ES2811090T3 - Terapéuticos dirigidos a proteínas truncadas de poliposis adenomatosa coli (apc) - Google Patents

Terapéuticos dirigidos a proteínas truncadas de poliposis adenomatosa coli (apc) Download PDF

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Abstract

Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: **(Ver fórmula)** o una sal farmaceuticamente aceptable de este.

Description

DESCRIPCIÓN
Terapéuticos dirigidos a proteínas truncadas de poliposis adenomatosa coli (apc)
Referencia cruzada a las aplicaciones relacionadas
Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad para la solicitud provisional de los EE. UU. núm.61/875,933 (presentada el 10 de septiembre de 2013) y la Solicitud provisional de los EE. UU. núm. 61/930,754 (presentada el 23 de enero, 2014).
Campo de la invención
La invención descrita se refiere al cáncer colorrectal, el gen supresor de los tumores APC, los productos del gen APC truncados producidos por la mutación del gen y los agentes terapéuticos dirigidos a las líneas celulares del cáncer de colon y otras líneas celulares del cáncer humano con los productos de los genes de la APC truncados.
Antecedentes de la invención
El cáncer colorrectal (CCR) es el tercer cáncer más comúnmente diagnosticado y la tercera causa principal de mortalidad relacionada con el cáncer en los Estados Unidos, con un estimado de 141 000 casos de cáncer de colon y recto diagnosticados en 2011. De este modo, 1 de cada 19 estadounidenses será diagnosticado con CCR en su vida con un riesgo general de 5,4 %. Afortunadamente, la escisión quirúrgica de los adenomas no invasivos tempranos es esencialmente curativa. Sin embargo, hay pocas opciones de tratamiento efectivas para los pacientes que padecen formas avanzadas de CCR, y el pronóstico a menudo es pobre. A pesar de una fase de latencia prolongada, se identifican muy pocas lesiones en una etapa en la que puedan extirparse quirúrgicamente (ver Phelps y otros. Cell Cycle, 2009; 8:16, 2549-2556).
Las mutaciones en el gen supresor tumoral APC humano se relacionan con la poliposis adenomatosa familiar (PAF), una afección hereditaria propensa al cáncer en la que se forman numerosos pólipos en el epitelio del intestino grueso (ver Kinzler y otros, Science, 1991; 253: 661-665; Kinzler y Vogelstein, Cell, 1996; 87: 159-170; Half y otros, Orphanet Journal of Rare Diseases, 2009; 4:22). El desarrollo del CCR se inicia por el crecimiento aberrante de los pólipos adenomatosos del epitelio colónico que finalmente evoluciona a carcinomas agresivos (ver Kinzler y Vogelstein, Cell, 1996; 87: 159-170). Se ha informado que alrededor del 85 % de los cánceres colorrectales esporádicos albergan mutaciones truncadoras de la APC (ver Kinzler y Vogelstein, Cell, 1996; 87: 159-170). El crecimiento de los pólipos se asocia en la mayoría de los casos con alteraciones de ambos alelos del gen de la poliposis adenomatosa coli (APC). Un primer golpe mutacional ocurre aproximadamente en el medio del marco de lectura abierto, generando una molécula APC truncada que carece de la mitad C-terminal. Dichas mutaciones de truncamiento se encuentran en la denominada región de agrupación de mutaciones (MCR) (ver Schneikert y otros, Human Molecular Genetics, 2006; 16: 199-209). El segundo golpe mutacional implica la eliminación del segundo alelo o una mutación que conduce a la síntesis de un producto truncado, que casi nunca ocurre después de la MCR (ver Schneikert y otros, Human Molecular Genetics, 2006; 16: 199-209). De este modo, las células de cáncer de colon expresan al menos una molécula APC truncada cuya longitud se define por la posición de la MCR y, ocasionalmente, un fragmento adicional pero más corto.
El tratamiento del CCR depende principalmente de los agentes quimioterapéuticos que actúan con una especificidad mínima para la base genética subyacente de la enfermedad. Estos agentes quimioterapéuticos con frecuencia interrumpen la función de las células normales al tiempo que interrumpen las células cancerosas debido a la dependencia compartida del objetivo químico. Se necesitan mejores agentes terapéuticos más precisos para mejorar el tratamiento de los pacientes diagnosticados con CCR.
Gen de la poliposis adenomatosa coli (APC)
La APC, que no actúa como un supresor tumoral clásico, influye en la señalización de Wnt regulando así la transcripción génica. Los Wnt son una familia de glicoproteínas ricas en cisteína secretadas que se han implicado en la regulación del mantenimiento, la proliferación y la diferenciación de las células madre durante el desarrollo embrionario. La señalización Wnt canónica aumenta la estabilidad de la p-catenina citoplasmática mediante la inactivación mediada por el receptor de la actividad de la quinasa GSK-3 y promueve la translocación de p-catenina en el núcleo. La vía de señalización Wnt canónica funciona además como un mitógeno de las células madre mediante la estabilización de la p-catenina intracelular y la activación del complejo de transcripción p-catenina/TCF/LEF, lo que resulta en la expresión activada de los genes reguladores del ciclo celular, como Myc, ciclina D1, EPhrinB (EPhB) y Msx1, que promueven la proliferación celular (ver Cayuso y Marti, Journal of Neurobiology, 2005; 64: 376-387).
APC es el regulador negativo de la señalización Wnt. Sin esta regulación negativa, la vía Wnt es más activa y es importante en el cáncer (ver Polakis, Current Opinion in Genetics & Development, 2007; 17: 45-51). Los estudios que comparan las células tumorales con mutaciones en ambos alelos APC para correlacionar los niveles de la señalización de Wnt y la gravedad de la enfermedad tanto en los humanos como en los ratones han ayudado a establecer un modelo en el que los efectos de la dosificación de los genes generan una ventana definida de la señalización de Wnt mejorada, lo que conduce a la formación de los pólipos en el intestino. Las combinaciones de las mutaciones APC 'más leves', asociadas con una mejora más débil de la señalización de Wnt, dan lugar a los tumores en los tejidos extra intestinales. De acuerdo con este modelo, la naturaleza de la mutación de la línea germinal en APC determina el tipo de la mutación somática que ocurre en el segundo alelo. (ver Minde y otros. Molecular Cancer, 2011; 10: 101).
Proteína APC
El producto del gen APC es una proteína de 312 kDa que consta de múltiples dominios, que se unen a varias proteínas, que incluyen la beta-catenina, axina, proteína de unión al terminal C (CtBP), factores de intercambio de los nucleótidos de guanina estimulados por APC (Asefs), Ras GTPasa- proteína de tipo activador (IQGAP1), unión final 1 (EB1) y los microtúbulos. Los estudios que usan los ratones mutantes y células cultivadas demostraron que la APC suprime la señalización Wnt canónica, que es esencial para la tumorigénesis, el desarrollo y la homeostasis de una variedad de tipos de células, incluidas las células epiteliales y linfoides. Otros estudios han sugerido que la proteína APC funciona en varios otros procesos celulares fundamentales. Estos procesos celulares incluyen la adhesión y migración celular, organización de redes de actina y microtúbulos, la formación del huso y la segregación cromosómica. La desregulación de estos procesos causados por las mutaciones en la APC se implica en el inicio y la expansión del cáncer de colon (ver Aoki y Taketo, Journal of Cell Science, 2007; 120: 3327-3335).
La proteína APC funciona como un centro o andamio de la señalización, ya que interactúa físicamente con una serie de proteínas relevantes para la carcinogénesis. La pérdida de la APC influye en la adhesión celular, la migración celular, el citoesqueleto y la segregación cromosómica (ver Aoki y Taketo, Journal of Cell Science, 2007; 120: 3327­ 3335).
La mayoría de los investigadores creen que las mutaciones de la APC causan una pérdida de cambio de función en el cáncer de colon. Las mutaciones sin sentido producen mutaciones puntuales en la APC, mientras que las mutaciones de truncamiento causan la pérdida de grandes porciones de la proteína APC, que incluyen los dominios reguladores definidos. Se ha informado un número significativo de mutaciones sin sentido de la APC en los tumores que se originan en varios tejidos, y se han relacionado con un peor resultado de la enfermedad en carcinomas uroteliales invasivos (ver Kastritis y otros, International Journal of Cancer, 2009; 124: 103-108), sugiriendo la relevancia funcional de la proteína APC mutada puntual en el desarrollo de los tumores extra intestinales. La base molecular por la cual estas mutaciones interfieren con la función de la APC permanece sin resolver.
La mutación APC que resulta en un cambio de función puede influir en la inestabilidad cromosómica de al menos tres maneras: al disminuir la interacción cinetocoro-microtúbulo, al perder la función del punto de control mitótico y al generar las células poliploides. Por ejemplo, los estudios han demostrado que la APC unida a los microtúbulos aumentó la estabilidad de los microtúbulos in vivo e in vitro, lo que sugiere un papel de la APC en la estabilidad de los microtúbulos (ver Zumbrunn y otros, Current Biology, 2001; 11: 44-49). La APC truncada condujo a la inestabilidad cromosómica en las células madre embrionarias de ratón (ver Fodde y otros, Nature Cell Biology, 2001; 3: 433-438), interfirió con la unión de los microtúbulos más extremos y causó un aumento dramático en las anormalidades mitóticas (ver Verde y Kaplan, Journal of Cell Biology, 2003; 163: 949-961). Los estudios han demostrado que las células cancerosas con las mutaciones APC tienen una capacidad disminuida para corregir las uniones erróneas de los microtúbulos cinetocóricos, lo que explica la aparición generalizada de la inestabilidad cromosómica en los tumores (ver Bakhoum y otros, Current Biology, 2009; 19:1937-1942). Además, se notificó la abrogación de la función del punto de control del huso con la pérdida de la función APC. La inactivación de APC con siRNA indicó que la pérdida de APC causa la pérdida de la función del punto de control del huso mitótico al reducir la asociación entre el cinetocoro y las proteínas del punto de control Bub1 y BubR1. De este modo, la pérdida de la APC reduce la apoptosis e induce poliploidía (ver Kaplan y otros, Nature Cell Biology, 2001; 3: 429-432; Dikovskaya y otros, Journal of Cell Biology, 2007; 176: 183-195; Rusan y Peifer, Journal of Cell Biology, 2008; 181: 719-726). La poliploidía es una fuente importante de aneuploidía ya que puede conducir a la mitosis multipolar (ver Shi y King, Nature, 2005; 437: 1038-1042).
Si bien la pérdida de la función debido a la APC puede ser parcialmente correcta, hay informes que muestran que una gran fracción de los pacientes con cáncer de colon tiene al menos un producto del gen APC que se trunca, y que esto tiene una ganancia de la función. De este modo, las proteínas APC truncadas pueden desempeñar un papel activo en la iniciación y la progresión del cáncer de colon en lugar de ser recesivo; por ejemplo, la APC truncada, pero no la APC de longitud completa, puede activar Asef y promover la migración celular. Un informe reciente divulga que los inhibidores de tankirasa de molécula pequeña, G007-LK y G244-LM, que suprimen el crecimiento tumoral en un modelo animal mutante de APC, son efectivos para bloquear la señalización de Wnt/p-catenina que se induce por la mutación APC, (Leu T y otros, Cancer Res., 73(10) 2013).
A pesar de que los defectos en la APC ocurren en una alta fracción de los casos de cáncer de colon, actualmente no existen terapéuticos dirigidos a las vulnerabilidades resultantes de estos defectos. La invención descrita proporciona compuestos inhibidores de molécula pequeña que se dirigen selectivamente a la APC truncada en las células epiteliales de colon humano inmortalizadas (HCEC) para tratar el cáncer de colon.
Breve descripción de la invención
De acuerdo con un aspecto, la invención descrita proporciona una serie de compuestos de molécula pequeña que inhiben selectivamente el crecimiento de las células cancerosas humanas que contienen una proteína truncada de poliposis adenomatosa coli (APC).
De acuerdo con una modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto de Fórmula I. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto de Fórmula I-a. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto de Fórmula I-b. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto de Fórmula I-c. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto de Fórmula I-d. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto seleccionado del grupo que consiste en las 43 estructuras descritas en la reivindicación 3. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto de la fórmula estructural descrita en la reivindicación 5. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña se selecciona del grupo que consiste en las 5 estructuras descritas en la reivindicación 7. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es un compuesto de la fórmula estructural descrita en la reivindicación 9. De acuerdo con otra modalidad, el IC50 del compuesto anticancerígeno de molécula pequeña molécula es de 0,01 nM a 5 pM. De acuerdo con otra modalidad, el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña está en forma de una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéutica del compuesto y un portador farmacéuticamente aceptable. De acuerdo con otra modalidad, la cantidad terapéutica del compuesto anticancerígeno de molécula pequeña es eficaz para inhibir el crecimiento tumoral, inhibir la proliferación tumoral, inducir la muerte celular o una combinación de estos.
De acuerdo con otro aspecto, la invención descrita proporciona una composición farmacéutica para usar en el tratamiento del cáncer colorrectal en un individuo cuyas células epiteliales del colon expresan al menos una proteína APC truncada, que comprende administrar al individuo una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéutica de al menos un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 y un portador farmacéuticamente aceptable, en donde, la cantidad terapéutica es eficaz para inhibir el crecimiento tumoral, inhibir la proliferación tumoral, inducir la muerte celular, o una combinación de estos.
De acuerdo con otro aspecto, la invención descrita proporciona una célula epitelial colónica humana (HCEC) inmortalizada que comprende un gen APC de tipo salvaje de longitud completa, en donde, la célula comprende al menos uno de los siguientes: un vector expresado ectópicamente que contiene un homólogo del oncogén viral de sarcoma de rata de Kirsten (Krasv12), un ARN de horquilla pequeña contra la proteína tumoral p53 (shp53) y un ARN de horquilla pequeña contra la APC (shAPC). De acuerdo con una modalidad, el gen APC contiene una mutación somática en el codón 1450. De acuerdo con otra modalidad, el gen APC contiene una mutación somática en el codón 1309. De acuerdo con otra modalidad, la célula expresa una proteína LacZ. De acuerdo con otra modalidad, la célula expresa el homólogo del oncogén viral del sarcoma de rata Kirsten (Krasv12) y el ARN de horquilla pequeño contra APC (shAPC). De acuerdo con otra modalidad, la célula se transduce con la quinasa 4 dependiente de ciclina retroviral (Cdk4) y un componente catalítico de la telomerasa humana (hTERT).
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 es un diagrama de una cripta colónica. Las criptas del colon están compuestas por una capa epitelial de células que incluye las células madre sometidas a mitosis, células de absorción columnar, células caliciformes productoras de mucina y células enteroendocrinas. Las células se diferencian y migran a la superficie luminal de la cripta, donde son extruidas hacia la luz del intestino por la muerte celular programada. Se cree que la APC participa en todos estos procesos directa o indirectamente modulando los perfiles de la transcripción dentro de las células epiteliales intestinales (ver Goss y otros, Journal of Clinical Oncology, 2000; 18: 1967-1979). La APC influye en la señalización de Wnt a través de la beta-catenina/TCF. La APC de longitud completa influye en el control del ciclo celular al detener las células en G1/S a través de la vía del retinoblastoma (Rb) y localizarlo en los husos mitóticos y centrosomas durante la fase M. La APC influye en la migración celular al estabilizar los microtúbulos y activar la división celular proteína de control 42 (cdc42). Por último, la APC de longitud completa influye en la diferenciación celular y la apoptosis.
La Figura 2 ilustra los posibles genes implicados en la progresión del epitelio colónico normal al cáncer de colon. Se cree que la mutación APC es un evento frecuente y temprano en el cáncer colorrectal, ya que las mutaciones APC se detectan en más del 80 % de los tumores colorrectales, y más del 90 % de las mutaciones APC generan codones de parada prematuros que resultan en productos genéticos truncados.
La Figura 3 muestra la estructura de APC de longitud completa y truncada. La APC truncada carece de los dominios de unión para la beta-catenina y los microtúbulos, pero retiene los dominios de unión para Asef, de este modo conduce a la activación de la proliferación, la inducción de la inestabilidad cromosómica y la estimulación de la migración celular. (ver Fodde y otros, Nat Rev Cancer, 1:55-67) Las mutaciones A1309 y A1450 están más representadas.
La Figura 4 ilustra que las células epiteliales del colon humano inmortalizadas (HCEC) son diploides normales y pueden diferenciarse. (A) Las pequeñas estructuras multicelulares autoorganizadas muestran evidencia de la villina polarizada y la tinción nuclear general. (B) Las pequeñas estructuras multicelulares autoorganizadas (día 11) muestran evidencia de la proteína de unión estrecha-1 (ZO-1) y la tinción nuclear general. (C) Las pequeñas estructuras multicelulares autoorganizadas (día 11) muestran evidencia de la mucina [MUC]2, la proteína de unión estrecha -1 (ZO-1) y la tinción nuclear general. (D) Muestra que hTERT CDK4 inmortalizó las células epiteliales del colon humano diferenciadas de manera similar a las células intestinales primarias de ratón. Las células hTERT CDK son 100 % LGR-5 positivas. El LGR-5 es un biomarcador aceptado de las células madre del colon. (ver Roig y otros. Gastro, 2010; 138:1012-1021).
La Figura 5 muestra que los truncamientos de la APC confieren propiedades tumorigénicas. Las células epiteliales del colon humano isogénicas (HCEC) usadas fueron: HCEC inmortalizadas con quinasa 4 dependiente de ciclina (CDK4) y transcriptasa inversa de la telomerasa humana (hTERT) (1CT); HCEC con las alteraciones genéticas CDK4, hTERT, homólogo del oncogén viral de sarcoma de rata Kirsten (Krasv12), ARN de horquilla pequeña contra la APC (shAPC), (1CTRA); HCEC con las alteraciones genéticas CDK4, hTERT, Krasv12, ARN de horquilla pequeña contra la proteína tumoral p53 (shp53), shAPC (1CTRPA); 1CTRPA que expresa LacZ (1CTRPA LacZ); 1c Tr PA que tiene una mutación somática en el codón 1450 (1CTRPA 1450); y 1CTRPA que tiene una mutación somática en el codón 1309 (1CTRPA 1309). Mientras que una pérdida del 90 % de la función APC no aumenta las propiedades tumorogénicas, el derivado de la línea celular isogénica que contiene un APC truncado muestra las características de la transformación. Esto indica que la APC truncada proporciona una ganancia de la función que representa un aumento en la progresión del cáncer y puede explicar por qué una gran fracción de pacientes con CRC retiene una proteína APC truncada.
La Figura 6 es un diagrama de flujo que muestra las etapas en la identificación de TASIN-1 (inhibidor selectivo de APC truncada) a través de la detección de alto rendimiento.
La Figura 7 muestra que TASIN-1 es selectivamente tóxico para las líneas de cáncer colorrectal (CRC) con truncamiento de la APC. (b) Validación de la expresión ectópica del truncamiento de APC, inactivación de WT APC y p53 y expresión de Krasv12 oncogénico por Transferencia Western o un ensayo de digestión de restricción. La línea celular usada en la pantalla principal se resalta en el cuadro rojo. (e) Curva de respuesta a la dosis de TASIN-1 en las células HCT116 y DLD1. La tabla (e) enumera el valor de IC50 para ambas líneas celulares. DLD1 expresa la APC truncada, mientras que HCT116 expresa la APC de tipo salvaje. De este modo, TASIN-1 inhibe que las células DLD1 que expresan las APC truncadas sobrevivan y formen colonias, pero tiene poco o ningún efecto sobre las células HCT116 (f) Fotografías representativas y cuantificación de las células HCT116 y DLD1 cultivadas en agar blando en presencia o ausencia de TASIN-1 durante 7 días. Los datos representan la media ± desviación estándar, n=3. Prueba t de Student, ***P <0,001.
La Figura 8 ilustra que la expresión ectópica del truncamiento de APC confiere propiedades tumorigénicas. (a) La expresión ectópica del truncamiento de la APC aumentó la tasa de crecimiento en las células 1CTRPA A1309 en comparación con 1CTRPA. Cambio de pliegue en la eficiencia de formación de las colonias de agar blando (b) o la invasión a través de Matrigel® (c) en las células 1CTRPA A1309 en comparación con 1CTRPA. Los datos representan la media ± desviación estándar, n=3. Prueba t de Student, *P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
La Figura 9 ilustra que la inactivación de la APC truncada desensibiliza las células DLD1 a TASIN-1, proporcionando evidencia de que la APC es el objetivo de TASIN-1.
La Figura 10 muestra que se requiere el truncamiento de la APC para los efectos citotóxicos de TASIN-1. (a) Curva de respuesta a la dosis de las células DLD1 que expresan shRNA o shRNA no silenciadores (Nsi) contra la APC. La tabla (a) enumera el valor IC50 para cada línea celular. (b) La curva de la respuesta a la dosis de las células HCT116 y HCT116 p53-/-, un mutante nulo para la proteína tumoral 53 (que es un supresor tumoral conocido), infectado con un vector lentiviral que expresa APC A1309 truncada, se usó para expresar la transacetilasa betagalactósido (LacA) o el mutante de truncamiento APC A1309. La LacA se expresó ectópicamente en las líneas celulares como un control negativo. Los datos representan las medias ± desviación estándar, n=3. La inactivación y la expresión ectópica se demostraron mediante Transferencia Western. (c) El gráfico de barras izquierdo muestra la fracción superviviente de cada línea celular tratada con DMSO, 2,5 M o 5 pM de TASIN-1 durante 72 horas. En la tabla de la derecha (c) se enumeran los promedios de los valores de IC50 para cada línea celular a partir de triplicados biológicos. Se determinó la significación estadística entre el promedio de los valores de IC50 de las líneas celulares con APC WT y las líneas celulares con APC truncada. Prueba t de Student, ****p <0 , 0001. El estado de la APC en cada línea celular se basa en datos publicados (Chandra, SH, Wacker, I. Appelt, Reino Unido, Behrens, J. & Schneikert, J. A common role for various human truncated adenomatous polyposis coli isoforms in the control of beta-catenin activity and cell proliferation. PloS one 7, e34479 (2012)) y la Base de datos del Proyecto Genoma del Cáncer (www.sanger.ac.uk/genetics/CGP).
La Figura 11 muestra que TASIN-1 es selectivamente tóxico para las células con la APC truncada. TASIN-1 no afecta la viabilidad de las líneas celulares normales (a) y otras células de tipo canceroso (b) con WT APC, pero mata las células DU4457 con la APC truncada. Los datos representan la media ± desviación estándar, n=3. Prueba t de Student, ***P <0,001.
La Figura 12 ilustra las respuestas de las líneas celulares de cáncer colorrectal con un estado APC variable a TASIN-1. Las líneas celulares epiteliales del colon humano que expresan APC HT-29 truncada, DLD1, SW620, SW480, HCT15, Lovo y Caco-2, y las células que expresan APC, HCT116, HCT116 p53-/-, HCEC, C26Ci, HBEC y BJ de tipo salvaje, se trataron con TASIN-1 y se evaluó la fracción celular sobreviviente. Tenga en cuenta que HCT116, HCT116 p53-/-, HCEC y C26Ci son líneas celulares colónicas, mientras que las líneas celulares HBEC y BJ son líneas celulares epiteliales bronquiales y fibroblastos de prepucio, respectivamente. En ambas condiciones, TASIN-1 a 2 |jM y 5 j M, todas las líneas celulares que expresan la APC truncada demostraron sensibilidad a TASIN-1, mientras que las líneas celulares que expresan APC de tipo salvaje no demostraron sensibilidad a TASIN-1. Esto sugiere que las células normales que contienen niveles de la APC de tipo salvaje no deberían afectarse por TASIN-1.
La Figura 13 muestra que el tratamiento sostenido con dosis bajas de TASIN-1 suprimió el crecimiento independiente del anclaje en las células DLD1.
La Figura 14 muestra que TASIN-1 induce la apoptosis en las células DLD1. Después de 72 horas de incubación de las células HCT116 o DLD1 con DMSO, TASlN-1 2,5 pM o BARD, los niveles de PARP escindido se analizaron mediante transferencia Western. El DMSO sirvió como control negativo, sin influir en la cantidad de PARP escindido en las líneas celulares. Sin embargo, BARD sirvió como control positivo, facilitando el aumento de PARP escindido en las líneas celulares HCT116 y DLD1. Las células DLD1 tratadas con TASIN-1 exhibieron un aumento en la PARP escindida, mientras que en las mismas condiciones las células HCT116 no lo hicieron. La HCT116 expresa la APC de tipo salvaje, mientras que la DLD1 expresa la APC truncada. Además, la actividad de la caspasa se incrementó en las células DLD1 tratadas con TASIN-1,2,5 pM.
La Figura 15 ilustra que TASIN-1 induce la apoptosis dependiente de la quinasa N-terminal c-Jun (JNK) en DLD1 pero no en las células HCT116. La incubación con TASIN-1 induce la escisión de PARP (a), la liberación del citocromo c de las mitocondrias (b) y la activación de la caspasa 3 en las células DLD1 (c). La doxorrubincina (DOX) se usó como control positivo para la apoptosis. Se usó la p-actina como control de carga. Los valores en (c) representan el doble de la inducción de la actividad caspasa3/7 normalizada a las células tratadas con el DMSO. r LU: unidad relativa de luciferasa. (d) El tratamiento con TASIN-1 induce la fosforilación de JNK en las células DLD1. (e)-(g) El cotratamiento de t As iN-1 con SP600125 revierte los efectos destructores de TASIN-1 (e), inhibe la fosforilación de JNK, elimina la escisión de PARP inducida por el tratamiento de TASIN-1 (f) y reduce la actividad de la caspasa3/7 (g). Los datos representan la media ± desviación estándar, n=3. Prueba t de Student, **P <0,01, *** P <0,001.
La Figura 16 muestra que TASIN-1 indujo la liberación del citocromo C en las células DLD1. Cito: citoplasma; mito: mitocondrias. Canal aniónico dependiente de voltaje (VDAC), que se encuentra en la membrana externa mitocondrial.
La Figura 17 muestra la estabilidad metabólica de TASIN-1 en S9 de ratón y los ensayos de los hepatocitos. La Figura 18 muestra que TASIN-1 se retiene en el intestino grueso después de absorberse por el espacio peritoneal. LIC: contenido del intestino grueso.
La Figura 19 ilustra el método por el cual la potencia y la selectividad de los compuestos de plomo se caracterizaron in vivo.
La Figura 20 muestra que TASIN-1 inhibe el crecimiento tumoral en los xenoinjertos DLD1. El programa de dosificación fue intraperitoneal durante 18 días a 40 mg/kg, administrado dos veces al día. (a) Los tamaños del tumor de los xenoinjertos DLD1 tratados con TASIN-1 (abajo) son más pequeños que los de los ratones control (arriba). Barra de escala, 10 mm. TASIN-1 reduce significativamente la tasa del crecimiento tumoral de DLD1 (b). La Figura 21 muestra que TASIN-1 inhibe selectivamente el crecimiento tumoral en los xenoinjertos con truncamiento de la APC (c-d) y reduce la tumorigenicidad en un modelo genético de ratón CRC (e-g). TASIN-1 reduce significativamente la tasa del crecimiento tumoral de HT29 (c) pero no los xenoinjertos de HCT116 (d). (c)-(d), los datos representan las medias ± desviación estándar de 8 tumores. El tratamiento con TASIN-1 reduce significativamente el número de los tumores benignos (pólipos) (e) y disminuye el tamaño del pólipo (f) en CPC; ratones Apc. En (e), cada punto representa un ratón. La media se indica mediante la línea negra continua. (g) TASIN-1 no inhibió el crecimiento de los ratones. En (f) y (g), los datos representan la media ± desviación estándar de 8-10 ratones. Se usaron la prueba t de Student (c)-(e), (g) y la prueba t múltiple ((f), FDR=1 %). *P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
La Figura 22 muestra que TASIN-1 inhibió el crecimiento tumoral en los xenoinjertos HT29. El programa de dosificación fue intraperitoneal durante 18 días a 40 mg/kg, administrado dos veces al día.
La Figura 23 muestra que TASIN-1 no inhibe el crecimiento tumoral en xenoinjertos de HCT116. El programa de dosificación fue intraperitoneal durante 18 días a 40 mg/kg, administrado dos veces al día. HCT116 tiene APC de tipo salvaje. De este modo, TASIN-1 mantiene la selectividad para APC truncada in vivo.
La Figura 24 muestra que TASIN-1 reduce la tumorigénesis en un modelo de ratón CRC genéticamente modificado. (a) TASIN-1 se retiene principalmente en el tejido del intestino grueso después de la inyección intraperitoneal. (b) Fotografías representativas de dos colon de los grupos de control y tratados con TASIN-1. (c) TASIN-1 suprime la expresión del conjunto de genes inflamatorios in vivo. Se extrajo el ARN de los lisados tumorales de control y del grupo tratado con TASIN-1, se sintetizó el ADNc y se sometió a análisis de qPCR. Los datos representan la media ± desviación estándar de 5 ratones. Prueba t de Student, *P <0,05, **P <0,01.
La Figura 25 muestra que TASIN-1 inhibe el tumor en el modelo de ratón de xenoinjerto mediante la inducción de la apoptosis sin toxicidad notable. (a) Pesos corporales antes y después del tratamiento en los ratones control o tratados con TASIN-1. (b) Imágenes representativas de tinción H&E e inmunohistoquímica para la caspasa 3 escindida en TASIN-1 o los xenoinjertos DLD1 tratados con el disolvente. Barra de escala (izquierda), 50 pM; (derecha), 200 pM. Los tumores tratados con TASIN-1 mostraron las áreas de las células tumorales apoptóticas (marcadas con un recuadro, abajo a la izquierda) y mostraron la tinción positiva para la caspasa 3 escindida (abajo a la derecha). (c) PARP escindido se detectó en los extractos del control o en las muestra de tumor tratada con TASIN-1 mediante transferencia Western.
La Figura 26 muestra el análisis de la relación estructura-actividad (SAR) para identificar los análogos de TASIN-1. Los análogos se probaron con diferentes quimiotipos. Se han probado 101 análogos y 40 de estos análogos muestran una mayor potencia en las células DLD1 que TASIN-1.
La Figura 27 muestra que los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña PDSA-010, PDSA-011, PDSA-013 y PDSA-014 matan de forma potente y selectiva las células DLD1 y 1CTRPA A1309.
La Figura 28 muestra que el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña PDSA-014, administrada por inyección intraperitoneal a 10 mg/kg dos veces al día, inhibe el crecimiento tumoral en xenoinjertos DLD1.
La Figura 29 muestra que el compuesto anticancerígeno de molécula pequeña PDSA-014, administrado por inyección intraperitoneal a 10mg/kg dos veces al día, no inhibe el crecimiento tumoral en los xenoinjertos de HCT116.
La Figura 30 muestra que TASIN-1,2,5 pM induce la muerte celular lenta y reversible.
La Figura 31 muestra que TASIN-1 aumenta el índice mitótico 4 veces sobre las células de control.
La Figura 32 muestra que TASIN-1 altera la congregación cromosómica similar al control positivo PITSTOP2. La Figura 33 muestra que TASIN-1 altera los husos mitóticos, la alineación cromosómica y la organización de la fibra K durante la mitosis en las células DLD1. (a) El ancho de la placa de la metafase. (b) La relación del ancho del huso/ancho total de las células de las células de la metafase. Pitstop2 es un control positivo para la interrupción del huso. Cada punto representa una célula. La media se indica mediante la línea negra continua. (c) Imágenes representativas de las células sincronizadas con la metafase teñidas para a-tubulina (rojo), HURP (verde) y ADN (DAPI, azul). El gráfico muestra el porcentaje de las células tratadas con TASIN-1 con localización anormal de HURP. Los datos representan la media ± error estándar de la media de 50 células acumuladas de 3 triplicados biológicos. Prueba t de Student, **P <0,001. (d) El tratamiento con TASIN-1 induce puentes microsómicos y anafásicos rezagados como lo indica la flecha roja. Todas las barras de escala: 10 pM.
La Figura 34 muestra que TASIN-1 no afecta la actividad de la vía Wnt en las células DLD1. Inmunotinción para la P-catenina activa (a) y la transferencia Western para la p-catenina total (b) en las células DLD1 tratadas con Ta SIN-1 durante 24 horas. (c) TASIN-1 no afectó la actividad de la vía Wnt mediante el uso del indicador STF. IWR se usó como control positivo (Chen, C. y otros. Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer. Nature Chemical Biology 5, 100-107 (2009)). Los datos representan la media ± desviación estándar, n=3. Prueba t de Student, **P <0,01, *** P <0,001. Todas las barras de escala: 10 pM. La Figura 35 muestra que TASIN-1 retrasa la entrada en la fase G1 en células DLD-1 después de la liberación de la sincronización de nocodazol.
Las Figuras 36 (a-z) y (aa) muestran espectros de RMN de compuestos ejemplificados.
Descripción detallada
La invención descrita puede entenderse mejor a partir de la siguiente descripción de las modalidades ilustrativas, tomadas en conjunto con las figuras y los dibujos adjuntos. Debería ser evidente para los expertos en la técnica que las modalidades descritas de la invención descrita proporcionadas en la presente son meramente ejemplares e ilustrativas y no limitantes.
Definiciones:
Varios términos usados a lo largo de esta especificación tendrán las definiciones establecidas en la presente descripción.
El término "gen de la poliposis adenomatosa coli " o "gen APC" o "APC" como se usa en la presente, se refiere a una secuencia de ADN de mamífero que codifica una proteína APC. Un ejemplo de un gen APC humano se encuentra en el cromosoma 5, 5q21-q22, GenBank: M74088.1. Los sinónimos para el gen APC humano incluyen: BTPS2, DP2, DP2.5, DP3, PPP1R46 y la "proteína fosfatasa 1, subunidad reguladora 46". Un ejemplo de un gen APC de ratón se encuentra en el cromosoma 18 B1, MGI: 88039. Los sinónimos para el gen APC de ratón incluyen: CC2, Min, mAPC, AI0147805, AU020952 y AW124434.
El término "compuestos anticancerígenos", como se usa en la presente, se refiere a los compuestos de molécula pequeña que se dirigen selectivamente e inhiben la actividad biológica de las APC truncadas.
El término "proteína de poliposis adenomatosa coli " o "proteína APC" o "APC" como se usa en la presente, se refiere a una secuencia de la proteína de mamífero de 2843 aminoácidos. Un ejemplo de una secuencia APC humana es GenBank: AAA03586. Un ejemplo de una secuencia APC de ratón es GenBank: AAB59632.
El término "truncamiento de APC" o "mutante de truncamiento de APC" o "mutación de truncamiento de APC" se refiere a un producto proteico truncado que resulta de una mutación que ocurre dentro del gen APC. Un truncamiento APC puede ser, por ejemplo, pero no se limita, a un producto de 1309 aminoácidos o un producto de 1450 aminoácidos.
El término "administrar" como se usa en la presente, incluye la administración in vivo, así como la administración directamente al tejido ex vivo. Generalmente, las composiciones pueden administrarse sistémicamente por vía oral, bucal, parenteral, tópica, por inhalación o insuflación (es decir, por la boca o por la nariz), o rectalmente en formulaciones de unidades de dosificación que contienen portadores farmacéuticamente aceptables no tóxicos, adyuvantes y portadores como deseado, o puede administrarse localmente por medios tales como, pero no se limitan a, la inyección, implantación, injerto, aplicación tópica o parenteralmente.
Los términos "análogo" y "derivado" se usan indistintamente para significar un compuesto producido a partir de otro compuesto de estructura similar en una o más etapas. Un "derivado" o "análogo" de un compuesto retiene al menos un grado de la función deseada del compuesto de referencia. En consecuencia, un término alternativo para "derivado" puede ser "derivado funcional". Los derivados pueden incluir modificaciones químicas, como la alquilación, la acilación, la carbamilación, la yodación o cualquier modificación que deriva del compuesto. Dichas moléculas derivadas incluyen, por ejemplo, aquellas moléculas en las que los grupos amino libres se han derivado para formar clorhidratos de amina, grupos p-toluenosulfonilo, grupos carbobenzoxi, grupos t-butiloxicarbonilo, grupos cloroacetilo o grupos formales. Los grupos carboxilo libres pueden derivatizarse para formar sales, ésteres, amidas o hidrazidas. Los grupos hidroxilo libres pueden derivatizarse para formar derivados de O-acilo o O-alquilo. El término "condición", como se usa en la presente, se refiere a una variedad de estados de salud y está destinado a incluir trastornos o enfermedades causadas por cualquier mecanismo subyacente o lesión. Las enfermedades asociadas con la APC incluyen, pero no se limitan, al cáncer de colon.
El término "enfermedad" o "trastorno", como se usa en la presente, se refiere a un deterioro de la salud o una condición de funcionamiento anormal.
El término "fármaco" como se usa en la presente, se refiere a un agente terapéutico o cualquier sustancia usada en la prevención, diagnóstico, alivio, tratamiento o cura de la enfermedad.
Como se usa en la presente, el término "actividad enzimática" se refiere a la cantidad del sustrato consumido (o producto formado) en un tiempo dado en las condiciones dadas. La actividad enzimática puede denominarse además como el "número de recambio".
El término "inhibidor", como se usa en la presente, se refiere a reducir o modular la actividad química o biológica de una sustancia o compuesto.
El término "lesión", como se usa en la presente, se refiere al daño o perjuicio a una estructura o función del cuerpo causada por un agente externo o fuerza, que puede ser física o química.
El término "síndrome", como se usa en la presente, se refiere a un patrón de síntomas indicativos de alguna enfermedad o afección.
El término "agente terapéutico" como se usa en la presente, se refiere a un fármaco, molécula, ácido nucleico, proteína, metabolito, composición u otra sustancia que proporciona un efecto terapéutico. El término "activo" como se usa en la presente, se refiere al ingrediente, componente o constituyente de las composiciones de la invención descrita, responsables del efecto terapéutico pretendido. Los términos "agente terapéutico" y "agente activo" se usan indistintamente en la presente. El agente activo puede ser, por ejemplo, pero sin limitarse al menos a uno de un compuesto de la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
El término "modificar", como se usa en la presente, significa cambiar, variar, ajustar, templar, alterar, afectar o regular en cierta medida o proporción en uno o más detalles.
El término "agente modificador" como se usa en la presente, se refiere a una sustancia, composición, extracto, ingrediente botánico, extracto botánico, constituyente botánico, componente terapéutico, constituyente activo, agente terapéutico, fármaco, metabolito, agente activo, proteína, componente no terapéutico, constituyente no activo, agente no terapéutico o agente no activo que reduce, disminuye en grado o extensión, o modera la forma, síntomas, signos, cualidades, carácter o propiedades de una condición, estado, trastorno, enfermedad, síntoma o síndrome.
El término "modular" como se usa en la presente, significa regular, alterar, adaptar o ajustar a una determinada medida o proporción.
El término "parenteral" como se usa en la presente, se refiere a la introducción en el cuerpo mediante una inyección (es decir, administración por inyección), que incluye, por ejemplo, por vía subcutánea (es decir, una inyección debajo de la piel), intramuscularmente (es decir, una inyección en un músculo); intravenosamente (es decir, una inyección en una vena), intratecalmente (es decir, una inyección en el espacio alrededor de la médula espinal o debajo de la membrana aracnoidea del cerebro), inyección intraesternal o técnicas de infusión. Una composición administrada parenteralmente se administra mediante el uso de una aguja, por ejemplo, una aguja quirúrgica. El término "aguja quirúrgica", como se usa en la presente, se refiere a cualquier aguja adaptada para el suministro de las composiciones fluidas (es decir, capaces de fluir) en una estructura anatómica seleccionada. Las preparaciones inyectables, tales como las suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, pueden formularse de acuerdo con la técnica conocida mediante el uso de agentes dispersantes o humectantes ejemplares y agentes de suspensión.
El término "reduce" o "reducir" como se usa en la presente, se refiere a la aparición limitada de un trastorno en los individuos con riesgo de desarrollar el trastorno.
Como se usa en la presente, los términos "sujeto" o "individuo" o "paciente" se usan indistintamente para referirse a un miembro de una especie animal de origen mamífero, que incluyen los humanos.
El término "síntoma", como se usa en la presente, se refiere a un fenómeno que surge y acompaña a una enfermedad o trastorno particular y sirve como una indicación de ello.
El término "componente terapéutico" como se usa en la presente, se refiere a una dosificación terapéuticamente efectiva (es decir, dosis y frecuencia de administración) que elimina, reduce o previene la progresión de una manifestación de la enfermedad particular en un porcentaje de una población. Un ejemplo de un componente terapéutico comúnmente usado es el ED50, que describe la dosis en una dosis particular que es terapéuticamente efectiva para una manifestación de una enfermedad en particular en el 50 % de una población.
El término "efecto terapéutico" como se usa en la presente, se refiere a una consecuencia del tratamiento, cuyos resultados se consideran deseables y beneficiosos. Un efecto terapéutico puede incluir, directa o indirectamente, el arresto, reducción o eliminación de una manifestación de la enfermedad. Un efecto terapéutico puede incluir, además, directa o indirectamente, la reducción de la detención o la eliminación de la progresión de una manifestación de la enfermedad.
Como se usa en la presente, el término "tópico" se refiere a la administración de una composición en, o inmediatamente debajo, del punto de la aplicación. La frase "aplicación tópica" describe la aplicación en una o más superficies que incluyen las superficies epiteliales. A pesar de que la administración tópica, en contraste con la administración transdérmica, generalmente proporciona un efecto local en lugar de un efecto sistémico, los términos "administración tópica" y "administración transdérmica" como se usan en la presente, a menos que se indique o implique de cualquier otra forma, se usan indistintamente.
Como se usa en la presente, el término "mutación" se refiere a un cambio de la secuencia de ADN dentro de un gen o cromosoma de un organismo que resulta en la creación de un nuevo carácter o rasgo que no se encuentra en el tipo parental, o el proceso por el cual dicho cambio ocurre en un cromosoma, ya sea a través de una alteración en la secuencia de los nucleótidos del ADN que codifica un gen o mediante un cambio en la disposición física de un cromosoma. Tres mecanismos de mutación incluyen la sustitución (intercambio de un par de bases por otro), la adición (la inserción de una o más bases en una secuencia) y la eliminación (pérdida de uno o más pares de bases).
Los términos "mutantes" y "variantes" se usan indistintamente en la presente, para referirse a las secuencias de los nucleótidos con identidad sustancial a una secuencia de los nucleótidos de referencia. Las diferencias en las secuencias pueden ser el resultado de los cambios en la secuencia o la estructura, ya sea naturalmente o por diseño. Pueden surgir cambios naturales durante el curso de la replicación normal o la duplicación en la naturaleza de la secuencia particular del ácido nucleico. Los cambios diseñados pueden diseñarse específicamente e introducirse en la secuencia para fines específicos. Dichos cambios específicos pueden realizarse in vitro mediante el uso de una variedad de técnicas.
El término "composición farmacéutica" como se usa en la presente, se refiere a una preparación que comprende un producto farmacéutico, fármaco o ingrediente activo.
Como se usa en la presente, el término "tratar" incluye anular, inhibir, ralentizar o revertir sustancialmente la progresión de una afección, mejorar sustancialmente los síntomas clínicos de una afección o prevenir sustancialmente la aparición de los síntomas clínicos de una afección. El tratamiento adicional se refiere a lograr uno o más de los siguientes: (a) reducir la gravedad del trastorno; (b) limitar el desarrollo de los síntomas característicos de los trastornos que se están tratando; (c) limitar el empeoramiento de los síntomas característicos de los trastornos que se tratan; (d) limitar la recurrencia de los trastornos en los pacientes que han tenido previamente los trastornos; y (e) limitar la recurrencia de los síntomas en los pacientes que anteriormente eran asintomáticos para el trastorno(s). El término "condición", como se usa en la presente, se refiere a una variedad de estados de salud y está destinado a incluir los trastornos o las enfermedades causadas por cualquier mecanismo subyacente o trastorno en el que se expresa una proteína APC truncada. Un sujeto que lo necesita es un paciente que tiene o está en riesgo de tener un trastorno relacionado con la mutación APC.
Compuestos
En la presente se describe un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña de Fórmula I:
Figure imgf000010_0001
en donde:
Y1 y Y2 son cada uno independientemente CH o N;
L es SO2 , CO, CH2 , o CHMe;
X 2 se selecciona del grupo que consiste en CH2 , CHR2,NR3, O, S;
X I se selecciona del grupo que consiste en CH2 , CHR4, NR5, O, S;
n = 0 , 1 , 2
R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C 1-4 , alquenilo C1-4 , alquinilo C1-4 , CH2arilo, CH2heteroarilo
R3, R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6 , cicloalquilo C 1-6 , alquenilo C 1-6 , alquinilo, arilo, heteroarilo, CH2arilo, CH2heteroarilo;
R3 puede formar un puente de metileno o etileno a uno de los otros átomos del anillo, proporcionando de este modo una estructura de anillo bicíclico; y el anillo conectado a L puede ser arilo, heteroarilo, heterociclilo, cicloalquilarilo fundido, heterociclilarilo fundido, arilheterociclilo fundido, cicloalquilheteroarilo fundido, heterociclilheteroarilo fundido, heteroarilheterociclilo fundido;
de modo que todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que haya centros estereogénicos presentes.
Ejemplos de los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña de fórmula I se encuentran en la Tabla A (SAR). Todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que existan centros esterogénicos.
Se describe un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña de Fórmula Ia:
Figure imgf000010_0002
en donde:
Y1 y Y2 son cada uno independientemente CH o N;
L es SO2 , CO, CH2 , o CHMe;
X1 se selecciona del grupo que consiste en CH2 , CHR4, NR5, O, S;
R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me;
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-6; cicloalquilo C 1-6, alquinilo C 1-6, alquinilo C 1-6, arilo, heteroarilo, CH2arilo, CH2heteroarilo;
el anillo que se conecta a L puede ser arilo, heteroarilo, heterociclilarilo fusionado;
de modo que todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que haya centros estereogénicos presentes.
Se describe un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña de Fórmula I-b:
Figure imgf000011_0001
en donde:
L es SO2 , CO, CH2 , o CHMe
R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me;
R4 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6 ; alquinilo C1-6, arilo, CH2arilo;
el anillo que se conecta a L puede ser arilo, heteroarilo, heterociclilarilo fusionado;
de modo que todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que haya centros esterogénicos presentes.
Un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña se representa por la Fórmula I-c:
Figure imgf000011_0002
en donde:
L es SO2 , CH2, o CHMe;
el anillo que se conecta a L puede ser arilo, heteroarilo, heterociclilarilo fusionado;
de modo que todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que haya centros estereogénicos presentes.
Un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña se representa por la Fórmula I-d:
Figure imgf000011_0003
en donde:
L es SO2 , CH2, o CHMe;
R4 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6; alquinilo C1-6, arilo, CH2arilo;
el anillo que se conecta a L puede ser arilo, heteroarilo, heterociclilarilo fusionado;
de modo que todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que haya centros estereogénicos presentes.
Un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña se representa por la Fórmula I-e:
Figure imgf000012_0001
en donde:
R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me;
R4 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, propargilo, isopropilo, ciclopropilo, CH2arilo;
R6-10 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, Me, Et, CF3 , ciclopropilo, isopropilo, terc-butilo, arilo, OMe, OCF3, OCHF2 , OAril, CN, N3 , CO Arilo, CO2H, CO2R, CHO, CONH2, CONR2 , CONHR. En el contexto de este párrafo, R se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C1-4 , cicloalquilo C1-4, arilo, CH2Arilo, CH2Heteroarilo;
de modo que todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que haya centros estereogénicos presentes.
Los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña se representan por la Fórmula I-e, R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me; R4 se selecciona de H, Me, propargilo, isopropilo, ciclopropilo, CH2aryl; R6-10 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, Cl, Br, Me, Et, CF3 , ciclopropilo, isopropilo, arilo, OMe, OCF3 , OCHF2 , OArilo;
Los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña se representan por la Fórmula I-e, R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me; R4 se selecciona de H, Me, propargilo, isopropilo, ciclopropilo, CH2aryl; R6 es arilo, R7-10 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, Cl, CF3, Me, ciclopropilo, isopropilo, OMe, OCF3 , OCHF2;
Los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña se representan por la Fórmula I-e, R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me; R4 se selecciona de H, Me, propargilo, isopropilo, ciclopropilo, CH2arilo; R7 es Arilo, R6, R8, R9 y R10 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, Cl, CF3 , Me, ciclopropilo, isopropilo, OMe, OCF3 , OCHF2;
Los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña se representan por la Fórmula I-e, R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me; R4 se selecciona de H, Me, propargilo, isopropilo, ciclopropilo, CH2aryl; R8 es Arilo, R6, R7, R9 y R10 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, Cl, CF3, Me, ciclopropilo, isopropilo, OMe, OCF3 , OCHF2;
Los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña se representan por la Fórmula I-e, R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me; R4 se selecciona de H, Me, propargilo, isopropilo, ciclopropilo, CH2arilo; R7 es COArilo, R6, R8, R9 y R10 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, Cl, CF3, Me, ciclopropilo, isopropilo, OMe, OCF3, OCHF2;
Un compuesto anticancerígeno de molécula pequeña se representa por la fórmula I-f:
Figure imgf000012_0002
en donde:
Y1 y Y2 son cada uno independientemente CH o N;
R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me;
R4 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6; cicloalquilo C1-6, alquenilo C1-6, alquinilo C1-6, CH2arilo; R11 y R12 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, Cl, Br, Me, CF3 , ciclopropilo, arilo, heteroarilo; de modo que todos los estereoisómeros posibles, que incluyen los isómeros ópticamente activos, se incluyen siempre que haya centros estereogénicos presentes.
Los compuestos anticancerígenos de molécula pequeña se representan por la Fórmula I-f, Y1 es CH; Y2 es N; R1 y R2 son cada uno independientemente H o Me; R4 se selecciona de H, Me, propargilo, isopropilo, ciclopropilo, CH2arilo; R11 es H, Me, CF3, ciclopropilo, arilo; y R12 se selecciona de H, F, Cl, CF3 , Arilo;
La presente invención se refiere a los compuestos específicos reivindicados en las reivindicaciones 1-6.
En una modalidad, la presente invención se refiere a un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000013_0001

Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES
    Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
    Figure imgf000094_0001
    Figure imgf000095_0001
    95
    Figure imgf000096_0001
    96
    Figure imgf000097_0001
    97
    Figure imgf000098_0001
    98
    Figure imgf000099_0001
    99
    Figure imgf000100_0001
    100
    Figure imgf000101_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
  2. 2. El compuesto de la reivindicación 1 seleccionado del grupo que consiste en:
    Figure imgf000101_0002
    Figure imgf000102_0001
    102
    Figure imgf000103_0001
    Figure imgf000104_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
  3. 3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el valor de IC50 del compuesto en las células DLD-1 es:
    Figure imgf000104_0002
    Continuación
    Figure imgf000105_0001
    Continuación
    Figure imgf000106_0001
    Continuación
    Figure imgf000107_0001
    Continuación
    Figure imgf000108_0001
    Continuación
    Figure imgf000109_0001
  4. 4. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéutica del compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.
  5. 5. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4 para usar para inhibir el crecimiento tumoral, inhibir la proliferación tumoral, inducir la muerte celular o una combinación de estos.
  6. 6. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4 para usar en el tratamiento del cáncer colorrectal en un sujeto cuyas células epiteliales del colon expresan al menos una proteína APC truncada.
    Figure imgf000110_0002
    Figure imgf000110_0001
    Inestabilidad
    Trisomia 7,5p genómica, 18q
    Figure imgf000111_0001
    Trisomia 20,17p
    Figure imgf000111_0002
    Otras alteraciones
    Figura 2
    APC de longitud completa 1309 U S O
    Figure imgf000112_0001
    COON
    Figure imgf000112_0004
    Región de agrupación de mutaciones
    APC truncada en C-terminal
    Figure imgf000112_0002
    Activación de Asef Activación de la transcripción Inducción de de -catenina/TCF dtsfunciones del huso
    Figure imgf000112_0003
    F ig u ra 3
    Figure imgf000113_0001
    Figure imgf000114_0002
    Figure imgf000114_0001
    1CTRA Shp53
    Figure imgf000115_0002
    APC A PC
    1CT 1450 1309 Sí (6,704 cmpds)
    1
    Lín
    Figure imgf000115_0001
    Compuestos líderes
    F ig u ra 6
    Figure imgf000116_0001
    Figura 7
    Figure imgf000117_0002
    Figure imgf000117_0001
    Figura 8
    Figure imgf000118_0001
    Figure imgf000119_0001
    APC truncada
    Figure imgf000119_0002
    Figura 10
    Figure imgf000120_0001
    F ig u ra 11
    Figure imgf000121_0001
    F ig u ra 12
    DMSO 2l>nM TASIN-1
    Figure imgf000122_0001
    F ig u ra 13
    HCT116 L'l !)1
    DMSO 2,5 (jM BARD DMSO 2,5 (jM BARD
    Figure imgf000123_0001
    HCT116 DLD1
    *» »p<0,001
    F ig u ra 14
    Figure imgf000124_0001
    F ig u ra 15
    TASIN-1 (2,5 pM):
    Citocromo C 72 h
    VÜAC
    Figure imgf000125_0001
    cito: citoplasma mito: mitocondria
    F ig u ra 16
    Figure imgf000126_0001
    
    Figure imgf000127_0001
    
    Figure imgf000128_0002
    vehículo compuesto Vehículo compuesto
    Figure imgf000128_0001
    Velocidad de crecimiento tumoral
    F ig u ra 19
    Figure imgf000129_0001
    *p<0,05; **p<0 ,01 ; ***p <0 ,0001
    Figura 20
    Figure imgf000130_0001
    HT29
    1400
    Figure imgf000131_0001
    Días posteriores a la implantación Figura 22
    HCT116
    Figure imgf000132_0001
    Días posteriores a la implantación Figura 23
    Figure imgf000133_0001
    Figura 24
    Figure imgf000134_0001
    F ig u ra 25
    Figure imgf000135_0001
    Figure imgf000135_0002
    Figure imgf000135_0003
    Figure imgf000135_0004
    Figure imgf000135_0005
    Figure imgf000135_0006
    Figura 26
    Figure imgf000136_0001
    
    Figure imgf000137_0001
    
    Figure imgf000138_0002
    Figure imgf000138_0001
    Figura 29
    Figure imgf000139_0001
    
    Figure imgf000140_0001
    Control ta sin-1 Pitstop2
    (n=3, >100 células por muestra)
    Figura 31
    Figure imgf000141_0001
    Figura 32
    Figure imgf000142_0001
    ı42
    Figure imgf000143_0001
    ı43
    Figure imgf000144_0001
    ı44
    Figure imgf000145_0001
    
    Figure imgf000146_0001
    
    Figure imgf000147_0001
    
    Figure imgf000148_0001
    Figura 36(d)
    Figure imgf000149_0001
    
    Figure imgf000150_0001
    Figure imgf000151_0001
    Figure imgf000152_0001
    Figura 36(h)
    Figure imgf000153_0001
    ı53
    Figure imgf000154_0001
    ı54
    Figure imgf000155_0001
    ı55
    Figure imgf000156_0001
    
    Figure imgf000157_0001
    
    Figure imgf000158_0001
    
    Figure imgf000159_0001
    
    Figure imgf000160_0001
    Figure imgf000161_0001
    Figure imgf000162_0001
    ı62
    Figure imgf000163_0001
    ı63
    Figure imgf000164_0001
    ı64
    Figure imgf000165_0001
    ı65
    Figure imgf000166_0001
    ı66
    Figure imgf000167_0001
    
    Figure imgf000168_0001
    Figura 36(x)
    Figure imgf000169_0001
    
    Figure imgf000170_0001
    Figure imgf000171_0001
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