KR101818672B1 - 아토피 피부염 진단용 조성물 및 상기 조성물을 이용한 아토피 피부염의 진단 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아토피 피부염 진단용 조성물 및 상기 조성물을 이용한 아토피 피부염의 진단 방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명의 아토피 피부염 진단용 조성물은 체내 특정 단백질의 발현량을 확인하여 아토피 피부염을 진단함으로써, 아토피 피부염에 대한 체계적인 진단 및 예측을 가능하게 하여 이에 대한 적절한 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

아토피 피부염 진단용 조성물 및 상기 조성물을 이용한 아토피 피부염의 진단 방법{DIAGNOSIS COMPOSITION OF ATOPIC DERMATITIS AND DIAGNOSIS METHOD OF ATOPIC DERMATITIS USING THE SAME}

본 발명은 아토피 피부염 진단용 조성물 및 상기 조성물을 이용한 아토피 피부염의 진단 방법에 관한 것이다.

아토피 피부염은 만성적인 염증성 피부질환으로서, 면역학적, 유전학적, 약리학적, 생리학적 및 환경적 등 다인자적 요인에 의해 발병되며, 병인과 발병기전은 감염, 스트레스, 계절과 기후변화, 자극 및 알레르기 유발 항원(allergen) 등에 의해 호전 및 악화가 반복적으로 일어난다. 아토피 피부염은 영·유아부터 성인에이르기까지 광범위하게 유발되며, 70 내지 80%는 IgE 매개 감작(IgE-mediated sensitization)에 의한 외인성 형태(extrinsic form)이며 20 내지 30%는 비 IgE 매개 감작(non-IgE-mediated sensitization)에 의한 내인성 형태(intrinsic form)이다.

아토피 피부염은 주로 가려움증, 발진, 상처, 경피 수분 손실량의 증가, 각질층의 수분량 감소와 같은 피부 항상성에 이상을 초래하고, 면역병리학적 특징을 수반하는 것으로 알려져 있으며, 기침, 재채기, 콧물, 코막힘, 눈의 결막충혈, 눈물, 구토, 설사, 복통 등의 증상을 나타낼 수 있으며 심한 경우 호흡곤란이나 쇼크를 일으킬 수도 있다.

국내의 경우 아토피 피부염을 앓는 환자는 전체 인구의 0.5% 내지 1%로 특히 어린이의 경우 5% 내지 10%가 아토피 피부염으로 인해 고통을 겪고 있으며, 아토피 피부염과 관련된 환자의 수는 계속 증가하고 있다. 증상은 대체로 생후 2 내지 6개월 즉, 1세 미만에서 많이 나타나고 다섯 살 이내에 85%가 나타난다. 보통 어릴 때 잠시 앓는 병이라고 알려져 있으며 50%는 두돌 이내에 없어지나 25%는 청소년까지, 나머지 25%는 성인이 되어서도 나타난다. 최근 어린이는 물론 성인 아토피 피부염도 증가 되고 있으며, 심한 경우에는 정신적 스트레스로 대인기피 및 우울증을 유발하기도 하여 심각한 사회문제가 되고 있다.

아토피 피부염을 치료하기 위해 일반적으로 부신피질호르몬제, 면역조절제, 국소면역조절제 또는 항히스타민제가 사용된다. 이때, 피부의 염증상태의 치료에 부신피질호르몬제, 면역조절제 및 국소면역조절제 등이 사용되고, 가려움증을 해소하기 위해 항히스타민제가 사용된다. 그러나 현재 아토피 피부염에 쓰이는 약물들은 장기적으로 사용하면 불면증, 중독증세와 같은 심각한 부작용을 초래하는 것으로 알려져 있다. 특히, 스테로이드제는 피부 위축이 일어날 수 있고 전신으로 흡수될 경우 부신 기능 부전신증이 생길 수 있는 부작용이 있으며, 면역억제제의 경우에는 고혈압 또는 신기능 이상 등의 부작용을 초래한다.

상기의 문제점들로 인해 아토피 피부염을 치료하는데 사용되는 스테로이드 외용제의 기피 풍조가 강해지고 있어, 병상의 악화 및 개선의 지표 또한 치료효과의 표현으로서 아토피 피부염의 중증도를 분류할 수 있는 아토피 피부염의 마커를 찾는 연구가 진행되고 있다. 구체적으로, 아토피성 피부질환 진단용 마커 및 상기 마커를 통한 아토피성 피부질환의 유발 인자 또는 아토피성 피부질환의 예방, 경감 또는 치료 약물을 스크리닝하는 방법이 대한민국 특허등록 제10-1117799호에 개시되어 있으며, 갈렉틴-10 또는 S100A9의 단백질 발현을 억제시키는 물질을 스크리닝하여 아토피 피부염 치료제를 개발하는 방법이 대한민국 특허등록 제10-1512121호에 개시되어 있다.

이에, 본 발명자들은 아토피 피부염을 진단하는 방법을 개발하고자 노력하던 중, 구강관용 아토피 마우스(OT-EC), 아토피 마우스(EC) 및 대조군 마우스에서 얻은 피부조직으로부터 초고속 RNA 서열분석(RNA-seq)을 통해 전사체 프로파일을 비교하여 아토피 피부염 환자에서 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자의 mRNA 발현이 유의하게 감소함을 확인하였다. 따라서, 상기 5종류의 유전자가 아토피 피부염의 바이오마커로서 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 목적은, SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질 또는 이들을 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 아토피 피부염 진단용 조성물 및 상기 조성물을 포함하는 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은, 상기 아토피 피부염 진단용 조성물을 이용하여 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질 또는 이들을 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 아토피 피부염 진단용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 아토피 피부염 진단용 조성물을 포함하는 아토피 피부염 진단용 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 1) 시료로부터 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 단백질 발현량을 정상개체의 단백질 발현량과 비교하는 단계를 포함하는 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.

아울러, 본 발명은 1) 시료로부터 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질을 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 유전자 발현량을 정상개체의 유전자 발현량과 비교하는 단계를 포함하는 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.

본 발명의 아토피 피부염 진단용 조성물은 체내 특정 단백질의 발현량을 확인하여 아토피 피부염을 진단함으로써, 아토피 피부염에 대한 체계적인 진단 및 예측을 가능하게 하여 이에 대한 적절한 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1a는 대조군 마우스(Control 또는 DW cont)와 구강관용을 유도하지 않은 아토피 마우스(EC 또는 DW EC), 구강관용 아토피 마우스(OT EC)와 EC 마우스 또는 대조군 마우스와 OT EC 마우스 그룹 사이에서 발현되는 유전자의 기하학적 평균 체적과 변화 값의 관계(A), 색조(heat map) 및 클러스터링 분석(B)을 나타낸 도이다: 도 1A에서 log₂(fold change) 값이 양수면 상향 조절을 음수면 하향 조절을 나타낸다. 짙푸른색점(변화값≥2, P<0.05)과 파란색점(변화값≥2)은 분석그룹 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자를 나타낸다. 도 1B의 색조(변화값≥2, P<0.05)에서 빨간색은 고발현을, 녹색은 저발현을 나타낸다.
도 1b는 대조군 마우스(Control 또는 DW cont)와 구강관용을 유도하지 않은 아토피 마우스(EC 또는 DW EC), 구강관용 아토피 마우스(OT EC)와 EC 마우스 또는 대조군 마우스와 OT EC 마우스 각 그룹 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자의 온톨로지에 따른 분류를 나타낸 도이다.
도 2는 대조군 마우스(Control)와 구강관용을 유도하지 않은 아토피 마우스(EC), 구강관용 아토피 마우스(OT EC)와 EC 마우스 또는 대조군 마우스와 OT EC 마우스 그룹 사이에서 발현되는 유전자의 mRNA 발현 수준(A) 및 초고속 RNA 서열분석 결과와 실시간 PCR 결과(B)를 비교 분석한 도이다. 도 2A의 그래프는 평균±SEM 값을 나타내며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001을 나타낸다.
도 3은 건강한 사람(Control)과 아토피 피부염 환자(Atopic Dermatitis)에서 5가지 유전자에 대한 mRNA 발현 수준을 실시간 PCR을 통해 비교한 그래프이다. *은 p<0.05, **은 p<0.01을 나타낸다.
도 4는 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자의 발현이 siRNA를 활용한 RNA 간섭으로 넉다운된 각질세포에서 5가지 유전자에 대한 mRNA 발현 수준을 실시간 PCR을 통해 비교한 그래프이다. *은 p<0.05, **은 p<0.01을 나타낸다:
siSCGB1A1: SCGB1A1 siRNA를 처리한 실험군
siTSC22D3: TSC22D3 siRNA를 처리한 실험군
siCon: 음성 대조군 siRNA를 처리한 대조군
mock: siRNA를 처리하지 않은 대조군
도 5는 건강한 사람(Control)과 아토피 피부염 환자(AD)에서 6종류의 유전자(IL5, IL13, CCL22, CCL17, LOR, FLG)에 대한 mRNA 발현 수준을 실시간 PCR을 통해 비교한 그래프이다. *은 p<0.05, ***은 p<0.001을 나타낸다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질 또는 이들을 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 아토피 피부염 진단용 조성물을 제공한다.

상기 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질은 통상의 기술분야에 알려진 어떠한 서열로 구성되는 폴리펩티드일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질은 각각 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54 및 서열번호 55의 아미노산 서열로 구성되는 폴리펩티드일 수 있다.

상기 폴리펩티드는 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 아미노산 서열뿐만 아니라, 상기 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 이의 단편을 포함한다. 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 본 발명의 폴리펩티드와 80％ 이상, 구체적으로는 90％ 이상, 더욱 구체적으로는 95％ 이상의 상동성을 가질 수 있다. 상기 폴리펩티드는 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서, 아미노산 잔기의 결실, 삽입, 치환 또는 이들의 조합에 의해서 상이한 서열을 가지는 아미노산의 변이체 또는 단편일 수 있다. 분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 또는 펩티드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다. 경우에 따라서는 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation) 등으로 수식(modification)될 수 있다.

상기 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질을 암호화하는 유전자는 통상의 기술분야에 알려진 어떠한 서열로 구성되는 유전자를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질을 암호화하는 유전자는 각각 서열번호 56, 서열번호 57, 서열번호 58, 서열번호 59 및 서열번호 60의 염기서열로 구성되는 유전자일 수 있다.

상기 유전자는 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열뿐만 아니라, 상기 폴리뉴클레오티드와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 이의 단편을 포함한다. 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 폴리뉴클레오티드와 80％ 이상, 구체적으로는 90％ 이상, 더욱 구체적으로는 95％ 이상의 상동성을 가질 수 있다. 상술한 바와 같이, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 이와 동등한 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 한, 하나 이상의 염기서열이 치환, 결실 또는 삽입된 변이체를 포함할 수 있다.

상기 검출시약은 항체, 항체 단편, 앱타머, 프라이머, 프로브(probe) 및 안티센스 뉴클레오티드(anti-sense nucleotide)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다. 단백질인 경우, 검출시약은 항체, 항체 단편 및 앱타머로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 유전자인 경우, 검출시약은 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.

상기 항체는 단일클론항체, 다클론항체 또는 재조합항체일 수 있다. 항체는 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 상기 항체 단편은 항체 분자의 기능적인 단편을 포함할 수 있다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등일 수 있다. 상기 앱타머는 소정의 표적 분자에 대한 결합 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드 분자로 RNA, DNA, 수식(modified) 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 혼합물일 수 있으며, 직쇄상 또는 환상의 형태일 수 있다.

상기 단일클론 항체는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마 방법, 또는 파지 항체 라이브러리 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 단일클론항체를 분비하는 하이브리도마 세포는 항원 단백질을 주사한 마우스와 같이 면역학적으로 적합한 숙주 동물로부터 분리된 면역 세포와 암 세포주를 융합하여 만들 수 있다. 이와 같은 두 집단의 세포 융합은 폴리에틸렌글리콜과 같이 본 발명이 속하는 기술 분야에 공지되어 있는 방법을 이용하여 수행되고 항체를 생산하는 세포는 표준적인 배양 방법으로 증식시킬 수 있다. 구체적으로, 한계 희석법을 이용하여 서브 클로닝을 실시하고, 균일한 세포 집단을 수득한 뒤 항원에 특이적인 항체를 생산할 수 있는 하이브리도마 세포를 시험관 또는 생체 내에서 대량으로 배양하여 제조할 수 있다. 상기 방법으로 제조된 항체는 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 방법을 이용하여 분리 및 정제될 수 있다.

상기 다클론 항체는 당업계에 널리 알려진 방법에 따라 면역원인 바이오마커 단백질 또는 그 단편을 외부 숙주에 주사함으로써 제조될 수 있다. 외부 숙주는 마우스, 래트, 양, 토끼와 같은 포유동물일 수 있다. 상기 면역원이 근내, 복강내 또는 피하 주사 방법으로 주사되는 경우, 항원성을 증가시키기 위한 보조제(adjuvant)와 함께 투여될 수 있다. 이후, 외부 숙주로부터 정기적으로 혈액을 채취하여 향상된 역가 및 항원에 대한 특이성을 보이는 혈청을 수득하고 이로부터 항체를 분리 및 정제하여 제조될 수 있다.

상기 프라이머는 본 발명에서 탐색된 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질을 암호화하는 유전자와 상보적이며, 이를 증폭할 수 있도록 설계된 프라이머라면 모두 사용할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 프라이머는 서열번호 19 내지 22 및 33 내지 38의 염기서열로 구성되는 프라이머일 수 있다.

상기 프로브는 DNA 또는 RNA와 특이적 결합을 이룰 수 있는 짧게는 수개 내지 길게는 수백 염기에 해당하는 핵산 단편으로서, 특정 DNA 또는 RNA의 존재 유무를 확인하는데 사용될 수 있다. 상기 프로브는 올리고뉴클레오티드 프로브, 단쇄 DNA 프로브, 이중쇄 DNA 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있고, 비오틴, FITC, 로다민, DIG(digoxigenin) 등으로 표지되거나 방사선 동위원소 등으로 표지될 수 있다.

상기 안티센스 뉴클레오티드는 이중나선 또는 단일나선 DNA, 이중나선 또는 단일나선 RNA, DNA/RNA 하이브리드, DNA 및 RNA 아날로그 및 염기, 당 또는 백본 변형을 지닌 것일 수 있다.

상기 검출시약은 발색효소, 형광물질, 방사성 동위원소 또는 콜로이드 등의 검출체로 표지된 접합체일 수 있다. 발색효소는 퍼록시다제, 알칼라인 포스파타제 또는 산성 포스파타제일 수 있고, 형광물질은 플루오레신카복실산(FCA), 플루오레신 이소티오시아네이트(FITC), 플루오레신 티오우레아(FTH), 7-아세톡시쿠마린-3-일, 플루오레신-5-일, 플루오레신-6-일, 2',7'-디클로로플루오레신-5-일, 2',7'-디클로로플루오레신-6-일, 디하이드로 테트라메틸로사민-4-일, 테트라메틸로다민-5-일, 테트라메틸로다민-6-일, 4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-에틸 또는 4,4-디플루오로-5,7-디페닐-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-에틸, Cy3, Cy5, 폴리 L-라이신-플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 로다민-B-이소티오시아네이트(RITC), PE(Phycoerythrin) 또는 로다민일 수 있다.

상기 검출시약은 추가로 상기 검출시약에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드를 포함할 수 있다. 상기 리간드는 발색효소, 형광물질, 방사성 동위원소 또는 콜로이드 등의 검출체로 표지된 접합체, 및 스트렙타비딘 또는 아비딘이 처리된 리간드일 수 있다.

본 발명의 진단용 조성물은 상기 서술한 바와 같은 검출시약 외에도 이들의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 구강관용 아토피 마우스(OT-EC), 구강관용을 유도하지 않은 아토피 마우스(EC) 및 구강관용을 유도하지 않고 EC 감작을 하지 않은 마우스(대조군)로부터 피부 조직을 수득해 RNA 서열을 분석하여 대조군과 EC 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자는 72종류이고(표 2 참조), OT-EC와 EC 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자는 130종류이며(표 3 참조), 대조군과 OT-EC 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자는 8종류이고(표 4 참조), 대조군과 OT-EC의 유전자 발현 패턴이 유사함(도 1a 참조)을 확인하였다.

또한, 아토피 피부염 환자에서 피부 조직을 수득해 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자의 mRNA 발현이 감소함을 확인하였으며(도 3 참조), 각질세포에서 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자를 넉다운시키면 아토피 피부염 환자에서 발현이 변화되는 것으로 알려진 IL13, CCL22 및 LOR 유전자의 발현변화가 아토피 피부염 환자와 동일하게 나타나므로 선별된 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자가 아토피 피부염의 마커로서 사용될 수 있음을 확인하였다(도 4 및 5 참조).

또한, 본 발명은 본 발명의 아토피 피부염 진단용 조성물을 포함하는 아토피 피부염 진단용 키트를 제공한다.

상기 아토피 피부염 진단용 조성물 및 검출시약은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 아토피 피부염 진단용 조성물은 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1로 구성된 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함할 수 있다.

한편, 검출시약은 항체, 항체 단편, 앱타머, 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 검출시약은 세척이나 복합체의 분리 등 그 이후의 단계를 용이하게 하기 위해 고형 기질에 결합될 수 있다. 고형 기질로는 합성수지, 니트로셀룰로오스, 유리기판, 금속기판, 유리섬유, 미세구체 또는 미세비드가 사용될 수 있다. 또한, 합성수지로는 폴리에스터, 폴리염화비닐, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, PVDF 또는 나일론 등이 사용될 수 있다.

상기 키트는 환자가 아토피 피부염인지 아닌지를 구별하여 의사 등 진료 행위자가 아토피 피부염을 진단하는 것을 가능하게 할 뿐 아니라, 치료에 대한 환자의 반응을 모니터하여 그 결과에 따라 치료를 변경할 수 있게 한다. 또한, 마우스 및 랫트 등의 아토피 피부염 모델의 생체 내 또는 생체 외에서 하나 이상의 마커의 발현을 조절하는 화합물을 동정하는데 사용될 수 있다.

상기 아토피 피부염 진단용 키트는 당업자에게 알려진 종래의 제조방법에 의해 제조될 수 있으며, 버퍼, 안정화제, 불활성 단백질 등을 더 포함할 수 있다.

상기 키트는 검출시약의 양을 탐색하기 위해 검출체로서 부착된 형광물질의 형광을 검출함으로써 수행되는 형광법 또는 검출체로서 부착된 방사선 동위원소의 방사선을 검출함으로써 수행되는 방사선법을 통한 초고속 스크리닝(high throughput screening, HTS) 시스템, 검출체의 표지 없이 표면의 플라즈몬 공명 변화를 실시간으로 측정하는 SPR(surface plasmon resonance) 방법 또는 SPR 시스템을 영상화하여 확인하는 SPRI(surface plasmon resonance imaging) 방법을 이용할 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 아토피 피부염 환자에서 피부 조직을 수득해 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자의 mRNA 발현이 감소함을 확인하였으며(도 3 참조), 각질세포에서 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자를 넉다운시키면 아토피 피부염 환자에서 발현이 변화되는 것으로 알려진 IL13, CCL22 및 LOR 유전자의 발현변화가 아토피 피부염 환자와 동일하게 나타나므로 선별된 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자가 아토피 피부염의 마커로서 사용될 수 있음을 확인하였다(도 4 및 5 참조).

또한, 본 발명은 1) 시료로부터 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 단백질 발현량을 정상개체의 단백질 발현량과 비교하는 단계를 포함하는 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.

상기 단계 1)의 시료는 소변, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직 등 정상적인 상태와 구별될 수 있는 질환 특이적 폴리펩티드를 확인할 수 있는 생체 시료를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 시료는 조직, 구체적으로는 피부 조직일 수 있다.

시료는 음이온 교환 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피, 크기별 배제 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피, 연속추출, 원심분리 또는 젤 전기영동 등의 방법을 이용하여 전처리될 수 있다.

상기 단계 1)의 단백질 발현량은 효소면역분석법, 방사능면역분석법, 샌드위치 측정법, 웨스턴 블롯팅, 면역침강법, 면역조직화학염색법, 형광면역법, 효소기질발색법 및 항원-항체 응집법으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정될 수 있다. 이때, SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 발현량은 대조군에 비해 감소할 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 아토피 피부염 환자에서 피부 조직을 수득해 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자의 mRNA 발현이 감소함을 확인하였으며(도 3 참조), 각질세포에서 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자를 넉다운시키면 아토피 피부염 환자에서 발현이 변화되는 것으로 알려진 IL13, CCL22 및 LOR 유전자의 발현변화가 아토피 피부염 환자와 동일하게 나타나므로 선별된 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자가 아토피 피부염의 마커로서 사용될 수 있음을 확인하였다(도 4 및 5 참조).

또한, 본 발명은 1) 시료로부터 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질을 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 유전자 발현량을 정상개체의 유전자 발현량과 비교하는 단계를 포함하는 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.

상기 단계 1)의 시료는 소변, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직 등 정상적인 상태와 구별될 수 있는 질환 특이적 폴리펩티드를 확인할 수 있는 생체 시료를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 시료는 조직, 구체적으로는 피부 조직일 수 있다.

상기 단계 1)의 유전자 발현량은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법 및 노던 블롯팅으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정될 수 있다. 이때, SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 발현량은 대조군에 비해 감소할 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 아토피 피부염 환자에서 피부 조직을 수득해 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자의 mRNA 발현이 감소함을 확인하였으며(도 3 참조), 각질세포에서 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자를 넉다운시키면 아토피 피부염 환자에서 발현이 변화되는 것으로 알려진 IL13, CCL22 및 LOR 유전자의 발현변화가 아토피 피부염 환자와 동일하게 나타나므로 선별된 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자가 아토피 피부염의 마커로서 사용될 수 있음을 확인하였다(도 4 및 5 참조).

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.

아토피 피부염 동물모델에서 발현이 변하는 유전자의 확인

<1-1> 구강관용 유도 마우스의 준비

먼저, 구강관용 아토피 마우스(OT-EC)는 6 내지 8주령의 암컷 BALB/c 야생형 마우스(Orientbio, Korea)에게 1% 오브알부민(Sigma-Aldrich, USA)이 포함된 식수를 5일 동안 제공하여 준비하였다. 구강 치료 2일 후, EC 감작을 하였다. 한편, 구강관용을 유도하지 않은 아토피 마우스(EC)는 정상적인 식수를 5일 동안 제공한 뒤, EC 감작을 하였다. 또한, 구강관용을 유도하지 않고, EC 감작을 하지 않은 마우스를 대조군으로서 사용하였다. 모든 마우스는 가천대학교에서 표준 온도 및 습도 조건하에서 사육되었다.

<1-2> cDNA 라이브러리 제작 및 서열분석

상기 실시예 <1-1>에서 준비된 마우스로부터 EC 감작 50일 후, 피부를 수득하였다. 수득된 피부로부터 통상적인 방법에 따라 QIAzol 용해 용액(Qiagen, Germany)을 사용하여 전체 RNA를 추출한 후, RNeasy 미니 키트(Qiagen)로 컬럼 정제를 수행하였다. 게놈 DNA를 제거하기 위해 DNase I(New England Biolabs, USA)을 정제된 RNA에 처리하였다. 각 샘플의 RNA 농도와 보존상태(integrity)는 Agilent 2100 Bioanalyzer(Santa Clara, USA)로 측정하였으며, 모든 RNA는 보존상태 숫자가 8 이상이었다. cDNA 라이브러리는 1 ㎍의 총 RNA와 Illumina Truseq RNA 라이브러리 키트(Illumina Inc, USA)를 사용하여 제작하였다. 라이브러리는 PCR을 15 사이클 반복하여 증폭시켰고, 증폭된 라이브러리의 서열은 Illumina HiSeq2000을 사용하여 샘플당 100 bp의 쌍방향 판독(Macrogen, Korea)으로 분석하였다.

<1-3> 아토피 피부염 동물 모델에서 발현이 변하는 유전자의 선별

하기 표 1과 같이 대조군 및 OT-EC 군은 각각 2마리, EC군은 3마리를 이용하여 RNA 서열을 분석하였다. 염기서열은 FASTQ로 해독하였으며, FASTQ 형식의 시퀀싱 데이터는 원본 샘플에 판독을 할당하기 위해 역 다중화시켰다. 판독결과는 TopHat v2.0.13을 사용하여 mm10 마우스 표준유전체에 맵핑하였다. 커프링크(Cufflink)를 사용하여 FPKM(백만 조각당 엑손의 킬로베이스당 단편)을 검출하기 위해 각 전사물의 총 맵핑된 판독 수를 결정하고 표준화했다. 분석된 샘플 중 하나 이상의 FPKM 값이 0인 유전자는 중요한 유전자 발현을 필터링하기 위해 제외하였다. 대조군 마우스와 EC 마우스, OT-EC 마우스와 EC 마우스 또는 대조군 마우스와 OT-EC 마우스 사이에서 각각 발현 정도가 서로 다른 유전자 분석을 위해, log₂(FPKM+1)의 값을 계산하였고, 이들을 사분위수(quantile) 표준화로 표준화하였다. 분석결과, P 값이 0.05 이하이며 변화값(fold change)이 2 이상인 전사물을 발현정도가 서로 다른 유전자(DEG)로 선별하였다.

또한, 상기 DEG의 발현 패턴은 완전 연결법과 유클리드 거리를 사용해 유사성 측정을 한뒤, 계층적 클러스터링 분석을 수행하여 표시했다. DEG의 모든 데이터 분석은 R 3.2.2(www.r-project.org)를 사용하여 수행되었다.

또한, DEG를 포함하는 기능적 그룹과 경로는 DAVID(Database for Annotation, Visualization, and Integrated Discovery) v.6.8 소프트웨어를 사용하여 유전자 온톨로지(GO) 분석을 기반으로 확인하였으며, 임계값은 피셔의 정확도 P-값(EASE 점수)≤0.05로 설정하였다. DEG의 유전자 온톨로지는 '생물학적 과정', '세포구성요소' 및 '분자기능'의 3가지 범주로 분석하였다.

[표 1]

[표 2]

대조군 마우스와 EC 마우스 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자

[표 3]

OT-EC 마우스와 EC 마우스 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자

[표 4]

대조군 마우스와 OT-EC 마우스 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자

그 결과, 도 1a 및 표 2 내지 표 4에 나타낸 바와 같이, 대조군과 EC 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자는 72종류였고(표 2), OT-EC와 EC 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자는 130종류였으며(표 3), 대조군과 OT-EC 사이에서 발현 정도가 서로 다른 유전자는 8종류였다(표 4). 또한, DEG의 볼륨 플롯(volume plot) 분석 결과 대조군 또는 OT-EC와 EC 사이에서 발현 값의 강도는 차이가 있었으며(도 1a의 A), 색조(heat map) 및 클러스터링 분석결과 대조군과 구강관용 아토피 마우스의 유전자 발현 패턴 및 계통이 매우 유사하였다(도 1a의 B).

선별된 RNA의 발현변화 재확인

상기 초고속 RNA 서열분석 결과를 검증하기 위해 기능적으로 중요하며 대조군 및 EC 마우스에서 발현 정도가 서로 다른 유전자인 Krtap14, Ear11, Atp6v1b1 및 Col11a1, OT-EC 및 EC 마우스에서 발현 정도가 서로 다른 유전자인 Krt72, Krt33b, Lce1l 및 Lor, 대조군 및 OT-EC 마우스에서 발현 정도가 서로 다른 유전자인 Hamp2, Scgb1a1, Tsc22d3, Klk13 및 Gjb6에 대해 실시간 PCR을 수행하였다. 각 그룹당 5 내지 8마리의 마우스로부터 표피 조직을 수득하여 실시예 <1-2>와 동일한 방법으로 전체 RNA를 추출한 후, iScript cDNA 합성 키트(Bio-Rad, USA)를 이용하여 cDNA를 합성했다. 실시간 PCR은 iQ SYBR Green supermix(Bio-Rad), 하기 표 5에 기재된 프라이머 및 CFX Connect 실시간 PCR 검출 시스템(Bio-Rad)을 이용하여 통상적인 방법에 따라 수행하였다. 같은 실험을 두번 반복하여 실행한 후 평균±표준편차의 값으로 그래프를 나타내었으며, 스튜던트 t 검정을 통해 초고속 RNA 서열분석 결과와 실시간 PCR 결과를 비교 분석하였다.

[표 5]

실시간 PCR에 사용한 프라이머

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 각 유전자의 mRNA 발현 변화 값의 증감 정도가 초고속 RNA 서열분석 결과와 유사하였으며(도 2A), 상관계수가 0.73이며, p 값이 0.0021로 초고속 RNA 서열분석과 실시간 PCR이 유의한 상관관계가 있었다(도 2B).

아토피 피부염 환자에서 선별된 RNA의 발현변화 확인

<2-1> 사람의 피부 조직 샘플 준비

가천대학교 길 메디컬 센터의 기관 검토위원회의 승인 하에(GBIRB2016-082) 아토피피부염 환자 3명의 병변 피부 조직을 채취하여 실험군으로 하였고, 건강한 사람 9명의 피부 표본을 채취하여 대조군으로 하였다. 실험군에는 4주 이상 동안 어떠한 치료도 받지 않은 아토피 피부염 급성 악화(SCORAD 20-70, 상승된 IgE)환자가 포함되어 있다.

<2-2> 아토피 피부염 환자에서 발현이 변화되는 유전자의 확인

상기 <실시예 1>에서 대조군과 OT-EC 사이에서 발현이 변화된 8개의 유전자 중에서 인간과 상동성을 지닌 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자를 대상으로 아토피 피부염 환자에서 발현수준 변화를 확인하였다.

구체적으로, 실험은 실시예 <2-1>에서 수득한 사람의 피부 조직에서 추출한 RNA 및 하기 표 6에 기재된 프라이머를 사용한 것을 제외하고는 실시예 <1-4>와 동일한 방법으로 수행하였다. 같은 실험을 두번 반복하여 실행한 후 평균±표준편차의 값으로 그래프를 나타내었으며, 만 위트니 검정을 통해 건강한 사람과 아토피 피부염 환자에서 차별적으로 발현된 유전자를 확인하였다.

[표 6]

실시간 PCR에 사용한 프라이머

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 아토피 피부염 환자에서 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 유전자의 mRNA 발현이 감소하였다(도 3).

<2-3> 선별된 유전자 및 아토피 피부염 발생과의 상관관계 검증

상기 실시예 <2-2>의 아토피 피부염 환자에서 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자의 발현이 감소한 결과에 기초하여, 각질세포(HaCaT)에서 상기 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자를 넉다운(knock down)시킨 경우에 그 하위단계 유전자들의 발현변화를 하기와 같이 확인하였다.

구체적으로, GB1A1 및 TSC22D3 유전자의 발현이 넉다운된 각질세포와 아토피 피부염 환자의 피부 조직으로부터 RNA를 추출하여 실시간 PCR을 이용하여 IL13, CCL22, CCl17, LOR 및 FLG 유전자의 mRNA 발현 수준을 비교하였다.

먼저, 각질세포를 SCGB1A1 및 TSC22D3의 발현을 억제시키기 위해 제작된 siRNA(ON-TARGETplus SMARTpool siRNA SCGB1A1 및 ON-TARGETplus SMARTpool siRNA TSC22D3, Dharmacon, USA)로 트랜스팩션하여 유전자 발현을 넉다운 하였다. SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자의 발현이 넉다운된 상기 세포에서 추출한 RNA 또는 실시예 <2-1>에서 수득한 사람의 피부 조직에서 추출한 RNA, 및 하기 표 7에 기재된 프라이머를 사용한 것을 제외하고는 실시예 <1-4>와 동일한 방법으로 실시간 PCR을 수행하였다. 같은 실험을 두번 반복하여 실행한 후 평균±표준편차의 값으로 그래프를 나타내었으며, 만 위트니 검정을 통해 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자의 발현이 넉다운된 각질세포와 아토피 피부염 환자에서 IL13, CCL22, CCl17, LOR 및 FLG 유전자의 mRNA 발현 수준을 확인하였다.

[표 7]

실시간 PCR에 사용한 프라이머

그 결과, 도 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, SCGB1A1 유전자의 발현을 넉다운시키면 IL13 및 CCL22 유전자의 mRNA 발현은 증가하는 반면 LOR 유전자의 mRNA 발현은 감소하였고, TSC22D3 유전자의 발현을 넉다운시키면 CCL22 유전자의 mRNA 발현은 증가하는 반면 LOR 유전자의 mRNA 발현은 감소하였다(도 4). 이와 유사하게 아토피 피부염 환자에서 IL5, IL13, CCL22 및 CCL17 유전자의 mRNA 발현은 증가하는 반면 LOR 및 FLG 유전자의 mRNA 발현은 감소하였다(도 5).

즉, 상기로부터 SCGB1A1 및 TSC22D3 유전자의 발현이 감소하면 아토피 피부염 환자에서 발현이 변화되는 것으로 알려진 IL13, CCL22, 및 LOR 유전자의 발현변화가 아토피 피부염 환자와 동일하게 나타나므로 상기 선별된 유전자가 아토피 피부염의 마커로서 사용될 수 있음을 알 수 있었다.

<110> Gachon University of Industry-Academic cooperation Foundation <120> DIAGNOSIS COMPOSITION OF ATOPIC DERMATITIS AND DIAGNOSIS METHOD OF ATOPIC DERMATITIS USING THE SAME <130> 2017P-02-022 <160> 60 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Krtap14 Forward primer <400> 1 tccgatctct tcatgcggtt 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Krtap14 Reverse primer <400> 2 gtgggtgatg ggagtttgga 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ear11 Forward primer <400> 3 acatgggtct ggagcaactt 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ear11 Reverse primer <400> 4 tcatcacatc ggggataggc 20 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atp6v1b1 Forward primer <400> 5 ggctgtgacc cgaaactaca t 21 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atp6v1b1 Reverse primer <400> 6 ctcagcatac tgggcaaact t 21 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Col11a1 Forward primer <400> 7 aggtggaaaa cgaaacggtg 20 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Col11a1 Reverse primer <400> 8 ggaagagaaa agtcaaggcg a 21 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Krt72 Forward primer <400> 9 cgccagttga ccctctatcc 20 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Krt72 Reverse primer <400> 10 aaatgctgct cccttgactc c 21 <210> 11 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Krt33b Forward primer <400> 11 aaatgctgct cccttgactc c 21 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Krt33b Reverse primer <400> 12 caagccctgg atgaagatgg t 21 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lce1l Forward primer <400> 13 acctgttcct gcctgctatt 20 <210> 14 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lce1l Reverse primer <400> 14 tggaatcaca gaaggagatg ag 22 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lor Forward primer <400> 15 acatcagcat cacctccttc 20 <210> 16 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lor Reverse primer <400> 16 tctttccaca acccacagg 19 <210> 17 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hamp2 Forward primer <400> 17 ctcctgtggt atctgttgtg a 21 <210> 18 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hamp2 Reverse primer <400> 18 atgaatactg gggttgaggg g 21 <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Scgb1a1 Forward primer <400> 19 gctgaagaga ctggtggata 20 <210> 20 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Scgb1a1 Reverse primer <400> 20 cttgcttaca cagaggactt g 21 <210> 21 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tsc22d3 Forward primer <400> 21 tgagatgtga tgccagtgt 19 <210> 22 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tsc22d3 Reverse primer <400> 22 gcttcttcat aggaacagtc att 23 <210> 23 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Klk13 Forward primer <400> 23 ccaggggcac ttgatacact c 21 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Klk13 Reverse primer <400> 24 tgttcgtcac ctctttccca 20 <210> 25 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Gjb6 Forward primer <400> 25 gacatgaaac tgcccgaaag t 21 <210> 26 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Gjb6 Reverse primer <400> 26 cgaagatgat gcggaagaaa atg 23 <210> 27 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Gapdh Forward primer <400> 27 ctggtatgac aatgaatacg 20 <210> 28 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Gapdh Reverse primer <400> 28 gcagcgaact ttattgatgg 20 <210> 29 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SCGB1A1 Forward primer <400> 29 cagagacgga accagagac 19 <210> 30 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SCGB1A1 Reverse primer <400> 30 gagagccagt gtgaccag 18 <210> 31 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TSC22D3 Forward primer <400> 31 ccagtttgct ccagaaagt 19 <210> 32 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TSC22D3 Reverse primer <400> 32 cagtcgttgt caggtgaag 19 <210> 33 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PON1 Forward primer <400> 33 tttgggttta gcgtggtcgt 20 <210> 34 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PON1 Reverse primer <400> 34 tgccatcggg tgaaatgttg 20 <210> 35 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BTC Forward primer <400> 35 cctgggtcta gtgatccttc a 21 <210> 36 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BTC Reverse primer <400> 36 ctttccgctt tgattgtgtg g 21 <210> 37 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PER1 Forward primer <400> 37 caccctgatg acccactctt 20 <210> 38 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PER1 Reverse primer <400> 38 ggtaaggctg gactggatga 20 <210> 39 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH Forward primer <400> 39 ctgggctaca ctgagcacc 19 <210> 40 <211> 21 <212> 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Val Glu Leu Pro Asn Cys Asn Leu Val Lys Gly Ile 35 40 45 Glu Thr Gly Ser Glu Asp Leu Glu Ile Leu Pro Asn Gly Leu Ala Phe 50 55 60 Ile Ser Ser Gly Leu Lys Tyr Pro Gly Ile Lys Ser Phe Asn Pro Asn 65 70 75 80 Ser Pro Gly Lys Ile Leu Leu Met Asp Leu Asn Glu Glu Asp Pro Thr 85 90 95 Val Leu Glu Leu Gly Ile Thr Gly Ser Lys Phe Asp Val Ser Ser Phe 100 105 110 Asn Pro His Gly Ile Ser Thr Phe Thr Asp Glu Asp Asn Ala Met Tyr 115 120 125 Leu Leu Val Val Asn His Pro Asp Ala Lys Ser Thr Val Glu Leu Phe 130 135 140 Lys Phe Gln Glu Glu Glu Lys Ser Leu Leu His Leu Lys Thr Ile Arg 145 150 155 160 His Lys Leu Leu Pro Asn Leu Asn Asp Ile Val Ala Val Gly Pro Glu 165 170 175 His Phe Tyr Gly Thr Asn Asp His Tyr Phe Leu Asp Pro Tyr Leu Gln 180 185 190 Ser Trp Glu Met Tyr Leu Gly Leu Ala Trp Ser Tyr Val Val Tyr Tyr 195 200 205 Ser Pro Ser Glu Val Arg Val Val Ala Glu Gly Phe Asp Phe Ala Asn 210 215 220 Gly Ile Asn Ile Ser Pro Asp Gly Lys Tyr Val Tyr Ile Ala Glu Leu 225 230 235 240 Leu Ala His Lys Ile His Val 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aacttttcag ccctgatcaa gacatgaggg aggcaggggc 240 tcagctgaag aagctggtgg acaccctccc ccaaaagccc agagaaagca tcattaagct 300 catggaaaaa atagcccaaa gctcactgtg taattagcat ttagaagctg aagatcccca 360 actgctccag cctctgccgc tgccatgctt tgagtccacg cccaccagcc ttgctctctt 420 caataaacca caagcatctc acttttgtgc cc 452 <210> 57 <211> 2312 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 57 ctccacaggt ccgccccaat ccccgctcac acttgggaaa cttgggactg cgctggggcc 60 gcgtgtggca cctcaggggg gcggcccccg gcctcaagag gagggggagg agaaggagga 120 agaggaggaa gtgagcccga aggatccgct cggagctgtt tgtccagctg tttctattcg 180 cacccggagc agtacagcca gaagggggcc gagccgaagg tggctggctt taggcgctaa 240 tttccaactc ttttcctcac agcttgtctt ttccaggcac cctggagtcc cctcaggcca 300 gctcggtggg cgcgcacctg ccagccgccc ctgacctcgc aggccaggcg acctccgagc 360 ctgagaagat ggcccagtcc aagctcgatt gccgctcacc tgtcggcctc gactgctgca 420 actgctgcct ggacctggcc catcggagtg ggctccagcg aggcagcagc ggggagaaca 480 acaacccggg cagccctaca gtgagcaact ttcggcagct gcaggaaaag ctggtctttg 540 agaacctcaa 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ttaagcagag gcaacctctc tcttctcctc tgtttcgtga 1440 aggcagggga cacagatggg agagattgag ccaagtcagc cttctgttgg ttaatatggt 1500 ataatgcatg gctttgtgca cagcccagtg tgggattaca gctttgggat gaccgcttac 1560 aaagttctgt ttggttagta ttggcatagt ttttctatat agccataaat gcgtatatat 1620 acccataggg ctagatctgt atcttagtgt agcgatgtat acatatacac atccacctac 1680 atgttgaagg gcctaaccag ccttgggagt attgactggt cccttacctc ttatggctaa 1740 gtctttgact gtgttcattt accaagttga cccagtttgt cttttaggtt aagtaagact 1800 cgagagtaaa ggcaaggagg ggggccagcc tctgaatgcg gccacggatg ccttgctgct 1860 gcaacccttt ccccagctgt ccactgaaac gtgaagtcct gttttgaatg ccaaacccac 1920 cattcactgg tgctgactac atagaatggg gttgagagaa gatcagtttg ggcttcacag 1980 tgtcatttga aaacgttttt tgttttgttt tgtaattatt gtggaaaact ttcaagtgaa 2040 cagaaggatg gtgtcctact gtggatgagg gatgaacaag gggatggctt tgatccaatg 2100 gagcctggga ggtgtgccca gaaagcttgt ctgtagcggg ttttgtgaga gtgaacactt 2160 tccacttttt gacaccttat cctgatgtat ggttccagga tttggatttt gattttccaa 2220 atgtagcttg aaatttcaat 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gggctgtact tacatatgat acataaatag ctcccctatt 2340 agtaaaagct aagccaaaca actgataatt ttcaaaatct attttttctc ctgatttaat 2400 ggtcatactt gaaacacaat tatatccaac tgatccatgt tgtatatgcc ttattttcaa 2460 aagtctcatt taagctcatt catgcccttt ctcttatgta gtcttcttcg atacgaaagg 2520 agcttggaat aaatatccat tagagctttt aaaaacacaa aacaatgctt taatgtttct 2580 tttttcctgg actgagtttg gctgaccaac aaaatctctc aagccatttt gttttgatcc 2640 taaaatatca atggtggctc tcgaaatttg gtagatctga tatcaagaaa gaatttcaaa 2700 gatttttata tcttttcaaa atgtatttta tagttgcttt gcatacacta aataactttg 2760 tttatgtaaa ctgtcaatat tatcatgtaa taaaataaat ttatttttaa aacaaaaaaa 2820 aaaaaaa 2827 <210> 60 <211> 4717 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 60 attatgcaac ccgcctcccc gcccgcccgg tggagcttcc actcggctgc gggctggagc 60 ggcggcgggc aggcgtgcgg aggacactcc tgcgaccagg tactggctgt gatcgaactt 120 ctcaaccctc agagacttag atcttccacc tcactccctc agccaagcct ccaggccccc 180 tcgtgcatcc gtggtggcct ctctgccttc tctgttctgt tctccccatg gcccagacat 240 gagtggcccc ctagaagggg ctgatggggg 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aagtccgtct tctgccgtat 1140 cagaggaggt cctgaccggg atccagggcc tcggtaccag ccattccgcc taaccccgta 1200 tgtgaccaag atccgggtct cagatggggc ccctgcacag ccgtgctgcc tgctgattgc 1260 agagcgcatc cattcgggtt acgaagctcc ccggataccc cctgacaaga ggattttcac 1320 tacgcggcac acacccagct gcctcttcca ggatgtggat gaaagggctg cccccctgct 1380 gggctacctg ccccaggacc tcctgggggc cccagtgctc ctgttcctgc atcctgagga 1440 ccgacccctc atgctggcta tccacaagaa gattctgcag ttggcgggcc agccctttga 1500 ccactcccct atccgcttct gtgcccgcaa cggggagtat gtcaccatgg acaccagctg 1560 ggctggcttt gtgcacccct ggagccgcaa ggtagccttc gtgttgggcc gccacaaagt 1620 acgcacggcc cccctgaatg aggacgtgtt cactcccccg gcccccagcc cagctccctc 1680 cctggacact gatatccagg agctgtcaga gcagatccac cggctgctgc tgcagcccgt 1740 ccacagcccc agccccacgg gactctgtgg agtcggcgcc gtgacatccc caggccctct 1800 ccacagccct gggtcctcca gtgatagcaa cgggggtgat gcagaggggc ctgggcctcc 1860 tgcgccagtg actttccagc agatctgtaa ggatgtgcat ctggtgaagc accagggcca 1920 gcagcttttt attgagtctc gggcccggcc tcagtcccgg ccccgcctcc ctgctacagg 1980 cacgttcaag gccaaggccc ttccctgcca atccccagac ccagagctgg aggcgggttc 2040 tgctcccgtc caggccccac tagccttggt ccctgaggag gccgagagga aagaagcctc 2100 cagctgctcc taccagcaga tcaactgcct ggacagcatc ctcaggtacc tggagagctg 2160 caacctcccc agcaccacta agcgtaaatg tgcctcctcc tcctcctata ccacctcctc 2220 agcctctgac gacgacaggc agaggacagg tccagtctct gtggggacca agaaagatcc 2280 gccgtcagca gcgctgtctg gggagggggc caccccacgg aaggagccag tggtgggagg 2340 caccctgagc ccgctcgccc tggccaataa ggcggagagt gtggtgtccg tcaccagtca 2400 gtgtagcttc agctccacca tcgtccatgt gggagacaag aagcccccgg agtcggacat 2460 catcatgatg gaggacctgc ctggcctagc cccaggccca gcccccagcc cagcccccag 2520 ccccacagta gcccctgacc cagccccaga cgcctaccgt ccagtggggc tgaccaaggc 2580 cgtgctgtcc ctgcacacac agaaggaaga gcaagccttc ctcagccgct tccgagacct 2640 gggcaggctg cgtggactcg acagctcttc cacagctccc tcagcccttg gcgagcgagg 2700 ctgccaccac ggccccgcac ccccaagccg ccgacaccac tgccgatcca aagccaagcg 2760 ctcacgccac caccagaacc ctcgggctga agcgccctgc 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gccaatgctg accagcgcgt 3660 catgatgacc taccaggtgc cctccaggga catgacctct gtgctgaagc aggatcggga 3720 gcggctccga gccatgcaga agcagcagcc tcggttttct gaggaccagc ggcgggaact 3780 gggtgctgtg cactcctggg tccggaaggg ccaactgcct cgggctcttg atgtgatggc 3840 ctgtgtggac tgtgggagca gcacccaaga tcctggtcac cctgatgacc cactcttctc 3900 agagctggat ggactggggc tggagcccat ggaagagggt ggaggcgagc agggcagcag 3960 cggtggcggc agtggtgagg gagagggctg cgaggaggcc caaggcgggg ccaaggcttc 4020 aagctctcag gacttggcta tggaggagga ggaagaaggc aggagctcat ccagtccagc 4080 cttacctaca gcaggaaact gcaccagcta gactccattc tgggaccatc tccaggagtc 4140 catgagaggc tttcttctcc tatgtcccaa ttctcagaac tcagatgtgg ctagaccaac 4200 cagtgggaaa ctgccccagc ttctcccacc atagggggcc ggacccccat caccagccta 4260 ggatccaggg gctgcctctg gcctcttagg gagcagagag cagaactccg cagcccagcc 4320 cagaggagtg tcacctccca cctttggaga ggaatccttc cctcccctgg acaaagttgc 4380 tgacaagctg ctgaagtggc ctctccatat tccagctgag cctgaatctg actcttgagg 4440 gttggggctg cacttattta ttgcggggag acagctctct ctcccacctc ctccccagat 4500 gggaggagag cctgaggccc aagcaggacc cgggggttcc agcccctagc tgctctggag 4560 tgggggaggt tggtggacca tggagtccct ggtgctgccc ctcaggtggg acccaggcgt 4620 tctcagctgt accctctgcc gatggcattt gtgtttttga tatttgtgtc tgttactact 4680 tttttaatac aaaaagataa aaacgcccaa aaaaaaa 4717

Claims (9)

1. SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 아토피 피부염 진단용 조성물.
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 검출시약이 항체, 항체 단편, 앱타머, 프라이머, 프로브(probe) 및 안티센스 뉴클레오티드(anti-sense nucleotide)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 아토피 피부염 진단용 조성물.
   
3. 제 1항의 조성물을 포함하는 아토피 피부염 진단용 키트.
   
4. 1) 시료로부터 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 발현량을 측정하는 단계; 및
   2) 상기 단계 1)의 단백질 발현량을 정상개체의 단백질 발현량과 비교하는 단계를 포함하는 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법.
   
5. 제 4항에 있어서, 상기 단계 1)의 시료가 소변, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직인, 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법.
   
6. 제 4항에 있어서, 상기 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질의 발현량이 대조군에 비해 감소하는, 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법.
   
7. 제 4항에 있어서, 상기 단백질의 발현량은 효소면역분석법, 방사능면역분석법, 샌드위치 측정법, 웨스턴 블롯팅, 면역침강법, 면역조직화학염색법, 형광면역법, 효소기질발색법 및 항원-항체 응집법으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정되는, 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법.
   
8. 1) 시료로부터 SCGB1A1, TSC22D3, PON1, BTC 및 PER1 단백질을 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및
   2) 상기 단계 1)의 유전자 발현량을 정상개체의 유전자 발현량과 비교하는 단계를 포함하는 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법.
   
9. 제 8항에 있어서, 상기 유전자의 발현량은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법 및 노던 블롯팅으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정되는, 아토피 피부염 진단의 정보를 제공하기 위한 방법.
   
   

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