JP6674381B2 - 癌治療のためのＭｃｌ−１調節化合物 - Google Patents

Description

本発明は、癌及び細胞増殖障害を治療するための化合物、組成物、及び方法に関し、より詳細には、Ｍｃｌ−１を調節する化合物の製造及び使用方法に関する。該化合物は、医薬組成物中に含有され、治療薬として使用されてよい。

癌は世界における主な死亡原因である。プログラムされた細胞死としても知られているアポトーシスは、形態形成及び組織のホメオスタシス等の様々な生理的過程にも関わる老化又は損傷細胞を取り除くために、多細胞生物が用いる自然な過程である。アポトーシスは、多くのタンパク質が関わる複雑で高度に制御された過程である。これらのタンパク質のいくつかは、細胞死を促進する（「アポトーシス促進性」タンパク質）ものもあれば、細胞死を防ぐ（「抗アポトーシス」タンパク質）ものもある。癌細胞は抗アポトーシス遺伝子を過剰発現させる傾向がある。抗アポトーシス遺伝子の過剰発現は、腫瘍形成、転移性増殖、及び化学療法への抵抗性と関係し、癌細胞を選択的に殺す治療戦略に対する必要性が引き続き存在する。

より具体的には、アポトーシス制御の欠陥は、造血器腫瘍及び固形腫瘍の両方における癌細胞の化学療法抵抗性にしばしば関係し、Ｂｃｌ−２ファミリーメンバーの発現異常は、最も頻繁で重要な事象の１つを構成する。これらのタンパク質は、Ｂｃｌ−２ホモロジードメイン（ＢＨドメインと呼ばれる）を共有する。抗アポトーシスタンパク質（Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ．．．）は、ＢＨ１〜ＢＨ４ドメインを含有するのに対し、アポトーシス促進性タンパク質は、ＢＨ１〜ＢＨ３ドメイン（Ｂａｘ及びＢａｋ等のマルチドメインメンバー）又はＢＨ３ドメインのみ（Ｂｉｍ、Ｐｕｍａ、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｎｏｘａ、及びＨｒｋ等のＢＨ３−ｏｎｌｙ群）を含有する（Ａｄａｍｓ，Ｊ．Ｍ．及びＣｏｒｙ，Ｓ．（２００７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６、１３２４〜１３３７）。細胞ストレス下でＢＨ３−ｏｎｌｙタンパク質は、抗アポトーシスメンバーの活性を阻害するか又はマルチドメインアポトーシス促進性メンバーを直接活性化させることによってアポトーシスを開始するが、これはあるタンパク質のＢＨ３ドメインと別のタンパク質の疎水性ポケットとの相互作用により媒介される（Ｓｈａｍａｓ−Ｄｉｎら（２０１１）Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １８１３、５０８〜５２０）。

Ｂｃｌ−２又はＢｃｌ−ｘ_Ｌ等の抗アポトーシスメンバーの活性を阻害するための絶え間ない努力がなされており、その中でも強力なＢＨ−３類似分子の開発が有望である。これらの分子は、Ｂｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシスタンパク質ＢＨ３結合溝に結合し、アポトーシス促進性Ｂｃｌ−２ファミリーメンバーの解放により細胞死を促進する（Ｚｈａｎｇ，Ｌｉｎら（２００７）Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔ．Ｕｐｄａｔ．１０、２０７〜２１７）。ＡＢＴ−７３７（及びＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−２６３、又はナビトクラックス（Ｎａｖｉｔｏｃｌａｘ）に関連する経口投与可能な化合物）は、Ｂｃｌ−２及びＢｃｌ−ｘ_Ｌの抗アポトーシス活性の効率的な阻害を可能にする。これは、造血器腫瘍においては単剤として、固形腫瘍細胞においてはより小さい程度でアポトーシス細胞死を誘導可能なものとして示されている。ＡＢＴ−７３７はまた、癌細胞を化学療法に対して感作できる。しかしながら、その活性はＭｃｌ−１の不在又は不活性化を条件としており、Ｍｃｌ−１の高発現及び活性はＡＢＴ−７３７応答の不在に関連する（Ｄａｉ，Ｙ．及びＧｒａｎｔ，Ｓ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７（７）、２９０８〜２９１１）。したがって、抗アポトーシスタンパク質Ｍｃｌ−１の発現及び活性は、ＡＢＴ−７３７の活性への大きな障害となる。

卵巣癌については、発明者らは、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ及びＭｃｌ−１が協働して腫瘍細胞をアポトーシスから保護するため、それらの同時阻害により化学療法をしていなくても広範なアポトーシスがもたらされるが、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ又はＭｃｌ−１の下方制御は依然として効果がないことを以前に実証した（Ｂｒｏｔｉｎら（２０１０）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２６、８８５〜８９５）。本文脈中、発明者らは更に、Ｍｃｌ−１の下方制御又は不活性化が、卵巣癌細胞をＨＡ１４−１（Ｓｉｍｏｎｉｎら（２００９）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ８、３１６２〜３１７０）又はＡＢＴ−７３７（Ｓｉｍｏｎｉｎら（２０１３）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ １８、４９２〜５０８）等のＢｃｌ−ｘ_Ｌ標的ＢＨ３類似分子に対して感作するために必要とされることを示した。

Ｍｃｌ−１は３つのＢＨドメイン（ＢＨ１〜ＢＨ３）を含有するが、ＮＨ_２末端において明確に規定されたＢＨ４ドメインを欠いている。Ｍｃｌ−１は様々な細胞内膜に、特にそのＣＯＯＨ末端が膜貫通領域を通ってミトコンドリア外膜に局在する。Ｂｃｌ−２及びＢｃｌ−ｘ_Ｌと同様に、Ｍｃｌ−１はＢａｘ及び／又はＢａｋと相互に作用してミトコンドリアを介したアポトーシスを阻害可能である。Ｂｃｌ−２及びＢｃｌ−ｘ_Ｌとは異なり、Ｍｃｌ−１の発現はサイトカイン又は成長因子に露出されるとすぐに誘発される。Ｍｃｌ−１の発現増加は、白血病細胞、肝細胞癌細胞、黒色腫細胞、前立腺癌細胞、及び乳癌細胞を含む広範な種類の腫瘍細胞において細胞生存を促進する。更に、Ｍｃｌ−１は、体細胞性コピー数の増幅により多くの種類の癌における細胞不死化及び腫瘍形成の一因となる。内部でＭｃｌ−１が増幅する癌細胞は、しばしば生存のためにＭｃｌ−１に依存する（Ｂｅｒｏｕｋｈｉｍ，Ｒ．ら（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ ４６３、８９９〜９０５）。

Ｍｃｌ−１は、卵巣癌を含む様々な腫瘍細胞内で過剰発現し、更にその発現は化学療法抵抗性に関連している（Ｓｈｉｇｅｍａｓａら（２００２）Ｊｐｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ９３、５４２〜５５０）。重要なことに、Ｍｃｌ−１の場所はヒト癌において最も頻繁に増幅されるものの１つであり、更に発癌におけるその中心的役割があることを示すため、優先順位の高い治療標的としてその重要性が増している（Ｂｅｒｏｕｋｈｉｍら（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ ４６３、８９９〜９０５）。

従って、以下のようなＭｃｌ−１を阻害することを目的とした様々な手段を使用して、ＡＢＴ−７３７を感作してきた：
− Ｍｃｌ−１標的ｓｉＲＮＡ（Ｌｉｎら（２００７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６、３９７２〜３９７９）、
− Ｎｏｘａ遺伝子導入（Ｗｅｓａｒｇら（２００７）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２１、２３８７〜２３９４、Ｌｕｃａｓら（２０１２）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １８、７８３〜７９５）、
− シグナリング経路阻害（Ｒｕｓｓｏら（２０１３）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ８５、９２７〜９３６）、又は
− 従来の化学療法（Ｍａｓｏｎら（２００９）Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２３、２０３４〜２０４１、Ｓｉｍｏｎｉｎら（２０１３）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ １８、４９２〜５０８。

これらの戦略はいずれもＭｃｌ−１の発現自体の阻害、又はその内因性阻害物質、即ち、Ｂｉｍ、Ｎｏｘａ、若しくはＰｕｍａ等のＢＨ３−ｏｎｌｙタンパク質の活性化によるＭｃｌ−１の抗アポトーシス活性の間接的阻害につながる。従って、前述したように、プラチナ化合物ベースの化学療法は、卵巣癌でＭｃｌ−１タンパク質レベルを減少させ、ＢＨ３−ｏｎｌｙタンパク質を誘導することができ、ＡＢＴ−７３７への感作をもたらす（Ｓｉｍｏｎｉｎら（２００９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８（１１）、３１６２〜７０、及びＳｉｍｏｎｉｎら（２０１３）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ １８、４９２〜５０８）。しかしながら、部分的には蓄積毒性（従来の化学療法）又は生体内での非効率性（ｓｉＲＮＡ、遺伝子治療）のため、このような戦略の臨床実務における適用が困難であることから、研究者は特異的且つ強力なＭｃｌ−１阻害剤を特定しようとしている。

Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６（２００７），１３２４〜１３３７ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １８１３（２０１１），５０８〜５２０ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔ．Ｕｐｄａｔ．１０（２００７），２０７〜２１７ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７（７）（２００７），２９０８〜２９１１ Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２６（２０１０），８８５〜８９５ Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ８（２００９），３１６２〜３１７０ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ １８（２０１３），４９２〜５０８ Ｎａｔｕｒｅ ４６３（２０１０），８９９〜９０５ Ｊｐｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ９３（２００２），５４２〜５５０ Ｎａｔｕｒｅ ４６３（２０１０），８９９〜９０５ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６（２００７），３９７２〜３９７９ Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２１（２００７），２３８７〜２３９４ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １８（２０１２），７８３〜７９５ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ８５（２０１３），９２７〜９３６ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２３（２００９），２０３４〜２０４１ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ １８（２０１３），４９２〜５０８ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６（２００７），３９７２〜３９７９ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８（１１）（２００９），３１６２〜７０ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ １８（２０１３），４９２〜５０８

従って、本発明の目的は、Ｍｃｌ−１活性を調節、とりわけ阻害するのに有用な代替的化合物を提供することである。

従って、一態様において、本発明は下記構造の様々な化合物又はその薬学的に許容される塩の形態に係り、構成要素は以下で定義される。

本発明の別の目的は、本発明の化合物を含む医薬組成物を提供することであり、当該組成物は、１又は複数の薬学的に許容される賦形剤と、治療有効量の本発明の化合物のうちの少なくとも１つ又はその薬学的に許容許容される塩と、を含む。

本発明の別の目的は、式（Ｉ）の化合物とＢｃｌ−２又はＢｃｌ−ｘ_Ｌ阻害剤との組み合わせを提供することである。

本発明の別の目的は、癌治療において使用するための式（Ｉ）の化合物を提供することである。

本発明の別の目的は、式（Ｉ）の化合物の調製方法及び式（Ｉ）の化合物の調製に有用な式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の特定の化合物の調製方法を提供することである。

式（Ｉ）の化合物のこれらの及びその他の目的、特徴、並びに利点は、本開示の以下の発明を実施するための態様において開示される。

式（Ｉ）の化合物
第１の目的において、本発明は、式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容される塩を提供する。

式中、
Ｙ_１、Ｙ_２はそれぞれ独立して、−Ｓ−、−Ｃ＝Ｃ−、−Ｎ＝Ｃ−から選択され、但し、Ｙ_１、Ｙ_２の一方が−Ｓ−であれば、もう一方は−Ｎ＝Ｃ−であり；
Ａｒ_１、Ａｒ_２はそれぞれ独立して、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール又は５〜７員ヘテロアリールから選択され、当該アリール及びヘテロアリール基は、場合により１〜３個のＲ_３基で置換され、但し：
− Ａｒ_１、Ａｒ_２は、両方が４−ピリジル、非置換２若しくは３−チオフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、又は３，４，５−トリメトキシフェニルから選択される同一の基を表すことはできず、
ｉ及びｊは独立して０又は１であり、但し：
− ｉ＋ｊ≧１；及び
− Ｙ_１、Ｙ_２のいずれも−Ｓ−でなければ、ｉ＋ｊ＝２であり；
Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立して、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルケニル、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリールカルボニル、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルカルボニル、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、ＣＯＯＨ、ＯＨから選択され、当該アルキル基は場合によりＯＨで置換され；
ｋ及びｌは独立して０、１であり；
Ｒ_３はそれぞれ独立して、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈ、（ＣＨ_２）_ｐＣＮ、（ＣＨ_２）_ｑＣ（＝Ｎ（ＯＨ））ＮＨ_２、Ｉ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール、及び５〜７員ヘテロアリール、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルケニルから選択され、当該アルキル基は場合によりＯＨで置換され；
ｎは０、１、２、３であり；
ｐは０、１、２、３であり；
ｑは０、１、２、３であり；
以下の化合物を除く：
２−（ピリジン−３−イル）−５−（５−ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン、
３−（５−メチル−６−（５−メチル−６−（ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン、
３−（６−（５−メチル−６−（ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン。

ある種の態様では、Ｙ_１及びＹ_２の両方が−Ｎ＝Ｃ−である式（Ｉ）の化合物が含まれる。

特定の態様では、Ａｒ_１、Ａｒ_２は上記定義の通りであるが、但し、Ａｒ_１、Ａｒ_２のうち少なくとも１つが５〜７員ヘテロアリールである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

ある種の態様では、Ｙ_１及びＹ_２の両方が−Ｎ＝Ｃ−であれば、Ａｒ_１、Ａｒ_２のうち少なくとも１つがフェニルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

別の態様では、Ａｒ_１及び／又はＡｒ_２は、フェニル、ピリジル、ピリミジル、イミダゾリル、ピラゾリル、チオフェニル、トリアゾリル、特にフェニル、３−ピリジル、５−ピリミジル、２−イミダゾリル、３−ピラゾリル、２−チオフェニル、４−トリアゾリルから選択される式（Ｉ）の化合物が含まれる。

更に別の態様では、Ａｒ_１、Ａｒ_２のうちの少なくとも１つが窒素原子を含む５〜７員ヘテロアリール、好ましくはピリジル、とりわけ３−ピリジルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

更に別の態様では、Ａｒ_１が３−ピリジル又はフェニルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

別の態様では、Ａｒ_２が３−ピリジル又はフェニルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

ある種の態様では、Ｒ_１、Ｒ_２が独立してＣ_１〜Ｃ_６アルキル、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルケニル、好ましくはメチル及びスチリルから選択される式（Ｉ）の化合物が含まれる。

別の態様では、Ｒ_１が５−メチルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

更に別の態様では、Ｒ_２が５−スチリルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

好ましい態様では、Ｒ_１が５−メチルであり、且つＲ_２が５−スチリルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

別の態様では、Ｙ_１が−Ｓ−であり、Ｙ_２が−Ｎ＝Ｃ−である式（Ｉ）の化合物が含まれる。

更なるある種の態様では、Ａｒ_１が５〜７員ヘテロアリール、特にピリジル、より詳細には３−ピリジルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

更なるある種の態様では、Ａｒ_１が５〜７員ヘテロアリール、特にチオフェニル、より詳細には３−チオフェニルで置換される式（Ｉ）の化合物が含まれる。

更なるある種の態様では、Ａｒ_２が５〜７員ヘテロアリール，特にピリジル又はチオフェニル、より詳細には３−ピリジル、２−チオフェニル、又は３−チオフェニルである式（Ｉ）の化合物が含まれる。

その他の態様では、Ｒ_１がＣ_１〜Ｃ_６アルキル、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル、イソプロピル、又はナフチル−ＣＨ_２−から選択される式（Ｉ）の化合物が含まれる。

その他の態様では、薬学的に許容される塩が塩酸塩である式（Ｉ）の化合物が含まれる。

その他の態様では、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、及び（Ｉｄ）の化合物から選択される式（Ｉ）の化合物が含まれる。

式中、
Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３はそれぞれ独立して、Ｃ又はＮから選択され、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３はそれぞれ独立して、上記定義の通りである。

更に他の態様では、
− ５，６’−ジ（ピリジン−３−イル）−５’−メチル−３−（（Ｅ）−スチリル）−２，３’−ビピリジン（ＭＲ２９０７２）、
− ５，６’’−ジ（ピリジン−３−イル）−３，５”−ビス−（（Ｅ）−スチリル）−［２，３’；６’，３”］ターピリジン（ＭＲ２９０７５）、
− ３，５’’，５’’−トリメチル−５，６’’−ジフェニル−［２，３’；６’，３’’］−ターピリジン（ＭＲ３０８０２）、
− ５’−ブロモ−３’，５−ジメチル−６−（３−メチル−４−ピリジン−３−イルフェニル）−３，２’−ビピリジン（ＭＲ３０８０４）、
− ５’−（２−メチル−４−ピリジン−３−イルフェニル）−３’，５−ジメチル−６−（２−メチル−４−ピリジン−３−イルフェニル）−３，２’−ビピリジン（ＭＲ３０８１１）、
− ２−（ピリジン−３−イル）−５−（３−メチル−４−ピリジン−３−イルフェニル）−（Ｅ）スチリルベンゼン（ＭＲ３０８２０）、
− ３−（４−メチル−５−（ピリジン−３−イル）チオフェン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３２７）、
− ３−（４−（（ナフタレン−３−イル）メチル）−５−（ピリジン−３−イル）チオフェン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３２８）、
− ３−（４−イソブチル−５−（ピリジン−３−イル）チオフェン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３３０）、
− ２−（５−メチル−６−（ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）−５−フェニル−３−スチリルピリジン（ＭＲ３１３４８）、
− ２−（５−メチル−６−フェニルピリジン−３−イル）−５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３１３４９）、
− ５−（３−ベンジルピリジン−２−イル）−２−（５−ベンジルピリジン−３−イル）ピリジン（ＭＲ３１３９７）、
及び薬学的に許容されるそれらの塩から選択される式（Ｉ）の化合物が含まれる。

好ましい態様では、式（Ｉ）の化合物は、
− ５，６’−ジ（ピリジン−３−イル）−５’−メチル−３−（（Ｅ）−スチリル）−２，３’−ビピリジン（ＭＲ２９０７２）及びその塩酸塩である。

式（Ｉ）の化合物の調製方法
本発明の化合物は、以下に記載される方法を含むがこれらに限定されない当業者に周知の複数の方法により、又は有機合成分野の当業者に公知の標準的な技術を適用してこれらの方法を修正したものにより調製することができる。試薬及び出発物質は市販のものか、又は当業者に周知の技術により容易に合成される。全ての置換基は、別途明記されない限り、前述の定義の通りである。本発明と関連して開示されるすべてのプロセスは、ミリグラム、グラム、マルチグラム、又は商業的工業規模を含む任意の規模で実践されると考えられる。

容易に理解されるように、式Ｉの化合物に存在する官能基は保護基を含んでもよい。保護基は、ヒドロキシル基及びカルボキシル基等の官能基に選択的に付加され、また当該官能基から除去することが可能な化学官能基としてそれ自体知られている。これらの基は、化学化合物中に存在して、このような官能基を、化合物が曝される化学反応条件に対して不活性にする。任意のさまざまな保護基を本発明で用いてもよい。本発明によるその他の好ましい保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．及びＷｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第２版、Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９１年、又はＰ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ」、第３版、Ｔｈｉｅｍｅ、シュトゥットガルト、ニューヨーク、２００４年に見出すことができる。

このようにして調製された化合物は、従来の手段によって反応混合物から回収できる。例えば、化合物は抽出後に溶媒混合液から蒸留してもよく、あるいは必要であれば、溶媒混合液から蒸留した後に残渣を水に注ぎ、その後、水不混和性有機溶媒を用いて抽出し、溶媒混合物から蒸留してもよい。加えて、所望であれば、生成物は更に、再結晶化、沈殿反応、又は様々なクロマトグラフィー技術、とりわけカラムクロマトグラフィー若しくは分取薄層クロマトグラフィー、特に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の様々な公知の技術によって精製され得る。

別の目的においては、本発明は、
ｉ）鈴木−宮浦カップリングに従って、パラジウム（Ｐｄ^０）触媒及び塩基の存在下において、化合物（ＩＩａ）をＡｒ_２Ｂ（ＯＨ）_２と反応させ、式中、Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｉ、ｊ、ｋ、ｌは上記定義の通りであり、Ｈａｌ_２はＩ又はＢｒである工程と、場合により、
ｉｉ）得られた式（Ｉ）の化合物を回収する工程と、を含む、本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。

更なる態様では、式（ＩＩａ）の化合物は、
ｉ）鈴木−宮浦カップリングに従って、パラジウム（Ｐｄ^０）触媒及び塩基の存在下において、式（ＩＶ）の化合物をボロン酸（ＩＩＩ）と反応させ、式中、Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｉ、ｊ、ｋ、ｌは上記定義の通りであり、Ｈａｌ_１はＩ又はＢｒであり、Ｈａｌ_２はＣｌである工程と、場合により、
ｉｉ）得られた式（ＩＩａ）の化合物を回収する工程と、を含む方法に従って調製される。

別の態様において、本発明は、
ｉ）鈴木−宮浦カップリングに従って、パラジウム（Ｐｄ^０）触媒及び塩基の存在下において、化合物（ＩＩｂ）をＡｒ_２Ｂ（ＯＨ）_２と反応させ、式中、Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｋ、ｌは上記定義の通りであり、Ａｒ_１及びＡｒ_２は同一であり、Ｈａｌ_２はＩ又はＢｒである工程と、場合により、
ｉｉ）得られた式（Ｉ）の化合物を回収する工程と、を含む、上記定義の式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。

式（Ｉ）の化合物の調製に有用な合成中間体
更なる目的において、本発明は式（ＩＩａ）の化合物に関する。

式中、
Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｉ、ｊ、ｋ、ｌは上記定義の通りであり、
Ｈａｌ_２はＩ、Ｂｒ、又はＣｌである。

一例として、式（ＩＩａ）の化合物は、
− ２−（６−ブロモ−５−メチルピリジン−３−イル）−５−（５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３１３５２）、
− ２−ブロモ−３−メチル−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３６０）、
− ５−（６−（６−ブロモ−５−メチルピリジン−３−イル）−５−スチリルピリジン−３−イル）ピリミジン（ＭＲ３１３６２）、
− ３−（６−（６−ブロモ−５−メチルピリジン−３−イル）−５−スチリルピリジン−３−イル）フェノール（ＭＲ３１３７７）、
− ２−（３−（６−（６−ブロモ−５−メチルピリジン−３−イル）−５−スチリルピリジン−３−イル）フェニル）アセトニトリル（ＭＲ３１３８０）
から選択されてよい。

更なる目的においては、本発明は、式（ＩＩｂ）の化合物に関する。

式中、
Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｉ、ｊ、ｋ、ｌは上記定義の通りであり、
Ｈａｌ_２はＩ又はＢｒである。

一例として、式（ＩＩｂ）の化合物は、
− ５−ブロモ−２−（６−ブロモ−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ２９０６１）、
− ５−ブロモ−２−（６−ヨード−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ２９０６９）
から選択されてよい。

医薬組成物
別の目的において、本発明は式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。

式中、
Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｉ、ｊ、ｋ、及びｌは上記定義の通りであり、
少なくとも１種の薬剤として許容される賦形剤又はキャリアと混合された以下の化合物を除く。
− ２−（ピリジン−３−イル）−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン、
− ３−（５−メチル−６−（５−メチル−６−（ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン、
− ３−（６−（５−メチル−６−（ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ピリジン。

特定の態様では、以下の式（Ｉ）の化合物を除く上記定義の医薬組成物が含まれる。

− ３，３’−ジメチル−２，５”−ジピリジン−３−イル−［２，５’；２’，５”］ターピリジン、

− ３，３’，３”−トリメチル−２，５”−ジピリジン−３−イル−［２，５’；２’，５”］ターピリジン、

− ３，３’，３”，３”’−テトラメチル−２，５”−ジピリジン−３−イル−［２，５’；２’，５”；２”，５”’］クアテルピリジン、

− ３’，３’’，３’’’−トリメチル−２，５’’−ジピリジン−３−イル−［２，５’；２’，５’’；２’’，５’’’］クアテルピリジン

特定の態様では、式（Ｉ）の化合物が上記定義の通りであり、但し、Ｙ_１、Ｙ_２の両方がＮ＝Ｃであるか又はＹ_１、Ｙ_２の一方がＮ＝Ｃであり、他方がＣ＝Ｃであり、Ａｒ_１、Ａｒ_２の両方がピリジニルである場合、Ｒ_１、Ｒ_２のうちの少なくとも１つが存在し、Ｈ又はＣＨ_３とは異なる、医薬組成物が含まれる。

他の態様では、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ阻害剤、特にＨＡ１４−１、ＡＢＴ−７３７、又はＡＢＴ−２６３等のＢＨ３類似阻害剤を更に含む医薬組成物が含まれる。

当業者に明らかであるように、当該医薬組成物の特定の配合は、治療する癌の種類に基づいて選択可能である。本発明の組成物は、患者に投与するために、その安定性を改善し、且つ／又は生体内での制御放出若しくは持続放出を提供する物質を用いて配合可能である。

これらの医薬組成物は、製薬分野において周知の方法で調製可能であり、局所療法又は全身療法のどちらが所望されるか、また治療部位に応じてさまざまな経路で投与可能である。

投与は、局所（皮膚、目、並びに鼻孔内、膣、及び直腸送達を含む粘膜への投与を含む）、肺（例えば、ネブライザによるものを含む粉末又はエアゾールの吸入又は吹入れによる、気管内、鼻孔内、表皮、及び経皮）、目、口腔、又は非経口であってよい。目への送達方法としては、局所投与（点眼薬）、結膜下、眼周囲、又は硝子体内への注射又はバルーンカテーテル若しくは外科手術により結膜嚢に配置された眼科用挿入物による導入を挙げることができる。非経口投与としては、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、若しくは筋肉への注射若しくは注入、又は頭蓋内、例えば、くも膜下若しくは脳室内投与が挙げられる。

医薬組成物は、当該技術分野において公知の手順を用いることによって患者への投与後、活性成分の急速放出、持続放出、又は遅延放出を提供するように配合可能である。

医薬組成物は通常、薬学的に許容される無機又は有機のキャリア、防腐剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、矯味剤、浸透圧を変えるための塩、緩衝液、マスキング剤、又は酸化防止剤を含む。医薬組成物は、その他の治療的価値のある物質を更に含有する。これらの成分は、投与方法及び投与経路に基づいて選択される。薬剤成分並びに薬物調合において使用するために好適な製薬補助薬は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ）に記載されている。

本発明の化合物の治療用量は、例えば、治療を行う特定の用途、化合物の投与方法、患者の健康状態及び疾患、並びに担当医の判断に応じてさまざまでありうる。医薬組成物中の本発明の化合物の比率又は濃度は、用量、化学的特徴（例えば、疎水性）、及び投与経路を含むいくつかの要因に応じてさまざまでありうる。

組み合わせ
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、少なくとも１種の第２の治療薬を併用してよい。

従って、化合物は、細胞毒性薬又は癌化学療法剤等の別の治療薬とともに投与されてよい。２種以上の治療薬の併用投与は、治療薬が治療効果を発揮する期間が重なっていれば、同一期間中に又は同一経路によって治療薬が同時に投与されることを必要としない。同時投与又は連続投与は、その投与を異なる日数又は週数で考慮される。

本化合物と組み合わせて投与されてよいその他の有用な治療としては、Ｂｃｌ−２ファミリーの他のメンバーを標的とする薬剤が挙げられる。抗Ｂｃｌ−２剤は、Ｂｃｌ−２の活性を調節する任意の薬剤であってよく、抗Ｂｃｌ−２オリゴヌクレオチド、抗Ｂｃｌ−２抗体、及び小分子阻害剤を挙げることができる。例示的な小分子阻害剤としては、ゴシポール及びゴシポール類似体（例えば、ＡＴ−１０１）、ベンゼンスルホニル誘導体、すなわちＴＷ３７、アポゴシポール誘導体、即ち、サブトクラックス、ＡＢＴ−１９９、ＡＢＴ−７３７及び経口投与可能な類似体、ＡＧＴ−２６３を含むＡＢＴ系の化合物、オバトクラックス、並びにＨＡ１４−１が挙げられる。

本発明は好ましくは、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ阻害剤、特にＢＨ３類似阻害剤、例えば、ＨＡ１４−１、ＡＢＴ−７３７、又はＡＢＴ−２６３と組み合わせた式（Ｉ）の化合物を含む組み合わせに関する。

癌治療において使用するための式（Ｉ）の化合物
本明細書に開示される化合物及び組成物は、概して、癌治療にさまざまに役立つ。

従って、更なる目的において、本発明は、癌、とりわけＭｃｌ−１の調節に反応する癌の治療において使用する式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容される塩に関する。

式中、
Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｉ、ｊ、ｋ、及びｌは、上記定義の通りである。

本発明の治療方法の影響を受けやすい癌は、Ｍｃｌ−１の調節に反応する癌でありえ、従って、Ｍｃｌ−１の誤調節（例えば、過剰発現又は変化した結合若しくは活性）に関連する任意の形態の癌は本発明の範囲内である。

癌又は腫瘍性疾患としては、例えば、乳癌、骨髄腫、白血病、及びリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、及び急性Ｔ細胞白血病）等の血液癌、脳腫瘍、例えば、星状細胞腫又は膠芽腫を含む神経膠腫等の神経腫瘍、黒色腫、肺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、胃癌、結腸癌又は直腸癌等の胃腸腫瘍、肝臓癌、膵臓癌、卵巣癌、膣癌、外陰癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、睾丸癌、前立腺癌、又は陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管性腫瘍、並びに基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、及び黒色腫等の皮膚癌が挙げられるが、これらに限定されない。

好ましくは、式（Ｉ）の化合物は、リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫等の造血器腫瘍、並びに卵巣癌、中皮腫、黒色腫、膵臓癌、肺癌、乳癌、腎臓癌、及び肝臓癌等の固形腫瘍の治療に有用である。造血器腫瘍は、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌを標的とする戦略に反応するようにＭｃｌ−１中毒（ａｄｄｉｃｔｅｄ ｔｏ Ｍｃｌ−１）であるものとして記載されている（Ｄａｉら（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６７（７），２９０８〜１１；Ｙｅｃｉｅｓら（２０１０）Ｂｌｏｏｄ，１１５（１６），３３０４〜１３）。

特定の態様では、式（Ｉ）の化合物は好ましくは、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ阻害剤、特にＢＨ３類似阻害剤、例えば、
− ２−アミノ−６−ブロモ−α−シアノ−３−（エトキシカルボニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−酢酸エチルエステル（ＨＡ１４−１とも呼ばれる）、

−４−［４−［［２−（４−クロロフェニル）フェニル］メチル］ピペラジン−１−イル］−Ｎ−［４−［［（２Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−１−フェニルスルファニルブタン−２−イル］アミノ］−３−ニトロフェニル］スルホニルベンズアミド（ＡＢＴ−７３７とも呼ばれる）、

又は、
− ４−［４−［［２−（４−クロロフェニル）−５，５−ジメチルシクロヘキセン−１−イル］メチル］ピペラジン−１−イル］−Ｎ−［４−［［（２Ｒ）−４−モルホリン−４−イル−１−フェニルスルファニルブタン−２−イル］アミノ］−３−（トリフルオロメチルスルホニル）フェニル］スルホニルベンズアミド（ＡＢＴ−２６３とも呼ばれる）

と一緒に投与される。

別の態様では、Ｍｃｌ−１タンパク質を介したアポトーシスを誘導するために使用される式（Ｉ）の化合物が含まれる。

患者は、臨床的に有益な結果が続くのであればいつでも効果的に治療される。このことは、例えば、疾患の症状の完全な回復、疾患の症状の重症度の低下、又は疾患の進行を遅らせることを意味することができる。

本明細書で提供される有効量の任意の組成物は、治療を必要とする個体に投与可能である。本明細書で使用する場合、用語「有効」とは、患者に顕著な毒性を誘発せずに所望の反応を誘発する任意の量を意味する。このような量は、既知量の特定の組成物を投与した後の患者の反応を評価することによって決定することができる。

Ｍｃｌ−１の調節に反応する癌の治療方法
本発明はまた、癌を治療するために組成物を投与する方法、癌細胞を殺す方法、及び細胞中のＭｃｌ−１レベルを調節する方法にも関する。本明細書に記載されている治療方法は、その他の細胞毒性療法（例えば、化学療法、ホルモン療法、放射線療法、及び抗体に基づく療法）と共に実施することができる。

好ましい実施形態では、本発明の化合物及び組成物は、Ｍｃｌ−１発現癌を患う患者において転移又は更なる播種を防止又は減少させるのに有用である。より具体的には、本発明の化合物及び組成物は、このような患者の生存期間の増加、このような患者の無進行生存の増加、反応持続期間の増加に有用であり、生存期間、無進行生存、反応率又は反応持続期間を測定したときに統計学的に有意且つ臨床的に意味のある治療患者の改善をもたらす。好ましい実施形態では、医薬品は患者群の反応率の増加に有用である。

本発明の１つ又は複数の実施形態の詳細を、添付図面及び以下の説明に示す。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかになるであろう。

定義
本明細書に含まれる以下の用語及び表現は、次のように定義される。

本明細書で使用する場合、用語「アルキル」とは、１〜８個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、ヘキシル、オクチル等を意味する。アルコキシ及びアルコキシカルボニル等のアルキル含有基のアルキル部分は上記定義のアルキルと同じ意味を有する。好ましい低級アルキル基は、１〜４個の炭素を含む上記定義のアルキル基である。「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル」等の表記は、１〜６個の炭素原子を含むアルキル基を意味する。

本明細書で使用する場合、用語「アルケニル」とは、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する２〜６個の炭素原子の直鎖又は分岐炭化水素鎖を意味する。「Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル」という表記は、２〜６個の炭素原子を含むアルケニル基を意味する。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、２，４−ペンタジエニルが挙げられる。「Ｃ_２〜Ｃ_４アルケニル」が特に好ましい。

本明細書で使用する場合、用語「アルコキシ」とは、アルキル基が本明細書に記載された通りのものであるアルキル−Ｏ−基を意味する。例示的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、及びｎーブトキシが挙げられる。

本明細書で使用する場合、用語「アリール」とは、６〜１０個の環炭素原子を有する置換又は非置換の単環式又は二環式芳香族環系を意味する。例としては、フェニル及びナフチルが挙げられる。

本明細書で使用する場合、用語「アリールアルキル」とは、アリール基で置換されたアルキル基を意味する。アリールアルキル基の例としては、ベンジル、ブロモベンジル、フェネチル、ベンズヒドリル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、ジフェニルエチル、ナフチルメチルが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用する場合、用語「アルキルアルケニル」とは、アリール基で置換されたアルケニル基を意味する。アリールアルケニルの例としては、スチリルが挙げられるが、これに限定されない。

本明細書で使用する場合、用語「アリールカルボニル」とは、アリール基が本明細書に記載された通りのものであるアリール−Ｃ（＝Ｏ）−基を意味する。

本明細書で使用する場合、用語「アリールアルキルカルボニル」とは、アリールアルキル基が本明細書に記載された通りのものであるアリールアルキル−Ｃ（＝Ｏ）−基を意味する。

本明細書で使用する場合、用語「ヘテロアリール」とは、１又は複数の環炭素原子が−Ｏ−、−Ｎ−、又は−Ｓ−等の少なくとも１つのヘテロ原子で置換されている５〜１０個、好ましくは５〜７個の環炭素原子を含む芳香族基を意味する。ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、フラニル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、オキサチオリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、オキサトリアゾリル、フラザニル、テトラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、プリニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチオフェニル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、シンノリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、及びキノキサリニルが挙げられる。「ヘテロアリール」の定義内には、例えば、芳香環がヘテロシクロアルキル環に縮合された環系を含む縮合環系が含まれる。このような縮合環系の例としては、例えば、フタルアミド、無水フタル酸、インドリン、イソインドリン、テトラヒドロイソキノリン、クロマン、イソクロマン、クロメン、及びイソクロメンが挙げられる。

本明細書で使用する場合、用語「対象」とは、本明細書に記載される１又は複数の疾患及び状態に苦しむ、又は苦しんでいる可能性がある哺乳動物、好ましくはヒト又はヒトの子供等の温血動物を意味する。

本明細書で使用する場合、「治療有効量」とは、特定の障害の症状を予防又は治療するのに有効な本発明の化合物の量を意味する。このような障害としては、本明細書に記載される受容体の異常な活性と関連する病理学的障害及び神経障害が挙げられるが、これらに限定されない。治療又は予防は、受容体と本発明の化合物とを接触させることによってその活性を阻害、誘発、又は増強することを含む。

本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内における、妥当な利益／リスク比と釣り合う、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題となる合併症を伴うことなくヒト及び動物の組織と接触するのに適した化合物、物質、組成物、及び／又は投薬形態を意味する。

本発明の記述に用いられるその他用語の意味は、当該技術分野において周知である。

別の態様では、本発明は、上述の化合物の薬学的に許容される塩に関する。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物と非毒性の酸又は塩基付加塩の組み合わせから誘導されたかかる化合物の塩を含む。

酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、及びリン酸等の無機酸並びに酢酸、クエン酸、プロピオン酸、酒石酸、グルタミン酸、サリチル酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、コハク酸、及び安息香酸等の有機酸、並びに無機酸及び有機酸が挙げられる。

塩基付加塩としては、アンモニウム並びにアルカリ金属及びアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、及び重炭酸塩等の無機塩基から誘導される塩、並びに脂肪族アミン及び芳香族アミン、脂肪族ジアミン、ヒドロキシアルカミン等の塩基性有機アミンから誘導される塩が挙げられる。従って、本発明の塩の調製において有用なこのような塩基としては、水酸化アンモニウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化カルシウム、メチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン等が挙げられる。

薬学的に許容される塩に加えて、その他塩が本発明に包含される。それらは、化合物の精製、その他塩の調製、又は化合物若しくは中間体の同定及び特性決定における中間体としての役割を果たしうる。

ＢＲＥＴアッセイにおけるピリドクラックス（Ｐｙｒｉｄｏｃｌａｘ）及びＡＢＴ−７３７のＭｃｌ−１／Ｐｕｍａ及びＮｏｘａ／Ｍｃｌ−１の相互作用に対する効果を示す（それぞれ、図１Ａ及び図１Ｂ参照）。ピリドクラックスはＭｃｌ−１／Ｐｕｍａ及びＮｏｘａ／Ｍｃｌ−１の相互作用の両方を阻害できるが、ＡＢＴ−７３７はこれらの相互作用を変化させることができない。 単独又はＢｃｌ−ｘ_Ｌ標的ｓｉＲＮＡ（ｓｉＸＬ１）と併用したピリドクラックスのＩＧＲＯＶ１−Ｒ１０卵巣癌細胞に対する効果を示す。細胞は、２５μＭピリドクラックスに曝露する２４時間前（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）又は２、４、６時間前（Ｅ）に４８時間１０ｎＭのｓｉＲＮＡでトランスフェクションした。［Ａ］細胞形態、ＤＮＡ含有量のヒストグラム、及びアネキシンＶ／ヨウ化プロピジウムの２つのパラメータを持つヒストグラム（ｂｉｐａｒａｍｅｔｏｒｉｃ ｈｉｓｔｇｒａｍｓ）。［Ｂ］トリパンブルー色素排除アッセイ。［Ｃ］ウエスタンブロット法により評価されるＢｃｌ−ｘ_Ｌ発現並びにＰＡＲＰ及びカスパーゼ３の切断。［Ｄ］ＤＡＰＩ染色後に調べた核形態（上部）及び電子顕微鏡により調べた細胞形態。［Ｅ］（ピリドクラックスへの曝露開始後２、４、及び６時間後に評価された）ピリドクラックス／ｓｉＸＬ１併用の短時間での効果。細胞形態及びＤＮＡ含有量のヒストグラム（左パネル）並びにウエスタンブロット法により評価されるＰＡＲＰ及びカスパーゼ３の切断（右パネル）。 単独又はＢｃｌ−ｘ_Ｌ標的ｓｉＲＮＡ（ｓｉＸＬ１）と併用したピリドクラックスの卵巣癌細胞株、肺癌細胞株、及び中皮腫細胞株に対する効果を示す。細胞は、２５μＭピリドクラックスに曝露する２４時間前に４８時間１０ｎＭのｓｉＲＮＡでトランスフェクションした。卵巣癌細胞［Ａ］及び肺癌細胞又は中皮腫細胞［Ｂ］において、細胞剥離は細胞形態の観察によって評価され、ＤＮＡヒストグラムのｓｕｂ−Ｇ１フラクション部分は、フローサイトメトリーによってそれぞれ評価された。 化学療法抵抗性卵巣癌細胞ＩＧＲＯＶ１−Ｒ１０（上部）及びＳＫＯＶ３（下部）に対するピリドクラックスとＡＢＴ−７３７との併用効果を表す。細胞は、２５μＭピリドクラックス及び５μＭＡＢＴ−７３７に同時に（Ａ、Ｅ）、又は連続して（Ｂ）曝露され、細胞効果を縦方向に（Ａ、Ｂ、Ｅ）又は２４時間後（Ｃ、Ｄ、Ｆ）評価した。［Ａ、Ｂ、Ｅ］同時曝露（Ａ、Ｅ）又は連続曝露（Ｂ、２４時間ピリドクラックス、その後ＡＢＴ−７３７）後のインピーダンス測定（ｘＣＥＬＬＬｉｇｅｎｃｅ技術）によって評価されるリアルタイムの細胞活性。［Ｃ］２４時間の同時曝露後の細胞形態及びＤＮＡ含有量ヒストグラム。［Ｄ及びＦ］２４時間の同時曝露後のＰＡＲＰ及びカスパーゼ３の切断。

Ｉ．式（Ｉ）の化合物の合成
材料及び方法を以下に述べる。

材料
市販試薬を更なる精製を行わずに受け取ったときの状態で使用した。融点をコフラー（Ｋｏｆｌｅｒ）加熱ベンチで決定した。ＩＲスペクトルをＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製ＢＸ ＦＴ−ＩＲ分光光度計で記録した。バンド位置は毎センチメートル（ｃｍ^−１）で与えられる。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）及び^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）スペクトルをＪＥＯＬ社製Ｌａｍｂｄａ４００スペクトロメータで記録した。ケミカルシフトは内部標準であるテトラメチルシランからのダウンフィールドで百万分率により表し、結合定数はヘルツで表される。ケミカルシフトは溶媒共鳴に対する百万分率（ｐｐｍ）で報告される。固定相としてフラッシュシリカゲル６０、Ｍｅｒｃｋ社製（０．０６３〜０．２００ｍｍ）を使用してカラムクロマトグラフィーを行った。各精製で指定される溶出溶媒は、シリカゲル６０Ｆ−２６４（Ｍｅｒｃｋ社製）の０．２ｍｍプレコートプレートで行われた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により決定され、紫外線ランプを使用してスポットを可視化した。新たな化合物の元素分析を行い、Ｃ、Ｈ、及びＮのデータはすべての最終化合物の理論値の±０．４以内であった。

方法
本発明の（ヘテロ）芳香族オリゴ系は、以下のスキーム１及び実施例１に記述される５−ブロモ−２−ヒドロキシピリジン１、トランス−フェニルビニルボロン酸４、及び６−ブロモ−５−メチルピリジン−３−イルボロン酸７からＭＲ２９０７２を得るのに使用される手順と同じ手順に従って合成された。

実施例１：５，６’−ジ（ピリジン−３−イル）−５’−メチル−３−（（Ｅ）−スチリル）−２，３’−ビピリジン（ＭＲ２９０７２）

５−ブロモ−２−ヒドロキシピリジン１（５ｇ、２９ｍｍｏｌ）に固体Ｎ−ヨードスクシンイミド（７．１ｇ、３２ｍｍｏｌ）／アセトニトリル（１２０ｍＬ）を添加した。溶液を還流状態にて４時間撹拌し、その後ＴＬＣを行った。溶液を室温まで冷却し、ろ過し、メタノールで洗浄した。５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ヨードピリジン２はピンク色の固体として得られた（収率８３％）。

２（９ｇ、３０ｍｍｏｌ）をフェニルホスホン酸ジクロリド９０％（１００ｍＬ、０．３ｍｏｌ）中に溶解させた。混合物を４時間撹拌及び加熱し（１６０℃）、その後ＴＬＣを行った。室温にて、これを水で満たされた１Ｌバイアルに滴下し、０℃で冷却した。ＮＨ_４ＯＨ溶液を添加することにより、溶液を中和した。混合物を酢酸エチル中で抽出した。生成物は、白色固体の５−ブロモ−２−クロロ−３−ヨードピリジン３として得られた（収率８２％）。

３（５ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）を含有する窒素環境下の反応槽（１００ｍＬ）に、トランス−フェニルビニルボロン酸４（２．７ｇ、１８ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィン（９０７ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（４．２ｇ、３９ｍｍｏｌ）／１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）を添加した。出発物質を消費するまで混合物を還流状態にて２４時間撹拌し、その後ＴＬＣを行った。生成物は室温まで冷却し、これをセライトろ過した。ＭｇＳＯ_４を用いて溶液を乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン：酢酸エチル＝９９：１、その後９８：２）によって精製し、５ーブロモ−２−クロロ−３−（（Ｅ）−スチリル）−ピリジン５を得た（収率９３％。）。

５（２００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）にヨウ化ナトリウム（１ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、塩化アセチル（０．０７ｍＬ、１ｍｍｏｌ）、及びアセトニトリル（１０ｍＬ）を添加した。混合物をマイクロ波照射しながら１時間１００℃で撹拌した。室温にて、ＮａＨＣＯ_３溶液により混合物を中和した。抽出及び亜硫酸水素ナトリウム固体／水を用いた洗浄の後、ＭｇＳＯ_４を用いて有機層を乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。生成物をクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン：酢酸エチル＝９８：２、その後９５：５）によって精製し、５ーブロモ−２−ヨード−３−（（Ｅ）−スチリル）−ピリジン６を得た（収率８４％）。

６（１．４ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を含有する窒素雰囲気下の反応槽（１００ｍＬ）に、６−ブロモ−５−メチルピリジン−３−イルボロン酸７（９７８ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィン（２１０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（２．１ｇ、９ｍｍｏｌ）／１，２−ジメトキシエタン（３０ｍＬ）を添加した。出発物質を消費するまで混合物を還流状態にて２０時間撹拌し、その後ＴＬＣを行った。室温にて、溶液を酢酸エチルで抽出した。ＭｇＳＯ_４を用いて有機層を乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、その後９：１及び８：２）によって精製し、５，６’ージブロモ−５’−メチル−３−（（Ｅ）−スチリル）−２，３’−ビピリジン８を得た（収率８６％）。

８（３２０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を含有する窒素雰囲気下の反応槽（１００ｍＬ）に、ピリジン−３−イルボロン酸９（１５６ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、テトラキストリフェニルホスフィン（７８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３５５ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ）／１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）を添加した。出発物質を消費するまで混合物を還流状態にて２４時間撹拌し、その後ＴＬＣを行った。室温にて、懸濁液をセライトろ過し、溶液を酢酸エチルで抽出した。ＭｇＳＯ_４を用いて有機層を乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。生成物をクロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン：酢酸エチル＝８：２、その後７：３及び５０：５０）によって精製し、白色固体（Ｍｐ１５８℃）の５，６’ージ（ピリジン−３−イル）−５’−メチル−３−（（Ｅ）−スチリル）−２，３’−ビピリジンＭＲ２９０７２を得た（収率８６％）。ＩＲ（ＫＢｒ）：２９５７，１７２７，１５７５，１２７４，１１２５，１０１４，９６７，８０１，７７０，６８８ｃｍ^−１．^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．９８（ｄ，^４Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．９１（ｄ，^４Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｍ，２Ｈ），８．７２（ｄｄ，^３Ｊ＝４．９Ｈｚ，^４Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ），８．６８（ｄｄ，^３Ｊ＝４．９Ｈｚ，^４Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，^４Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｍ，３Ｈ），７．４８（ｄ，^３Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ），７．４４（ｄｄ，^３Ｊ＝７．８Ｈｚ，^４Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，^３Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，^３Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，^３Ｊ＝１６．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，^３Ｊ＝１６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｓ，３Ｈ）．^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１５５．３，１５３．４，１４９．９，１４９．６，１４９．２，１４８．２，１４８．０，１４６．９，１３９．８，１３６．５，１３６．３，１３５．８，１３４．４，１３４．１，１３３．１，１３３．０，１３２．９，１３２．６，１３２．０，１３１．１，１２８．８（２Ｃ），１２８．５，１２６．８（２Ｃ），１２４．６，１２３．８，１２３．２，２０．０．ＬＣＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｚ（％）＝［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ：４２７．５３，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ：４２７．３２．Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２９Ｈ_２２Ｎ_４：Ｃ，８１．６７；Ｈ，５．２０；Ｎ，１３．１４．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，８１．６５；Ｈ，５．２５；Ｎ，１３．２３．

この最初の手順は、３−メチル−５−（３−（Ｅ）−スチリル−５−（チオフェン−３−イル）ピリジン−２−イル）−２−（チオフェン−３−イル）ピリジン（ＭＲ３１３２２）、３−メチル−２−（３−メチルチオフェン−２−イル）−５−（５−（３−メチルチオフェン−２−イル）−３−（Ｅ）−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３３６）、３−メチル−５−（３−（Ｅ）−スチリル−５−（チオフェン−２−イル）ピリジン−２−イル）−２−（チオフェン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３２１）、２−（５−メチル−６−（^１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリジン−３−イル）−５−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３１３６３）、５−（２−クロロ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−２−（６−（２−クロロ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３１３５１）、３−メチル−２−（４−シアノフェニル）−５−（５−（４−シアノフェニル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジンＭＲ３０８５４、５−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２−（６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３０８４７）、２−（３，４−ジメトキシフェニル）−５−（５−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−スチリルピリジン−２−イル）−３−メチルピリジン（ＭＲ３０８４６）、４−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−４−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３５０）、３−メチル−２−フェニル−５−（５−フェニル−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３０８１４）、５−（３−メチル−５−（５−（ピリミジン−５−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）ピリミジン（ＭＲ３１３６１）の化合物に適用される。

本出願人は、窒素雰囲気下でチオフェン−３−ボロン酸、３−メチル−チオフェン−２−ボロン酸、チオフェン−２−ボロン酸、１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキソボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール、２−クロロ−１−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール、４−シアノフェニルボロン酸、３，４，５−トリメトキシフェニルボロン酸、３，４−ジメトキシフェニルボロン酸、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン、ベンゼンボロン酸、ピリミジン−５−イル−ボロン酸、テトラキストリフェニルホスフィン、炭酸ナトリウム／１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）を有する反応槽（１００ｍＬ）に導入された５，６’−ジブロモ−５’−メチル−３−（（Ｅ）−スチリル）−２，３’−ビピリジンから、ＭＲ３１３２２、ＭＲ３１３３６、ＭＲ３１３２１、ＭＲ３１３６３、ＭＲ３１３５１、ＭＲ３０８５４、ＭＲ３０８４７、ＭＲ３０８４６、ＭＲ３１３５０、ＭＲ３０８１４、ＭＲ３１３６１をそれぞれ得た。

実施例２：３−メチル−５−（３−（Ｅ）−スチリル−５−（チオフェン−２−イル）ピリジン−２−イル）−２−（チオフェン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３２１）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ８．９０（ｄ，１Ｈ，Ｈ６’，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．７３（ｄ，１Ｈ，Ｈ６，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．１８（ｄ，１Ｈ，Ｈ４’，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｈ４，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），７．５８（ｄ，１Ｈ，Ｈ３’’’，Ｊ＝３．８７Ｈｚ），７．４９−７．４６（ｍ，４Ｈ，２Ｈ ｏｒｔｈｏ Ｐｈ，Ｈ５’’及びＨ５’’’），７．４３（ｄ，１Ｈ，Ｈ３’，Ｊ＝３．８７Ｈｚ），７．３８−７．３４（ｄｄ，２Ｈ ｍｅｔａ Ｐｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．３０（ｍ，１Ｈ ｐａｒａ Ｐｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．２０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．１９−７．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ４’’及びＨ４’’’），２．６８（３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４３７［Ｍ＋］^＊．

実施例３：３−メチル−５−（３−（Ｅ）−スチリル−５−（チオフェン−３−イル）ピリジン−２−イル）−２−（チオフェン−３−イル）ピリジン（ＭＲ３１３２２）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ８．８９（ｄ，１Ｈ，Ｈ６，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），８．７７（ｄ，１Ｈ，Ｈ６’，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｈ４，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），７．９６（１Ｈ，Ｈ４’，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），７．６８−７．６６（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ５’’及びＨ５’’’，Ｊ＝２．９２Ｈｚ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．５７（ｄ，１Ｈ，Ｈ ｐａｒａ Ｐｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．５１（ｄ，２Ｈ，Ｈ２’’及びＨ５’’’，Ｊ＝２．９２Ｈｚ），７．４７（ｄ，２Ｈ ｏｒｔｈｏ Ｐｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．４３− ７．４１（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ４’’及びＨ４’’’，Ｊ＝２．９２Ｈｚ），７．３８−７．３４（ｄｄ，２Ｈ ｍｅｔａ Ｐｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．２６−７．２１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），２．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４３７［Ｍ＋］^＊．

実施例４：３−メチル−２−（３−メチルチオフェン−２−イル）−５−（５−（３−メチルチオフェン−２−イル）−３−（Ｅ）−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３３６）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：８．６８（ｄ，１Ｈ，Ｈ６，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），８．５９（ｄ，１Ｈ，Ｈ６’，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），８．０７（ｄ，１Ｈ，Ｈ４，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｈ４’，Ｊ＝１．９２Ｈｚ），７．５２−７．２８（ｍ，７Ｈ），７．２５−７．６．９５（ｍ，４Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），２．１６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），２．０３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４６６［Ｍ＋＋Ｈ，１００］．

実施例５：２−（５−メチル−６−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリジン−３−イル）−５−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３１３６３）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）：δ９．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），８．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），８．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），７．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ），７．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），７．７６（ｂｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．４５（ｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ），７．４０−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，），７．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１６），６．８６（ｍ，１Ｈ），６．５３（ｂｓ，１Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４０５．６０［Ｍ^＋］^＊．

実施例６：５−（２−クロロ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−２−（６−（２−クロロ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３１３５１）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ８．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８，６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．３９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３２−７．２５（ｍ，３Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），７．１２（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），３．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３），２．４７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：５０１．１３［Ｍ^＋］^＊，５０３．１２［Ｍ^＋＋２］^＊，５０５．３２［Ｍ^＋＋４］^＊．

実施例７：３−メチル−２−（４−シアノフェニル）−５−（５−（４−シアノフェニル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３０８５４）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．８８（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ２’），８．８５（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ６），８．２４（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ４），８．０４（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ４’），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．９，４Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．０，４Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．０，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．１，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３１（ｄ，Ｊ＝７．３，１Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．１７（ｄ，Ｊ＝１６．３，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），２．４９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．

実施例８：５−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２−（６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３０８４７）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．８３（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），８．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ２’），８．１６（ｓ，１Ｈ，Ｈ４），７．９９（ｓ，１Ｈ，Ｈ４’），７．４９（ｄ，Ｊ＝７．１，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝７．６，６．８，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３１（ｄ，Ｊ＝７．３，１Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．２８（ｄ，Ｊ＝１５．６，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７，２１（ｄ，Ｊ＝１５．６，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），６．８６（ｓ，２Ｈ），６，８４（ｓ，２Ｈ），３．９９（ｓ，６Ｈ，ＣＨ_３Ｏ−ｍｅｔａ），３，９３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３Ｏ−ｐａｒａ），３，９１（ｓ，６Ｈ，ＣＨ_３Ｏ−ｍｅｔａ’），３，８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３Ｏ−ｐａｒａ’），２，５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．

実施例９：２−（３，４−ジメトキシフェニル）−５−（５−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−スチリルピリジン−２−イル）−３−メチルピリジン（ＭＲ３０８４６）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．８４（ｓ，１Ｈ，Ｈ６ ），８．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ２’），８．１７（ｓ，１Ｈ，Ｈ４），７．９８（ｓ，１Ｈ，Ｈ４’），７．４８（ｄ，Ｊ＝６．８，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝７．８，７．１，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．２８（ｄ，Ｊ＝１６．４，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７，２７−７．２１（ｍ，４Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１５．９，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３Ｏ−ｍｅｔａ’），３，９７（ｓ，９Ｈ），２，５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．

実施例１０：４−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−４−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３１３５０）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ８．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８，８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），８．７３−８．７１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），８．７０−８．６８（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），７．５８−７．５７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），７．４８−７．４７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），７．４１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．３２−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２６−７．２５（ｍ，１Ｈ），７．２３−７．１６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４２７．３７［Ｍ^＋］^＊

実施例１１：３−メチル−２−フェニル−５−（５−フェニル−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン（ＭＲ３０８１４）

^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１５８．４，１５３．１，１４６．９，１４６．２，１４０．３，１３９．７，１３７．５，１３６．８，１３５．９，１３３．３，１３２．５（２Ｃ），１３１．７，１３０．６，１２９．３（２Ｃ），１２９．２（２Ｃ），１２８．８（２Ｃ），１２８．３（２Ｃ），１２８．２（２Ｃ），１２８．１，１２７．２（２Ｃ），１２６．８（２Ｃ），１２５．４，２０．１．
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）（ｍ／ｚ）：４２４．５５；［Ｍ＋Ｈ^＋］４２５．２７．

実施例１２：５−（３−メチル−５−（５−（ピリミジン−５−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）ピリミジン（ＭＲ３１３６１）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ９．３３（ｓ，１Ｈ），９．３０（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，２Ｈ），９．０７（ｓ，２Ｈ），８．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），８．８８（ｄ，１Ｈ Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．４０−７．３２（ｍ，３Ｈ），７．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ），７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ），２．５３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４２９．５８［Ｍ^＋］^＊．

第２及び第３の手順（スキーム２）を、３−メチル−５−（５−フェニル−３−スチリルピリジン−２−イル）−２−（ピリジン−３−イル）ピリジン（ＭＲ３１３４８）、３−（６−（５−メチル−６−フェニルピリジン−３−イル）−５−スチリルピリジン−３−イル）ピリジン（ＭＲ３１３４９）、３−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）フェノール（ＭＲ３１３６４）、３−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）フェノール（ＭＲ３１３６６），（１Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシ−２−（３−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）フェニル）アセタミジン（ＭＲ３１３６７）、５−（３，４−ジメトキシフェニル）−２−（６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３０８４９）、５−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２−（６−（３，４−ジメトキシフェニル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３０８５０）の化合物に適用した。

実施例１３：５−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２−（６−（３，４−ジメトキシフェニル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３０８５０）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．８３（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ６），８．８０（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ２’），８．１６（ｄ，Ｊ＝２．４，１Ｈ，Ｈ４），７．９８（ｄ，Ｊ＝１．７，１Ｈ，Ｈ４’），７．４９（ｄ，Ｊ＝７．１，２Ｈ，Ｈａ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝７，６，７．１，２Ｈ，Ｈｂ），７．３０（ｄ，Ｊ＝６．８，１Ｈ，Ｈｃ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１７．８，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．２０（ｄ，Ｊ＝１７．８，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ），６．８６（ｓ，２Ｈ），３．９９（ｓ，６Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．

実施例１４：５−（３，４−ジメトキシフェニル）−２−（６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−５−メチルピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン（ＭＲ３０８４９）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．８４（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ６），８．７９（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ２’），８．１７（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ，Ｈ４），７．９９（ｄ，Ｊ＝２．０，１Ｈ，Ｈ４’），７．４８（ｄ，Ｊ＝７．３，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝７．８，６．８，２Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．３０（ｄ，Ｊ＝７．１，１Ｈ，Ｈｓｔｙｒ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝１６，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．２３（ｄ，Ｊ＝１６．２，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．１９（ｄ，Ｊ＝２．２，１Ｈ），６．８４（ｓ，３Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｓ，６Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．

実施例１５：（１Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシ−２−（３−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）フェニル）アセタミジン（ＭＲ３１３６７）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ８．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．０２−８．００（ｍ，２Ｈ），７．５５−７．４３（ｍ，７Ｈ），７．３６−７．２０（ｍ，４Ｈ），４．５８（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ_２），３．５６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．４６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４９８．５５［Ｍ^＋］^＊

実施例１６：３−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）フェノール（ＭＲ３１３６６）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ１０．５（ｂｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．６６−８．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），８．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．３３−８．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），８．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．６３−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．５３−７．４８（ｍ，５Ｈ），７．３７−７．３３（ｍ，２Ｈ），７．２９−７．２１（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４８４．５４［Ｍ^＋］^＊

実施例１７：３−（３−メチル−５−（５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン−２−イル）ピリジン−２−イル）フェノール（ＭＲ３１３６４）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ８．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ），８．７２−８．７１（ｍ，１Ｈ） ８．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．０３−７．９９（ｍ，３Ｈ），７．５１−７．４６（ｍ，３Ｈ），７．３５−７．３２（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．２０（ｍ，４Ｈ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ），６．９３（ｓ，１Ｈ），６−８４−６．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ），２．４５（ｓ，ＣＨ_３），１．７７（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ）
ＭＳ（ＥＩ）：４４２．４１［Ｍ^＋］^＊

実施例１８：３−（６−（５−メチル−６−フェニルピリジン−３−イル）−５−スチリルピリジン−３−イル）ピリジン（ＭＲ３１３４９）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ８．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），８，７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．６４−８．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），８．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），７．９４−７．９１（ｍ，２Ｈ），７．５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．４４−７．３３（ｍ，６Ｈ），７．２９−７．２６（ｍ，２Ｈ），７．２３−７．１９（ｍ，２Ｈ），７．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４２６．４２［Ｍ^＋］^＊

実施例１９：３−メチル−５−（５−フェニル−３−スチリルピリジン−２−イル）−２−（ピリジン−３−イル）ピリジン（ＭＲ３１３４８）

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ８．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），８，８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），８．６８−８．６７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），８．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ），８．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），７．９８−７．９７（ｍ，１Ｈ），７．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．５７−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．４９−７．４６（ｍ，４Ｈ），７．３８−７．３４（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．２９（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ），７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ），２．５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）．
ＭＳ（ＥＩ）：４２６．５８［Ｍ^＋］^＊

ＩＩ．式（Ｉ）の化合物の生物活性

ＩＩ．Ａ．材料＆方法
試験化合物
（ヘテロ）芳香族オリゴ系を実施例Ｉに記載したように合成し、クロマトグラフィー（固定相としてフラッシュシリカゲル６０、Ｍｅｒｃｋ社製［０．０６３〜０．２００ｍｍ］を使用したカラム）により精製した。

ＡＢＴ−７３７はＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｎ社（テキサス州ヒューストン、米国）から入手し、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｓａｉｎｔ−Ｑｕｅｎｔｉｎ Ｆａｌｌａｖｉｅｒ、フランス）から入手した。

これらの化合物は通常、−２０℃にてＤＭＳＯ保存溶液として保管された。

細胞培養
ヒト卵巣癌ＯＡＷ４２細胞株をヒト卵巣腺癌から樹立し、ＥＣＡＣＣ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓａｉｎｔ−Ｑｕｅｎｔｉｎ Ｆａｌｌａｖｉｅｒ、フランス）から入手した。当該細胞株は、４５００ｍｇ／グルコース、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎児血清、３３ｍＭの重炭酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ社、リヨン、フランス）、及び２０ＩＵ／組換えヒトインスリン（Ｌｉｌｌｙ社、Ｓｕｒｅｓｎｅｓ、フランス）が添加されたＤＭＥＭ培地で培養された。

ヒト卵巣癌ＳＫＯＶ３細胞株をヒト卵巣腺癌から樹立し、ヒト悪性中皮腫細胞株ＮＣＩ−Ｈ２８及びヒト肺癌細胞株Ａ５４９と同様にアメリカ合衆国培養細胞株統保存機関（ヴァージニア州マナッサス、米国）から入手した。

ＩＧＲＯＶ１細胞株は、Ｊ．Ｂｅｎａｒｄ博士（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｇ． Ｒｏｕｓｓｙ、Ｖｉｌｌｅｊｕｉｆ、フランス）によりご提供いただいた。これらの細胞株は、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（商標）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０％ウシ胎児血清、及び３３ｍＭの重炭酸ナトリウム（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｉｌｌｋｉｒｃｈ、フランス）が添加されたＲＰＭＩ１６４０培地で培養された。

ＩＧＲＯＶ１（ＩＧＲＯＶ１−Ｒ１０）及びＯＶＷ４２（ＯＡＷ４２−Ｒ）細胞株の生体外化学療法抵抗性モデルは、シスプラチン投与の臨床試験実施計画書［Ｐｏｕｌａｉｎら（１９９８）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７８、４５４〜４６３、Ｖｉｌｌｅｄｉｅｕら，（２００７）Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ．１０５（１）、３１〜４４］を模することによって事前に入手した。

細胞を、５％ＣＯ_２加湿雰囲気中において３７℃で維持し、トリプシン処理により週２回剥離した。

処理
指数関数的に増殖する細胞を、以下に記述されるようにｓｉＲＮＡでトランスフェクションし、４８時間後、細胞をＤＭＳＯ中に溶解させた（ヘテロ）芳香族オリゴ系（１０、２５、又は５０μＭ）（全体積の＜０．１％）に更に４〜２４時間連続して曝露した。

遺伝子サイレンシング
ｓｉＲＮＡはＥｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社（リエージュ、ベルギー）により合成及びアニーリングされた。配列は以下の通りである。
Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ ｓｉＲＮＡアンチセンス（ｓｉＸＬ１）：５’−ａｕｕｇｇｕｇａｇｕｃｇｇａｕｃｇｃａｔｔ−３’（配列番号１）、
Ｍｃｌ−１ ｓｉＲＮＡ（ｓｉＭＣＬ１）：５’−ｇｕｇｃｃｕｕｕｇｕｇｇｃｕａａａｃａｔｔ−３’（配列番号２）、
対照ｓｉＲＮＡ（ｓｉＣＯＮＴ）：５’−ｇａｃｇｕａａａｃｇｇｃｃａｃａａｇｕｔｔ−３’（配列番号３）。

対照ｓｉＲＮＡはいかなる関連するヒト遺伝子とも一切相同性を有していない。トランスフェクション時に３０〜５０％の培養密度に達する前日に細胞を２５ｃｍ^２フラスコに播種した。トランスフェクションＩＮＴＥＲＦＥＲｉｎ（商標）試薬（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ社、ストラスブール、フランス）を、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｃｅｒｇｙ−Ｐｏｎｔｏｉｓｅ、フランス）で希釈したｓｉＲＮＡに添加し、室温で１５分間複合体を形成させてから、細胞に適用した。フラスコ中の最終ｓｉＲＮＡ濃度は２０ｎＭであった。

ＢＲＥＴアッセイ
ヒーラー細胞を６ウェルプレートに接種し、２００ｎｇ／ウェルのＢＲＥＴドナーをコードするプラスミドｐＲＬｕｃ−Ｂａｘ、ｐＲＬｕｃ−Ｐｕｍａ、又はｐＲＬｕｃ−Ｎｏｘａ、及び１μｇ／ウェルのＢＲＥＴアクセプタをコードするｐｅＹＦＰ−Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ又はｐｅＹＦＰ−Ｍｃｌ−１を用いて（又は対照としてｐＣＭＶ−Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ又はｐＣＭＶ−Ｍｃｌ−１を用いて）トランスフェクションした。トランスフェクションの２４時間後、細胞をトリプシン処理し、白色９６ウェル平底プレートに再び播種し、もう１日インキュベートし、その後、１６時間１０μＭの薬物で処理した。最終濃度５μＭのルシフェラーゼ基質であるセレンテラジンＨ（Ｕｐｔｉｍａ社）を添加した後に、４８５ｎｍ及び５３０ｎｍの光放射をＭｉｔｈｒａｓ蛍光／ルミネッセンス検出器ＬＢ９４０（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ社）を使用して連続的に測定した。ＢＲＥＴ比は記載されている通りに計算した［Ｔｅｒｒｉｌｌｏｎら（２００３）Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １７、６７７〜６９１、Ｖｏら（２０１２）Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．、２８６〜９３］。

リアルタイム細胞活性アッセイ
化合物により媒介される細胞毒性は、リアルタイム細胞アナライザマルチプレート（ＲＴＣＡ ＭＰ）機器、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ社、マンハイム、ドイツ）を使用してモニターした。このシステムは、組織培養Ｅ−ｐｌａｔｅｓ Ｖｉｅｗ（Ｒｏｃｈｅ社）の底部に組み込まれたくし形マイクロ電極間の電気インピーダンスを測定してリアルタイムで細胞事象をモニターする。電極センサに付着した細胞の数及びサイズの増大は、インピーダンスの増加につながり、これよりプロットに表示される細胞インデックス値（ＣＩ）が導かれる。従って、このインデックスは、Ｋｅら（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ７４０（２０１１），３３〜４３）により記述されるように、細胞生存率の変化を反映する。要約すると、９６ウェルＥ−Ｐｌａｔｅには３×１０^３細胞／ウェルが播種され、これを組織培養インキュベータ内に配置されたＲＴＣＡ ＭＰに置いたが、細胞は処理前に２４時間増殖させた。インピーダンスは処理終了まで連続して測定された。ウェル複製の標準偏差はＲＴＣＡソフトウェアを用いて分析した。

アポトーシスアッセイ
ＤＡＰＩを用いた核染色によるアポトーシス細胞の形態的特徴付け
処理後、浮遊（ｄｅｔａｃｈｅｄ）細胞及び接着細胞の両方をトリプシン処理後にプールし、ポリリシンでコートしたスライドガラスを細胞塗沫遠心により塗沫し、エタノール／クロロホルム／酢酸（６：３：１）の溶液で固定した。次に、調製物を室温で１５分間１μｇ／ｍｌのＤＡＰＩ溶液（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ−Ｒｏｃｈｅ社、マンハイム、ドイツ）と共にインキュベートし、蒸留水中で洗浄し、Ｍｏｗｉｏｌ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）中でカバーガラス下に取り付け、蛍光顕微鏡（ＢＸ５１、Ｏｌｙｍｐｕｓ社、Ｒｕｎｇｉｓ、フランス）で分析した。

フローサイトメトリーによる細胞周期分析
製造業者（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ社、インディアナポリス、米国）に推奨されるように、接着細胞及び浮遊細胞をプールし、１Ｘ ＰＢＳで洗浄し、５分間２００ｇで遠心分離にかけ、その後アネキシンＶ、ヨウ化プロピジウム、又はその両方により染色した。要約すると、１００μｌのアネキシンＶ−ＦＩＴＣ又はヨウ化プロピジウム又はその両方を細胞ペレット（１０^６細胞）に添加し、暗い場所で室温にて１５分間インキュベートした。次に、５００μｌの試料緩衝液を懸濁液に添加し、この懸濁液はＧａｌｌｉｏｓフローサイトメータ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社、Ｒｏｉｓｓｙ、フランス）を使用して分析し、細胞周期分布はＫａｌｕｚａ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社）を使用して決定した。

細胞抽出物の調製及びウエスタンブロット分析
細胞は氷冷ＰＢＳを用いてすすぎ、溶解緩衝液［ＲＩＰＡ：ＮａＣｌ １５０ｍＭ、Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）５０ｍＭ、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００ １％、ＰＭＳＦ ４ｍＭ、ＥＤＴＡ ５ｍＭ、ＮａＦ １０ｍＭ、ＮａＰＰｉ １０ｍＭ、Ｎａ３ＯＶ４ １ｍＭ、アプロチニン ０．５μｌ／ｍｌ、及び４．６ｍｌ超純水］中に懸濁させ、３０分間氷上でインキュベートした。溶解物を遠心分離（１３２００ｇ、１０分間、４℃）後に回収し、タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社、ハーキュリーズ、米国）を使用して決定した。２０μｇのタンパク質を、４〜１２％グラジエントポリアクリルアミドゲル（４−１２％ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｃｅｒｇｙ−Ｐｏｎｔｏｉｓｅ、フランス）を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、Ｈｙｂｏｎｄ−ＰＶＤＦメンブレン（Ａｍｅｒｓｈａｍ社、Ｏｒｓａｙ、フランス）に転写した。室温にて０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０（Ｔ−ＴＢＳ）を含む５％（ｗ／ｖ）脱脂粉乳／ＴＢＳで非特異的結合部位を１時間ブロックした後、メンブレンを以下のウサギ単クローン抗体、即ち、ＰＡＲＰ、カスパーゼ−３、及びＢｃｌ−ｘ_Ｌ、Ｂｉｍ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、Ｏｚｙｍｅ社、Ｓａｉｎｔ−Ｑｕｅｎｔｉｎ−ｅｎ−Ｙｖｅｌｉｎｅｓ、フランス）、Ｍｃｌ−１（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ社、Ｌｅ Ｐｅｒｒａｙ−ｅｎ−Ｙｖｅｌｉｎｅｓ、フランス）、ＨＳＰ−７０、Ｎｏｘａ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社、Ｆｏｎｔｅｎａｙ−ｓｏｕｓ−Ｂｏｉｓ、フランス）、（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社）、及びＡｃｔｉｎ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓａｉｎｔ−Ｑｕｅｎｔｉｎ Ｆａｌｌａｖｉｅｒ、フランス）で４℃にて一晩インキュベートした。次いで、メンブレンをＴ−ＴＢＳで洗浄し、適切なホースラディッシュペルオキシダーゼ標識抗ウサギ又は抗マウス（Ａｍｅｒｓｈａｍ社、Ｏｒｓａｙ、フランス）二次抗体と共に１時間インキュベートした。Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｉｍａｇｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、Ｏｒｓａｙ、フランス）を使用して証明を行った。

透過型電子顕微鏡
細胞を２．５％グルタルアルデヒド／ＰＢＳ緩衝液で固定し、寒天に含め、セーレンセンの緩衝液ですすぎ、１％四酸化オスミウム／セーレンセンの緩衝液で後固定し、エタノール中で脱水し、ＥＰＯＮ樹脂に包埋した。超薄切片を切り出し、酢酸ウラニル及びクエン酸鉛で染色し、ＪＥＯＬ１０１１透過型電子顕微鏡を使用して観察した。

ＩＩ．Ｂ．結果
ＩＩ．Ｂ．１．ピリドクラックスの活性（ＭＲ２９０７２）
ピリドクラックスはＭｃｌ−１／Ｐｕｍａの相互作用を阻害する。

図１Ａ及び図１Ｂに表されているように、ピリドクラックスは、ヒーラー細胞で行われた細胞アッセイ（ＢＲＥＴ）においてＭｃｌ−１／Ｐｕｍａ及びＭｃｌ−１／Ｎｏｘａ両方の相互作用を阻害できる。ＡＢＴ−７３７はこの相互作用を調節できないのに対して、ピリドクラックスはＭｃｌ−１／Ｐｕｍａの相互作用の劇的な阻害を引き起こした（約５０％）。

単剤として、又はｓｉＲＮＡ媒介Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ阻害と併用したピリドクラックスの効果
Ｍｃｌ−１阻害剤としてのピリドクラックスの利益を実証するために、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌの発現が曝露前４８時間のＲＮＡ干渉によりサイレンシングされるＢｃｌ−ｘ_Ｌ及びＭｃｌ−１の両方に対する選択的添加モデルを使用した。これらのアッセイを行うのに卵巣癌細胞株ＩＧＲＯＶ１−Ｒ１０を選択したが、これは、この細胞株がＢｃｌ−ｘ_Ｌ及びＭｃｌ−１の同時阻害に非常に敏感である（Ｂｒｏｔｉｎら（２０１０）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２６，８８５〜８９５）が、これらの標的の一方だけが阻害されても生存可能なままであるということが先に示されたからである。

予想通り、ピリドクラックスもＢｃｌ−ｘ_Ｌ標的ｓｉＲＮＡ（ｓｉＸＬ１）もそれぞれ単独では大規模な細胞死を誘導しなかった。これらの条件において、増殖の失速が観察されたが、細胞剥離又は大きなｓｕｂ−Ｇ１ピーク、カスパーゼ３活性化及び凝縮又は断片化された核も観察されなかった（図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ）。

対照的に、それらの併用により、強い細胞剥離、ＤＮＡ含有量ヒストグラムにおける大きなｓｕｂ−Ｇ１ピーク（５０％超）及びアネキシンＶ陽性細胞の６０％分画の出現（図２Ａ）によって示されるように、大規模な細胞死に至った。更に、生存率評価は、この併用が、生細胞数の劇的な減少及び同時に起こる死細胞の増加をもたらすことを示し（図２Ｂ）、ウエスタンブロット法は、ＰＡＲＰ及びカスパーゼ３の完全な切断を示した。ＤＡＰＩ染色及び電子顕微鏡は、この併用が、アポトーシス細胞死を強く想起する核の凝縮及び断片化をもたらした（２つの作用物質が組み合わされたときにだけ）ことを示した（図２Ｄ）。

これらの効果は、２５μＭ濃度のピリドクラックスへの曝露後に最適となるが、１０μＭでも小さな反応が観察された（データ不図示）。

この組み合わせの効果の動態試験は、アポトーシスが曝露開始から早くも２〜４時間後に観察される（４時間後にｓｕｂ−Ｇ１分画における事象の３７％）ことを示したが、この観察は、ＢＨ３類似活性による薬理学的Ｍｃｌ−１阻害と両立する（図２Ｅ）。

全体的に、これらの要素は、ピリドクラックスが卵巣癌化学療法抵抗性ＩＧＲＯＶ１−Ｒ１０細胞をＢｃｌ−ｘ_Ｌ標的ｓｉＲＮＡに対して強力に感作し、それらの組み合わせが大規模なアポトーシスをもたらすことを示す。

ピリドクラックスは、様々な癌細胞型をＢｃｌ−ｘ_Ｌ標的ｓｉＲＮＡに対して感作する
その他卵巣癌細胞株（図３Ａ）及びその他の癌細胞型（図３Ｂ）におけるピリドクラックスとｓｉＸＬ１との組み合わせの効果を研究した。

この併用に対する同様の反応がすべての卵巣癌細胞株、並びに肺癌（Ａ５４９）及び中皮腫（ＮＣＩ−Ｈ２８及びＭＳＴＯ−２１１Ｈ）細胞株において観察される。

ピリドクラックスは化学療法抵抗性卵巣癌細胞をＡＢＴ−７３７に対して感作する
ＡＢＴ−７３７はこれまでのところ最も強力なＢｃｌ−ｘ_Ｌ阻害ＢＨ３類似分子の１つであり、その卵巣癌細胞に対する反応はＭｃｌ−１の阻害により調節されるが、ＡＢＴ−７８７とピリドクラックスとの組み合わせの効果を評価した（図４）。ｓｉＸＬ１を用いて先に記載される通り、ＡＢＴ−７３７もピリドクラックスも単剤では細胞死を引き起こさなかったが、それらの併用により大規模なアポトーシス細胞死がＩＧＲＯＶ１−Ｒ１０及びＳＫＯＶ３化学療法抵抗性卵巣癌細胞株の両方でもたらされることが観察された。実際に、２種の分子が組み合わせられると、細胞活性はインピーダンス測定（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ技術）により評価したときに両細胞株において劇的に低下し（図４Ａ及び図４Ｄ）、更に、強力な細胞剥離及び重要なｓｕｂ−Ｇ１分画（図４Ｂ）並びに完全なＰＡＲＰ及びカスパーゼ３の切断（図４Ｃ及び図４Ｄ右パネル）が観察される。これらの効果は、同時曝露実験及び連続曝露実験（ピリドクラックス２４時間、その後ＡＢＴ−７３７）において同様であったことに注目すべきである。更に、観察されたアポトーシスは、細胞がピリドクラックス及びＡＢＴ−７３７に曝露されるとほぼすぐに起こり、ＢＨ３類似活性が支持されることを示している。

ＩＩ．Ｂ．２．本発明のその他の化合物の活性
次に、ＢＲＥＴアッセイにおけるＭｃｌ−１／Ｐｕｍａ相互作用を阻害する能力で選択された化合物を試験して、その細胞形態、細胞周期、ＰＡＲＰ切断、及び核形態に対する活性を評価した。結果は以下の表Ｉに提示される。

異なる基準の評価

細胞剥離
「−」とは、未処理細胞と、試験化合物で処理された細胞との間に差がないことを意味する。
「±」とは、殆どの細胞が支持体から剥離されなかった（１０％未満）ことを意味する。
「＋」とは、細胞の約２０％が支持体から剥離されたことを意味する。
「＋＋」とは、細胞の約半数が支持体から剥離されたことを意味する。
「＋＋＋」とは、細胞の大部分が支持体から剥離されたことを意味する。

ＰＲＡＰ切断
「＋」とは、ＰＡＲＰの８５ｋＤａ切断型に対応する小さなバンドがウエスタンブロットで観察可能であることを意味する。このバンドは、細胞が未処理であれば通常存在しないか又は弱いため、観察可能なバンドは１１０ｋＤａバンドのみである。
「＋＋」とは、ＰＡＲＰの８５ｋＤａ切断型に対応するバンドがウエスタンブロットではっきりと観察可能であることを意味する。未切断バンド（１１０ｋＤａ）は通常切断バンドと共存する。
「＋＋＋」とは、ほぼ完全に切断されたＰＡＲＰを意味する。１００ｋＤａバンドは多くの場合、８５ｋＤａ形態のため消失した。

アポトーシス核の特徴
「＋」とは、ＤＡＰＩ染色後、少数の凝縮又は断片化された核が観察可能であることを意味する。
「＋＋」とは、ＤＡＰＩ染色後、多数の凝縮又は断片化された核が観察可能である（２０〜５０％）ことを意味する。
「＋＋＋」とは、核のほとんどが凝縮又は断片化していることを意味する。

Claims (18)

1. 式（Ｉ）の化合物及びその薬剤として許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤又は担体の少なくとも１種と、を混合して含む、医薬組成物：
   
   式中、
   Ｙ_１、Ｙ_２は−Ｎ＝Ｃ−であり；
   Ａｒ_１、Ａｒ_２はそれぞれ独立して、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリール又は５〜７員ヘテロアリールから選択され、前記アリール及びヘテロアリール基は、場合により１〜３個のＲ_３基で置換され、但し：
   − Ａｒ_１、Ａｒ_２の両方を、４−ピリジル、非置換２若しくは３−チオフェニル、又は３，４−ジメトキシフェニル、又は３，４，５−トリメトキシフェニルで表されるものと同一とすることはできず、
   ｉ及びｊは１であり；
   Ｒ_１はＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
   Ｒ_２はＣ_６〜Ｃ_１０アリール、（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、及び（Ｃ_６〜Ｃ_１０）アリール（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルケニルから選択され；
   ｋ及びｌは１であり；
   Ｒ_３はそれぞれ独立して、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈ、（ＣＨ_２）_ｐＣＮ、（ＣＨ_２）_ｑＣ（＝Ｎ（ＯＨ））ＮＨ_２、Ｉ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆから選択され、前記アルキル基は場合によりＯＨで置換され；
   ｎは０、１、２、３であり；
   ｐは０、１、２、３であり；
   ｑは０、１、２、３である。
2. Ａｒ_１及び／又はＡｒ_２は、フェニル、ピリジル、ピリミジル、イミダゾリル、ピラゾリル、チオフェニル、トリアゾリル、特にフェニル、３−ピリジル、５−ピリミジル、２−イミダゾリル、３−ピラゾリル、２−チオフェニル、５−トリアゾリルから選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
3. Ａｒ_１、Ａｒ_２の少なくとも一方が窒素原子を含む５〜７員ヘテロアリールである、請求項２に記載の医薬組成物。
4. Ａｒ_１は３−ピリジル又はフェニルである、請求項２又は３に記載の医薬組成物。
5. Ａｒ_２は３−ピリジル又はフェニルである、請求項２〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
6. Ｒ_１ がメチルであり、Ｒ _２ がスチリルである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
7. Ｒ_１は５−メチルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
8. Ｒ_２は５−スチリルである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
9. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（Ｉａ）の化合物から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物：
   
   式中、
   Ｘ_１、Ｘ_２はそれぞれ独立して、Ｃ又はＮから選択され、
   Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３はそれぞれ独立して、請求項１〜８のいずれか１項に定義される通りである。
10. 前記式（Ｉ）の化合物は、
    − ５，６’−ジ（ピリジン−３−イル）−５’−メチル−３−（（Ｅ）−スチリル）−２，３’−ビピリジン、
    − ５，６’’−ジ（ピリジン−３−イル）−３，５’’−ビス−（（Ｅ）−スチリル）−［２，３’；６’，３’’］ターピリジン、
    − ３，５’’，５’’−トリメチル−５，６’’−ジフェニル−［２，３’；６’，３’’］−ターピリジン、
    − ５’−（２−メチル−４−ピリジン−３−イルフェニル）−３’，５−ジメチル−６−（２−メチル−４−ピリジン−３−イルフェニル）−３，２’−ビピリジン、
    − ２−（５−メチル−６−（ピリジン−３−イル）ピリジン−３−イル）−５−フェニル−３−スチリルピリジン、
    − ２−（５−メチル−６−フェニルピリジン−３−イル）−５−（ピリジン−３−イル）−３−スチリルピリジン、
    から選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
11. 更に、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ阻害剤、特にＢＨ３類似阻害剤、例えば、２−アミノ−６−ブロモ−α−シアノ−３−（エトキシカルボニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−酢酸エチルエステル（ＨＡ１４−１）、または４−［４−［［２−（４−クロロフェニル）フェニル］メチル］ピペラジン−１−イル］−Ｎ−［４−［［（２Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−１−フェニルスルファニルブタン−２−イル］アミノ］−３−ニトロフェニル］スルホニルベンズアミド（ＡＢＴ−７３７）を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
12. 請求項１〜１０のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物と、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ阻害剤と、を含む組み合わせである、医薬。
13. 癌の治療に使用される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
14. 前記式（Ｉ）の化合物は、Ｂｃｌ−ｘ_Ｌ阻害剤と一緒に投与される、請求項１３に記載の使用するための医薬組成物。
15. Ｍｃｌ−１タンパク質を介するアポトーシスを誘導するために使用される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
    
16. 式（Ｉ）の化合物およびその薬剤として許容される塩：
    式中、
    Ｙ_１、Ｙ_２、Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｉ、ｊ、ｋ、ｌは請求項１に定義される通りである。
17. Ｒ_１のうち１つはメチルであり、且つＲ_２はスチリルである、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物。
18. Ｒ_１は５−メチルであり、且つＲ_２は５−スチリルである、請求項１７に記載の式（Ｉ）の化合物。