KR20210119131A

KR20210119131A - 천식 진단 및 중증도와 치료 반응 예측용 조성물

Info

Publication number: KR20210119131A
Application number: KR1020200035617A
Authority: KR
Inventors: 김태범
Original assignee: 재단법인 아산사회복지재단; 울산대학교 산학협력단
Priority date: 2020-03-24
Filing date: 2020-03-24
Publication date: 2021-10-05

Abstract

본 발명은 천식 진단 및 흡입 코르티코스테로이드 치료 반응성 예측용 조성물 등에 관한 것으로, 본 발명자들은 MRGPRX2가 천식 환자에서 정상군 대비 유의적으로 증가된 수준을 보일 뿐만 아니라, 알레르기성 천식 환자에서 비알레르기성 천식 환자 대비 그 수준이 유의하게 증가함을 확인하였고, MRGPRX2 수준이 높은 환자들에서 고용량 ICS에 대한 요구량이 높았고 잘 조절되지 않는 천식인 경우가 많았던 바, MRGPRX2를 천식 및 중증 천식의 진단과 천식 환자의 치료 반응성 평가에 유용한 바이오마커로 이용할 수 있을 것으로 기대된다.

Description

천식 진단 및 중증도와 치료 반응 예측용 조성물{Composition for Diagnosing Asthma and Predicting Severity and Treatment Response}

본 발명은 천식 진단 및 중증도와 치료 반응 예측용 조성물 등에 관한 것이다.

천식(asthma)은 여러가지 자극에 대한 기도의 과민반응성(bronchial hyperresponsiveness)을 그 특징으로 하는 질환으로 만성 기도 염증(chronic airway inflammation)을 일으키며 기도의 광범위한 협착에 의해 발생하는 천명(喘鳴), 호흡곤란, 기침 등의 임상 증세들이 나타나는데 이는 자연적으로 또는 치료에 의해 가역적으로 호전될 수 있다.

일반적으로 천식은 TH2 타입 면역세포가 생성하는 인터루킨 (interleukin)-4, 5, 13에 의해 염증세포가 증식, 분화 및 활성화되어 기도 및 기도주변 조직으로 이동, 침윤하여 나타나는 만성 염증질환으로 인식되고 있다. 이 경우 활성화된 호산구, 비만세포, 폐포 대식세포 등의 염증세포가 다양한 염증매개인자들(시스테인 류코트리엔, 프로스타글란딘 등)을 분비하면서 강력한 기관지 수축작용이 과정에서 중요한 역할을 한다.

그 중, 흡입용 코르티코스테로이드(ICSs)의 광범위한 사용은 천식 증상의 치료 방법을 변화시켜왔으며, ICS는 만성 천식 환자에 대한 치료에서 중요한 역할을 한다. 일반적으로, 경증의 지속적 천식 환자에 대해 중급 또는 고용량의 ICS 치료 또는 낮은 용량의 ICS와 장시간 작용하는 β2 작용제를 조합한 치료가 추천되며, 심한 증상의 지속적 천식 환자는 일반적으로 지속성 베타 효능제 (LABA)와 함께 중급 또는 고용량의 ICS로 치료하고 있다. 대부분의 환자에 대해 상기 가이드라인이 잘 작용하지만, ICS 치료에 대한 반응은 개인 간에 매우 다양하다.

대한민국등록특허 10-1592719호

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 천식 및 천식의 중증도 진단과 치료 반응 예측용 조성물을 제공하는 것으로서, 본 발명자들은 MRGPRX2A (Mas-related G-protein coupled receptor member X2) 단백질이 천식 환자, 특히 알레르기성 천식 환자에게서 유의하게 증가할 뿐만 아니라, 고용량의 ICS를 필요로 하는 중증도가 높은 환자에게서 장기간 증가되어 있음을 확인하고, 천식 및 천식의 중증도 진단과 치료 반응성 예측에 사용할 수 있음을 확인하였다.

이에, 본 발명의 목적은 MRGPRX2 (Mas-related G-protein coupled receptor member X2) 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 피검체의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 천식 치료 물질의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 환자의 치료 반응성 예측용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 천식 환자의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 환자의 치료 반응성 예측에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 MRGPRX2의 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 치료 반응성 예측용 키트를 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 MRGPRX2 (Mas-related G-protein coupled receptor member X2) 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제는 MRGPRX2의 mRNA에 특이적으로 결합하는 프로브 또는 프라이머일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 MRGPRX2의 단백질에 특이적인 항체일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 MRGPRX2 단백질은 서열번호 1로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 MRGPRX2 mRNA는 서열번호 2로 이루어지는 염기 서열을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 천식은 알레르기성 천식일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 천식은 중증 천식 또는 잘 조절되지 않는 천식일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 피검체의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 시료는 혈액, 혈장 또는 혈청일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 방법은 대조군과 비교하여 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준이 증가된 경우 천식으로 진단할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 천식이 알레르기성 천식인 경우, 대조군은 정상 대조군 또는 비알레르기성 천식군일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 천식 치료 물질의 스크리닝 방법을 제공한다 :

(a) MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA를 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계;

(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현량을 측정하는 단계; 및

(c) 대조군 세포와 비교해 상기 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현량을 증가시킨 물질을 천식 치료 물질로 선별하는 단계.

또한, 본 발명은 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 환자의 치료 반응성 예측용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 천식 환자의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 환자의 치료 반응성 예측에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 MRGPRX2의 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식환자의 치료 반응성 예측용 키트를 제공한다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 치료 반응성은 흡입용 코르티코스테로이드 또는 다른 천식 치료제의 치료 반응성일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 천식 환자는 중증 천식 또는 잘 조절되지 않는 천식 환자일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 조성물은 중증 천식 환자에서 흡입용 코르티코스테로이드나 다른 천식 치료제의 치료 반응성을 예측하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 또한, 본 발명은 피검체의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 발병을 예측하기 위한 정보 제공 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 피검체의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 진단 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 조성물의 천식 진단 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 천식 환자의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 환자의 치료 반응성 예측 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 조성물의 천식 환자의 치료 반응성 예측 용도를 제공한다.

본 발명자들은 MRGPRX2가 천식 환자에서 정상군 대비 유의적으로 증가된 수준을 보일 뿐만 아니라, 알레르기성 천식 환자에서 비알레르기성 천식 환자 대비 그 수준이 유의하게 증가함을 확인하였다. 또한, MRGPRX2 수준이 높은 환자들은 고용량의 ICS 치료를 요구하여 중증도가 높았으므로, MRGPRX2를 천식 진단 및 천식 환자에 대한 ICS 치료 반응성 평가에 유용한 바이오마커로 이용할 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 (A) 건강한 그룹, 비알레르기성 천식 그룹, 및 알레르기성 천식 그룹 간의 MRGPRX2 수준 차이, (B) 요구되는 ICS 용량에 따른 알레르기성 천식 그룹의 MRGPRX2 수준 차이, (C) ICS에 대한 천식 조절 상태에 따른 MRGPRX2 수준 차이, 및 (D) 알레르기성 천식 그룹에서 ICS 치료에 대한 반응성을 나타내는 ROC 곡선을 나타낸 것이다.
도 2는 알레르기성 천식 환자의 임상적 특성 및 혈청 MRGPRX2 수준 차이를 나타낸 것이다 (FVC : 자기 노력성 폐활량).

본 발명은 MRGPRX2 (Mas-related G-protein coupled receptor member X2) 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 조성물 및 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 환자의 치료 반응성 예측용 조성물에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 명세서에서, 용어 “단백질”은 '폴리펩타이드(polypeptide)' 또는 '펩타이드(peptide)'와 호환성 있게 사용되며, 예컨대, 자연 상태의 단백질에서 일반적으로 발견되는 바와 같이 아미노산 잔기의 중합체를 말한다.

본 명세서에서, “폴리뉴클레오티드(polynucleotide)” 또는 “핵산”은 단일 또는 이중 가닥의 형태로 된 데옥시리보핵산(deoxyribonucleic acid, DNA) 또는 리보핵산(ribonucleic acid, RNA)를 말한다. 다른 제한이 없는한, 자연적으로 생성되는 뉴클레오티드와 비슷한 방법으로 핵산에 혼성화되는 자연적 뉴클레오티드의 공지된 아날로그도 포함된다. 일반적으로 DNA는 아데닌(adenine, A), 구아닌(guanine, G), 시토신(cytosine, C), 티민(thymine, T) 등 네 가지 염기로 구성되어 있으며, RNA는 티민 대신 우라실(Uracil, U)을 가지고 있다. 핵산 이중 가닥에서 A는 T 또는 U, C는 G 염기와 수소결합을 이루는데, 이러한 염기의 관계를 ‘상보적(complementary)'이라고 한다.

한편, 'mRNA(messenger RNA 또는 전령 RNA)'는 단백질 합성 과정에서 특정 유전자의 염기서열의 유전 정보를 리보솜(ribosome)으로 전달하여 폴리펩티드 합성(단백질 번역, translation)의 청사진 역할을 하는 RNA이다. 유전자를 주형(template)으로 하여 단일 가닥의 mRNA가 전사(transcription) 과정을 통하여 합성된다.

본 명세서에서, “MRGPRX2 (Mas-related G-protein coupled receptor member X2)”는 비만 세포 수용체 단백질로, 유사 알레르기성 약물 반응의 원인으로 알려져 있다.

본 명세서에서, MRGPRX2 단백질은 포유류에서 유래한 것일 수 있으며, 바람직하게는 인간에서 유래한 것이다. 가장 바람직하게, 본 발명에서의 MRGPRX2 단백질은 서열번호 1로 표시되는 인간의 MRGPRX2 (NP_473371.1) 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 한다(괄호 안은 NCBI Genebank accession number).

상기 MRGPRX2 mRNA는 바람직하게는 서열번호 2로 표시되는 인간 MRGPRX2 mRNA (NM_054030.4) 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 한다(괄호 안은 NCBI Genebankaccession number). 상기한 인간의 MRGPRX2 mRNA transcript variant들의 coding region(exon) 등의 특징 사항은 괄호 안에 기재된 Genebank accession number로 NCBI 데이터베이스를 검색하여 나오는 서열정보에서 확인된다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "상보적(complementary)"은 소정의 혼성화 또는 어닐링 조건, 구체적으로는 생리학적 조건 하(세포 내)에서 핵산 분자 내 타겟팅 모이어티가 타겟(예컨대, MRGPRX2 유전자)에 선택적으로 혼성화할 정도로 충분히 상보적인 것을 의미하는 것으로 하나 또는 그 이상의 미스매치(mismatch) 염기서열을 가질 수 있으며, 실질적으로 상보적(substantially complementary) 및 완전히 상보적(perfectly complementary)인 것을 모두 포괄하는 의미를 가지며, 보다 구체적으로는 완전히 상보적인 것을 의미한다.

본 명세서에서, 용어 '검출'은 목적하는 물질(본 발명에서의 마커 단백질, MRGPRX2)의 존재(발현) 여부를 측정 및 확인하는 것, 또는 목적하는 물질의 존재 수준(발현 수준)의 변화를 측정 및 확인하는 것을 모두 포함하는 의미이다. 같은 맥락에서, 본 발명에서 상기 단백질의 발현수준을 측정하는 것은 발현 여부를 측정하는 것(즉, 발현 유무를 측정하는 것), 또는 상기 단백질의 질적, 양적 변화 수준을 측정하는 것을 의미한다. 상기 측정은 정성적인 방법(분석)과 정량적인 방법을 모두 포함하여 제한 없이 수행될 수 있다. 단백질 수준의 측정에 있어서 정성적 방법과 정량적 방법의 종류는 당업계에 잘 알려져 있으며, 본 명세서에서 기술한 실험법들이 이에 포함된다. 각 방법 별로 구체적 단백질 수준 비교 방식은 당업계에 잘 알려져 있다. 따라서 상기 MRGPRX2 단백질 검출은 MRGPRX2 단백질의 존재 여부 검출, 또는 상기 단백질 발현량의 증가(상향 조절) 또는 감소(하향 조절)를 확인하는 것을 포함하는 의미이다.

본 명세서에서 용어 “진단”은 특정 질병 또는 질환에 대한 한 객체의 감수성(susceptibility)을 판정하는 것, 한 객체가 특정 질병 또는 질환을 현재 가지고 있는지 여부를 판정하는 것, 특정 질병 또는 질환에 걸린 한 객체의 예후(prognosis)를 판정하는 것, 또는 테라메트릭스(therametrics)(예컨대, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링 하는 것)를 모두 포함하는 개념이다. 바람직하게 본 발명에서의 진단은 MRGPRX2의 발현 수준을 측정하여 천식의 존재 또는 발병 여부를 확인하는 것일 수 있다.

본 발명에서 용어 “예후”는 질병을 진단하여 판단된 장래의 증세 또는 경과에 대한 전망을 말한다. 천식 환자에 있어서 예후는 통상적으로 천식 발병 또는 치료 후 일정기간 내의 개선 여부 또는 생존기간을 뜻한다. 예후의 예측 (또는 예후의 진단)은 특히 천식 환자의 화학치료 여부를 비롯하여 향후 천식 치료의 방향에 대한 단서를 제시하므로 매우 중요한 임상적 과제이다. 예후 예측은 질환 치료제에 대한 환자의 반응, 치료 경과에 대한 예측도 포함한다.

본 발명에서 용어 “천식”은 알러지성 천식 또는 비알러지성 천식일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 용어 “중증 천식” 또는 “잘 조절되지 않는 천식”은 일반적으로 미국흉부학회 및 유럽호흡기학회 (ATS/ERS) 가이드라인에서 말하는 severe asthma 에 해당하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 중증 천식은 바람직하게는 고용량의 흡입 코르티코스테로이드 치료를 필요로 하는 천식일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 용어 “잘 조절되지 않는 천식”이란 각 천식 중증도에 맞는 흡입스테로이드제 등 적절한 천식의 단계적 치료에도 불구하고 천식 상태가 조절되지 않는 천식일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

조절되지 않는 천식의 정의는 하기 조건 중 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:

1) 낮은 증상 조절: 한국 천식 진료 지침의 부분조절 상태, 또는 천식 조절 검사에서 20점 미만

2) 잦은 천식 악화: 전신 스테로이드가 3일 이상 필요한 정도의 천식 악화가 연 2회 이상

3) 중증 악화: 천식 악화로 입원이나 기계호흡이 필요한 경우

4) 기류제한: 기관지확장제 사용 후 FEV1 < 80% .

상기 고용량의 흡입 코르티코스테로이드는 국제천식가이드라인 (GINA)에서 고용량으로 적시한 용량을 말한다.

본 발명에서 용어 “반응성”은 천식 환자에 흡입 코르티코스테로이드 치료를 수행한 결과, 천식 증상이 예방, 개선, 또는 치료된다면 흡입 코르티코스테로이드에 대해서 “반응성”이라고 정의할 수 있다. 천식의 예방, 개선 또는 치료는 다양한 방식으로 측정될 수 있다.

본 발명에서, 상기 치료 반응성은 흡입용 코르티코스테로이드 또는 다른 천식 치료제의 치료 반응성일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 다른 천식 치료제는 예를 들어, 포모테롤(formoterol), 살메테롤(salmeterol), 톨로부테롤(tulobeterol)과 같은 베타2 항진제, 테오필린과 같은 잔틴계 약물, 부교감신경 차단제, 또는 몬테루카스트(montelukast), 프랜루카스트(pranlukast), 재퍼루카스트(zafirlukast)와 같은 류코트리엔 조절제, 전신적 스테로이드제 등 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 용어 “흡입 코르티코스테로이드 치료 반응성”은 흡입 코르티코스테로이드가 천식 치료에 유용할 수 있는지의 여부를 치료 전에 예측하는데 사용하기 위한 물질로서, 본 발명의 경우 MRGPRX2의 발현량을 측정하여 흡입 코르티코스테로이드에 대한 반응성을 예측하는데 사용된다.

본 명세서에서, 단백질의 '발현 증가(또는 고발현)'라는 의미는 발현되지 않던 것이 발현된 것(즉, 검출되지 않던 것이 검출된 것) 또는 정상적인 수준보다 상대적으로 과발현된 것(즉, 검출량이 많아지는 것)을 의미한다. 이의 반대적 용어의 의미는 당업자라면 상기 정의에 준하여, 반대의미를 가지는 것으로 이해 가능하다.

본 명세서에서, 상기 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제는 MRGPRX2의 mRNA에 특이적으로 결합하는 프로브 또는 프라이머일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서, 상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 MRGPRX2의 단백질에 특이적인 항체일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서, 상기 MRGPRX2의 단백질은 서열번호 1로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서, 상기 MRGPRX2의 mRNA는 서열번호 2로 이루어지는 염기 서열을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 '프라이머(primer)'는 DNA 합성의 개시점(starting point)으로 작용하는 짧은 단일가닥 올리고뉴클레오티드(single strand oligonucleotide)이다. 프라이머는 적합한 완충액(buffer)와 온도 조건에서 주형(template)인 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하고, DNA 중합효소가 프라이머에 주형 DNA에 상보적인 염기를 갖는 뉴클레오사이드 트리포스페이트를 추가하여 연결함으로써 DNA가 합성된다. 프라이머는 일반적으로 15 내지 30개의 염기서열로 이루어져 있으며, 염기 구성과 길이에 따라 주형 가닥에 결합하는 온도(melting temperature, Tm)가 달라진다. 프라이머의 서열은 주형의 일부 염기 서열과 완전하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, 주형과 혼성화되어 프라이머 고유의 작용을 할 수 있는 범위 내에서의 충분한 상보성을 가지면 충분하다. 따라서 본 발명에서 상기 MRGPRX2 mRNA의 발현 수준을 측정하기 위한 프라이머는 각 유전자 서열에 완벽하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, DNA 합성을 통해 mRNA 또는 cDNA의 특정 구간을 증폭하여 mRNA의 양을 측정하려는 목적에 맞는 길이와 상보성을 갖는 것이면 충분하다. 상기 증폭 반응을 위한 프라이머는 증폭하고자 하는 mRNA의 특정 구간의 양쪽 끝부분의 주형(또는 센스, sense)과 반대편(안티센스, antisense)에 각각 상보적으로 결합하는 한 세트(쌍)으로 구성된다. 프라이머는 당업자라면 MRGPRX2의 mRNA 또는 cDNA 염기서열을 참조하여 용이하게 디자인할 수 있다.

상기 '프로브(probe)'는 특정 유전자의 mRNA나 cDNA(complementary DNA)에 특이적으로 결합할 수 있는 짧게는 수개 내지 길게는 수백 개의 염기(base pair) 길이의 RNA 또는 DNA 등 폴리뉴클레오티드의 단편을 의미하며, 표지(labeling)되어 있어서 결합하는 대상 mRNA나 cDNA의 존재 유무, 발현양 등을 확인할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서는 MRGPRX2 mRNA에 상보적인 프로브를 피검체의 시료와 혼성화 반응(hybridization)을 수행하여 MRGPRX2 mRNA의 발현양을 측정함으로써 천식의 진단 또는 흡입 코르티코스테로이드 치료 반응성 예측에 이용할 수 있다. 프로브의 선택 및 혼성화 조건은 당업계에 공지된 기술에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 본 발명에서 상기 프라이머 또는 프로브는 포스포아미다이트(phosphoramidite) 고체지지체 합성법이나 기타 널리 공지된 방법을 이용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 또한 프라이머 또는 프로브는 MRGPRX2 mRNA와의 혼성화를 방해하지 않는 범위에서 당해 기술분야에 공지된 방법에 따라 다양하게 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 예로는 메틸화, 캡화, 천연 뉴클레오티드 하나 이상의 동족체로의 치환 및 뉴클레오티드 간의 변형, 예를 들면 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등), 그리고 형광 또는 효소를 이용한 표지 물질(labeling material)의 결합 등이 있다.

상기 항체란 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명에 사용되는 항체는 단클론 또는 다클론 항체, 면역학적으로 활성인 단편(예를 들어, Fab 또는 (Fab)2 단편), 항체 중쇄, 인간화 항체, 항체 경쇄, 유전자 조작된 단일쇄 Fν 분자, 키메릭 항체 등일 수 있다.

MRGPRX2 단백질은 공지된 단백질이므로 본 발명에 사용되는 항체는 단백질을 항원으로 하여 면역학 분야에서 널리 알려져 있는 통상의 방법으로 제조할 수 있다. 본 발명에 따른 항체의 항원으로서 사용되는 MRGPRX2 단백질은 천연에서 추출하거나 합성될 수 있으며 DNA 서열을 기초로 하여 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다. 유전자 재조합 기술을 이용할 경우 MRGPRX2 단백질을 코딩하는 핵산을 적절한 발현 벡터에 삽입하고, 재조합 발현 벡터로 형질전환된 형질전환체에서 MRGPRX2 단백질이 발현되도록 숙주 세포를 배양한 후 형질전환체로부터 MRGPRX2 단백질을 회수함으로써 수득될 수 있다.

예를 들어, 다클론 항체는 MRGPRX2 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 항체는 말, 소, 염소, 양, 개, 닭, 칠면조, 토끼, 마우스 또는 래트와 같은 여러 온혈 동물을 이용하여 제조할 수 있다.

단클론 항체도 공지된 융합방법(fusion method)(Kohler and Milstein, European J. Immnunol. 6:511-519, 1976), 재조합 DNA 방법(미국특허 제4816567호) 및 파지 항체 라이브러리(Clackson et al., Nature, 352, 624-628, 1991; Marks et al., J. Mol. Biol. 222, 58:1-597, 1991) 기술을 이용하여 제조할 수 있다.

한편, 본 발명은 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 키트 또는 흡입 코르티코스테로이드 치료 반응성 예측용 키트를 제공한다.

본 발명의 키트는 MRGPRX2의 단백질 항체 이외에 면역학적 분석에 사용되는 당 업계에 공지된 도구 및/또는 시약을 추가로 포함할 수 있다.

상기에서 면역학적 분석은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 있는 방법이라면 모두 포함될 수 있다. 이러한 방법들은 당 분야에 공지되어 있으며 예를 들어, 면역세포화학 및 면역조직화학, 방사선 면역 분석법(radioimmunoassays), 효소결합면역법(ELISA: Enzyme Linked Immunoabsorbent assay), 면역 블롯(immunoblotting), 파아르 분석법(Farr assay), 면역침강, 라텍스 응집, 적혈구 응집, 비탁계법, 면역확산법, 카운터-전류 전기영동법, 단일 라디칼 면역확산법, 단백질 칩 및 면역형광법이 있다.

면역학적 분석에 사용되는 도구 및/또는 시약으로는 적합한 담체 또는 지지체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지, 용해제, 세정제가 포함된다. 또한, 표지물질이 효소인 경우에는 효소활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다.

본 발명의 검출용 또는 진단용 키트에 포함되는 MRGPRX2는 바람직하게는 적합한 담체 또는 지지체에 문헌에 개시된 바와 같은 다양한 방법을 이용하여 고정될 수 있으며(Antibodies: A Labotory Manual, Harlow ＆ Lane;Cold SpringHarbor, 1988), 적합한 담체 또는 지지체의 예로는 아가로스, 셀룰로즈, 니트로셀룰로즈, 덱스트란, 세파덱스, 세파로즈, 리포솜, 카복시메틸 셀룰로즈, 폴리아크릴아미드, 폴리스테린, 반려암, 여과지, 이온교환수지, 플라스틱 필름, 플라스틱 튜브, 유리, 폴리아민-메틸 비닐-에테르-말레산 공중합체, 아미노산 공중합체, 에틸렌-말레산 공중합체, 나일론, 컵, 플랫 팩(flat packs) 등이 포함된다. 그 외의 다른 고체 기질로는 세포 배양 플레이트, ELISA 플레이트, 튜브 및 폴리머성 막이 있다. 상기 지지체는 임의의 가능한 형태, 예를 들어 구형(비드), 원통형(시험관 또는 웰 내면), 평면형(시트, 시험 스트립)을 가질 수 있다.

검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지는 항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정가능하게 하며, 이의 예로는 효소, 형광물질, 리간드, 발광물질, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사성 동위원소 등을 사용할 수 있다. 효소로는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제, 알칼라인 포스파타아제, 아세틸콜린에스테라아제, 글리코즈 옥시다아제, 헥소키나제, 말레이트 디하이드로게나아제, 글루코스-6-인산디하이드로게나아제, 인버타아제 등을 사용할 수 있다. 형광물질로는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, 플루오르신이소티옥시아네이트 등을 사용할 수 있다. 리간드로는 바이오틴 유도체 등이 있으며, 발광물질로는 아크리디늄 에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있다. 미소입자로는 콜로이드 금, 착색된 라텍스 등이 있고 레독스 분자로는 페로센, 루테늄 착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논 등이 있다. 그러나 상기 예시된 것들 외에 면역학적 분석법에 사용할 수 있은 것이라면 어느 것이라도 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 천식 치료 물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다 :

본 명세서에서, 상기 MRGPRX2의 mRNA 또는 단백질을 발현하는 세포는 MRGPRX2의 mRNA 또는 단백질이 내인적으로(endogenous) 발현 또는 일시적으로 과발현된 세포를 포함하며, 또는 MRGPRX2를 암호화하는 핵산을 세포 내에 도입하여 형질전환시킴으로써 발현하도록 하여 사용할 수 있으나, 이에 특별히 제한되지 않는다.

본 명세서에서, ‘발현(expression)’은 세포에서 단백질 또는 핵산이 생성되는 것을 의미한다. 상기 MRGPRX2를 발현하는 세포는 MRGPRX2를 내재적으로 발현하는 세포일 수도 있고, MRGPRX2를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 발현 벡터로 형질전환되어 MRGPRX2를 과발현하는 세포일 수도 있다.

본 발명 스크리닝 방법을 언급하면서 사용되는 용어 “시험물질”은 본 발명의 MRGPRX2의 발현에 영향을 미치는지 여부를 검사하기 위하여 스크리닝에서 이용되는 미지의 물질을 의미한다. 상기 시험물질은 siRNA(small interference RNA), shRNA(short hairpin RNA), miRNA(microRNA), 리보자임(ribozyme), DNAzyme, PNA(peptide nucleic acids), 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 항체, 앱타머, 천연추출물 또는 화학물질을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 상기 (a) 단계에서 사용되는 세포는 실험동물의 형태로 제공될 수 있으며, 시험물질과의 접촉은 비경구 또는 경구투여, 정위주사를 포함하나, 이로 제한하는 것은 아니며, 당업자라면 시험물질을 동물에게 테스트하기 위해 적절한 방법을 선택할 수 있을 것이다.

시험물질을 처리하는 것은 시험물질을 세포 또는 조직 배양 배지에 추가한 후 세포를 일정 시간 배양하는 것을 의미한다. 상기 세포가 실험동물 형태로 제공될 때, 시험물질과의 접촉은 비경구 또는 경구 투여, 정위주사를 포함하는 이로 제한되는 것은 아니며, 당업자라면 시험물질을 동물에게 테스트하기 위해 적절한 방법을 선택할 수 있을 것이다.

본 발명의 상기 (b) 단계에서 mRNA의 발현량 측정은 RT-PCR, 정량적 또는 반정량적 RT-PCR(Quantitative or semi-Quantitative RT-PCR), 정량적 또는 반정량적 리얼 타임 RT-PCR(Quantitative or semi-Quantitative real-time RT-PCR), 노던 블롯(northern blot) 및 DNA 또는 RNA 칩(chip)으로 이루어지는 군에서 하나 이상 선택된 방법을 이용하여 측정되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 (b) 단계에서 상기 단백질 발현량 측정은 웨스턴 블롯, ELISA, 방사선면역분석법, 방사면역확산법, 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트 면역전기영동, 면역조직화학염색, 면역침전분석, 보체고정분석, FACS 및 단백질 칩으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택된 방법을 이용하여 측정되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 (c) 단계는 대조군 세포와 비교하여 상기 MRGPRX2의 mRNA 또는 단백질의 발현량을 감소시킨 물질을 천식 치료 물질로 선별하는 단계이다.

상기 대조군 세포는 시험물질을 처리하지 않은 세포일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서, 시험 물질이 접촉된 시료에서의 MRGPRX2 유전자 또는 단백질의 발현 정도가 후보물질 접촉되지 않은 시료에서의 해당 유전자 또는 단백질의 발현 정도보다 감소된 경우, 상기 후보물질을 천식 치료제로 판단하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 피검체의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 천식 환자의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 환자의 치료 반응성 예측에 필요한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.

본 발명에서 상기 시료는 천식을 진단하거나 ICS의 치료 반응성을 예측하고자 하는 피검체로부터 채취된 것이라면 제한없이 사용할 수 있으며, 예를 들어 생검 등으로 얻어진 세포나 조직, 혈액, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇌척수액, 각종 분비물, 소변, 대변 등일 수 있다. 바람직하게는 혈액, 혈장, 혈청, 타액, 비액, 객담, 복수, 질 분비물 및 소변으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 바람직하게는 혈액, 혈장, 또는 혈청일 수 있다. 상기 시료는 검출 또는 진단에 사용하기 전에 전처리할 수 있다. 예를 들어, 균질화(homogenization), 여과, 증류, 추출, 농축, 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등을 포함할 수 있다.

상기 단계의 방법으로 측정한 피검체에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 동일한 방법으로 측정한 대조구와 비교하여, MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준이 증가한 경우, 상기 피검체를 천식에 걸린 것으로 진단할 수 있다.

상기 천식이 알레르기성 천식인 경우, 대조군은 정상 대조군 또는 비알레르기성 천식군일 수 있다.

상기 단계의 방법으로 측정한 피검체가 천식 환자인 경우, MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 동일한 방법으로 측정한 대조구와 비교하여, MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준이 증가한 경우, 상기 피검체에서 ICS 고용량 치료 요구도가 높은 것으로 판단할 수 있다.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

<실시예 1. 실험 방법>

1.1 대상

진행중인 다기관 코호트 연구인 한국 성인 천식의 현실과 진화를 위한 코호트에서 천식 환자를 등록하였다. 모든 대상체는 기도 과민 반응을 보였으며 180 μg의 알부테롤 흡입 후 FEV1 (Forced Expiratory Volume in 1 second) > 12 % (및 적어도 200 mL) 의 기도 가역성 또는 도발 테스트 동안 16 mg / mL (PC20) 메타콜린 투여 후 FEV1의 20% 감소를 나타냈다. 심각한 폐 손상, 기관지 확장증 또는 폐 절제 병력이 있는 환자는 제외하였다. 알레르기성 천식 환자는 적어도 하나의 일반적인 공기 알러르겐(aeroallergen)에 대한 피부단자검사(skin prick test) 반응성 또는 아토피성 피부염이나 알레르기성 비염의 병력을 갖는 환자로 정의되었다. 세계천식기구 GINA의 지침에 따르면, 환자들 중 일부는 등록 당시 환자의 폐 기능 및 증상을 고려하여 임상의가 결정한 적절한 ICS 용량을 처방받았다(부데소니드 용량 대비). 추적 관찰 (6 개월 및 12 개월) 동안 한 번도 통제되지 않은 알레르기 천식 환자는 미통제 그룹으로 분류하였다. 본 연구는 아산 메티컬 센터의 기관 검토위원회의 승인을 받았으며 모든 환자는 서면 동의서를 제공하였다.

1.2 MRGPRX2 측정 및 통계적 분석

MRGPRX2 (Mas-related G-protein coupled receptor member X2) 수준은 제조업체의 지침에 따라 ELISA 키트 (MyBioSource, Cat.No: MBS9333336)를 사용하여 측정하였다. 건강한 그룹, 천식 그룹 또는 알레르기성 천식 그룹에서 MRGPRX2 수준의 차이는 스튜던트 t 테스트를 사용하여 계산되었다. 수신자 조작 특성 (ROC) 곡선 분석을 사용하여 통제 된 그룹과 미통제 그룹을 구별하기 위한 최적의 MRGPRX2 컷오프를 결정하였다. 이진 로지스틱 회귀 모델(Binary logistic regression model)을 사용하여 MRGPRX2 수준이 연령 조정 후 독립 예측 변수인지 확인하였으며, 두 그룹 간의 임상 변수의 차이는 카이 제곱 검정(Chi-squared test)을 사용하여 평가하였다. 실험실 프로파일이 MRGPRX2 수준과 관련이 있는지 여부를 조사하기 위해 선형 회귀 모델을 사용하였다. STATA (버전 15) 및 MedCalc (버전 15.5) 통계 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다.

ELISA는 다음과 같은 방법으로 수행하였다 : 환자의 혈액에서 Serum을 분리하여 MRGPRX2의 농도를 측정하였다. MyBioSource사의 Human Mas-Related G-Protein Coupled Receptor Member X2 (MRGPRX2) ELISA Kit를 사용하여 제조업체의 방법에 따라 Sandwich ELISA를 시행하였다. 플레이트에 Standard와 Serum을 각각 50 μl씩 넣었으며, Standard는 100 ng/ml을 희석하여 사용하였다. HRP-conjugate reagent 100 μl를 추가로 더하여, 60 분 동안 37°C에서 반응시킨 후, 용액을 버리고, 세척 버퍼로 남은 HRP-conjugate reagent를 모두 제거해주었다. Chromogen Solution A 50 μl와 Chromogen Solution B 50 μl을 넣어 빛을 차단한 상태에서 37°C에서 15분간 반응시켰다. 50μl 정지 용액을 넣어 반응을 멈추게 한 후, ELISA 리더 (TECAN sunrise)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

<실시예 2. 실험 결과>

본 연구는 102 명의 건강한 대조군과 242 명의 천식 환자가 포함되었다. 천식 그룹의 평균 혈청 MRGPRX2 수준은 대조군보다 유의하게 높았다 (95.2 ± 54.8 vs 12.9 ± 9.8, P < .001). 알레르기성 천식 그룹에 포함된 천식 환자 164 명 (68%)의 혈청 MRGPRX2 수준은 비알레르기성 천식 그룹보다 유의하게 높았다(102.4 ± 54.5 vs 79.8 ± 52.5, P = .002) (도 1의 A 참조).

알레르기성 천식 그룹에서 중등도에서 고용량의 ICS가 필요한 환자의 MRGPRX2 수준은 저용량 ICS가 필요한 환자보다 높았다 (108.1 ± 52.9 vs 76.6 ± 43.9, P = .033) (도 1의 B 참조).

또한, 알레르기성 천식 그룹 중 70 %의 환자가 잘 통제된 그룹으로 분류되었으며, 이들의 MRGPRX2 수준은 미통제 그룹보다 유의하게 높았다 (113.3 ± 53.8 vs 83.4 ± 56.4, P = .041) (도 1의 C 참조).

ROC 곡선 분석 결과, MRGPRX2 수준을 통해 미통제 알레르기 천식 환자를 잘 예측할 수 있음을 확인하였다 (AUC = 0.672; 95 % 신뢰 구간 (CI), 0.525-0.798; 도 1의 D 참조).

또한, 상기 결과들은 MGRPRX2가 12 개월 추적 관찰 동안 ICS 반응으로 천식 상태를 예측할 수 있는 독립적인 바이오마커임을 나타낸다.

알레르기성 천식 그룹은 100 ng / mL의 최적 차단 값을 사용하여 높고 낮은 MRGPRX2 수준을 갖는 2 개의 하위 군으로 분류되었다. 두 하위 군 간의 임상 변수 분포는 도 2에 나타내었다. MRGPRX2 수준이 높은 환자는 40 세 이상의 발병 연령 (P = .008)과 ICS에 대한 잘 통제 된 반응 (P = .033)과 유의하게 관련이 있었다. 반면, MRGPRX2 수준과 관련된 중요한 변수는 존재하지 않는 것으로 나타났다. 또한, MRGPRX 수준은 혈중 호산구 절대수 (absolute eosinophil count) (r = .008, P = .929), 가래 호산구 비율(r = -.318, P = .582), C 반응성 단백질 (r = .118, P = .32) 및 FEV1 (r = .001, P = .986)과 상관관계가 나타나지 않았다.

이상의 실시예를 종합하면, 혈청 MRGPRX2 수준이 건강한 대상에서보다 천식 환자에서 유의하게 더 높게 나타나고, 알레르기성 천식 그룹보다 비 알레르기성 천식 그룹보다 높음을 확인하였다. 또한, 높은 수준의 MRGPRX2는 중간 내지 높은 ICS 용량을 필요로 하는 알레르기성 천식 및 12 개월의 추적 기간 동안 ICS에 대한 양호한 반응을 보이는 사람들 (특히 MRGPRX2 값이 100 ng / mL 이상)과 유의하게 관련됨을 확인하였다.

또한, 알레르기성 천식 환자에서 12 개월 추적 관찰을 통해, MGRPRX2가 ICS 반응성을 예측하기 위한 독립적인 바이오 마커임을 확인하였다. MRGPRX2 농도는 알레르기성 천식 환자들 중에서도 통제된 그룹에서 더 높게 나타났다. 이는 비알레르기성 천식의 성질이 더 강한 환자들(보통 조절하기 어려움) 때문에 미통제 그룹에서 더 낮은 것으로 해석된다.

따라서, 본 발명자들은 MRGPRX2를 천식의 진단 및 천식 환자에서 흡입 코르티코스테로이드의 반응성 예측용 바이오마커로서 활용할 수 있음을 확인하였다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가지는 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

<110> THE ASAN FOUNDATION University of Ulsan Foundation For Industry Cooperation <120> Composition for Diagnosing Asthma and Predicting Severity and Treatment Response <130> MP20-009 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MRGPRX2 [Homo sapiens] <400> 1 Met Asp Pro Thr Thr Pro Ala Trp Gly Thr Glu Ser Thr Thr Val Asn 1 5 10 15 Gly Asn Asp Gln Ala Leu Leu Leu Leu Cys Gly Lys Glu Thr Leu Ile 20 25 30 Pro Val Phe Leu Ile Leu Phe Ile Ala Leu Val Gly Leu Val Gly Asn 35 40 45 Gly Phe Val Leu Trp Leu Leu Gly Phe Arg Met Arg Arg Asn Ala Phe 50 55 60 Ser Val Tyr Val Leu Ser Leu Ala Gly Ala Asp Phe Leu Phe Leu Cys 65 70 75 80 Phe Gln Ile Ile Asn Cys Leu Val Tyr Leu Ser Asn Phe Phe Cys Ser 85 90 95 Ile Ser Ile Asn Phe Pro Ser Phe Phe Thr Thr Val Met Thr Cys Ala 100 105 110 Tyr Leu Ala Gly Leu Ser Met Leu Ser Thr Val Ser Thr Glu Arg Cys 115 120 125 Leu Ser Val Leu Trp Pro Ile Trp Tyr Arg Cys Arg Arg Pro Arg His 130 135 140 Leu Ser Ala Val Val Cys Val Leu Leu Trp Ala Leu Ser Leu Leu Leu 145 150 155 160 Ser Ile Leu Glu Gly Lys Phe Cys Gly Phe Leu Phe Ser Asp Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Trp Cys Gln Thr Phe Asp Phe Ile Thr Ala Ala Trp Leu Ile 180 185 190 Phe Leu Phe Met Val Leu Cys Gly Ser Ser Leu Ala Leu Leu Val Arg 195 200 205 Ile Leu Cys Gly Ser Arg Gly Leu Pro Leu Thr Arg Leu Tyr Leu Thr 210 215 220 Ile Leu Leu Thr Val Leu Val Phe Leu Leu Cys Gly Leu Pro Phe Gly 225 230 235 240 Ile Gln Trp Phe Leu Ile Leu Trp Ile Trp Lys Asp Ser Asp Val Leu 245 250 255 Phe Cys His Ile His Pro Val Ser Val Val Leu Ser Ser Leu Asn Ser 260 265 270 Ser Ala Asn Pro Ile Ile Tyr Phe Phe Val Gly Ser Phe Arg Lys Gln 275 280 285 Trp Arg Leu Gln Gln Pro Ile Leu Lys Leu Ala Leu Gln Arg Ala Leu 290 295 300 Gln Asp Ile Ala Glu Val Asp His Ser Glu Gly Cys Phe Arg Gln Gly 305 310 315 320 Thr Pro Glu Met Ser Arg Ser Ser Leu Val 325 330 <210> 2 <211> 2072 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MRGPRX2 [Homo sapiens] <400> 2 actccagatc ctgcaggcat ctccccatcc tcagctgttt gccagtccca ggaaagcact 60 tctcaactca ccaactccag tagaaagaag ggtgttaagg ggcaccagtg gaggttttct 120 gagcatggat ccaaccaccc cggcctgggg aacagaaagt acaacagtga atggaaatga 180 ccaagccctt cttctgcttt gtggcaagga gaccctgatc ccggtcttcc tgatcctttt 240 cattgccctg gtcgggctgg taggaaacgg gtttgtgctc tggctcctgg gcttccgcat 300 gcgcaggaac gccttctctg tctacgtcct cagcctggcc ggggccgact tcctcttcct 360 ctgcttccag attataaatt gcctggtgta cctcagtaac ttcttctgtt ccatctccat 420 caatttccct agcttcttca ccactgtgat gacctgtgcc taccttgcag gcctgagcat 480 gctgagcacc gtcagcaccg agcgctgcct gtccgtcctg tggcccatct ggtatcgctg 540 ccgccgcccc agacacctgt cagcggtcgt gtgtgtcctg ctctgggccc tgtccctact 600 gctgagcatc ttggaaggga agttctgtgg cttcttattt agtgatggtg actctggttg 660 gtgtcagaca tttgatttca tcactgcagc gtggctgatt tttttattca tggttctctg 720 tgggtccagt ctggccctgc tggtcaggat cctctgtggc tccaggggtc tgccactgac 780 caggctgtac ctgaccatcc tgctcacagt gctggtgttc ctcctctgcg gcctgccctt 840 tggcattcag tggttcctaa tattatggat ctggaaggat tctgatgtct tattttgtca 900 tattcatcca gtttcagttg tcctgtcatc tcttaacagc agtgccaacc ccatcattta 960 cttcttcgtg ggctctttta ggaagcagtg gcggctgcag cagccgatcc tcaagctggc 1020 tctccagagg gctctgcagg acattgctga ggtggatcac agtgaaggat gcttccgtca 1080 gggcaccccg gagatgtcga gaagcagtct ggtgtagaga tggacagcct ctacttccat 1140 cagatatatg tggctttgag aggcaacttt gcccctgtct gtctgatttg ctgaactttc 1200 tcagtcctga ttttaaaaca gttaagagag tccttgtgag gattaagtga gacagtgcct 1260 atgaaacaaa cactaagtgc agtgtctctg gaactgcctt actcacaggc ttccaccaca 1320 gccctatgag agctttgcca actctgcggt ccatgactgt tcccactttt aatgaatcct 1380 acctttcgca gaaggctgaa agcagggcag aaaagatcta catttctttg gacactgcac 1440 ttgataggga ctcaaagaat gttatatttt taattaattt ctttttctct tccgtacaat 1500 ttctgtctca acaaaattag aagaattaaa tttaaaacta gctccaaaag agcagtcgtc 1560 tttcattttg gcagacctta gaatatcccc ctagcttaat aaatctttgt tgaatggctt 1620 aatgaatgaa taaactggtt aatgtttaag ttaaacctct gaaaagtctc catttaccag 1680 atttgagtca ctaaatttat tgctttcact acttttgaat tttgcaaaca tgaaattaag 1740 ttttataatt agataaatca atgtcaacac atatttaaag tttgaggtac actgtcttcc 1800 tgtggtttcc tttcacatgc catcccttaa aatcccagct acacgccttc ccattccttc 1860 ccctttgcct ttgttctaat cttccctctc tgggggctct ctaattcgtc ctggaagttt 1920 ccagtggtct tatagactcc atgttcttgg aggacaggct gtatgtcaga tttacctttt 1980 attccgaaga actcggagca tttattttgt taattaaatt gcacatattt ttaaaagtta 2040 cgtgttccac agaataaaat actaattgta aa 2072

Claims

MRGPRX2 (Mas-related G-protein coupled receptor member X2) 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제는 MRGPRX2의 mRNA에 특이적으로 결합하는 프로브 또는 프라이머인 것을 특징으로 하는, 천식 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 MRGPRX2의 단백질에 특이적인 항체인 것을 특징으로 하는, 천식 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 MRGPRX2 단백질은 서열번호 1로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 천식 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 MRGPRX2 mRNA는 서열번호 2로 이루어지는 염기 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 천식 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 천식은 알레르기성 천식인 것을 특징으로 하는, 천식 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 천식은 중증 천식 또는 잘 조절되지 않는 천식인 것을 특징으로 하는, 천식 진단용 조성물.
피검체의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.
제8항에 있어서,
상기 시료는 혈액, 혈장 또는 혈청인 것을 특징으로 하는, 방법.
제8항에 있어서,
대조군과 비교하여 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준이 증가된 경우 천식으로 진단하는 것을 특징으로 하는, 방법.
제10항에 있어서,
상기 천식이 알레르기성 천식인 경우, 대조군은 정상 대조군 또는 비알레르기성 천식군인 것을 특징으로 하는, 방법.
MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 진단용 키트.
하기 단계를 포함하는 천식 치료 물질의 스크리닝 방법:
(a) MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA를 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현량을 측정하는 단계; 및
(c) 대조군 세포와 비교해 상기 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현량을 증가시킨 물질을 천식 치료 물질로 선별하는 단계.
MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 환자의 치료 반응성 예측용 조성물.
제14항에 있어서,
상기 치료 반응성은 흡입용 코르티코스테로이드 및 다른 천식 치료제 반응성인 것을 특징으로 하는, 조성물.
제14항에 있어서,
상기 천식 환자는 중증 천식 또는 잘 조절되지 않는 천식 환자인 것을 특징으로 하는, 조성물.
제14항에 있어서,
상기 조성물은 중증 천식 환자에서 고용량의 흡입용 코르티코스테로이드의 치료 반응성을 예측하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
천식 환자의 시료에서 MRGPRX2 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 천식 환자의 치료 반응성 예측에 필요한 정보를 제공하는 방법.
MRGPRX2의 단백질 또는 이의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 천식 환자의 치료 반응성 예측용 키트.