% w/v) 및 티메로살(0.004 내지 0.02% w/v)을 포함한다.
정제 또는 캡슐 형태의 경구 투여를 위하여, 활성 약물 성분은 임의의 경구 비-독성의 약리학적으로 허용되는 불활성 담체, 예를 들어, 락토오스, 전분, 수크로오스, 셀룰로오스, 마그네슘 스테아레이트, 디칼슘 포스페이트, 칼슘 설페이트, 탈크, 만니톨, 에틸 알코올(액체 형태) 등과 조합될 수 있다. 또한, 요망되거나 필요한 경우에, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 착색제가 또한, 혼합물에 도입될 수 있다. 분말 및 정제는 약 5 내지 약 95%의 기술된 조성물을 포함할 수 있다. 예시적인 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당, 옥수수 감미제, 천연 및 합성 검, 예를 들어, 아카시아, 소듐 알기네이트, 카복시메틸셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜 및 왁스를 포함한다. 윤활제 중에, 이러한 투약 형태에서 붕산, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드, 등을 사용하는 것이 언급될 수 있다. 붕해제는 전분, 메틸셀룰로오스, 구아 검, 등을 포함한다. 감미제 및 착향제 및 보존제가 또한, 적절한 경우 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한, 시럽 및 엘릭시르로서 제형화될 수 있다. 시럽 및 엘릭시르는 감미제, 예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 또는 수크로오스로 제형화될 수 있다. 이러한 제형은 또한, 완화제, 보존제, 및 착향제 및 착색제를 함유할 수 있다. 완화제는 주로 특히 점막 또는 상처를 입은 조직의 자극을 완화를 위해 사용되는 보호제이다. 다수의 화학적 물질은 완화제 성질을 갖는다. 이러한 물질은 알기네이트, 점액질, 검, 덱스트린, 전분, 특정 당, 및 폴리머 다가 글리콜을 포함한다. 다른 것은 아카시아, 아가, 벤조인, 카보머, 젤라틴, 글리세린, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 프로필렌 글리콜, 소듐 알기네이트, 트래거캔스, 하이드로겔, 등을 포함한다.
협측 투여를 위하여, 본 발명의 조성물은 이러한 경로를 위한 통상적인 방식으로 제형화된 정제 또는 로젠지의 형태를 가질 수 있다.
액체 형태 제조물은 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함한다.
액체 형태 제조물은 또한, 비강내 투여를 위한 용액을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 흡입 또는 통기(insufflation)(입을 통해 또는 코를 통해)에 의한 전달을 위한 분산성 건조 분말의 형태를 가질 수 있다. 건조 분말 조성물은 당해 분야에 공지된 공정들, 예를 들어, 국제특허공개번호 WO 91/16038호 및 미국특허번호 제6,921,527호에 기술된 바와 같이, 동결건조 및 제트 밀링에 의해 제조될 수 있으며, 이러한 문헌의 내용은 참고로 포함된다. 본 발명의 조성물은 단위 투약 치료로 피검체에 제공하기에 충분한 양으로 예시적인 투약 용기 내에 배치된다. 투약 용기는 에어로졸을 형성시키기 위해 가스 스트림에 분산시키고 이후에 치료를 필요로 하는 피검체에 의한 후속 흡입을 위해 부착된 마우스피스를 갖는 챔버에 이에 따라 형성된 에어로졸을 포집함으로써 건조 분말 조성물의 에어로졸화를 가능하게 하기 위해 예시적인 흡입 디바이스 내에 맞는 것이다. 이러한 투약 용기는 건조 분말 조성물을 분산시키기 위해 가스의 스트림(예를 들어, 공기)을 용기로 유도할 수 있는 제거 가능한 부분을 갖는 젤라틴 또는 플라스틱 캡슐과 같은 당해 분야에 공지된 조성물을 둘러싸는 임의의 용기를 포함한다. 이러한 용기는 미국특허번호 제4,227,522호; 미국특허번호 제4,192,309호; 및 미국특허번호 제4,105,027호에 기술된 것에 의해 예시된다. 예시적인 용기는 또한, 글락소(Glaxo)의 Ventolin® Rotohaler 상표 분말 흡입기 또는 피손(Fison)의 Spinhaler® 상표 분말 흡입기와 함께 사용되는 것을 포함한다. 우수한 수분 장벽을 제공하는 다른 예시적 단위-용량 용기는 알루미늄 호일 플라스틱 라미네이트로부터 형성된다. 약제-기반 분말은 형성 가능한 호일에 저압으로 중량으로 또는 부피로 채워지고, 커버링 호일-플라스틱 라미네이트로 기밀 시일링된다. 분말 흡입 디바이스와 함께 사용하기 위한 이러한 용기는 미국특허번호 제4,778,054호에 기술되어 있고, 글락소의 Diskhaler®(미국특허번호 제4,627,432호; 제4,811,731호; 및 제5,035,237호)와 함께 사용된다. 이러한 문헌 각각은 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 조성물은 조성물의 직장 투여를 위한 좌제 형태로 존재할 수 있다. 본원에서 사용되는 "직장" 또는 "직장으로"는 직장을 통해 신체로의 도입을 지칭하는 것으로서, 여기서 흡수는 직장의 벽을 통해 일어난다. 이러한 조성물은 일반적인 온도에서 고체이지만 직장 온도에서 액체이고 이에 따라 직장에서 용융하고 약물을 방출시키는 예시적인 비자극 부형제, 예를 들어, 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜과 약물을 혼합함으로써 제조될 수 있다. 좌제로서 제형화될 때, 본 발명의 조성물은 트리글리세라이드와 같은 전통적인 결합제 및 담체로 제형화될 수 있다.
용어 "국소적"은 적용 포인트에, 또는 바로 아래에, 본 발명의 투여를 지칭한다. 구 "국소적으로 적용하는"은 상피 표면을 포함하는 하나 이상의 표면(들) 상에 적용을 기술한다. 국소 투여가 경피 투여와는 상반되게, 일반적으로 전신 효과 보다 오히려 국소 효과를 제공하지만, 달리 기술하거나 암시하지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 국소 투여 및 경피 투여는 교호적으로 사용된다. 이러한 적용의 목적을 위하여, 국소 적용은 구강세척제 및 가글을 포함할 것이다.
국소 투여는 또한, 경피 투여의 사용, 예를 들어, 당해 분야에 널리 공지된 기술 및 절차에 따라 제조된 경피 패치 또는 이온도입 디바이스(iontophoresis device)를 포함할 수 있다. 용어 "경피 전달 시스템," "경피 패치" 또는 "패치"는 전신 순환을 경우한 분포를 위해 이용 가능한 피부를 통해 투약 형태로부터의 통로에 의해 시간 지연 용량의 약물(들)을 전달하기 위해 피부 상에 배치된 접착 시스템을 지칭한다. 경피 패치는 멀미용 스코폴라민, 협심증의 치료를 위한 니트로글리세린, 고혈압을 위한 클로니딘, 폐경기후 증상용 에스트라디올, 및 금연을 위한 니코틴을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 매우 다양한 약제를 전달하기 위해 사용되는 널리 허용되는 기술이다.
본 발명에서 사용하기 위한 예시적인 패치는 (1) 매트릭스 패치; (2) 저장소 패치; (3) 다중-라미네이트 약물-인-접착제 패치; 및 (4) 모놀리식 약물-인-접착제 패치를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다[TRANSDERMAL AND TOPICAL DRUG DELIVERY SYSTEMS, pp. 249-297 (Tapash K. Ghosh et al. eds., 1997), 이러한 문헌은 본원에 참고로 포함됨]. 이러한 패치는 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 일반적으로 상업적으로 입수 가능하다.
달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명에 속하는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 균등한 임의의 방법 및 물질이 또한 기술된 발명의 실행 또는 교시에서 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 기술된다. 본원에 언급된 모든 공개문은 공개문에 인용되는 것과 관련하여 방법 및/또는 물질을 기재하고 기술하기 위해 본원에 참고로 포함된다.
소정 범위의 수치가 제공되는 경우에, 문맥이 달리 명확하게 명시하지 않는 한 하한치의 10/1 단위까지의 각 사이 값, 그러한 범위의 상한치와 하한치 사이 및 그러한 기술된 범위에서 임의의 다른 기술되거나 사이에 있는 값이 본 발명 내에 포함되는 것으로 이해된다. 보다 작은 범위에 독립적으로 포함될 수 있는 이러한 보다 작은 범위의 상한치 및 하한치는 또한 기술된 범위에서 임의의 상세하게 배제된 한계를 조건으로 본 발명 내에 포함된다. 기술된 범위가 한계치들 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우에, 이러한 포함된 한계치 모두를 배제하는 범위가 또한 본 발명에 포함된다.
본원에 사용되고 첨부된 청구항들에서, 단수 용어가 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수의 대상을 포함한다는 것이 주지되어야 한다. 본원에서 사용되는 모든 기술용어 및 과학용어는 동일한 의미를 갖는다.
본원에서 논의되는 공개문은 오로지 이들의 설명을 위하여 본 출원의 출원일 이전에 제공된다. 본원에서는 기술된 발명이 종래 발명에 의해 이러한 공개문을 선행할 권리가 있지 않는다는 것을 인정하는 것으로 해석되지 않을 것이다. 또한, 공개문 제공 일자는 독립적으로 확인되어야 할 수 있는 실제 공개일과 상이할 수 있다.
실시예
하기 실시예는 기술된 발명을 제조하고 사용하는 방법의 완전한 내용 및 설명을 당업자에게 제공하기 위해 기술되고, 본 발명자들이 본 발명으로서 여기는 범위를 제한하도록 의도되지 않고, 하기 실험이 수행된 모든 실험 또는 유일한 실험인 것을 나타내는 것으로 의도되지 않는다. 사용된 수(예를 들어, 양, 온도, 등)와 관련하여 정확성을 확보하기 위해 노력을 하였으나, 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 할 것이다. 달리 명시하지 않는 한, 부는 중량 기준이며, 분자량은 중량평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이며, 압력은 대기압이거나 대기압 부근이다.
실시예 1
무한증식 인간 결장 상피 세포(HCEC)주를 외인성으로 도입된 텔로머라제 및 cdk4를 사용하여 형성하였다[Fearon, E.R. & Vogelstein, B. A genetic model for colorectal tumorigenesis. Cell 61, 759-767 (1990)]. 이러한 세포는 비-변형된, 핵형 이배체로서, 다분화능 특징을 갖는다. 간엽 공급자층의 부재 하에 matrigel®에 배치시킬 때, 개개 세포는 분화하고, 성숙한 상피와 관련된 마커를 나타내는 서브세트의 세포를 갖는 자가-조직화, 소낭선-유사 구조를 형성한다.
결장 조직
본 연구는 달라스 VA 의료 센터의 기관감사위원회(institutional review board)에 의해 승인된 것이다. 내시경으로 식별 가능한 선종을 포함하지 않는 조직으로부터의 결장 생검(20 내지 30개의 샘플, ~0.5 cm3)을 사전 동의를 얻은 후에 일반적인 스크리닝 결장경 검사를 수행하는 환자로부터 수득하였다.
성장 배지 및 조직 배양 기질
세포를 EGF(25 ng/mL)(Peprotech, Inc, Rocky Hill, NJ), 하이드로코르티손(1 ㎍/mL), 인슐린(10 ㎍/mL), 트랜스페린(2 ㎍/mL), 소듐 셀레나이트(5 나노몰)(모두는 Sigma(St Louis, MO)로부터 획득), 2% 코스믹 송아지 혈청(cosmic calf serum)(Hyclone), 및 겐타마이신 설페이트(50 ㎍/ml)(Gemini Bio-Products, West Sacramento, CA)이 보충된 기저 DMEM, MEM 또는 RPMI 배지(Gibco®, Hyclone, Logan, UT) 상에서 성장시켰다. 세포를 프리마리아(primaria) 플라스크(BD Biosciences, San Jose, CA)에서 배양시키고, 2% 내지 5% 산소 및 7% 이산화탄소에서 성장시켰다. HCT 116, BJ 인간 피부 섬유아세포, Hela 세포, 및 무한증식 인간 결장 섬유아세포(C26Ci, 집단 배가(population doubling) 150)를 10% 코스믹 송아지 혈청(Hyclone)이 보충된 DMEM, MEM 또는 RPMI 배지(Gibco®, Hyclone, Logan, UT)에서 유지시켰다. C26Ci 세포를 2시간 동안 10 ㎍/mL 미토마이신 c(Sigma)로 처리하고, 제1 계대배양까지 초기 낭와 부착의 포인트로부터 공급자층으로서 사용하였다.
분열된 PARP 검출 및 카파제 3 활성 검정을 위하여, 세포를 양성 대조군으로서 단독으로 6시간 동안 12.5uM의 SP600125(Millipore) 또는 5uM의 독소루비신(Sigma)의 존재 또는 부재 하에, 72시간 동안 2.5uM의 TASIN-1로 처리하였다. 유사분열 동기화(mitotic synchronization)를 위하여, 세포를 18시간 동안 선택적 cdk1 소분자 억제제, RO-3306(9uM)로의 처리에 의해 G2/M 경계에서 동기화하였다[Kim, Hyun S. et al. Systematic Identification of Molecular Subtype-Selective Vulnerabilities in Non-Small-Cell Lung cancer. Cell 155, 552-566 (2013)].
플라스미드
CDK4, hTERT, pSRZ-shTP53 및 pBABE-hyg-KRASV12는 Vassilev, L.T.에 기술되어 있고, 이에 의해 이는 본원에 참고로 포함된다[Vassilev, L.T. Cell cycle synchronization at the G2/M phase border by reversible inhibition of CDK1. Cell cycle 5, 2555-2556 (2006)].
세포 단리 및 불멸화
결장 생섬을 차가운 DMEM, MEM 또는 RPMI 배지(Gibco®, Hyclone, Logan, UT)에 함침시키고, 결장경 검사 후 40 내지 60분 내에 실험실에 가져오고, 항생제/항진균 용액을 함유한 포스페이트-완충된 염수(Gemini Bio-Products)로 충분히 세척하고, 여러 개의 작은 조각(크기 ~ 1mm)으로 절단하였다. 콜라게나제 150 u/mL(Worthington Biochemical, Lakewood, NJ) 및 디스파제 40 ㎍/ml(Roche, Germany)로의 효소적 소화 후에, 낭와를 2% 혈청을 포함한 성장 보충물을 함유한 DMEM, MEM 또는 RPMI 배지(Gibco®, Hyclone, Logan, UT)에 다시 현탁시키고, 50% 콘플루언트 결장 섬유아세포 공급자층으로 이미 48시간 전에 시딩된 프리마리아 배양 디시에 플레이팅하였다. 부착 후 첫음 10시간 동안, 세포를 3일 마다 공급하여, 혈청을 각 1% 변화율로 0%까지 감소시켜 섬유아세포와 같은 원치않는 세포의 성장을 억제하였다. 작은 네스트(nest)의 확장하는 상피 세포를 용이하게 관찰한 직후에, 세포를 전술한 바와 같이 레트로바이러스 CDK4 및 hTERT로 변환시켰다. 다수의 큐브형을 나타내는 세포 네스트가 관찰되었을 때(초기 낭와 시딩 후 3 내지 4주), 세포를 프리마리아 플라스크 상에 다시 시딩하였다. 공급자층은 제1 계대 배양 후에 일반적일 조직 배양을 위해 요구되거나 사용되지 않았다.
APC 녹다운 실험
정상 결장 생검으로부터 단리된 HCEC를 CDK4 및 hTERT의 연속적인 감염 이후 개개 항생제, 즉 G418(250 ㎍/mL) 및 블라스토시딘(2.5 ㎍/mL)으로의 선택에 의해 고정화하였다. p53에 대한 shRNA에 레트로바이러스를 주입하고, p53 녹다운 효율을 웨스턴 분석에 의해 확인하였다. 인간 결장암 세포주(HCT116, DLD-1, RKO) 및 바이러스-형성 세포주(293FT, Phoenix A)를 10% 혈청이 보충된 기저 배지에서 배양하였다. 모든 세포주의 일치성을 DNA 핑거프린팅에 의해 확인하였다. 1 ㎍의 헬퍼 플라스미드(0.4 ㎍ pMD2G 및 0.6 ㎍ psPAX2)와 함께 1 ㎍의 shRNA를 Polyjet 시약(SignaGen)으로 293FT 세포에 트랜스펙션시켰다. 바이러스 상청액을 트랜스펙션 후 48시간 수집하고, 0.45-㎛ 필터를 통해 세정하였다. 세포를 대략 1의 감염 다중도(MOI)에서 4 ㎍/mL 폴리브렌(Sigma)을 함유한 바이러스 상청액으로 감염시켰다. 문헌[Eskiocak U, Kim SB, Ly P, Roig AI, Biglione S, Komurov K, Cornelius C, Wright WE, White MA, Shay JW. Functional parsing of driver mutations in the colorecta cancer genome reveals numerous suppressors of anchorage-independent growth. Cancer Res 2011;71:4359-65]에 기술된 바와 같이, 성공적으로 감염된 세포를 3일 동안 1 ㎍/mL 푸로마이신으로 선택하였으며, 이러한 문헌은 본원에 참고로 포함된다.
웨스턴 블롯 분석
10% SDS-PAGE 통한 전기영동 후에, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스(NC) 멤브레인 상으로 이동시켰다(Pierce, Rockford, USA). 멤브레인을 4℃에서 밤새 폴리(ADP-리보스) 폴리머라제(PARP)(Millipore, Cell Signaling Technology, Santa Cruz, etc.), 시토크롬 C(Abcam, Cell Signaling Technology, Santa Cruz, etc.), 전압-의존성 음이온-선택적 채널 단백질-1(VDAC)(Cell Signaling Technology, Abcam, Santa Cruz, etc.), 포스포-JNK(Cell Signaling), JNK(Cell Signaling), 또는 액틴(Abcam, Santa Cruz, Cell Signaling, etc.)에 대한 1차 항체로 인큐베이션하였다. 세척 후에, 멤브레인을 화학발광에 의해 시각화하기 전에 각 상응하는 2차 항체로 인큐베이션하였다. 마우스 모노클론 GAPDH(Promab, USA, 1:1000)를 대조군을 위한 1차 항체로서 사용하였다.
카파제 3/7 활성
세포를 비히클 대조군 또는 2.5 uM의 TASin-1로 72시간 동안 처리하고, 96-웰 플레이트(Promega)에서 카스파제-Glo 3/7 검정으로 처리하였다. 상세하게, 세포를 함유한 96-웰 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내고, 실온에서 평형을 유지시켰다. 재구성화된 카스파제-Glo 시약을 또한 실온에서 평형을 유지시켰다. 세포 배양 배지의 부피와 동일한 부피의 카스파제-Glo 시약을 각 웰에 첨가하였다. 혼합물을 30초 동안 300 내지 500 rpm에서 플레이트 쉐이커를 이용하여 온화하게 혼합하고, 이후에 실온에서 30분 내지 3시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 베리타스(Veritas)에 삽입하여 검정을 개시하였다. RLU 수치를 VeritasTM에 의해 측정하였(Promega; A Veritas Microplate Luminometer Method for Prometa's 카스파제-GloTM 3/7 assay).
면역세포화학
세포를 3.7% 파라포름알데하이드를 사용하여 10분 동안 고정시키고, PBS 중 0.5% Triton X-100와 함께 5분 동안 투과시키고, 블로킹 용액(0.1% Triton X-100을 함유한 PBS 중의 10% 염소 혈청 및 3% BSA)과 함께 60분 동안 인큐베이션하였다. 이후에, 세포를 블로킹 용액에 희석된 1차 항체와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 하기 항체를 사용하였다: 항-HURP(Santa Cruz Biotechnology), 항-α-튜불린(Cell Signaling), 항-활성 β-카테닌(EMD Millipore). Alexa-568 또는 Alexa-488(Invitrogen)로 표지된 2차 항체를 사용하여 인큐베이션한 후에, 슬라이드를 Mowiol 4-88(Calbiochem) 용액과 함께 마운팅하였다[Eskiocak, U. et al. Functional parsing of driver mutations in the colorectal cancer genome reveals numerous suppressors of anchorage-independent growth. Cancer Res 71, 4359-4365 (2011)]. 형광 현미경 Axiovert 200M(Carl Zeiss)으로 세포를 관찰하였다. 핵을 DAPI(Vectashield, Vector Laboratories)로 대비염색하였다. 중기 플레이트 폭, 방추 폭 및 세포 폭을 ImageJ 소프트웨어에서 라인 측정 툴을 이용하여 결정하였다.
수퍼톱플래시 검정( SuperTopFlash Assay)
DLD1 세포를 CMV 프로모터에 의해 작동하는 개똥벌레 루시페라제(FL) 및 가우시아 루시페라제(GL) 단백질을 엔코딩하는 DNA 작제물로 일시적으로 트랜스펙션시키고, 18시간 동안 DMSO 또는 TASIN-1과 함께 인큐베이션하고, 이후에 각각 24시간 후에 GL 및 FL 활성에 대해 분석하였다[Longin, A., Souchier, C., Ffrench, M. & Bryon, P.A. Comparison of anti-fading agents used in fluorescence microscopy: image analysis and laser confocal microscopy study. J Histochem Cytochem 41, 1833-1840 (1993)].
정량적 역전사 - PCR ( qRT - PCR )
전체 RNA를 제조업체 프로토콜에 따라 RNeasy Plus Universal Mini 키트(Qiagen)를 이용하여 마우스 조직으로부터 단리하였다. 이후에, 1 ㎍을 제1 가닥 cDNA 합성 키트(Roche)를 이용하여 cDNA로 전환시켰다. 실시간 정량적 PCR 반응을 Ssofast Master Mix(Biorad)로 세배로 설정하고, LightCycler® 480(Roche)에서 진행시켰다. 돌연변이 Kras의 검출을 위한 제한 분절 길이 다형성(RFLP) 분석을 사토 등(Sato et al.)에 의해 수행되었으며, 이는 본원에 참고로 포함된다[Sato, M. et al. Multiple oncogenic changes (K-RAS(V12), p53 knockdown, mutant EGFRs, p16 bypass, telomerase) are not sufficient to confer a full malignant phenotype on human bronchial epithelial cells. Cancer Res 66, 2116-2128 (2006)]. 본 연구에서 사용되는 모든 프라이머(Sigma)는 데이타 표 3에 나열되어 있다.
데이타 표 3. 염증 유전자에 대한 qPCR 프라이머 세트
Figure 112016034146661-pct00016
데이타 표 2. APC에 대한 shRNA 서열
Figure 112016034146661-pct00017
생체내 약물동력학 분석
암컷 CD-1 마우스를 5% DMSO, 5% 크레모포어 EL, 및 90% D5W pH 7.4로서 제형화된 10 mg/kg TASIN-1, 0.2 mL/마우스로 IP 주사하였다. 전혈을 수확하였다. 혈장을 표준 원심분리에서 10,000 rpm에서 10분 동안 ACD 처리된 혈액의 원심분리에 의해 전혈로부터 처리하였다. 내용물을 갖는 큰창자를 수확하고, 큰창자 내용물을 추가 분석을 위해 제거하였다. 모든 수확된 조직을 계량하고, 액체 질소에서 급속 냉동하였다. 창자 내용물을 다지고 4배 부피의 PBS에서 균질화함으로써 큰창자 내용물(LIC) 균질액을 제조하였다. 100 마이크로리터 LIC를 0.15% 포름산 및 37.5 ng/mL IS(IS 최종 농도 = 25 ng/ml)를 함유한 200 마이크로리터의 아세토니트릴과 혼합하였다. 샘플을 15초 동안 완류시키고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션하고, 표준 마이크로원심분리에서 2x 13,200 rpm에서 회전시켰다. 이후에, 상청액을 LC/MS/MS에 의해 분석하였다. 비-처리된 마우스를 사용하여 표준물 및 QC를 제조하기 위한 블랭크 균질액을 위한 조직을 수집하였다.
조직 염색
파라핀 섹션을 위한 헤마톡실린 및 에오신 염색 프로토콜
염색 전에, 슬라이드를 최소 70℃의 온도에서 적어도 20분 동안 베이킹시켜 염색 절차 동안 섹션들의 탈착을 억제하였다. 섹션을 Weigert의 헤마톡실린, 작업 용액에서 6분 동안 염색하고, 배수시켰다. 슬라이드를 각각 3회의 빠른 딥(dip)으로, 2회의 변화를 이용하여 70% 산-에탄올, pH 2.5에서 탈수시켰다. 슬라이드를 각각 3회의 빠른 딥(dip)으로, 2회의 변화를 이용하여 70% Acid-DI, pH 2.5에서 탈수시켰다. 슬라이드를 흐르는 수돗물에서 15분 동안 세척하고, 과량의 물을 슬라이드로부터 배수시키고, 이후에 작업 에오신-플록신 용액에서 2분 동안 염색하고, 배수시켰다. 슬라이드를 각각 30초에 2회의 변화를 이용하여 95% 에탄올에서 탈수시키고, 3회의 변화를 이용하여, 각각 3회의 빠른 딥으로 100% 에탄올에서 완전히 탈수시키고, Histoclear(National Diagnosics; AGTC Bioproducts, etc.)에서 2회의 변화를 이용하여 각각 1분에 세정하였다. 새로운 Histoclear를 사용하고, 슬라이드를 마운팅 배지로 커버슬라이딩하였다.
동결된 조직 섹션에 대한 헤마톡실린 및 에오신 염색 프로토콜
섹션을 슬라이드 상에 마운팅하고, 공기 건조시켜 수분을 제거하고, 여과된 0.1% Mayers 헤마톡실린(Sigma; MHS-16)로 10분 동안 염색시키고, 차가운 흐르는 ddH2O에서 5분 동안 세정하였다. 슬라이드를 0.5% 에오신(300 mL의 95% EtOH 중에 용해된1.5 g)에 12번 딥핑시키고, 이후에 증류된 H2O에서 에오신이 더 이상 자국을 나타내지 않을 때까지 딥핑하고, 50% EtOH에서 10회 딥핑하고, 이후에, 70% EtOH에서 10회 딥핑하고, 95% EtOH에서 30초 동안 평형을 유지시키고, 100% EtOH에서 1분 동안 평형을 유지시키고, 자일렌에서 여러번 딥핑하고, 이후에, 킴와이프(kimwipe)로 세정하고, Cytoseal XYL(Stephens Scientific; cat#8312-4)을 사용하여 커버슬립으로 마운팅하였다.
표준 면역조직화학 염색 방법: 아비딘 바이오틴 착화(ABC) 방법
탈파라핀화되건 동결된 섹션을 함유한 슬라이드를 2x2분 동안 PBS-트윈 20에서 세정하였다. 섹션을 2차 항체로서 동일한 종의 정상 혈청에서 인큐베이션하였다. 섹션을 1차 항체, 항-카스파제 3(Millipore No. AB3623; Sigma-Aldrich No. C8487; etc.)에서, IHC-TekTM 항체 희석제(Cat# IW-1000 또는 IW-1001) 또는 항-분열된 카스파제 3(Cell signaling) 중 1:100로, 실온에서 1시간 동안 또는 밤새 인큐베이션하고, PBS-Tween 20에서 3x2분 동안 세정하였다. 섹션을 실온에서 10분 동안 퍼옥시다제 블로킹 용액에서 인큐베이션하고, PBS-Tween 20에서 3x2분 동안 세정하고, 이후에 실온에서 30분 동안 PBS 중의 바이틴화된 2차 항체에서 인큐베이션하였다. 섹션을 3x2분 동안 PBS-Tween 200에서 세정하고, 이후에 실온에서 30분 동안 ABC-퍼옥시다제 용액에서 인큐베이션하였다. 섹션을 3x2분 동안 PBS-Tweem 20에서 세정하고, 이후에 퍼옥시다제 기질 용액에서 인큐베이션하였다. 섹션을 3x2분 동안 PBS-Tween 20에서 세정하고, 대비염색 용액으로 대비염색하고, 2 내지 5분 동안 흐르는 수돗물에서 세정하고, 1분 동안 95% 에탄올, 2x3분 동안 100% 에탄올을 통해 탈수시키고, 2x5분 동안 자일렌에서 세정하고, 마운팅 배지로 커버슬립핑하였다. 음성 대조군 슬라이드를 1차 항체의 부재 하에 처리하였다[Ren, Y. et al. Small molecule Wnt inhibitors enhance the efficiency of BMP-4-directed cardiac differentiation of human pluripotent stem cells. Journal of molecular and cellular cardiology 51, 280-287 (2011); Scholl, F.A. et al. Mek 1/2 MAPK kinases are essential for Mammalian development, homoestasis, and Raf-induced hyperplasia. Developmental cell 12, 615-629 (2007)].
연질 아가 콜로니 형성 검정
DLD1 또는 HCT116 세포를 35-mm 디시에서 이중층 아가 배양물에서 플레이팅하였다. 20% 우태아혈청(Sigma-Aldrich, Invitrogen, 등)이 보충된 이글 최소 필수 배지(Flow Laboratories, Invitrogen, Sigma-Aldrich, 등)의 알파 개질을 모든 배양물에 대하여 사용하였다. 성장 인자 및/또는 컨디셔닝된 배지를 디시 당 1.5 mL의 총 배양 부피의 최대 13.2%로 하층에 도입하였다. 배양물을 5% 02-10% C02-85% N2 혼합물로 가스화시키고 10 내지 14일 동안 인큐베이션하였다. 단지 50개 이상의 세포를 함유한 콜로니의 점수를 매겼다.
침습 검정
105개의 세포를 밤새 혈청이 없도록 만들고, 기저 배지에 현탁시키고, 8.0-㎛ 기공의 Matrigel® 트랜스웰(BD Biosciences) 상에 플레이팅하였다. 2% 혈청 및 성장 보조물을 함유한 5백 마이크로리터의 배지를 바닥 웰에 첨가하였다. 비-이동성 세포를 24시간 후에 벗겨내고, 이동성 세포를 4',6-디아미디노-2-페닐인돌(DAPI)로 염색하였다. 실험을 생물학적 삼배체(triplicate)에 대한 삼배 트랜스웰에서 수행하고, 챔버당 5 필드를 카운팅하는 4x 뷰필드 당 염색된 세포의 수를 평균처리함으로써 정량화하였다.
유동세포 분석법
HCT116, DLD1, 1CTRPA 및 1CTRPA A1309 세포를 소분자 항암 유사체 PDSA-010, PDSA-011, PDSA-013 또는 PDSA-014에 노출시키고, Beckman Coulter (Hialeah, FL) EPICS XL 유동세포 분석기를 이용하여 유동세포 분석법에 의해 분석하였다.
시토크롬 C 방출하는 아폽토시스 검정
용어 "아폽토시스" 또는 "프로그래밍된 세포사"는 유기체를 손상시키지 않으면서, 수포형성(blebbing), 세포막에 대한 변화, 예를 들어 막 비대칭 및 부착의 손실, 세포 수축, 핵 분절화, 크로마틴 응축, 및 염색체 DNA 분절화를 포함하는 다양한 형태학적 변화를 야기시키는 일련의 생화학적 사건을 포함하는 생물학적 항상성에 기여하는 매우 규칙적이고 활성인 과정을 지칭한다.
아폽토성 세포사는 여러 상이한 인자에 의해 유도되고, 여러 신호전달 경로를 포함하며, 일부는 카스파제 프로테아제(한 부류의 시스테인 프로테아제)에 의존적이며, 나머지는 카스파제 독립적이다. 이는 세포 표면 수용체, 스트레스에 대한 미토콘드리아 반응, 및 세포독성 T 세포를 포함하는 여러 상이한 세포 자극에 의해 촉발되어, 아폽토성 신호전달 경로의 활성화를 야기시킬 수 있다.
아폽토시스에 관련된 카스파제는 단백질분해 캐스케이드에서 아폽토성 신호를 전달하고, 카스파제는 분열하고 이후에 세포사를 유발시키는 다른 세포 타겟을 분해시키는 다른 카스파제를 활성화시킨다. 캐스케이드의 상부 단부에서의 카스파제는 카스파제-8 및 카스파제-9을 포함한다. 카스파제-9은 Fas와 같은 사멸 도메인(DD)을 갖는 수용체에 대한 반응과 관련된 초기 카스파제이다.
TNF 수용체 패밀리에서 수용체는 아폽토시스의 유도, 뿐만 아니라 염증 신호전달과 관련이 있다. Fas 수용체(CD95)는 다른 세포의 표면 상에서 발현되는 Fas-리간드에 의해 아폽토성 신호전달을 매개한다. Fas-FasL 상호전달은 면역계에서 중요한 역할을 하며, 이러한 시스템의 결여는 자기면역을 초래하여, Fas-매개 아폽토시스가 자가-반응성 림프구를 제거하는 것을 명시한다. Fas 신호전달은 또한, 변형된 세포 및 바이러스 감염된 세포를 제거하기 위해 면역 감시에 관련이 있다. 다른 세포 상에서 올리고머화된 FasL에 Fas의 결합은 카스파제 단백질 분해 캐스케이드를 활성화시키기 위해 FAF, FADD 및 DAX를 포함하는 신호전달 어댑터와 상호작용하는 사망 도메인(DD)으로 지칭되는 세포질 도메인을 통한 아폽토성 신호전달을 활성화시킨다. 카스파제-8 및 카스파제10은 먼저 활성화되어, 이후에 다운스트림 카스파제 및 세포사를 야기시키는 다양한 세포 물질을 분열시키고 활성화시킨다.
미토콘드리아는 세포질로의 미토콘드리아 단백질의 방출을 통한 아폽토성 신호전달 경로에 관여한다. 전자 수용체의 중요한 단백질인 시토크롬 c는 아폽토성 신호에 대한 반응으로 미토콘드리아로부터 방출되고, 미토콘드리아로부터 방출된 프로테아제인 Apaf-1을 활성화시킨다. 활성화된 Apaf-1은 카스파제-9 및 카스파제 경로의 나머지를 활성화시킨다. Smac/DIABLO는 미토콘드리아로부터 방출되고, 대개 카스파제-9과 반응하여 아폽토시스를 억제하는 IAP 단백질을 억제한다. Bcl-2 패밀리 단백질에 의한 아폽토시스 조절은 패밀리 일원이 미토콘드리아 멤브레인을 hwls입하는 착물을 형성함에 따라 일어나서, 시토크롬 c 및 다른 단백질의 방출을 조절한다. 아폽토시스를 야기시키는 TNF 패밀리 수용체는 직접적으로 카스파제 캐스케이드를 활성화시키지만, 또한, 미토콘드리아-매개된 아폽토시스를 활성화시키는 Bid, a Bcl-2 패밀리 일원을 활성화시킬 수 있다. Bax, 다른 Bcl-2 패밀리 일원은 이러한 경로에 의해 활성화되어 미토콘드리아 막으로 국소화시키고 이의 투과성을 증가시켜, 시토크롬 c 및 다른 미토콘드리아 단백질을 방출시킨다. Bcl-2 및 Bcl-xL은 기공 형성을 방지하여, 아폽토시스를 차단한다. 시토크롬 c와 같이, AIF(아폽토시스-유발 인자(apoptosis-inducing factor))는 아폽토성 자극에 의해 미토콘드리아로부터 방출된 미토콘드리아에 발견된 단백질이다. 시토크롬 C가 카스파제-의존 아폽토성 신호전달에 연결되지만, AIF 방출은 카스파제-독립 아폽토시스를 자극시켜, DNA를 결합하는 핵으로 이동한다. AIF에 의한 DNA 결합은 크로마틴 응축, 및 DNA 분절화를 아마도 누클레아제의 보충을 통해 자극시킨다.
미토콘드리아 스트레스 경로는 미토콘드리아로부터 시토크롬 c의 방출과 함깨 개시하며, 이는 이후에 v와 상호작용하여, 카스파제-9의 자가-분열 및 활성화를 야기시킨다. 카스파제-3, -6 및 -7은 업스트림 프로테아제에 의해 활성화된 다운스트림 카스파제이고, 세포 타겟을 분열시키기 위해 자체적으로 작용한다.
세포독성 T 세포에 의해 방출된 그랜자임 B 및 퍼포린 단백질은 표적 세포에서 아폽토시스를 유발시켜, 막관통 기공을 형성시키고, 아폽토시스를 아마도 카스파제의 분열을 통해 촉발시키며, 그랜자임 B 매개 아폽토시스의 카스파제-독립 메카니즘이 제안되었다.
뉴클레오솜 사다리(nucleosomal ladder)를 생성시키기 위해 아폽토성 신호전달 경로에 의해 활성화된 다수의 뉴클레아제에 의한 핵 게놈의 분절화는 아폽토시스의 세포 반응 특징이다. 아폽토시스에 관련된 하나의 뉴클레아제는 DNA 분절화 인자(DFF), 카스파제-활성화 DNAse(CAD)이다. DFF/CAD는 아폽토시스 동안 카스파제 프로테아제에 의한 이의 관련된 억제제 ICAD의 분열을 통해 활성화된다. DFF/CAD는 크로마틴 구조를 응축시키고 아마도 CAD를 크로마틴으로 구성하기 위해 토포이소머라제 II 및 히스톤 H1과 같은 크로마틴 성분과 상호작용한다. 다른 아폽토시스 활성화된 프로테아제는 엔도뉴클레아제 G(EndoG)이다. EndoG는 핵 게놈에서 엔코딩되지만, 정상 세포에서 미토콘드리아로 국소화된다. EndoG는 미토콘드리아 게놈의 복제, 뿐만 아니라 아폽토시스에서 역할을 할 수 있다. 아폽토성 신호전달은 미토콘드리아로부터 EndoGdml 방출을 야기시킨다. EndoG 및 DFF/CAD 경로는 독립적인데, 왜냐하면, EndoG 경로가 DFF가 결여된 세포에서 여전히 일어나기 때문이다.
저산소증, 뿐만 아니라, 재산소화 이후 저산소증은 시토크롬 c 방출 및 아폽토시스를 촉발시킬 수 있다. 대부분의 세포 타입에서 보편적으로 발현된 글리코겐 신타제 키나아제(GSK-3), 세린-트레오닌 키나아제는 미토콘드리아 세포사 경로를 활성화시키는 다수의 자극에 기인한 아폽토시스를 매개하거나 강력하게 하는 것으로 나타난다[Loberg, RD, et al., J. Biol. Chem. 277 (44): 41667-673 (2002)]. 카스파제 3 활성화를 유발시키고 전아폽토성 종양 억제제 유전자 p53을 활성화시키는 것이 입증되었다. 또한, GSK-3이 집합 및 미토콘드리아 국소화 시에 시토크림 c 방출을 유발시키는, 시토크롬 c 방출을 유도하는 전아폽토성 Bcl-2 패밀리 일원, Bax의 활성화 및 전좌를 증시킨다는 것을 시시하였다. Akt는 GSK-3의 중요한 조절제이며, GSK-3의 포스포릴화 및 비활성화는 Akt의 일부 안티아폽토성 효과를 매개할 수 있다.
아폽토시스는 하기와 같이 세포에서 유발되었다. 세포를 4℃에서 5분 동안 600 x g에서 원심분리에 의해 수집하고(5 x 107), 10 ml의 얼음-냉각 PBS로 세척하고, 4℃에서 5분 동안 600 x g에서 원심분리하고, 상청액을 제거하였다. 세포를 DTT 및 프로테아제 억제제를 함유한 1.0 ml의 1X 시토솔 추출 완충제 혼합물로 재현탁하고, 얼음 상에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 얼음 상의 얼음-냉각 다운스(Dounce) 조직 그라인더에서 균질화하였다. 균질액을 1.5-ml 마이크로원심분리 튜브로 옮기고, 4℃에서 10분 동안 700 x g에서 원심분리하였다. 상청액을 새로운 1.5-ml 튜브에 모으고, 4℃에서 30분 동안 10,000 x g에서 원심분리하였다. 상청액을 세포질 분획으로서 수집하였다. 펠렛을 DTT 및 프로테아제 억제제를 함유한 0.1-mL 미토콘드리아 추출 완충액 혼합물에서 재현탁하고, 10초 동안 와류시키고, 미토콘드리아 분획으로서 구하였다. 유도되지 않은 세포 및 유도된 세포로부터 단리된 각 10 ㎍의 세포질 분획 및 미토콘드리아 분획을 12% SDS-PAGE 상에 로딩하고, 전기영동하였다. 표준 웨스턴 블롯 절차를 수행하고, 블롯을 시토크롬 c 항체(1 ㎍/mL)로 프로빙하였다[TekpBioVision; 시토크롬 C 방출 아폽토시스 검정 키트; Catalog #K257-100].
TASIN -1의 흡수를 결정하기 위한 검정
큰창자, 혈장 및 큰창자의 내용물로부터의 샘플을 분석하여 TASIN-1의 잔류를 결정하였다. 샘플을 하기 시점에서 획득하였다: 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1400, 및 1600분. 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 각 샘플에서 TASIN-1의 존재를 평가하였다.
에톡시코우마린(DMSO 중 2mM)을 0 내지 240분 동안 수컷 ICR/CD-1 마우스 간세포(Lot HIC) 및 HI 배지와 함께 인큐베이션하였다. 반응을 0.2% 포름산 및 100 ng/nl IS (IS 최종 농도 = 25 ng/ml)를 함유한 0.2 mL(1:2)의 메탄올로 켄칭시켰다. 샘플을 15초 동안 와류시키고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션하고, 이후에 테이블 탑에서 회전시키고, 13.2K rpm에서 5분 동안 원심분리물을 냉각시켰다. 상청액(182 ㎕)을 HPLA 바이알(인서트를 가짐)로 옮겼다. 결과물을 Qtrap 4000 질량 분광기에 의해 분석하였다. Qtrap 4000을 사용하기 위한 파라미터는 에톡시코우마린 + IS 050412.dam이다. 이온 소스/가스 파라미터는 하기와 같다: CUR = 45, CAD = low, IS = 5500, TEM = 600, GS1 = 60, 및 GS2 = 60. 완충제 A는 물 + 0.1% 포름산이며, 완충제 B는 MeOH + 0.1% 포름산이며, 유량은 1.5 mL/min이다. 사용되는 컬럼은 Agilent C18XDB 컬럼, 5 마이크론 패킹 50 x 4.6 mm 크기, 0 내지 1.5분 97% A, 1.5 내지 2.0분 구배 내지 100% B, 2.0 내지 3.0분 100% B, 3.0 내지 3.3분 구배 내지 97% A, 3.3 내지 4.5분 내지 97% A; IS: n-벤질벤즈아미드(sigma-alderich, lot #02914LH, MeOH 중 11/07/11로 제조됨, 전이 212.1 내지 91.1); 화합물 전이 191.0 내지 163.1.
각 화합물(DMSO 중 2mM)을 무린 S9 (lot KWB) 분획 제I 시기 (NADPH 재생 시스템) 공동인자와 함께 0 내지 240분 동안 인큐베이션하였다. 반응을 0.2% 포름산 및 100 ng/mL IS(IS 최종 농도 = 50 ng/mL)를 함유한 1 mL(1:1) 메탄올로 켄칭시켰다. 샘플을 15초 동안 와류시키고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션하고, 2400 rpm에서 5분 동안 회전시켰다. 이후에, 상청액(1 mL)을 에펜도르프 튜브로 옮기고, 테이블 톱에서 회전시키고, 13.2K rpm에서 5분 동안 원심분리물을 냉각시켰다. 상청액(800 ㎕)을 HPLC 바이알(인서트 없음)로 옮겼다. 결과물을 Qtrap 4000 질량 분광기에 의해 분석하였다. Qtrap 4000을 사용하기 위한 파라미터는 SW142282 + IS053112.dam이다. 이온 소스/가스 파라미터는 하기와 같다: CUR = 45, CAD = low, IS = 5500, TEM = 600, GS1 = 60, GS2 = 60. 완충제 A는 물 + 0.1% 포름산이며; 완충제 B는 MeOH + 0.1% 포름산이며, 유량은 1.5 mL/min이었다. 사용된 컬럼은 Agilent C18XDB 컬럼, 5 마이크론 패킹 50 x 4.6 mm 크기, 0 내지 1.5분 97% A, 1.5 내지 2.0분 구배 내지 100% B, 2.0 내지 3.0분 100% B, 3.0 내지 3.3분 구배 내지 97% A, 3.3 내지 4.5분 구배 내지 97% A; IS: n-벤질벤즈아미드(sigma-alderich, lot #02914LH, MeOH 중 11/07/11 제조, 전이 212.1 내지 91.1); 화합물 전이, 예를 들어, 400.1 내지 146.0, 또는, 예를 들어 354.2 내지 171.0이다.
동물 실험
각 마우스의 양쪽 등 측면에 2x106 CRC 세포를 접종함으로써 피하(s.c.) 이종이식을 5주 내지 6주령 암컷 누드 마우스(NCI)에서 수행하였다. 종양이 2 내지 3 mm 직경으로 성장하였을 때, 마우스에 TASIN-1을 40mg/kg 용량(10% DMSO, 10% 크레모포어를 함유한 0.2 mL 용매에 용해됨)으로 또는 용매 단독을 종양이 대조군에 15 mm 직경으로 성장할 때까지 하루에 2회 i.p. 주사하였다. 종양 부피를 캘리퍼를 이용하여 측정하고, 수학식 l x w2 x 0.5를 이용하여 계산하였으며, 상기 식에서 l 및 w는 각각 종야의 길이 및 폭을 나타낸다. 결장직장 형질전환 암 마우스 모델, CDX2P - NLS Cre;APC +/ loxP (CPC;Apc) 마우스를 사용하였다[Kaplan, K.B. et al. A role for the Adenomatous Polyposis coli protein in chromosome segregation. Nature cell biology 3, 429-432 (2001)]. 수컷 CPC;Apc 마우스 ~ 110일령에 90일 동안 1주일에 2회 용매 또는 TASIN-1의 20 mg/kg/주입 중 어느 하나를 i.p. 주입하였다. 중량을 처리 기간에 걸쳐 15일 마다 측정하였다.
요약하면, 수립된 이종이식을 갖는 암컷 누드 마우스(NCI)에 TASIN-1을 40mg/kg(10% DMSO, 10% 크레모포어를 함유한 0.2 mL 용매에 용해됨)으로, 또는 용매 단독을 하루에 2회 i.p. 주사하였다. CPC; Apc 마우스 실험을 위하여, 마우스를 90일 동안 1주에 2회 용매 또는 TASIN-1의 20mg/kg/주사로 i.p. 주사하였다.
마우스에서 종양 발달
마우스에 0일 및 8일에 HCT116 세포, DLD1 또는 HT-29 세포를 주사하고, 이후에 비히클 또는 화합물로 10 내지 40 mg/kg의 용량으로 하루에 2회 처리하였다. 종양을 잘라내고 종양의 크기를 물리적으로 측정하여 종양 성장을 평가하였다. HCT116 세포, DLD1 또는 HT-29로의 접종 후 하기 시점 후에 종양 크기를 분석하여 종양 성장 속도를 평가하였다: 12, 15, 19, 22 및 24일.
마우스에서 종양 억제를 위해 유사체를 시험하였다. DLD1 또는 HCT116 세포를 마우스에 주사하여 종양을 성장시켰다. 6일째에, 종양 부피가 대략 50 mm3일 때, 마우스를 대조군 또는 PDSA-014 중 어느 하나로 접종시켰다. PDSA-014를 마우스에 하루에 2회 10 mg/kg로 복강내 주사에 의해 투여하였다. 종양을 9, 12, 15, 18 및 21일에 제거하였다. 종양을 측정하여 종양 성장을 결정하였다.
분열 지수(Mitotic Index)
분열 지수의 결정을 위하여, DLD1 세포를 2.5 ㎕ 또는 10 ㎕ 농도의 TASIN-1 또는 10 ㎕ 농도의 Pitstop2(abcam, ab120687)로의 처리 후 24시간에 메탄올 고정시키고, DNA를 Hoechst 33342 염색에 의해 시각화하고, 세포를 LD 40x/NA 0.75/Ph2 Plan-Neofluor 대물렌즈를 이용하여 현미경(Axiovert 200M; Carl Zeiss) 상에서 이미지화하였다. 유사분열 세포를 이의 응축된 DNA 함량에 의해 UV 채널에서 확인하였다.
APC 절단 1309(하기에서 "1CTRPA A1309")의 이소성 발현과 함께 TP53을 갖는 HECE, APC 녹다운, KRASV12 돌연변이(1CTRPA)(표 1)를 발달시켰다[참조, Eskiocak U, Kim SB, Ly P, Roig AI, Biglione S, Komurov K, Cornelius C, Wright WE, White MA, Shay JW. Functional parsing of driver mutations in the colorectal cancer genome reveals numerous suppressors of anchorage-independent growth. Cancer Res 2011;71:4359-65; Ly, P. Eskiocak, U., Parker, C.R., Harris, K.J., Wright, W.E. and Shay, J.W. RNAi screening of the human colorectal cancer genome identifies multifunctional tumor suppressors regulating epithelial cell invasion. Cell Res. 22:1605-1608, 2012, PubMed PMID: 23044803; Zhang, L., Komurov, K., Wright, W.E. and Shay, J.W. Identification of novel driver tumor suppressors through functional interrogation of putative passenger mutations in colorectal cancer. Int J Cancer. 132(3):732-7, 2013. doi: 10.1002/ijc.27705. Epub 2012 Jul 21. PMID: 22753261, 이러한 문헌 각각은 본원에 참고로 포함됨]. 이러한 APC 돌연변이는 결장암에 대해 강력하게 선택되고, 다른 절단된 형태의 APC에 비해 카스파제 분열에 대해 더욱 내성적인 것으로 나타났다. APC-절단된 HCEC 세포주 1CTRPA A1309는 매칭된 부모 HCEC(1CTRPA)와 비교하여 성장 속도의 증가, 연질 아가 성장의 향상 및 matrigel® 통한 침입을 나타낸다. 그러나, wt APC 단독(1CTRPA)의 녹다운은 HECE가 종양형성 성질을 증가시키지 못하였다(데이타 공개되지 않음).
이러한 관찰들은 APC 절단이 세포가 종양형성 성질, 예를 들어, 과도한 또는 잘못 조절된 세포 증식을 야기시킬 수 있다는 사상을 지지하였다.
규정된 유전학적 변형을 갖는 이러한 동종 세포주는 절단된 APC 단백질을 타겟화하는 소분자의 확인을 위한 세포 모델로서 사용되었다.
Figure 112016034146661-pct00018
동종 세포주를 사용하여 APC-절단된 HCEC의 성장 억제를 선택적으로 억제할 수 있는 텍사스 사우스웨스턴 대학교(University of Texas Southwestern; UTSW) 화합물 화일 내에서의 소분자 및/또는 천연 생성물 분획을 확인하도록 디자인된 세포-기반 고처리량 스크린을 수행하였다[도 6]. 이러한 화합물 라이브러리는 Prestwick Chemical Library®로부터의 1200개의 시판되는 약물, 및 NIH 라이브러리로부터의 사전-임상 시험으로 제공된 600개의 화합물을 포함하는, 여러 상업적 공급업체로부터의 큰 화학적 공간을 나타내는 ~200,000개의 합성 화합물을 포함한다. 스크린에서 사용되는 동종 세포주는 표 1에 나열되어 있다.
1차 스크린을 1CTRPA A1309에서 수행하였다. 스크린을 위하여, 세포를 상업적으로 입수 가능한(Invitrogen; BioRad; Corning etc.) 384 웰 플레이트에서 400 세포/웰의 밀도로 단일층으로서 시딩하였다[결정 상피 세포 배지 중(CoEpiCM (ScienCell Research Laboratories; Innoprot, etc.)]. 24시간 후에 후보 화합물을 웰 당 2.5μM 의 농도로 첨가하고, 세포를 생리학적 산소 조건(~3 내지 5% O2)에서 4일 동안 인큐베이션하였다. 세포 생존율을 측정하기 위해 판독(readout)으로서 ATP 수준을 사용하여 발광-기반 Celltiter-Glo® 검정을 수행하였다. 간단하게, 배양 배지(웰 당 25 ㎕, 384-웰 플레이트) 중의 포유류 세포를 갖는 불투명한 벽을 갖는 다중웰 플레이트를 준비하였다. 세포를 지니지 않은 배지를 함유한 대조군 웰을 준비하여 백그라운드 발광에 대한 수치를 얻었다. 시험 화합물을 실험 웰에 첨가하고, 배양 프로토콜에 따라 인큐베이션하였다. 플레이트 및 이의 내용물을 실온에서 대략 30분 동안 인큐베이션하였다. CellTiter-Glo® 시약을 첨가하기 직전에 ATP 표준 곡선을 형성시켰다. 각 웰에 존재하는 세포 배양 배지의 부피와 동일한 부피의 CellTiter-Glo® 시약(384-웰 플레이트에 대해 세포를 함유한 25 ㎕의 배지에 대해 25 ㎕의 시약)을 첨가하였다. 내용물을 세포 용해를 유도하기 위해 오비탈 쉐이커 상에서 2분 동안 혼합하였다. 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시키고 발광을 기록하였다[예를 들어, GloMax ®, Lumistar, SPECTROstar, PHERAstar FS]. 1차 스크린은 6704 포지티브 히트(positive hit)를 수득하였다(z-스코어를 기반으로 하여 <-3, 이는 -3의 z-스코어가 평균 미만의 3 표준 편차인 것을 의미함).
정상 인간 상피 세포 증식의 >40%를 억제한 화합물은 스크리닝 설비 데이타베이스 및 이전 실험을 기반으로 하여 배제되었다. 나머지 5381 화합물을 A1309 (1차 스크린 결과를 입증하기 위함) 및 1CTRPA (APC 절단에 대해 특이적이지 않은 화합물을 배제하기 위함)에 대해 다시 스크리닝하였다. 이러한 화합물의 가능한 일반적인 독성 성질을 제거하기 위하여, 화합물을 또한, 정상 이배체 HCEC(1CT)에 대해 역-스크리닝하였다. 이러한 역스크린은 1CTRPA 및 1CT에 비해 >50% CTRPA A1309의 세포 성장을 더욱 억제하는 126개의 화합물을 확인하였다. 이러한 선택적 독성 화합물의 추가 스크린을 2.5 ㎛ 내지 30 nm 범위에서, 1:3배 희석 계열 농도의 HCEC의 동일한 패널에 대해 수행하였다. 2차 역스크린은 1CTRPA 또는 1CT 세포에 대해 주목할만한 영향 없이, 30 nm 또는 90 nm의 농도에서 1CTRPA A1309 세포의 선택적 억제를 나타내는 14개의 후보 화합물을 수득하였다. 전체 스크리닝 전략은 흐름 차트(도 6)에 나타내었다.
이러한 14개의 화합물을 이후에, 상업적으로 획득하고, 두 개의 확실한 CRC 세포주, HCT116 (wt APC) 및 DLD1 (절단된 APC)에서 12개의 농도 포인트에서 절반 log 희석 시리즈로 용량 반응 연구를 수행하여 이의 IC50을 결정하였다. 항암 화합물 A 및 B는 도 7에 도시된 바와 같이, 각각 IC50 63nm 및 131nm를 갖는, DLD1에 대한 선택적 독성을 나타내었다. 이러한 두 개의 화합물은 유사체 발달 및 추가 연구를 위해 초기 선행 화합물로서 제공하였다.
이러한 치환으로부터 얻어진 예시적 화합물은 표 A에 나타내었다.
I. 일반적인 정보
1H 및 13C NMR 스펙트럼은 Varian Inova-400 MHz 또는 500 MHz 분광기를 이용하여 획득하였다. 신호 커플링에 대한 약어는 하기와 같다: s, 싱글렛(singlet); br, 브로드(broad); d, 더블렛(doublet); t, 트리플렛(triplet), q, 쿼테트(quartet) 및 m, 멀티플렛(multiplet). 고체 샘플의 융점은 Fisher-Johns Melting Point 장비를 이용하여 수행하였다. 분석 박막 크로마토그래피(TLC)는 E. Merck에서 구매한 사전코팅된 플레이트 상에서 수행하였다(TLC 실리카 60 PF254, 25 유리 플레이트 20 x 20 cm). 크로마토그램을 UV 광하에서 또는 요오다이드 또는 KMnO4로의 염색에 의해 시각화하였다. 플래시 크로마토그래피를 E. Merck 실리카겔 60 (230 내지 400 메시)를 이용한 문헌[Still, W. C. et al. J. Org. Chem. 1978, 43, 2923-2925]의 설명 또는 4 그램 내지 80 그램 범위의 크기를 갖는 Redisep®Rf Flash 컬럼을 이용한 Isco Combiflash 시스템을 기반으로 하여 수행하였다. 모든 공기 민감한 반응을 아르곤 환경 하에서 수행하였다. 달리 주지하지 않는 한, 상업적 공급처로부터 구입된 모든 일반적인 시약 및 용매를 추가 정제 없이 사용하였다. 수분-민감성 반응을 위해 사용되는 모든 유리기구를 밤새 오븐 건조시키고, 불꽃-건조시켰다.
II. 설포닐 클로라이드 및 아민으로부터 설폰아미드의 제조를 위한 일반적인 절차
아민(1.0 mmol), 설포닐 클로라이드(1.1 mmol), N,N-디이소프로필 에틸아민(1.5 mmol), 및 CH2Cl2(5 mL)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 이후에 NaHCO3 포화용액(20 ml)에 붓고 CH2Cl2(3 x 20 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 용리액으로서 MeOH:CH2Cl2(또는 MeOH:EtOAc) 혼합물과 함께 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 또는 CH2Cl2 및 헥산의 혼합물로부터의 재결정화에 의해 정제하여 설폰아미드를 제공하였다.
Figure 112016034146661-pct00019
4-메틸-1'-(페닐설포닐)-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 벤젠설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 엷은 황색 고체(92%)로서 수득하였다. mp 154 - 156℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.77 (dd, J = 8.3, 1.4 Hz, 2 H), 7.65 - 7.58 (m, 1 H), 7.54 (dd, J = 8.4, 7.0 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 11.9 Hz, 2 H), 2.80 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 2.26 (m, 3 H), 2.14 (t, J = 11.4 Hz, 2 H), 1.86 (d, J = 11.7 Hz, 2 H), 1.72 - 1.59 (m, 4 H), 1.40 - 1.28 (m, 1 H), 1.23 (m, 2 H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.0, 132.7, 129.0, 127.6, 61.3, 49.1, 46.1, 33.9, 30.8, 26.9, 21.7; MS (ESI) m/z 323.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00020
1'-((4-(디플루오로메톡시)페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-(디플루오로메톡시)벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 밝은 오렌지색 고체(69%)로서 수득하였다. mp 132 - 135℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.24 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 6.61 (t, J = 72.6 Hz, 1 H), 3.83 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 2.77 (d, J = 11.7 Hz, 2 H), 2.33 - 2.16 (m, 3 H), 2.11 (td, J = 11.6, 2.5 Hz, 2 H), 1.84 (d, J = 13.2 Hz, 2 H), 1.64 (m, 4 H), 1.30 (dddt, J = 13.3, 9.7, 6.5, 3.5 Hz, 1 H), 1.16 (qd, J = 12.0, 3.8 Hz, 2 H), 0.89 (d, J = 6.5 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 154.1 (t, J = 2.9 Hz), 132.9, 129.8, 119.3, 115.2 (t, J = 262.5 Hz), 61.4, 49.5, 46.1, 34.6, 31.0, 27.3, 21.8; MS (ESI) m/z 389.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00021
4-메틸-1'-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디하이드로벤조푸란-5-일)설포닐)-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디하이드로벤조푸란-5-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)을 통해 이러한 화합물을 엷은 황색 오일(95%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.97 (s, 2 H), 2.89 (s, br, 2 H), 2.75 (dt, J = 12.0, 4.0 Hz, 2 H), 2.50 (s, 3 H), 2.46 (s, 3 H), 2.41 (s, br, 1 H), 2.14 (s, br, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.90 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.64 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.51 (m, 2 H), 1.48 (s, 6 H), 1.40 - 1.08 (m, 3 H), 0.87 (d, J = 4.0 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 159.9, 140.8, 135.3, 125.8, 125.0, 117.9, 86.8, 61.9, 49.6, 43.9, 43.1, 34.5, 31.0, 28.6, 27.7, 21.8, 19.2, 17.6, 12.5; MS (ESI) m/z 435.3 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00022
1-((4-메톡시페닐)설포닐)-4-(피롤리딘-1-일)피페리딘: 4-(피롤리딘-1-일)피페리딘과 4-메톡시벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc, 이후 1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 엷은 황색 오일(70%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.68 (d, J =8.0 Hz, 2 H), 6.97 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 3.86 (s, 3 H), 3.68 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.51 (s, 4 H), 2.36 (dt, J = 12.0, 4.0 Hz, 2 H), 1.90 (m, 3 H), 1.75 (s, 4 H), 1.61 (q, J = 12.0 Hz, 1H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 162.9, 129.8, 127.8, 114.1, 60.8, 55.6, 51.3, 45.0, 30.4, 23.2; MS (ESI) m/z 325.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00023
1-(메시틸설포닐)-4-(피롤리딘-1-일)피페리딘: 4-(피롤리딘-1-일)피페리딘과 2,4,6-트리메틸벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 황색 오일(59%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.92 (s, 2 H), 3.53 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.80 (td, J = 12.0, 2.6 Hz, 2 H), 2.59 (s, 6 H), 2.56 (s, 4 H), 2.28 (s, 3 H), 2.11 (s, br, 1 H), 1.93 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.77 (s, 4 H), 1.50 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.6, 131.9, 131.6, 61.2, 51.4, 42.9, 30.7, 23.2, 22.7, 21.0; MS (ESI) m/z 337.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00024
4-(피롤리딘-1-일)-1-((2,4,6-트리이소프로필페닐)설포닐)피페리딘: 4-(피롤리딘-1-일)피페리딘과 2,4,6-트리이소프로필벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(>95%)로서 수득하였다. mp 118 - 122℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.15 (s, 2 H), 4.16 (m, 2 H), 3.58 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.85 (m, 3 H), 2.62 (s, 4 H), 2.16 (s, br, 1 H), 1.98 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.81 (s, 4 H)m 1.55 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.24 (m, 18 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 153.2, 151.8, 129.7, 123.9, 61.5, 51.4, 42.9, 34.2, 29.3, 24.9, 23.6, 23.2; MS (ESI) m/z 421.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00025
1-(나프탈렌-1-일설포닐)-4-(피롤리딘-1-일)피페리딘: 4-(피롤리딘-1-일)피페리딘과 나프탈렌-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(67%)로서 수득하였다. mp 151 - 154℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.70 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 8.20 (dd, J = 7.3, 1.4 Hz, 1 H), 8.05 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 7.90 (dd, J = 7.3, 1.4 Hz, 1 H), 7.58 (m, 3H), 3.81 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.65 (m, 6 H), 2.19 (s, br, 1 H), 1.92 (m, 2 H), 1.79 (s, 4 H), 1.59 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 134.5, 134.3, 132.8, 130.5, 128.9, 128.8, 128.1, 126.9, 125.2, 124.1, 60.8, 51.1, 44.2, 30.0, 23.2 ; MS (ESI) m/z 345.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00026
1'-((3-(3차-부틸)페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-(피롤리딘-1-일)피페리딘과 3-(3차-부틸)벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(90%)로서 수득하였다. mp 100-102℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.73 (s, 1 H), 7.57 (m, 2 H), 7.43 (m, 1 H), 3.84 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.78 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.22 (td, J = 12.0, 2.5 Hz, 3 H), 2.12 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.82 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.63 (m, 4 H), 1.33 (s, 9 H), 1.28 (m, 1 H), 1.19 (m, 2 H), 0.88 (d, J = 8.0 Hz,3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 152.5, 135.9, 129.7, 128.7, 124.7, 124.4, 61.5, 49.4, 46.0, 35.0, 34.4, 31.1, 31.0, 27.2, 21.8 ; MS (ESI) m/z 379.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00027
3-(4-(메시틸설포닐)피페라진-1-일)퀴누클리딘: N, N-디이소프로필 에틸아민 (1.5 mmol) 존재 하 CH2Cl2 중에서 3-피페라진-1-일퀴누클리딘 트리하이드로클로라이드 헤미수화물(1.0 mmol)과 2,4,6-트리메틸벤젠설포닐 클로라이드(1.1 mmol) 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(42%)로서 수득하였다. mp 300℃ 보다 높음; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.96 (s, 2 H), 3.34-3.12 (m, 9 H), 3.04 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1 H), 2.60 (s, 6 H), 2.45 (s, 5 H), 2.30 (s, 4 H), 2.05 (m, 2 H), 1.79 (m, 1 H), 1.68 (m, 1 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.8, 140.5, 132.0, 131.0, 59.1, 52.8, 50.3, 46.6, 45.6, 44.1, 23.0, 22.9, 22.1, 20.9, 17.7; MS (ESI) m/z 378.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00028
1'-((4-클로로나프탈렌-1-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-클로로나프탈렌-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(71%)로서 수득하였다. mp 129-132℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.76 (m, 1H), 8.39 (ddd, J = 6.5, 3.4, 0.7 Hz, 1 H), 8.11 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.69 (dd, J = 6.6, 3.3 Hz, 2 H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 3.87 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.75 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.55 (td, J = 12.2, 2.4 Hz, 2 H), 2.23 (t, J = 12.0 Hz, 1 H), 2.06 (t, J = 11.3 Hz, 2 H), 1.81 (d, J = 13.1 Hz, 2 H), 1.55 (m, 4 H), 1.27 (dd, J = 17.6, 9.0 Hz, 1 H), 1.15 (dd, J = 13.4, 9.6 Hz, 2 H), 0.87 (d, J = 6.4 Hz, 3 H).; 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 138.4, 132.3, 131.5, 130.1, 130.0, 128.7, 127.9, 125.7, 125.4, 124.6, 61.5, 49.5, 45.5, 34.5, 31.0, 27.7, 21.8; MS (ESI) m/z 407.1(100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00029
1'-((2,4-디클로로-5-메틸페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 2,4-디클로로-5-메틸벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(83%)로서 수득하였다. mp 120-123℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.89 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 3.87 (d, J = 12.9 Hz, 2 H), 2.82 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 2.71 (td, J = 12.4, 2.4 Hz, 2H), 2.38 (s, 3 H), 2.34 (m, 1 H), 2.15 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 1.83 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 1.59 (m, 4H), 1.31 (m, 1H), 1.06 (t, J = 12.0 Hz, 2H), 0.89 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 139.3, 135.5, 134.6, 133.6, 132.0, 129.9, 61.7, 49.5, 45.6, 34.5, 31.0, 27.7, 21.8, 19.6 ; MS (ESI) m/z 405.1(100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00030
1'-([1,1'-비페닐]-2-일설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 [1,1'-비페닐]-2-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(>95%)로서 수득하였다. 106-109℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.56 (td, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.46 (td, J = 7.6, 1.6 Hz, 1 H), 7.39 (m, 5 H), 7.30 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1 H), 3.29 (d, J = 12.8, 2 H), 2.71 (d, J = 10.8 Hz, 2 H), 2.22 (td, J = 12.6, 2.5 Hz, 3 H), 2.09 (t, J = 10.4 Hz, 2 H), 1.90 - 1.49 (m, 4 H), 1.21 (m, 5 H), 0.88 (d, J = 6.0 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 141.6, 139.7, 137.1, 133.0, 132.2, 130.3, 129.6, 127.7, 127.5, 61.7, 49.3, 44.4, 34.4, 31.0, 27.2, 21.8; MS (ESI) m/z 399.2(100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00031
N-(4-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)나프탈렌-1-일)아세트아미드: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-아세트아미도나프탈렌-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(64%)로서 수득하였다. mp 113-117℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.09 (m, 2H), 7.87 (s, 1 H), 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.48 (m, 2 H), 3.86 (d, J = 9.6 Hz, 2 H), 2.80 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 2.52 (t, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.36 (t, J = 12.8 Hz, 1 H), 2.31 (s, 3 H), 2.15 ( t, J = 11.6 Hz, 3 H), 1.83 (d, J =13.6 Hz, 2 H), 1.56 (m, 4 H), 1.24 (m, 3 H), 0.88 (d, J = 6.0 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 169.5, 133.3, 133.2, 130.6, 129.5, 129.4, 128.1, 127.7, 124.3, 123.9,123.4, 61.6, 49.3, 45.3, 33.7, 30.7, 27.2, 24.0, 21.6; MS (ESI) m/z 430.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00032
5-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)이소퀴놀린: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 이소퀴놀린-5-설포닐 클로라이드간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(51%)로서 수득하였다. mp 123 - 126℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.33 (s, 1 H), 8.66 (d, J = 6.0 Hz, 1 H), 8.48 (d, J = 6.0 hz, 1 H), 8.36 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1 H), 8.19 (d, J = 6.0 Hz, 1 H), 7.69 (dd, J = 8.2, 7.4 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.74 (d, J = 10.8 Hz, 2 H), 2.51 (td, J = 12.0, 2.4 Hz, 2 H), 2.21 (m, 1 H), 2.06 (m, 2 H), 1.81 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 1.56 (m, 4 H), 1.27 (m, 1 H), 1.15 (m, 2 H), 0.86 (d, J = 6.4 Hz, 3 H) ; 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 153.2, 145.1, 134.0, 133.7, 132.6, 131.9, 129.1, 125.8, 117.7, 61.4, 49.9, 45.6, 34.5, 31.0, 27.7, 21.6; MS (ESI) m/z 374.2(100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00033
1'-((4-브로모-2-에틸페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-브로모-2-에틸벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(92%)로서 수득하였다. mp 87 - 91℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.73 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.50 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.42 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1 H), 3.75 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.96 (q, J = 7.6 Hz, 2 H), 2.83 (d, J = 7.6 Hz, 2 H), 2.60 (td, J = 12.4, 2.4 Hz, 2 H), 2.34 (m, 1 H), 2.13 (m, 2 H), 1.84 (d, J = 7.6 Hz, 2 H), 1.57 (m, 4 H), 1.25 (m, 6 H), 0.89 (d, J =6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 145.2, 134.8, 133.9, 131.7, 129.0, 127.8, 61.6, 49.5, 45.1, 34.4, 30.9,27.7, 25.9, 21.8, 15.4; MS (ESI) m/z 429.1 (100 %, [M+]+), 431.1 (100 %, [M+2]+).
Figure 112016034146661-pct00034
1'-((2,4-디클로로-6-메틸페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 2,4-디클로로-6-메틸벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(93%)로서 수득하였다. mp 89 - 91℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 2.3, 0.9 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 2.93 - 2.73 (m, 4H), 2.67 (s, 3H), 2.45 - 2.27 (m, 1H), 2.14 (td, J = 11.3, 2.5 Hz, 2H), 1.83 (dd, J = 12.3, 3.4 Hz, 2H), 1.57 (dtd, J = 24.4, 11.6, 4.0 Hz, 4H), 1.30 (ddt, J = 12.8, 6.4, 3.7 Hz, 1H), 1.18 (qd, J = 12.0, 3.9 Hz, 2H), 0.89 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 143.7, 137.7, 135.3, 134.2, 131.6, 130.2, 61.7, 49.5, 45.0, 34.6, 31.0, 27.9, 24.0, 21.8; MS (ESI) m/z 405.1(100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00035
1'-((5-브로모-2,3-디하이드로벤조푸란-7-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 5-브로모-2,3-디하이드로벤조푸란-7-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(86%)로서 수득하였다. mp 128 - 132℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 (s, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 4.70 (t, J = 8.9 H z, 2 H), 3.89 (d, J = 12.3Hz, 2 H), 3.24 (t, J = 9.0 Hz, 2 H), 2.79 (d, J = 11.9 Hz, 2 H), 2.50 (t, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.27 (tt, J = 11.7, 3.7 Hz, 1 H), 2.12 (t, J = 11.5 Hz, 2H), 1.82 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 1.60 (m, 4H), 1.30 (m, 1H), 1.17 (qd, J = 11.9, 3.7 Hz, 2 H), 0.88 (d, J = 6.3 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 156.4, 132.3, 132.2, 130.7, 121.0, 111.8, 73.0, 61.7, 49.5, 46.0, 34.6, 31.0, 29.0, 27.6, 21.9; MS (ESI) m/z 443.1 (90 %, [M+]+), 445.1 (100 %, [M+2]+).
Figure 112016034146661-pct00036
3-메틸-1'-(페닐설포닐)-1,4'-비피페리딘: 3-메틸-1,4'-비피페리딘과 벤젠설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(63%)로서 수득하였다. mp 132 - 135℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 - 7.69 (m, 2 H), 7.62 - 7.55 (m, 1 H), 7.55 - 7.44 (m, 2 H), 3.84 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 2.89 - 2.51 (m, 2 H), 2.36 - 2.09 (m, 3 H), 2.02 (td, J = 11.2, 2.7 Hz, 1 H), 1.88 - 1.76 (m, 2 H), 1.75 - 1.44 (m, 7 H), 0.85 - 0.73 (m, 1 H), 0.81 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.3, 132.6, 129.0, 127.6, 61.5, 57.6, 49.5, 46.2, 33.29, 31.5, 27.2, 27.1, 25.9, 19.8; MS (ESI) m/z 323.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00037
1'-((4-메톡시페닐)설포닐)-3-메틸-1,4'-비피페리딘: 3-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-메톡시벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(74%)로서 수득하였다. mp 114 - 117℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.69 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.82 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 2.87 - 2.62 (m, 2H), 2.22 (td, J = 12.0, 2.5 Hz, 3H), 2.06 (td, J = 11.8, 10.7, 2.9 Hz, 1H), 1.90 - 1.79 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 1.79 - 1.46 (m, 7H), 0.88 - 0.75 (m, 1H), 0.83 (d, J = 6.4 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 162.9, 129.8, 127.7, 114.1, 61.6, 57.3, 55.6, 49.4, 46.1, 33.1, 31.2, 27.0, 25.6, 19.8.; MS (ESI) m/z 353.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00038
1'-((5-브로모-2-메톡시페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 5-브로모-2-메톡시벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(92%)로서 수득하였다. mp 98 - 102℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.01 (d, J = 2.6, Hz, 1 H), 7.59 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1 H), 6.88 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 3.96 - 3.88 (d, J = 13.6 Hz, 2 H), 3.90 (s, 3 H), 2.84 (d, J = 10.9 Hz, 2 H), 2.64 (td, J = 12.5, 2.5 Hz, 2 H), 2.38 (d, J = 12.2 Hz, 1 H), 2.17 (t, J = 11.7 Hz, 2 H), 1.85 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 1.60 (m, 4 H), 1.40 - 1.14 (m, 3 H), 0.91 (d, J = 6.2 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 155.9, 136.8, 133.8, 128.7, 114.1, 112.3, 61.8, 56.3, 49.5, 45.9, 34.6, 31.0, 28.0, 21.9; MS (ESI) m/z 431.1 (100 %, [M+]+), 433.1 (100 %, [M+2]+).
Figure 112016034146661-pct00039
4-메틸-1'-((1-메틸-1H-이미다졸-2-일)설포닐)-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 1-메틸-1H-이미다졸-2-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(51%)로서 수득하였다. mp 153 - 156℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.03 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 3.96 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.05 (t, J = 12.5 Hz, 2H), 2.89 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 2.54 (s, 1H), 2.24 (s, 2H), 1.94 (d, J = 12.5 Hz, 2H), 1.81 - 1.58 (m, 4H), 1.31 (s, 3H), 1.06 - 0.79 (d, , J = 8.0 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.8, 128.2, 124.4, 61.8, 49.4, 46.6, 34.8, 34.1, 30.9, 27.3, 21.7; MS (ESI) m/z 327.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00040
1'-((2-클로로피리딘-3-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 2-클로로피리딘-3-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(71%)로서 수득하였다. mp 122 - 124℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.55 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 8.38 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.40 (dd, J = 7.8, 4.8 Hz, 1 H), 3.92 (d, J = 13.0 Hz, 2 H), 2.83 (t, J = 12.5 Hz, 4 H), 2.38 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 2.15 (t, J = 11.0 Hz, 2H), 1.86 (d, J = 12.5 Hz, 2H)., 1.72 - 1.53 (m, 4 H), 1.32 (m, 1 H), 1.18 (m, 2 H), 0.90 (d, J = 6.5 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 148.4, 144.5, 136.9, 130.5, 118.5, 57.6, 45.6, 41.9, 30.7, 27.1, 24.0, 17.9; MS (ESI) m/z 358.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00041
1'-((2-플루오로피리딘-3-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 2-플루오로피리딘-3-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(>95%)로서 수득하였다. mp 120 - 123℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 8.29 (dd, J = 9.2, 7.6 Hz, 1 H), 7.37 (dd, J = 7.6, 4.9 Hz, 1 H), 3.96 (d, J = 12.6 Hz, 2 H), 2.81 (d, J = 11.5 Hz, 2 H), 2.67 (t, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.34 (ddd, J = 11.5, 8.0, 3.5 Hz, 1 H), 2.15 (t, J = 10.4 Hz, 2 H), 1.87 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 1.74 - 1.55 (m, 4 H), 1.32 (ddt, J = 10.3, 6.9, 4.1 Hz, 1 H), 1.27 - 1.11 (m, 2 H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 154.75 (d, J = 244.0 Hz), 147.68 (d, J = 14.3 Hz), 138.2, 118.2, 117.9, 57.5, 45.6, 41.9, 30.7, 27.1, 23.8, 17.9; MS (ESI) m/z 342.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00042
3,5-디메틸-4-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)이속사졸: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 3,5-디메틸이속사졸-4-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 CH2Cl2 및 헥산의 혼합물에서의 재결정화를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(28%)로서 수득하였다. mp 158 - 161℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.78 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 2.80 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 2.61 (s, 3H), 2.50 (t, J = 12.0 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.27 (tt, J = 11.4, 3.5 Hz, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 2H), 1.87 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 1.72 - 1.50 (m, 4H), 1.30 (m, 1H), 1.25 - 1.09 (m, 2H), 0.89 (d, J = 6.4 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 173.5, 158.0, 113.7, 61.3, 49.6, 45.4, 34.6, 31.0, 27.5, 21.9, 13.0, 11.4; MS (ESI) m/z 342.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00043
4-메틸-1'-((1-메틸-1H-이미다졸-4-일)설포닐)-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 1-메틸-1H-이미다졸-4-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 CH2Cl2 및 헥산의 혼합물에서의 재결정화를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(61%)로서 수득하였다. mp 139 - 142℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.48 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 3.90 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 2.80 (d, J = 9.9 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 12.1 Hz, 2H), 2.26 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 2.13 (t, J = 10.5 Hz, 2H), 1.83 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 1.64 (m, 4H), 1.31 (s, br, 1H), 1.26 - 1.12 (m, 2H), 0.90 (d, J = 6.4 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 139.0, 138.3, 124.4, 61.7, 49.5, 46.3, 34.6, 34.0, 31.1, 27.4, 21.9; MS (ESI) m/z 327.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00044
1-(메시틸설포닐)-4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진: N,N-디이소프로필 에틸아민(1.5 mmol)의 존재 하에 CH2Cl2 중에서 1-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진(1.0 mmol)과 2,4,6-트리메틸벤젠설포닐 클로라이드(1.1 mmol) 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 무색 겔(>95%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.91 (s, 2 H), 3.23 - 3.04 (m, 4 H), 2.85 (d, J = 12.2 Hz, 2 H), 2.59 (s, 6 H), 2.57 - 2.48 (m, 4 H), 2.26 (s, 3 H), 2.22 (s, 3 H), 2.19 (m, 1 H), 1.89 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.69 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 1.51 (qd, J = 12.3, 3.9 Hz, 2 H).; 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.4, 131.9, 131.3, 61.4, 55.3, 48.4, 46.1, 44.7, 28.0, 23.0, 21.0.; MS (ESI) m/z 366.2 (60 %, [M+H]+), 414.2 (100 %, [M+K]+).
Figure 112016034146661-pct00045
1'-((6-클로로피리딘-3-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 6-클로로피리딘-3-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(80%)로서 수득하였다. mp 178 - 182℃. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.75 (s, 1H), 7.99 (dd, J = 8.4, 2.3 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 2.81 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 12.0 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.14 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 1.89 (d, J = 11.3 Hz, 2H), 1.75 - 1.58 (m, 4H), 1.33 (s, br, 1H), 1.21 (m, 2H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 155.6, 148.6, 137.7, 132.1, 124.7, 61.3, 49.5, 46.0, 34.4, 30.9, 27.3, 21.8; MS (ESI) m/z 358.1(100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00046
1'-((5-브로모피리딘-3-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 5-브로모피리딘-3-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(79%)로서 수득하였다. mp 171 - 173℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.81 (s, 2 H), 8.18 (t, J = 2.0 Hz, 1 H), 3.89 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 2.81 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.39 (td, J = 12.0, 2.5 Hz, 2 H), 2.25 (d, J = 11.9 Hz, 1 H), 2.14 (t, J = 11.6 Hz, 2 H), 1.90 (d, J = 12.8 Hz, 2 H), 1.78 - 1.57 (m, 4 H), 1.43 - 1.29 (m, 1 H), 1.20 (m, 2 H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 154.4, 146.2, 137.4, 134.5, 121.0, 61.2, 49.5, 46.0, 34.5, 31.0, 27.3, 21.8; MS (ESI) m/z 402.1 (100 %, [M+]+), 404.1 (100 %, [M+2]+).
Figure 112016034146661-pct00047
1,3-디메틸-5-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)피리미딘-2,4(1H,3H)-디온: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 1,3-디메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(78%)로서 수득하였다. mp 212 - 215℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.07 (s, 1H), 3.94 (d, J = 12.8 Hz, 2 H), 3.50 (s, 3 H), 3.35 (s, 3 H), 2.93 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 2.85 (t, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.56 (t, J = 11.7 Hz, 1 H), 2.26 (t, J = 11.9 Hz, 2 H), 1.92 (d, J = 11.9 Hz, 2 H), 1.75 - 1.58 (m, 4H), 1.48 - 1.20 (m, 3H), 0.93 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 158.2, 150.8, 148.1, 112.6, 61.6, 49.2, 46.0, 37.9, 33.8, 30.7, 28.3, 27.5, 21.7; MS (ESI) m/z 385.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00048
1'-(메시틸설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 2,4,6-트리메틸벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(>95%)로서 수득하였다. mp 62 - 65℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.94 (s, 2 H), 3.62 (d, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.85 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.75 (t, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.61 (s, 6 H), 2.34 (t, J = 11.5 Hz, 1 H), 2.29 (s, 3 H), 2.12 (t, J = 11.4 Hz, 2 H), 1.86 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 1.63 (d, J = 13.4 Hz, 2 H), 1.50 (qd, J = 12.3, 4.0 Hz, 2H), 1.39 - 1.27 (s, br, 1 H), 1.27 - 1.13 (m, 2 H), 0.90 (d, J = 6.6 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.4, 140.4, 131.8, 131.7, 61.8, 49.6, 44.0, 34.6, 31.0, 27.7, 22.8, 21.9, 20.9; MS (ESI) m/z 365.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00049
2-클로로-4-메틸-5-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)티아졸: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 2-클로로-4-메틸티아졸-5-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(64%)로서 수득하였다. mp 117 - 119℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.85 (d, J = 13.5 Hz, 2 H), 2.82 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.60 (s, 3 H), 2.53 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.34 (t, J = 11.9 Hz, 1 H), 2.15 (t, J = 11.4 Hz, 2 H), 1.91 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 1.65 (m, 4 H), 1.45 - 1.29 (m, 1 H), 1.22 (m, 2 H), 0.89 (d, J = 6.2 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 155.4, 154.4, 128.9, 61.3, 49.5, 46.0, 34.3, 30.9, 27.3, 21.8, 16.8; MS (ESI) m/z 378.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00050
4-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)벤조니트릴: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-시아노벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(86%)로서 수득하였다. mp 184 - 186℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.84 (q, J = 8.5 Hz, 4 H), 3.85 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 2.77 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 2.31 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.22 (tt, J = 11.6, 3.6 Hz, 1 H), 2.11 (t, J = 12.2 Hz, 2 H), 1.85 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 1.71 - 1.55 (m, 4 H), 1.31 (m, 1 H), 1.25 - 1.10 (m, 2 H), 0.89 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 140.9, 132.8, 128.1, 117.3, 116.4, 61.2, 49.5, 46.1, 34.6, 31.0, 27.4, 21.8; MS (ESI) m/z 348.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00051
4-메틸-1'-(피리딘-3-일설포닐)-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 피리딘-3-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(86%)로서 수득하였다. mp 144 - 147℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.98 (s, 1 H), 8.82 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.49 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1 H), 3.88 (d, J = 12.3 Hz, 2 H), 2.78 (d, J = 11.9 Hz, 2 H), 2.32 (td, J = 12.0, 2.4 Hz, 2 H), 2.22 (tt, J = 11.6, 3.6 Hz, 1H), 2.12 (t, J = 11.6 Hz, 2 H), 1.86 (d, J = 11.9 Hz, 2 H), 1.75 - 1.55 (m, 4 H), 1.31 (m, 1 H), 1.17 (qd, J = 12.0, 3.7 Hz, 2 H), 0.89 (d, J = 6.5 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 153.3, 148.4, 135.2, 133.1, 123.7, 61.3, 49.5, 46.0, 34.5, 31.0, 27.3, 21.8; MS (ESI) m/z 324.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00052
6-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)벤조[d]티아졸: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 벤조[d]티아졸-6-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 황색 고체(93%)로서 수득하였다. mp 197 - 199℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.19 (s, 1 H), 8.41 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 8.24 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.86 (dd, J = 8.5, 1.8 Hz, 1 H), 3.89 (d, J = 12.3, 2 H), 2.75 (d, J = 10.7 Hz, 2 H), 2.45 - 2.02 (m, 5 H), 1.84 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 1.76 - 1.51 (m, 4 H), 1.44 - 1.05 (m, 3 H), 0.87 (d, J = 6.3 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 157.8, 155.5, 134.3, 133.5, 125.2, 124.1, 122.4, 61.4, 49.4, 46.2, 34.4, 30.9, 27.3, 21.8; MS (ESI) m/z 380.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00053
1'-((4-메톡시페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-메톡시벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(94%)로서 수득하였다. mp 109 - 112℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.67 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.83 - 3.74 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 2.76 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 2.28 - 2.04 (m, 5H), 1.88 - 1.75 (d, J = 12.9 Hz, 2H), 1.72 - 1.54 (m, 4H), 1.28 (m, 1H), 1.23 - 1.08 (m, 2H), 0.87 (d, J = 6.3 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 162.9, 129.8, 127.6, 114.1, 61.5, 55.6, 49.5, 46.2, 34.6, 31.0, 27.3, 21.9; MS (ESI) m/z 353.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00054
1'-((4'-클로로-[1,1'-비페닐]-4-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4'-클로로-[1,1'-비페닐]-4-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(87%)로서 수득하였다. mp 205 - 207℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.88 - 7.75 (m, 2 H), 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.51 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.43 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 3.87 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.76 (d, J = 10.9 Hz, 2 H), 2.41 - 2.02 (m, 5 H), 1.83 (dd, J = 12.3, 3.6 Hz, 2 H), 1.70 - 1.46 (m, 4 H), 1.37 - 1.05 (m, 3 H), 0.87 (d, J = 6.3 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 144.2, 137.7, 135.1, 134.7, 129.2, 128.5, 128.3, 127.4, 61.4, 49.5, 46.2, 34.6, 31.0, 27.3, 21.8; MS (ESI) m/z 433.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00055
1'-((4'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(92%)로서 수득하였다. mp 195 - 198℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.85 - 7.72 (m, 2 H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.53 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.04 - 6.88 (m, 2 H), 3.88 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 3.84 (s, 3 H), 2.76 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 2.40 - 1.95 (m, 5 H), 1.83 (d, J = 10.7 Hz, 2 H), 1.71 - 1.48 (m, 4 H), 1.29 (m, 1 H), 1.23 - 1.04 (m, 2 H), 0.87 (d, J = 6.3 Hz, 3 H).; 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 160.0, 145.1, 133.9, 131.6, 128.4, 128.2, 126.9, 114.5, 61.5, 55.4, 49.5, 46.2, 34.6, 31.0, 27.4, 21.9; MS (ESI) m/z 429.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00056
2,7-비스((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)나프탈렌: N,N-디이소프로필 에틸아민(0.52 mmol)의 존재 하에 CH2Cl2(2.5 mL) 중에서 4-메틸-1,4'-비피페리딘(0.39 mmol)과 나프탈렌-2,7-디설포닐 디클로라이드(0.15 mmol)의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(92%)로서 수득하였다. mp 265 - 268℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 2 H), 8.04 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.89 (dd, J = 8.6, 1.7 Hz, 2 H), 3.92 (d, J = 12.3 Hz, 4 H), 2.75 (d, J = 11.7 Hz, 4 H), 2.32 (td, J = 12.1, 2.4 Hz, 4 H), 2.25 - 1.99 (m, 6 H), 1.84 (d, J = 11.5 Hz, 4 H), 1.72 - 1.51 (m, 8 H), 1.37 - 1.21 (m, 2 H), 1.21 - 1.07 (m, 4 H), 0.86 (d, J = 6.3 Hz, 6 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.0, 135.5, 131.3, 129.7, 129.2, 125.8, 61.4, 49.5, 46.2, 34.5, 31.0, 27.4, 21.8; MS (ESI) m/z 617.3 (100 %, [M+H]+)
Figure 112016034146661-pct00057
4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-브로모-2-(트리플루오로메톡시)벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 1'-((4-브로모-2-(트리플루오로메톡시)페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘을 황색 고체(67%)로서 수득하였다. mp 108 - 110℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.83 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 7.58 - 7.45 (m, 2 H), 3.85 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.78 (dt, J = 11.9, 3.3 Hz, 2 H), 2.59 (td, J = 12.5, 2.5 Hz, 2 H), 2.29 (tt, J = 11.5, 3.6 Hz, 1 H), 2.11 (td, J = 11.5, 2.4 Hz, 2 H), 1.82 (dt, J = 12.7, 2.7 Hz, 2 H), 1.69 - 1.45 (m, 4 H), 1.40 - 1.24 (m, 1 H), 1.23 - 1.05 (m, 2 H), 0.88 (d, J = 6.3 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 146.2, 132.7, 130.1, 129.8, 127.9, 123.90, 121.3, 61.5, 49.5, 45.7, 34.59, 31.0, 27.8, 21.8; MS (ESI) m/z 485.1 (100 %, [M+H]+)
Figure 112016034146661-pct00058
4-메틸-1,4'-비피페리딘과 3-브로모벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 1'-((3-브로모페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘을 백색 고체(65%)로서 수득하였다. mp 125 - 126℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.85 (s, 1 H), 7.66 (dd, J = 13.3, 7.9 Hz, 2 H), 7.37 (t, J = 7.9 Hz, 1 H), 3.80 (d, J = 11.7 Hz, 2 H), 2.74 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.16 (dt, J = 73.4, 11.4 Hz, 5 H), 1.81 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 1.60 (td, J = 12.4, 8.1 Hz, 4 H), 1.27 (dt, J = 11.0, 5.9 Hz, 1 H), 1.20 - 1.02 (m, 2 H), 0.85 (d, J = 6.2 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 138.2, 135.7, 130.5, 130.3, 126.1, 123.1, 61.3, 49.5, 46.1, 34.6, 31.0, 27.4, 21.9; MS (ESI) m/z 401.1 (100 %, [M+]+), 403.1 (100 %, [M+2]+).
Figure 112016034146661-pct00059
4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-클로로벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 CH2Cl2 및 헥산의 혼합물에서의 재결정화를 통해 1'-((4-클로로페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘을 백색 고체(67%)로서 수득하였다. mp 152 - 155℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 3.93 - 3.69 (m, 2 H), 2.80 (dt, J = 11.6, 3.4 Hz, 2 H), 2.23 (td, J = 12.0, 2.5 Hz, 3 H), 2.15 (t, J = 11.3 Hz, 2 H), 1.84 (d, J = 12.6 Hz, 2 H), 1.71 - 1.54 (m, 4 H), 1.42 - 1.26 (m, 1 H), 1.25 - 1.12 (m, 2 H), 0.87 (d, J = 6.2 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 139.3, 134.6, 129.3, 129.0, 61.4, 49.4, 46.0, 34.2, 30.8, 27.2, 21.7; MS (ESI) m/z 357.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00060
4-메틸-1,4'-비피페리딘과 4-메틸벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 CH2Cl2 및 헥산의 혼합물에서의 재결정화를 통해 4-메틸-1'-토실-1,4'-비피페리딘을 백색 고체(67%)로서 수득하였다. mp 139 - 142℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.59 (d, J = 8.2 Hz, 2 H), 7.28 (d, J = 8.2 Hz, 2 H), 3.80 (d, J = 11.9 Hz, 2 H), 2.79 (d, J = 11.1 Hz, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 2.30 - 2.07 (m, 5 H), 1.84 (d, J = 10.9 Hz, 2 H), 1.69 - 1.53 (m, 4 H), 1.40 - 1.09 (m, 3 H), 0.86 (d, J = 6.2 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 143.5, 132.9, 129.6, 127.7, 61.6, 49.4, 46.0, 34.1, 30.8, 27.1, 21.7, 21.5; MS (ESI) m/z 337.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00061
4-메틸-1,4'-비피페리딘과 3,4-디클로로벤젠-1-설포닐 클로라이드 간의 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 1'-((3,4-디클로로페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘을 밝은 갈색 고체(86%)로서 수득하였다. mp 160 - 162℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 1.9 Hz, 1 H), 7.66 - 7.44 (m, 2 H), 3.81 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 2.76 (d, J = 11.2 Hz, 2 H), 2.29 (td, J = 11.9, 2.5 Hz, 2 H), 2.20 (tt, J = 11.5, 3.5 Hz, 1 H), 2.10 (td, J = 11.5, 2.4 Hz, 2 H), 1.84 (d, J = 11.5 Hz, 2 H), 1.62 (ddt, J = 16.3, 12.5, 5.6 Hz, 4 H), 1.28 (tdd, J = 12.8, 10.3, 5.5 Hz, 1 H), 1.15 (qd, J = 11.8, 11.2, 3.7 Hz, 2 H), 0.87 (d, J = 6.5 Hz, 3H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 137.5, 136.2, 133.8, 131.1, 129.4, 126.6, 61.3, 49.5, 46.1, 34.6, 31.0, 27.4, 21.8; MS (ESI) m/z 391.1 (100 %, [M+H]+).
III. 설포닐 클로라이드 및 아민 하이드로클로라이드 염으로부터 설폰아미드의 제조를 위한 일반적인 절차
설포닐 클로라이드(1.2 mmol), 아민 하이드로클로라이드 염(1.0 mmol), CHCl3(2 mL), 물(2 mL) 및 K2CO3(2.5 mmol)을 15 ml 플라스크에 순차적으로 첨가하였다. 2-상 반응 용액을 실온에서 20시간 후에 격렬하게 교반하고, 이후에, 반응 용액을 분별 깔대기로 옮기고, 25 mL NaHCO3 포화용액을 첨가하였다. 얻어진 2-상 용액을 CH2Cl2(3 x 20 mL)에 의해 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 용리액으로서 헥산:EtOAc(또는 MeOH:CH2Cl2) 혼합물로 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 설폰아미드 생성물을 제공하였다.
Figure 112016034146661-pct00062
1-(페닐설포닐)피페리딘-4-온: 플래시 크로마토그래피(1:1 헥산 : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(93%)로서 수득하였다. mp 105 - 108℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.85 - 7.73 (m, 2 H), 7.66 - 7.58 (m, 1 H), 7.58 - 7.48 (m, 2 H), 3.39 (t, J = 6.2 Hz, 4 H), 2.52 (t, J = 6.2 Hz, 4 H); 13C NMR (126MHz, CDCl3) δ 205.6, 136.3, 133.2, 129.3, 127.5, 45.9, 40.7. 분석 데이타는 문헌 보고서와 일치하였다[Ellis, G. L. et al. J. Med. Chem. 2008, 51, 2170-2177].
Figure 112016034146661-pct00063
1-(1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)아제판: 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 오렌지색 겔(90%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.94 (s, 2 H), 3.71 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 3.62 (s, br, 1 H), 3.18 - 2.89 (s, 4 H), 2.77 (t, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.58 (s, 6 H), 2.29 (s, 3 H), 2.10 (d, J = 12.5 Hz, 2 H), 1.82 (s, 4 H), 1.76 - 1.54 (m, 6 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.8, 140.3, 132.0, 132.0, 132.0, 131.5, 63.3, 51.2, 43.8, 26.9, 26.6, 26.4, 22.8, 21.0. MS (ESI) m/z 365.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00064
1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온: 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(95%)로서 수득하였다. mp 102 - 105℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.95 (s, 2 H), 3.50 (t, J = 6.2 Hz, 4 H), 2.61 (s, 6 H), 2.52 (t, J = 6.2 Hz, 4 H), 2.29 (s, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 201.6, 138.3, 135.6, 127.4, 126.8, 39.6, 36.3, 18.1, 16.2; MS (ESI) m/z 282.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00065
1-((2-니트로페닐)설포닐)피페리딘-4-온: 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(88%)로서 수득하였다. mp 107 - 109℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 - 7.96 (m, 1 H), 7.81 - 7.58 (m, 3 H), 3.64 (t, J = 6.3 Hz, 4 H), 2.63 - 2.45 (t, J = 6.3 Hz, 4 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 205.4, 134.1, 131.9, 131.9, 130.9, 124.4, 45.5, 41.2; MS (ESI) m/z 285.0 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00066
1-((4-니트로페닐)설포닐)피페리딘-4-온: 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(82%)로서 수득하였다. mp 192 - 195℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.47 - 8.33 (m, 2 H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 3.46 (t, J = 6.2 Hz, 4 H), 2.56 (t, J = 6.2 Hz, 4 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 204.5, 150.4, 142.7, 128.6, 124.6, 45.8, 40.7; MS (ESI) m/z 285.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00067
1-((3-니트로페닐)설포닐)피페리딘-4-온: 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(90%)로서 수득하였다. mp 141 - 143℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.60 (s, 1 H), 8.48 - 8.43 (m, 1 H), 8.14 - 8.07 (m, 1 H), 7.78 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.46 (t, J = 6.2 Hz, 4 H), 2.56 (t, J = 6.2 Hz, 4 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 204.6, 148.5, 139.1, 132.8, 130.8, 127.6, 122.5, 45.8, 40.7; MS (ESI) m/z 285.1 (100 %, [M+H]+).
IV. 3차 아민의 메틸화를 위한 일반적인 절차
3차 아민(0.1 mmol)을 아세토니트릴(3 mL)에 용해시키고, CH3I(0.3 mmol)를 적가하였다. 얻어진 혼합물을 환류 하에 4시간 동안 교반하였다. 진공 중에 유기 용매를 증발시킨 후에, 달리 주지하지 않는 한 추가 정제 없이 상응하는 4차 암모늄 염을 수득하였다.
Figure 112016034146661-pct00068
1,4-디메틸-1-(1-(페닐설포닐)피페리딘-4-일)피페리딘-1-이윰 요오다이드(N-메틸 및 C-메틸은 트랜스임): 4-메틸-1'-(페닐설포닐)-1,4'-비피페리딘의 메틸화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 EtOH : CH2Cl2)를 통해 이러한 트랜스 이성질체를 황색 고체(58%)로서 수득하였다. mp 201-204℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.73 (m, 3 H), 7.65 (m, 2 H), 3.78 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 3.36 (d, J = 12.0 Hz, 3 H), 3.07 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.84 (s, 3 H), 2.18 (t, J = 12.4 Hz, 4 H), 1.78 (qd, J = 12.0, 3.9 Hz, 2 H), 1.67 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.54 (m, 3H), 0.91 (d, J = 4.0 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, DMSO-d6) δ 135.1, 133.9, 130.0, 128.0, 72.0, 58.5, 45.6 , 41.1, 27.9, 27.6 , 24.6, 20.7 ; MS (ESI) m/z 337.2 (100 %, [M-I]+).
Figure 112016034146661-pct00069
1,4-디메틸-1-(1-(페닐설포닐)피페리딘-4-일)피페리딘-1-이윰 요오다이드(N-메틸 및 C-메틸은 시스팀): 4-메틸-1'-(페닐설포닐)-1,4'-비피페리딘의 메틸화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 EtOH : CH2Cl2)를 통해 시스 이성질체를 백색 고체(28%)로서 수득하였다. mp 264 - 266℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.74 (m, 3 H), 7.65 (m, 2 H), 3.75 (m, 3 H), 3.53 (d, J = 16.0 Hz, 2 H), 3.16 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.81 (s, 3 H), 2.40 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 1.99 (d, J = 12.0, 2 H), 1.75 (m, 2 H), 1.51 (m, 5 H), 0.87 (d, J = 4.0 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, DMSO-d6) δ 135.8, 133.8, 130.1, 128.0, 59.8, 58.3, 47.2, 45.0, 28.0, 26.9, 24.0, 20.5; MS (ESI) m/z 337.2 (100 %, [M-I]+).
Figure 112016034146661-pct00070
1-(1-((4-메톡시페닐)설포닐)피페리딘-4-일)-1-메틸피롤리딘-1-이윰 요오다이드: 이러한 화합물을 황색 고체(>95%)로서 수득하였다. mp 82 - 85℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.67 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 7.15 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 3.82 (s, 3 H), 3.72 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 3.49 (dd, J = 12.0, 8.0 Hz, 2 H), 3.30 (s, br, 3 H), 2.79 (s, 3 H), 2.17 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.02 (m, 6 H), 1.84 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, DMSO-d6) δ 163.4, 130.3, 126.6, 115.1, 70.1, 63.5, 56.3, 45.4, 43.3, 26.2, 21.3; MS (ESI) m/z 339.2 (100 %, [M-I]+).
Figure 112016034146661-pct00071
1-(1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)-1-메틸피롤리딘-1-이윰 요오다이드: 이러한 화합물을 황색 고체(83%)로서 수득하였다. mp 263 - 266℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.07 (s, 2 H), 3.60-3.43 (m, 5 H), 3.34 (dd, J = 19.2, 8.0 Hz, 2 H), 2.80 (s, 3 H), 2.73 (td, J = 12.6, 2.1 Hz, 2 H), 2.56 (s, 6 H), 2.25 (s, 3 H), 2.05 (m, 6 H), 1.71 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, DMSO-d6) δ 143.1, 140.1, 132.4, 131.6, 70.6, 63.4, 43.4, 43.2, 26.5, 22.8, 21.2, 20.9; MS (ESI) m/z 351.2 (100 %, [M-I]+).
Figure 112016034146661-pct00072
1-메틸-1-(1-(나프탈렌-1-일설포닐)피페리딘-4-일)피롤리딘-1-이윰 요오다이드: 이러한 화합물을 황색 고체(91%)로서 수득하였다. mp 285 - 288℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1 H), 8.29 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1 H), 8.12 (m, 2 H), 7.69 (m, 3 H), 3.90 (d, J = 12.8 Hz, 2 H), 3.46 (dd, J = 9.6, 4.8 Hz, 2 H), 3.26 (m, 3 H), 2.75 (s, 3 H), 2.42 (s, 1 H), 2.02 (m, 7 H), 1.78 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, DMSO-d6) δ 135.2, 134.5, 132.1, 130.8, 129.6, 128.8, 128.6, 127.5, 125.2, 125.0, 70.1, 63.4, 45.0, 43.2, 26.6, 21.2; MS (ESI) m/z 359.2 (100 %, [M-I]+).
V. 3차 아민 하이드로클로라이드 염의 제조를 위한 일반적인 절차
3차 아미드(0.5 mmol)를 소량의 DCM에 용해시키고, 얻어진 용액을 격렬하게 교반시키고, 그 동안 1,4-디옥산 중의 HCl(4 M, 2 mL)을 적가하였다. 용매를 제거하여, 표제 아민 염산염을 추가 정제 없이 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112016034146661-pct00073
1-(1-((4-(디플루오로메톡시)페닐)설포닐)피페리딘-4-일)-4-메틸피페리딘-1-이윰 클로라이드: 이러한 화합물을 백색 고체(>95%)로서 수득하였다. mp 251 - 254℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.08 (s, 1 H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz, 2 H), 6.63 (t, J = 72.4 Hz, 1 H), 3.93 (d, J = 9.9 Hz, 2 H), 3.33 (d, J = 9.8 Hz, 2 H), 3.03 (s, 1 H), 2.70 (s, 2 H), 2.35 (d, J = 11.7 Hz, 4 H), 2.20 - 1.90 (m, 2 H), 1.81 (t, J = 15.8 Hz, 4 H), 1.55 (s, 1 H), 0.99 (d, J = 6.0 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 154.5, 132.4, 129.7, 119.7, 115.2 (트리플렛), 62.8, 49.5, 45.1, 30.7, 29.7, 25.3, 20.9; MS (ESI) m/z 389.2 (100 %, [M-Cl]+).
Figure 112016034146661-pct00074
1-(1-((4-메톡시페닐)설포닐)피페리딘-4-일)-4-메틸피페리딘-1-이윰 클로라이드: 이러한 화합물을 백색 고체(>95%)로서 수득하였다. mp 247 - 250℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.03 (s, 1 H), 7.63 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 6.98 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 3.98 - 3.87 (s, 2 H), 3.85 (s, 3 H), 3.30 (s, 2 H), 2.99 (s, 1 H), 2.72 (s, 2 H), 2.30 (s, 4 H), 2.10 - 1.92 (s, 2 H), 1.78 (m, 4 H), 1.55 (s, 1 H), 1.13 - 0.89 (s, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 163.4, 129.8, 126.8, 114.5, 63.0, 55.8, 49.4, 45.2, 30.8, 29.8, 25.3, 20.9; MS (ESI) m/z 353.2 (100 %, [M-Cl]+).
Figure 112016034146661-pct00075
1-(1-((2,5-디메톡시페닐)설포닐)피페리딘-4-일)-4-메틸피페리딘-1-이윰 클로라이드: 이러한 화합물을 백색 고체(73%)로서 수득하였다. mp 207 - 210℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.90 (s, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 6.96 (d, J = 32.2 Hz, 2 H), 4.16 - 3.90 (s, 2 H), 3.83 (s, 3 H), 3.73 (s, 3 H), 3.24 (d, br, J = 75.5 Hz, 3H), 2.70 (s, 4 H), 2.46 - 2.18 (s, 2 H), 2.16 - 1.90 (s, 2 H), 1.88 - 1.68 (s, 4 H), 1.69 - 1.41 (s, 1 H), 0.96 (s, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 152.98, 150.81, 126.50, 120.42, 115.98, 114.02, 63.41, 57.05, 56.07, 49.66, 45.11, 30.79, 29.68, 26.09, 20.93; MS (ESI) m/z 383.2 (100 %, [M-Cl]+).
1-(1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)-4-메틸피페리딘-1-이윰 클로라이드: 이러한 화합물을 백색 고체(69%)로서 수득하였다. mp 259 - 262℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.73 (s, 1 H), 6.85 (s, 2 H), 3.93 - 3.46 (s, br, 2 H), 3.33 (s, br, 3 H), 2.74 (s, 3 H), 2.46 (s, 6 H), 2.18 (d, J = 4.3 Hz, 5 H), 2.06 - 1.07 (m, 8 H), 0.89 (s, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.99, 140.20, 132.08, 131.01, 63.44, 49.91, 43.52, 30.77, 29.54, 25.70, 22.85, 20.96; MS (ESI) m/z 365.2 (100 %, [M-Cl]+).
도 30은 예시된 화합물의 NMR 스펙트럼을 도시한 것이다.
VI. 환원성 아민화를 위한 일반적인 절차
케톤(또는 아세톤)(1.0 mmol), 아민(1.0 mmol), AcOH(1.0 mmol), 및 CH2Cl2(또는 DCE)(5 ml)의 혼합물을 NaBH(OAc)3(1.5 mmol)을 첨가하기 전에 실온에서 15분 동안 교반하였다. 얻어진 현탁액을 실온에서 20시간 내지 89시간 범위의 반응 시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응을 0℃에서 NaHCO3 포화용액을 적가하여 켄칭시키고, 생성된 2-상 용액을 CH2Cl2(3 x 30 ml)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 용리액으로서 MeOH:CH2Cl2(또는 헥산:EtOAc) 혼합물과 함께 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 환원성 아민화 생성물을 제공하였다.
Figure 112016034146661-pct00076
1-(1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)-4-메틸피페라진: 20시간의 반응 시간과 함께 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온과 1-메틸피페라진 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 무색 겔(74%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.91 (s, 2 H), 3.59 (d, J = 12.6 Hz, 2 H), 2.73 (t, J = 12.3 Hz, 2 H), 2.58 (s, 6 H), 2.55 (s, br, 4 H), 2.49 - 2.35 (s, br, 4 H), 2.36 - 2.29 (s, 1 H), 2.26 (s, 3 H), 2.25 (s, 3 H), 1.84 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 1.59 - 1.34 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.4, 131.8, 131.7, 61.2, 55.3, 48.9, 45.9, 43.7, 27.8, 22.8, 20.9; MS (ESI) m/z 366.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00077
2-(1'-((2-니트로페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올: 38시간의 반응시간과 함께 1-((2-니트로페닐)설포닐)피페리딘-4-온과 2-(피페리딘-4-일)에탄올 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 엷은 황색 고체(37%)로서 수득하였다. mp 130 - 133℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.96 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.74 - 7.61 (m, 2 H), 7.61 - 7.51 (m, 1 H), 3.88 (d, J = 12.9 Hz, 2 H), 3.65 (t, J = 6.6 Hz, 2 H), 2.82 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 2.73 (t, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.33 (tt, J = 11.5, 3.6 Hz, 1 H), 2.14 (t, J = 11.6 Hz, 2 H), 1.84 (d, J = 10.7 Hz, 2 H), 1.73 - 1.65 (m, 2 H), 1.59 (qd, J = 12.3, 4.2 Hz, 3 H), 1.48 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 1.38 (m, 1 H), 1.20 (qd, J = 12.1, 3.8 Hz, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 148.3, 133.5, 131.8, 131.5, 130.9, 124.0, 61.4, 60.5, 49.4, 45.9, 39.4, 32.6, 32.6, 27.7; MS (ESI) m/z 398.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00078
2-(1'-((4-니트로페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올: 71시간의 반응시간과 함께 1-((4-니트로페닐)설포닐)피페리딘-4-온과 2-(피페리딘-4-일)에탄올 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 엷은 황색 고체(20%)로서 수득하였다. mp 126 - 129℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.36 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 3.88 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 3.66 (t, J = 6.5 Hz, 2 H), 2.82 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.33 (td, J = 11.9, 2.2 Hz, 2 H), 2.25 (m, 1 H), 2.14 (t, J = 11.4 Hz, 2 H), 1.87 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 1.66 (m, 4 H), 1.48 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 1.40 (m, 1H), 1.32 - 1.13 (m, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 150.1, 142.4, 128.7, 124.3, 61.2, 60.4, 49.4, 46.1, 39.3, 32.5, 27.3; MS (ESI) m/z 398.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00079
2-(1'-((3-니트로페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올: 64시간의 반응시간과 함께 1-((3-니트로페닐)설포닐)피페리딘-4-온과 2-(피페리딘-4-일)에탄올 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 엷은 황색 고체(25%)로서 수득하였다. mp 128 -131℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.59 (s, 1 H), 8.46 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 8.09 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.77 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 3.92 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 3.68 (t, J = 6.6 Hz, 2 H), 2.84 (d, J = 11.2 Hz, 2 H), 2.35 (t, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.27 (tt, J = 11.6, 3.5 Hz, 1 H), 2.16 (t, J = 11.7 Hz, 3 H), 1.89 (d, J = 11.2 Hz, 2 H), 1.69 (m, 4 H), 1.50 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 1.47 - 1.35 (m, 1 H), 1.23 (qd, J = 12.0, 3.8 Hz, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 148.3, 138.8, 133.0, 130.5, 127.2, 122.6, 61.2, 60.4, 49.4, 46.1, 39.2, 32.5, 32.4, 27.3; MS (ESI) m/z 398.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00080
1'-(메시틸설포닐)-1,4'-비피페리딘: 24시간의 반응시간과 함께 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온과 피페리딘 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 무색 겔(67%)로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (s, 2 H), 3.62 (d, J = 11.7 Hz, 2 H), 2.74 (t, J = 12.1 Hz, 2 H), 2.60 (s, 6 H), 2.52 - 2.40 (s, 4 H), 2.38 - 2.30 (m, 1 H), 2.28 (s, 3 H), 1.85 (d, J = 11.5 Hz, 2 H), 1.56 (m, 4 H), 1.52 - 1.44 (m, 2 H), 1.41 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.4, 140.4, 131.8, 131.8, 62.2, 50.2, 44.1, 27.5, 26.3, 24.6, 22.8, 20.9; MS (ESI) m/z 351.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00081
4-(1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)모르폴린: 89시간의 반응시간과 함께 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온과 모르폴린 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:9 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 무색 겔(74%)로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.92 (s, 2 H), 3.68 (s, 4 H), 3.60 (d, J = 12.9 Hz, 2 H), 2.75 (t, J = 12.3 Hz, 2 H), 2.59 (s, 6 H), 2.55 - 2.45 (s, 4 H), 2.27 (s, 4 H), 1.87 (d, J = 14.5 Hz, 2 H), 1.46 (qd, J = 11.6, 3.4 Hz, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.4, 140.4, 131.9, 131.6, 67.1, 61.5, 49.7, 43.6, 27.7, 22.8, 20.9; MS (ESI) m/z 353.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00082
1'-(메시틸설포닐)-4-페닐-1,4'-비피페리딘: 48시간의 반응시간과 함께 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온과 4-페닐피페리딘 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(2:1 헥산 : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 백색 고체(90%)로서 수득하였다. mp 141 - 144℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 - 7.26 (m, 2 H), 7.25 - 7.16 (m, 3 H), 6.95 (s, 2 H), 3.66 (d, J = 12.5 Hz, 2 H), 3.03 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.78 (t, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.62 (s, 6 H), 2.47 (m, 2 H), 2.30 (s, 3 H), 2.30 - 2.20 (m, 2 H), 1.99 - 1.66 (m, 6 H), 1.56 (qd, J = 12.2, 4.3 Hz, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.5, 131.9, 131.7, 128.4, 126.8, 126.2, 61.9, 50.0, 44.0, 42.9, 33.7, 27.7, 22.8, 21.0; MS (ESI) m/z 427.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00083
4-벤질-1'-(메시틸설포닐)-1,4'-비피페리딘: 48시간의 반응시간과 함께 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온과 4-벤질피페리딘 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(2:1 헥산 : EtOAc)를 통해 이러한 화합물을 밝은 갈색 오일(68%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.36 - 7.22 (m, 2 H), 7.21 - 7.06 (m, 3 H), 6.92 (s, 2 H), 3.61 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.92 (s, 2 H), 2.72 (td, J = 12.5, 2.4 Hz, 2 H), 2.58 (s, 6 H), 2.50 (d, J = 7.0 Hz, 2 H), 2.40-2.26 (s, br, 1 H), 2.28 (s, 3 H), 2.08 (t, J = 17.9 Hz, 1 H), 1.85 (d, J = 12.8 Hz, 2 H), 1.64 (d, J = 12.8 Hz, 2 H), 1.49 (d, J = 11.5 Hz, 3 H), 1.41 - 1.12 (s, br, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.5, 140.4, 131.9, 131.7, 129.1, 128.2, 125.8, 61.9, 49.6, 44.0, 43.1, 38.1, 32.3, 27.6, 22.8, 21.0; MS (ESI) m/z 441.3 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00084
1'-(메시틸설포닐)-3,5-디메틸-1,4'-비피페리딘: 88시간의 반응시간과 함께 3,5-디메틸피페리딘과 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 무색 오일(36%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.92 (s, 2 H), 3.61 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.87 - 2.66 (m, 4 H), 2.59 (s, 6 H), 2.47 - 2.29 (m, 1 H), 2.27 (s, 3 H), 1.82 (d, J = 13.6 Hz, 2 H), 1.74 - 1.39 (m, 7 H), 0.81 (d, J = 5.8 Hz, 6 H), 0.47 (q, J = 11.4 Hz, 1 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.4, 140.4, 131.8, 131.8, 61.8, 57.2, 44.1, 42.3, 31.4, 27.5, 22.8, 20.9, 19.7; MS (ESI) m/z 379.3 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00085
4-이소프로필-1'-(메시틸설포닐)-1,4'-비피페리딘: 30시간의 반응시간과 함께 4-이소프로필피페리딘과 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 이러한 화합물을 황색 오일(46%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.91 (s, 2 H), 3.60 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.90 (dd, J = 11.5 Hz, 2 H), 2.72 (t, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.59 (d, J = 2.3 Hz, 6 H), 2.38 - 2.29 (m, 1 H), 2.28 (s, 3 H), 2.06 (t, J = 10.6 Hz, 2 H), 1.85 (d, J = 11.2 Hz, 2 H), 1.63 (d, J = 11.3 Hz, 2 H), 1.49 (td, J = 12.1, 4.1 Hz, 2 H), 1.44 - 1.32 (m, 1 H), 1.30 - 1.14 (m, 2 H), 0.95 (m, 1 H), 0.83 (d, J = 6.7 Hz, 6 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.4, 140.4, 131.8, 131.7, 61.8, 50.0, 44.0, 42.6, 32.4, 29.6, 27.7, 22.8, 20.9, 19.8; MS (ESI) m/z 393.3(100 %, [M+H]+).
VII. 1'-( 페닐설포닐 )-2-(2-( 프로프 -2-인-1- 일옥시 )에틸)-1,4'- 비피페리딘과 1'-( 페닐설포닐 )-2-( 프로프 -2-인-1-일)-1,4'- 비피페리딘의 합성
Figure 112016034146661-pct00086
Figure 112016034146661-pct00087
2-(1'-(페닐설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-2-일)에탄-1-올: 1-(페닐설포닐)피페리딘-4-온(0.6004 g, 2.51 mmol) 및 2-(피페리딘-2-일)에탄-1-올(0.9701 g, 7.52 mmol)을 톨루엔(5 mL)에 용해시키고, 이후에 AcOH(0.62 ml, 10.84 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 3시간 동안 교반하고, 이후에, 실온으로 냉각시켰다. 메탄올(5 mL) 중의 NaCNBH3(0.2031 g, 3.22 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응을 0℃에서 NaHCO3 포화용액(20 mL)에 의해 켄칭시켰다. 얻어진 2-상 용액을 CH2Cl2(3 x 25 mL)에 의해 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 용리액으로서 1: 19 MeOH:CH2Cl2의 혼합물과 함께 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 환원성 아민화 생성물을 황색 오일(0.4445 g, 50%)로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.65 - 7.57 (m, 1 H), 7.56 - 7.47 (m, 2 H), 3.86 (dd, J = 11.1, 4.7 Hz, 3 H), 3.64 (dt, J = 11.1, 5.6 Hz, 1 H), 3.05 - 2.87 (m, 3 H), 2.44 - 2.30 (m, 2 H), 2.26 (td, J = 12.1, 2.5 Hz, 1 H), 1.88 - 1.29 (m, 12 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 135.9, 132.9, 129.1, 127.6, 60.7, 56.7, 56.0, 46.1, 45.8, 44.9, 31.1, 29.7, 28.5, 25.0, 24.2, 22.4; MS (ESI) m/z 353.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00088
Figure 112016034146661-pct00089
1'-(페닐설포닐)-2-(2-(프로프-2-인-1-일옥시)에틸)-1,4'-비피페리딘: 2-(1'-(페닐설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-2-일)에탄-1-올(0.0830 g, 0.24 mmol)을 무수 THF(2 mL)에 용해시키고, 이후에 0℃에서 NaH(60%, 0.0192 g, 0.48 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 플라스크를 아르곤 흐름에 의해 바로 수세하고, 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀에 의해 시일링하였다. 반응 용액을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 프로파길 브로마이드(톨루엔 중 80%, 0.075 ml, 0.67 mmol)를 시린지를 통해 첨가하였다. 반응 용액을 0℃에서 다른 30분 동안 교반하고, 실온으로 가온시키고, 무수 THF(1 mL) 중 NaH(60%, 0.0175 g, 0.44 mmol)의 제2 부분을 도입하기 전에 3시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 물(10 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시키고, 이후에 CH2Cl2(3 x 10 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 실리카겔(1:19 CH3OH : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제한 후에, 생성물을 황색 겔(0.0132 g, 18%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.82 - 7.69 (m, 2 H), 7.64 - 7.56 (m, 1 H), 7.53 (m, 2 H), 4.06 (d, J = 2.4 Hz, 2 H), 3.83 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 3.58 - 3.37 (m, 2 H), 2.73 (dd, J = 39.3, 10.5 Hz, 3 H), 2.35 (t, J = 2.4 Hz, 1 H), 2.25 (dtd, J = 26.4, 12.1, 11.7, 2.9 Hz, 3 H), 1.88 - 1.70 (m, 4 H), 1.69 - 1.19 (m, 8 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.0, 132.8, 129.1, 127.6, 79.6, 74.4, 67.1, 58.2, 55.5, 55.0, 46.4, 45.9, 45.4, 30.3, 29.8, 29.7, 25.6, 24.2, 23.0; MS (ESI) m/z 391.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00090
1'-(페닐설포닐)-2-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘: 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 불꽃 건조된 플라스크를 아르곤에 의해 퍼징하고, 이후에 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀으로 시일링하였다. 무수 CH2Cl2(1 mL) 및 옥살릴 클로라이드(0.039 ml, 0.45 mmol)를 시린지를 통해 순차적으로 첨가하였다. 얻어진 용액을 드라이 아이스-아세톤 베쓰에서 -78℃로 냉각시켰다. 무수 DMSO(0.066ml, 0.93 mmol)를 도입하고, 용액을 -78℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 1 mL 무수 CH2Cl2 중의 2-(1'-(페닐설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-2-일)에탄올(0.1344 g, 0.38 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후에, Et3N(0.20 mL, 1.44 mmol)을 첨가하고, 15분 후에, 반응 용액을 실온으로 가온시키고, 2시간 동안 교반하고, 이후에 6 mL 물에 의해 켄칭시켰다. NaHCO3 포화용액(10 mL)을 첨가하고, 얻어진 용액을 CH2Cl2(3 x 20 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 알데하이드 중간체를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계를 위해 직접적으로 사용하였다.
무수 CH2Cl2(2 mL) 중의 트리페닐포스핀(0.4429 g, 1.69 mmol)의 용액에, CH2Cl2(1 mL) 중의 카본 테트라브로마이드(0.2653 g, 0.80 mmol)의 용액을 실온에서 적가하고, 얻어진 용액을 30분 동안 교반하고, 그 후에 Et3N(0.45 mL, 3.39 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 이후에, 용액을 -78℃로 냉각시키고, CH2Cl2(2 mL) 중에 용해된 상기 알데하이드 중간체를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하고, 이후에 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 농축시키고, 플래시 크로마토그래피(2회; 1:19 CH3OH : CH2Cl2 이후 1:1 헥산 : EtOAc)에 의해 정제하여 상응하는 디브로마이드(0.0505 g)를 무색 오일로서 수득하였다.
상기 디브로마이드를 무수 THF(1 mL)에 용해시키고, -78℃로 냉각시켰다. n-BuLi(0.090 mL, 헥산 중 2.5 M, 0.225 mmol)를 시린지를 통해 도입하였다. 반응 혼합물을 동일한 온도에서 2.5시간 동안 교반하고, NH4Cl(15 mL) 포화 용액을 첨가하여 켄칭시켰다. 이후에, 혼합물을 EtOAc(3 x 15 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 플래시 크로마토그래피(1:1 헥산 : EtOAc)에 의해 정제하여 최종 알킨(0.0165 g, 12% 3 단계)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.82 - 7.70 (m, 2 H), 7.63 - 7.57 (m, 1 H), 7.57 - 7.50 (m, 2 H), 3.85 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 2.78 - 2.57 (m, 3 H), 2.36 - 2.19 (m, 4 H), 1.94 (t, J = 2.7 Hz, 1 H), 1.89 - 1.39 (m, 9 H), 1.35 - 1.19 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.2, 232.7, 129.0, 127.6, 82.1, 70.0, 56.4, 55.5, 46.5, 46.0, 45.2, 31.8, 30.1, 26.0, 24.2, 23.2, 21.7; MS (ESI) m/z 347.2 (100 %, [M+H]+).
VIII. 1'-( 페닐설포닐 )-4-(2-( 프로프 -2-인-1- 일옥시 )에틸)-1,4'- 비피페 리딘과 1'-(페닐설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘의 합성
Figure 112016034146661-pct00091
2-(1'-(페닐설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올: 1-(페닐설포닐)피페리딘-4-온 (0.4923 g, 2.06 mmol) 및 AcOH (0.24 mL, 4.20 mmol)를 톨루엔(4 mL)에 용해시키고, 얻어진 용액을 환류 조건 하에서 30분 동안 교반하고, 이후에 2-(피페리딘-4-일)에탄올(0.2562 g, 1.99 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 조건 하엣 2시간 이상 동안 교반하고, 이후에 실온으로 냉각시켰다. 메탄올 (4 mL) 중의 NaCNBH3(0.1590 g, 2.52 mmol)를 적가하고, 용액을 50분 동안 교반하였다. 반응을 0℃에서 NaHCO3 포화용액(10 mL)에 의해 켄칭하였다. 얻어진 용액을 CH2Cl2(3 x 15 mL)에 의해 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 실리카겔(1:19 CH3OH : CH2Cl2) 상에서의 플래시 크로마토그래피로 요망되는 생성물을 황색 오일(0.1613 g, 21%)로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.78 - 7.72 (m, 2 H), 7.62 - 7.56 (m, 1 H), 7.53 (ddt, J = 8.4, 6.7, 1.4 Hz, 2 H), 3.85 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 3.66 (t, J = 6.6 Hz, 2 H), 2.81 (d, J = 11.6 Hz, 2 H), 2.32 - 2.04 (m, 5 H), 1.83 (d, J = 13.0 Hz, 3 H), 1.75 - 1.54 (m, 4 H), 1.49 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 1.45 - 1.32 (m, 1 H), 1.29 - 1.14 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.1, 132.7, 129.0, 127.6, 61.4, 60.4, 49.4, 46.1, 39.3, 32.5, 27.3; MS (ESI) m/z 353.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00092
Figure 112016034146661-pct00093
1'-(페닐설포닐)-4-(2-(프로프-2-인-1-일옥시)에틸)-1,4'-비피페리딘: 2-(1'-(페닐설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올(0.0585 g, 0.17 mmol)을 무수 THF (1 mL)에 용해시키고, 이후에, 플라스크를 아르곤 흐름에 의해 바로 수세하고, 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀에 의해 시일링하였다. 무수 THF(0.5 mL) 중에 현탁된 KH(미네랄 오일 중 30%, 0.0275 g, 0.21 mmol)를 실온에서 시린지를 통해 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 45분 동안 교반하고, 프로파길 브로마이드(톨루엔 중 80%, 0.038 mL, 0.43 mmol)를 시린지를 통해 적가하였다. 용액을 실온에서 7.5시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시킨 후에, 잔부를 실리카겔(1:19 CH3OH : CH2Cl2) 상에 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 요망되는 생성물을 황색 겔(0.0072 g, 11%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.83 - 7.69 (m, 2 H), 7.63 - 7.57 (m, 1 H), 7.57 - 7.49 (m, 2 H), 4.11 (d, J = 2.3 Hz, 2 H), 3.95 - 3.80 (m, 2 H), 3.53 (t, J = 6.4 Hz, 2 H), 2.85 (d, J = 10.7 Hz, 2 H), 2.41 (t, J = 2.4 Hz, 1 H), 2.22 (m, 5 H), 1.87 (d, J = 12.6 Hz, 2 H), 1.79 - 1.59 (m, 4 H), 1.52 (q, J = 6.5 Hz, 2 H), 1.45 - 1.36 (m, 1 H), 1.25 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.06, 132.74, 129.01, 127.63, 79.89, 74.18, 67.58, 61.57, 58.05, 49.34, 46.08, 35.88, 32.57, 32.15, 27.11; MS (ESI) m/z 391.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00094
1'-(페닐설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘: 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 불꽃 건조된 플라스크를 아르곤에 의해 퍼징시키고, 이후에 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀으로 시일링하였다. 무수 CH2Cl2(1.5 mL) 및 옥살릴 클로라이드(0.10 mL, CH2Cl2 중 2M, 0.20 mmol)를 시린지를 통해 순차적으로 첨가하였다. 얻어진 용액을 드라이 아이스-아세톤 베쓰에서 -78℃로 냉각시켰다. 무수 DMSO(0.030 mL, 0.42 mmol)를 도입하고, 용액을 -78℃에서 40분 동안 교반하였다. 1.5 mL 무수 CH2Cl2 중의 2-(1'-(페닐설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올(0.0570 g, 0.16 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반한 후에, Et3N(0.085 mL, 0.61 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 실온으로 가온시키고, 2시간 동안 교반하고, 이후에 25 mL NaHCO3 포화용액에 의해 켄칭시켰다. 얻어진 용액을 CH2Cl2(3 x 25 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 알데하이드 중간체를 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계를 위해 직접적으로 사용하였다.
베스트만 오히라(Bestmann Ohira) 시약(디메틸 (1-디아조-2-옥소프로필)포스포네이트)를 문헌[Pietruszka, J. et al. [Pietruszka, J. et al. Synthesis 2006, 24, 4266-4268]]에 보고된 실험 절차에 따라 미리 제조하였다. 베스트만 오히라 시약(0.0441 g, 0.023 mmol) 및 메탄올(2 mL)을 0℃에서 혼합하고, 이후에 알데하이드(0.5 mL CH2Cl2에 용해됨) 및 K2CO3(0.0523 g, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 반응 용액을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 슬러리 용액을 여과하고, 분별 깔대기에 붓고, 25 mL CH2Cl2로 희석시키고, 1N NaOH(25 mL)에 의해 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔부를 실리카겔(1:9 CH3OH : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제된 생성물을 황색 고체(0.0282 g, 50%)로서 수득하였다. 생성물이 충분히 순수하지 않는 경우에, 이를 소량의 헥산으로 초음파처리하고, 헥산층의 상청액을 유리 피펫에 의해 제거하여 불순물을 제거하였다. mp 109 - 111℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.82 - 7.73 (m, 2 H), 7.67 - 7.59 (m, 1 H), 7.55 (dd, J = 8.4, 7.0 Hz, 2 H), 3.88 (d, J = 12.0 Hz, 2 H), 2.84 (s, 2 H), 2.35 - 2.03 (m, 7 H), 1.97 (t, J = 2.7 Hz, 1 H), 1.92 - 1.74 (m, 4 H), 1.67 (tt, J = 15.6, 7.8 Hz, 2 H), 1.46 (s, br, 1 H), 1.30 (s, br, 2 H).; 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 136.1, 132.8, 129.0, 127.6, 82.5, 69.5, 61.6, 49.1, 46.0, 35.4, 31.5, 27.0, 25.2; MS (ESI) m/z 347.2 (100 %, [M+H]+).
IX. (3-((4- 메틸 -[1,4'- 비피페리딘 ]-1'-일) 설포닐 )-4-( 프로프 -2-인-1- 일 옥시)페닐)(페닐)메탄온의 합성
Figure 112016034146661-pct00095
Figure 112016034146661-pct00096
(4-메톡시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페닐)(페닐)메탄온: 자석 교반 막대가 장착된 25 ml 불꽃 건조된 플라스크에 1'-((5-브로모-2-메톡시페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘(0.3686 g, 0.86 mmol) 및 무수 THF(2.5 mL)를 첨가하였다. 플라스크를 아르곤에 의해 퍼징시키고, 이후에 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀으로 시일링하였다. 얻어진 용액을 드라이 아이스-아세톤 베쓰에서 -78℃로 냉각시키고, n-BuLi(0.68 mL, 헥산 중 2.5 M, 1.70 mmol)를 시린지를 통해 도입하였다. 반응 혼합물을 이러한 온도에서 50분 동안 교반하였다. 벤즈알데하이드(0.125 mL, 1.23 mmol)를 시린지를 통해 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, 이후에 이를 실온으로 가온시키고, 3시간에 걸쳐 교반하였다. 반응을 이후에 20 mL NaHCO3 포화용액에 의해 켄칭시키고, 얻어진 용액을 CH2Cl2(3 x 20 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 플래시 크로마토그래피(1:19 메탄올 : CH2Cl2)에 의해 정제하여 알코올 중간체를 무색 겔로서 수득하였다.
망간(IV) 디옥사이드(2.0087 g, 22.32 mmol)를 CH2Cl2(7 mL) 중의 알코올 중간체의 용액에 첨가하였다. 현탁액 용액을 실온에서 36시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 감압 하에 농축시켜 요망되는 생성물을 백색 고체(0.2329 g, 60% 2단계)로서 수득하였다. mp 52 - 56℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.33 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 8.04 (dd, J = 8.6, 2.2 Hz, 1 H), 7.82 - 7.67 (m, 2 H), 7.67 - 7.54 (m, 1 H), 7.48 (m, 2 H), 7.09 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 4.00 (s, 3 H), 3.91 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.79 (d, J = 11.1 Hz, 2 H), 2.63 (td, J = 12.5, 2.4 Hz, 2 H), 2.30 (tt, J = 11.6, 3.2 Hz, 1 H), 2.12 (t, J = 10.2 Hz, 2 H), ), 1.81 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 1.60 - 1.48 (m, 4 H), 1.29 (m, 1 H), 1.18 (qd, J = 11.6, 7.9 Hz, 2 H), 0.88 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 194.3, 159.9, 137.2, 136.4, 133.8, 132.6, 129.9, 129.8, 128.5, 127.0, 112.0, 61.8, 56.4, 49.5, 45.9, 34.6, 31.0, 28.0, 21.9; MS (ESI) m/z 457.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00097
(4-하이드록시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페닐)(페닐)메탄온: 15 mL 플라스크에서 LiCl(0.0672 g, 1.6 mmol)을 진공 하에 불꽃 건조시키고, 이후에, 플라스크를 아르곤으로 다시 채웠다. 무수 DMF(3 mL) 중의 (4-메톡시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페닐)(페닐)메탄온(0.0733 g, 0.16 mmol)을 시린지를 통해 플라스크에 첨가하였다. 이후에, 플라스크에 아르곤 벌룬이 장착된 환류 콘덴서를 장착하였다. 반응을 환류 조건 하에서 21.5시간 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후에, 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, CH2Cl2에 의해 세척하였다. 용매를 증발시킨 후에, 잔부를 실리카겔(1:19 메탄올 : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 요망되는 생성물을 오렌지색의 고체(0.0560 g, 79%)를 제공하였다. mp 153 - 156℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 7.91 (dd, J = 8.6, 2.2 Hz, 1 H), 7.75 - 7.69 (m, 2 H), 7.63 - 7.55 (m, 1 H), 7.48 (ddd, J = 8.2, 6.6, 1.3 Hz, 2 H), 7.21 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 3.94 (d, J = 12.9 Hz, 2 H), 3.32 (d, J = 11.3 Hz, 2 H), 3.06 (t, J = 12.3 Hz, 1 H), 2.79 - 2.50 (m, 4 H), 2.25 (d, J = 12.3 Hz, 2 H), 1.83 (s, br, 6 H), 1.57 (m, 1 H), 0.98 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 194.3, 161.0, 137.4, 136.9, 133.2, 132.5, 129.7, 128.5, 128.1, 122.6, 119.1, 62.7, 49.5, 44.8, 30.9, 29.1, 26.0, 20.7; MS (ESI) m/z 443.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00098
(3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일옥시)페닐)(페닐)메탄온: (4-하이드록시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페닐)(페닐)메탄온(0.1103 g, 0.25 mmol)을 무수 DMF(1.5 mL)에 용해시키고, 이후에 0℃에서 NaH(95%, 0.0095 g, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 플라스크를 아르곤 흐름에 의해 바로 수세하고, 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀에 의해 시일링하였다. 반응 용액을 실온으로 가온시키고, 30분 동안 교반하였다. 이후에, 용액을 0℃로 냉각시키고, 프로파길 브로마이드(톨루엔 중 80%, 0.032 ml, 0.29 mmol)를 시린지를 통해 첨가하였다. 용액을 실온으로 점진적으로 가온시키고, 17시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 CH2Cl2(25 mL)로 희석시키고, NaHCO3 포화용액(25 ml) 및 20% LiCl 용액(25 mL)에 의해 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 실리카겔(1:19 메탄올 : CH2Cl2) 상에서의 플래시 크로마토그래피로 요망되는 생성물을 황색 오일(0.0290 g, 24%)로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.37 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 8.07 (dd, J = 8.6, 2.2 Hz, 1 H), 7.76 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 2 H), 7.67 - 7.58 (m, 1 H), 7.51 (t, J = 7.7 Hz, 2 H), 7.24 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 4.93 (d, J = 2.4 Hz, 2 H), 3.96 (d, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.89 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.72 (t, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.62 (t, J = 2.3 Hz, 1 H), 2.46 (s, 1 H), 2.24 (t, J = 11.4 Hz, 2 H), 1.90 (d, J = 11.4 Hz, 2 H), 1.73 - 1.56 (m, 4 H), 1.44 - 1.27 (m, 3 H), 0.93 (d, J = 5.8 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 194.2, 157.6, 137.0, 136.1, 133.9, 132.7, 130.8, 129.8, 128.5, 127.7, 113.5, 77.4, 77.4, 62.0, 56.8, 49.4, 45.9, 34.2, 30.9, 27.8, 21.7; MS (ESI) m/z 481.2 (100 %, [M+H]+).
X. 1'-(3- 아지도 -4-( 프로프 -2-인-1- 일옥시 ) 벤질 )-4- 메틸 -1,4'- 비피페리딘의 합성
Figure 112016034146661-pct00099
Figure 112016034146661-pct00100
1'-(3-아지도-4-(프로프-2-인-1-일옥시)벤질)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 메틸 3-아지도-4-(프로프-2-인-1-일옥시)벤조에이트(0.1085 g,0.47 mmol)를 무수 CH2Cl2(2 mL)에 용해시키고, 용액을 -78℃로 냉각시켰다. DIBAL-H(헥산 중 1.2M, 1.1 mL, 1.32 mmol)를 시린지를 통해 적가하였다. 이후에, 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후에, 1.5 mL CH3OH 및 15 mL HCl(2.5 M)를 서서히 첨가하여 켄칭시켰다. 얻어진 용액을 CH2Cl2(4 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 (3-아지도-4-(프로프-2-인-1-일옥시)페닐)메탄올을 수득하였고, 이를 다음 단계를 위해 직접적으로 사용하였다.
CH2Cl2(2 mL) 중의 (3-아지도-4-(프로프-2-인-1-일옥시)페닐)메탄올(상기)의 ㅇ용액을 피리디늄 클로로크로메이트(PCC)(0.3103 g, 1.44 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 1:1 헥산:EtOAc로 희석시켰다. 얻어진 현탁액을 짧은 실리카겔 패드를 통해 여과하고, 여과된 케이크를 1:1 Et2O : 헥산 및 Et2O에 의해 세척하였다. 용매를 증발시켜 3-아지도-4-(프로프-2-인-1-일옥시)벤즈알데하이드를 수득하고, 이를 양성자 NMR에 의해 확인하였고, 다음 단계를 위해 직접적으로 사용하였다.
3-메틸-1,4'-비피페리딘(0.0865 g, 0.048 mmol), 3-아지도-4-(프로프-2-인-1-일옥시)벤즈알데하이드(상기), CH2Cl2(2 mL), AcOH(0.027mL, 0.47 mmol) 및 NaBH(OAc)3(0.1425 g, 0.67 mmol)의 혼합물을 실온에서 28시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응을 0℃에서 NaHCO3 포화용액(20 ml)에 의해 켄칭시키고, 형성된 2-상 용액을 CH2Cl2(4 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 실리카겔(1:9 메탄올 : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피하여 요망되는 생성물을 황색 겔(0.0378 g, 3단계에 걸쳐 22%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.10 - 6.87 (m, 3 H), 4.72 (d, J = 2.4 Hz, 2 H), 3.38 (s, 2 H), 3.03 - 2.85 (m, 4 H), 2.51 (t, J = 2.4 Hz, 1 H), 2.41 (s, 1 H), 2.24 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 1.93 (td, J = 11.9, 2.2 Hz, 2H), 1.84 (d, J = 9.9 Hz, 2 H), 1.61 (m, 5 H), 1.37 (s, 2 H), 0.91 (d, J = 5.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 148.5, 133.0, 128.9, 125.9, 120.9, 114.1, 78.0, 76.1, 62.7, 61.9, 56.9, 53.1, 49.4, 33.8, 30.8, 27.5, 21.7; MS (ESI) m/z 368.2 (100 %, [M+H]+).
XI. 1'-((5- 아지도 -2-( 프로프 -2-인-1- 일옥시 )페닐) 설포닐 )-4- 메틸 -1,4'-비피페리딘
Figure 112016034146661-pct00101
Figure 112016034146661-pct00102
벤질 (4-메톡시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페닐)카바메이트: p-아니시딘-3-설폰산(1.2215 g, 6.02 mmol), 물(10 mL), 벤질 클로로포르메이트(1.03 mL, 7.21 mmol), K2CO3(2.0854 g, 15.11 mmol) 및 CHCl3(10 mL)를 플라스크에 순차적으로 첨가하였다. 2-상 용액을 71시간 동안 격렬하게 교반하였다. 75 mL 물을 첨가한 후, 용액을 CHCl3(2 x 75 mL)에 의해 세척하고, 수용액을 진공 중에 농축시켜 5-(((벤질옥시)카보닐)아미노)-2-메톡시벤젠설포네이트 칼륨 염을 황색 고체로서 수득하였다.
염을 DMF(20 mL)과 혼합하고, 현탁액을 0℃로 냉각시켰다. SOCl2(1.80 mL, 25.02 mmol)를 15분 내에 적가하였다. 이후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 얼음물(50 mL)에 붓고, CH2Cl2(3 x 60 ml)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 벤질 (3-(클로로설포닐)-4-메톡시페닐)카바메이트를 형성시키고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
4-메틸-1,4'-비피페리딘(1.2090 g, 6.64 mmol), 벤질 (3-(클로로설포닐)-4-메톡시페닐)카바메이트(상기), N,N-디이소프로필 에틸아민(3 mL, 18.19 mmol), 및 CH2Cl2(15 mL)를 실온에서 21시간 동안 교반하였다. 이후에, 용액을 CH2Cl2(20 mL)로 희석시키고, NaHCO3 포화용액(35 mL) 및 염수(35 mL)에 의해 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 실리카겔(1:19 메탄올 : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 요망되는 생성물을 백색 고체(2.3318 g, 77% 3단계)로서 수득하였다. mp 124 - 127℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80 (s, br, 1 H), 7.67 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 7.43 - 7.30 (m, 4 H), 6.95 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 6.89 (s, 1 H), 5.18 (s, 2 H), 3.89 (s, J = 3.4 Hz, 1 H), 3.87 (s, 3 H), 2.79 (d, J = 11.5 Hz, 2 H), 2.66 - 2.53 (m, 2 H), 2.29 (tt, J = 11.6, 3.5 Hz, 1 H), 2.19 - 2.06 (m, 2 H), 1.96 - 1.72 (m, 3 H), 1.68 - 1.48 (m, 4 H), 1.31 (ddt, J = 14.5, 6.7, 3.7 Hz, 1 H), 1.25 - 1.10 (m, 2 H), 0.89 (d, J = 6.3 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 153.6, 153.0, 135.9, 130.8, 128.6, 128.4, 128.3, 126.9, 125.1, 122.2, 113.2, 67.2, 61.8, 56.4, 49.5, 45.9, 34.6, 31.1, 27.9, 21.9; MS (ESI) m/z 502.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00103
4-메톡시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)아닐린: 플라스크에 메탄올 (6 mL), 벤질 (4-메톡시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페닐)카바메이트(0.5270 g, 1.05 mmol), 및 3 스패튤라 탄소상 팔라듐(10 중량%)을 첨가하였다. 플라스크를 고무 셉텀으로 시일링하고, 이후에 진공을 이용하여 공기를 배기시키고, 수소 벌룬을 사용하여 수소를 다시 채웠다. 반응 혼합물을 27시간 동안 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, CH2Cl2에 의해 세척하였다. 용매를 증발시켜 생성물을 황색 고체(0.3591 g, 93%)로서 수득하였다. mp 54 - 57℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.24 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 6.89 - 6.79 (m, 2 H), 3.91 (d, J = 13.0 Hz, 2 H), 3.84 (s, 3 H), 3.59 (s, 2 H), 2.84 (d, J = 9.3 Hz, 2 H), 2.60 (t, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.36 (t, J = 11.9 Hz, 1 H), 2.19 (td, J = 11.6, 10.0, 2.7 Hz, 2 H), 1.84 (d, J = 12.5 Hz, 2 H), 1.70 - 1.50 (m, 4 H), 1.35 (s, br, 1 H), 1.26 (m, 2 H), 0.92 (d, J = 6.3 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 149.6, 140.0, 126.8, 120.8, 117.7, 114.3, 62.7, 56.7, 49.2, 45.4, 32.3, 30.1, 26.8, 21.2; MS (ESI) m/z 502.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00104
4-아지도-2-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페놀: 환류 콘덴서가 장착된 25 mL 불꽃 건조된 플라스크에 4-메톡시-3-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)아닐린(0.2546 g, 0.69 mmol), 무수 톨루엔(6 mL), 무수 CH2Cl2(1.5 mL) 및 BBr3(CH2Cl2 중 1M, 3.5 mL, 3.5 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 70℃에서 오일 베쓰에서 3시간 동안 수행하고, 이후에 0℃로 냉각시키고, 6 mL 메탄올에 의해 켄칭하였다. 용액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 메탄올을 세척하였다. 용매를 증발시킨 후에, 잔부를 실리카겔(1.5:8.5 메탄올 : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 탈메탈화된 생성물을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.79 (d, J = 2.7 Hz, 1 H), 7.51 (dd, J = 8.8, 2.7 Hz, 1 H), 7.13 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 3.95 (d, J = 13.2 Hz, 2 H), 3.49 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.40 (m, 1 H), 3.26 (m, 2 H), 3.05 (t, J = 13.7 Hz, 2 H), 2.82 (t, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.21 (dd, J = 11.6, 3.3 Hz, 2 H), 1.88 (d, J = 14.7 Hz, 2 H), 1.75 (d, J = 14.2 Hz, 3 H), 1.53 (q, J = 12.7 Hz, 2 H), 0.94 (d, J = 6.2 Hz, 3 H); 13C NMR (100 MHz, 메탄올-d4) δ 155.9, 129.3, 125.2, 125.0, 121.6, 118.8, 62.9, 49.8, 44.5, 31.1, 28.5, 26.3, 20.0.
탈메틸화된 생성물(상기)을 함유한 플라스크에 6 M HCl(3 mL), THF(3 mL) 및 DMF(3 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, H2O(1 mL) 중 NaNO2(0.0612 g, 0.89 mmol)를 5부에 조금씩 첨가하였다. 반응 용액을 0℃에서 40분 동안 교반하고, H2O(1 mL) 중의 NaN3(0.0699 g, 1.08 mmol)을 적가하였다. 이후에, 얻어진 용액을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하고, 이후에 반응 용액을 물(10 mL)로 희석시키고, 1M NaOH 용액에 의해 염기화하였다. 얻어진 용액을 CH2Cl2(3 x 25 mL)에 의해 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 실리카겔(1:9 메탄올 : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 요망되는 생성물(0.1921 g, 73% 2단계)을 녹색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.15 (dd, J = 2.1, 1.0 Hz, 1 H), 7.12 - 7.08 (m, 2 H), 3.85 (d, J = 12.5 Hz, 2 H), 3.05 (d, J = 10.9 Hz, 2 H), 2.67 (t, J = 11.8 Hz, 1 H), 2.51 (td, J = 12.4, 2.4 Hz, 2 H), 2.40 (t, J = 10.4 Hz, 2 H), 2.04 (d, J = 11.1 Hz, 2 H), 1.83 - 1.61 (m, 4 H), 1.46 (dt, J = 19.6, 7.8 Hz, 3 H), 0.91 (d, J = 5.5 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 152.8, 132.1, 125.9, 121.3, 120.5, 118.8, 61.8, 49.4, 45.4, 32.7, 30.1, 26.5, 21.3; MS (ESI) m/z 380.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00105
1'-((5-아지도-2-(프로프-2-인-1-일옥시)페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 4-아지도-2-((4-메틸-[1,4'-비피페리딘]-1'-일)설포닐)페놀(0.1190 g, 0.31 mmol)을 무수 DMF(2.5 mL)에 용해시키고, 0℃에서 NaH(60%, 0.163 g, 0.41 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 아르곤 흐름에 의해 바로 수세하고, 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀에 의해 시일링하였다. 반응 용액을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 프로파길 브로마이드(톨루엔 중 80%, 0.035 mL, 0.31 mmol)를 시린지를 통해 첨가하였다. 용액을 실온으로 점진적으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 이후에, NaHCO3 포화용액(20 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시키고, EtOAc(3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(40 mL) 및 염수(40 mL)로 세척하고, 그 후에, 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 실리카겔(1:19 메탄올 : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래하여 요망되는 생성물(0.0442g, 34%)을 황색 겔을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.57 (dd, J = 2.1, 1.1 Hz, 1 H), 7.17 - 7.07 (m, 2 H), 4.77 (d, J = 2.4 Hz, 2 H), 3.90 (d, J = 12.9 Hz, 2 H), 2.80 (d, J = 11.3 Hz, 2 H), 2.66 (td, J = 12.5, 2.4 Hz, 2 H), 2.54 (t, J = 2.4 Hz, 1 H), 2.34 (tt, J = 11.6, 3.5 Hz, 1 H), 2.15 (td, J = 11.5, 2.7 Hz, 2 H), 1.90 - 1.75 (m, 2 H), 1.71 - 1.52 (m, 4 H), 1.42 - 1.27 (m, 1 H), 1.27 - 1.11 (m, 2 H), 0.88 (d, J = 6.3 Hz, 3 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 151.7, 133.8, 129.5, 124.2, 122.0, 115.9, 77.3, 76.9, 61.9, 57.2, 49.4, 46.0, 34.4, 31.0, 27.8, 21.9; MS (ESI) m/z 418.2 (100 %, [M+H]+).
XII. 아릴 아지드를 함유한 1'-( 페닐설포닐 )-4-( 프로프 -2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘 화합물의 합성
Figure 112016034146661-pct00106
합성 실험 절차는 1'-((4-아지도페닐)설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘의 제조에 의해 나타낸다.
Figure 112016034146661-pct00107
1-((4-니트로페닐)설포닐)피페리딘-4-온을 상기 상세한 특징을 갖는 설포닐 클로라이드 및 아민 하이드로클로라이드 염으로부터 설폰아미드의 제조를 위한 일반적인 절차에 따라 제조하였다.
Figure 112016034146661-pct00108
2-(1'-((4-니트로페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올을 상기 상세한 특징을 갖는 환원성 아민화를 위한 일반적인 절차에 따라 제조하였다.
Figure 112016034146661-pct00109
2-(1'-((4-아미노페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올: 10 mL 플라스크에 2-(1'-((4-니트로페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올(0.1002 g, 0.25 mmol), 메탄올(3.5 mL) 및 1 스패튤라 탄소상 팔라듐(10 중량%)을 첨가하였다. 플라스크를 고무 셉텀으로 시일링하고, 이후에 진공을 이용하여 공기를 배기시키고, 수소 벌룬을 사용하여 수소를 다시 채웠다. 반응 혼합물을 21시간 동안 교반하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, CH2Cl2에 의해 세척하였다. 용매를 증발시켜 생성물을 황색 고체(0.0815 g, 88%)로서 수득하였다. mp 59 - 62℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.53 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 6.70 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 4.15 (s, 2 H), 3.80 (dt, J = 10.9, 3.1 Hz, 2 H), 3.68 (t, J = 6.7 Hz, 2 H), 2.82 (d, J = 10.7 Hz, 2 ), 2.30 - 2.06 (m, 5 H), 1.83 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 1.67 (m, 4 H), 1.50 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 1.45 - 1.35 (m, 1 H), 1.35 - 1.15 (m, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 150.5, 129.8, 124.2, 113.9, 61.6, 60.5, 49.4, 46.1, 39.3, 32.6, 32.5, 27.3; MS (ESI) m/z 368.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00110
2-(1'-((4-아지도페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올: 2-(1'-((4-아미노페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올(0.1822 g, 0.50 mmol)을 함유한 25 mL 플라스크에 6M HCl(2 mL), THF(2 mL) 및 DMF(2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, H2O(0.7 mL) 중의 NaNO2(0.0445 g, 0.64 mmol)를 5분에 적가하였다. 반응 용액을 0℃에서 20분 동안 교반하고, NaN3(0.0521 g, 0.80 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 얻어진 용액을 실온으로 점진적으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 이후에, 1M NaOH(30 mL)를 첨가하여 반응을 켄칭시키고, 이후에 CH2Cl2(3 x 30 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 EtOAc(30 mL)에 용해시키고, 10% LiCl 용액(30 mL) 및 염수(3 x 30 mL)로 세척하여 표제 생성물(0.0719 g, 36%)을 엷은 황색 고체로서 수득하였다. mp 165-167℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.72 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 3.81 (d, J = 11.5 Hz, 2 H), 3.65 (t, J = 6.6 Hz, 2 H), 2.80 (d, J = 10.9 Hz, 2 H), 2.33 - 2.04 (m, 5 H), ), 1.82 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 1.64 (m, 5 H), 1.47 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 1.38 (m, 1 H), 1.18 (ddd, J = 15.4, 10.3, 3.7 Hz, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 144.8, 132.3, 129.5, 119.4, 61.4, 60.4, 49.4, 46.1, 39.3, 32.6, 32.5, 27.3; MS (ESI) m/z 394.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00111
1'-((4-아지도페닐)설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘:
자석 교반 막대가 장착된 25 ml 불꽃 건조된 플라스크를 아르곤에 의해 퍼징시키고, 이후에 아르곤 벌룬이 장착된 고무 셉텀으로 시일링하였다. 무수 CH2Cl2(1.5 mL) 및 옥살릴 클로라이드(0.30 mL, CH2Cl2 중 2M, 0.60 mmol)를 시린지를 통해 순차적으로 첨가하였다. 얻어진 용액을 드라이 아이스-아세톤 베쓰에서 -78℃로 냉각시켰다. 무수 DMSO(0.085 mL, 1.20 mmol)를 도입하고, 용액을 -78℃에서 25분 동안 교반하였다. 2 mL CH2Cl2 중의 2-(1'-((4-아지도페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올(0.1910 g, 0.49 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후에, Et3N(0.24 mL, 1.73 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 실온으로 가온시키고, 1.5시간 동안 교반하고, 이후에 20 mL NaHCO3 포화용액에 의해 켄칭시켰다. 얻어진 2-상 용액을 CH2Cl2(3 x 20 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 알데하이드 중간체를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계를 위해 직접적으로 사용하였다.
형성된 알데하이드를 2 mL CH2Cl2에 용해시키고, 이의 절반은 베스트만 오히라 시약 반응을 위한 것이다. 베스트만 오히라 시약 반응의 절차는 하기와 같이 기술된다. 베스트만 오히라 시약 (디메틸(1-디아조-2-옥소프로필)포스포네이트)(0.0570 g, 0.030 mmol) 및 메탄올(2 mL)을 0℃에서 혼합하고, 이후에 알데하이드(1 mL CH2Cl2에 용해됨) 및 K2CO3(0.0670 g, 0.49 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 반응 현탁액을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 슬러리 용액을 여과하고, 분별 깔대기에 붓고, 20 mL CH2Cl2로 희석시키고, NaHCO3 포화용액(20 ml) 및 1 N NaOH(20 mL)에 의해 세척하였다. 유기층을 Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과하고, 진공 중에 농축하였다. 잔부를 소량의 헥산과 함께 초음파 처리하고, 헥산층의 상청액을 유리 피펫에 의해 제거하고, 이후에 실리카겔(1:9 CH3OH : CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 생성물을 황색 고체(0.0454 g, 48%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.15 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 3.85 (dd, J = 11.5, 3.8 Hz, 2 H), 2.87 (s, 2 H), 2.39 - 2.05 (m, 7 H), 1.97 (t, J = 2.1 Hz, 1 H), 1.85 (m, 4 H), 1.67 (q, J = 12.5 Hz, 2 H), 1.46 (s, br, 1 H), 1.30 (s, br, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 144.8, 132.3, 129.5, 119.4, 82.6, 69.4, 61.5, 49.2, 46.0, 35.4, 31.7, 27.2, 25.3; MS (ESI) m/z 388.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00112
2-(1'-((3-아미노페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올을 2-(1'-((4-아미노페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올의 합성의 실험 절차에 따라 황색 고체(91%)로서 제조하였다. mp 61-64℃; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.27 (t, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.03 (s, 1 H), 6.97 (d, J = 7.7 Hz, 1 H), 6.91 (dd, J = 8.1, 2.3 Hz, 1 H), 3.82 (d, J = 12.8 Hz, 2 H), 3.60 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.32 (s, 2 H), 3.05 (d, J = 11.5 Hz, 2 H), 2.49 (t, J = 11.7 Hz, 1 H), 2.45 - 2.26 (m, 4 H), 1.97 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 1.80 (d, J = 13.3 Hz, 2 H), 1.62 (qd, J = 12.3, 4.1 Hz, 2 H), 1.57 - 1.50 (m, 1 H), 1.48 (q, J = 6.4 Hz, 2 H), 1.37 - 1.22 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CD3OD) δ 149.2, 136.3, 129.4, 118.5, 115.4, 112.5, 61.6, 58.9, 49.2, 45.6, 38.4, 31.7, 31.0, 26.6; MS (ESI) m/z 368.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00113
2-(1'-((3-아지도페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올을 2-(1'-((4-아지도페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올의 합성의 실험 절차에 따라 엷은 황색 고체(>95%)로서 제조하였다. mp 168 - 171℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 - 7.45 (m, 2 H), 7.36 (s, 1 H), 7.24 - 7.18 (m, 1 H), 3.83 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 3.65 (t, J = 6.6 Hz, 2 H), ), 2.79 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.37 - 2.07 (m, 5 H), 1.83 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 1.72 - 1.54 (m, 5 H), 1.47 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 1.43 - 1.34 (m, 1 H), 1.20 (tdd, J = 15.5, 9.6, 4.2 Hz, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 141.4, 138.2, 130.5, 123.8, 123.0, 118.0, 61.4, 60.4, 49.4, 46.1, 39.3, 32.6, 32.5, 27.3; MS (ESI) m/z 394.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00114
1'-((3-아지도페닐)설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘을 1'-((4-아지도페닐)설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘의 합성의 실험 절차에 따라 황색 고체(49%)로서 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.59 - 7.48 (m, 2 H), 7.38 (s, 1 H), 7.27 - 7.23 (m, 1 H), 3.90 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 3.02 (s, 2 H), 2.53 (s, br, 1 H), 2.33 (m, 4 H), 2.16 (s, 2 H), 2.04 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 1.99 (t, J = 2.6 Hz, 1 H), 1.89 (d, J = 10.7 Hz, 2 H), 1.73 (qd, J = 12.3, 4.2 Hz, 2 H), 1.66 - 1.46 (s, br, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 141.6, 137.9, 130.6, 123.7, 123.2, 118.0, 82.1, 69.8, 61.8, 49.0, 45.7, 35.0, 30.6, 26.6, 25.0; MS (ESI) m/z 388.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00115
2-(1'-((2-아미노페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올을 2-(1'-((4-아미노페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올의 합성의 실험 절차에 따라 황색 고체(90%)로서 제조하였다. mp 204 - 206℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (dd, J = 8.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.37 - 7.18 (m, 1 H), 6.85 - 6.58 (m, 2 H), 5.04 (s, 2 H), 3.84 (d, J = 12.4 Hz, 2 H), 3.64 (t, J = 6.4 Hz, 2 H), 2.86 (d, J = 10.7 Hz, 2 H), 2.45 (td, J = 12.3, 2.4 Hz, 2 H), 2.34 (t, J = 11.8 Hz, 1 H), 2.26 - 2.13 (m, 2 H), 1.86 (d, J = 13.3 Hz, 2 H), 1.70 (d, J = 11.4 Hz, 2 H), 1.60 (qd, J = 12.3, 4.1 Hz, 2 H), 1.52 - 1.20 (m, 6 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 146.2, 134.2, 130.3, 117.8, 117.6, 117.2, 61.7, 60.3, 49.4, 45.8, 39.1, 32.3, 32.0, 27.0; MS (ESI) m/z 368.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00116
2-(1'-((2-아지도페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올을 2-(1'-((4-아지도페닐)설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에탄올의 합성의 실험 절차에 따라 엷은 황색 고체(78%)로서 제조하였다. mp 152 - 155℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.92 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1 H), 7.56 (td, J = 7.7, 1.6 Hz, 1 H), 7.38 - 7.12 (m, 2 H), 3.94 (d, J = 13.0 Hz, 2 H), ), 3.67 (s, 2 H), 2.87 (d, J = 10.9 Hz, 2 H), 2.66 (td, J = 12.7, 2.4 Hz, 2 H), 2.35 (d, J = 12.5 Hz, 1 H), 2.18 (t, J = 11.3 Hz, 2 H), 1.87 (d, J = 12.6 Hz, 2 H), 1.71 (d, J = 10.8 Hz, 2 H), 1.66 - 1.54 (m, 2 H), 1.54 - 1.21 (m, 6 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 138.3, 133.9, 131.7, 129.3, 124.6, 119.9, 61.9, 60.4, 49.4, 45.8, 39.2, 32.4, 32.3, 27.8; MS (ESI) m/z 394.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00117
1'-((2-아지도페닐)설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘을 1'-((4-아지도페닐)설포닐)-4-(프로프-2-인-1-일)-1,4'-비피페리딘의 합성의 실험 절차에 따라 황색 고체(40%)로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.94 (dd, J = 7.9, 1.6 Hz, 1 H), 7.57 (td, J = 7.8, 1.6 Hz, 1 H), 7.31 - 7.27 (m, 1 H), 7.23 (td, J = 7.7, 1.1 Hz, 1 H), 3.94 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.87 (d, J = 11.0 Hz, 2 H), 2.67 (td, J = 12.4, 2.4 Hz, 2 H), 2.34 (ddt, J = 11.5, 7.3, 3.7 Hz, 1 H), 2.12 (m, 3 H), 1.96 (t, J = 2.6 Hz, 1 H), 1.82 (t, J = 15.2 Hz, 4 H), 1.60 (qd, J = 12.1, 4.2 Hz, 2 H), 1.46 (m, 1 H), 1.29 (ddd, J = 24.3, 12.1, 3.7 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 138.3, 133.8, 131.7, 129.4, 124.6, 119.9, 82.8, 69.3, 61.6, 49.2, 45.9, 35.6, 32.0, 28.0, 25.4; MS (ESI) m/z 388.1 (100 %, [M+H]+).
XIII. 3-(1'-( 메시틸설포닐 )-[1,4'- 비피페리딘 ]-4-일) 프로판니트릴의 합성
Figure 112016034146661-pct00118
Figure 112016034146661-pct00119
3차-부틸 4-(2-(토실옥시)에틸)피페리딘-1-카복실레이트: 2-(피페리딘-4-일)에탄올(1.3091 g, 10.15 mmol), Et3N(4.20 mL, 30.19 mmol) 및 CHCl3(10 mL)을 혼합하고, 0℃에서 교반하고, 이후에 30분에 CHCl3(4 mL) 중 디-3차-부틸-디카보네이트(2.5770 g, 11.81 mmol)를 첨가하였다. 이후에, 반응 용액을 실온으로 가온시키고, 9시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 NaHCO3 포화용액(30 mL)에 붓고, CHCl3(3 x 30 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 Boc 보호된 2-(피페리딘-4-일)에탄올을 수득하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용하였다.
Boc 보호된 2-(피페리딘-4-일)에탄올을 CH2Cl2(20 ml) 중의 토실 클로라이드(3.8988 g, 20.46 mmol) 및 DMAP (0.2514 g, 2.06 mmol)과 함께 교반하고, 이후에 10분에 Et3N(4.25 mL, 30.55 mmol)을 적가하였다. 반응 용액을 14시간 동안 교반하고, NaHCO3 포화용액(70 mL)에 서서히 붓고, CH2Cl2(3 x 70 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 플래시 크로마토그래피(1:4 EtOAc : 헥산)를 통해 정제하여 표제 생성물(2.6127 g, 67% 2단계)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.76 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 4.21 - 3.86 (m, 4 H), 2.58 (t, J = 12.8 Hz, 2 H), 2.43 (s, 3 H), 1.65 - 1.46 (m, 5 H), 1.46 - 1.30 (s, 9 H), 1.14 - 0.87 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 154.7, 144.8, 132.9, 129.8, 127.9, 79.3, 68.0, 43.7, 35.2, 32.1, 31.6, 28.4, 21.6; MS (ESI) m/z 406.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00120
3차-부틸 4-(2-시아노에틸)피페리딘-1-카복실레이트: 15 ml 플라스크에 3차-부틸 4-(2-(토실옥시)에틸)피페리딘-1-카복실레이트(0.4975 g, 1.30 mmol), KCN(0.6981 g, 10.74 mmol) 및 DMF(5 mL)를 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 100℃에서 4시간 동안 격렬하게 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 이후에, 현탁액을 NaHCO3 포화용액(30 mL)에 서서히 붓고 CH2Cl2(3 x 30 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 실리카겔(2:1 헥산 : EtOAc) 상에서 플래시 크로마토그래피하여 요망되는 생성물(0.2901 g, 94%)을 무색 겔로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.09 (s, 2 H), 2.67 (t, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.36 (td, J = 7.1, 0.9 Hz, 2 H), 1.80 - 1.50 (m, 5 H), 1.42 (s, 9 H), 1.08 (qd, J = 12.2, 4.2 Hz, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 154.7, 119.5, 79.4, 43.6, 34.9, 31.7, 31.4, 28.4, 14.5.
Figure 112016034146661-pct00121
3-(1'-(메시틸설포닐)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)프로판니트릴: 3차-부틸 4-(2-시아노에틸)피페리딘-1-카복실레이트(0.3280 g, 1.38 mmol)를 실온에서 2시간 동안 1,4-디옥산(4 mL) 중의 HCl(1 mL)과 혼합하고 교반하였다. 용매를 증발시킨 후에, 형성된 4-(2-시아노에틸)피페리딘 하이드로클로라이드 산염을 0℃에서 NaHCO3 포화용액에 의해 중화시키고, 이후에 CH2Cl2(3 x 25 mL)에 의해 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압(낮은 진공) 하에서 농축시켜 3-(피페리딘-4-일)프로판니트릴을 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계를 위해 사용하였다.
상기 3-(피페리딘-4-일)프로판니트릴, 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온(0.3860 g, 1.37 mmol), CH2Cl2(4 mL), AcOH(0.080 mL, 1.40 mmol)를 실온에서 25분 동안 교반하고, NaBH(OAc)3(0.4298 g, 2.03 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 50시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응을 0℃에서 NaHCO3 포화용액에 의해 켄칭시키고, 이후에 CH2Cl2(3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 정제하여 요망되는 생성물(0.0252 g, 5% 2단계)을 백색 겔로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.94 (s, 2 H), 3.63 (d, J = 12.3 Hz, 2 H), 2.90 (d, J = 10.7 Hz, 2 H), 2.74 (td, J = 12.4, 2.4 Hz, 2 H), 2.60 (s, 6 H), 2.35 (t, J = 7.2 Hz, 3 H), 2.29 (s, 3 H), 2.14 (t, J = 9.6 Hz, 2 H), 1.84 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 1.71 (d, J = 12.3 Hz, 2 H), 1.63 - 1.34 (m, 5 H), 1.24 (m, 2 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.4, 131.9, 131.7, 119.7, 61.8, 49.2, 44.0, 34.8, 31.8, 31.7, 27.6, 22.8, 21.0, 14.6; MS (ESI) m/z 404.2 (100 %, [M+H]+).
XIV . 3-(1-( 메시틸설포닐 )피페리딘-4-일)-6- 메틸 -1,3- 옥사지난의 합성
Figure 112016034146661-pct00122
Figure 112016034146661-pct00123
4-((1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)아미노)부탄-2-올을 27시간의 반응 시간과 함께 4-아미노부탄-2-올과 1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-온 간의 환원성 아민화 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 백색 고체(82%)로서 수득하였다. mp 105 - 108℃; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.95 (s, 2 H), 3.96 (ddd, J = 8.9, 5.8, 2.4 Hz, 1 H), 3.55 (d, J = 12.5 Hz, 2 H), 3.05 (dt, J = 11.9, 4.2 Hz, 1 H), 2.83 (tt, J = 12.5, 3.3 Hz, 2 H), 2.76 (td, J = 11.1, 2.9 Hz, 1 H), 2.61 (s, 7 H), 2.30 (s, 3 H), 1.96 (t, J = 12.8 Hz, 2 H), 1.63 (d, J = 14.9 Hz, 1 H), 1.47 (m, 1 H), 1.34 (m, 2 H), 1.16 (d, J = 6.2 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.6, 140.4, 131.9, 131.6, 69.5, 54.4, 45.5, 43.1, 43.0, 37.0, 31.8, 31.5, 23.6, 22.8, 21.0; MS (ESI) m/z 355.2 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00124
3-(1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)-6-메틸-1,3-옥사지난: 환류 콘덴서가 장착된 15 mL 플라스크에 4-((1-(메시틸설포닐)피페리딘-4-일)아미노)부탄-2-올(0.1192 g, 0.34 mmol), 파라포름알데하이드(0.0143 g, 0.48 mmol), Mg2SO4(0.2091 g, 1.74 mmol), 피리디늄 p-톨루엔설포네이트(PPTS)(0.0025 g, 0.01 mmol), 및 무수 톨루엔(4 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 환류 하에 3시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각하였다. 이후에, 현탁액을 30 mL NaHCO3 포화용액을 함유한 분별 깔대기에 붓고, 이후에 CH2Cl2(3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔부를 실리카겔(1:19 MeOH:CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피하여 요망되는 생성물을 무색 겔(0.0555 g, 45%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.91 (s, 2 H), 4.61 (dd, J = 10.0, 2.3 Hz, 1 H), 4.16 (d, J = 10.1 Hz, 1 H), 3.57 (m, 3 H), 3.11 (ddt, J = 13.4, 4.4, 2.2 Hz, 1 H), 2.89 - 2.68 (m, 4 H), 2.58 (s, 6 H), 2.27 (s, 3 H), 1.92 (dp, J = 12.2, 2.8 Hz, 2 H), 1.65 - 1.29 (m, 4 H), 1.15 (d, J = 6.1 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 142.5, 140.4, 131.9, 131.6, 81.6, 73.6, 55.0, 46.5, 43.4, 30.3, 29.8, 29.2, 22.8, 21.8, 20.9; MS (ESI) m/z 367.2 (100 %, [M+H]+).
XV . 1'-([1,1'-비페닐]-4- 일설포닐 )-4- 메틸 -1,4'- 비피페리딘의 합성
Figure 112016034146661-pct00125
Figure 112016034146661-pct00126
4-브로모벤젠-1-설포닐 클로라이드와 4-메틸-1,4'-비피페리딘 간의 설폰아미드 형성 반응 후에 플래시 크로마토그래피(1:19 MeOH:CH2Cl2)를 통해 1'-((4-브로모페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘을 백색 고체(83%)로서 수득하였다. mp 165 - 168℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.75 - 7.45 (m, 4 H), 3.81 (d, J = 11.9 Hz, 2 H), 2.75 (d, J = 11.5 Hz, 2 H), 2.38 - 1.96 (m, 5 H), 1.81 (d, J = 11.8 Hz, 2 H), 1.73 - 1.52 (m, 4 H), 1.28 (m, 1 H), 1.22 - 1.06 (m, 2 H), 0.87 (d, J = 6.4 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 135.2, 132.3, 129.1, 127.7, 61.3, 49.5, 46.1, 34.6, 31.0, 27.3, 21.9; MS (ESI) m/z 403.1 (100 %, [M+H]+).
Figure 112016034146661-pct00127
1'-([1,1'-비페닐]-4-일설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘: 환류 콘덴서가 장착된 불꽃 건조된 플라스크에 1'-((4-브로모페닐)설포닐)-4-메틸-1,4'-비피페리딘(0.2200 g, 0.55 mmol), 페닐보론산(0.1065 g, 0.87 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0.0609 g, 0.053 mmol), THF(8 mL) 및 Na2CO3(2 M, 0.8 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 냉동-펌프-해동 사이클링을 통해 탈기시키고, 3시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 현탁액을 물(25 mL)로 희석시키고, 10분 동안 교반하고, DCM(3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 잔부를 실리카겔(1:19 MeOH:CH2Cl2) 상에서 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 생성물을 백색 고체(0.0433 g, 21%)로서 수득하였다. mp 178 - 181℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.72 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.64 - 7.56 (m, 2 H), 7.52 - 7.45 (m, 2 H), 7.45 - 7.37 (m, 1 H), 3.90 (d, J = 12.1 Hz, 2 H), 2.84 (d, J = 10.8 Hz, 2 H), 2.32 (td, J = 12.1, 2.5 Hz, 3 H), 2.20 (t, J = 11.9 Hz, 2 H), 1.91 (d, J = 12.6 Hz, 2 H), 1.77 - 1.57 (m, 4 H), 1.42 - 1.12 (m, 3 H), 0.90 (d, J = 5.9 Hz, 3 H); 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 145.6, 139.2, 134.6, 129.1, 129.1, 128.5, 128.2, 127.6, 127.3, 61.6, 49.4, 46.1, 34.1, 30.8, 27.1, 21.7; m/z 399.2 (100 %, [M+H]+).
실시예 2. 시험관내 APC 억제 검정
소분자 항암 화합물을 시검관내 검정에서 APC의 활성을 억제하는 능력에 대해 평가하였다. 표 A는 각 예시된 화합물에 대해 측정된 IC50을 나타낸 것이다.
검정을 위해 요구되는 시약은 (3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드; 티아졸릴 블루; RPI corp., cat# M92050); RPMI-1640 또는 페놀 레드가 없는 선택된 배지(즉, DMEM); 1M Hepes; 100mM Na피루베이트; 1000X 겐타마이신(50mg/ml); 100X 페니실린/스트렙토마이신/푼기존(Fungizone); 1X PBS; Triton X-100; 1N HCl 및 이소프로판올이다. MTT 용액(10x)을 제조하기 위해, MTT 분말을 완전 RPMI (또는 DMEM 용액)에 5mg/mL의 최종 농도로 용해시키고, 0.2 ㎛ 필터로 여과하여 멸균시켰다. MTT 가용화 용액은 10% Triton X-100, 0.1N 및 80% 이소프로판올을 함유하였다. MTT 용액을 플레이트 당 12 mL.에서 완전 배지로 1X로 희석하였다. 배양 디시(96 웰)를 인큐베이터에서 꺼내고, 배지를 제거하였다. 플레이트를 1x PBS로 3회 세척하였다. 100 ㎕의 1X MTT 용액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 세포주에 따라, 2 내지 4시간 동안 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 세포를 인큐베이터에서 꺼내고, MTT 용액을 제거하였다. 200 ㎕의 1X MTT 가용화 용액을 다채널 피펫터를 이용하여 각 웰에 첨가하고, 세포를 10분 동안 오비탈 쉐이커 상에서 배치시켰다. 결과를 미세적정 플레이트 판독기(흡광도 = 570 nm, 참조 = 700 nm) 상에서 판독하고 데이타를 산출하였다.
억제율을 억제제가 없는 대조 반응에 대해 결정하였고, 반 최고치 억제 농도(IC50) 값을 억제 데이타에 대해 표준 4개의 파라미터 피트를 이용하여 결정하였다. 본원에서 사용되는 용어 "IC50"은 제공된 생물학적 과정(또는 과정의 성분)을 50%까지 억제하는데 요구되는 양을 지시하는 생물학적 또는 생화학적 기능을 억제하는 화합물의 효능의 정량적 척도를 지칭한다.
표 A
결정암의 치료를 위한 유사체. DLD-1에서 100 nM 미만의 IC50을 갖는 유사체는 진한 서체로 지시되어 있다.
Figure 112016034146661-pct00128
Figure 112016034146661-pct00129
Figure 112016034146661-pct00130
Figure 112016034146661-pct00131
Figure 112016034146661-pct00132
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Figure 112016034146661-pct00134
Figure 112016034146661-pct00135
Figure 112016034146661-pct00136
Figure 112016034146661-pct00137
Figure 112016034146661-pct00138
Figure 112016034146661-pct00139
실시예 3. 절단된 APC 선택적 억제제-1 ( TASIN - 1)은 APC 절단을 갖는 CRC 라인을 사멸시키며, 여분의 정상 인간 결장 상피 세포( HCEC ) 및 야생형(WT) APC를 갖는 다른 암세포는 적절한 유사분열 방추 형성을 방해하고, APC 절단된 세포에서 JNK-의존 아폽토성 세포사를 유발시킨다.
두 개의 인증된 CRC 세포주, HCT116 (WT APC) 및 DLD1 (절단된 APC)에서의 용량 반응 분석은 리드 화합물 TASIN-1 (절단된 APC 선택적 억제제)의 동정으로 이어진다(도 7(d)). 이러한 화합물은 DLD1 세포에 대해 강력하고 선택적인 독성을 나타내지만(IC50 = 63 nM), HCT116 세포에 대해서는 그러하지 않다(IC50>10 μM)(도 7(e)). TASIN-1의 지속 치료는 DLD1에서 연질 아가 성장을 억제하였지만 HCT116 세포에서는 그러하지 않았다(도 7(f), 11).
APC 절단 의존성을 입증하기 위하여, shRNS를 발현시키는 두 개의 독립적인 안정한 녹다운 DLD1 세포주를 절단된 APC에 대해 생성시켰다. 절단된 APC 발현의 녹다운은 TASIN-1에 대해 DLD1 세포를 >90%의 단백질 감소로 둔감화되었는데(도 8, 9), 이는 APC 또는 관련된 APC-의존성 경로에서의 단백질(들)이 TASIN-1의 타겟임을 지지하는 것이다. 유사한 효과는 절단된 APC 단백질이 결여된 HT29 세포에서 관찰되었다(도 9a). 또한, 절단된 APC의 이소성 발현은 TASIN-1에 대해 HCT116 및 HCT116 p53 눌 세포를 일부 민감하게 한다(도 9).
TASIN-1을 다양한 APC 상태를 갖는 CRC 세포주의 패널에서 시험하였다. 고도로 불균일한 유전학적 백그라운드에도 불구하고, 결과는 TASIN-1 민감성과 APC 상태 간의 일정한 상관관계를 나타내었다(도 9, 10). TASIN-1은 정상 조직 뿐만 아니라 WT APC를 갖는 다른 암세포 타입으로부터 유도된 HCEC, 인간 기관지 상피 세포(HBEC) 및 BJ 섬유아세포의 생존능에 영향을 미치지 않았다. 그러나, DU4475, 절단된 APC 15를 발현시키는 유방암 세포주는 TASIN-1에 대해 민감하였으며, 이는 또한, APC 절단 의존성을 지지하는 것이다(도 9', 데이타 표 1).
데이타 표 1. APC 상태 및 다른 암 타입의 기원
Figure 112016034146661-pct00140
TASIN-1은 폴리(ADP 리보스) 폴리머라제 1(PARP1) 분열, 미토콘드리아로부터의 시토크롬 c 방출을 야기시키고, DKD1 세포에서 카스파제 3/7 활성을 유발시키지만 HCT116 세포에서는 그러하지 않는데(도 12, 12'(a-c), 13), 이는 아폽토시스의 유발을 지시하는 것이다. 추가적으로, TASIN-1 처리는 DLD1 세포에서 48시간 후에 JNK의 활성화를 야기시키지만, HCT116 세포에서는 그러하지 않으며, 이러한 활성화는 72시간 동안 지속되었다(도 12'(d)). JNK 억제제 SP600125 (Millipore)로의 동시 치료는 TASIN-1의 효과를 약화시켰고, JNK 활성화를 효율적으로 억제하고 PARP1의 분열, 뿐만 아니라 카스파제 3/7 활성화를 폐지하였다(도 12'(e-g)). 총괄하여, 이러한 데이타는 TASIN-1이 DLD1 세포에서 JNK-의존성 아폽토성 세포사를 유발시킨다는 것을 나타낸다.
실시예 4. 이종이식 마우스 모델에서 TASIN -1의 생체내 항종양 활성
TASIN-1의 생체내 항종양 활성을 이종이식 마우스 모델에서 시험하였다. 확립된 DLD1 종양을 갖는 누드 마우스에 용매(대조군) 또는 40 mg/kg의 TASIN-1를 18일 동안 하루에 2회씩 복강내로 주사하였다. TASIN-1 치료는 대조군 마우스와 비교하여 종양 이종이식의 크기를 감소시켰고(도 17, 17'), 종양 성장 속도를 감소시켰다(도 17'(b)). 대조군과 TASIN-1 치료군 간에 마우스의 체중에서 과독성 및 통계적학으로 유의미한 차이가 관찰되지 않았다(도 20(a)). 유사한 항종양 활성은 HT29 이종이식에서 관찰되었는데, 이는 또한, 절단된 APC를 번식시키고, 시험관 내에서 DSD-1과 유사한 민감성을 나타내었다(도 17'(c)). 그러나, TASIN-1은 HCT116 (WT APC) 이종이식에서 종양 성장을 억제하지 못하였는데(도 19). 이는 TASIN-1이 생체내에서 선택성을 유지시키는 것을 나타낸다. 절개된 종양의 면역조직화학 분석에서는 TASIN-1이 대조 종양과 비교하여 TASIN-1 처리된 DLD1 종양에서 아폽토성 마커, 분열된 카스파제 3의 유의미한 증가를 유발시킨다는 것을 나타내었다(도 20(b)). 아폽토시스의 유발은 대조군 및 TASIN-1 처리된 DLD1 이종이식으로부터 종양 용해물에서 분열된 PARP1의 검출에 의해 확인되었다(도 20(c)).
실시예 5. CPC;Apc 마우스에서 TASIN -1의 항종양 효과
TASIN-1이 마우스의 큰창자 조직에서 긴 체류 시간을 갖는 것을 고려하여(도 19'), CPC;Apc 마우스, 주로 직장결장 종양을 발달시키는 유전학적으로 조작된 마우스 모델을 추가로 시험하였다. 이러한 마우스는CDX2P-NLS 레콤비나제 이식유전자 및 엑소 14가 제거된 loxP-타겟화된 Apc 대립 유전자를 지니며, 코돈 580 및 절단된 APC 단백질에서 프레인 이동을 야기시킨다[Hinoi, T. et al. Mouse Model of colonic adenoma-carcinoma progression based on somatic Apc inactivation. Cancer Res 67, 9721-9730 (2007)]. ~110일령의 마우스에 용매 또는 20 mg/kg/주사의 TASIN-1을 90일 동안 1주에 2회씩 복강내로 주사하였다. 체중을 치료 기간에 걸쳐 15일 마다 측정하였다. 이러한 연구를 UT 싸우스웨스턴 동물실험윤리위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 가이드라인에 따라 수행하였다.
TASIN-1 치료는 CPC;Apc 마우스의 결장에서 종양 형성을 유의미하게 감소시켰다(도 17', 19'). TASIN-1 치료된 CPC;Apc 마우스에서 발달된 양성 종양(폴립)은 대조군과 비교하여 훨씬 작았다(도 3f). 추가적으로, 보다 적은 종양을 갖는 TASIN-1 치료된 마우스는 90일 치료에 걸쳐 WT 마우스와 유사한 수준으로 체중을 상승시켰다(도 17'). 마지막으로, TASIN-1 치료된 마우스는 염증 반응 유전자의 패널의 발현 억제를 나타내었고(도 19'), 결장 종양 섹션에서 분열된 카스파제 3에 대한 증가된 염색에 의해 달성된 Ki67 및 시클린 D1에 대한 염색을 감소시킴을 나타내었다. 함께 고려하여, 이러한 생체내 실험들에서는, TASIN-1이 주목할만한 독성없이 인간 이종이식 및 유전적으로 조작된 CRC 마우스 모델 둘 모두에서 종양 형성을 효과적으로 감소시킴을 나타낸다.
* * *
기술된 발명이 이의 특정 구체예를 참조로 하여 기술되었지만, 당업자에 의해 다양한 변형예가 이루어질 수 있으며 균등물이 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 치환될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 또한, 여러 개질예는 기술된 발명의 목적하는 사상 및 범위에 대해 특정 상태, 물질, 물질의 조성물, 공정, 공정 단계 또는 단계들을 구성하도록 이루어질 수 있다. 이러한 모든 개질예는 이에 첨부된 청구범위 내에 있는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> UT Southwestern Medical Center Debrabander, Jef Shay, Jerry W. Wang, Wentian <120> Therapeutics Targeting Truncated Adenomatous Polyposis Coli (APC) Proteins <130> 17541.0006 <140> PCT/US 14/054987 <141> 2014-09-10 <150> US 61/875,933 <151> 2013-09-10 <150> US 61/930,754 <151> 2014-01-23 <160> 26 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 1 ttgtgccaag tctggagatg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 2 ttctcagagc ggatgaaggt 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 3 tgaccttgct ccagactgc 19 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 4 ttgacccaga ccttgacctc 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 5 atgaacaagt ggctgtgctg 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 6 tcacacagga gctgatgacc 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 7 tctggtctgc ctgtggagta 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 8 caaaggacca aagacctcca 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 9 aattgcacca actcctcagc 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 10 tcgattgcag ttcacgagag 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 11 tgaaatatgg cccactcaca 20 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 12 ctgtcttccc tgtcttggtt g 21 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 13 ggacctaccc ttgcaaacaa 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 14 tatcaggacc ctcagcttgg 20 <210> 15 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 15 gagcatccga attgcatca 19 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 16 acagcgtttg ctgaagagga 20 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 17 gtcttcgaac tgcagctgtg 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 18 tacccaggtt ccggtttgta 20 <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 19 gagactcggg aagccaagat 20 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 20 ggtggtcttg agtggtcgat 20 <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 21 cgctgccatt ctcttcctac 20 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 22 tcgatccttg aattcctgct 20 <210> 23 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> shRNA <400> 23 taatgaacac tacagataga a 21 <210> 24 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> shRNA <400> 24 ttctatctgt agtgttcatt a 21 <210> 25 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> shRNA <400> 25 cccagtttgt ttctcaagaa a 21 <210> 26 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> shRNA <400> 26 tttcttgaga aacaaactgg g 21

Claims (29)

  1. 하기 화학식 I-g에 따른 화합물:
    Figure 112017056715354-pct00222
    화학식 I-g
    상기 식에서,
    상기 고리는 하기로 구성된 군으로부터 선택되고:
    Figure 112017056715354-pct00223
    ;
    R1은 H, R21로 치환되거나 치환되지 않은 C1-3알킬, 및 -(CH2)0-1-페닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R2는 독립적으로 H 및 C1-4알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R3은 H, 및 R21로 치환되거나 치환되지 않은 C1-3알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R6, R7, R9 및 R10는 독립적으로 H, F, Cl, Br, C1-4알킬, 사이클로프로필, N3, NH2, CF3, OCHF2, OCF3, OC1-4알킬, 벤조일, 페녹시, -C≡C-R24, R25, -OCH2C≡CH, CN, NO2, -CO2-C1-4알킬, CO2H, -NR18CO-(C1-4알킬), -CON(C1-4알킬)2, -SO2NR18 2, -SO2(피롤리딘-N-일), -N(CH2페닐)2, -NH(CH2페닐), -N(C1-4알킬)2, -NH(C1-4알킬), R23, -N(C1-4알킬)C(O)CH3, -N(C1-4알킬)C(O)CH2CH3, -CO(C1-4알킬), -OC(O)NR18 2, -OC(O)(피롤리딘-N-일) 및 -NR18C(O)O-(C1-4알킬)로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R8은 H, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 사이클로프로필, Br, N3, NH2, -N(C1-4알킬)2, -NH(C1-4알킬), OCHF2, 벤조일, 페녹시, R23, -N(C1-4알킬)C(O)CH3, -N(C1-4알킬)C(O)CH2CH3, -NHC(O)CH2CH3, -CO(C1-4알킬), -O(C2-4알킬), -OC(O)NR18 2, -OC(O)(피롤리딘-N-일) 및 -NR18C(O)O-(C1-4알킬)로 구성된 군으로부터 선택되고, 단, R1이 H이면, R8은 프로필, 이소프로필, n-부틸, 사이클로프로필, N3, NH2, -N(C1-4알킬)2, -NH(C1-4알킬), OCHF2, 벤조일, 페녹시, R23, -N(C1-4알킬)C(O)CH3, -N(C1-4알킬)C(O)CH2CH3, -NHC(O)CH2CH3, -CO(C1-4알킬), -O(C2-4알킬), -OC(O)NR18 2, -OC(O)(피롤리딘-N-일) 및 -NR18C(O)O-(C1-4알킬)로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R21는 독립적으로 CN, -C≡C-H, -C≡C-SiMe3 및 OR22로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R22는 독립적으로 H, -CH2C≡CH 및 -CH2C≡CSiMe3로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R23은 F, Cl, Br, C1-4알킬, 사이클로프로필, N3, NH2, CF3, OCHF2, OCF3, OC1-4알킬, 벤조일, 페녹시, -C≡C-R24, R25, -OCH2C≡CH, NO2, -CO2-C1-4알킬, CO2H, -NR18CO-(C1-4알킬), -CON(C1-4알킬)2, -SO2NR18 2, -SO2(피롤리딘-N-일), -N(CH2페닐)2, -NH(CH2페닐), -N(C1-4알킬)2, -NH(C1-4알킬), -N(C1-4알킬)C(O)CH3, -N(C1-4알킬)C(O)CH2CH3, -NHC(O)CH2CH3, -CO(C1-4알킬), -OC(O)NR18 2, -OC(O)(피롤리딘-N-일) 및 -NR18C(O)O-(C1-4알킬)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 치환되거나 치환되지 않은 페닐이고;
    각각의 R24는 독립적으로 C1-4알킬 및 -(CH2)1-4OH로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R25는 독립적으로 F, Cl, 메톡시 또는 CF3로 치환되거나 치환되지 않은 페닐이고;
    R11은 H, Cl 또는 NHC(O)CH3이고;
    R13은 H, Cl 또는 Br이고;
    R14 및 R15는 독립적으로 H, F, Cl 또는 Br이고;
    각각의 R18는 독립적으로 H, 메틸 또는 에틸이고;
    R26은 H 또는 Br이다.
  2. 제1항에 있어서,
    R1은 H, 페닐, -CH2페닐, 및 R21로 치환되거나 치환되지 않은 C1-3알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R2는 독립적으로 H 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R3는 H, 및 R21로 치환되거나 치환되지 않은 C1-3알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R6, R7, R9 및 R10은 독립적으로 H, F, Cl, Br, C1-4알킬, N3, NH2, CF3, OCHF2, OCF3, 메톡시, 벤조일, 페녹시, -C≡C-R24, R25 또는 -OCH2C≡CH이고;
    R8은 H, 이소프로필, Br, N3, NH2, OCHF2, 벤조일, 페녹시 및 R23로 구성된 군으로부터 선택되고, 단 R1이 H이면, R8은 이소프로필, Br, N3, NH2, OCHF2, 벤조일, 페녹시 및 R23으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R21는 독립적으로 H, CN, -C≡C-H, -C≡C-SiMe3 및 OR22로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R22는 독립적으로 H, -CH2C≡CH 및 -CH2C≡CSiMe3로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R23은 F, Cl 또는 메톡시로 치환되거나 치환되지 않은 페닐이고;
    각각의 R24는 독립적으로 C1-4알킬 및 -(CH2)1-4OH로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R25는 독립적으로 F, Cl, 메톡시 또는 CF3로 치환되거나 치환되지 않은 페닐이고;
    R11은 H, Cl 또는 NHC(O)CH3이고;
    R13은 H, Cl 또는 Br이고;
    R14 및 R15는 독립적으로 H, F, Cl 또는 Br이고;
    각각의 R18은 독립적으로 H, 메틸 또는 에틸이고;
    R26은 H 또는 Br인, 화합물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 고리는
    Figure 112017056715354-pct00224
    이고;
    R1은 H, 페닐, -CH2페닐, 및 R21로 치환되거나 치환되지 않은 C1-3알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R2는 독립적으로 H 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R3은 H, 및 R21로 치환되거나 치환되지 않은 C1-3알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R6, R7, R9 및 R10은 독립적으로 H, F, Cl, Br, C1-4알킬, N3, NH2, CF3, OCHF2, OCF3, 메톡시, 벤조일, 페녹시, -C≡C-R24, R25 또는 -OCH2C≡CH이고;
    R8은 H, 이소프로필, Br, N3, NH2, OCHF2, 벤조일, 페녹시 및 R23로 구성된 군으로부터 선택되고, 단, R1이 H이면, R8은 이소프로필, Br, N3, NH2, OCHF2, 벤조일, 페녹시 및 R23로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R21는 독립적으로 H, CN, -C≡C-H, -C≡C-SiMe3 및 OR22로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R22는 독립적으로 H, -CH2C≡CH 및 -CH2C≡CSiMe3로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R23는 F, Cl 또는 메톡시로 치환되거나 치환되지 않은 페닐이고;
    각각의 R24는 독립적으로 C1-4알킬 및 -(CH2)1-4OH로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R25는 독립적으로 F, Cl, 메톡시 또는 CF3로 치환되거나 치환되지 않은 페닐인, 화합물.
  4. 치료량의 제1항의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 결장암, 유방 암종, 골육종, 전립선 암종, 자궁경부 암종, 및 폐 암종으로 구성된 군으로부터 선택된 암의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 약제 조성물.
  5. 치료량의 제1항의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 직장결장암(colorectal cancer)의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 약제 조성물.
  6. 제2항에 있어서, 상기 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물:
    Figure 112016113655114-pct00225
    ,
    Figure 112016113655114-pct00226
    ,
    Figure 112016113655114-pct00227
    ,
    Figure 112016113655114-pct00228
    ,
    Figure 112016113655114-pct00229
    ,
    Figure 112016113655114-pct00230
    ,
    Figure 112016113655114-pct00231
    ,
    Figure 112016113655114-pct00232
    ,
    Figure 112016113655114-pct00233
    ,
    Figure 112016113655114-pct00234
    ,
    Figure 112016113655114-pct00235
    ,
    Figure 112016113655114-pct00236
    ,
    Figure 112016113655114-pct00237
    ,
    Figure 112016113655114-pct00238
    ,
    Figure 112016113655114-pct00239
    ,
    Figure 112016113655114-pct00240
    ,
    Figure 112016113655114-pct00241
    ,
    Figure 112016113655114-pct00242
    ,
    Figure 112016113655114-pct00243
    ,
    Figure 112016113655114-pct00244
    ,
    Figure 112016113655114-pct00245
    ,
    Figure 112016113655114-pct00246
    ,
    Figure 112016113655114-pct00247
    및
    Figure 112016113655114-pct00248
    .
  7. 제3항에 있어서, 상기 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물:
    Figure 112016113655114-pct00249
    ,
    Figure 112016113655114-pct00250
    ,
    Figure 112016113655114-pct00251
    ,
    Figure 112016113655114-pct00252
    ,
    Figure 112016113655114-pct00253
    ,
    Figure 112016113655114-pct00254
    ,
    Figure 112016113655114-pct00255
    ,
    Figure 112016113655114-pct00256
    ,
    Figure 112016113655114-pct00257
    ,
    Figure 112016113655114-pct00258
    ,
    Figure 112016113655114-pct00259
    ,
    Figure 112016113655114-pct00260
    ,
    Figure 112016113655114-pct00261
    ,
    Figure 112016113655114-pct00262
    ,
    Figure 112016113655114-pct00263
    ,
    Figure 112016113655114-pct00264
    ,
    Figure 112016113655114-pct00265
    ,
    Figure 112016113655114-pct00266
    및
    Figure 112016113655114-pct00267
    .
  8. 하기로 구성된 군으로부터 선택된 화합물:
    Figure 112016113655114-pct00268
    ,
    Figure 112016113655114-pct00269
    ,
    Figure 112016113655114-pct00270
    ,
    Figure 112016113655114-pct00271
    ,
    Figure 112016113655114-pct00272
    ,
    Figure 112016113655114-pct00273
    ,
    Figure 112016113655114-pct00274
    ,
    Figure 112016113655114-pct00275
    ,
    Figure 112016113655114-pct00276
    ,
    Figure 112016113655114-pct00277
    ,
    Figure 112016113655114-pct00278
    ,
    Figure 112016113655114-pct00279
    ,
    Figure 112016113655114-pct00280
    ,
    Figure 112016113655114-pct00281
    ,
    Figure 112016113655114-pct00282
    ,
    Figure 112016113655114-pct00283
    ,
    Figure 112016113655114-pct00284
    ,
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    ,
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    ,
    Figure 112016113655114-pct00287
    ,
    Figure 112016113655114-pct00288
    ,
    Figure 112016113655114-pct00289
    ,
    Figure 112016113655114-pct00290
    ,
    Figure 112016113655114-pct00291
    ,
    Figure 112016113655114-pct00292
    ,
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    ,
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    ,
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    ,
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    ,
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    ,
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    ,
    Figure 112016113655114-pct00299
    ,
    Figure 112016113655114-pct00300
    및
    Figure 112016113655114-pct00301
    .
  9. 치료량의 제8항의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 결장암, 유방 암종, 골육종, 전립선 암종, 자궁경부 암종, 및 폐 암종으로 구성된 군으로부터 선택된 암의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 약제 조성물.
  10. 치료량의 제8항의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 직장결장암(colorectal cancer)의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 약제 조성물.
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 입체이성질체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체.
  12. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180011890A (ko) * 2013-09-10 2018-02-02 보드 오브 리전츠 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 절단된 선종성 결장 폴립증 (ａｐｃ) 단백질을 타겟화하는 치료제

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10082496B2 (en) 2014-09-10 2018-09-25 Board Of Regents Of The University Of Texas System Targeting emopamil binding protein (EBP) with small molecules that induce an abnormal feedback response by lowering endogenous cholesterol biosynthesis
AU2016292779B2 (en) * 2015-07-15 2021-05-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Targeting emopamil binding protein (EBP) with small molecules that induce an abnormal feedback response by lowering endogenous cholesterol biosynthesis
CA3015817A1 (en) 2016-03-09 2017-09-14 President And Fellows Of Harvard College Direct palladium-catalyzed aromatic fluorination
MA45793A (fr) 2016-07-27 2021-03-24 Univ Case Western Reserve Composés et procédés de stimulation de la myélinisation
US10918610B2 (en) 2017-12-22 2021-02-16 Case Western Reserve University Compounds and methods of promoting myelination
CN108250111B (zh) * 2018-01-15 2020-04-28 华南理工大学 一种双受体有机发光小分子材料及其制备方法和应用
EP3890715A4 (en) * 2018-12-04 2023-03-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System THERAPEUTIC AGENTS TARGETING ADENOMATOCOLIC POLYPOSIS (APC) MUTANT FOR THE TREATMENT OF CANCER
CN113624665A (zh) * 2021-07-30 2021-11-09 中国药科大学 一种抗肿瘤候选化合物在治疗结直肠癌药物中的应用及测定方法
WO2024020156A1 (en) * 2022-07-22 2024-01-25 Biogen Ma Inc. Emopamil-binding protein inhibitors and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001172257A (ja) 1999-10-05 2001-06-26 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd 有機スルホンアミド化合物
US20060223829A1 (en) 2005-03-31 2006-10-05 Kathleen Aertgeerts Hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors
WO2006134481A1 (en) 2005-06-16 2006-12-21 Pfizer Inc. Inhibitors of 11-beta hydroxysteroid dehydrogenase type 1

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1521000A (en) 1975-06-13 1978-08-09 Syntex Puerto Rico Inc Inhalation device
US4227522A (en) 1978-09-05 1980-10-14 Syntex Puerto Rico, Inc. Inhalation device
US4192309A (en) 1978-09-05 1980-03-11 Syntex Puerto Rico, Inc. Inhalation device with capsule opener
CA1224992A (en) 1982-10-08 1987-08-04 Robert E. Newell Device for administering medicament to patients
US4778054A (en) 1982-10-08 1988-10-18 Glaxo Group Limited Pack for administering medicaments to patients
FR2585563B1 (fr) 1985-07-30 1993-11-12 Glaxo Group Ltd Dispositif pour administrer des medicaments a des patients
JPH0667926B2 (ja) * 1985-11-12 1994-08-31 旭化成工業株式会社 環状のイソキノリンスルホンアミド誘導体
JPH05963A (ja) 1990-04-13 1993-01-08 Toray Ind Inc ポリペプチド類組成物
US6582728B1 (en) 1992-07-08 2003-06-24 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Spray drying of macromolecules to produce inhaleable dry powders
IL117149A0 (en) * 1995-02-23 1996-06-18 Schering Corp Muscarinic antagonists
AR033517A1 (es) * 2000-04-08 2003-12-26 Astrazeneca Ab Derivados de piperidina, proceso para su preparacion y uso de estos derivados en la fabricacion de medicamentos
CA2364178C (en) 2000-12-05 2006-01-10 Yasuhiro Katsu N-benzenesulfonyl l-proline compounds as bradykinin antagonists
MY130778A (en) * 2001-02-09 2007-07-31 Vertex Pharma Heterocyclic inhibitiors of erk2 and uses thereof
WO2002070469A2 (en) * 2001-03-05 2002-09-12 Icos Corporation Selective pde3b inhibitors and use of the same in therapy
DE10155684A1 (de) * 2001-11-13 2003-05-22 Bayer Ag Thiazolharnstoffe
JPWO2004069828A1 (ja) * 2003-02-04 2006-05-25 三菱ウェルファーマ株式会社 ピペリジン化合物およびその医薬用途
US20060035884A1 (en) * 2004-05-20 2006-02-16 Elan Pharmaceuticals, Inc. N-cyclic sulfonamido inhibitors of gamma secretase
WO2007115805A2 (en) * 2006-04-05 2007-10-18 European Molecular Biology Laboratory (Embl) Aurora kinase inhibitors
ES2452820T3 (es) * 2006-04-07 2014-04-02 Methylgene, Inc. Derivados de benzamida como inhibidores de histona desacetilasa
US8603465B1 (en) * 2006-08-07 2013-12-10 Merck Sharp & Dohme, Corp. Methods for treatment of polyposis
WO2009032694A1 (en) 2007-08-28 2009-03-12 Dana Farber Cancer Institute Amino substituted pyrimidine, pyrollopyridine and pyrazolopyrimidine derivatives useful as kinase inhibitors and in treating proliferative disorders and diseases associated with angiogenesis
US8642660B2 (en) * 2007-12-21 2014-02-04 The University Of Rochester Method for altering the lifespan of eukaryotic organisms
WO2009137630A1 (en) 2008-05-07 2009-11-12 Wintherix Llc Methods for identifying compounds that modulate wnt signaling in cancer cells
US9623109B2 (en) * 2008-05-27 2017-04-18 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of killing cells and use of same in prevention and treatment of cancer
TW201028421A (en) * 2009-01-15 2010-08-01 Abbott Lab Novel benzenesulfonamides as calcium channel blockers
WO2012166617A2 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Cytocure Llc Methods, compositions, and kits for the treatment of cancer
CN104364391A (zh) 2012-02-08 2015-02-18 因赛特遗传学公司 用于诊断和治疗癌症的涉及ros1融合的方法和组合物
US20130330761A1 (en) 2012-06-12 2013-12-12 Celcuity, LLC Whole cell assays and methods
WO2015038644A2 (en) * 2013-09-10 2015-03-19 Debrabander Jef Therapeutics targeting truncated adenomatous polyposis coli (apc) proteins

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001172257A (ja) 1999-10-05 2001-06-26 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd 有機スルホンアミド化合物
US20060223829A1 (en) 2005-03-31 2006-10-05 Kathleen Aertgeerts Hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors
WO2006134481A1 (en) 2005-06-16 2006-12-21 Pfizer Inc. Inhibitors of 11-beta hydroxysteroid dehydrogenase type 1

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Application of PC-ANN and PC-LS-SVM in QSAR of CCR1 antagonist compounds: A comparative study, European Journal of Medicinal Chemistry, 45(4), 1572-1582(2010.01.04.)*
Dragon method for finding novel tyrosinase inhibitors: Biosilico identification and experimental in vitro assays, European Journal of Medicinal Chemistry, 42(11-12), 1370-1381(2007.)*

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180011890A (ko) * 2013-09-10 2018-02-02 보드 오브 리전츠 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 절단된 선종성 결장 폴립증 (ａｐｃ) 단백질을 타겟화하는 치료제
KR102300576B1 (ko) * 2013-09-10 2021-09-08 보드 오브 리전츠 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 절단된 선종성 결장 폴립증 (ａｐｃ) 단백질을 타겟화하는 치료제

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